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Facultad De Ciencias Químicas
Extensión OcozocoautlaPrograma de Químico
Farmacobiólogo
Manual de Laboratorio
Materia: Bioquímica Cuarto semestre
INTRODUCCIÓN
El presente manual está dirigido a los alumnos que cursan la asignatura de
Bioquímica en el cuarto semestre del programa de Químico Farmacobiólogo y
tiene como objetivo familiarizar al estudiante con las substancias, métodos y
equipo utilizados en la asignatura; además pretende darle experiencia personal en
algunas técnicas y ponerlo en contacto con el método científico y seguir
estimulando su interés por esta rama de la ciencia.
Cada una de las prácticas contiene la metodología necesaria para el desarrollo
experimental, así como los antecedentes teóricos necesarios para la comprensión
de cada uno de los experimentos y poder reforzar los aspectos teóricos del curso.
El manual de Bioquímica lo hemos preparado con algunas prácticas sencillas, y
representativas, que intentan explicar algunas de las propiedades de las
biomoléculas y técnicas para estudiarlas.
Objetivos de laboratorio
El alumno aprenderá a relacionar los principios teóricos con las técnicas y
determinaciones de procesos Bioquímicos para describir e interpretar los
principales procesos metabólicos de la célula como medios de obtención de
energía para la misma.
También se busca hacer conciencia y responsabilizar al usuario de este manual
de los procedimientos, materiales y equipos empleados antes de cada sesión del
laboratorio.
1. Metabolismo celularObjetivoObservar y comprender diversos procesos metabólicos que ocurren en los
organismos vivos
IntroducciónEl metabolismo celular, es el conjunto de reacciones químicas que se producen en
el interior de las células de un organismo, mediante las cuales los nutrientes que
llegan a ellas desde el exterior se transforman. Estas reacciones están catalizadas
por enzimas específicas. El metabolismo tiene principalmente dos finalidades:
•Obtener energía química utilizable por la célula, que se almacena en forma de
ATP. Esta energía se obtiene por degradación de los nutrientes que se toman
directamente del exterior o bien por degradación de otros compuestos que se han
fabricado con esos nutrientes y que se almacenan como reserva.
•Fabricar sus propios compuestos a partir de los nutrientes, que serán utilizados
para crear sus estructuras o para almacenarlos como reserva.
Dentro del metabolismo se diferencian dos tipos de procesos: catabolismo y
anabolismo.
El catabolismo o fase destructiva. Es el conjunto de reacciones metabólicas
mediante las cuales las moléculas orgánicas más o menos complejas (glúcidos,
lípidos etc), que proceden del medio externo o de reservas internas, se degradan
total o parcialmente transformándose en otras moléculas más sencillas (CO2,
H2O, ácido láctico, amoniaco, etc) y liberándose energía en mayor o menor
cantidad que se almacena en forma de ATP. Esta energía será utilizada por la
célula para realizar sus actividades vitales (transporte activo, contracción
muscular, síntesis de moléculas, etc). Las reacciones catabólicas se caracterizan
por lo siguiente:
•Son reacciones degradativas, mediante ellas compuestos complejos se
transforman en otros más sencillos.
•Son reacciones oxidativas, mediante las cuales se oxidan los compuestos
orgánicos más o menos reducidos, liberándose electrones que son captados por
coenzimas oxidados que
se reducen.
•Son reacciones exergónicas en las que se libera energía que se almacena en
forma de ATP.
•Son procesos convergentes mediante los cuales a partir de compuestos muy
diferentes se obtienen siempre los mismos compuestos (CO2, pirúvico, etanol,
etc).
El anabolismo o fase constructiva. Es el conjunto de reacciones metabólicas
mediante las cuales a partir de compuestos sencillos (inorgánicos u orgánicos) se
sintetizan moléculas más complejas. Mediante estas reacciones se crean nuevos
enlaces por lo que se requiere un aporte de energía que provendrá del ATP.
Las moléculas sintetizadas se utilizaran por las células para formar sus
componentes celulares y así poder crecer y renovarse o serán almacenadas como
reserva para su posterior utilización como fuente de energía.
Las reacciones anabólicas se caracterizan por lo siguiente:
•Son reacciones de síntesis, mediante ellas a partir de compuestos sencillos se
sintetizan otros más complejos.
•Son reacciones de reducción, mediante las cuales compuestos más oxidados se
reducen, para ello se necesita electrones que se los ceden los coenzimas
reducidos (NADH, FADH2, etc) que al cederlos se oxidan.
