- Farmacologia da Inflamação e Dor 36.001 EFEITO DO TRATAMENTO COM ANTICORPOS PARA FATORES NEUROTRÓFICOS SOBRE A HIPERALGESIA E ALODINIA INDUZIDA PELA AVULSÃO DO PLEXO BRAQUIAL DE RATO. 1Rodrigues Filho, R.; 2Santos, A. R. S.; 3 Bertelli, J.A.; 1Campos, M. M.; 4Ferreira, J.**; 1Calixto, J. B.; 1Farmacologia UFSC; 2Fisiologia UFSC; 3CCBS-UNISUL; 4Farmacologia, UFMG Objetivo: Resultados obtidos em nosso laboratório demonstraram que a avulsão do tronco inferior do plexo braquial do rato induz dor neuropática persistente caracterizada por hiperalgesia e alodinia. o objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento de alguns fatores de crescimento neural como NGF, BDNF e GDNF no aparecimento destas respostas. Métodos e Resultados: Ratos Wistar com 2 meses (± 200 g) foram divididos em grupos falso operado e submetidos a avulsão do tronco inferior do plexo braquial. Cada um desses grupos foi subdividido em 5 grupos (basal, salina, NGF, BDNF e GDNF) de 4 animais cada. A cirurgia foi realizada no plexo braquial direito e cada animal recebeu ou não no dia da cirurgia, na área da lesão, uma aplicação local de salina (n=4) ou de um dos seguintes anticorpos: anti-NGF, anti-BDNF ou anti-GDNF (2µg/sítio num volume de 50µl). As respostas foram medidas em ambas as patas posteriores entre 20-40 dias após a cirurgia. A hiperalgesia mecânica foi avaliada através do aparelho de Randall-Selitto e a alodinia ao frio pelo “spray” de acetona. Os anticorpos aplicados localmente reverteram de modo significativo a hiperalgesia mecânica e a alodinia ao frio induzida pela avulsão do plexo braquial em ambas as patas posteriores (P< 0,05; Student Newman-Keuls e Mann-Whitney). Conclusões: O efeito obtido com os anticorpos para os fatores de crescimento neural (anti-NGF, anti-BDNF e anti-GDNF) sobre a hiperalgesia mecânica e a alodinia ao frio sugere um importante papel dos mesmos nesta neuropatia. Além disso, estes anticorpos podem se constituir em opções terapêuticas importantes para o tratamento da dor neuropática resultante de lesão do plexo braquial como já vistos em outros modelos de neuropatias dolorosas. 36.002 FURTHER EVIDENCES FOR INVOLVEMENT OF KININ B1 AND B2 RECEPTORS IN SPINAL NERVE LIGATION MODEL OF NEUROPATHIC PAIN IN RATS. 1Werner, M. F. P.; 1Ferreira, J.; 1Calixto, J. B.; 2Zampronio, A. R.; 1Rae, G. A. Farmacologia UFSC; 2Farmacologia UFPR Objective:

We have shown that i.p. injection of 1 mol/kg kinin B1 (Des-Arg9-Leu8]-BK, DALBK) and B2 (Hoe-140, HOE) receptor antagonists reduce the hypernociception induced by spinal nerve ligation (SNL) (Werner et al., XXXVI SBFTE, res. 06.030, 2004). This study assesses if these receptors also impact on SNL-induced thermal hypernociception and overt nociception. Methods and Results:

Neuropathic pain was performed in male Wistar rats (200 g, n=3-9) according Kim & Chung method (Pain 50; 355, 1992). On day 12 after SNL the enhanced responsiveness to heat stimulation (Hargreaves method) was reduced by HOE (36.9 %) and DALBK (33.5%) (0.1 µmol/kg, i.p.; controls received PBS, at 120 min) but combined HOE plus DALBK did not cause greater inhibition. Peak cold hypernociception on day 6 after SNL (i.e. number of hind paw nocifensive responses evoked by acetone spray) was reduced by HOE (29.5 %) and DALBK (28.5%) and the association of both drugs only increased the duration of anti-hypernociception (at 150 min: Sham: 0.2 ± 0.3; SNL-PBS: 12.3 ± 1.3; SNL-HOE + DALBK: 7.6 ± 1.1 s). Captopril (5 mg/kg, s.c.) did not cause further heat or cold hypernociception in SNL or sham rats. At 12 days after SNL, i.pl. injection of the B2 receptor agonist bradykinin (BK, 0.1-10 nmol/50µl) induced overt nociception over first 5 min (PBS: Sham 2 ± 1 s, SNL 5 ± 3 s; BK 1: Sham 80 ± 10 s, SNL 182 ± 18 s, whereas i.pl. Injection of the B1 receptor agonist [des-Arg9]-BK (DABK, 0.1-10 nmol/50µl) induced overt dose-related nociception over the first 5 min only in SNL animals (DABK 1: Sham 3 ± 1 s, SNL 110 ± 20 s). Conclusion:

Our results show that nociceptive mechanisms operated by kinin B1 and B2 receptors are upregulated by SNL, leading to overt nociception in the rat hindpaw as well as thermal hypernociception to both heat and cold stimuli. 36.003 NATURAL TETRANORTRITERPENOIDS AMELIORATE ZYMOSAN-INDUCED JOINT INFLAMMATION. Penido C.; Conte, F. P.; Chagas, M. S. S.; Henriques, M. G. M. O. Far-Manguinhos FIOCRUZ Objetivo: In the present study, we investigated the antiinflammatory effects of a pool of six tetranortriterpenoid (TNTP) compounds isolated from Carapa guianensis seeds (6α -acetoxygedunin, 7-deacetoxy-7-oxogedunin, andirobin, gedunin, methyl angolensate and 6α -acetoxyepoxyazadiradione) in murine experimental arthritis. Métodos e Resultados: The intra-articular (i.a.) injection of zymosan (500µ g/knee) induced a marked increase in the knee joint diameter within 6h (sal 0.3± 0.04 X zy 1.4± 0.09mm n=10) that peaked at 24h (sal 0.3± 0.04 X zy 2.8± 0.19mm n=10), and remained significant until 20 days (sal 0.1± 0.01 X zy 0.56± 0.03mm n=10). Pre-treatment with TNTP (100mg/Kg, p.o.) and dexamethasone (dexa, 10mg/kg, i.p.) 1h prior inhibited the 6h zymosan-induced knee oedema (sal 0.18± 0.06 X zy 1.5± 0.1 X dexa 0.7± 0.09 X TNTP 0.6± 0.08mm n=10) and protein extravazation into the synovial space (sal 0.08± 0.02 X zy 0.25± 0.017 X dexa 0.13± 0.02 X TNTP 0.1± 0.02 µ g/cav n=10). TNTP also significantly inhibited total leukocyte (sal 0.08± 0.01 X zy 4.5± 1.2 X dexa 2.5± 0.8 X TNTP 1.9± 0.31x105 cells/cav, n=10) and neutrophil (sal 0.026± 0.02 X zy 4.0± 1.0 X dexa 2.3± 0.7 X TNTP 1.6± 0.2x105 cells/cav n=10) accumulation in the synovial fluid and inflamed tissue induced by zymosan. ELISA assays showed that TNF-α , IL-1β and muIL-8 levels were significantly increased in synovial extracts of zymosan-stimulated mice, phenomena inhibited by TNTP pre-treatment (47%, 96% and 82%, respectively). Moreover, western blot analysis demonstrated that in vitro TNTP treatment (100g/mL) was able to inhibit NFκ B p65 subunit translocation into the nuclei in J774 cells stimulated with LPS (1g/mL) (sal 2.22 X LPS 21.48 X TNTP 1.47 densitometric units). P values ≤ 0.05 were regarded as significant. Conclusões: Such results suggest that TNTP present a potent anti-inflammatory activity due to the inhibition of NF B pathway in zymosan-induced arthritis in mice. 36.004 EFFECTS OF SNAKE VENOMS ON MACROPHAGE MEMBRANE AND SOLUBLE AMINOPEPTIDASES. Olivo, R. A.; Silveira, P. F.; Teixeira, C. F. P. Farmacologia Instituto Butantan Objetivo: Aminopeptidases (APs) constitute a family of enzymes relevant for cell adhesion and modulation of the activity of inflammatory mediators released from MØ. In this study we evaluated the in vitro effect of BjV and CdtV on the activities of soluble (S) and membrane-bound (M) neutral AP/CD13 (APN), basic AP (APB) and dipeptidyl peptidase IV/CD26 (DPPIV) in MØ. Métodos e Resultados: Peritoneal MØs were collected 96h after injection of 3% thioglycollate into peritoneum of male Swiss mice (n=6). 4x106 MØ/mL were then incubated with non-cytotoxic concentrations of BjV (5µg/mL) or CdtV (1.5µg/mL) or PBS (control) for 1 h. The activities of APs were measured by fluorogenic assay using naphthylamide-derivative substrates. The results represented as UP/mg of protein, showed that in relation of control (29±5), BjV and CdtV venoms reduced the M-DPPIV activity (15±3 and 12±3, respectively), while that of S fraction was increased by BjV but not CdtV (160±10 and 110±11) in relation of control (98±10). M-APN activity was significantly reduced by CdtV (18±4) but not affected by BjV (30±9) in relation of control (45±8). In contrast, both venoms did not modify S-APN (56±9) and S-APB (188±8) activities, in relation of control (47±10 and 207±5, respectively). Conclusões:

These data demonstrate that the effects caused by BjV on MØ aminopeptidases differ from those of CdtV. BjV induces dual effect on DPPIV activity, depending on the cellular location of this enzyme. The effect of BjV on soluble DPPIV may be related to the release of INF-γ induced by this venom. The reduction of S-APN activity by CdtV may be relevant for the inhibitory effect of this venom on spreading and phagocytic activities of MØs. . 36.005 NITRIC OXIDE FROM NEURONAL NO SYNTHASE IS IMPORTANT FOR THE INITIATION OF THE SYSTEMIC INFLAMMATORY REACTION IN THE RAT. Duma, D.; Fernandes, D.**; Assreuy, J. Farmacologia UFSC Objetivo: We have previously showed that aminoguanidine (AG) given 1 hour before bacterial LPS injection or cecal ligation and puncture (CLP), prevented the development of systemic inflammatory reaction and increased survival. A skeletal muscle-specific splice variant of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) is constitutively expressed in skeletal muscles of all mammals. In the present report, we studied the role of NO released from nNOS in the initiation of an inflammatory reaction and sepsis development. Métodos e Resultados: The previous injection (-1 hour) of NOS inhibitors 7-nitroindazole (7-NI, 0.2 mg/Kg, i.p.) or AG (20 mg/Kg i.p.) prevented the early and short-lived hypotension caused by LPS (10 mg/Kg, i.p.) injection (for example, LPS 23 ± 6; 7NI+LPS 7 ± 1; AG+LPS 12 ± 1 mmHg; 75 min after LPS; n=5). In addition, injection of NOS inhibitors (INOSI) prevented the increase in nitrite+nitrate levels in skeletal muscle homogenates (control 10 ± 0.5; LPS 18 ± 1.8; 7NI+LPS 11 ± 0.4 and AG+LPS 12 ± 1.3 µM/mg protein, 2 hour after LPS, n=5), but not in plasma. Furthermore, INOSI prevented the increase of myeloperoxidase activity in both sepsis models studied (lung, control 36 ± 11; CLP 213 ± 19; 7NI+CLP 131 ± 29 OD 450 nm/mg protein, 36 hours after CLP, n=5). In CLP model, INOSI also prevented hypotension (control 109 ± 6; CLP 68 ± 4; 7NI+CLP 86 ± 3 mmHg, n=5) and hyporesponsiveness to phenylephrine (30 nmol/Kg, control 39 ± 1; CLP 18 ± 3; 7NI+CLP 42 ± 6 mmHg, n=5), besides diminishing peritoneal bacterial growth (control 0.09 ± 0.004; CLP 0.76 ± 0.13; 7NI+CLP 0.36 ± 0.07 OD 630 nm, n=5), 36 hours after surgery. Finally, INOSI 1 hour before CLP, significantly increase survival (100%, 50%, 100% and 100% survival, sham-operated, CLP, 7NI+CLP and AG+CLP, respectively, n=6). Conclusões: It seems that NO released from nNOS soon after the onset of an inflammatory reaction has a crucial role as a signalling mechanism. Once this initial NO signal from nNOS is blunted, the ensuing inflammatory reaction is dampened. A better understading of this new signaling role of NO released from the neuronal NOS isoform may lead to new ways to interfere with the inflammatory reaction. 36.006 PHARMACOLOGICAL CHARACTERIZATION OF THE RAT SPINAL NERVE LIGATION MODEL OF NEUROPATHIC PAIN. 1Werner, M.F.P.; 2Zampronio, A. R.; 1Rae, G. A.; 1Farmacologia UFSC; 2Farmacologia UFPR Objective:

The spinal nerve ligation (SNL) induces neuropathic pain and mechanical and thermal (heat and cold) hypernociception in the ipsilateral hindpaw of the rat (Werner et al., XXXVI SBFTE; res. 06.029, 2004). The purpose of this study was to assess the acute effects of different categories of analgesic drugs, including a non-steroidal anti-inflammatory drug (indomethacin, IND), two anticonvulsants (carbamazepine, CBZ and gabapentin, GAB) and an opiate (morphine, MOR). Methods and Results:

SNL was induced in Male Wistar rats (200 g, n=3 - 7) by placing two 6-0 silk thread sutures around L5 and L6 spinal nerves, according Kim & Chung method (Pain 50, 355, 1992). The following treatments were given: IND (4 mg/kg, i.p.), CBZ (10 mg/kg, i.p.), GAB (30 mg/kg, i.p.) and MOR (3 mg/kg, s.c), doses which failed to cause overt side effects. Control groups received appropriate vehicles. On day 12 after SNL (peak of mechanical hypernociception), the enhanced responsiveness to mechanical stimulation (von Frey hair, up-down method) was reduced

significantly by IND (~ 26 %), CBZ (~ 47 %) GAB (~ 38 %) and MOR (~ 99 %). At 12 days after SNL (peak of heat hypernociception), the enhanced responsiveness to heat stimulation (Hargreaves method) was reduced significantly by IND (~ 63 %) and MOR (~ 85 %), but CBZ or GAB completely failed to reduce this hypernociceptive response. Peak cold hypernociception on day 6 after SNL (i.e. number of hindpaw flinches/licking responses evoked by acetone spray) was reduced significantly by IND (~ 32 %), CBZ (~ 44 %) GAB (~ 48 %) and MOR (~ 98 %). Conclusion:

Thus, spinal nerve injury-induced mechanical and cold hypernociception is sensitive to all analgesic drugs tested, whereas heat hypernociception was insensitive to anticonvulsivant drugs. This suggests that the mechanisms underlying the sensory modalities tested are distinct. 36.007 AVALIAÇÃO DA RITMICIDADE DE SECREÇÃO DE MELATONINA EM COLOSTRO DE MÃES, CLINICAMENTE SADIAS E COM MASTITE. 1Pontes, G. N.; 2Cardoso, E. C.*; 3Carneiro-Sampaio, M.M.S.; 1Ferreira, Z. S.; 1Markus, R. P. 1Fisiologia IB-USP; 2Imunologia ICB IV-USP; 3 IC-USP Objetivo: O leite materno contém inúmeros fatores de proteção com ação antiinfecciosa como: enzimas, componentes do complemento, anticorpos secretores, principalmente IgA, células fagocitárias e vários hormônios. Entre esses hormônios, está a melatonina que é secretada pela pineal. A concentração de melatonina presente no colostro humano é significantemente mais elevada durante a noite que durante o dia, modulando múltiplas funções, incluindo a defesa do organismo. Uma vez que a concentração de melatonina no recém-nascido é muito baixa, o aleitamento materno pode atuar como um importante fator de proteção ao recém-nascido. O objetivo desse trabalho é avaliar se a variação diária da produção de melatonina pode ser inibida durante processos infecciosos. Métodos e Resultados: Foram coletadas amostras de colostro humano no período diurno (12:00h) e noturno (22:00h) de 15 parturientes em diferentes condições: 8 partos normais, sendo 4 de mães saudáveis e 4 de mães com mastite; 7 partos foram por fórceps, sendo 4 de mães saudáveis e 3 de mães com mastite. Essas amostras foram submetidas à ensaios imunoenzimáticos para a determinação da concentração de melatonina. Não foi observada alteração na variação diária da produção de melatonina em amostras de colostro de mães saudáveis com condições de parto normal (dia=3,4+0,6 noite=38,1+9,4 pg/ml) ou fórceps (dia=3,7+0,5 noite=35,9+8,3 pg/ml), entretanto, na vigência de um processo infeccioso da mama (mastite) a produção de melatonina noturna foi inibida nas amostras de colostro de parto normal (dia=2,7+1,3 noite=3,2+1,7 pg/ml) e fórceps (dia=3,5+ noite=2,9+ pg/ml). Conclusões: Os dados demonstram que a melatonina é secretada de forma rítmica no colostro de parturientes saudáveis que conceberam por parto normal ou fórceps. Considerando que a pineal tem a via de transcrição NFkappaB (Ferreira et al., J Pineal Res 38:182, 2005), seria de se esperar que durante uma resposta inflamatória, onde há aumento dos níveis de citocinas pró-inflamatórias do tipo TNF-α , IL-1, IL-6 e IL-8, poderia haver variação no ritmo de produção de melatonina noturna. 36.008 EFFECT OF CHRONIC TREATMENT WITH NITRIC OXIDE INHIBITOR L-NAME ON EOSINOPHILIC MIGRATION IN A MURINE MODEL OF ASTHMA. 1Lintomen, L.; 1Souza Filho, L. G.**; 1Ferreira, T*; 2Teixeira, S. A.; 2Muscará, M. N.; 2de Nucci, G.; 1Antunes, E. 1Farmacologia UNICAMP; 2ICB-USP Objetivo: The eosinophil (EO) influx into the airways of ovalbumin (OVA)-sensitized rats is largely reduced in chronic NO-deficient rats, but contrasting results have been reported in literature, depending on the animal specie and sensitization procedure. In the present study we have investigated the effect of chronic treatment with L-NAME on EO migration in OVA sensitized/challenged mice. Métodos e Resultados: Male BALB/c mice were divided in groups: NS-C (non-sensitized/non-treated), NS-T (non-sensitized/treated), S-C (sensitized/non-treated) and S-T (sensitized/treated). Mice were sensitized

with 2 injections of OVA and/or treated with L-NAME (50 mg/kg/day, 4 weeks) in the drinking water. Intratracheal challenge with OVA significantly increased the EO counts in BAL fluid at 24 h post-OVA challenge compared with non-sensitized mice (0.27±0.04 and 0.01±0.01x106/ml, respectively; n=6-12). No statistical differences in EO counts in BAL were detected at 48 and 72 h post-OVA challenge. Chronic treatment with L-NAME largely potentiated (P<0.01) the EO counts in BAL, particularly at 48 h (0.04±0.01 and 1.22±0.23 x106/ml for control and treated, respectively) and 72 h (0.03±0.02 and 0.40±0.07 x106/ml for control and treated, respectively). The number of EO in BM and blood were also significantly increased in sensitized mice at 24, 48 and/or 72 h after OVA challenge, compared with NS mice. However, L-NAME treatment did not change this pattern of EO in BM and blood in any time-point evaluated. At the dose used, L-NAME reduced by approximately 40% the cerebellar NO synthase activity (14.4±0.8 and 8.8±0.5 pmol L-citrulline/min/mg; P<0.01). Conclusões: In contrast to rats, the chronic treatment with L-NAME potentiates the EO counts in BAL fluid. Additional studies are necessary to clarify this aspect. 36.009 LIBERAÇÃO DE ÓXIDO NÍTRICO (NO) POR METALOPROTEINASES E SEUS DOMÍNIOS ESTRUTURAIS EM CÉLULAS ENDOTELIAIS HUMANAS (CE) IN VITRO. 1Zamuner, S. F.; 2Assakura, M. T.; 3Serrano, S. M.; 4Silva, C. A.; 1Teixeira, C.F.P. 1Farmacologia Instituto Butantan; 2Bioquímica e Biofísica Instituto Butantan; 3Bioquímica Instituto Butantan; 4Bioquímica e Biologia Molecular Instituto Butantan Objetivo: As metaloproteinases são consideradas os fatores responsáveis pela hemorragia, inibição plaquetária e degradação dos componentes da matriz extracelular, causados por venenos viperidicos. As metaloproteinases de venenos foram agrupadas em quatro classes estruturais (P-I a P-IV), com base na constituição dos seus domínios estruturais. O objetivo deste trabalho é estudar o efeito das metaloproteinases MPA (P-I) isolada do veneno de B. moojeni e HF3 (P-III), isolada do veneno de B. jararaca, além dos domínios estruturais D-BTT e DC-HF3, obtidos através de clonagem molecular do cDNA da metaloproteinase de B. jararaca, na liberação de (NO) e viabilidade de CE. Métodos e Resultados:

As CE foram cultivadas em meio de cultura F12-SFB 10%, em placas de 96 poços, e incubadas em diversos períodos de tempo com as proteínas (0,2 a 1,0 µ M/mL) ou F12-SFB (controle). A liberação de NO foi avaliada por quimioluminescência, após redução do nitrato com cloreto de vanádio, e a viabilidade celular pelo método da redução do MTT. O HF3 causou a liberação de NO (5,7 ± 0,5 µ M) significativa em relação ao controle (2,5 ± 0,1 µ M), aos 30 minutos de incubação e, paralelamente, causou redução do MTT (32%). Esses efeitos foram verificados até 24 h de incubação. No entanto, a MPA e os domínios recombinantes não afetaram a viabilidade e nem foram capazes de liberar o NO. Conclusões: A metaloproteinase da classe P-III (HF3), mas não da classe P-I (MPA), tem a capacidade de induzir a liberação de NO. Embora os domínios proteinase, disintegrina e disintegrina–rico em cisteína, isoladamente, não causem a liberação de NO, a sua associação ao domínio proteolítico é relevante para o efeito observado, provavelmente por favorecer a interação ideal da metaloproteinase aos sítios da CE, envolvidos na produção de NO. 36.010 THE EFFECTS OF CC-CHEMOKINES ON ADHESION MOLECULES EXPRESSION IN HUMAN EOSINOPHILS 1 L, L.; 2 Franchi, G; 3 G, d. N.; 4 Antunes, E.; 1, 3, 4 Farmacologia, UNICAMP; 2, UNICAMP Objetivo: The CC-chemokines (CC-ch) are involved in eosinophil (EOS) migration to inflammatory tissues, mainly during allergic diseases such as bronchial asthma. They are described to regulate the EOS expression of adhesion molecules. This study was undertaken to investigate the effects of both eotaxin and RANTES on adhesion molecules expression in human EOS. Métodos e Resultados:

EOS were isolated from peripheral blood of healthy volunteers (male and female, 21-45 years), using a VarioMACS system and microbeads (CD16 immunomagnetic microbeads). The final purity of EOS was 92-99%. After the isolation procedure, the cells (3x105 cells/tube) were incubated (2 to 4 h, 37°C, 5% CO2) in RPMI 1640 medium, with or without eotaxin (10-1000 ng/ml) or RANTES (10-1000 ng/ml), in absence or presence of the non-selective NOS inhibitor L-NAME (0.1 mM). After incubation, the cells were washed and the unspecific sites were blocked with human serum. EOS were then incubated with the phycoerythrin-labelled-monoclonoal human antibody (anti-VLA-4 or anti-Mac-1) or a suitable isotype control. The expression of adhesion molecules on the surface of EOS was detected using flow cytometry. The MTT assays were performed to ascertain the cell viability. Our results showed that in all incubation periods, eotaxin did not affect the expression of VLA-4 or Mac-1 on the EOS surface (26.5±1.3 and 160.7±13 fluorescence intensity, respectively, for 100 ng/ml at 2h) when compared to the non-stimulated EOS (27.4±1.4 and 153.4±17.3, respectively). Similar results were observed with RANTES. Preliminary results showed that L-NAME did not affect the expression of VLA-4 or Mac-1 in EOS. The MTT assays demonstrated that EOS were viable, and activated in the presence of CC-ch, in all periods of incubation. Conclusões: In our experimental conditions, the CC-ch tested were unable to increase the expression of adhesion molecules in human EOS, and NO inhibition did not affect their expression. 36.011 ETA AND ETB RECEPTOR MECHANISMS IN ENDOTHELIN-1-INDUCED THERMAL AND MECHANICAL HYPERNOCICEPTION IN RATS.

