Aspetti biochimici e molecolari della malattia di Fabry

Andrea Dardis, PhDCentro di Coordinamento Regionale per le Malattie Rare

University Hospital “Santa Maria della Misericordia”Udine, Italy

Malattia di Fabry

• Malattia da accumulo lisosomiale

• 1:40.000 maschi

• Causa: deficit dell’enzima alfa-galattosidasi A (AGAL-A)

• Deputata alla degradazione di Globotriaosilceramide(Gb3) e Globotriaosilsfingosina (LysoGb3) nei lisosomi

Lisosoma

Sfingosine

Sfingosine

Globotriaosylsphingosine (LysoGb3)

Lactosylsphingosine

Sintesi e trasporto di AGAL-A

X linked: Gene GLA (Xq22.1)

XY

Donne portatrici in eterozigosi, come conseguenza

dell’inattivazione casuale del X, possono essere asintomatiche o

sviluppare sintomi.

XX

Maschi emizigoti sono affetti

Diagnosi enzimatica

Determinazione dell’attività dell’enzima AGAL-A nelle cellule del paziente affidabile e rapida

�Non informativa nelle femmine

�XY �Maschi emizigoti presentano un’attività della AGAL-A chiaramente

patologica (<5%)

�XX�Come conseguenza dell’inattivazione casuale dell’ X, l’

attività enzimatica può risultare alterata o nella norma.

Diagnosi molecolare

�Conferma diagnostica nei maschi�Diagnostica nelle femmine�Consulenza genetica

Gene GLA

�gDNA: 13 kb; 7 esoni�cDNA: 1290 pb�Proteina: 429 aa (31 aa signal peptide)

Circa 700 varianti nel gene GLA!!

La maggior parte puntiformi

Delezione o duplicazione

Mutazioni patogenetiche:

�Mutazioni missenso- Analisi funzionale (p.C52, p.G183A, p.Y216C, p.C172G, pD264Y)�Mutazioni non senso�Frameshift

Polimorfismi: p.D313Yp.E66Q

Mutazioni missenso non riportate in letteratura:

Analisi di 100 alleli normaliAnalisi in silicoFunzionale.

Le varianti del gene GLA

Criteri proposti per definire la diagnosi di malattia diFabry classica

Van der Tol et al, J Med Genet , 2014

Variati atipiche

�Segni clinici aspecifici

�Attività residua della AGAL-A in leucociti >5%

�Varianti genetiche di significato incerto (GVUS):

p.A143T

p.R112H

p.R118C

ecc

Non trovati in pazienti con la forma classica di Fabry

Dati controversi

Attività residua in vitro 30-40%

Dosaggio in plasma di LysoGb3 Suggestivo di FD

N Non esclude FD però

in maschi, FD altamente improbabile

Imaging e prove funzionali

Biopsia dell’organo affetto

X Y X X

XY XX XXXY

Gene GLA (Xq22.1)

Padre Madre portatrice

Figlio sano

(25%)

Figlia sana

(25%)

Figlio Affetto

(25%)

Figlia portatrice

(25%)

X Y X X

XY XX XXXY

Padre affetto Madre

Gene GLA (Xq22.1)

Tutti i figli maschi saranno saniTutte le figlie femmine saranno portatrici

Diagnosi prenatale

E’ possibile quando c’è un paziente diagnosticato in famiglia

Malattie X linked: le donne portatrici hanno una probabilità ½ di

trasmettere il gene mutato ai figli

50% dei maschi affetti 50% delle femmine portatrici

Diagnosi prenatale solo nei maschi