•Son reacciones endergónicas que requieren un aporte de energía que procede de
la hidrólisis del ATP.
•Son procesos divergentes debido a que, a partir de unos pocos compuestos se
pueden obtener una gran variedad de productos.
MetodologíaProcedimiento 1a) Prepare los siguientes tratamientos en tubos de ensayo:
Tubo Agua Azúcar Levadura Tratamiento Condiciones1 3 ml agua tibia - - Agitar Baño de agua tibia
2 3 ml agua tibia 1cdita - Tapar el
tubo
con
papel parafilm
Baño de agua tibia
3 3 ml agua tibia - 1 cdita Baño de agua tibia
4 3 ml agua tibia 1 cdita 1 cdita Baño de agua tibia
5 3ml agua hirviendo 1 cdita 1 cdita Baño de agua tibia
b) Deje reposar las preparaciones hasta que observe alguna variación en el
parafilm. Tome nota de los cambios ocurridos. Deje reposar 20 minutos todas las
preparaciones manteniendo los tubos en el baño de agua tibia.
c) Registre la observación del estado final del parafilm en cada una de las
preparaciones.
Cuestionario. Procedimiento 1
1. ¿Qué diferencias observa entre el estado final del parafilm del tubo 4 y las de
los tubos 1, 2 y 3? ¿Cómo pueden explicarse estas diferencias?
2. ¿Qué procesos metabólicos podrían haber producido estos resultados? ¿Qué
proceso ocurrió? ¿Cuáles son sus productos?
3. ¿Qué intercambio de materia tuvo lugar en el proceso ocurrido en los tubos?
¿Hubo alguna transformación de energía asociada?
4. ¿Qué diferencias observa en el estado final del parafilm de los tubos 4 y 5?
Explique.
5. ¿Qué diferencias hubiera observado entre el tubo 4 y un tubo adicional
conteniendo una preparación similar (agua tibia, levadura y azúcar) pero colocado
en un baño de agua helada? Explique.
Procedimiento 2a) Coloque 1 ml de solución de azul de bromotimol en una probeta y lleve a 50 ml
con agua corriente. El azul de bromotimol es un indicador de pH (a pH 7,5 es azul
y a pH 6 es verde amarillento).
b) Coloque 10 ml de esa solución en un tubo (Nº 1) que será el testigo azul. A la
solución remanente de la probeta, insúflele aire con una pipeta hasta que el color
vire a verde amarillento. c) Responda:
1. ¿Por qué cambió el color de la solución de bromotimol de azul a verde?
2. Si se le insufló aire expirado ¿qué gas aumentó su concentración en la
solución?
d) Reparta la solución verde
amarillenta en 4 tubos de
ensayo numerados y siga en
cada caso el procedimiento
indicado (ver esquema):
Tubo Nº 1: Testigo azul;
Tubo Nº 2: Testigo verde
amarillo; Tubo Nº 3: Coloque una ramita de elodea y deje a la luz durante 40`;
Tubo Nº 4: Coloque una ramita de elodea y tape con un sobre de cartulina negra
por 40`.
e) Luego de transcurrido el tiempo indicado, saque las ramas de ambos tubos,
observe y compare los colores con los respectivos testigos. Anote las
observaciones.
Cuestionario. Procedimiento 21. ¿Qué cambio de color ocurrió en el tubo Nº 3? ¿Por qué se produjo ese
cambio?
2. ¿Qué gas que había sido insuflado cambió su concentración? ¿Cómo explica
ese cambio de concentración?
3. ¿Qué intercambio de materia ocurrió? ¿En qué proceso?
4. ¿Hubo alguna transformación de energía durante ese proceso? ¿Pudo ser
observada/evidenciada?
5. ¿Cuáles son los productos de ese proceso? ¿Cómo podrían visualizarse?
6. ¿Qué cambio de color ocurrió en el tubo Nº 4? ¿Por qué?
Procedimiento 3a) Lave 4 hojas de espinaca, córtelas en pedacitos y colóquelas en un mortero.
b) Vierta 10 ml de acetona y triture la mezcla hasta que el disolvente adquiera un
color verde intenso.
c) Filtre con un embudo y papel filtro.
d) Siembre el extracto con un capilar a medio centímetro de altura del papel
cromatográfico.
e) Coloque el papel cromatográfico sostenido con una pinza en un vaso de
precipitado que contenga ½ centímetro de altura de éter de petróleo. Es
importante que la línea de siembra del extracto no quede sumergida en el éter).
f) Deje el papel cromatográfico en el éter por unos minutos, observe qué sucede y
tome nota de los resultados.