1Motta, E. M.; 2Souza, G.E; 3 D’Orleans-Juste, P; 1Rae, G. A.; 1Farmacologia UFSC; 2Farmacologia FCFRP-USP; 3Pharmacology Faculty of Medicine Canada Métodos e Resultados: Methods: Male Wistar rats (~250 g) received intraplantar (i.pl.) ET-1 (10-30 pmol; ETA/ETB receptor agonist), SRTX S6c (3 pmol; selective ETB receptor agonist) or PBS into the right hind-paw and the threshold responsiveness to radiant heat and mechanical stimuli were assessed repeatedly each hour up to 8 h and 24 h, using the plantar (Hargreaves) test and dynamic plantar aesthesiometer tests, respectively. At 3.5 h after agonist injection (i.e. just prior to onset of hypernociception), rats received another ipsilateral i.pl. injection of BQ-123 or BQ-788 (10 nmol) selective ETA and ETB receptor antagonist, respectively. Results: ET-1 and SRTX S6c induced thermal and mechanical hypernociception, starting at 4 h after injection and lasting until 8 h. BQ-123 or BQ-788 reduced heat hypernociception only at 4 and 5 h after ET-1, by 50% and 56%, respectively (at 4 h: PBS + PBS 11,7± 0,4; ET-1 + PBS 7,6 0,2; ET-1 + BQ-123 10,1± 0,7; ET-1 + BQ-788 9,48± 0,5 s, n = 6-8). BQ-123 did not affect SRTX S6c-induced heat hypernociception. BQ-123 and BQ-788 each also reduced ET-1-induced mechanical hypernociception, by 40 and 48 %, respectively. Conclusion:

The sustained hypernociception to heat and mechanical stimulation of the hind paw induced by ET-1 depends on local ETA and ETB receptor activation. However, as this effect was not fully reversed by the antagonists, additional mechanisms triggered by ET-1 prior to antagonist treatment could be involved. Financial Support: CNPq, CAPES and PRONEX. 36.012 EFICÁCIA DA ACUPUNTURA NA NOCEPÇÃO INDUZIDA PELO VENENO DO PEIXE TALASSOPHRYNE NATTERERI EM MODELO MURINO. Domingues, N. M. O.**; Lopes-Ferreira, M.; Macedo-Soares, M. F. Imunopatologia Instituto Butantan Objetivo: Dentre os peixes peçonhentos encontrados no Brasil, destaca-se o Thalassophryne nattereri (niquim), que provoca um grande número de acidentes na região norte e nordeste do país. Estes acidentes ocorrem pela inoculação do veneno por meio de espinhos dorsais e laterais afetando em geral a região palmar ou plantar, sendo o quadro clínico caracterizado por dor, edema e necrose. Neste projeto nos propusemos a estudar terapia alternativa (acupuntura), visando tratamento dos acidentados, especialmente pela comprovada eficácia da acupuntura nos tratamentos da dor. A

palavra acupuntura significa puncionar com agulha visando a terapia e cura de enfermidades, pela aplicação de estímulos através da pele em pontos específicos (acupontos). O efeito da acupuntura pode ser evidenciado tanto no local da aplicação como em áreas distantes, devido a ação nociceptiva da agulha, que induz a liberação de mediadores que também agem à distância. O objetivo principal deste projeto é estudar ação da acupuntura sobre os efeitos do envenenamento experimental por T. nattereri, pesquisando os acupontos no camundongo (definição dos pontos e tempo de agulhamento) em relação à eficiência sobre tratamento de dor, induzida pela administração subcutânea do veneno de niquim. Métodos e Resultados: Para detecção da atividade nociceptiva, camundongos BALB/c foram injetados na região intraplantar da pata posterior direita com 3µg do veneno e foram colocados individualmente sob funis de vidro localizados sobre uma superfície refletora para facilitar a observação. Em seguida mediu-se a reatividade do animal, considerada como o tempo gasto em segundos em que os animais lambem ou mordem a pata injetada, durante 30 minutos de avaliação experimental. Este protocolo permite evidenciar duas fases da sensibilidade dolorosa: a primeira fase aparece nos primeiros 5 minutos após a injeção da amostra (dor neurogênica), e a segunda ocorre entre 15 e 30 minutos, representando a resposta tônica a dor, acompanhada de uma reposta inflamatória relacionada à liberação de mediadores químicos (dor inflamatória). Pelos resultados observamos que os animais que receberam agulha nos acupontos KUNLUN, B60 (ponto do meridiano da Bexiga ) e o TAIXI, R3 (ponto do meridiano do Rim) por transfixação, na pata posterior esquerda, ou na orelha esquerda apresentaram uma efetiva e acentuada diminuição da dor (118,3+/-27,3 e 80,0+/-26,3 respectivamente), principalmente a partir de 10 minutos, comparado com os animais que não receberam agulhas (26,7+/-30,9) ou foram estimulados em acupontos não específicos, no dorso lateral esquerdo (265,0+/-68,6). Conclusões: Estes resultados comprovam a eficiente ação da acupuntura nos processos nociceptivos, e consolidam o modelo experimental como ferramenta para os estudos dos mecanismos de atuação desta técnica. 36.013 ENVOLVIMENTO DAS ÓXIDO NÍTRICO SINTASES E DA PROTEÍNA QUINASE G NA ADESÃO DE EOSINÓFILOS DE PACIENTES COM RINITE ALÉRGICA E VOLUNTÁRIOS SADIOS. 1Muniz, F. R. M.**; 1Guimarães, L. A. F.**; 1Oliveira, C. H. D.; 3Ferreira, H. H. A. 1Ciências Farmacêuticas USF; 2Clínica Médica UNICAMP; 3Medicina USF Objetivo: Identificar a(s) isoforma(s) das óxido nítrico sintases (NOS) envolvida(s) no processo de adesão do eosinófilo (EO) e investigar o papel da proteína quinase G-dependente de GMPc neste processo. Métodos e Resultados: Os EOs foram isolados do sangue periférico de voluntários sadios e de pacientes com rinite alérgica pelo método de separação magnética negativa. Para a verificação do envolvimento das NOS na adesão, os EOs foram incubados com o inibidor não seletivo, o L-NAME (1,0 mM) ou com o inibidor especifico da iNOS, 1400 W (1,0 mM), antes de serem incubados em placa recoberta com fibronectina (FN). Para a verificação do envolvimento do GMPc e da proteína quinase G, as células foram pré-incubadas com seus inibidores ODQ ( 0,01 mM) e KT 5823 (10,0 µ M), respectivamente, e com o dibutiril GMPc. A verificação do número de EOs aderidos foi feita pela dosagem da peroxidase eosinofílica (EPO). A adesão basal dos eosinófilos de pacientes com rinite alérgica foi 80% maior que a dos voluntários sadios. A pré-incubação com o L-NAME provocou um aumento da adesão de 80% e 68% dos EOs dos indivíduos sadios e dos alérgicos, respectivamente. Aumento da adesão dos EOs de ambos os grupos também foi observado na presença do 1400 W (98%, voluntários e 59%, pacientes). O tratamento com o ODQ e KT 5823 provocou um incremento de aproximadamente 50% na adesão dos eosinófilos de ambos os grupos, sendo que efeito sinérgico foi verificado pela co-incubação do ODQ e do dGMP (aumento de 160% em relação ao ODQ). Conclusões: Os resultados sugerem que a modulação da adesão dos EOs à FN é mediada pela isoformas constitutivas nNOS e eNOS. O envolvimento da quinase G pela ativação do GMPc necessita mais

estudos, desde que tanto a inibição da guanilato ciclase quanto a adição do GMPc exógeno produziu o mesmo efeito. Apoio financeiro: Fapesp e Capes 36.014 ESTUDO DO PADRÃO INFLAMATÓRIO NA TOLERÂNCIA AO LPS. 1Melo, E. S; 1Moretti, A. I. S.**; 2Barbeiro, H. V.**; 1Soriano, F. G.; 1Clínica Médica FMUSP; 2Emergências Clinicas FMUSP Objetivo: análise da expressão de citocinas e estresse oxidativo na tolerância ao LPS. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Balb/c machos entre 6 a 8 semanas, injetamos 1,0mg/Kg sc 1x/dia durante cinco dias no grupo tolerante e salina estéril sc 1x/dia durante 5 dias no grupo controle. Analisamos a expressão de IL-6, 1L-10, TNF-α , IL1-β , MIP-2 por ELISA e estresse oxidativo através do MDA (ensaio de malondialdeído) nos dois grupos após injeção de LPS 20mg/kg ip (dose letal). Os animais foram sacrificados em 0, 2 , 4 e 8 horas após a injeção de LPS, sendo coletado o plasma. IL-6 apresentou diferença em 2hs, controle com 1487,8 96 pg/ml e tolerante 723,6± 158 pg/ml (p<0,05), MIP-2 e IL-1 apresentaram diferença em 4 horas, sendo que para a quimocina MIP-2 o grupo controle apresentou 2173± 252 pg/ml e o tolerante 1803,4± 159 pg/ml. A citocina IL-1 apresentou 1017,9± 303 pg/ml vs 734,8± 264 pg/ml, controle vs tolerante. No ensaio de malondialdeído observamos um aumento significante do grupo controle 94,3± 7pg/ml em relação ao tolerante 48± 2,4 pg/ml às 0hs, sendo p< 0,001 e em 8 hs, o grupo controle apresentou 176,7± 11,7 pg/ml e o grupo tolerante 64,4± 10,5pg/ml. Verificamos que a citocinas IL-10 e TNF não apresentaram diferença estatisticamente significante entre os grupos controle e tolerante. Conclusões: A indução de tolerância reduz a produção de citocinas pró- inflamatórias (TNF, IL-6, IL1), sem contanto interferir nas citocinas antiinflamatórias. Além de uma redução da resposta pró-inflamatória das citocinas, os animais tolerantes apresentaram menor produção de estresse oxidativo medido pela MDA em 0 e 8hs. A tolerância reduziu a cascata pró-inflamatória de citocinas e a liberação de espécies reativas, tendo uma conseqüente menor indução de lesão celular e tecidual. 36.015 ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DO AMBUROSÍDIO A, UM GLUCOSÍDIO ISOLADO DE AMBURANA CEARENSIS (CUMARU). 1Fonseca, F. N.; 1Fonsêca, K. S.*; 1Barbosa, A. L. R.*; 2Canuto, K. M.**; 2Silveira, E. R.; 1Leal, L. K. A. M.**; 7 Viana, G. S. B. 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Química Orgânica UFC Objetivo: O presente trabalho visa investigar a ação antiinflamatória do amburosídio A (AMB) isolado de A. cearensis (Fabaceae), espécie utilizada tradicionalmente no tratamento da asma. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss (25-30g) foram tratados com AMB (25 e 50mg/Kg, i.p.) ou veículo (Tween 80 a 2%) antes da injeção subcutânea na pata de solução contendo carragenina (Cg, 1%), dextrano (Dx, 10%), prostaglandina E2 (PGE2, 30nmol/animal), histamina (Hist, 200µg/animal), serotonina (Sert, 200g/animal), composto 48/80 (6µg/animal) ou bradicinina (3nmol/animal). O volume da pata foi medido através de pletismógrafo (Ugo Basile) em diferentes intervalos de tempo após a injeção do estímulo inflamatório. No modelo de edema induzido por Cg, foram realizados estudo histopatológico e avaliação morfométrica. Para determinação do extravasamento vascular (EV) no edema - Dx, administrou-se azul de Evans (25 mg/kg, i.v.) 30 min antes do sacrifício dos animais e estimou-se a quantidade de material corado extraído da pata, por espectrofotometria (619nm). O AMB (25 e 50 mg/kg, i.p.) causou inibições (%) no edema induzido por: Cg (determinado na 4ºh: 11,4 e 38%); PGE2 (30min: 25 e 46%); Dx (2ºh: 36 e 44%); Hist (30min: 16 e 52%) e Sert (30 min: 25 e 34%) respectivamente; mas não interferiu significativamente nos edemas induzidos pelo composto 48/80 ou bradicinina. O AMB (50mg/kg, i.p.) reduziu significativamente (p<0,05) o EV induzido por Dx (10,7±0,5mg/mL) em relação ao controle (17,0±0,8mg/mL); bem como o número de neutrófilos no edema - Cg (15,0±1,9 cels; controle: 30,04,5 cels).

Conclusões: Dessa forma, os resultados sugerem que o AMB possui atividade antiinflamatória que está possivelmente relacionada a um bloqueio dos efeitos locais da histamina, serotonina e PGE2, bem como da migração de neutrófilos para o foco inflamatório. 36.016 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DO PLUMIERÍDEO, EM CAMUNDONGOS. 1Bortolini, K. A.; 1Rae, G. A.; 2Malheiros, A.; 3Silva-Santos, J. E.; 1Farmacologia UFSC; 2Química UNIVALI; 3Farmácia UNIVILLE Objetivo: Introdução: Este trabalho avalia as propriedades antiinflamatórias do composto Plumierídeo (PL), um iridóide extraído das partes aéreas da planta ornamental Allamanda cathartica L. (Apocinaceae), nos modelos de edema de pata e pleurisia. Métodos e Resultados: Tratou-se camundongos Swiss machos (20-30 g) com PL (0,01-100 µ g/kg; s.c.) 1h antes da injeção intraplantar (i.pl.) de Carragenina (Cg; 300 µ g), Dextrana (Dx; 300 µ g), Zimosano (Zi; 500 µ g) ou Formalina (For; 2,5%, 30 µ l). O edema de pata foi avaliado por pletismometria da 1 a 6 h após o tratamento. Diferentes doses de PL demonstraram potente e duradouro efeito antiedematogênico. Após 1 h da injeção i.pl. de Cg (20,63± 1,56 µ l; n= 30), Dx (12,86± 1,84 µ l; n= 18), Zi (20,87 1,91 µ l; n= 24) e 5 min. após a For (34,60 3,72 µ l; n= 14) o tratamento com PL na dose de 10 µ g/kg inibiu significativamente o edema em 79,8; 70,8; 67,3 e 73,4%, respectivamente. No modelo de pleurisia induzido por Cg (300 µ g/cavidade) o recrutamento de leucócitos e neutrófilos foi avaliado no lavado pleural. A Cg aumentou o número de leucócitos (9,93 1,42 x 106 células) e neutrófilos (9,15± 1,17, 106 células) na cavidade pleural, na 4ª h. O PL inibiu o recrutamento de leucócitos induzido por Cg em 83,5; 91; 93,4; e 86,7%, e neutrófilos em 99,8; 97,3; 96 e 100% nas doses de 0,1; 0,3; 1 e 10 µ g/kg, respectivamente. A inibição máxima do PL nesses modelos foi similar ou superior à aquela demonstrada pela dexametasona (0,5 mg/kg, s.c.). O PL demonstrou ainda boa biodisponibilidade oral e o tratamento s.c. diário com 1 mg/kg de PL por 7 d não causou mortes ou perda de peso. Conclusões: O PL apresenta potente atividade antiedematogênica e baixa toxicidade aguda, mas os mecanismos subjacentes a estes efeitos ainda requerem caracterização. 36.017 NITRIC OXIDE AND NEUROKININS EFFECTS IN THE CONTROL OF BASELINE AIRWAY TONUS IN GUINEA PIGS IN PHYSIOLOGICAL AND CHRONIC INFLAMMATORY SITUATIONS. 1Prado, C. M.; 1Leick-Maldonado, E. A.; 2Martins, M. D. A.; 1Tibério, I. F. L. C.; 1Clínica Geral FMUSP; 2Clínica Médica FMUSP Objetivo: We evaluated the influences of nitric oxide (NO) and neurokinins (NK) in the control of baseline airway tonus in physiological and chronic inflammatory situations in guinea pigs (GP). Métodos e Resultados: NK depletion was performed by capsaicin pretreatment (CAP). After 14 days, GP received inhalations of ovalbumin (OA) or normal saline (NS) 2x/wk/4wks. After 4th inhalation, chronic L-NAME treatment (NO unspecific inhibitor - L) was given ad libtum in drinking water (OA-L or NS-L). The treatment with 1400W (iNOS inhibitor - W) was given daily beginning in the 7th inhalation (OA-W and NS-W). After 72 hours, GP were anesthetized, mechanically ventilated and we analyzed baseline values of elastance (Ers) and resistance (Rrs) of respiratory system. Results: There were no differences in Rrs and Ers between OA and NS. Both L and W increased Rrs compared to non-treated animals (P<0.05). Considering Ers, L and W reduced this response only in NS (P<0.05). CAP reduced Rrs and Ers independently of the sensitisation (P<0.01). Treatments with L or W restored Rrs responses previously attenuated by CAP (P<0.05). Conclusões: Both cNOS and iNOS-derived NO acts as a proximal bronchodilator in physiological and chronic inflammatory situations in GP. The Ers responses suggested actions of NO in lung parenchyma that

needs to be further investigated. NK act in the maintenance of proximal and distal physiological airway tonus and this effect is partially mediated by NO. 36.018 EFEITO DE ANTI-HISTAMÍNICO H1 NA NOCICEPÇÃO, EDEMA E EXTRAVASAMENTO PLASMÁTICO INDUZIDO POR FORMALINA NO JOELHO DE RATOS. Oliveira, D. T.; Souza-Silva, E.*; Bressan, E.**; Tonussi, C. R. Farmacologia UFSC Objetivo: Existe participação de histamina via receptores H1 em ambas as fases do teste de nocicepção induzida por formalina via subcutânea. Nosso objetivo é avaliar o efeito do antagonista de receptor H1da histamina, meclizina, na nocicepção, edema e extravasamento plasmático no modelo de formalina intraarticular. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (240–420 g) receberam 25 mg/kg de Azul de Evans (0,1ml/100 g; i.v.) e foram tratados com meclizina (MEC) (2,5; 7,5 ou 21 mg/kg; i.p.) 60 min antes da injeção intraarticular (i.art.) de formalina (FOR) (5 %; 50 µl) ou veículo (0,2 ml/100 g; i.p.; óleo de girassol e tween 80, 90:10 v/v). A incapacitação articular foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante marcha de 1 min em intervalos de 5 min durante 60 min; o edema, pela avaliação do diâmetro articular (DA; cm) e extravasamento plasmático (EP; µg/ml) pela dosagem de azul de Evans no fluido sinovial. O EP foi coletado 60 min após o início do teste e 5µl deste foram adicionados a 245 µl de solução salina para leitura da absorbância (610 nm). FOR intraarticular gera uma resposta nociceptiva bifásica. O primeiro pico de resposta é detectado imediatamente após a injeção de formalina e o segundo aos 20 min do teste. MEC (21 mg/kg) inibiu o TEP em relação ao grupo controle (teste t pareado 15-60 min, P<0,05; t = 2,902; df= 9). MEC 7,5 mg/kg potencializou o TEP em relação ao grupo controle (teste t pareado, 15-60 min, P<0,05; t = 2,276; df = 9). MEC não alterou o diâmetro articular (DA controle = 0,083 0,012 cm; MEC 2,5 mg/kg = 0,096 0,007 cm; MEC 7,5 mg/kg = 0,081 0,013 cm; MEC 21 mg/kg = 0,116 0,006 cm). MEC 7,5 mg/kg tendeu a reduzir o extravasamento plasmático (teste t não pareado, P= 0,0976; t=1,827; df=10). Conclusões: Os resultados demonstram que o anti-histamínico apresenta um efeito bifásico, causando hiperalgesia em dose baixa e antinocicepção em dose alta. O efeito hiperalgésico pode ser conseqüência da redução do extravasamento plasmático, o que causaria o aumento da concentração relativa de formalina na segunda fase. 36.019 ÔMEGA 6: EFEITO SOBRE A LIBERAÇÃO DE MEDIADORES INFLAMATÓRIOS E A POSSÍVEL RELAÇÃO COM O MECANISMO DA CONTRA-IRRITAÇÃO. Xavier, R. A. N.; Wohlers, M.**; Silveira, V. L. F. Fisiologia UNIFESP Objetivo: Em nosso laboratório verificamos que animais alimentados com dieta rica em ácidos graxos poliinsaturados (AGP) w-6 apresentam diminuição da resposta inflamatória aguda induzida por carragenina (CA). Essa resposta poderia estar ocorrendo por um processo de contra-irritação (CI), onde a dieta funcionaria como a primeira injúria estimulando mediadores inflamatórios que agiriam modulando a segunda injúria, induzida por CA. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é verificar se o efeito antiinflamatório da dieta rica em AGP w-6 estaria relacionado ao mecanismo da CI. Métodos e Resultados: Para isto, verificamos se ratos machos Wistar alimentados durante 5, 6 ou 7 semanas com dieta padrão (grupo C) ou dieta padrão acrescida de 15% de óleo de soja (rico em AGP w-6, grupo S) apresentavam alterações nos níveis plasmáticos de alguns mediadores inflamatórios, como corticosterona (CT) (método fluorimético), e as proteínas de fase aguda, fibrinogênio (método turbidimétrico) e calicreína (método colorimétrico). A dieta aumentou os níveis de CT (C:14,75±0,94; 12,35±0,82; 11,93±0,67/ S:18,85±1,05; 17,59±1,48; 21,32 ± 0,72) e de fibrinogênio (C: 2,03±0,11; 2,12±0,10; 2,02±0,07/ S: 2,38±0,07; 2,37±0,08; 2,27±0,09) em todas as semanas estudadas. Com relação aos níveis de calicreína ocorreu uma tendência de aumento durante todo o período de tratamento, porém significante apenas na 5ª semana (C:1,25±0,07/ S: 1,59±0,07).

Para verificar se poderia estar ocorrendo o mecanismo de CI os animais foram submentidos ao edema de CA, onde verificamos, de fato, uma resposta diminuída na primeira hora da inflamação, em todas as semanas estudadas. Conclusões: É possível que a liberação alterada de CT, hormônio que participa da expressão e regulação de muitas proteínas de fase aguda, possa ter sido determinante das alterações observadas nos níveis de fibrinogênio e calicreína e da diminuída resposta inflamatória econtrada em nossos animais. 36.020 ANÁLISE TEMPORAL DO EFEITO ANTINOCICEPTIVO DA DOTARIZINA E DA FLUNARIZINA EM CAMUND 1Souza, D. G.; 1Felisbino, C. S.**; 1Silva-Júnior, O.**; 1Gabilan, N. H.; 2Santos, A. R. S.; 1Bioquímica CCB-UFSC; 2Ciências Fisiológicas CCB-UFSC Objetivo: Os canais de cálcio participam da excitabilidade neuronal e estão envolvidos na nocicepção. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito de dois bloqueadores de canais de cálcio (dotarizina e flunarizina) na modulação da dor de origem inflamatória e neuropática, utilizando modelos animais de nocicepção. Métodos e Resultados: Para induzir uma nocicepção inflamatória, camundongos (Swiss; n = 6/grupo) foram injetados (via intraplantar na pata direita posterior) com: adjuvante completo de Freund (CFA), epinefrina (EPI; 100ng/20µl/pata) ou prostaglandina (PgE2; 100ng/20µl/pata). Outro grupo de animais foi submetido à ligação parcial do nervo ciático (dor neuropática). Após os tratamentos, os animais receberam (via i.p.), dotarizina (DTZ; 30 mg/Kg) ou flunarizina (FLZ; 30 mg/Kg). A seguir, a alodinia induzida nesses modelos foi avaliada em diferentes tempos (0 [basal], 0,5; 1; 2; 4 e 6 horas) pela porcentagem de retirada da pata frente a um estímulo mecânico (filamentos de von Frey). Após 30 minutos, foi observado que DTZ e FLZ reduziram significativamente a alodinia (86 ± 13% e 64 ± 6%, respectivamente ), induzida pela administração de CFA. No tempo 1 hora, a DTZ reverteu completamente (100%) a alodínia provocada pelo CFA, enquanto a FLZ reduziu em 61 ± 22%. A nocicepção induzida por PgE2 foi inibida significativamente pela DTZ nos tempos de 30 min (49 ± 5%), 1 h (74 ± 25%) e 2 h (100%, níveis basais). A FLZ foi menos efetiva em inibir a nocicepção provocada pela injeção de PgE2, reduzindo a alodínia apenas nos tempos de 30 min (47 ± 8%) e 2 h (41 ± 12%). Entretanto, a alodinia induzida pela epinefrina foi inibida totalmente (100%) pela FLZ nos tempos de 30 min e 1 h. Nestes tempos, a DTZ reduziu a alodínia induzida pela epinefrina em 61 ± 23% e 59 ± 9%, respectivamente. No modelo de dor neuropática, a alodínia induzida pela ligação parcial do nervo ciático foi inibida pela FLZ (tempo de 30 min) e pela DTZ (tempo 1 h), em 32 ± 13% e 42 ± 15%, respectivamente. Conclusões: A dotarizina (bloqueador de canais de cálcio dos tipos L, N e P/Q) e flunarizina (bloqueador de canais de cálcio do tipo L) demonstraram um efeito antinociceptivo em modelos animais de dor inflamatória e neuropática.

