anti-psoriatic drug anthralin activates jnk via lipid peroxidation: mononuclear cells are more...

5
Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes Dominik Peus, Astrid Beyerle, Heike L. Rittner,* Markus Pott, Alexander Meves, Cornelia Weyand,* and Mark R. Pittelkow Department of Dermatology, Biochemistry and Molecular Biology and *Rheumatology, Mayo Clinic/Foundation, Rochester, Minnesota, U.S.A. Anthralin is a widely used, topical therapy for psoria- sis. Anti-proliferative and anti-in¯ammatory proper- ties of anthralin have been identi®ed. Little is known, however, about differential sensitivities of targeted cell types and speci®c mechanisms of signaling path- way activation. We demonstrate that anthralin exerts potent effects on keratinocytes and mononuclear cells through strong induction of lipid peroxidation and JNK activation, a stress-induced signal transduc- tion pathway. Lipid peroxidation was observed rapidly and half-maximal levels of lipid peroxidation were reached at a 10-fold lower concentration of anthralin for peripheral blood mononuclear cells vs normal keratinocytes. JNK activation was detected in peripheral blood mononuclear cells at a 40-fold lower anthralin dose compared with keratinocytes. For both cell types, selected inhibitors of lipid perox- idation prevented JNK activation. This study demon- strates that mononuclear leukocytes are markedly more sensitive than keratinocytes to anthralin- induced lipid peroxidation and JNK activation. We identify anthralin as a novel and potent inducer of JNK activation and demonstrate that this process is mediated, at least in part, by lipid peroxidation which is among the earliest and most proximate, membrane-related responses to anthralin yet described. Key words: anthralin/c-jun-N-terminal protein kinase/keratinocytes/lipid peroxidation/reactive oxygen spe- cies. J Invest Dermatol 114:688±692, 2000 P soriasis is a chronic relapsing, papulosquamous, in¯am- matory disorder of the skin. It is estimated that more than 2% of the people with European ancestry are affected by psoriasis (Stern, 1997). Lesional skin is characterized by epidermal hyperproliferation and perturbed maturation of the epidermis as well as vascular alterations. The dermal and epidermal in¯ammatory in®ltrates are rich in CD4 + and CD8 + lymphocytes, respectively, and release proin¯ammatory cytokines that play important parts as cellular mediators in psoriasis (Bata-Csorgo et al, 1995; Krueger et al, 1995; Schon et al, 1997). Anthralin (1,8-dehydroxy-9-anthrone), also known as dithra- nol or Cignolin was ®rst used in psoriasis more than 80 y ago and remains a widely used topical therapy (Galewsky, 1916; Unna, 1916; Mahrle, 1997). Anthralin is relatively safe, economical, and is often used in combination with many other treatments for psoriasis. Anthralin has long been used empiri- cally, but only more recently are its potential mechanisms of therapeutic action beginning to be characterized (Mahrle, 1997). Anthralin exhibits both anti-proliferative (Reichert et al, 1985) and anti-in¯ammatory properties in psoriasis (Schroder et al, 1985, ; Mrowietz et al, 1997), but also induces in¯ammation in normal skin (Finnen et al, 1984). In addition, modi®cation of DNA bases (Muller, 1997) and inhibition of various enzymes (Schallreuter and Pittelkow, 1987; Kemeny et al, 1990) have been described. The speci®c pharmacologic mode of action of anthralin to these reported effects, however, is poorly under- stood. Rapid photo-oxidation and auto-oxidation of anthralin results in the formation of anthraquinones, anthralin dimers and, following skin application, anthralin generates reactive oxygen species (ROS) (Muller, 1997). ROS have been shown to be involved in the activation of selected mitogen-activated protein kinases (MAPK) signal transduction pathways including the c- jun-N-terminal kinase (JNK) cascade (Lo et al, 1996). The JNK or stress-activated protein kinase cascade (SAPK) pathway is activated by a variety of stress-related stimuli including ultraviolet radiation, heat shock, osmotic imbalance, endotoxin, and cytokines (Derijard et al, 1994). JNK has been shown to be required for the regulation of cellular proliferation and apoptosis (Davis, 1999). As healing of the psoriatic plaque has been associated with the disappearance of in®ltrating lymphocytes along with the inhibition of keratinocyte proliferation (Christophers and Mrowietz, 1999) modulation of JNK activation may have important therapeutic implications follow- ing anthralin treatment. In this study, we demonstrate that anthralin is a novel inducer of JNK activation and show that lipid peroxidation is among the earliest cellular responses linked to anthralin exposure. Comparing the principal cell types involved in the expression of psoriasis (Bata- Csorgo et al, 1995), we also ®nd that peripheral blood mononuclear 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 688 Manuscript received November 8, 1999; accepted for publication January 7, 2000. Reprint requests to: Dr. Dominik Peus, Department of Dermatology, Ludwig-Maximilians-University Munich, Frauenlobstr. 9±11, 80337 Mu Ènchen, Germany. Email: [email protected] Abbreviations: JNK, c-jun, N-terminal kinase; LPO, lipid peroxidation; cPA, cis-parinaric acid; NAC, N-acetylcysteine; AA6P, ascorbic acid-6- palmitate.