Cuestionario. Procedimiento 31. ¿De qué color es el extracto obtenido de la planta?
2. Según la respuesta anterior ¿qué pigmento puede asegurar que tiene este
extracto?
3. Según los resultados ¿podría decir que esta planta verde tiene otros
pigmentos?
4. ¿Por qué no se ven normalmente estos pigmentos? ¿Qué función cumplen?
Discusión de resultados
Conclusiones
2. Actividad glucolítica: eritrocitosObjetivoEl alumno integrará el conocimiento basado en que la glucosa es el metabolito
fundamental y de rápido alcance para la obtención de energía celular.
IntroducciónA diferencia de otras células y de sus propios precursores, el eritrocito maduro
carece de orgánulos subcelulares. En sentido estricto podría decirse que no es
una célula viva, al menos como las demás, puesto que no puede sintetizar
proteínas, glucógeno ni lípidos y es incapaz de llevar a cabo la fosforilación
oxidativa. En consecuencia, su metabolismo, muy reducido, queda limitado a la
glucolisis, ciclo de las pentosas fosfato, ciclo del 2,3bifosfoglicerato, reacciones de
oxidorreducción para la detoxificación de sustancias oxidantes y ciertos aspectos
del metabolismo nucleotídico. Estas rutas y reacciones son justamente las
precisas para mantener sus necesidades metabólicas durante los 4 meses de vida
media celular. El eritrocito requiere la energía para la realización del transporte
iónico (sodio, potasio y cloro, principalmente), para el mantenimiento del hierro de
la hemoglobina en su forma divalente, de los grupos sulfhidrilo de las proteínas
enzimáticas y de la hemoglobina en estado reducido y para la conservación de su
propia morfología celular. Por otro lado, contiene una concentración de fosfatos
orgánicos del orden de 50 a 100 veces superior a la existente en el plasma, la
mayoría de los cuales son de naturaleza orgánica (azúcares-fosfatos y ATP).
Gracias a la producción de un fosfato orgánico característico, el 2,3bifosfato, el
eritrocito puede modular, en combinación con el pH y la presión de CO 2, el grado
de eficiencia con que el oxígeno es cedido a los tejidos.
La glucolisis comienza con la incorporación de monosacáridos a la célula; la
glucosa y la fructosa, transportadas al interior de la célula por un proceso de
difusión facilitada, mediante un transportador común, son también fosforiladas en
el carbono 6 por la hexoquinasa (Fig.3). La velocidad de transporte de la fructosa
es mucho mayor que la de la glucosa, por lo que aquella puede acumularse en el
interior del eritrocito. La presencia de glucosa a concentración fisiológica, inhibe la
utilización in vivo de la fructosa, tanto en el transporte como en la fosforilación.
Ello demuestra que la fructosa no es un substrato fisiológico para el eritrocito, y
confirma que sólo se emplea metabólicamente en ausencia de glucosa. La
galactosa también es transportada por difusión facilitada, y una vez fosforilada a
galactosa-1fosfato por la galactoquinasa, se introduce en la glucolisis mediante la
intervención de la uridin bisfosfato glucosa (UDPG) y la acción de la galactosa
1fosfato uridil transferasa, la UDPG-4epimerasa y la fosfoglucomutasa. La glucosa
6-fosfato que se forma se isomeriza a fructosa-6-fosfato mediante la fosfohexosa
isomerasa, con lo que se inicia la secuencia de reacciones características de la
glucolisis hasta la formación de lactato como producto final.
MetodologíaLas muestras problema a utilizar serán:
Tubo 1: plasma separado (aislado de eritrocitos)
Tubo 2: plasma no separado (no aislado de eritrocitos)
Reactivos: a cada equipo se le proporcionarán 4 tubos con solución reactiva para
la determinación de glucosa. Identifique los 4 tubos como A 1 y A 2 ; B 1 y B 2 .
Procedimiento
1. En el tubo A1 agregue 10 microlitros de plasma separado, incube 10 minutos
y mida la glucosa.
2. En el tubo B1 agregue 10 microlitros de plasma no separado, incube 10
minutos y mida la glucosa.
3. Realice simultáneamente el paso 1 y 2.
4. Después de haber extraído los 10 microlitros de plasma no separado, de
inmediato mezcle por inversión suave, espere 30 minutos, centrifugue y tome 10
microlitros de plasma para una segunda medición de glucosa (use el tubo B2).