36.021 ENDOGENOUS OPIOIDS LIMIT ENDOTHELIN ETB RECEPTOR-MEDIATED HYPERNOCICEPTION TO FORMALIN IN MICE. Fernandes, M. B. M. M.; Trentin, P. G.**; Rae, G. A. Farmacologia UFSC Objetivo: Intraplantar (i.pl.) formalin causes a biphasic nociceptive response in mice. Both the first (0-5 min) and second (10-30 min) phases of the response are augmented by activation of local endothelin ETA receptors, but the selective endothelin ETB receptor agonist sarafotoxin S6c (SRTX) potentiates only the second phase (Piovezan et al., Can J Physiol. Pharmacol., 75: 596, 1997). This study assesses if endogenous opioids can affect the ability of SRTX to enhance formalin-induced responses. Métodos e Resultados: Male Swiss mice (30-35 g) received i.pl. injections of either vehicle (20 µl of PBS) or SRTX (10 or 30 pmol) alone or in combination with NTX (5 µg), 30 min prior to i.pl. of formalin 1%, and the time

spent licking the treated hindpaw was recorded in s in 5 min bins over the next 40 min. Each group was comprised of 8-10 mice. Neither dose of SRTX alone modified licking time during the first phase of formalin-induced nociception. However, the second phase of the response was significantly potentiated by SRTX at 10 pmol (from 78.4 ± 3.2 to 145.1 ± 19.1 s), but not at 30 pmol (to 65.7 ± 8.9 s). Co-injection of NTX together with 10 pmol SRTX did not alter the magnitude of second-phase nociception induced by formalin (155.2 ± 8.9 s), but clearly potentiated nociceptive responses in mice given 30 pmol of SRTX together with the opioid antagonist (130.7 ± 26.0 s). Conclusões: These findings confirm that selective activation of ETB receptors in the hind paw by SRTX can evoke hypernociception to formalin in the mouse. Nonetheless, this effect occurs over a very narrow dose range, as higher doses trigger local release of endogenous opioids which act to inhibit nociceptive responsiveness. The nature of the opioid mechanisms (i.e. peptides and receptors) involved in the limitation of SRTX-induced hypernociception to formalin remain to be characterized. 36.022 PARTICIPAÇÃO PERIFÉRICA DA VIA HEME OXIGENASE-MONÓXIDO DE CARBONO NA RESPOSTA NOCICEPTIVA DE RATOS AO TESTE DA FORMALINA. 1Nascimento, C.G.O.; 2Branco, L. G. S. 1Fisiologia FMRP-USP; 2Morfologia, Estomatologia e Fisiologia FORP-USP Objetivo: Nos últimos anos muitas evidências surgiram envolvendo os neuromoduladores gasosos como o óxido nítrico e o monóxido de carbono em diversos processos fisiológicos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar o papel desempenhado pela via heme oxigenase (HO)-monóxido de carbono (CO) na resposta nociceptiva de ratos submetidos ao modelo experimental de dor bifásica da formalina. Métodos e Resultados: Os animais foram manuseados e adaptados à câmara e ao ambiente experimental por 3 dias antes da realização de cada protocolo experimental. Para o teste da formalina, utilizou-se um volume de 50µl de formalina diluida a 1%, injetada por via subcutânea na superfície dorsal da pata posterior direita. Após as injeções os animais foram observados por 1 hora, e o comportamento de flinching medido como a resposta nociceptiva. Vinte minutos antes do teste, os ratos foram pré-tratados com injeções podais do inibidor da HO, zinc deuteroporphyrin 2,4-bis glycol (ZnDPBG) ou heme-lisinato, indutor da via HO-CO. Observou-se aumento significativo da resposta nociceptiva dos ratos tratados com o ZnDPBG tanto na fase 1 (47,6±1,78) quanto na fase 2 (63±3) em relação ao veículo controle (28,6±2,85 e 49,4±2,6), e drástica redução da resposta comportamental de flinching nos animais pré-tratados com heme-lisinato tanto na fase 1 (10,4±0,92) quanto na fase 2 (10,2±1,24) contra 25,4±1,59 e 47,8±2,25 respectivamente do veículo. Dados da fase 1 tomados aos 5 min e da fase dois aos 35 minutos de teste. Conclusões: Os resultados demonstram que a via HO-CO periférica local modula a nocicepção, tanto na primeira quanto na segunda fase do teste da formalina. A inibição da via levou ao aumento da nocicepção, enquanto que a indução promoveu forte antinocicepção. 36.023 EFEITO ADITIVO DA CETAMINA SOBRE A RESPOSTA DA MORFINA NOS TESTES DE TAIL-FLICK, CATALEPSIA E CAMPO ABERTO EM RATOS: PAPEL DOS RECEPTORES OPIÓIDES, ADRENÉRGICOS A2 E CANAIS DE K

+-ATP DEPENDENTES. Rao, V. S.; Lima Júnior, R. C. P.**; Maia, J. L.**; Almeida, F.; Campos, A. R.** Fisiologia e Farmacologia UFC Objetivo: A combinação de analgésicos de várias classes farmacológicas são freqüentemente para o tratamento da dor. Este estudo investigou a potenciação dos efeitos da morfina (Morf 2,5; 5 e 7,5 mg/Kg/s.c.) por uma dose não analgésica de cetamina (Cet 30 mg/Kg/i.p.) utilizando os modelos de tail-flick,catalepsia e campo aberto. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (n=8/grupo) que receberam Morf nas doses de 5 (30':11,58±1,66 e 60':10,30±1,80***p<0,001 x controle) e 7,5 (30':9,40±1,89, 60':9,21±1,85 e 90':9,68±2,52***p0,001 x

controle), mas não 2,5 mg/Kg, mostraram um aumento dose-dependente no tempo de latência para a retirada da cauda no teste do tail-flick (Controle 30':3,47±0,64, 60':2,70±0,79, 90':4,53±1,42, 120':2,81±0,49 e 150':3,56±0,74). Cet 30 m/Kg não mostrou efeito antinociceptivo neste modelo (30':1,67±0,33, 60':2,01±0,34, 90':2,22±0,33 e 120': 3,42±0,64). A combinação Morf2,5-Cet (60':10,83±2,16 e 90':8,56±2,45**p<0,01 x controle e Morf), Morf5-Cet (30':11,20±1,46***p<0,001 x controle e Cet, 60':8,71±2,25**p<0,01 x controle e Cet e 90':11,84±2,04***p<0,001 x controle, Cet e Morf) ou Morf7,5-Cet (30'60'90'120'150': 15,00±0,00***p<0,001 vs controle, Cet e Morf) resultou em potenciação dose-dependente do efeito antinociceptivo da morfina, tanto em intensidade como em duração. Este efeito foi parcialmente bloqueado pelo pré-tratamento com ioimbina (2 mg/Kg/i.p. + Morf7,5-Cet: 30':4,96±1,78, 60':6,71±211, 90':6,65±1,99, 120':6,41±1,94 e 150': 2,90±1,74,***p<0,001 x Morf7.5-Cet) e completamente bloqueado pelo pré-tratamento com naloxona (2 mg/Kg/i.p. + Morf7,5-Cet: 30':2,01±0,65, 60':2,41±0,65, 90':3,01±0,60, 120':4,45±1,05 e 150': 4,31±1,05, ***p<0,001 x Morf7,5-Cet), porém não foi bloqueado por glibenclamida (3 mg/Kg/i.p. + Morf7,5-Cet: 30':14,06±0,93, 60':12,48±1,72, 90':12,61±1,68, 120':11,88±1,80 e 150':11,53±2,12, ***p<0,001 x controle). Morf 5 mg/Kg (3,50±2,10) e Cet (1,00±0,00) não induziram catalepsia nos ratos (controle: 4,50±1,53), mas a combinação das duas drogas produziu um efeito sinérgico (296,66±3,33 ***p<0,001 x controle, Morf e Cet), que foi inibido (***p<0,001 x Morf5-Cet) no animais pré-tratados com naloxona (0,00±0,00), ioimbina (1,50±1,14) e glibenclamida (0,50±0,34). No teste do campo aberto, enquanto Morf (5 mg/Kg) induziu um efeito depressor da atividade locomotora (11,75±2,06*p<0,05 x controle), Cet levou a um aumento desta atividade (39,12±6,27*p<0,05 x controle 22,25±278. Mas a combinação Morf5-Cet causou uma potenciação do efeito depressor da Morf (1,00±0,00***p<0,001 x controle e Cet), o que também foi antagonizado (***p<0,001 x Morf5-Cet) pela naloxona (10,58±1,24), ioimbina (12,16±2,30) e glibenclamida (17,16±7,44). Conclusões: Os resultados indicam que cetamina, em dose não analgésica, potencia a antinocicepção, catalepsia e depressão da atividade locomotora induzidos pela morfina, possivelmente envolvendo receptores opióides µ, adrenérgicos α2 e canais de K

+-ATP dependentes. Esta potenciação, apesar de favorável no tratamento da dor aguda, pode apresentar efeitos clínicos adversos. 36.024 ESTUDO COMPARATIVO DA ATIVIDADE DA ADENOSINA DESAMINASE (ADA) NA RESPOSTA INFLAMATÓRIA INDUZIDA POR DIFERENTES ESTÍMULOS QUIMIOTÁTICOS. Teixeira, C. M.; Vasconcelos, M. P.*; Cavalcante, C. F.*; Marinho, M. M.; Silvestre, P. P.*; Vale, M. R.; Alencar, N. M. N. Fisiologia e Farmacologia Objetivo: A adenosina desaminase (ADA) é uma enzima de reconhecido papel na imunomodulação via modulação dos níveis de adenosina. O presente estudo objetivou avaliar a atividade da ADA na quimiotaxia de neutrófilos induzida por diferentes mecanismos inflamatórios. Métodos e Resultados: Peritonite foi induzida em ratos Wistar machos (150 –200 g), pela administração i.p. de carragenina (Cg;2mg/kg) agente quimiotático indireto, ou por fMLP (1,5µg/Kg), agente quimiotático direto. Quatro horas após a injeção dos estímulos os animais foram sacrificados e coletado o fluído peritoneal, no qual foram realizadas contagem total e diferencial dos leucócitos e a determinação da atividade da ADA. Os resultados foram expressos como a média do número de célula/mL ou atividade da ADA em U/L ± EPM. A migração de neutrófilos no grupo Cg (13280 + 748) foi maior em relação ao grupo fMLP (6630 + 356) e ambos diferente do controle (1423 + 207), animais tratados com salina i.p. O número de mononucleares não variou entre os grupos. A atividade da ADA não foi significativamente diferente entre os grupos estimulados com Cg (5.36 + 0,34) ou fMLP (3,4 + 0,58), mas foi diferente do controle (1.8 + 0,6). A razão atividade da ADA/número de neutrófilos foi maior no grupo fMLP do que no grupo Cg, não havendo diferenças da razão ADA/monucleares nos dois tratamentos (ANOVA – teste de Bonferroni). Conclusões: Os resultados sugerem uma maior eficiência do fMLP em induzir liberação de ADA para o meio extracelular por uma ação direta sobre os neutrófilos. Estudos mais acurados deverão ser feitos no sentido de esclarecer melhor esta hipótese.

36.025 ALTERAÇÕES BIOQUÍMICAS E FUNCIONAIS DAS GLÂNDULAS SALIVARES MAIORES DE RATOS COM PERIODONTITE. 1Herrera, B. S.; 1Maia-Dantas, A.**; 1Porto-Martins, R.*; 1Capi, P.*; 1Teixeira, S. A.; 2Spolidório LC ;1Muscara MN ; 1Farmacologia ICB I-USP; 2Patologia Geral e Laboratórios UNESP-Araraquara Objetivo:

Estudar a influência da periodontite sobre a taxa de salivação e expressão de marcadores de estresse oxidativo em glândulas submandibular (GSM) e parótida (GP) de ratos. Métodos e Resultados: Periodontite foi induzida em ratos Wistar (machos, 180 - 220 g) colocando-se uma ligadura ao redor do primeiro molar inferior direito (grupo P); no grupo sham (S) a ligadura foi imediatamente removida após o procedimento. Nos dias 3, 7 e 14 após a colocação da ligadura, foi mensurado o fluxo salivar não-estimulado, e amostras de GSM e GP foram retiradas de todos os grupos (S, P, e P+AG) para análise da expressão de nitrotirosina (NT) e atividade de mieloperoxidase (MPO). Diminuição do fluxo salivar foi observado no grupo P em relação ao S no 3º (100±15,8 vs 13,7±3,4; p<0,01), 7º (100±20,1 vs 50,8±6,9; p=0.073) e 14º (100±11,7 vs 35,9±5,3; p<0,01) dias. No 3º dia, a atividade de MPO presente na GSM direita (ipsilateral à indução da periodontite) do grupo P mostrou-se aumentada em relação ao sham, tanto ipsi- (220,2±22 vs. 88,2±40,6; p<0,05) quanto contralateral (100±27,2; p<0,05); quanto à GP, o grupo P mostrou perfil similar em relação ao S (ipsilateral: 199,8±28,9 vs. 67,2±18,4; p<0,01; contralateral: 100±15,9; p<0,05). De forma paralela, observou-se que a expressão de NT nas amostras de GSM dos animais com periodontite foi maior que no grupo sham. Conclusões: Modificações oxidativas de biomoléculas das glândulas salivares podem mediar a disfunção observada na decorrência da doença. 36.026 ENDOTHELIN RECEPTOR BLOCKADE REDUCES HEAT HYPERNOCICEPTION INDUCED BY CHRONIC INFRAORBITAL NERVE CONSTRICTION IN RATS 1 Chichorro, J. G.; 2 Zampronio, A. R.; 3 Rae, G. A.; 1, 3 Farmacologia UFSC; 2 Farmacologia UFPR Objetivo: Infraorbital nerve (ION) constriction injury inflicts marked facial ipsilateral hypernociception to cold and heat stimuli in rats. Hypernociception to cold stimuli is reduced by blockade of endothelin ETA and/or ETB receptors. This study assesses the effects of the mixed ETA/ETB (bosentan) and selective ETA (atrasentan, BQ-123) or ETB (A-192621, BQ-788) receptor antagonists against heat hypernociception in this model of trigeminal neuropathic pain. Métodos e Resultados: Two loose silk 4-0 ligatures were tied around the right ION of anesthetized male Wistar rats (180-200 g) to induce constriction injury. One day before and on day 4 after surgery rats (n= 5 to 8) were tested repeatedly for responsiveness to application of a radiant heat stimulus to the snout, as measured by latency for flicking snout/vibrissae or head withdrawal. Bosentan, atrasentan and A-192621 were injected i.v., while BQ-123 and BQ-788 were injected s.c. into the upper lip. Control rats received vehicle alone. ION injury caused marked heat hypernociception over first 10 days. Heat hypernociception was substantially reduced, for up to 3-4 h, by bosentan (10 mg/kg), atrasentan (both 10 mg/kg) and A-192621 (20 mg/kg), with maximal reductions of ∼ 80, 96 and 90%, respectively (the reactions time of sham and nerve-injured animals treated with vehicle, atrasentan and A-192621 were 11.0±0.8, 5.6±0.5, 10.8±0.9, 10,5±0.5 seconds, respectively). Local injection of BQ-123 or BQ-788 (10 nmol) resulted in short-lasting (1 h) reductions of 87 and 71%, respectively. Co-administration of BQ-123 + BQ-788 prolonged the duration of such effects to 90 min, but maximal reduction was similar (85%). Conclusões: ETA and ETB receptor-operated mechanisms near of the site of ION injury, and possibly at other sites, seem to be involved in heat hypernociception induced by ION constriction.

36.027 EFEITOS DO LASER ASSOCIADO OU NÃO A ANTIINFLAMATÓRIO SOBRE A HIPERNOCICEPÇÃO EM RATOS WISTAR. Hortêncio Neto, H.; Paulino, C. A. Neurociências UNIBAN Objetivo: Estudar os efeitos do laser (2 Joules/cm2), associado ou não ao antiinflamatório não esteroidal, Diclofenaco de Sódio, sobre a hipernocicepção em ratos. Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos Wistar, machos, com 200-220 gramas, divididos em 4 grupos (n=9): G1 = controle (sem o laser); G2 = laser de forma pontual no coxim plantar posterior esquerdo; G3 = AINE, Diclofenaco de Sódio (10 mg/kg, via ip) e G4 = AINE, associado ao laser. A hipernocicepção foi induzida pela injeção de carragenina lambda-1% (0,1 ml, via sc), aplicada no coxim plantar posterior esquerdo de cada rato; o tempo de latência (em segundos) para retirada da pata foi medido por meio do Teste Plantar (Ugo Basile®) antes e nos momentos 1-2-3-4-5-6 e 8 horas após cada procedimento. Os resultados (Média ± DP) mostraram em H1 que os grupos G2 (8,8±1,1), G3 (6,7±1,8) e G4 (7,3±1,4) demonstraram uma redução significante (P<0,05) em relação a G1 (6,3±1,3) no limiar de hipernocicepção, em H2, H3 e H6, os grupos G2 (5,7±0,8/4,5±0,8/4,2±0,6), G3 (5,8±1,3/4,9±1,1/4,7±1,0) e G4 (6,2±1,2/5,1±0,8/4,5±1,0) demonstraram uma redução significante (P<0,05) em relação ao grupo G1 (4,4±0,6/3,3±0,6/3,2±0,8), já em H4 o grupo G3 (4,6±0,8) demonstrou uma redução significante (P<0,05) em relação aos grupos G1 (2,7±0,4) e G2 (3,7±0,5), enquanto os grupos G2 e G4 (4,1±0,5) demonstraram uma redução significante (P<0,05) em relação ao grupo G1, em H5 e H8, os grupos G2 (4,0±0,6/5,5±1,0) e G4 (3,7±0,7/5,7±0,9) demonstraram uma redução significante (P<0,05) em relação ao grupo G1 (3,0±0,6/ 4,4±0,8), o grupo G3 (4,7±0,9/6,6±0,9) demonstrou uma redução significante (P<0,05) em relação aos demais grupos. Conclusões: Estes resultados indicam que a laserterapia (aplicação única) com densidade energética de 2 Joules/cm2 é mais eficaz no controle da hipernocicepção, de forma similar ao efeito analgésico produzido pelo antiinflamatório Diclofenaco de Sódio. 36.028 PAPEL DE CITOCINAS E EFEITO DA TALIDOMIDA(TLD) NA INFESTAÇÃO EXPERIMENTAL DE TUNGA PENETRANS(TP) EM RATOS. 1Capaz, R. A. C.; 2Calheiros, C. M. L.**; 1SOARES, P. M. G.**; 1Witt, L. H.*; 2Cunha, F. Q.; 1Ribeiro, R. A; 3Heukelbach, J.; 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Farmacologia, FMRP-USP; 3Saúde Coletiva UFC Objetivo:

Tunguíase é uma ectoparasitose causada pela penetração permanente da pulga Tunga penetrans(Tp) no seu hospedeiro. Um achado freqüente é a inflamação severa no local da lesão. Os mecanismos do processo inflamatório, entretanto, nunca foram descritos. Recentemente estabelecemos um modelo de infestação experimental em ratos (Parasitol Res 2004 94:371-376). Objetivou-se numa 1a fase observar o perfil de citocinas nos animais experimentalmente infestados, e numa 2a fase, avaliar o efeito de um inibidor seletivo de TNF, talidomoda(TLD), no curso da infestação. Métodos e Resultados:

Foi obtido, de 14 ratos infestados com Tp, sangue periférico para dosagem de citocinas(TNF e IL-1) pelo método de ELISA 0,2,6,10,13,16 e 20 dias após a penetração. Outros 18 ratos infestados experimentalmente com Tp foram divididos de forma aleatória em 3 grupos de 6 animais cada. Os animais foram tratados anteriormente com uma dose única de TLD(15mg/kg ou 45mg/kg). O terceiro grupo ficou estabelecido como controle. Os ratos foram examinados clinicamente 1,4,7,10,13e15 dias após tratamento. Para avaliar o edema, o volume das patas foi mensurado por pletsmografia. O estudo foi cego quanto ao tratamento. Os nível plasmático elevou-se, ao comparar o 13o dia com o nível antes da penetração(TNF: 94pg/ml – 446pg/ml, aumento de 474% e IL-1:360pg/ml- 1398 pg/ml, aumento de 388%). A razão de lesões vitais/ total de lesões, encontrada ao exame clínico, foi estatisticamente diferente 10 dias após tratamento no grupo de TLD 45 mg/kg em relação ao grupo controle(Salina: 0,711 ±0,255, TLD 15mg/kg: 0,575 ±0,165,

TLD 45mg/kg: 0,303 ±0,245) e a variação de volume foi significativa do grupo controle em relação a TLD 45mg/kg no 15o dia(Salina: 0,482 ±0,259, TLD 15mg/kg: 0,390 ±0,157, TLD 45mg/kg: 0,165 ±0,132) sendo nos dois parâmetros p<0,05(ANOVA). Conclusões:

Sugere-se a participação do TNF na patogênese da lesão causada pela Tp ,em modelo experimental. 36.029 CHOLINERGIC CONTROL OF RESIDENT PERITONEAL MACROPHAGES. 1Pochapski, M. T.; 2Souza, G. E. P.; 1Zamprônio, A. R. 1Farmacologia UFPR; 2Farmacologia FCFRP-USP Objetivo: We have shown that subdiaphragmatic vagotomy reduces the number of peritoneal macrophages (MΦ) (Inflamm.Res.,52:291, 2003) which affected fever and neutrophil migration. This study assessed the effect of acetylcholine (ACh) on the number of resident peritoneal MΦ, on fever and neutrophil migration and on the release of lipopolysaccharide (LPS)-induced tumor necrosis factor (TNF)-α by peritoneal MΦ. Métodos e Resultados: Male Wistar rats (180g) received intraperitoneal (i.p.) injection of tubocurarine (TC, 20µg/kg single injection or 2µg/kg, once a day/ 5 days) or saline and peritoneal cells were collected after 2h. In another set of experiments, LPS (5µg/kg,ip) was injected 30 min after TC injection (both protocols) and the febrile response was evaluated. Rats were also treated with TC (20µg/kg,i.p.) or atropine (AT, 20µg/kg,i.p.) or saline 30min before LPS (0.2µg/kg, i.p) and the neutrophil migration to the peritoneal cavity was evaluated. Thioglycollate-elicited MΦ were treated with AT or TC (50nM) and stimulated with LPS (0,001-10µg/ml) in the presence or absence of ACh (1, 3 e 10nM) and after 4h, TNF-α levels were measured by ELISA. A single injection of TC did not change the number of MΦ in the peritoneal cavity of the animals. However, daily injection of the lower dose of TC reduced 30% the number of MΦ. TC in both protocols reduced the fever after LPS injection (13% after a single injection and 51% after daily injection protocol). TC also reduced neutrophil migration in 39%. Ach 10 nM potentiated (75%) the TNF-α release induced by lower dose of LPS. This potentiation was reduced (65%) by TC. Conclusões: The results strongly suggest a role for the ACh from vagus nerve in the maintenance of the number and functionality of peritoneal MΦ and consequently in the integrity of the inflammatory response through nicotinic receptors 36.030 EFFECT OF LAMOTRIGINE, MEMANTINE AND MK-801 ON COLD HYPERNOCICEPTION IN A MODEL OF TRIGEMINAL NEUROPATHIC PAIN IN RATS. 1Pereira, E. M.; 2Chichorro, J. G.**; 2Rae, G. A.; 1Zamprônio, A. R.; 1Farmacologia UFPR; 2Farmacologia UFSC Objetivo: Chronic constriction injury of the infraorbital nerve in rats induces a state of thermal hypernociception in the first 12 days after surgery. This study aimed to evaluate the effects of the anticonvulsant lamotrigine and of the NMDA receptor antagonists memantine and MK-801 in the trigeminal cold hypernociception associated with this model. Métodos e Resultados: Male Wistar rats weighing 160-200 g were used. Trigeminal neuropathy was induced by placing two loose ligatures around the infraorbital nerve. Cold hypernociception developed shortly after the surgery, reaching maximal values at four days. Control animals (sham) were submitted to the same procedure without nerve ligatures. On the fourth day, sham and constricted groups received lamotrigine (30 mg/Kg, i.p.), memantine (0.3, 1 and 3 mg/Kg, p.o.) or MK-801 (5 nM/50 µL, in the lip) or the respective vehicle (1 mL/Kg or 50 µL) and noxious cold stimulation of the orofacial region ipsilateral to the surgery was applied at 30 minute intervals during six hours, in the form of a tetrafluoroethane spray. The time of facial grooming was recorded, as an index of nociceptive responsiveness. Constriction injury increased the total time of facial grooming from 8.53 ± 1.28 to 28.93 ± 2.85 seconds. Lamotrigine, memantine and MK-801 reduced the hypernociception by