Upload: mark-r

Post on 06-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes

������������ � � ������� �������� ��� �� ���������������� ����� ��� ����� � ��� ��������� ��������������

������� ��� � ��� �������� ����� �� �� ����� ���� �� � ��������� ����� �������� �������� ������� �� �� ���������� ��� �� ����� ��� �� ���!"��� �� ��� ����!��� ����� � ��� ��"��� ��� �� ���� �����!#$���� ���� ��!"� ��� ������ �� %�&���

������� �� ������ ��� ������ ����� !� ��������" ���������!����� �� ������#$$��� ��������� �! ������ ��� %��� ������&��" ������ �� '���� ������ %� � ��!!������ ������������� �! ���������� ����� �� �����&� $������$� �! �������� ������ ��������" (� ��$������ ��� ������ ����������� �!!���� �� '���������� �� $���� �������� ��� �� ����� ��� ����� �! ����� ������������ ��� �������� ��������� ��� ����� ���� ������ �����" ����� ���������� �� �%���������� �� ��!�$��$� ������ �! ����� ������������� ����� � )*�!��� ���� ����������� �!������ !� ������� %���� $���� ��� ����� ����$� '����������" ��� �������� �� �������� ��������� %���� $���� ��� ����� � +*�!���

���� ������ ���� ��$��� ���� '����������",� %��� ���� ����� �������� ����%���� �! ����� ����������� �������� ��� ��������" -��� �� �� ��$�������� ��� $���� ��� �� '������ � $'����$�� ��������� ��� '���������� �� ���������� ��� ����� ���������� �� ��� ��������" (�������!� ������ � ����� �� ������ ��� �� �!��� �������� �� ��$������ ��� ���� ������ ��$������ � ���� �� �� %� ����� ��������������� �� $��� ��� ������ �� $��� ����$�� $�$%�������� �������� �� ������ ��������%��" ��� ���� �� ��������������� ������� ��� �������������� ����� ������� ������� �������� ��� ������ ��������� � ����� ����� �� !"##$"%&' &(((

������ � � !"����! ������� � �����'���� ��(��)�� ��� ������� �� "� ���� * � � ��� �� "� ���� "�� +, �� "� ������ �� " -������ ��!� �� �������! �� .� ������ /& ���� 01123� ������� ��� �!"���! ���4�� .� ��������� "������������� ��� ���

��� �.�� �� �� ��� �� "� �������� � ���� � ��!����� ��� ���� 5"� ������ ��� ��������� ��(���� ��� ��6� �� � �����!" �� ��78 ��� ��98 ����"�!� �� ����! ������ ��� �����������(���� ��� !� ����� "� ���� ����� �� ��� � !����������� �� �� ������ /�� �)��� � �� ��� 011:; <�� �� �� ��� 011:;&!"�� �� ��� 01123�

�� "����� /0�9)��"������)1)�� "����3� ��� ����� � �� "��)��� �� �� ����� �� 6� �� �� ������ ���� "�� 9= � � ���� ������ � ������ �� ���!�� "����� />������� 010?;%���� 010?; ��"���� 01123� �� "����� � ���� ����� �����!�����!��� ��� � �� �� �� �� !��.��� ��� �� " ���� � "�� ��� ��� ��� ������� �� "����� "� ��� .��� �� ������)!����� . ���� ���� ��!�� �� ��� � �� �� ��� ��!"���� �� "����� �! �! ��� .� ����� � .� !"���! ���4�� /��"���� 01123��� "����� ��"�.� .� " �� �)��������� ��� /���!"�� �� ��� 019:3��� �� �)��(���� ��� ������ �� �� ������ /&!"����� �� ���

019:� ; ������ 4 �� ��� 01123� . ��� ���!� ��(���� ��� �������� ��� /$����� �� ��� 01973� *� ���� ���� ����6!� ��� ���@� .�� /������ 01123 ��� ��"�.� ��� �� ����� ��4���/&!"����� �� ��� �� ������ 0192; <����� �� ��� 011=3 "���.��� ��!��.��� 5"� ��!�6! �"����!��� �! ���� �� �! ��� ���� "����� � "�� ����� �� ����! � "������� � ������ ����) ���� ����� �"� �)����� ��� ��� � �)����� ��� �� �� "�������� �� "� ����� ��� �� �� "��'������ �� "����� ����� ������������ ��� �����!� ���� �� "����� ����� � ���! ��� ��� ����!�� /�A&3 /������ 01123� �A& "��� .��� "��� � .��������� �� "� �! ��� ��� �� ���! �� �� � ��)�! ��� �� ��� �������� /���<3 � ��� ����! ��� �� "��� ��!���� "� !)B�)@) ������� ����� /C@<3 !�!��� /�� �� ��� 011?3� 5"� C@<�� ��)�! ��� �� ��� ��� ����� !�!��� /&��<3 �� "��� ��! ��� �� .� � ����� � �� ��)���� �� ���� ��!���� � ������� ����� ���� "�� "�!�� ��� �! ��.����!�� ���� �������� !� ����� /����B��� �� ��� 01173� C@< "� .��� "��� � .���'���� ��� "� �� �� ��� �� !������ ��������� ��� ��� ���� ��/����� 01113� � "����� �� "� ����� �! ���'� "� .�����!�� �� �� " "� ����������!� �� ��6� �� �� ����"�!� ����� �� " "� ��"�.� ��� �� ���� ���!� � ��������� ���/�"�� ��"�� ��� ������ 4� 01113 ����� ��� �� C@<�! ��� ��� ��� "��� ����� �� "����� �! �����!� ��� ������)�� �� "����� ��� ��� �

*� "� ��� �� ����� �� � "� �� "����� � � ����� ���!�� ��C@< �! ��� ��� ��� "�� "� ����� �������� ��� � ���� "������� !������ ������ ������ � �� "����� ������� �������� "� ����!���� !��� ��� �������� �� "� �������� �� ������ /�� �)��� � �� ��� 011:3� �� ��� 6�� "� �����"���� .���� �����!����

==++)+=+D#==#E0:�== F ������ " � +=== .� 5"� &�!�� � ��� *��� � � ��� ����� ��� �� *�!�

.//

���!��� ��!����� @����.�� 9� 0111; �!!�� �� ��� �.��!� ���C����� 2� +===�

������ ��'� �G ��� ������� ��� ����� ��� �� ����� ��� ������ )����������)%������ � ���!"� $������. �� 1H00� 9=II2�J�!"��� >������� -����G ����K��4���)���!"�����

�..����� ���G C@<� !)B�� @) ������� �����; ��A� ����� �������� ���;!��� !�)��������! �!��; @��� �)�!� ��!� ����; ��?�� �!��.�! �!��)?)����� � ��

Page 2: Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes

!��� /����3 ��� ����"�!� � ��� � ��6!�� �� ���� ��� ��� "������ ���!� � � �� "�����)���!�� ����� �������� ��� ��� C@<�! ��� ����

��5-�*��& �@� �-5�A�&

0������ �� "����� /�� "�����3 �� �. ����� ���� ������ �����!"��.��� ���� /����� " ��� �� � ��3 ��� �������� �� ���" ��&A/&� ��� & ���� �A3 ������� ��� .����� �� �)�!� ��!� ���� /@��3��!��.�! �!��)?)����� � � /��?�3 ��� �)������ ���� � ���� ��!"������� &� ��� ���)������! �!�� /!��3 �� �. ����� ���� ����!��� ���.�/- ���� A�3 ��� ������� �� 12, � "���� �� �� �� " �� �� ��� 5� "��� ��� 0� . ��� �� "������ ����� ����� /&� ��3 �� ����� � �� �)������ ��� ���'� ���� ���� � H+=���

���� � �� � @����� "��� ���� ���!� � ���� ���� �� ���� ����� ��������� ��!����� ������� !� �� ���� ��� �� �� ��� ���� ����� �� ������!� ��� � � �� " !����� �� ���)���� ���� 0:I ������<��� ���!� � ���� ������� !� �� ���� ��� �� �� � �!������ !� ��� 0H0=� 0=I !��� ��� !�+� ������ � ����� �� ������� �� �� "=�0�� !��!��� =�+, /���#���3 .����� �� � ��� �� ��! .����� �� � ����� ��! � ��������� ��� " ��! �� /0= � �����3� ����� /:� �����3�"����!�� ���� /:� 0=H2�3� � "��������� /0� 0=H7�3� �"��"�� "����)����� /0� 0=H7�3� ��� ������� �� ����� �!��� ���� ���� ���� �!��(��!� ��� ��� �� " ������ ����� /�� "� ��� " ��! ��3 ��� � ��� 79 " � �!"���� '��!��!� � �������� ��!��.�� /�� �� ��� 01123����� ���� "��� "� .���� ����� ���� ���� �� .� ���� � ������ !�� ��� � ��� �� $�!���)��'� /�"����!��� ��!� ����� @C3� �������� ���� ����� �� ���*)0?7= /��� �"� ����� �� �������� ��3 �� "0=, �� �� .����� ��� /&��� ��� �!"���� �� $�� ������� �A3 �������!�����# ��� ���!�� /���� 5�!"���� ��� >���� *����� @C3� �������� �� �� "�� I " ���� �� ��� ��� ��������� �

����� ���������� ��� ������� "��� ���� ���!� � �� ���� ���������� �� " !�� /0= ��3 �� !����� � ����� �� ���*#0=, �� �� .��������� ����! ������ ��� 0 " � I2�� /������ ��� �"�� 011+3� ���� ���� "�� ��"�� ��� ��� �� �� " �� "����� /0= ��H0== ��3 �������� .� ������4� ���� 6�� ��� �� " =�7, ������������"��� ��� ���!���� �� �!��5�� "���� !��� ���� �����4�� ������� ��� .� (�� !� ��� �� �� ���! ��)��!����� $��& & �� �� /&�� C��� ��3 �� " � �� ������ ������� �� �� ���� � 0==�� ����� ��!� � ��� ��� ������ ������� " �� II7HI?7 �� ��� 7+7 ��� ����! ������ 5"� ���� (���!��!���� "� !�� ��� �� !��� �� �� � � I== ��.� ���� �� � ���� ���� � ��

�� ����"�!� � ��� �� "�� ������� 5"� � ��� �� � ��&A) ��� ��!�� ��� "���� �� ��������!� �� ����� �������� ��� ��� �� "�� !��� ���� $������ !����� !����!�� ��!��!���� !��� ���� ������ �� " !�� ��� ��� ��� ��!��.�� �.���� <��� ���!� � ���� !� ��� �� !������� ��� ��� ����� �. ����� �� " �� ����� �� ���� !����� !����!�� ��!��!����&�70= /L��� C����� >������3 �'����� �� " � !�"���� � ������� ����� *����� I== /&�� � ������ ��3� 5"� ��� �� 0==�� ���� �� " ��I?7 �� ��� ��!� � ��� � ��(�! �� .� � ��!"���! ��� -�)6� ��� ��I1: �����I12� ����! ������ *�� � �� ���� ���� ���� .����� ��� �� �� �� "����� ��� ��� �� � @�.��� !"��.��� $����!��!� �� ��� �� ����!����� �� �� � ����!���� �� "� ��� ��� �����4� /����$���� ���� ��!"� ��� �@3�

��� '���� ��� C@< �! ��� � �� ������ �� >&5)!)B� /0H++I3� �� ��� ��� . �� � /��.� �� ��� 011I3� ���� �� ��! ���� ����� �� " � � "���� />&�3)� ���� .��� � �"�!" >&5)!)B� �� .���� �� ����!.� ��� � 7�� ��� I "� "� .��� ���� ��"�� �� ������� ��� ��!.� ���� ����� .���� M+=�� �)+)"������� "��������4���)��)+� "��������!�!�� /�-�-&3 /�� 2�?3� +=�� � ��+� 0=�� �) ��!����"��"� ��+=�� �)�� ���"�����"��"� �� =�:�� @�INA7� +�� �� "�� "��� ���:= �� �������� ���"��"� �3� ���� C@< �� �� �! �� .� "� ���� ����� :��� �� M�)I+�O�������� ���"��"� � /���� @-@� �� ��� ��3 � I=�� ��� +=���� �"��"����� �� ��� ��� ���� ����� �� .� ��������!�� ��� �H�����!�������� �� ���! ���"���� ��� �����4�� .�� ������ ���"� /<����� @�� ������ �53�

�-&%�5& �@� �*&�%&&*A@

���� � ��!��� �� !����!�� �� "� ��!�6! ��!"���� ���! ��� ��� �� �� ��!������ � ����� �� "��� .� �� "����� ��� �� ���� ���� ���� ���� �������� ��� �� ����� ��� ��� "� �� �� "�� ������� ����� �������� ��� � � �������� !������������ � �� "����� ��� ���� � � ��)�! ��� �� � ����� �� "���� $�� "�� ��������� � ���"�� ���� �� ���� ���������� ���� ���!� �� ���� �� ��� !� ��� ���� "��� ������)��� ���� ��� -�������� ���� ���!� � ��� ����"�!� � ������� "� �� ����!���� !��� ��� �������� �� "� ���������� �� ������/�� �)��� � �� ��� 011:; & ���� 01123� 5� !"���! ���4� "� ��� �������� ���� ��� ���� � � !������ !�� � �� "� ��� ���!�� .������.�� �������� �������� �� "����� ������� �� ����������� �������� ��� �� !������ ���.����� !�� � � �� ������!!���� (���!�� �"���� �� �� �� �� � �!��� * � �! �����

,�� � )" ������� ��� ��� ����� ������������ '���������� �� �1��" �� �� !�� (��)�!��!� �� ��� � ����!� �� ��!����� ����� ������)�� ��� � "��� �� ���� !����� !����!����!��!��� ��� ����� �� � �� ��!���� �� ������������� ��� �� �� ��� ��� �� " �� "����� �� /��3 ���� ��� /�� �3 ���� ���!� �� /� �3 ���)����� 6��� �� ���� �� @�.��� !"��.�� �������! ��� /�� �3 ������� "� ��� 6��� �� ��)"���� ���� ���!� �� ���� ���� ������ �� " !����� 0 " .����� ��� ��� � ������ ��� 0:��� �� ������ ��� �� �� "������ ��� � ���� �. ����� ���(���!��!� �� ��� �� ���� !����� �� �� �����!����� ���� ���G /� �3 : ��; /�� �3 0= ���

NA�� 007� @A� 7 ���*� +=== �@5����*@ ��5*N�5-& C@< N*� �*�*� �-�AD*��5*A@ ./2

Page 3: Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes

����� � � �� ����! ���.���� ����� ��� � ������� ��!������ ���� � ���.���� /������ ��� �"�� 011+3� �� �� !�� (���!��!�.� (�� !� ��� �� "� .��� �� � � '�� � � ��� �������� ������� ���.���� ���� � �� �������� !��� !� �� � �� /<������ ��� 0192; ��!���.��� �� ��� 011I3� �� �����4�� "� �� ��(���!��!� �� ��� � �� !�� .� ����)!����� !����!�� ��!��)!��� � '�� � � � ������� "� ����� ��������)����� � �� !"������! ��� �������� ������ � �� "������ $����!��!� �� ��� � ��

�� � �4�� ��� � �� !����� �� �� � ����!���� � ��!��.�� ����������� ��� �������� �� ��!���� �� ����� �������� ���� "��� .��� �� !��� (���!��!�� �� �.����� �� "�� 0:��� �� �� "����� ��� ��� �� ���"�� ���� �� ���� /I��3 /,�� ))3 �� ���� ���)!� � /0==��3 /,�� )*� �3 !������� �� " � ��� �� !�� ��� !���/,�� )+� *3 �� �� ���4�� !��!�� �� ��� �� �� "����� ��� ��!"!��� ��� /�� ,�� 3)3� 5"� ����� ��� ��� ����� �! �� ��(���!��!� �� �� �� "����� ������ ����!� � "� ����� ��������) ��� � � �������� ����� ���� �� "� !������ ������ � �� "������

����� ���! ��� �� ����� �������� ��� .� �� "����� �� "�����.���� �� ��!�6! !��� ��� !��� ������ ��� .� ������ �!��!�� �� ���)�������� ��� �������� ����� �� � �� �! ��� ��� ���� ��!������ � ��� ����! ��� �� "��� "� �� �� � !���H!����� ���! ��� ��� !��� ���.��� �� ��������� "����� �! � ���� "����� "� .��� ������!���� ��6��� ���� "� ��!��� � ������4������� � "� �� � �� ���4�� !��!�� �� ��� ��� ��� ��� ����� !�� �! � ���� � � ������4� ���!� � � .� " ����� �! ��������� ���� 5"�������� ����� �������� ��� �������� �� "����� ��� ��� �� �� "�� �����4�� �� ���� ���!� � ��� ����� ��(�� !� ��� ��! � �� �� !�� �� ��� ��� ����"�!� � !��� .����! ����� �� �! ��� �� �� !�� (���!��!� �� !��!�� �� ���)��� ���)�������� �� �����4��� <��� ���!� � ��� ���� ���� ��� �� �� " �� ���4�� !��!�� �� ��� �� �� "������ :=�� ���0��� ����! ������ 5"�� ��!�6! !��!�� �� ��� ���� !"���.��� �� "� �������� ��� ��� �� � ����� �������� ��� �� ��!" !��� ��� /�� ,�� 3)3� �� "�� :��� �� �� "����� ������� ��� �� "��:=, �� (���!��!� �� ��� � "�� .��� �� � 5"� ��� �� ������������� ��� �� .� " !��� ��� � ����� ��� ������ �� ���6��/,�� 3+3� �������� !��!�� �� ��� �� �� "����� ��'���� ����!� ����� �������� ��� �� ���� �� ���� ���!� �� (���!��!��� ��� � �� !�� �� ����"�!� � ��!����� �� ������ � 0= ���� "����� ��� "���� � ����� �! ��!���� �� " ������ � =�I���� "����� ���� I=��� �� ��� ��� /,�� 3)3� @��� ������� ������� ����� �������� ��� ���� ���!"�� � I�� �� "����� ������"�!� � ��� � I=�� �� ���� ���!� �� ����!� �� "� ���� ��� ��������� ��� 0= ��� ���� ��� ��� � �� "�����)���!�� ����� �������� ��� "�� ���� ���!� �� ����!� � ��"�.)� �� � .�� " (���!��!� �� ���� �����.�� .�!�� �� �� � ����� (���!"����� ��� !��� " .� �������� �� �� ���� ����"�)!� � �� ��� ��������� ������ �� �� !�� .� (�� !� ��� ���

,�� � 3" 4!!���� �! ������ �� ����� ���������� �� '������������ �1��" /3 5���)�������� ��!���� �� !�� (���!��!� �� ��� ��� :=�� �� "����� ��� ���� ���!� � �� 0�� �� "����� ��� ����/��!�6!���� � �� �� ����"�!� �3� >��� �� "�� :=, !�� (���!��!��� ��� � "�� .��� �� �� .� " !��� ��� �� �� :��� �� �� "����� ��� ��� �/�3 >��� �� "�� +:, ��!���� �� !�� (���!��!� �� ��� � �� �.������� ���� �� �� I== �� �� "����� ��� I=��� !������� �� " I�� �� "�������� ���� ���!� �� !�� (���!��!� �� ��� � �� "�� ������"� �� " "� "����� �� �� "����� ��� "�� ����� � I �� ��� 0==�� �� "����� ������ ��� ���� ���!� �� ����! ������ $����!��!� �� ��� � �� !�� �������4�� .� (�� !� ��� �� �� �����!� � �� " 0=�=== ����"�!� � ��!"�$����!��!� �� ��� � �� � ��� �� ��� !��)������ !��� �� ��.� ������ � � I== ��.� ���� �� � ��� ��� ������� � ��� �� "��� ���������� ��������� �

,�� � 5" ���������������������� �� ��$� �� �� �! ����������� %� ������" /3 <��� ���!� � ��� ���� ���� ������ � :H+==�� �� "����� ��� 1=��� .����� !��� ��� � ���� ����� ��� C@<�! ��� �� C@< �! ��� � �������� ������ !��!�� �� ��� �� �� "������ /�35��� !��� �� C@< �! ��� ��� �� �����4�� �� 0==�� �� :���� "����� ��� ���� ���!� � �� ����� ����! ������ ���� ��� � �� "� �����.�� �� !��� ��� ����� ���� ��!.� �� �� " >&�)� ���� .��� ��"�!" >&5)!)B� /0H++I3 �� .��� ��� I "� �� �� ��"�� ��� ���� ����� M�)I+�O�������� ���"��"� � ��� +=��� �������� .� ����� ��� .����� ����!�� ��� �H�����!�������� �� ���! ���"���� �"��"����� ��!)��� �� �����4�� .� � ������ ���"� � ��!��.�� �� ��������� �����������

.2* �-%& �� � 5�- CA%�@�� A$ *@N-&5*>�5*N- �-���5A�A>P

Page 4: Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes

@� ��������!� �� ����� �������� ��� ���� �.����� �� ��7 �� ��9����"�!� � .����� ��� ����� �� .� ���& !���� /�� � �� "���3� $� "������� ����"�!� � �! ��� �� .� 0+)���� � � 0I)�!� � � /���3 ����� �� ��� ��� ������!�� ���� ���� ��� ��� "�� '��!�� !��� � ����� �������� ��� ����!�� .� �� "�����/�� � �� "���3� A� �� � "�� "� ����� �������� ��� � ���!��!��!�� �� ���) ��� ���)�������� �� .� �� "����� �� "�� ��� ��� ������ � ���� ���!� � �� ����"�!� �� 5� �� ������� ����� ���� ����� ����! �� ���� ���� ���� � ����� ������"��� �� .��� ��!��.�� �������� �� "����� ��� ��� � *� ���� ������ ���� "� ���� ���� ��!�6!����� ����"�!� � ��� � ��� 0=)���� ���� ��� ��� � �� "�����)���!�� ����� �������� ���!������� �� " ���� ���!� �� 5"�� �.���� ��� ������� ������!� "� ����� �������� ��� ����� �� .� �� "����� � .� " � ����� ���!���) ��� ���! ���� ���.����)��!�� �� ���� "� ��� !�� ��. � � "� "����� �! �! ��� �� "� �� �

�� "����� � � ����� ���!�� �� �A& /������ 01123� ��� �A&��� �������� �� "� �! ��� ��� �� C@< /�!� ��� ��� P�������011:3� �� "������� �������� �"� "�� �� "����� ���!� �! ���) ��� �� C@< �� ���� ���!� � ��� ���� �� � !��!�� �� ���) ��� ���)�������� ������� 5� !������ ���� ��!�6!���� �! ��� ��������� �� .� " !��� ���� � �� C@< ��� ��� �� ������ �� ���!�6! C@< �� �.��� /&�� � ��4� ��� �!"���� �� &�� � ��4���3 ��� "� ��.�� �� !��� �� ��� ��������� ���� !��!�� ���!!����� ��� C@< �! ��� ��� .� �� "����� �� !��!�� �� ���)�������� �� .� " !��� ��� ��� �� ��������� ���!�� ������ ���!� � .� +==�� �� "����� �� �� 1=��� ������ /,�� 5+3�*� ����� C@< �� ��� �� �! ��� �� � � � ��6!�� �� �����!��!�� �� ��� �� :�� �� "����� .� 1=���� �� ��������� ���� �� � +:�� ��� ��!����� � "� "�� �� "����� !��!�� ��) ���� *� .� " ���� ���!� � ��� ����� 0==�� �� "����� �! ��� ��C@< �� "�� I=��� �� ������� ��� ������ �! ��� �� ��������� �.����� �� "�� 0+= �� 1=���� ����! ����� /,�� 5)3� 5� ��C@< ��� ��� ��� �� ������ �� ���� ��� ���� ���!� �� ��� �� ���� �'���� ������� 5"�� ��������� ����� �� � "� �� "����� �! ��� � C@< �� ���� ���!� � ��� ����� . "� "��"��� ������ �� ���� �!!� � 7=)���� ����� !��!�� ��) ��� �� �� "����� !������� �� " ���� ���!� ��

���!�� �� ��� �� 0, /77��3 �� "����� ��� !������� �� ��� ���!�� "����� �� ������� ����� ��� �� ��������� ����"�!� � "�.��� "��� � .� "����� �!���� ������� �� ������ /�� �)��� ��� ��� 011:3 ���� �������� �� "� ������ ���� �����!� ������!���� ��� "� �� �� !�� �� �� "� ���� � �!" � 0+, �� "� ���!���� ������� �� "����� ��� "� .��� ������ �� "�

��������� 5��)���� ����� !��!�� �� ��� �� �� "����� "��� .����� �! �� �� "� ����� /&!"����� �� ��� 01903� *� "� ����! � "� �� !��!�� �� ��� � ��� ���� "�� 0==)���� "� "�� "�� "� ��'���� ��� C@< �! ��� ��� �� "� "���)������� ���! ��� �� ������������� ��� �� ����� �� ����� 5"�� �� � "�� "� "�!��!�� �� ��� �� �� "�� ��������� ��� ���� �� "�� "� ��� ��� �� �� ��� ����!��� �� "�� "� ��!"��� �! �������!� ���� 6���� � *� ����� � ��� �� ���� ���!� �� �� "��� ���� "� C@< �! ��� ��� "�� � ��� ����� � �� " ����� �������� �������!�� .� ���! �� ����� ��� ��)���!�� � �� ��� "� ������������� ��� � �� ����� �� � ���� ���� ��'���� ��� C@<�! ��� ��� /��.��"�� �.���� ���3� 5"� !��!�� �� ��� ���� "����� "� ���!� C@< �! ��� ��� !������ � ���� �� " ����� ������� �������� ��� ��� ��!" !��� ���� �� � "������� "� C@<�! ��� ��� .� �� "����� ��� ���� ����"�!� � ��� ���� ���!� � ������� � .� ����� �� .� ����� �������� ���� 5� ������� � .� �� "���!"���� �� �� "�����)���!�� C@< �! ��� ���� !��� ������� ��� �� �� " "� �� �)������ � @�� �� ��?�� �"�!" �������� � ��"�.� ����� �������� ���� ��� ��� ��� �� ���� ������ ���!� � �� " 0=H+=�� @�� �� :=�� ��?� ��� I=����� �� �� ��"�.� �� C@< �! ��� ��� ���!�� .� ��� ��� ��� 1=����� " :�� �� +==�� �� "������ ����! ����� /,�� ++� )3� 5"����������� �����!� � .� " �A& ��� ����� �������� � ����� �� ����� �� �� C@< �! ��� ��� ���!�� .� �� "������

����� �������� ��� ��� ���� "� � �!� ��� �! !"��� ���! ����� ������ �� �� �� � �!�� !�� ����� �� ���� !��.�� ��.��.��� "� ��� ��!� �� �� "�� !������ ���.����� ���� �A&�"������� ����!�� ��� !�������� � .� "� ��� � ��� �� �� ������� �������� ��� /> ���� � ��� ���������� 01913� . "� ���!����!"���� �� ����� ��� �� ��� �� ����� �������� ��� � ��� �!����� ����� .� ���� "� ����� ����� ��� �� �A& ��� ��� ����� ������������� ��� �� !������ ���.���� "� .��� �������� ���� �6��/��!���.��� �� ��� 011I; N�� �� ��� 011I3� * ��� "� .��� "��� "� �������� ���!�� �����!� ��� �� �� "������ ����� �������� ��� ����� � ��� ���� � ��� �� �� !�� .� ��"�.� �� .� �� �)������ ����"�.� �� �� ����� �������� ��� /$����� �� ��� 0197; �"� �6��� �� ���019:3� A� 6���� "� ���! �� �� �)������ ��� ��"�.� �� ������� �������� ���� !" � @�� ��� ��?�� ���� �� "�����)����� �� C@< �! ��� ��� �� ���� ���!� � ��� ���� � �.��" ������������� ��� � � ����� ��� !�� �!�� � ���� ���� �� "� !�!��� ��C@< �! ��� ��� �������� �� "����� ��� ��� � 5"� � �� � ������ �� " �� 6���� "� ����� �������� ��� �� ���� ���!��� C@<�! ��� ���� . ��� "� "��� � � !��� !������ ��� .� ���� "�� �� ���� �������� � ������� � ������� ��� ��� ��� ��� �� "�������� ����� ��� �� ���!�� � �� /��.��"�� �.���� ���3�

C�"��� �� �� /011?3 "��� ����� �� "� ���� �� 5����"�!� �� �� !�������� �� " ���� ���!� �� ��� ���� "��:=)���� ���� ��� ��� � "� !� � ���! ����! �� ������� ��� ������� � ����� ���� * �� ��� ����� �� �� "� ��������� �� ����"��� !��� ��� � � 0== ��� ���� ��� ��� "������ ���!� � � "� ����! �� �� "� ���� �� ����� "�� "������� !������ �� � �"�� ��� �� ������ �� " �� "� ���� �/C���� �� ��� 011:3� � �� "����� ��� ���� �������� ��� !� � ���!����! "� �������� ����� �� � ���� /��.��"�� �.���� ���3��� "��� "��4� "� ������� ����"�!� � ��� ������� �� .������ �� �����!� ��� �� �� "����� � ����� �! ���'��

��� �! ��� �� !��� ���� ��������.�� ���� � ��� ��� " .� ������������� ��� � ����� �� "�� " ����� ��4��� �! �� ���)��4��� �! �� �)������ �� "���� <��� ���!� � ��� �������� ���������� "�� ��! �� � !�� ���! "� ���! ����! �� �������������� *� ���� ���� "� �� ����� ��� ���� ������� �� ��)����� � 6����� �! �� �� ���� ���!� � ��� ��������� �!������� �� " ����"�!� � ��� � "�� !��� ���� ��� ��� ���� ���B�� ��� �� "� ��"��!�� ��� ��!� � ����� �"��!�� ���!"���!�� ���������� �� ���� ��!���� "�� ���!�� .� ������������� ����

*� ������ �� ���� ��� �� "����� � � ����� ���!�� �� C@<�! ��� ��� ��� !"���! ���4� ����� �������� ��� � "� ������ ������ �� ��!��.�� "� ����� � �! ��� ��� �� ���� ����

,�� � +" 6���%����� �! ���������� ��� ��� ������� %� ��� ����.� �� '���������� �� �1��" /3 <��� ���!� � ��� �� �� "+==�� �� "����� ��� 1=��� ��� /�3 ���� ������ � :�� �� "����� ���1=��� ���� ��� ��� �� ��� 9 " �� " 0= �� +=�� @��� $�� � ��!��������� �� �� ��?� �� ����� ��� I=��� .����� ��� ��� � C@< �! ��� � ������� � ��!��.�� �� ,�� 5�

NA�� 007� @A� 7 ���*� +=== �@5����*@ ��5*N�5-& C@< N*� �*�*� �-�AD*��5*A@ .2)

Page 5: Anti-Psoriatic Drug Anthralin Activates JNK via Lipid Peroxidation: Mononuclear Cells are More Sensitive than Keratinocytes

� ����� ���� �� ���� ��� ���� ���!� �� A� �� � �������������!� "� �����!���� !��� ��� � ��6!�� �� ���� ��� ��� ��� "����� "�� ���� ���!� � ��� ��� ������ "� ������� �� � �� "��"����!��� �! �! ��� �� �� "������ $� "�� !"���! ���4� ��� �� "�.��!"���!�� ��!"���� �� �! ��� ��� �� � ����� �� "��� .��� "����� ���� ���� � � .� �� ���� ����� �� "� ���� �� �! ����� "� �� ��� ���� �� ����� "� ��� .��� ��������� ��������� ��� � "�� ��� ����� /����� ��� ����4� 01123�

�� ����� ��� �� ����� ��� ����! �" #�� ��� $�#� �# % �&�& �� '���(��� ���

�)������� ��������� ���������� '������ �* +� ��������! �� ������� ��� ��

,������� �� $����#���* �����-���$��� �� ����� ������� .��� ��� ��� ��-�� #��

����������� ����������� �� .��� �.� /0123&4" ��� 5� +������ �+6 73823&4" -���

��''����� �* $����� #��( ��� �������� 9�������$�$�(�������#� ��9%"� � ����

-�� ��''����� �* ��� %��(��&(������ 9�����$�� ��((������ ��� ���

���������#���$ ��� ��������� :������ ��������� ��''��� -�� '������ �* ���

��*� 9����������

�-$-�-@�-&

�� �)��� � L� ������.�� �� N���"�� CC� ������ <�G *� ��������� 5)����"�!� � �! ��� ��� � � ����� �� �� ����� �! ��������� "���������� 6���� ���(���� 0=:G91&H17&� 011:

�!� ��� C� P������ ��G ���� �� ��� ��!����� ����� ��� �� ���! ��� ��� ����!�� �� ����Q ������� ����� �� �� ��� ������ I29G22?H221� 011:

�"�� ��"�� -� ������ 4 %G 5"� ��(���� ��� ��6� �� � �� ������� ���� ���(����0IG0I0H0I:� 011:

���� �CG &� ��� ����! ��� .� "� !)C� @) ������� ������ ������( �� *('?7G0H0+� 0111

����B��� �� ��.� �� � *�� �� ��G C@<0G � ��� ��� ����� ���� �� .� %N �� " �����)�� "� .��� ��� �"��"����� � "� !)C� �! ��� ��� ������� ����2?G0=+:H0=I2� 0117

$����� �C� ������!� ��� &" �� &G *�"�.� ��� �� �� "����� ��(���� ��� .� ����)����!�� !���� ��� ������ ��G00+1H00I=� 0197

>������ -G %J .�� �� ������ ��� -�� 4���J���� �� �"�����.��� ���(���� ����������?+G00IH00:� 010?