5. Realice simultáneamente la segunda medición de glucosa utilizando el plasma
separado (use el tubo A2)
La medición de glucosa será auxiliada por el personal a cargo del laboratorio.
ResultadosOrganice los resultados obtenidos en una tabla.
Cuestionario1. Establezca si hay o no hay diferencia en la cantidad de glucosa medida
entre los tubos A1 y A2 y entre los tubos B1 y B2
2. Si usted observó diferencias, explique a qué se deben esas diferencias.
3. Si usted no observó diferencias, diga cuál podría ser la explicación.
4. Diga usted, en el caso de que hubiésemos utilizado células hepáticas, qué
podríamos haber observado (teóricamente)? Explíquese
5. Diga usted, en el caso de que hubiésemos utilizado células musculares,
qué podríamos haber observado (teóricamente)? Explíquese
6. Diga usted, si hubiésemos podido medir el pH de los tubos a los cero y a
los 30 minutos, ¿habríamos observado alguna diferencia? ¿más alcalino o
más ácido? ¿por qué?
7. Diga usted, logró observar alguna evidencia de la glucólisis en nuestro
experimento? Cómo?
Discusión de resultados
Conclusiones
3. OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO Objetivo
El alumno demostrara la oxidación mitocondrial del succinato, utilizando un
aceptor artificial de electrones, la cantidad del cual será determinada por
espectrofotometría.
Introducción Los animales superiores son heterótrofos, es decir, no pueden sintetizar su propia
energía (como lo hacen las plantas en la fotosíntesis), sino que deben ingerir esa
energía en los alimentos que consumen, y posteriormente extraer parte de la
misma mediante una compleja serie de reacciones bioquímicas.
La principal fuente de energía para los animales y el hombre son los
carbohidratos, el metabolismo energético de estos compuestos incluye reacciones
como la glucólisis, ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Dependiendo de si las
condiciones microambientales son aerobias (con presencia de oxigeno), o
anaerobias (en ausencia de oxigeno), las reacciones proseguirán por una vía, o
bien, se detendrán a cierto nivel.
La mitocondria, es un pequeño organelo celular en donde se llevan a cabo las
reacciones que requieren la presencia de oxigeno. En la mitocondria se hallan
numerosas enzimas que hacen posible la oxidación de los metabolitos del ciclo de
Krebs. La oxidación puede implicar: ganancia de oxigeno, perdida de hidrogeno, o
más específicamente, perdida de electrones.
La producción de energía por parte de la mitocondria, implica el transporte de
electrones a lo largo de una cadena de reacciones y de varias maneras, una de
ellas, es la colorimétrica, usando un aceptor artificial de electrones, el cual cambia
de color cuando capta dichos electrones.
Para el caso de nuestra práctica experimentaremos
Para el caso de la práctica, se usará como aceptor artificial de electrones al
ferrocianuro (se usará ferrocianuro de potasio). Esta substancia es de color
amarillo, y a medida que va aceptando electrones, va haciéndose cada vez más
pálida. A mayor cantidad de electrones aceptados, más pálida se vulva la solución,
esta disminución de color se puede mediar con gran exactitud usando el
espectrofotómetro.
Metodología Reactivos Buffer de fosfatos pH 7.4 0.1M, Succinato en buffer 0.01M, Malonato en buffer
0.01M, Cianuro de potasio, Ferrocianuro de potasio 0.01M y Ácido tricloroacético
al 10%
Procedimiento
1. Pese 10 gramos de corazón de res fresco (puede ser de otra especie).
2. Pique finamente el trozo de corazón, añada 190ml de buffer de fosfatos
bien frío.
3. Coloque en un vaso licuador y licue por 1 minuto.
4. Filtre a través de gasa fina y recoja el filtrado en un vaso de precipitados.
5. Coloque en baño Maria de hielo el vaso de precipitados que contiene el
filtrado (homogenizado).
6. Numere 3 tubos de ensayo y proceda como muestra el esquema:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Buffer de fosfatos 3ml 2ml 1.9mlSuccinato en buffer 1ml 1mlMalonato en buffer 0.1ml_______________________________________________________________Homogenizado del paso No 5 1ml 1ml 1ml
NOTA: Checar que esté bien mezclado._______________________________________________________________Cianuro de potasio 1 gota 1 gota 1 gota
7. Colocar los tubos en un baño María a 37°C por 5 minutos.
8. Añadir a cada tubo 1ml de ferrocianuro de potasio. Mezcle bien, anotar el
tiempo al que se hizo la adición.