95.4%, 97.1% and 51.2%, respectively. Lamotrigine and memantine were effective during the whole period of test, whereas MK-801 provided only partial relief of the hypernociception over the first four hours after treatment. Conclusões: The results suggest that lamotrigine, memantine and MK-801 are effective in the reversion of the cold hypernociception induced by the surgery. The reversion of the cold hypernociception by memantine and MK-801 strongly suggests that glutamate may have a role in the maintenance of this neuropathic condition. 36.031 SUPPRESSION OF ALLERGIC AIRWAYS INFLAMMATION IN ALLOXAN DIABETIC MICE. Barreto, E. O.; Arantes, A. C. S.; Carvalho, V. F.**; Serra, M. F.; Cordeiro, R. S. B.; Martins, M. A.; Silva, P. M. R. Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ Objetivo: The negative association between symptoms of type-1 diabetes and allergy was already stated, though the mechanism is not clarified yet. We reported that alloxan-diabetic rats are hyporesponssive to pleural antigen provocation, in a direct correlation with mast cell depletion and increase in serum corticosterone levels (Diaz et al., 1996; 1997). Here, we examined the reactivity of diabetic mice to airways antigen provocation. Métodos e Resultados: Male mice (strain A) were rendered diabetic after i.v. alloxan injection. Sensitization and booster with a mixture of ovalbumin (OVA) plus Al(OH)3 were performed on days 5 and 19 after diabetes induction, respectively. On day 25 and 26, animals were provoked intranasally with OVA (25 µg). Total and differential leukocytes were analyzed in bronchoalveolar lavage (BAL) as well as in the blood, 24 h post-challenge. Alloxinated mice sowed a long-lasting increase in the blood glucose levels as well as a significant elevation in the plasma levels of corticosterone. Intranasal administration of OVA into actively sensitized mice led to a marked increase in the number of leucocytes recovered in the BAL fluid as compared to control animals, mainly of eosinophils (from 0.01 ± 0.01 x 10-5 cells/BAL in controls to 2.30 ± 0.51 x10-5 cells/BAL in sensitized challenged). Increased number of eosinophils in the blood was also noted 24 h post-challenge. Interestingly, diabetic sensitized mice exhibited a less pronounced allergen-evoked inflammatory response in the airways (0.3 ± 0.1 x10-5 eosinophils/BAL) as compared to that of diabetic sensitized non-challenged animals, a phenomenon also reflected in the blood cellularity. Conclusões: We conclude that alloxan diabetes causes down-regulation of the allergic inflammatory response in the airways of mice, a phenomenon close correlated with an over expression of endogenous corticosteroids. 36.032 TRATAMENTO COM LIDOCAÍNA INIBE A RESPOSTA INFLAMATÓRIA INDUZIDA POR PARTÍCULAS DE SÍLICA EM CAMUNDONGOS. 1Fernandes, A. M.; 1Ferreira,T. P. T.*; 2 Costa, J. S.**; 1Farias Filho, F. A..*; 1Arantes, A. C. S.*; 1Cordeiro, R. S. B.; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R.; 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Química,FIOCRUZ; Objetivo: A silicose é uma doença inflamatória crônica, de elevada incidência na população mundial, porém sem tratamento específico até o momento. O anestésico local lidocaína tem se mostrado potente em inibir o desenvolvimento de algumas doenças de caráter inflamatório. No presente estudo, investigamos o efeito da lidocaína sobre a silicose experimental em camundongos, tendo-se o composto beclometasona como comparação. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss Webster foram utilizados e a sílica (10 mg) instilada por via intranasal, na condição de prévia anestesia. O infiltrado leucocitário foi avaliado no lavado broncoalveolar (BAL), 14 dias após injeção da sílica. Lidocaína (5%) e beclometasona (Clenil A; 400 µg/mL) foram administradas através de aerolização diária, durante o período de 7 a 14 após a indução da silicose. Verificamos que, em comparação com os controles, os animais injetados com sílica

apresentaram elevação nos níveis de leucócitos totais no BAL, que se refletiu por aumento no número de células mononucleares (de 0,60 ± 0,05 x10-5 para 1,83 ± 0,09 x10-5/BAL) (média ± SEM) e de neutrófilos (de 0,00 ± 0,00 x10-5 para 0,95 ± 0,18 x10-5/BAL). O tratamento com lidocaína mostrou-se eficaz em reduzir o infiltrado leucocitário no BAL de animais silicóticos, sendo mais efetivo no caso de células mononucleares em comparação aos neutrófilos. Efeito equivalente foi observado quando camundongos silicóticos foram tratados com esteróide beclometasona. Conclusões: Nossos resultados mostram que a lidocaína inibe o infiltrado leucocitário no espaço broncoalveolar de camundongos silicóticos, e indicam que a utilização da lidocaína pode representar uma alternativa terapêutica promissora no controle da inflamação pulmonar crônica. 36.033 IL-1 E IL-10 PRESENTES NA LINFA MODULAM A INFLAMAÇÃO PULMONAR DECORRENTE DA ISQUEMIA/REPERFUSÃO INTESTINAL (I/R-I). Cavriani, G.; Domingos, H. V.; Oliveira-Filho, R. M.; Tavares de Lima, W. Farmacologia ICB I-USP Objetivo: A inflamação sistêmica pode levar a insuficiência múltipla de órgãos e sistemas. Nesse contexto, observa-se inflamação pulmonar. Durante a I/R-i, o trato gastrintestinal gera citocinas inflamatórias que podem modular, através do sistema linfático, a inflamação pulmonar. Neste estudo avaliamos o efeito da secção do ducto linfático sobre a liberação das interleucinas IL-1 e IL-10 na inflamação pulmonar causada pela I/R-i. Métodos e Resultados: Após secção do ducto torácico linfático (ds = “ducto seccionado”), ratos machos (Wistar) foram submetidos a oclusão da artéria mesentérica superior (45 min) seguida de reperfusão (2 h). A inflamação pulmonar foi avaliada pela atividade pulmonar de mieloperoxidase (MPO). Quantificou-se também a liberação de IL-1 e IL-10 no soro e na linfa de ratos I/R-i. O grupo controle consistiu de ratos não manipulados e submetidos a I/R-i com o ducto linfático intacto (di = “ducto intacto”). Foram utilizados 10 animais por grupo experimental. Resultados:

Em relação ao grupo controle (MPO: 0,08 ± 0,013), o grupo I/R-i apresentou expressiva inflamação pulmonar (MPO: 0,53 ± 0,02), a qual sofreu significativa redução nos animais I/R-i ds (MPO: 0,33 ± 0,02). No soro destes animais houve evidente diminuição dos níveis de IL-1 (di: 766 ± 44 pg/ml; ds: 232 ± 14 pg/ml) e aumento de IL-10 (di: 436 ± 31 pg/ml; ds: 1017 ± 181 pg/ml). Os níveis de IL-1 e IL-10 na linfa coletada durante o período de isquemia foram indetectáveis, porém aumentaram marcadamente na linfa recuperada durante a reperfusão (IL-1: 243 ± 29 pg/ml; IL-10: 1389 ± 200 pg/ml). Conclusões: Nossos dados sugerem que mediadores inflamatórios gerados no trato gastrintestinal podem ser veiculados pelo sistema linfático, modulando a inflamação pulmonar causada pela I/R-i. 36.034 MORPHINE INDUCES FEVER INDEPENDENT ON PROSTAGLANDIN SYNTHESIS. 1Fraga, D.; 2Souza, G. E. P.; 3Zampronio, A. R.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2FCFRP-USP 3Farmacologia UFPR Objetivo: Opioid administration induces an elevation on body temperature. However, it is not clear if this can be described as a febrile or a hyperthermic response. Also, it is unknown if this response is dependent on prostaglandins synthesis. The aim of this study was to investigate if morphine induces a real fever, e.g. followed by peripheral vasoconstriction, and if so, if this response results from prostaglandin synthesis. Métodos e Resultados: Male Wistar rats (180g) were treated with the selective (µ-opioid antagonist CTAP (1µg, 2µl, icv) 30min before sc injection of morphine (3mg/kg). Rectal and skin temperature were evaluated every 30min up to 6h at a room temperature of 28°C. Animals were treated with metamizol (120mg/kg, ip), ibuprofen (10mg/kg, ip) or nimesulide (3mg/kg, ip) 30min before or with celecoxib (5mg/kg, vo) or dexamethasone (0.5mg/kg, sc) 1h before the injection of morphine (3mg/kg, sc). Cicloxygenase-

2 (COX-2) expression was evaluated by Western blot. Morphine induced a rapid rise in body temperature that peaked at 1h (Sal/Sal 0.1±0.1°C; CTAP/Sal 0.1±0.1°C; Sal/Morph 2.1±0.1°C) concomitantly with a decrease in the tail skin temperature (Sal/Sal 0.0±0.2°C; CTAP/Sal -0.1±0.1°C; Sal/Morph -1.5±0.2°C) and both effects were abolished by icv CTAP (0.0±0.1(C and -0.1(0.1(C, respectively). None of the anti-inflammatory altered morphine-induced fever. Morphine alone or in combination with CTAP did not induce further COX-2 expression in the hypothalamus while LPS (positive control) induced a significant increase in the COX-2 expression (116,1%). CTAP also did not affect the increased COX-2 expression induced by LPS (99.6%). Conclusões:

These results suggest that opioids induce a controlled rise in body temperature, which can be described as fever, but this response is independent on COX-2 expression and consequently prostaglandin synthesis. 36.035 SENSIBILIZAÇÃO INDUZIDA POR PROCESSO INFLAMATÓRIO EM MODELO EXPERIMENTAL DE HÉRNIA DE DISCO LOMBAR. 1Grava, A. L. S.**; 2Ferrari, L. F.; 1Defino, H. L. A.; 2Parada, C. A.; 2Cunha, F. Q.; 2Ferreira, S. H. 1Ortopedia Traumatologia FMRP-USP; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Para se estudar a participação do processo inflamatório na sensibilização induzida por hérnia de disco lombar foi desenvolvido um modelo experimental cirúrgico em ratos. O presente trabalho apresenta, além da técnica cirúrgica, os resultados obtidos pela administração de diferentes classes de analgésicos e antiinflamatórios sobre o quadro agudo de instalação da hérnia de disco lombar. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (180-250g) foram submetidos ao procedimento cirúrgico (exposição da quinta (L5) e sexta (L6) vértebras lombares, hemi-laminectomia da vértebra L5 e exposição do gânglio da raiz dorsal (GRD–L5)). Dos discos intervertebrais das caudas dos animais foram colhidos os núcleos pulposos e colocados sobre os GRD-L5. Após a sutura das incisões e recuperação dos animais, testes comportamentais (von Frey eletrônico (VF) e teste térmico de Hargreaves (HAR)) foram realizados para verificar a sensibilidade dos animais à estimulação nociceptiva. Todos os animais apresentaram diminuição do limiar ao estímulo nociceptivo mecânico (56% de diminuição do limiar hipernociceptivo em relação ao grupo controle no teste de VF; n=36 ratos) e térmico (69% de diminuição de limiar hipernociceptivo em relação ao grupo controle; n=36 ratos) da pata ipisilateral após a cirurgia. O tratamento com diferentes drogas antiinflamatórias (Indometacina (ind), 2mg/kg; atenolol (at), 1mg/kg; dexametazona (dex), 0,5mg/kg; indometacina + atenolol (indo+at)) e analgésicas (morfina (mph), 2mg/kg), durante a fase aguda (7 dias) diminuiu a sensibilidade à dor nos três testes (diminuição da hipersensibilidade em relação ao tratamento com salina: ind: VF: 38,6%; HAR: 65,2% / at: VF: 34,4%; HAR: 62,7% / dex: VF: 78,7%; HAR: 90,06% / indo+at: VF: 56%; HAR: 80,2% / mph: VF:98,4%; HAR: 96,9%; n=6 ratos por grupo). Conclusões: Os dados obtidos demonstram que o processo inflamatório participa da sensibilidade à dor apresentada na fase aguda deste quadro patológico. Além disso, o modelo cirúrgico se mostrou eficaz e confiável para ser utilizado em outros estudos que possam envolver patologias da região lombar da coluna vertebral. 36.036 PAPEL DO ÓXIDO NÍTRICO (NO) E DOS CANAIS DE K ATP DEPENDENTES (KATP) NO EFEITO ANTINOCICEPTIVO DO SILDENAFIL NAS CONTORÇÕES ABDOMINAIS INDUZIDAS POR ZYMOSAN EM CAMUNDONGOS. Freitas, I.**; Rolim, D. E.*; Ribeiro, R. A; Vale, M. L.; Souza, M. Fisiologia e Farmacologia DFF-UFC Objetivo: A necessidade de desenvolver novas drogas analgésicas, bem como a de compreender os mecanismos envolvidos na dor inflamatória, motiva a pesquisa de fármacos que atuem no eixo NO/GMPc/PKc/ KATP (Proc. Natl. Acad. Sci USA 101: 3680-3685/2004). Neste ínterim, nosso trabalho teve por objetivo avaliar o efeito antinociceptivo do sildenafil, um inibidor da

fosfodiesterase tipo 5 do GMPc, nas contorções abdominais induzidas por zymosan em camundongos, bem como avaliar o papel do NO e KATP neste evento. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss pesando entre 25 e 30 g receberam salina ou sildenafil (10 mg/kg). Após 20 min, zymosan (ZYM; 1 mg/animal) foi administrado por via i.p. e as contorções abdominais foram aferidas por 20 minutos. Em outro grupo os animais foram pré- tratados com L-NAME (inibidor não seletivo da oxido nítrico sintase; 20mg/kg ; s.c.), glibenclamida (bloqueador dos KATP, 1mg/kg; V.O.), diazóxido (abridor de KATP; 1mg/kg; s.c.) ou glibenclamida (1mg/kg, v.o) + Diazóxido (1mg/kg, s.c). Nossos resultados mostram que Sildenafil (2.33 + 0.7, N=12) inibiu significativamente (p<0.001) as contorções abdominais induzidas por ZYM (20 + 1.44, N=12). L-NAME (13.8 + 1.5, N=5) reverteu significativamente (p<0.05) o efeito antinociceptivo do sildenafil nas contorções abdominais induzidas por ZYM. Glibenclamida sozinha (13 + 2.3, N=12), mas não associada com diazóxido (1.6 + 0.8, N=6), reverteu o efeito antinociceptivo do sildenafil no modelo. Diazóxido sozinho (0.1 + 0.1, N=6) amplificou o efeito antinociceptiva do sildenafil nas contorções abdominais induzidas por ZYM. Conclusões: O presente estudo nos permite inferir que o sildenafil possui uma atividade antinociceptiva provavelmente via NO endógeno/GMPc/Canais de Potássio ATP-dependentes. 36.037 EFEITO DO TRATAMENTO COM ANTAGONISTAS NÃO-PEPTÍDICOS PARA OS RECEPTORES B1 DAS CININAS SOBRE A PELURISIA INDUZIDA PELA CARRAGENINA. Costa, R.; Fernandes, E. S.**; Lima Jr., O. M.; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: O potencial terapêutico de antagonistas seletivos para os receptores B1 das cininas tem sido sugerido por diversos estudos (Br. J. Pharmacol. 143: 803, 2004). O presente trabalho avaliou o efeito de dois novos antagonistas não-peptídicos dos receptores B1, o antagonista benzodiazepínico (BZD) e o SSR240612, no modelo da pleurisia induzida pela carragenina (Cg) em camundongos. Métodos e Resultados: Camundongos suíços machos (20-25g, N = 6) foram pré-tratados com os antagonistas BZD (3 mg/Kg, i.p.) ou SSR240612 (1 mg/Kg, i.p.) 30 min antes da administração intrapleural (i.pl.) de Cg (1%, 100µL/sítio, 4h). Os parâmetros analisados foram a migração celular e o grau de exsudação. A administração i.pl. de Cg induziu aumento significativo (p<0,001) no influxo de leucócitos e na exsudação plasmática para a cavidade pleural. O tratamento com os antagonistas não-peptídicos, BZD e SSR240612, inibiu significativamente a migração celular total (28 ± 7% e 63 ± 3% de inibição, respectivamente) e diferencial (neutrófilos; 29 ± 6% e 69 ± 3% de inibição, respectivamente). Porém, apenas o SSR240612 foi efetivo em inibir a exsudação plasmática (41 ± 5% de inibição) Conclusões: Os resultados obtidos demonstram que o antagonista seletivo e não-peptídico dos receptores B1, o SSR240612 apresentou efeito antiinflamatório superior àquele observado com o antagonista BZD. Estes resultados permitem sugerir que o SSR240612 poderia representar uma nova ferramenta terapêutica para o tratamento de doenças inflamatórias. Outros estudos estão em andamento para verificar os efeitos deste antagonista, quando administrado por via oral neste modelo. 36.038 MÉTODO DE ADMINISTRAÇÃO DE DROGAS DIRETAMENTE NO GÂNGLIO DA RAIZ DORSAL. 1Ferrari, L. F.; 2Grava, A. L. S.**; 1Cunha, F. Q.; 1Parada, C. A.; 1Ferreira, S. H. 1Farmacologia FMRP-USP; 2Ortopedia Traumatologila FMRP-USP Objetivo: Drogas administradas via intratecal podem atuar tanto sobre neurônios secundários quanto sobre os gânglios da raiz dorsal (GRD) dos neurônios primários. Para separarmos os efeitos de drogas administradas via intratecal sobre estas últimas estruturas foi desenvolvida a técnica de administração de drogas diretamente no GRD. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (150-350g) anestesiados receberam injeção pela técnica intraganglionar (igl), realizada com uma cânula preparada, inserida ao nível da quinta vértebra lombar (L5), 1,5cm lateralmente à coluna, em direção ao processo lateral da vértebra. A diminuição da resistência óssea e um reflexo na pata ipsilateral (flinch) indicaram a correta localização do GRD L5, onde um volume máximo de 5µl de solução foi depositado. A administração do corante Azul de Pontamina com posterior verificação cirúrgica confirmou a precisão da técnica (n=20 ratos). ArgininaC14 foi utilizada para verificar se as estruturas circundantes também eram atingidas pela injeção. A radiatividade medida no GRD L5 e nos tecidos ao redor mostrou que a droga se limitou ao gânglio, não se difundindo pelas outras estruturas (n=9 ratos). Além disso, testes comportamentais foram realizados para demonstrar a funcionalidade de drogas administradas por esta via: o teste de von Frey eletrônico mostrou que a administração igl de PGE2 (75ng/2,5l) induziu hipernocicepção (⊗ de limiar hipernociceptivo em relação ao grupo controle: 22g±1,108; n=5 ratos) que foi bloqueada em cerca de 89,5% pela injeção igl de morfina (6g/2,5l)(n=5 ratos). Ainda, a administração igl de glibenclamida (160g/2,5l) bloqueou a analgesia induzida pela morfina (⊗ de limiar hipernociceptivo em relação ao grupo controle: 22,180g±1,622; n=5 ratos). Esses resultados foram comparados com resultados obtidos com a administração destas mesmas drogas na pata dos animais e verificou-se que eram semelhantes. Conclusões: A técnica descrita permite a administração de drogas no GRD sem procedimento cirúrgico e realização de testes poucos minutos após a injeção. Os experimentos demonstraram a confiabilidade do método, além de sugerirem a existência de receptores farmacológicos nos corpos celulares presentes nos GRD. 36.039 ESTUDO DO EFEITO ANTINOCICEPTIVO DA TALIDOMIDA NA HIPERALGESIA ARTICULAR EXPERIMENTAL INDUZIDA POR ZYMOSAN. 1Vale, M. L.; 2Cunha, F. Q.; 1Brito, G.A.C.; 2Poole, S.; 1Ribeiro, R. A. 1Fisiologia e Farmacologia DFF-UFC; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Anteriormente havíamos demonstrado que talidomida (TAL) possui efeito antinociceptivo nos modelos de contorção abdominal e hiperalgesia mecânica plantar em ratos e que esse efeito devia-se à sua inibição da síntese do Fator de Necrose Tumoral (TNF). Outros autores vêm apontando o TNF como sendo a citocina pivô envolvida na gênese e piora das artropatias. Levando-se em conta o papel do TNF na dor inflamatória e nas doenças articulares e que TAL possui atividade inibitória sobre a síntese dessa citocina, nos propusemos a avaliar o efeito antinociceptivo da TAL em um modelo de hiperalgesia articular. Métodos e Resultados: A hiperalgesia articular foi avaliada utilizando-se o teste da incapacitação articular (IA) induzida pela injeção intrarticular de zymosan (ZYM; 1mg/articulação). Nossos resultados mostram que TAL (5-45mg/kg; ip) inibiu de forma significativa (p<0.05) a IA (20.6+1.4, N=6, maior efeito) quando comparado ao controle (48.5+4.8, N=6). Esse efeito não é observado quando TAL é dada após o ZYM. O pré-tratamento com o antagonista de receptores opioides, naloxona, não reverte o efeito da TAL na IA. Os níveis de citocinas (ng/ml) foram mensurados no lavado da cavidade articular por ensaio imunoenzimático e TAL significativamente (p<0.05) inibiu os níveis de TNF (ng/ml; 0.3+0.07, N=8) quando comparado ao controle (0.9+0.03, N=8) mas não a de interleucina-1 (IL-1), IL-6 ou do CINC-1. Os níveis de IL-10 também não foram alterados. Em adição, a expressão de TNF a nível tissular foi avaliada por imunohistoquímica observando-se uma diminuição acentuada da marcação para TNF nos animais pré-tratados com TAL. Conclusões: TAL possui efeito antinocicpetivo no modelo de IA em joelho de rato que pode ser explicado pela sua atividade inibitória sobre a produção de TNF local. Células residentes sinoviais parecem ser a principal fonte de TNF que é inibida pelo tratamento com TAL, a nível articular. 36.040 EFEITO ANTINOCICEPTIVO DO CLORETO DE ZINCO NA NOCICEPÇÃO INDUZIDA POR CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS (IL-1BETA E TNF-ALFA). 1Rosa, K. A.; 1Gadotti, V. M.**;