> ���� � C�� ��������� �G *��� ���!� � ��� ��� �� ����!��� �������;�� ���� 5��(����+G01:H+:?� 0191

������ �� �"�� &G $��� !� ��� ��! �������� �� ����� �������� ��� �� �� �� !����� ��������! �!��� �*��(���* 0IG?9?H?1+� 011+

��.� �� ��� �� &���� 5� ������ �� <���� �G *��� �6!� ��� �� �� ��!���� ���) ���%N)�������� ��� ��� ����� "� .��� ��� �� �� �� � "� !)C� �! ��� ���������� %���� �����'(��� 2G+0I:H+079� 011I

��!���.��� ��� A� ��� L@� P�� D�� �������� ��� <������� &CG �!�)+ ��! ����� �� �� ������� �� "��� � ������ ���� ��� ���� 2:G+70H+:0� 011I

C���� -�� I��� �!���� " C�� �� ����� ��� �� ��G �� "� ���� � "����� ��������G �������� ��� ��� ��� � �� ��������� �� ����"��� ��� ��� "����� !��� �

"� !� � ���! ��� ��� ") ��"�.� ��� ����! �� �� "� ���� �� 6���� ���(����0=7G09IH099� 011:

C�"��� �� & �����)���!� �� � �� �� ��������� *� @�.���)5���B� �� <�� ��C>G �%N� ��� ��� ���! ����� ���!� � !��� !�!�� .��!� ��� .�'�� ���� �� �� "��� 5)����"�!� �� .�������( .�������� ?IG:??H:20� 011?

<����� �� �4�!�� 5� ����)$��!� AG �� "�����G � ������ �� "� ��!"���� ���! ��� �� "� ��� ��� �� ������ �� ���� ��� .���(���� IG0H+=� 011=

<�� �� C>� ����� C5� @�.��� �5� �� ��G &!!��� � ������� � ��� ��� �������� � �!!�������� .� � ������� �� ���� ���!� � �� "��� � ��� .� ���! �������� ��� �� �� ����������� 5 !���� �)' ��� 09+G+=:2H+=?9� 011:

<���� $�� ��� ��� ��� CC� &!"�����B� �� �������� �� A� ��� <��� C�G��������! �!�� � � ��� ��� (���!�� ���.� ��� "� �� ������ ��� �� ������������� ���� ������( ���'�*� ��� 1+0G+??H+27� 0192

�� PP�� ��� C�&� ��4 5$G ���! ��� ��� �� ��!�� ����� � !� ����� �! ��� ����� !)C� @�+) ������� ������ ���� ���( +20G0:2=IH0:2=2� 011?

��"��� >G �� "������ ���� ���(���� 0:G2+IH2I2� 0112������ 4 %� C�� �� &!"���4 �� &!"���4 5G �� "����� /�� "�����3 �� ���� ��"�.�

"��� ����!� � � �!�� � *�)?� *�)9 ��� 5@$)�� . �� *�)0� �� ���(���� 0I?G:7+H:72� 0112

����� <G �� ������ �! ��� �����(���� ��� �! ��� �� �� "������ *����!� ��� ��� "����� �� ��� �� ����!��� ������( .���(���� :IG0+0:H0++0� 0112

����� <� ����4 �G �� ������ �! �� "���� �� " ����� �� ����� ������ ��� 7�&�� "�� ��� .���� �!�� �! ��� � �� ����� 1�0=)��"����)0�9)��"������)1)���)+)�� "��!���!��.�����! ��� )"��������! �!��� ��� ���( 7=G+29=H+292�0112

�� �� ����!"�� �� �� ����� ��G ->$)��!�� �� ������ ����� ��"�.� ������!� ���� ���!� � ��� " ���� ��� ������� �������� �� ���� 6�������(���� 0=1G2:0H2:?� 0112

���!"�� %� C�!'� P� >��� ��� �� &!"��� �G �� ������� ��� ����� ���������� ��� �! ��� � �� �� "����� �� !� ��� "��� ���� ���!� �� 6�������(���� 97G0I=H0I7� 019:

&!"����� �� &!"���� �� &"��� �G �� "�����)��! � ���� ��� �������� ���.���� <5����� 07?G+2IH+9+� 0190

&!"����� �� <%� �� ����� ��G �� "����� ��"�.� ����� �� ����� �� "������������! �� �� ������� � ��� ���� �� �! ��� ��� "� �� � ��� ���(����0+IG0717H0719� 0192

&!"�� ��� �� ��� �� ������ ��G ����� ������)���� ������� ���!�� .� �������78 5 !���� ��� ��� IG09IH099� 0112

&!"����� C�G �� "����� /0�9)��"�������� "����3 � � �� �� ��"�.� �� �� ���� ���������! ��� ��� �5�7)��� � ����� ��� .� "��� �� ���"��� 6�������(���� 92G?+7H?+1� 019?

&!"����� C�� <����� %� �"�� ��"�� -G �� ���! ����� ��"�.� ��� .� �� "����� ����� ���� �� ��� !"��� �! �! ��! �� ���� �� "��� �� ���"��� 6�������(���� 9:GI=HI7� 019:

& ��� �&G ������� ������ I:=GI71HI:I� 0112%��� �>G �� ����� �� ������ �� ��� ������� ���(���� ���������� ?+G00?H0I2�

0:=H0?I� 02:H09I� 010?N�� �C� &������ ��� &" �� C�� <������� &CG �!�)+)��6!��� ��!� ����� �� �

������� ����"��� ���� ��� ����!� �! ������� ��� "����� ��� �� "�������� 2:G++1H+7=� 011I

�"� �6��� �� ������ >�� ������� ��G *�"�.� ��� �� �� "����� ��(���� ��� .�����)����!�� !���� ��� ������ �G02I� 019:

.23 �-%& �� � 5�- CA%�@�� A$ *@N-&5*>�5*N- �-���5A�A>P