9. Diez minutos después agregue a cada tubo 5ml de ácido tricloroacético.
Mezcle bien.
10. Centrifugue cada tubo por 5 minutos a 2,000 r.p.m.
11. Obtenga el sobrenadante de cada tubo y tome la lectura de la absorbancia en
el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 420nm. NOTA: UTILICE
AGUA DESTILADA COMO BLANCO PARA CALIBRAR EL APARATO.
12. Calcule el número de micromoles de ferrocianuro que quedan en cada tubo,
para ello considere lo siguiente:
a) La Extinción molar (E) del ión ferrocianuro es de 1 X 10 3 litros mol -1 cm -1 a 420nm.
b) El volumen total en cada tubo, luego de la adición del ácido tricloroacético
es de 10ml.
c) La longitud del rayo de luz que atraviesa la cubeta es de 1-1.2 cm. (Consulte a su instructor para el caso de las cubetas que usted está usando)
FORMULA A EMPLEAR PARA LOS CALCULOS
C = A___ EB
C = Concentración, A = Abosorbancia medida en el espectrofotómetro E = Exticnción molar (1 X 10 3 mol -1 cm -1), B = Espesor de la cubeta (cms)
Resultados
Micromoles de Fe (CN) 3 Micromoles de Fe (CN) 3Al final de la reacción usados por el sistema Tubo 1: Tubo 2: Tubo 3:
Resultados esperados Tubo 1. ------ la solución conserva color inicial
Tubo 2. ------ solución se decolora-tiende a ser transparente
Tubo 3. ------ la solución conserva su color inicial
Cuestionario1. Explique por qué suceden los fenómenos colorimétricos en cada uno de los
tubos problema
2. ¿En qué reacción se ubica el procedimiento realizado de ésta práctica?
Explique la reacción problema (describa la función de las estructuras
químicas que participan en la reacción)
3. ¿A qué coenzima del ciclo de krebs sustituye el ferrocianuro?
4. ¿Las reacciones que se llevaron a cabo, se producen dentro o fuera de la
mitocondria? Explique su respuesta
5. ¿Qué sucede con el organismo cuando se intoxica con malonato? Explique
las posibles situaciones.
Discusión de resultados
Conclusiones
4. Ciclo de la UREAObjetivoEl alumno debe familiarizarse con los procesos experimentales utilizados para la
elucidación de las rutas metabólicas. Estos procesos se aplicarán al estudio del
ciclo de la urea.
IntroducciónLa urea, CO(NH2)2, es el compuesto mediante el cual los mamíferos excretan la
mayoría del ión amonio producido por el catabolismo de los aminoácidos. En la
síntesis de urea, que tiene lugar en el hígado, las fuentes inmediatas de los
átomos de nitrógeno son el carbamil fosfato y el ácido aspártico. El carbamil
fosfato se sintetiza en la matriz mitocondrial a partir de anhídrido carbónico y
amoníaco en una reacción que requiere ATP. El ácido aspártico se forma por una
transaminación en la que el oxalacetato es el receptor de un grupo amino. Como
puede verse en el esquema de abajo, la formación de urea es un proceso cíclico
en el que que la ornitina tiene un papel análogo al oxalacetato en el ciclo de los
ácidos tricarboxílicos, pero a diferencia del mismo, no se decaboxila en cada ciclo,
de modo que la molécula de la ornitina cicla una y otra vez. El hígado de una
persona con dieta normal produce en promedio 25-30 g de urea al dia, aunque
puede variar dependiendo de la abundacia en proteían de la dieta. La uremia es
alrededor de 30 mg/dl.
En esta práctica el alumno llevará a cabo varios ensayos para tratar de comprobar
determinados aspectos del ciclo de la urea.
Metodología
Determinación de urea Para cuantificar el efecto de los cambios experimentales sobre la actividad del
ciclo, se utilizará un método de medida de la cantidad de urea basado en la
reacción coloreada de la urea en presencia de ortoftalaldehido (Reactivo 1) en
medio ácido (ácido bórico, Reactivo 2). La mezcla incubada durante 15 minutos a
37º C da una coloración roja con un máximo de absorción a una longitud de onda
de 510 nm. Se determinará también la concentración de urea en orina humana.
Recta patrón y medida de urea en orina.
1. Hacer las mezclas en los tubos patrones y el tubo con orina (volumen final
1,5 ml).