2Rosa, A. O.**; 2Rodrigues, A. L. S.; 3Calixto, J. B.; 1Santos, A. R. S.; 1Ciências Fisiológicas UFSC; 2Bioquímica CCB-UFSC; 2Farmacologia UFSC; Objetivo: O Zinco (Zn2+) é encontrado no sistema nervoso central em vesículas sinápticas de neurônios específicos. Anteriormente demonstramos que o cloreto de zinco (ZnCl2) apresenta importante ação antinociceptiva em camundongos, em parte, por modular a transmissão glutamatérgica. O presente estudo analisa o possível efeito antinociceptivo do ZnCl2 na nocicepção induzida pela injeção intratecal (i.t.) de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α) em camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss (25-35g n=6-12 por grupo) de ambos os sexos. A resposta nociceptiva foi caracterizada pelo tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo (TLM) os membros posteriores (patas posteriores, cauda e abdômen) após a injeção intratecal (i.t.) de IL-1β (0,1 pmol/sitio) e TNF-α (1 pmol/sitio). O ZnCl2 administrado pela via intraperitoneal (i.p.) (0,1-10 mg/kg) foi capaz de reduzir de forma significativa e dose dependente o TLM induzido pela injeção i.t. de IL-1β e TNF-α, com DI50s de 0,59 (0,38-0,91) e 2,74 (1,13-6,64) mg/kg e inibições de 100 e 84±20%, respectivamente. Além disso, o antagonista de receptor NMDA, MK-801, administrado pela via (i.p.) (0,05 mg/kg) também foi capaz de reduzir a nocicepção induzida pela injeção intratecal (i.t.) de IL-1β e TNF-α, com inibições de 77±9 e 92±7%, respectivamente. Conclusões: Estes resultados estendem dados anteriores e demonstram que o ZnCl2 pode produzir antinocicepção em camundongos por modular a resposta nociceptiva produzida por citocinas pró-inflamatórias. Além disso, pode-se sugerir que o efeito antinociceptivo do ZnCl2 depende, em parte, de uma modulação do sistema glutamatérgico, principalmente dos receptores ionotrópicos do tipo NMDA. 36.041 ANTI-CINC-1 INIBE A NOCICEPÇÃO, EDEMA E MIGRAÇÃO CELULAR NO MODELO DE ARTRITE REATIVA AO LPS: COMPARAÇÃO COM ANTI-TNFα E ANTI-IL-1β 1Bressan, E.; 2Cunha, F. Q.; 1Tonussi, C. R. 1Farmacologia UFSC; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: CINC-1 (IL-8 humana) tem sido reconhecida como uma citocina quimiotática de neutrófilos em ratos. Nosso objetivo foi avaliar a participação da CINC-1 na artrite reativa ao LPS em comparação com TNF⟨ e IL-1. Métodos e Resultados: LPS (30 ng) foi injetado por via intraarticular (i.art.) em ratos Wistar machos 3 d após carragenina (300 µg; i.art.; n=6). Anti-CINC-1, anti-TNF⟨, anti-IL-1 ou soro pré-imune (C) (20 ou 40 µl do soro total; i.art.) foram administrados 20 min antes do LPS. A incapacitação articular foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante marcha de 1 min; o edema, pela variação do diâmetro articular (DA; cm) e, a migração celular, pela contagem total (CT; cel/mm3) e diferencial de leucócitos (mono e polimorfonucleares, MON; PMN; cel/mm3) do fluido sinovial coletado 6 h após. Anti-CINC-1 (20 µl) reduziu o TEP (P<0,05; 36,2±1,8 s) e o DA (P<0,01; 0,06±0,01 cm) (C, TEP: 45,2±3,3 s; DA: 0,12±0,01 cm). Anti-CINC-1 (40 µl) reduziu o TEP (P<0,01; 23,9±5,2 s), o DA (P<0,05; 0,12±0,01 cm) e a migração de MON (P<0,01; 2201±110 cél/mm3) e PMN (P<0,05; 207±59 cél/mm3) (C, TEP: 36,0±4,8 s; DA: 0,15±0,01cm; MON: 5022±705 cél/mm3; PMN: 495±105 cél/mm3). Anti-TNF⟨ e anti-IL-1 (20 µl) inibiram o DA (P<0,01; anti-TNF⟨: 0,03±0,01 cm; anti-IL-1: 0,051±0,01 cm) e a migração de MON (anti-TNF⟨: 1733±100 cél/mm3; anti-IL-1: 1969±339 cél/mm3). (C, DA: 0,076±0,01 cm; MON: 6206±958 cél/mm3). Houve tendência de inibição da migração de PMN pela anti-IL-1 (20 µl) (414±125 cél/mm3; C: 1526±518 cél/mm3). Anti-TNF⟨ e anti-IL-1 (40 µl) inibiram o DA (P<0,01; C: 0,136±0,01 cm; anti-TNF⟨: 0,08±0,01 cm; anti-IL-1: 0,09±0,01 cm). Apenas anti-TNF⟨ inibiu o TEP (P<0,01; 21,1±3,3 s), e a migração de MON (P<0,01; 1055±162 cél/mm3) e PMN (P<0,05; anti-TNF⟨: 98±23 cél/mm3) (C, TEP: 44,3±4,3 s; MON: 4089±655 cél/mm3; PMN: 535±178 cél/mm3). Conclusões: Estes dados demonstram que IL-8 pode constituir um alvo terapêutico na artrite reativa. Além disso, demonstramos que CINC-1 também pode mediar a migração de MON além de PMN.

36.042 O VENENO DO ESCORPIÃO TITYUS BAHIENSIS INDUZ MIELOPOIESE E LEUCOCITOSE EM CAMUNDONGOS. 1Cardoso, S. S.*; 2 Bincoletto, C.; 3Teixeira, C. F. P.; 4Kwasniewski, F. H.; 1Medicina UMC; 2Centro Interdisciplinar de Investigação Bioquímica UMC; 3Farmacologia Instituto Butantan; 4Núcleo Integrado de Biotecnologia UMC Objetivo: O escorpionismo é um problema de saúde pública no Brasil, e nos acidentes graves pelo T. serrulatus há uma resposta inflamatória com produção de citocinas e leucocitose. A ação de venenos de outros escorpiões da fauna brasileira, como o do T. bahiensis (vTb), raramente são estudadas. Nosso objetivo foi avaliar a ação do vTb sobre a mielopoiese e mobilização de leucócitos para o sangue. Métodos e Resultados: Métodos e Resultados: Camundongos Swiss machos (2 meses) receberam 200µg/kg ip do vTb e após 30min, 1, 3, 6 ou 24hs foram sacrificados e a expansão de colônias de células da medula óssea (representadas como número de colônias/105 células, médiaepm) avaliada in vitro em meio semi-sólido (7 dias de incubação a 37oC e 5% de CO2) com ou sem a adição de fatores de crescimento (SCM). As colônias foram contadas em aumento de 40X. Do sangue realizamos as contagens totais e diferenciais de leucócitos (representadas como células/µL, média±epm). Os animais controles receberam NaCl 0,9% ip. Logo na 1ah (n=6-12) ocorreram leucocitose (6,7±0,7 X 10,0±0,8) e discreta neutrofilia (2,1±0,2 X 3,0±0,3), perdurando até a 24ah (n=8-12) (6,7±0,7 X 18,0±0,8 e 2,1±0,2 X 7,0±0,5 respectivamente), quando também surgiram linfocitose (4,5±0,5 X 7,5±0,5), eosinofilia (0,1±0,02 X 0,3±0,1) e monocitose (0,1±0,02 X 0,4±0,1). O vTb não induziu o crescimento de colônias sem o SCM in vitro, e, com a adição deste, houve sinergismo entre eles na 6ªh (100,6±14 X 200±33, n=8-12) e 24ªh (82±6,3 X 135±12, n=8-10). Conclusões: O vTb afeta a dinâmica dos leucócitos, provavelmente mobilizando inicialmente os leucócitos marginais da microcirculação e depois induzindo a sua produção e também mobilização a partir da medula óssea. 36.043 PARTICIPAÇÃO DO ÓXIDO NÍTRICO ENDÓGENO NO ESCORPIONISMO EXPERIMENTAL. 1Kwasniewski, F. H.; 2Landgraf, R. G.**; 3Teixeira, C.F.P.; 1Núcleo Integrado de Biotecnologia UMC; 2Imunologia ICB IV-USP; 3Farmacologia Instituto Butantan Objetivo: Os acidentes com escorpiões Tityus serrulatus levam à alterações pulmonares e sistêmicas, podendo ocasionar a morte. Nosso objetivo foi avaliar a participação do óxido nítrico (NO) endógeno em um modelo de envenenamento pelo T. serrulatus. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (160-200g) receberam iv NaCl 0,9% (controles) ou 200µg/kg do veneno do T. serrulatus (vTs). Após 30min e 1h foram avaliados na traquéia (Tr), brônquios externo (Be) e internos (Bi) e pulmões (P), o aumento da permeabilidade vascular (aPV, pelo extravasamento do corante azul de Evans) e a hemorragia (pela quantificação de hemoglobina) respectivamente. Após 24h avaliamos a migração celular (contagem de células no lavado broncoalveolar, em número de células x105/mL). A participação do NO nesses eventos e na sobrevida por 24h foi estudada pelo pré-tratamento iv 30min com L-NAME (10 mg/kg) ou com a L-arginina (L-ARG, 300 mg/kg). O vTs induziu o aPV (n=8-20, médiaepm, em µg de aE/g peso seco) na Tr 10514 X 17013, Be 110±12 X 260±18; Bi 686 X 306±26; e P 57±3 X 39536; hemorragia (Hb, n=6-15, em mg/g de tecido) na Tr 1±0,1 X 3±0,3; Be 1,7±0,2 X 3,1±0,3; Bi 1,4±0,2 X 4±0,4 e P 2,3±0,2 X 8±0,8), e a migração de PMNs 0,15±0,1 X 3,3±0,6. O L-NAME (n=10) potencializou em 40% o aPV nos P e não teve efeito sobre a Hb, enquanto que a L-ARG inibiu em 50% o aPV nos Bi e 60% nos P, e em 30% a Hb nos P. No influxo de PMNs o L-NAME (n=4) não teve efeito, enquanto que a L-ARG (n=9) inibiu em 65%. Após 24h do envenenamento (n=10) 25% dos animais morreram o que não foi afetado pela L-ARG (n=9) mas o tratamento com L-NAME (n=10) causou a morte de 70% dos animais.

Conclusões: O NO endógeno é importante no escorpionismo experimental, enquanto um aumento na oferta de seu substrato melhora o quadro pulmonar, a sua falta piora o quadro e aumenta a taxa de mortalidade. 36.044 PARTICIPAÇÃO DO ÓXIDO NÍTRICO (NO) NA MODULAÇÃO CENTRAL DA HIPERNOCICEPÇÃO DA ARTRITE POR ZYMOSAN (AZY). 1Girão, V. C. C.**; 1Leite, A. C. R. M.**; 1Monteiro, M. M. F.*; 2Bezerra, M. M.; 3Silva Jr., F. S.; 1Rocha, F. A. C. 1Medicina Clínica, UFC; 2Fisiologia e Farmacologia, UFC; 3Reumatologia FMUSP Objetivo: Em estudos anteriores, demonstramos que o NO tem efeito dual na hipernocicepção da AZy, com efeito analgésico de doadores de NO. Neste trabalho, demonstramos o efeito da modulação de NO ao nível do SNC sobre a hipernocicepção periférica da AZy. Métodos e Resultados: Ratos Wistar (220g) foram submetidos, sob anestesia, à colocação de cânula intratecal(i.t.) no espaço lombar (L5 – L6). Grupos(n=6/grupo) receberam Zy (1mg) i.art. no joelho direito (NT) e receberam salina i.t, SIN-1 (10ug, 20ug e 40ug i.t) 2h após Zy i.art ou L-NAME (3mg i.t) ou 1400W(0,1umol i.t), de forma terapêutica (2h horas após Zy) ou profilática (30’antes do Zy). A hipernocicepção foi avaliada pelo teste de incapacitação articular (IA) e expressa como Tempo de Suspensão da Pata (TSP) (s). Os animais foram sacrificados, sob anestesia, 6h após Zy. A administração de SIN-1 promoveu antinocicepção (P<0,05) (10ug/12,14±0,6s) ou hipernocicepção (P<0,05)(40ug/37,02±1,65s) a depender da dose. Os inibidores de NOS, L-NAME (10,57±0,9s e 11,50±0,93s) e 1400W (11,18±0,73s e 13,50±0,86s), profilático e terapêutico, respectivamente, reduziram a hipernocicepção (P<0,05), se comparados ao TSP do grupo NT (23,93±0,67s) Conclusões: Alterações nos níveis de NO presente no SNC pela administração do SIN-1 (doador de NO) modula a hipernocicepção da AZy, sendo antinociceptiva ou hipernociceptiva, a depender da concentração; inibidores de NOS, dados no SNC, possivelmente por bloqueio da iNOS, promovem antinocicepção na AZy. Esta é a primeira demonstração da modulação central do NO sobre a hipernocicepção em modelo de artrite. 36.045 NITRIC OXIDE PRODUCTION IN BCG-INFECTED MESOTHELIAL CELL REQUIRES NF-KB ACTIVATION 1Candéa, A. L. P.; 1Vergara, F. M. F.*; 2Barja-Fidalgo, C; 2Freitas, M. S.; 3Henriques, M. G. M. O.; 1Farmacologia Aplicada FIOCRUZ; 2Farmacologia e Psicobiologia UERJ; 3Far-Manguinhos FIOCRUZ Objetivo: Mesothelial cells are metabolically active cells that line the pleura in a continuous monolayer and are able to release several inflammatory mediators after inflammatory stimuli. However, the regulation of mediators released during Mycobacterium infection is poorly understood. In this work we studied the mechanisms involved in the regulation of Nitric Oxide (NO) production by mesothelial cells after Mycobacterium bovis - BCG infection. Métodos e Resultados:

Pleural mesothelial cells were isolated from pleural cavity of C57/Bl-10 mice by enzyme digestion (Exp Cell Res 190; 91, 1990). The mesothelial cells were cultured (4x105cell/well, pool ≈20) and infected with BCG (4x105 UFC/mL). Nitrite released in supernatant was determined by Greiss method and was observed a significant increase at 48 hours after the infection (from 0.45 + 0.15 to 4.70 + 0.08µM, p ≤0.05) that remained until 72h. The epifluorescence microscopy analysis showed a progressive increase in iNOS expression in mesothelial cells infected with BCG from 24 hours to 72 hours of infection. Nuclear translocation of NF-κB was evaluated by western blot at BCG-infected mesothelial cells, and an increased nuclear accumulation of NF-κB (80%, p> 0.05) was observed in infected cells. Moreover, the iNOS expression was decreased (72%, p> 0.05) after pre-treatment of BCG-infected cells with PDTC (1µM), a NF-κB inhibitor. Conclusões:

Our data showed that BCG infection induces iNOS expression and NO production. The NF-κB nuclear translocation was induced by BCG infection and this transcriptional factor was required for the transcription of iNOS gene, as demonstrated when cells were treated with NF-κB inhibitor. 36.046 COMPARATIVE ACTIVITY OF THE ANTI-CONVULSANTS OXCARBAZEPINE, CARBAMAZEPINE AND GABABENTIN IN A RAT MODEL OF TRIGEMINAL NEUROPATHIC PAIN. 1Chichorro, J. G.; 2Zampronio, A. R.; 1Rae, G. A. 1Farmacologia UFSC; 2Farmacologia UFPR Objetivo: Rats submitted to infraorbital nerve (ION) constriction injury develop pronounced facial ipsilateral hypernociception to cold and heat stimuli over first 12 days, and bilateral mechanical hypernociception lasting more than 120 days. This study aims to compare, in this model of trigeminal neuropathic pain, the profiles of action of the anti-convulsants oxcarbazepine, carbamazepine and gabapentin against hypernociception to cold, heat and mechanical stimuli. Métodos e Resultados: Two loose silk 4-0 ligatures were tied around the right ION of anesthetized male Wistar rats (180-200 g) to induce constriction injury. At the peak of hypernociception, a single type of stimulus were applied repeatedly to the snout (n= 5 to 8 animals): 1) a cold tetrafluoroethane spray, 2) radiant heat, or 3) mechanical stimulation with von Frey hairs. Nociceptive responses were recorded, respectively, as: 1) duration of facial grooming, 2) latency to flick snout/vibrissae or withdraw head, or 3) minimal force causing escape/attack reactions. The effects of drug treatments (10 or 30 mg/kg, i.p.) were analyzed at 1 h intervals for up to 5 h later. Oxcarbazepine and gabapentin reduced cold hypernociception by 90 and 96%, respectively, but carbamazepine was ineffective. Oxcarbazepine, carbamazepine and gabapentin all attenuated heat hypernociception (maximal reductions of 89, 93 and 78%, respectively), but none of them significantly affected mechanical hypernociception. Conclusões: The mechanisms underlying ION constriction-induced hypernociception to cold and heat stimuli are amenable to temporary relief by anticonvulsants, and thus differ markedly from those of the bilateral mechanical hypernociception. This experimental model of trigeminal pain thus appears to correlate well with the varying efficacy of these anticonvulsants in treating neuropathic facial pain in humans. 36.047 EFFECT OF LAMOTRIGINE AND MEMANTINE ON HEAT HYPERNOCICEPTION IN A MODEL OF TRIGEMINAL NEUROPATHIC PAIN IN RATS. 1Pereira, E. M.; 2Chichorro, J. G.**; 2Rae, G. A.; 1Zampronio, A. R.; 1Farmacologia UFPR; 2Farmacologia UFSC Objetivo: The chronic constriction of the infraorbital nerve in rats induces a state of heat hypernociception in the first 12 days after surgery. This study aimed to evaluate the effects of the anticonvulsant lamotrigine and of the NMDA receptor antagonist memantine in trigeminal heat hypernociception. Métodos e Resultados: Male Wistar rats weighing 160-200g were used. Heat hypernociception was observed six days after the surgery, in which two loose ligatures were placed around the infraorbital nerve. Sham and constricted groups received lamotrigine (30 mg/Kg, i.p.), memantine (3 mg/Kg, p.o.) or vehicle (1 mL/Kg) and were exposed to the noxious thermal stimulus in the orofacial region ipsilateral to the surgery by a radiant heat source. The latency for occurrence of flicking snout/vibrissae or head withdrawal was measured (in seconds) every 30 minutes during six hours. Constriction of the infraorbital nerve reduced the reaction time of the animals from 10.6 ± 0.4 to 4.2 ± 0.37 seconds. Overall, lamotrigine and memantine reduced the hypernociception of the constricted groups by 87.1% and 92.23%, respectively, to values statistically similar to the threshold of the sham operated vehicle group. However, the effect of lamotrigine started immediately after injection whereas those of memantine started 1 h after injection. Conclusões: The results suggest that both drugs are effective in reducing heat hypernociception induced by the chronic constriction of the infraorbital nerve. The reduction of the hypernociception by memantine strongly suggests that glutamate may have a role in the onset of the neuropathic condition.

36.048 ENVOLVIMENTO DA ATIVAÇÃO DE MASTÓCITOS NO AUMENTO DOS RECEPTORES B1 APÓS TRATAMENTO LOCAL COM PAF. Fernandes, E. S.; Passos, G. F.**; Medeiros, R.**; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo:

Foi demonstrado que o fator de agregação plaquetária (PAF) promove aumento expressivo dos receptores B1 para as cininas na pata de rato via produção de citocinas pró-inflamatórias e migração de neutrófilos (BJP, 139:973, 2003; XXXIV SBFTE, RES.04.050). O presente trabalho avaliou o envolvimento de mastócitos no aumento da resposta edematôgenica mediada pelos receptores B1, bem como, sobre a migração de neutrófilos e a produção de IL-1β em animais tratados com PAF. Métodos e Resultados:

Ratos machos Wistar (140-160g, N = 5) receberam PAF (10 nmol/pata) e após 6h, o edema de pata foi induzido pela des-Arg9-BK (DABK, 100 nmol/pata). Outros grupos de animais receberam PAF (10 nmol/pata) e foram utilizados para a medida da atividade da mieloperoxidase (MPO, 6 h) ou dos níveis de IL-1β (3h). A injeção de DABK produziu uma pequena alteração de volume na pata de animais controle (0,1 ± 0,05 ml). O tratamento com PAF causou aumento significativo da resposta edematogênica à DABK (0,39 ± 0,039 ml). Esta resposta foi reduzida significativamente pelo composto 48/80 (12 µg/pata, 24h) e pelo tratamento crônico com o cromoglicato de sódio (8 mg/kg, i.p., 6 dias, 1 x ao dia) (74 ± 3 % e 60 ± 3,6 %). O PAF aumentou aproximadamente 34 vezes a atividade da MPO, um efeito que não foi alterado pelo composto 48/80. Além disso, o PAF aumentou cerca de 10 vezes os níveis de IL-1β na pata de rato, uma resposta potencializada pela administração do composto 48/80 ou do cromoglicato de sódio (129 ± 12 e 83 ± 11 %). Conclusões: Os resultados do presente estudo sugerem que a ativação de mastócitos parece constituir um importante evento na indução funcional dos receptores B1 para as cininas após o tratamento com PAF. Entretanto, esta ativação não parece estar relacionada à migração de neutrófilos ou à produção de IL-1β. Estudos adicionais estão sendo realizados para o melhor entendimento deste processo. 36.049 EVIDÊNCIAS SOBRE O ENVOLVIMENTO DOS RECEPTORES B2, MAS NÃO DOS RECEPTORES B1 PARA CININAS NA RESPOSTA NOCICEPTIVA INDUZIDA PELO ATIVADOR DE PAR-2, TRIPSINA, NA PATA DE CAMUNDONGOS. Paszcuk, A. F.; Quintão, N. L. M.**; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: Tem sido demonstrado que a tripsina é capaz de induzir respostas nociceptivas e inflamatórias através da interação com receptores ativados por proteinases do tipo 2 (PAR-2) (Nat. Med., 7:821, 2001). No presente estudo, foi analisada a possível participação dos receptores B1 e B2 para as cininas na nocicepção espontânea induzida pela tripsina na pata de camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos suíços machos (15-25 g, N= 5-8 por grupo). A resposta nociceptiva foi caracterizada pelo tempo (s) em que o animal permaneceu lambendo ou mordendo a pata traseira direita após a injeção intraplantar (i.pl.) de 20 µl de tripsina (300 µg/pata) num intervalo de 10 min. O antagonista não-peptídico e seletivo dos receptores B2 para as cininas, o FR 173657 (30 mg/kg, i.p. 30 min antes), reduziu de forma marcante a nocicepção causada pela tripsina em camundongos, com inibição de 57 ± 15 % (P < 0,05). Por outro lado, o tratamento com o antagonista não-peptídico e seletivo dos receptores B1 das cininas, o SSR 240612 (1 mg/kg, i.p. 30 min) não foi capaz de interferir de forma significativa na resposta nociceptiva induzida pela tripsina. Conclusões: Os resultados demonstram que a nocicepção induzida pela tripsina, um ativador dos receptores PAR-2, parece envolver a ativação dos receptores B2, mas não dos receptores B1 cininérgicos. Outros estudos estão em andamento a fim de melhor caracterizar a importância das cininas nas respostas nociceptivas induzidas pela ativação dos receptores PAR-2. 36.050

5-FU INDUZ MUCOSITE INTESTINAL EM RATOS – AVALIAÇÃO TEMPORAL E POSSÍVEIS MECANISMOS FISIOPATOLÓGICOS. Soares, P. M. G.; Mota, J. M. S. C.*; Menezes, A. A. J.*; Brito, G. A. C.; Souza, M.; Ribeiro, R. A. Fisiologia e Farmacologia DFF-UFC Objetivo:

Mucosite intestinal (MI) é uma condição patológica induzida durante a quimioterapia do câncer com 5-fluorouracil (5-FU) e caracterizada por ulceração do epitélio da mucosa. Objetivou-se padronizar um modelo de mucosite intestinal induzida por 5-FU, avaliando seu curso temporal e mecanismo fisiopatológico. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar (250-350g) receberam dose única de 5-FU (150 mg/Kg, ip) ou igual volume de salina (ip). O dia da administração foi o dia 0 (d0), seguindo-se os dias experimentais d1, d3, d5, d15, d30. O peso foi mensurado para análise ponderal. O sangue periférico foi obtido para análise de leucócitos totais. O intestino foi separado em duodeno, jejuno e íleo para análise morfométrica, dosagem de mieloperoxidase (MPO) e de grupos sulfidrilas não-proteicos (NP-GSH). Grupos foram separados em n=5, com valores significantes se p<0,05. A perda ponderal foi mais importante em d3 (17,24% ± 2,16%) e houve recuperação a partir de d15. A leucopenia foi mais importante em d3 (redução de 72,81%) com recuperação a partir de d15. Em d3, a análise morfométrica mostrou redução na altura dos vilos (duodeno= 63,97; jejuno= 41,59%; íleo= 21,59%), aumento na profundidade das criptas (duodeno= 58,14%; jejuno= 33,49%; íleo= 18,47%) e diminuição da razão vilo/cripta (duodeno-controle= 3,17 ± 0,07, em d3= 0,84 ± 0,17; do jejuno- controle= 2,09 ± 0,19, em d3= 1,04 ± 0,29 e do íleo-controle= 1,20 ± 0,01, em d3= 0,83 ± 0,09), com recuperação a partir de d15. Principalmente em d3, houve aumento da atividade de MPO no duodeno, jejuno e íleo em relação ao controle, de 314,24%, 253,92% e 392,20%, respectivamente. Em d3, houve redução importante da atividade de NP-GSH em relação ao controle no duodeno, jejuno e íleo de 24,12%, 45,58% e 26,95%, respectivamente. Conclusões: 5-FU induziu MI no modelo agudo experimental em ratos com efeitos mais importantes no d3 e recuperação parcial a partir do d15 com possível participação de neutrófilos e de radicais livres. 36.051 A NOVEL EFFECT FOR ANNEXIN 1-DERIVED PEPTIDE AC2-26: REDUCTION OF ALLERGIC INFLAMMATION IN THE RAT. 1Bonavita, A. G. C.; 1Melo, C. B.; 2Diaz, B. L.; 1Silva, P. M. R.; 1Carvalho, V. F.**; 3José, P. J.; 4Flower, R. J.; 4Perretti, M., 1Martins M. A.; 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Biologia Celular INCa; 3Biomedical Sciences, Imperial College School of Medicine; 4Biochemical Pharmacology University of London Objetivo: Previous investigations have provided evidence that the N-terminal peptide of annexin 1 (peptide Ac2-26) has the capacity of reproducing the antiinflammatory actions of the full-length protein in many systems. In the current study, we report the effectiveness of the peptide Ac2-26 as an anti-allergic tool in a model of rat pleurisy, and provide indication for some of the mechanisms involved. Methods and Results:

In rats inflamed by injection of ovalbumin into the pleural cavity 14 days post-sensitization, peptide Ac2-26 (50-200 µg/cavity) inhibited mast cell desgranulation, plasma protein leakage, and the accumulation of both neutrophils and eosinophils. Treatment with either peptide Ac2-26 (200 µg/cavity) or dexamethasone (1 mg/kg, i.p.) inhibited ovalbumin-induced eotaxin release in the pleural effluents (545.1±162.6 to 18.2±18.2 and 5.0±5.0 fmol/cavity, respectively). In vitro, peptide Ac2-26 inhibited ovalbumin-evoked histamine release (62%) from subcutaneous tissue fragments obtained from sensitized rats (33-66 µM) and IL-13-evoked eotaxin generation (52%) from cultured rat mesothelial cells (16-33 µM) but not eosinophil chemotaxis evoked by either eotaxin or PAF. Conclusões: This work demonstrates that the annexin 1 mimetic peptide Ac2-26 prevents allergen-evoked eosinophilic inflammatory response in rats. Combined analysis of the in vivo and in vitro experiments here presented suggests that the blockade of secretion of pivotal mediators for the allergic response, such as histamine and eotaxin, could be responsible for the inhibitory actions displayed by peptide Ac2-26.

36.052 ATIVIDADE ANTINOCICEPTIVA DO EXTRATO AQUOSO DA FIBRA DE COCOS NUCIFERA L (PALMAE). 1Rinaldi Neto, S.; 1Alviano, D. S.*; 2Antoniolli, A. R.; 1Alviano, C. S.; 1Matheus, M. E.*; 1Melo, P. A.; 1Fernandes, P. D.; 1Farmacologia UFRJ; 2Farmacologia UFS Objetivo: O cocos nucifera é amplamente distribuído por toda costa nordeste do Brasil, e a população dessa região o utiliza como tratamento para alguns males, inclusive como analgésico. O extrato aquoso de sua fibra é composto principalmente por Catequinas, Epicatequinas e Taninos condensados. Esta classe de moléculas está associada a atividades analgésica e antiinflamatória. O objetivo deste trabalho é a comprovação da atividade antinociceptiva e antiinflamatória do extrato aquoso (EA) da fibra de Cocos nucifera L (palmae). Métodos e Resultados: Camundongos Swiss 44, machos, 18-26g (n=8), receberam, por via oral 50 a 300mg/kg do EA. Os resultados nos diversos modelos foram: contorção abdominal: Controle = 75,8+5,3; 50 mg/kg = 58.3+ 7,7; 100 mg/kg = 50.6+3.3; 150 mg/kg = 40.6+6.4; 200 mg/kg = 57.5+4.9. Teste da retirada da cauda: 50 mg/kg = 0.9+0.4 seg(33.8%*); 100 mg/kg = 1.3+0.4 seg(58.9%*); 150 mg/kg = 1.6+0.3 seg(75.9%*); 1.4+0.3 seg(66.47%*). Teste da placa quente: 100 mg/kg = 15.4+5.9 seg(13.5%*); 150 mg/kg = 15.2+4.9 seg(26.6%*); 200 mg/kg = 14.2+3.5 seg(27.3%*); 300 mg/kg = 11.8+1.4 seg (45.8%*). Teste de formalina: controle/fase1=53.1+7.4 seg, controle/fase 2=261,6+23,4 seg; 50 mg/kg, F1=39,0+6.5 seg. F2=193,7+19.1 seg; 100 mg/kg, F1=33.1+8.2 seg. F2=180,0+17,9; 150 mg/kg, F1=49,2+8.2 seg F2=169.1+26,6 seg; 200 mg/kg, F1=24.3+6.2. F2=159.7+19,4 seg. *p < 0,05 (ANOVA seguido de Bonferroni). Conclusões:

Os efeitos observados em nossos estudos sugerem que o extrato aquoso da fibra de cocos nucifera L (Palmae), possui significativa atividade antinociceptiva periférica e espinhal e pequeno efeito supraespinhal, Além disso, também demonstrou efeito antiinflamatório. 36.053 MEDIATORS INVOLVED IN THE FEVER INDUCED BY RANTES. 1Machado, R. R.; 1Soares, D. M.**; 1Souza, G. E. P.; 2Proudfoot, A.; 1Física e Química FCFRP-USP; 2Biologia Serono Pharmaceutical Research Institute Objective:

RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted), a CC chemokine acts on CCR1, CCR3, and CCR5 receptors and promotes a true fever when injected into the anterior hypothalamus preoptic area (AH/POA). This study investigated the effects of indomethacin (INDO), celecoxib (CELEC), dexamethasone (DEXA) and IL-1ra on fever induced by this chemokine. Métodos e Resultados: RANTES (25 pg/rat) was injected into the AH/POA in male Wistar rats (200 g b.w.). Control animals received vehicle only. Changes in body temperature were measured for up to 6 h by radio-telemetry system. INDO (2 and 8 mg/kg, i.p.), CELEC (5 mg/kg, v.o.) were administered 30 min before RANTES. DEXA (0,5 mg/kg, s.c.) was administered 1 hour before RANTES. IL-1ra (20 µg/rat, AH/POA) was administered 15 min before RANTES or IL-1β (300 pg/rat, AH/POA). INDO (2 mg/kg) reduced the last phase by 62% (from 3.5 to 6 h; RANTES: 1.51 ± 0.08; INDO + RANTES: 0.57 ± 0.07; 5,0 h, n=6). INDO (8 mg/kg) (RANTES: 1.76 ± 0.14; INDO + RANTES: 0.24 ± 0.18; 2,5 h, n=7), CELEC (RANTES: 1.46 ± 0.14; CELEC + RANTES: 0.06 ± 0.03; 2,5 h, n=6) and DEXA (RANTES: 1.46 ± 0.14; DEXA + RANTES: 0.51 ± 0.08; 2,5 h, n=7) reduced by 86% 96%, and 65%, respectively, the whole febrile response to RANTES. IL-1ra reduced by 60% (IL-1β: 1.60 ± 0.17; IL-1ra + IL-1β: 0.64 ± 0.14; 2,0 h, n=6) the febrile response induced by IL-1β but did not change that induced by RANTES (RANTES: 1.32 ± 0.10; IL-1ra + RANTES: 1.32 ± 0.17; 2,0 h, n=6). Conclusions

Fever induced by RANTES does not depend on IL-1β but on prostaglandins, synthesized via COX-2. However, the involvement of other mediators can not be discarded. Besides to block PGs

synthesis indomethacin, 8 mg/kg, induces central release of arginine vasopressin (AVP)1 an endogenous antipyretic, blocking the fever to RANTES. 1) Souza, GEP et al., Inflamm. Res. 51:24, 2002 36.054 AVALIAÇÃO FARMACOLÓGICA DO NOVO CANDIDATO A PROTÓTIPO DE FÁRMACOS ANTIINFLAMATÓRIOS LASSBIO 973. Schulz, D. F.; Faoro, D.**; Miranda, A. L. P.; Barreiro, E.J.; Fraga, C. A. M. Lassbio FF-UFRJ Objetivo: Os AINEs têm suas ações analgésicas e antiinflamatórias relacionadas principalmente com a inibição do metabolismo do ácido araquidônico (AA) pela via da COX (Trends in Molec. Med. 8:390, 2002). Inserido numa linha de pesquisa que visa o planejamento racional e síntese de novos protótipos bioativos capazes de atuar na cascata do AA, o presente trabalho teve por objetivo a avaliação das atividades analgésica e antiinflamatória de uma nova série benzofenona planejada e sintetizada como inibidor seletivo da COX-2 (Cur. Méd. Chem. 9:849, 2002). Métodos e Resultados: As atividades analgésica e antiinflamatória foram determinadas por ensaios de contorções abdominais induzidas por ácido acético 0,1N (camundongos Suíços de ambos os sexos 18-26g) e edema de pata induzido por carragenina 1% (1000 µg/pata, ratos Wistar de ambos os sexos 120-165g) respectivamente. Foram avaliados 8 compostos, administrados por via oral na dose de 100 µmols/Kg dentre eles 5 compostos apresentaram significativa atividade analgésica, contudo apenas o derivado LASSBio 973 foi capaz de inibir significativamente o edema de pata (tabela).

Resultados obtidos dentre os compostos ativos. *p < 0,05 Teste t de Student; ns = não significativo; n = 8-10

Compostos Ensaio de Analgesia %

de inibição Ensaio de Inflamação %

de inibição

LASSBio 944 24,02* ns

LASSBio 971 45,9* ns

LASSBio 972 ns ns

LASSBio 973 37,25* 27,4*

LASSBio 974 ns ns

LASSBio 975 ns ns

LASSBio 976 40,6* ns

LASSBio 977 26,2* ns

Celecoxib 45,2* 35,8*

Conclusões: A maioria dos compostos apresentou pequena atividade analgésica, entretanto apenas LASSBio 973 apresentou significativa atividade analgésica e antiinflamatória. Consiste perspectivas deste trabalho avaliar os compostos ativos em ensaio de seletividade COX-1/COX-2 e a determinação de sua potência analgésica e antiinflamatória, além da otimização de LASSBio 973 visando aumentar suas atividades antiinflamatória e analgésica. 36.055

BENEFICIAL EFFECTS OF EXERCISE TRAINING ON INFLAMMATORY RESPONSES FOLLOWING LUNG ISCHEMIA-REPERFUSION IN RATS. 1Kalaf, R.**; 2Ferreira, T.*; 2Camargo, E. A.; 1Brandão, S. L. B.; 3Moraes C **; 3Zanesco, A.; 2Landucci, E. C. T.; 2Antunes, E. 1Cirurgia UNICAMP; 2Farmacologia UNICAMP; 3Educação Física UNESP Rio Claro Objectives:

Lung ischemia-reperfusion injury plays a central role in pulmonary dysfunction after cardiac surgery, particularly in thoracic organ transplantation. A number of cardiovascular disorders and inflammatory conditions can be reduced or prevented by regular physical exercise. The purpose of this study was to evaluate the effects of exercise training on the inflammatory response after the lung ischemia-reperfusion in rats. Métodos e Resultados: Anesthetized Wistar male rats (360-410 g) were mechanically ventilated (60% O2) and submitted for 90 min of left lung ischemia followed by 120 min of reperfusion. Three groups were performed, namely sham, sedentary and trained (n=6-8 rats). The trained group was submitted to run training for 60 min, 5 days a week, over a period of 8 weeks. The lung myeloperoxidase (MPO) activity, lung plasma protein extravasation and levels of serum IL-1β have been measured. The sedentary group submitted to I/R showed an increased lung MPO activity and plasma extravasation (29.2±1.6 UMPO/mg and 421±23 L plasma, respectively) compared to sham groups (13.4±1.9 UMPO/mg and 161±12L plasma, respectively). The increase in lung MPO was largely reduced in the trained group (20.5±2.7 UMPO/mg lung tissue; p<0.05), without significantly affecting the increased plasma protein extravasation (351±25L plasma). Serum IL-1 levels in the trained group were also significantly lower compared with the sedentary group (29.6±2.0 and 38.2±2.0pg/mL; respectively). Conclusions:

Our data indicate a diminished inflammatory response in the trained animals, suggesting that physical exercise acts to reduce the inflammatory conditions following the ischemia-reperfusion in rats. 36.056 NITRATION OF A-ACTININ 1 CONTRIBUTES TO INHIBITION OF PLATELET ADHESION BY NITRIC OXIDE (NO). 1Cardoso, M. H. M; 1Marcondes, S.; 1Lila, S.; 2de Nucci, G.; 1Turko, I. V.; 1Murad, F.; 1Antunes, E. 1Farmacologia UNICAMP; 2Farmacologia, USP Objetivo: The inhibition of platelet adhesion by NO is essential in preventing excessive aggregation and thrombus formation. Besides cGMP-dependent mechanisms, recent works have proposed that cGMP-independent mechanisms may mediate the NO-induced anti-platelet activities. In the present study, we have investigated the cGMP-independent mechanisms mediating the inhibition of platelet adhesion by the NO donor SNP. Métodos e Resultados: Human washed platelet adhesion was evaluated using fibrinogen-coated 96-well microtiter plates. Platelets (unstimulated or activated with thrombin) were incubated in absence or presence of the polyphenolic antioxidant peroxynitrite scavenger epigalocatechin gallate (ECG). Adherent platelets were incubated with the acid phosphatase substrate (p-nitrophenyl phosphate disodium) for 1h. The plate was read by a microplate reader set at 405 nm. Nitrated proteins were detected by immunobloting. Purification and identification of nitrated bands were done by Western bloting analysis and mass spectrometry respectively. SNP (0.1–1.0 mM) significantly inhibited platelet adhesion to fibrinogen-coated plates in non-stimulated and thrombin (50 mU/ml)-stimulated platelets (15 and 60 min incubation). At 15 min, the compound ECG (5 mM) did not affect the inhibitory effect of SNP at 0.1mM, but reduced by 50% the inhibition at 1 mM SNP. At 60 min, ECG did not significantly affect the inhibition of platelet adhesion by SNP. Immunobloting indicated the presence of a nitrated protein in SNP (1 mM)-treated platelets at 15 min, that was identified as a-actinin 1. At 60 min, no tyrosin-nitrated-protein was detected. Conclusions:

cGMP-independent mechanisms contribute to inhibition of platelet adhesion by SNP, at high concentrations and short-time incubation, and this may involve -actinin 1 nitration.

36.057 TADALAFIL PROMOVE ANALGESIA E INIBE O INFLUXO CELULAR NA ARTRITE POR ZYMOSAN EM RATOS. 1Silva Jr., F. S.; 2Bezerra, M. M.; 2Castro, R.**; 3Amarante, M. P. F.*; 3Rocha, F. A. C. 1Reumatologia FMUSP; 2Fisiologia e Farmacologia UFC; 3Medicina Clínica UFC Objetivo:

Avaliamos o efeito do tadalafil sobre a incapacitação articular e o influxo celular articular no modelo de artrite induzida por zymosan (Zy). Métodos e Resultados:

Quatro grupos de seis ratos Wistar machos (180-200 g) receberam Zy intra-articular no joelho direito (1mg/animal), e foram submetidos ao teste de incapacitação articular em que se mede o tempo que o animal mantém suspensa a pata ao ser colocado para andar em um cilindro (tempo de suspensão da pata –TSP). O TSP, por 1 min, foi medido 1 h após o Zy (T1) e a cada hora, até a 5a. hora (T2,T3,T4,T5). Três dos grupos (GT) receberam 0,02; 0,25 ou 0,5 mg/kg de tadalafil i.p. 1 hora após o Zy, e o outro grupo recebeu salina i.p. (GNT). Após T5, os animais foram sacrificados e foi colhido o lavado articular para avaliação da celularidade total. Os resultados representam média±e.p.m. do pico do TSP, entre 3 e 4 h após Zy, e do número total de células. O tadalafil na dose de 0,5 mg/kg reduziu em 49% o TSP (GNT= 33,3 ±2,14 s; GT= 16,95±3,93) (P<0.05), e em 67% o influxo celular (GNT= 18 520± 3295 céls/mm3; GT= 6 000± 933 céls/mm3) (P<0,05). Conclusões: Essa é a primeira descrição na literatura mundial que o tadalafil tem ação anti-inflamatória, promovendo analgesia e inibição da migração de células inflamatórias em um modelo de artrite, sugerindo um papel para a PDE-5 nesses fenômenos. 36.058 ENHANCED SERUM GLUCOCORTICOID LEVELS MEDIATE THE DEPLETION IN SPLEEN LYMPHOCYTES IN DIABETIC RATS. 1Carvalho, V. F.; 1Pessoa, A.*; 3 Balduino, A.**; 1Oliveira, M. S. S.*; 1Barreto, E. O.**; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R. 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Histologia e Embriologia UFRJ Objective:

We reported that diabetic rats showed refractoriness to antigen provocation in association with reduction in mast cell numbers and serum IgE levels as well as hypercorticolism. Here we investigated alterations in the lymphocyte population under diabetic conditions. Methods and Results:

Diabetes was induced by i.v. alloxan injection into male Wistar rats and the analyses were performed 21 days later. Lymphocyte subpopulations were distinguished by means of flow cytometry and viability by Alamar Blue dye. Expression of annexin-V and of proapoptotic Bcl-2 family member Bax was evaluated by Western blotting technique as an indication of cell apoptosis. Diabetic rats, as compared to non-diabetic animals, showed a significant reduction in the lymphocyte numbers in different body compartments including blood (from 5.57 ± 0.54 cell/mm3 to 3.14 ± 0.32 cell/mm3), mesenteric lymphonodes (from 1.16 ± 0.04 x 106 cells/ml to 0.92 ± 0.06 x 106

cells/ml) and spleen (from 36.08 ± 5.46 x 106 cell/ml to 21.25 ± 3.13 x 106 cells/ml). In the latter, we detected a reduction in the number of CD3+CD4+, CD3+CD8+ as well as of CD45R+. After stimulation with concanavalin A, splenocytes from diabetic rats exhibited lower survival rate as compared to that of normal splenocytes. Spleen lymphocytes from diabetic rats also presented an increase in apoptotic rate as attested by higher expression of both annexin-V and Bax. The reduction in spleen lymphocyte population was no longer significantly different from non-diabetic rats following treatment with the glucocorticoid receptor antagonist RU 486. Conclusões: Conclusion: These findings indicate that alloxan diabetes causes suppression of lymphocyte population in different body compartments, a phenomenon which seems to be dependent on increased levels of endogenous glucocorticoids as well as to cell apoptosis. 36.059 NEUTROPHIL MIGRATION FAILURE AND CARDIOVASCULAR DYSFUNCTION IN SEVERE SEPSIS INDUCED BY CLP IN MICE: PEROXYNITRITE ROLE. 1Torres-Dueñas, D.; 2Celis, M. R.**;

1Alves-Filho, J. C.**; 1Spiller, F.**; 1Freitas A.**; 1Dal Secco D **; 2Rossi M. A; 1Cunha, F. Q.; 1Ferreira, S. H.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2Patologia FMRP-USP Objetivo: To determine the role of peroxynitrite (ONOO-) in the neutrophil migration failure (NMF) and in the cardiovascular dysfunction (CVD) in severe sepsis. Métodos e Resultados:

Sepsis through CLP (Moderate septic injury, MSI and Severe septic injury, SSI) was induced in males mice C57BL/6 weighing 18 - 22 g. The uric acid UA was used with peroxynitrite inhibitor (MSI+UA and SSI+UA groups). Neutrophil migration, bacterial count, nitrate (NO3) concentration, MPO activity assay and concentrations of TNF-α, MIP-1α, and IL-1β were assessed 6 h after CLP. Leukocytes were assessed 2 h after CLP by intravital microscopy. Mean arterial pressure (MAP) and pressor responses (PR) to phenylephrine were measured (6, 12, 24 and 6 h respectively) after CLP. The survival of the MSI+UA and SSI+UA groups was significantly higher than MSI and SSI groups (50 % Vs 69 % and 10 % Vs 42 % respectively). The treatment of the SSI with UA prevented NMF to infectious focus (4,468 ± 0,6215416 Vs 13,908 ± 1,633482), diminished significantly the bacteria amount in blood (3.723 ± 0.1279 Vs 3.096 ± 0.1540) and peritoneal cavity (6.814 ± 0.1167 Vs 6.196 ± 0.2199), reduced significantly the TNF-α (427.9 ± 116.5 Vs 48.19 ± 3.406), IL-1β (793.7 ± 170.4 Vs 266.6 ± 38.17) and MIP-1α (217.5 ± 22.92 Vs 46.96 ± 11.45) cytokines level in sera and decreased significantly MPO activity in the lung 102.8 ± 15.41 N=5 (102.8 ± 15.41 Vs 42.97 ± 9.104) , prevented to arterial hypotension 6 h after SSI (54,288 ± 3,90217 Vs 91,64201 ± 3,819062) and 12 h after SSI (47,440 ± 5,250483 Vs 89,730 ± 8,023896) and improved significantly the PR (30.79 ± 2.453 Vs 44.40 ± 3.750). The uric acid treatments did not affect the nitric oxide production. Conclusões: The ONOO- is implicated in the NMF and CVD during the severe sepsis and septic shock. 36.060 NITRIC OXIDE INHIBITS NEUTROPHIL MIGRATION BY A MECHANISM DEPENDENT OF ICAM-1/CD54. 1Dal Secco, D; 2Moreira, A. P.**; 1Ferreira, S. H.; 1Cunha, F. Q. 1Farmacologia FMRP-USP; 2Bioquímica e Imunologia USP Objetivo: The participation of intercellular adhesion molecule type 1 (ICAM-1/CD54) in the inhibitory effect of nitric oxide (NO) on neutrophil (N∅) migration during an inflammatory process was investigated. Métodos e Resultados: Adult C57BL-6 (wild type-WT), iNOS deficient (iNOS-/-) or ICAM-1 deficient (ICAM-1-/-) mice weighing 18-20g (N=5) were used in this study. It was observed that the N∅ migration induced by i.p. administration of carrageenan (Cg; 500µg/cav), LPS (100ng/cav) or fMLP (25nmol/cav) in ICAM-1-/- mice (PBS: 0.1±0.02, Cg: 4.6±0.7, LPS: 3.2±0.2, fMLP: 2.7±0.2 x106 N∅/cav) is unpredictable, similar to that observed in WT mice (PBS: 0.2±0.01, Cg: 4.0±0.7, LPS: 3.0±0.4, fMLP: 2.5±0.3 x106 N∅/cav). The pretreatment (s.c., 30 min before) of WT mice with 50mg/kg of NO synthase (NOS) inhibitors, nitro-L-arginine (nitro) or aminoguanidine (amino), enhanced the N∅ migration induced by Cg (nitro: 7.1±1.0, amino: 7.3±1.0 x106 N∅/cav); LPS (nitro: 6.4±0.9, amino: 5.5±0.8x106 N∅/cav) or fMLP (nitro: 6.1±1.6, amino: 5.9±0.6 x106 N∅/cav). However, this result was not observed in ICAM-1-/- mice (Cg; nitro: 5.0±0.2, amino: 5.0±0.4, LPS; nitro: 2.6±0.1, amino: 2.7±0.2, fMLP; nitro: 2.9±1.2, amino: 3.3±0.6 x106 N∅/cav). The N∅ migration was evaluated 6 h after stimuli injection. Likewise, the potentiation of Cg-induced leukocyte adhesion (4 h after) on mesentery venular endothelium by treatment of the animals with NOS inhibitors in WT mice (PBS: 0.1±0.3, Cg: 0.8±0.1, nitro: 2.6±0.6, amino: 2.2±0.4 cells/10µm2) was not observed in ICAM-1-/- mice (Cg: 1.1±0.4, nitro: 0.9±0.1, amino: 0.7±0.2 cells/10µm2). Moreover, pharmacological (nitro and amino) or genetic (iNOS-/- mice) inhibition of NOS enhanced LPS-induced ICAM-1 expression (2 h after) on venular endothelial cells (PBS: 0.4±0.1, LPS: 1.6±0.6, nitro: 4.1±0.5, amino: 5.3±0.9, iNOS-/-: 3.2±0.1 % area/µm2). Conclusões:

These results suggest that, although ICAM-1 does not contribute for N∅ migration during inflammation, it is necessary for the down-modulatory effect of inflammatory released NO on the adhesion and transmigration of neutrophils. 36.061 LPS-INDUCED CXC CHEMOKINE (LIX): THE ROLE OF PAF, TNFA, LTB4 AND MAST CELLS IN NEUTROPHIL MIGRATION LED BY LIX. Vieira, S. M.; Lemos, H. P.**; Ramos, C. D. L.**; Grespan, R.**; Fernandes, K. S.; Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo:

The newly murine CXC chemokine induces potent chemotactic activity to NØ both in vivo and in vitro. LIX share structural homology with the human chemokines ENA-78 and GCP-2. Thus, we investigate the mechanisms involved in the LIX-induced NØ migration to murine peritoneal cavities. Métodos e Resultados:

In this study was used Balb/c mice of both gender weighing 18-20g, aging 3 to 4 weeks. It was observed that the i.p. administration of LIX in Balb/c mice induces dose and time-dependent NØ migration to peritoneal cavities, which peaked in 30 ng/cavity at 4ª h (3,421±0,319). Some mice were pretreated or not with MK886 (5-LO inhibitor; vo; 1 mg/kg), BN50730 (PAF antagonist; sc; 10 mg/Kg), thalidomide (TNF-α synthesis inhibitor; sc; 50 mg/kg), dexamethasone (glucocorticoid; sc; 0,5 mg/kg). The pretreatment of the mice with MK886 (0,620±0,189), thalidomide (0,268±0,061), BN50730 (0,283±0,190) or dexamethasone (0,029±0,019) inhibited LIX-induced NØ migration. The involvement of TNF-α, PAF and LTB4 was confirmed by mice pretreatment with antibody anti-TNF-⟨ (2,331±0,497) or just LIX-treatment in PAF-/- (1,016±0,391) and 5-LO-/- (1,432±0,385) mice, respectively. LIX-induced NØ migration was increased by residential macrophages in mice that was pretreated with tioglicolate 3% (4,937±0,989). LIX-induced NØ migration was seem to be dependent to residential mast cells, since that LIX was not able to induce NØ migration into peritoneal cavities depleted from mast cell with distillated water or 48/80 treatment (0,300±0,126). The results were expressed as means ± SEM and the statistics analysis were performed by analysis of variance and then by the Bonferroni test. Conclusões:

The results suggest that LIX induces NØ recruitment dependently of TNFα, LTB4 and PAF release by resident mast cells. Futurely, the knowing of mechanisms involved in the neutrophil activation and recruitment can be potential therapeutic interest to development of specific antagonists of chemokines to use in several diseases, where neutrophils have a key role, such as arthritis, inflammatory bowel diseases and psoriases. 36.062 ROLE OF SUBSTANCE P AND CALCITONIN-GENE RELATED PEPTIDE IN THE HYPERALGESIC AND EDEMATOGENIC RESPONSES INDUCED BY A FORMALIN-DERIVED PERITONEAL FLUID INJECTED IN RAT PAWS. Santos, J. M. M.; Menezes, G. B.*; Francischi, J. N. Farmacologia, UFMG Objetivo: Formalin injection into rats induces a characteristic neurogenic inflammation. Peritoneal lavage fluid supernatant from formalin injected animals induces hyperalgesic and edematogenic responses in recipient rat paws. We aimed to study whether substance P and calcitonin gene-related peptide (CGRP) would contribute to these responses. Métodos e Resultados: Four hours following 1.25%- formalin ip injection Holtzman rats (150g) were killed and 3 ml-peritoneal lavage supernatant (PLF) collected for 0.1 ml intraplantar (i.pl.) injection in recipient animals. SR 140333 (NK1 antagonist) were injected 15min prior PLF-injection (intramuscular route (IM): 1 mgKg-1/100 µl/100 g). CGRP8-37 (CGRP antagonist) i.pl. injection (10 µg/50 µl/paw) were performed 30 min prior PLF-injection. Hyperalgesia (g) and paw oedema (ml) were assesssed at 0, ¼, ½, 1, 2, 3, 4 and 6 h following PLF intraplantar injections. Control animals (C) received drug vehicle prior PLF by the same conditons (route/time/volume) of drug-treated animals. SR 140333 treatment reduced significantly the hyperalgesia presented 3 hours following PLF-injection (SR: -8 ± 3; C: -58 ± 5, g) and edema formation 4 hours following PLF injection (SR: 0.02 ± 0.01; C: 0.07 ± 0.01, ml). CGRP8-37 reduced partially the hyperalgesia-PLF induced at 3rd hour (CGRP8-37: -26 ± 8;

C: -52 ± 8, g) and did not reduce paw edema formation at the time-points studied (CGRP8-37: 0.07 ± 0.01; C: 0,09 ± 0.02, ml) (n=5; one-way ANOVA, P<0.05). Conclusões: Our data suggested that release of substance P and CGRP contribute to hyperalgesic and edematogenic responses induced by a fluid from formalin-treated rats. 36.063 ICAM-1 LACKING IMPROVES RESISTANCE TO LETHAL EFFECTS OF SEPSIS INDUCED BY CECAL LIGATION AND PUNCTURE (CLP). Moreno, S. E.; Alves-Filho, J. C.**; 3 Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Sepsis is a systemic inflammatory response commonly caused by bacterial infection. Recently we demonstrated that failure of neutrophil (NE) migration towards infectious focus is observed in severe sepsis induced by CLP. However, despite this failure, it is observed a significant sequestration of the NE in remote organs, such as lung and heart, which contribute to the dysfunction of these organs, a frequent complication of sepsis. The accumulation of NE in these organs seems to be mediated by adhesion molecules, which expression is increased by cytokines. The goal of present study was to investigate the role of ICAM-1 on NE migration into the infectious focus and on sequestration of NE in the lung and heart, as well as in survival rate of CLP-induced sepsis in mice. Métodos e Resultados: It was used ICAM-1 knock-out (ICAM-1-/-) and control (ICAM-1+/+) mice. . The ICAM-1-/- mice subjected to sub-lethal (SL)-CLP present NE migration to infectious focus similarly to that observed in ICAM-1+/+. Moreover, the ICAM-1-/- mice submitted to lethal sepsis present failure of NE migration to infectious focus similar to that observed in ICAM-1+/+. However, despite this failure, these mice exhibited efficient bacterial clearance, control of the infection correlates with increased in neutrophil viability and NO production. It was also observed reduced systemic inflammation, determined by reduced cytokines levels and neutrophils sequestration to the organs. L-CLP ICAM-1-/- mice displayed an important reduction in NE sequestration in lung (40%) and heart (95%) compared with ICAM-1+/+. Furthermore, the L-CLP ICAM-1-/- mice exhibiting a higher survival rate (50%) compared with ICAM-1+/+ mice, which presented 100% of mortality. Conclusões: Concluding, these results suggest that ICAM-1 is not important for NE migration to infectious focus, but is essential for NE sequestration in remote organs in severe sepsis and, consequently to development of organ dysfunction syndrome. 36.064 EFEITO DE DIETAS HIPERLIPÍDICAS NA LIBERAÇÃO DE MEDIADORES INFLAMATÓRIOS: ÓXIDO NÍTRICCO (NO), BRADICININA (BK), PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO (H2O2), CALICREÍNA (K), CORTICOSTERONA (CT) E LEPTINA (L). Wohlers, M.**; Xavier, R. A. N.; Oyama, L. M.; Silveira, V. L. F. Fisiologia, UNIFESP Objetivo: Determinar os efeitos de dietas ricas em óleo de peixe ou óleo de soja sobre a liberação de H2O2, NO, BK, K, CT e L após estímulo com carragenina (CA). Métodos e Resultados: Ratos machos Wistar foram alimentados, durante 7 semanas, com dieta padrão normal (grupo C) ou acrescida de 15% de óleo de soja (grupo S) ou 15% de óleo de peixe (grupo P). Os ratos receberam 0,1 mg de CA na pata. Determinamos a liberação: NO (Griess) e BK (HPLC) no exsudato inflamatório, NO e H2O2 (colorimétrico) em macrófagos estimulados com CA, CT (fluorimétrico), K (colorimétrico) e L (radioimunoensaio) plasmáticos (da 1ª à 4ª h após CA). As dietas hiperlipídicas (S e P) diminuíram a liberação: H2O2 (C=21,84±1,91; S=7,61±1,29; P=7,7±0,9) e NO (C=27,51±3,34; S=13,62±1,29; P=20,69±1,87) por macrófagos, BK (C=58,80±3,76; S=24,14±2,87; P=30,68±3,38) e NO (C=2,25±0,68; S=0,77±0,35; P=0,84±0,22) no exsudato e K plasmática (C=0,17±0,01; S=0,1±0,01; P=0,07±0,001). Os níveis de L estavam aumentados nos grupos lipídicos (C=1,97±0,23; S=5,13±0,69; P=7,23±1,19) e os de CT foram similares entre os 3 grupos.

Conclusões: Esses resultados mostram que as dietas ricas em óleo de soja e óleo de peixe promovem similares alterações na liberação dos mediadores do edema de CA e uma associação causal com o efeito antiinflamatório dessas dietas por nós anteriormente observado (Wohlers et al, 2003; Silveira et al, 1995) 36.065 INFLAMMATORY MEDIATORS INVOLVED IN PHOSPHOLIPASE A2 (PLA2)-INDUCED ACUTE PANCREATITIS. 1Camargo, E. A.; 1Ferreira, T*; 2Ribela, M. T. P.; 1de Nucci G; 1Landucci, E. C. T.; 1Antunes, E. 1Farmacologia UNICAMP; 2IPEN-CNEN Objectives:

PLA2 induce acute pancreatitis when injected into the pancreaticobilliary duct of rats. We have investigated the inflammatory mediators involved in PLA2-induced acute pancreatitis. Métodos e Resultados: Acute pancreatitis was induced by the injection of PLA2 from Naja mocambique mocambique venom (300 µg/kg) into the pancreaticobilliary duct of male Wistar rats (220-260g, n=5-8). Treatment with several pharmacological antagonist/inhibitors was performed. Four h later, the pancreatic plasma protein extravasation (PPE), pancreatic and lung myeloperoxidase (MPO) and serum amylase (SAM) were measured. The PLA2 from Naja m mocambique venom induced a marked increase in PPE (65%), pancreatic MPO (309%), lung MPO (34%) and SAM (155%). Pretreatment with the B2 receptor antagonist Hoe 140 (Icatibant, 100 nmol/kg) reduced significantly the PPE (31%), pancreatic MPO (29%), lung MPO (33%) and SAM (37%). Pretreatment with the neurokinin-1 (NK1) receptor antagonist SR140333 (120 nmol/kg) reduced the PPE (19%) and pancreatic MPO (24%), but did not affect the lung MPO and SAM. Treatment with the PAF receptor antagonist PCA4248 (5 mg/kg) decreased significantly the lung MPO (24%), without causing any change in the other parameters. The NO inhibition with the acute treatment with L-NAME (20 mg/kg) reduced significantly the PPE (39%), but rather caused an increase in the pancreatic MPO (94%), whereas the lung MPO and SAM were not significantly changed. Treatment with indomethacin (5mg/kg) or AA861 (lipoxygenase inhibitor, 0.2 mg/kg) did not cause any change in PPE, pancreatic and lung MPO and SAM. Conclusions:

The acute pancreatitis induced by exogenous PLA2 involves the activation of B2, NK1 and PAF receptors, with no involvement of cyclooxygenase and lypoxygenase products. Moreover, NO seems to have a controversial role in this model and further studies are necessary to clarify its role in this inflammatory model. 36.066 PARTICIPAÇÃO DA INTERNALIZAÇÃO DE RECEPTORES CXCR2 NO EFEITO INIBITÓRIO DO ÓXIDO NÍTRICO NA MIGRAÇÃO DE NEUTRÓFILOS NA SEPSE GRAVE. 1Rios-Santos, F.; 1Alves-Filho, J. C.**; 2Souto, F.O*; 1Lotufo, C. M. C; 4Soares, M. B. P.; 4Santos, R. R.; 1Cunha, F. Q. 1Farmacologia FMRP-USP; 2Ciências Biológicas, UESC; 4Imunologia Celular Centro de Pesquisa Gonçalo Muniz Objetivo: Investigar a ocorrência da dessensibilização de CXCR2 em neutrófilos circulantes durante a sepse e o efeito do bloqueio da sintase de óxido nítrico induzida (NOSi) na hiporesponsividade de neutrófilos a quimiocinas CXC-ELR+ na sepse grave. Métodos e Resultados: Animais submetidos a uma sepse grave no modelo de CLP (CLP-L) quando pré-tratados com aminoguanidina (AG, 30 mg/Kg, s.c., 30 minutos antes da cirurgia) ou L-canavanina (CAN, 50 mg/Kg, s.c. 30 minutos antes da cirurgia), não desenvolveram a falência da migração de neutrófilos para cavidade peritoneal. Neutrófilos de animais do grupo CLP-L apresentavam uma média de 19,6 ±2,6% de positividade para CXCR2, enquanto animais sham-operados ou que não apresentam falência da migração de neutrófilos (sepse moderada, CLP-SL) ou apresentavam valores médios de 80,1 ±6,4% e 54,9 ±3,3%, respectivamente. O pré-tratamento de animais submetidos a CLP-L com AG ou CAN preveniu a perda na expressão de CXCR2 (38,67 ±2,0% e 47,6 ±3,1%, respectivamente). A redução na expressão de CXCR2 foi associada a uma hiporesponsividade dos

neutrófilos in situ (microscopia intravital no leito mesenterial). Neutrófilos do grupo CLP-L apresentaram menor rolamento (R, células/min) e adesão (A, células/min) (R=16,6 ±0,9 e A=3,86 ±0,2) ao estímulo local com MIP-2 (20ng/50ul) quando comparados a animais sham-operados (R=25,4 ±0,6 e A=5,7 ±0,2) ou submetidos à CLP-SL (R=28,3 ± 1,5 e A=5,0 ±0,3). A redução no rolamento e adesão dos neutrófilos no grupo CLP-L foi prevenida pelo pré-tratamento dos animais com AG (29,4 ±0,5 e 6,2 ±0,1) ou CAN (28,0 ±0,7 e 5,5 ±0,2). Através de microscopia de varredura confocal, demonstramos ainda que o bloqueio da NOSi reduz a internalização de CXCR2 em neutrófilos de animais do grupo CLP-L e aumenta a mobilização de cálcio intracelular em animais tratados com AG (média de fluorescência máxima , MFM= 7,5 ±0,4) ou CAN (MFM= 9,8 ±0,6) quando comparados a animais do grupo CLP-L sem tratamento (MFM= 3,3 ±0,7). Conclusões: Nossos resultados mostram que a hiporesponsividade de neutrófilos durante a CLP-L à quimiocinas CXC-ELR+ ocorre devido a uma regulação negativa na expressão de CXCR2 pelos neutrófilos circulantes. Além disso, demonstramos que um dos mecanismos da prevenção da falência da migração de neutrófilos para o foco infeccioso pelo bloqueio da NOSi decorre da atenuação da dessensibilização de CXCR2 em neutrófilos durante a sepse grave. 36.067 INFLAMMATORY-MEDIATORS INVOLVED IN THE NEUTROPHIL MIGRATION TO PERITONEAL CAVITY IN MBSA-IMMUNIZED MICE. Grespan, R.; Lemos, H. P.**; Vieira, S. M.**; Cunha, F. Q.

Farmacologia FMRP-USP Objetivo: The aim of this study was to perform an immune model to investigate the molecular and cellular mechanisms involved in peritoneal neutrophil migration after antigenic challenge in mice immunized with mBSA. Métodos e Resultados: Briefly, on day 0 Balb/c mice of both genders, weighing 18-20g, aging 3 to 4 weeks, received one s.c. injection of mBSA (500µg) in 0.1 mL of an emulsion containing PBS and CFA (1:1). The mice received booster injections of mBSA dissolved in IFA on days 7 and 14. Control mice received the same treatment without mBSA. At the 21th day, immunized and control animals were challenged by i.p. injection with mBSA (3, 10, 30 and 100µg/cavity) in 0.2 mL of PBS or PBS alone and the neutrophil migration was determined 4, 6, 12, 24 and 48 hours after. Some groups of immunized mice were treated with MK886 (MK,1mg.kg-1,orally,1h), BN730 (BN,10mg.kg-1,30 min), Cimetidine (Cim,30mg.kg-1,30min), Dexametasone (Dexa,0.5mg.kg-1, s.c.,1h), IL-1Ra (30mg.kg-1,i.v.,15min.), before mBSA challenge. The results were expressed as means±SEM and the statistics analysis were performed by analysis of variance and then by the Bonferroni test. The mBSA challenge induced a dose and time-dependent neutrophil migration in immunized mice when compared with control group, being the optimal dose of 30 µg/cavity, 6 h after challenge. Pretreatment with a corticoid (Dexa: 0,82±0,36) or with an antagonist of PAF receptor (BN: 0,46±0,09) were able to inhibit the neutrophil migration when compared to controls (Sal: 0.26±0.01, mBSA: 2.76±0.40). Nevertheless, the H2 receptors (Cim: 1,50±0,25), COX-1/-2 derivatives (Indo: 1,78±0,28), LTB4 (MK: 2,90±0,54), and IL-1β (IL-1Ra: 2,08±0,53) did not change the migration after antigenic challenge. Conclusões: Our results suggests that PAF plays an important role for neutrophil migration to peritoneal cavity in mBSA immune model. However, other inflamatory mediators will be investigated to elucidate the mechanisms of such recruitment. 36.068 AMBUROSÍDIO A, ISOLADO DE AMBURANA CEARENSIS INIBE A MIGRAÇÃO DE CÉLULAS EM PROCESSOS INFLAMATÓRIOS AGUDO: PAPEL DA MIELOPEROXIDASE. 1Costa, K. C. S.; 1Pereira, F. A.*; 1Amorim, L. S.; 2Canuto, K. M.**; 2Silveira, E. R.; 1Leal, L. K. A. M.; 1Viana, G. S. B. 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Química Orgânica e Inorgânica, UFC Objetivo:

O presente trabalho visa investigar o possível mecanismo de ação antiinflamatória do amburosídio A (AMB), um glucosídio isolado das casas do caule de A. cearensis (Fabaceae), planta tradicionalmente utilizada no tratamento da asma. Métodos e Resultados:

Camundongos Swiss (25-30g) foram tratados com AMB (25 e 50mg/Kg, i.p. ou v.o.), dexametasona (dexa, 5mg/kg, v.o.) ou veículo (Tween 80 a 2%) antes da injeção de carragenina (Cg, 1%, i.p.) ou fMLP (10-4 M, i.p.). Após 5h, os animais foram sacrificados, injetado 3mL de PBS e uma amostra do lavado peritoneal foi utilizada para contagem de leucócitos totais. Para a determinação do efeito do AMB (25, 50 e 100µg/mL) sobre a atividade da mieloperoxidase (MPO), índice da migração celular, foram utilizados leucócitos polimorfonucleares (PMN) humano (107

cels/mL; viabilidade: 91%) estimulados com citocalasina B (1mM) + fMLP (10nM) a 37°C durante 5 min. Após adição de H2O2 e tetrametilbenzidina, a reação foi interrompida com acetato de sódio e a absorbância determinada (620nm). O tratamento oral com AMB (25 e 50mg/kg) reduziu significativamente (p<0,01) a migração de leucócitos induzida por Cg (50 e 57% respectivamente); enquanto, quando administrado por via i.p. nas mesmas doses, causou inibições de 21 e 55% respectivamente. Dexa, droga padrão, inibiu a migração de leucócitos em 67%. Independente da via de administração, o AMB (50mg/kg) inibiu em 36% a migração induzida por fMLP. Além disso, o AMB (25, 50 e 100µg/mL) foi capaz de inibir em 54, 58 e 67% respectivamente a atividade da MPO. Conclusões:

Os resultados sugerem que a ação antiinflamatória do AMB envolve o bloqueio da migração de leucócitos para o foco inflamatório, que está possivelmente relacionado à redução da atividade da enzima MPO. 36.069 ENHANCEMENT OF TNF-ALPHA AND IL-1 PRODUCTION IN ALVEOLAR MACROPHAGES BY C-FIBER DEGENERATION. Souza, I. A.; Camargo, E. A.**; Franco-Penteado, C. F.; de Nucci, G.; Antunes, E. Farmacologia UNICAMP Objetivo: Permanent loss of C-fibers in the rat lungs lead to an exacerbation of neutrophil influx in response to ovalbumin and staphylotoxins (SEA and SEB). In an attempt to further understand the communication of C-fibers and pulmonary cells, we have evaluated the in vitro TNF-α and IL-1 production by alveolar macrophages stimulated with SEA and SEB. Alveolar macrophages were collected from control or capsaicin-treated animals. Métodos e Resultados: Alveolar macrophages (AM) were isolated from brochoalveolar lavage of control and male Wistar rats (250-300g) treated with capsaicin as neonates. AM were ressuspended in culture medium and transferred to tissue culture wells. They were allowed to adhere for 2 h (37o C, 5% CO2) and then incubated for 4 h in the presence of either SEA or SEB (3 µg/ml each). The supernatant was colleted and used to determinate TNF-α and IL-1 concentrations by ELISA. Incubation of AM with either SEB or SEA increased by 30% and 42% the TNF-α production above basal levels, respectively (P<0.05). The basal production of TNF-α in AM from capsaicin-treated rats was largely increased (44%), but no further increases were observed when these cells were stimulated with SEA or SEB. In addition, incubation of AM from control animals with SEB and SEA significantly increased the IL-1 production (28% and 54%, respectively). Such increases were largely potentiated when AM were collected from capsaicin-treated rats (325% and 450% increase, respectively). Conclusões: Our finding that permanent C-fiber degeneration lead to exacerbation of cytokine production, suggest that sensory fibers act to down-regulate cytokine production in vivo. 36.070 EFFECT OF DENERVATION AND LOCAL ANESTHETIC AGENTS ON THE EDEMA INDUCED BY DIEFFENBACHIA PICTA SCHOTT. Lacerda, E. D.; Pereira, N. A.*; Fernandes, F. F. A.*; Pinheiro, D. A.*; Sanches, F. V.*; Tomaz, M. A.*; Fernandes, P. D.; Melo, P. A. Farmacologia Básica e Clínica ICB-UFRJ