2. Añadir 1 ml de Reactivo 1 y 1 ml de Reactivo 2 a todos los tubos (incluido
el Blanco)
3. Incubar los tubos durante 5 minutos a 37ºC para que tenga lugar reacción
de los Reactivos 1 y 2 con la urea (producto de color rojo).
4. Meter los tubos en hielo 1 min aproximadamente y medir la absorbancia a
510 nm. Dejar el tubo blanco en hielo después de ajustar el blanco del
colorímetro
5. Representar una recta patrón de absorbancias (en eje de ordenadas) frente
a µmoles de urea totales en cada tubo (en abcisas)
6. Determinar los µmoles de urea presentes en la muestra de orina
interpolando en la recta
Análisis del ciclo de la UREAPreparar los tubos problema 1 a 4, con volumen final 1,5 ml. Los compuestos se
utilizarán en las siguientes concentraciones y volúmenes:
1. Incubar los tubos durante 5 minutos a 37ºC para que tenga lugar las
reacciones enzimáticas de síntesis de urea en los tubos problema
2. Añadir los Reactivos 1 y 2 (1 ml de cada uno).
3. Incubar 5 min a 37ºC para que tenga lugar la reacción coloreada en
presencia de urea.
4. Enfriar los tubos para parar la reacción (1 min en hielo) y medir la
Absorbancia a 510 nm (Secar los tubos antes de meterlos en el
espectrofotómetro). SI es necesario usar el Tubo 1 (blanco) de la primera
parte para hacer el blanco del colorímetro
5. Interpolar en la recta patrón y expresar la cantidad de µmoles de urea
producidos en cada tubo
Resultados
Cuestionario
1. ¿Cuál es la concentración de urea en la muestra de orina analizada? (tener
en cuenta que se ha usado 0.1 ml de orina diluída 1/10)
2. ¿Cuál es la cantidad de urea presente en el tubo que tiene todos los
componentes necesarios para que se lleve a cabo el ciclo? ¿Qué
metabolitos del ciclo NO has añadido?
3. ¿Hay urea en el homogenado de hígado?
4. ¿La generación de urea es un proceso enzimático?
5. ¿Es la arginina precursora directa de la urea?
Discusión de resultados
Conclusiones
5. Cuerpos cetónicosObjetivo
Demostrar la presencia de cuerpos cetónicos como consecuencia de un ayuno
prolongado
Introducción
En condiciones normales los combustibles empleados en los tejidos para obtener
energía son: Glucosa, ácidos grasos, cuerpos cetónicos y aminoácidos.
En caso de ayuno hay cambios que requieren de la adaptación del organismo y
esto trae como consecuencia modificaciones en los patrones metabólicos y por lo
tanto en las moléculas utilizadas como combustibles.
Durante las primeras etapas del ayuno se realizan cambios hormonales, se deja
de liberar insulina y se aumenta la liberación de glucagon, lo que ocasiona un
aumento en la Glucogenólisis, estimulación de la Lipólisis, inhibición de la síntesis
de triacilglicéridos, aumento de la Beta - oxidación y producción de cuerpos
cetónicos (Cetogénesis), si el ayuno es prolongado se presenta un desequilibrio
entre el metabolismo de carbohidratos y el de lípidos lo que ocasiona que los
niveles de cuerpos cetónicos se eleven en sangre y sean eliminados por orina
donde son detectados fácilmente.
Metodología
MuestrasOrina de personas en ayuno de 8 horas (la primera del día), diabéticas y normales.
Procedimiento
1. En un tubo de ensaye se colocan 2.5 ml de orina y se agregan 10 gotas del
reactivo de Imbert. Se mezcla.
2. Deslizando por las paredes del tubo se agrega 0.5 ml de Amoniaco o
hidróxido de amonio para obtener una reacción zonal.
3. Cuando la reacción es positiva, en el punto de contacto aparece un anillo
violeta cuya intensidad es proporcional a la cantidad de cuerpos cetónicos.
Resultados
Cuestionario1. ¿Qué nombre recibe la presencia de cuerpos cetónicos en sangre y orina
cuando se encuentran en cantidades más altas que las normales?
2. ¿En qué condiciones metabólicas se acumulan cuerpos cetónicos?
3. ¿Cuáles son las células que son capaces de utilizar a los cuerpos
cetónicos como combustibles?
4. ¿A partir de qué macro moléculas es posible sintetizar cuerpos cetónicos?
5. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de Imbert?
Discusión de resultados
Conclusiones