Objetivo: We have been studying in mice the cytotoxic effect of Dieffenbachia picta Schott a tropical poisonous and ornamental plant. We examined, the effect of denervation or the local anesthetics agents on edema caused by the crude D. picta juice (DIP et al., 2004). Métodos e Resultados: The paw edema was induced by the intraplantar injection of 50 µl of D.picta juice and were evaluated with a pachymeter for 2 hours. At the 14 or 21 days after denervation the paw edema induced by D.picta juice injection, was reduced either in 66,66% + 2,5 (n=14). The local plasma extravasation was evaluated in response to intradermally injection of 100 µL of D. picta crude juice. Capillary plasma leaked was measured by the accumulation of intravenously injection of Evan’s blue dye (25 mg/kg) to as visual marker. The injection of the mixture of juice with lidocaine (2.5 -10.0%), decrease in a concentration dependent way the plasma extravasation expressed as percent of D.picta effect. Lidocaine preincubation decrease the effect of the plasma extravasation induced by D.picta from 42,93% + 12.33 to 70% + 9,0 (n=8 for each group). Previous treatment (15 min ip ) of the animals with eugenol 50 mg/kg (n=10) or sodium cromoglycate 100 mg/kg (n=8) also reduced significantly the plasma extravasation. On the tongue edema induced by topical application of 100 µLof D.picta juice (See Dip et al., 2004) previous topical application of licocaine (10%) or benzocaine (20%) inhibited by 50%+3,45 or 100% respectively (n=5 for each group). Conclusões: Our results suggests that the angioedema depends on the stimulation of primary sensitive neurons leading to neurogenic plasma protein extravasation due to the release of substance P resulting in the triple inflammatory response. 36.071 PROPRIEDADES ANTINOCICEPTIVAS CENTRAIS DO (+) – CIS – (6-ETIL–TETRAHIDROPIRANO – 2 – YL) – ÁCIDO FÓRMICO. 1 Marinho, B. G.**; Rinaldi Neto, S.; Miranda, L. S. M.*; Leitão, S. G.*; Matheus, M. E.; Vasconcellos, L. A. A.; Fernandes, P. D. Farmacologia UFRJ Objetivo: (+) – CIS – (6 – ETIL – TETRAHIDROPIRANO – 2 – YL) – ÁCIDO FÓRMICO foi sintetizado a partir de substância isolada do extrato em diclorometano das cascas de Vitex cymosa. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antinociceptiva dessa substância e tentar elucidar seu mecanismo de ação. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss 44, machos, 18 a 25 g (n=10) receberam a substância por via oral, nas doses de 1, 30, 50 e 100 mg/kg. Em intervalos de 20 minutos avaliou-se o tempo de permanência da cauda dos animais no banho à 550 C, e calculou-se o percentual de aumento em relação à linha de base. Os resultados foram: Teste de Retirada da Cauda – 1mg/kg-1,65 + 1,02 s (34,88%*); 30mg/kg-1,97 + 0,94 s (79,21%*); 50mg/kg-1,97 + 0,97 s (50,64%*); 100mg/kg-2,74 + 1,23 s (102,59%*). A ação antinociceptiva demonstrada pelo composto foi totalmente revertida pela administração de naloxona (150 mg/kg) – 1,69 + 0,48 s (14,21%). No teste de tolerância, a substância não foi capaz de restabelecer a atividade antinociceptiva da morfina (20 mg/kg) após o desenvolvimento de tolerância (no 8° dia). Já a tolerância ao composto se manifestou no 5° dia. Conclusões:

Pode-se observar com estes resultados que o composto demonstrou possuir atividade antinociceptiva central espinhal significante, com ação sobre receptores opióides (foi revertido pela naloxona e apresentou tolerância cruzada à morfina). E desenvolveu tolerância em período de tempo inferior ao da morfina (5 dias). 36.072 INVOLVEMENT OF SERUM FACTOR(S) EXPRESSED IN SEVERE SEPSIS ON FAILURE OF NEUTROPHIL MIGRATION TOWARD INFLAMMATORY FOCUS. 1Spiller, F.; 1Alves-Filho, J. C.**; 2Mestriner, F.L.A.C.**; 1Freitas, A.**; 1Cunha, F. Q.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2Clínica Médica FMRP-USP Objetivo:

We have observed failure of neutrophil migration to the infectious focus in experimental severe sepsis. This phenomenon was accompanied by an increased number of bacteria in peritoneal fluid and blood and by a high mortality rate. In the present study we investigated the participation of expressed factors or bacterial products in serum from septic mice on neutrophil migration toward inflammatory focus. Métodos e Resultados: Male C57Bl/6, C3H/HePas (TLR4 +/+), C3H/HeJ (TLR4 -/-), TLR2 -/- mice weighing 18-20g were used (n=5). Thirty minutes prior challenge with carrageenan (Cg, 500µg/cavity; i.p.), mice were treated i.v. with saline or serum from normal, sham or septic mice. The septic serum was obtained from C57Bl/6 mice 2 h after lethal cecal ligation and puncture (CLP). Six hours after carrageenan administration, the animals were sacrificed and their peritoneal cavities were washed for counts the number of neutrophils. Administration of septic serum resulted in reduction of neutrophil migration to inflammatory site as compared to saline or sham group after challenge with Cg (48.6% and 41.8% respectively). Septic serum filtered by a 0.22-µm-pore-size filter also decreased neutrophil migration to inflammatory site (40.9% reduction). Moreover, the septic serum induced reduction of neutrophil migration in TLR4 -/- and TLR2 -/- mice (50.3% and 76.5% respectively). Conclusões: Intravenous administration of serum from septic mice resulted in reduction of neutrophil migration toward inflammatory site after challenge with Cg. This effect is not dependent to bacteria or their products, since the pretreatment with filtered septic serum of wide type mice or TLR4-/- or TLR2-/- mice also displayed reduction of neutrophil migration. In summary, our results suggested that the failure of neutrophil recruitment toward inflammatory focus is due to expression of some factor(s) present in serum after lethal CLP. 36.073 CARACTERIZAÇÃO DO(S) COMPONENTE(S) ENVOLVIDOS NA FALÊNCIA DA MIGRAÇÃO DE NEUTRÓFILOS PARA O FOCO INFLAMATÓRIO EM SORO DE PACIENTES SÉPTICOS. 1Mestriner, F. L. A. C.; 2Spiller, F.**; 3Laure, H. J.; 4Basile Filho, A.; 2Cunha, F. Q.; 1Greene, L. J. 1Clínica Médica FMRP-USP; 2Farmacologia FMRP-USP; 3Hemocentro USP; 4Cirurgia e Anatomia, USP Objetivo: Em modelos animais de sepse letal, ocorre falência da migração dos neutrófilos (N∅) para o foco infeccioso que é acompanhada pelo aumento no número de bactérias no fluído peritoneal e no sangue. Além disso, pacientes com sepse severa possuem uma redução na função quimiotática dos N∅, in vitro. O Objetivo deste trabalho é caracterizar o(s) fator(es) envolvido(s) na falência da migração dos N∅ para o foco inflamatório, em soro de pacientes sépticos. Métodos e Resultados: Foram utilizadas amostras de soro de pacientes sépticos admitidos no Centro de Terapia Intensiva do HCFMRP-USP. Para a purificação do soro, foram utilizadas cromatografia de afinidade em resina Blue-Sepharose e filtração em RP-HPLC. A pureza, peso molecular aparente e ponto Isoelétrico foram determinados por SDS-PAGE e focalização Isoelétrica. A capacidade das frações purificadas do soro em inibir a falência de migração dos N∅ para a cavidade peritoneal, foram testadas em ratos Wistar machos com peso entre 200 e 250 g, administrando-se carragenina i.p. (100µg/cavidade) como estímulo inflamatório. O pré-tratamento i.v. (1 h) dos animais com a fração não ligante à coluna Blue-Sepharose, foi capaz de inibir significativamente (67% de redução) a migração de N∅. A cromatografia em RP-HPLC demonstrou a existência de efluente de pico com efeito similar à fração não ligante da resina Blue-Sepharose (58% de inibição). O efluente de pico do RP-HPLC, com atividade de inibir a migração dos N∅, apresentou 3 bandas de peso molecular entre 14 -97 Kd e revelou caráter ácido das proteínas. Conclusões: O(s) fator(s) sérico(s) expresso(s) em paciente com sepse, envolvido(s) na falência da migração dos N∅ para o foco inflamatório, é (são) proteína(s) de caráter ácido com peso molecular entre 14 e 97 Kd. 36.074

EFFECT OF HYDROGEN SULFIDE ON ASPIRIN-INDUCED LEUKOCYTE ADHESION. 1Zanardo, R. C. O.; 2Fiorucci, S.; 1Wallace, J. L.; 1Pharmacology and Therapeutics University of Calgary Canada; 2Gastroenterologia Universidade de Perugia Itália Objetivo: Hydrogen sulfide is a naturally occurring gas with potent vasodilator activity and its effects on inflammation have not yet been shown. The aim of this study was to investigate the effect of hydrogen sulfide on aspirin-induced leukocyte adhesion in vivo. Métodos e Resultados: Male Wistar rats were anesthetized with sodium pentobarbital (60 mg/kg, ip) and the mesentery was prepared for visualization by an intravital microscope. Leukocyte adhesion was evaluated in postcapillary venules in a 100 µm venule length and were considered adherent if they remained stationary for > 30 s. The recordings of the experiment started 5 min prior to aspirin administration (baseline) and were followed until 60 min after aspirin treatment. Aspirin (50 mg/kg, po) induced a time-dependent increase in leukocyte adhesion (baseline = 1.8±0.4; 30 min = 5.1±0.3; 60 min = 7.1±0.4) which was completely abolished by Na2S (50 and 100 µmol/kg, po) given 30 min prior to aspirin (baseline = 1.8±0.5; 30 min = 2.5±0.7; 60 min = 1.7±0.5 and baseline = 2.2±0.2; 30 min = 2.0±0.4; 60 min = 2.1± 0.6, respectively). In addition, treatment of rats with glibenclamide (10 mg/kg, ip), a KATP channel blocker, 1h prior to Na2S reversed the protective effects of hydrogen sulfide on aspirin-induced leukocyte adhesion (baseline = 2.0±0.3; 30 min = 6.0±0.7; 60 min = 6.8±1.4). Glibenclamide alone did not induce leukocyte adhesion in mesenteric venules. Conclusões: Hydrogen sulfide potentially inhibits aspirin-induced leukocyte adhesion, likely via actions on KATP channels. 36.075 DETERMINAÇÃO DA POTÊNCIA ANALGÉSICA E DO PERFIL ANTITROMBÓTICO DO DERIVADO N-ACILIDRAZÔNICO ANÁLOGO AO AAS, LASSBIO 917. Araújo, R. M.*; Torreão, C. L. D.*; Lima, L. M.; Barreiro, E. J.; Miranda, A. L. P. Fármacos LASSBIO, UFRJ Objetivo: O perfil analgésico e antinflamatório de uma série de compostos N-acilidrazônicos (NAH) análogos ao ácido acetil salicílico (AAS) foi descrito anteriormente (Araújo et al., SBFTE 2004). Estes compostos também foram capazes de inibir em 100% a agregação plaquetária induzida por AA. Dando continuidade aos estudos, o objetivo deste trabalho foi a determinação da potência analgésica e do perfil antitrombótico de alguns desses compostos, considerando o perfil aspirina-like apresentado pela série, isto é, mais analgésico que antinflamatório. Métodos e Resultados: A potência analgésica foi avaliada no ensaio de contorções abdominais induzidas por ácido acético 0,1N em camundongos. O perfil antitrombótico foi avaliado através da medida do tempo de sangramento realizado por uma incisão de aproximadamente 5 mm na cauda dos camundongos previamente anestesiados com pentobarbital (25 mg/kg; i.p.). Em intervalos de 15s encosta-se papel de filtro, 2 vezes no local da lesão, até que não haja sinal de sangramento no papel. Os compostos foram administrados por via oral. O composto LASSBio 917 apresentou uma IC50 de 0,7 mol/kg. O tempo de sangramento foi aumentado em 80,2%* e 163,7%* com a administração de LASSBio 917 e AAS na dose de 100 mol/kg, respectivamente (* p<0,05; n=15-20). Conclusões: Os resultados obtidos demonstram que o composto LASSBio 917 (IC50 = 0,7 µmol/kg) é aproximadamente 250 vezes mais analgésico que o ácido acetil salicílico (IC50 = 175,4 µmol/kg), além de não apresentar efeito gastrotóxico como observado para o AAS. A importante atividade antiagregante plaquetária associada à capacidade de aumentar o tempo de sangramento, observadas para LASSBio 917, sugerem um importante perfil antitrombótico. O conjunto de resultados sugere uma possível ação sobre o metabolismo do AA e apontam o derivado LASSBio 917 como um candidato a protótipo de fármaco com potencial antitrombótico e analgésico cujo mecanismo de ação deve ser investigado. 36.076

INFLAMMATORY MEDIATORS INVOLVED IN THE NEUTROPHIL MIGRATION INDUCED BY IL-23 IN MICE. Lemos, H. P.; Grespan, R.**; Vieira, S. M.**; Fernandes, K. S. S.; Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: It was shown that IL-23 induces neutrophil migration in several pathologies, both infectious and immune ones, however the mechanisms to such induction have not been fully elucidated. Thus, the aim of this work is to contribute for such comprehension, once it could be so relevant to achieve a potential target to new strategies of therapeutic intervention. Métodos e Resultados: IL-23 or saline was injected, i.p., in C57Bl/6 mice of both genders, weighing 18-20g, aging 3 to 4 weeks. Some mice were pretreated or not with anti-TNF-α, IL-1Ra (soluble IL-1 receptor), MK886 (inhibitor of LTB4 synthesis), BN 50730 (PAF antagonist), dexamethasone (corticoid), indomethacin (non-selective COX inhibitor), etoricoxib (selective inhibitor de COX-2). After 4 hours, IL-23 induced a significant peritoneal neutrophil migration (Sal: 0.44±0.13; IL-23: 1.97±0.31) that was reduced for pretreatments with anti-TNF-α (0.74±0.24), IL-1Ra (0.47±0.18), Indo (0.51±0.14), BN (0.74±0.17), Dexa (0.10±0.08), MK886 (0.21±0.07), etoricoxib (0.66±0.17). The results were expressed as means±SEM and the statistics analysis were performed by analysis of variance and then by the Bonferroni test. Conclusões: The results suggest that all TNF-α, IL-1, Prostaglandins, PAF, LTB4 are involved in the neutrophil migration induced by IL-23. 36.077 NUMBER OF ALLERGEN PROVOCATIONS DISTINGUISHES THE SENSITIVITY TO DEXAMETHASONE IN A MURINE MODEL OF ASTHMA. Serra, M. F.; Ciambarella, B. T.*; Pires, A. L. A.; Azevedo, E. C. A.*; Campos, P. B.*; Cordeiro, R. S. B.; Silva, P. M. R.; Martins, M. A. Fisiologia e Farmacodinâmica, FIOCRUZ Objetivo: The effectiveness of dexamethasone (DEX) on allergen-evoked airway inflammation and hyperreactivity (AHR) was assessed in a murine model of asthma, in which we varied the number of allergen provocations to establish whether the magnitude of eosinophylic inflammatory response may influence the sensitivity of the AHR to the steroid. Métodos e Resultados: Sensitized and boosted A/J mice were subjected to 1, 2, 3 or 4 daily intranasal provocations with ovalbumin (OVA) starting at day 19 after sensitization. Mice were treated with dexamethasone (DEX, 3 mg/kg, i.p.) 1 h before provocation. We measured AHR to metacholine by whole-body plethysmography and determined eosinophil numbers in the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid 24 h after the last challenge. Eosinophil numbers progressively increased following 1 to 4 OVA provocations. The values (Mean ±SEM, N=7) increased from zero in the controls to: 220 ± 6.9, 345 ± 4.2, 674 ± 12.7 and 1022 ± 9.8 x 103 cells/BAL). Treatment with DEX clearly abolished the eosinophilic response regardless of the number of OVA provocations. In contrast, AHR was sensitive to DEX treatment only up to 2 consecutive allergen provocations, not any more. Conclusões:

This novel approach has revealed a clear dissociation between eosinophilia in BAL fluid and AHR by using a glucocorticoide (GC) treatment which is the most effective therapy for asthma available. These data indicate that the clearance of eosinophils in the bronchoalveolar space is not enough to prevent AHR, and emphasize that the higher the number of allergen provocations is the less marked the sensitiveness of the AHR to the GC therapy is. 36.078 ESTUDO DO MECANISMO DE AÇÃO ANTIAGREGANTE PLAQUETÁRIO DE DERIVADOS TIENILACILIDRAZÔNICOS. 1Brito, F. C. F.; 2Kummerle, A. E.**; 2Fraga, C. A. M.; Barreiro, E. J.; Miranda, A. L. P. 1Farmacologia Básica e Clínica CCS-UFRJ; 2Lassbio FF-UFRJ Objetivo: A determinação da potência antiagregante plaquetária de compostos tienilacilidrazônicos frente a diversos agonistas fisiológicos, bem como seu potencial efeito antitrombótico foi anteriormente

descrita (Brito et al., SBFTE 2004). Tendo em vista a atividade inibidora de fosfodiesterases (PDEs) descrita para derivados piridazinônicos, análogos estruturais aos derivados tienilacilidrazônicos (JPET, 299, 558, 2001), neste trabalho foi investigado o efeito desses compostos sobre esse alvo farmacológico. Através da utilização da metodologia da agregação plaquetária, utilizando inibidores seletivos das isoformas 2 (EHNA) e 3 (milrinona) de PDE em plaqueta humana lavada, associados ao nitroprussiato de sódio (SNP), doador de NO, avaliou-se indiretamente o efeito desses compostos sobre as PDEs plaquetárias. Métodos e Resultados: A atividade qualitativa anti-PDE foi avaliada indiretamente utilizando-se plaqueta humana lavada, estimulada por trombina (1,0 – 2,0 UI) na presença ou ausência de SNP (1 – 10 µM), inibidor de PDE3, milrinona (100 µM), monitorada através do método turbidimétrico, como descrito por DICKINSON et al., (Biochem. J., 323, 371, 1997). Os compostos foram avaliados na faixa de concentração de 10 – 300 M e foram pré incubados por 1 min junto ao SNP ou ao SNP + milrinona (n= 5). O composto LASSBio 789 (10 M) e o composto LASSBio 785 (100 M) potencializaram a inibição da agregação plaquetária induzida por SNP, efeito similar àquele produzido pelo derivado EHNA (20 M). Da mesma forma, esses compostos na concentração de 100 M foram capazes de reverter a indução da agregação plaquetária promovida por SNP na presença de milrinona, sugerindo um efeito inibidor de PDE2, como o observado para o composto EHNA. Conclusões: Os resultados obtidos sugerem que os compostos LASSBio 789 e 785 podem estar exercendo seu efeito antiagregante plaquetário e antitrombótico, através da inibição da PDE2. Esse trabalho corrobora com resultados anteriores para essa série e permite destacar os compostos LASSBio 785 e 789, como novos candidatos a protótipos de agentes antiplaquetários e /ou antitrombóticos. 36.079 EFEITO DO TRATAMENTO COM FLUOXETINA SOBRE A MIGRAÇÃO CELULAR NA RESPOSTA INFLAMATÓRIA AGUDA INDUZIDA POR BCG EM CAMUNDONGOS. Rizek, C. F.; Wanderley, L. T.*; Barbosa, C. D. P.*; Pinto, F. G. Patologia UFSCar Objetivo: A fluoxetina, inibidor seletivo da recaptação de serotonina, tem sido amplamente utilizada no tratamento da depressão. Experimentalmente tem apresentado também atividade anti-inflamatória em ratos após estímulo com carragenina. Entretanto, não foi ainda claramente determinada essa atividade em camundongos ou utilizando-se outros tipos de estímulo inflamatório. Avaliar o efeito da administração de fluoxetina sobre a migração celular e a produção de nitritos na resposta inflamatória aguda peritoneal induzida por BCG em camundongos. Métodos e Resultados: Metodologia: camundongos suíços, com 8 semanas de idade e 30 gr. de peso, foram divididos em 4 grupos: CSSE – controles não tratados e inoculados com 0,2 ml de solução salina estéril por via intra-peritoneal, CBCG – não tratados e inoculados com 0,2 ml de BCG (1:5), T18 e T36 – tratados durante 7 dias com 18 ou 36 mg/kg de fluoxetina (DAFORIN®) na água de bebida e inoculados com 0,2 ml de BCG (1:5). Após 24 da inoculação os animais foram sacrificados para obtenção do lavado peritoneal; após centrifugação as células do lavado foram coradas segundo a técnica de Randolph (BRATTIG et al, 1993) para contagem total e diferencial, enquanto a concentração de nitritos foi determinada no sobrenadante através da reação de Griess. Os resultados foram expressos como medianas e analisados estatisticamente por meio do teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis, complementado pelo teste de Dunn. Conforme esperado, o estímulo com BCG induziu significativo aumento do número de células inflamatórias (CSSE=78,76 x 104 células/ml; CBCG=142,57 x 104 células/ml; p<0,01) e da porcentagem de polimorfonucleares (CSSE=1,2%; CBCG=22,8%; p<0,01), sem influência significativa do tratamento com fluoxetina (T18=105,24 x 104 cels/ml e 26,9%; T36=95,96 x 104

cels/ml e 26,1%). A concentração de nitritos no lavado não foi influenciada significativamente pela inoculação de BCG ou pelo tratamento com fluoxetina (CSSE=0,33; CBCG=0,50; T18=0,47; T36=0,50 µM; p>0,05). Foram observados sinais de constipação nos animais submetidos ao tratamento com fluoxetina, independente da dose utilizada. Conclusões:

Conclusão: Neste modelo experimental o tratamento com fluoxetina não influenciou significativamente a cinética inflamatória peritoneal induzida por BCG em camundongos, sugerindo que seu efeito anti-inflamatório pode variar dependendo da espécie animal ou do tipo de estímulo inflamatório utilizado. 36.080 PAPEL DA COX-2, NO SINTASE E CANAIS DE K+ATP-DEPENDENTES NO EFEITO PROTETOR DA AMIFOSTINA (WR-2721) NA LESÃO GÁSTRICA INDUZIDA POR INDOMETACINA EM RATOS. Mota, J. M. S. C.; Menezes, A. A. J.*; Soares, P. M. G.**; Brito, G. A. C.; Ribeiro, R. A.; Souza, M. Fisiologia e Farmacologia DFF-UFC Objetivo:

Demonstramos previamente que amifostina (AMF) apresenta um efeito protetor na lesão gástrica induzida por indometacina (INDO) em ratos. (Mota et al, 2004, Anais do XXXVI Congresso da SBFTE, 06-137). Neste trabalho pretendemos avaliar o papel da COX-2, óxido nítrico sintase (NOS) e canais de K+ ATP-dependentes neste evento (KATP). Métodos e Resultados: Ratos Wistar (200-250g) foram pré-tratados com salina (controle), L-NAME (inibidor da NOS), rofecoxib (inibidor seletivo da COX-2) ou glibenclamida (bloqueador de KATP); após 30 min AMF (90 mg/kg, i.p.) foi administrada. Decorridos 30 min, os animais receberam INDO (20 mg/kg, v.o.). Após 3 h, os ratos foram sacrificados, os estômagos retirados, e a extensão das lesões medidas através da soma da extensão de todas as lesões encontradas (IL). Fragmentos da mucosa foram retirados para análise da infiltração de neutrófilos pela atividade de Mieloperoxidase (MPO). AMF (IL= 0 mm e MPO= 1.59 ± 0.26 U/mg) inibiu significativamente (p<0,05) a lesão gástrica e a infiltração de neutrófilos induzida por INDO (IL=17.85 ± 1.53 mm, MPO= 5.16 ± 0.84 U/mg). Não houve reversão do efeito protetor da AMF nos grupos pré-tratados com L-NAME (IL=0 mm, MPO= 1.80 ± 0.2 U/mg), rofecoxib (IL=0 mm, MPO= 1,9 ± 0,45 U/mg) ou glibenclamida (IL= 0 mm, 2.76 ± 0.96 U/mg). Conclusões: Os dados sugerem que óxido nítrico, prostaglandinas produzidas pela COX-2 ou abertura de canais de potássio não medeiam o efeito protetor da amifostina na lesão gástrica induzida por indometacina em ratos. 36.081 PARTICIPAÇÃO DO RECEPTOR B1 PARA CININAS NA GÊNESE E NA MANUTENÇÃO DA DOR NEUROPÁTICA INDUZIDA PELA AVULSÃO DO PLEXO BRAQUIAL EM CAMUNDONGOS. Quintão, N. L. M.; Paszcuk, A. F.**; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: Estudos anteriores demonstraram que camundongos com deleção gênica para o receptor B1 das cininas não desenvolvem hipernocicepção mecânica após lesão de nervo periférico (J Neurosci. 25:2405-12). O presente trabalho avaliou o efeito de antagonistas do receptor B1 para cininas na gênese e na manutenção da hipernocicepção mecânica induzida pela avulsão do plexo braquial (APB) em camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos suíços fêmeos (20-30g; N=4-6). A hipernocicepção mecânica foi avaliada através da aplicação do filamento de von Frey 0,6 g. A administração local dos antagonistas seletivos dos receptores B1 para as cininas, o R-715 (peptídico) ou o SSR-240612 (não peptídico), na dose de 60 nmol/sítio, no momento da cirurgia, reduziu de forma marcante a hipernocicepção mecânica induzida pela APB (76 ± 5 % e 64 ± 6 %, respectivamente). Sistemicamente, o R-715 (438 nmol/kg; i.p.) e o SSR-240612 (390 nmol/kg; i.p.) também reduziram significativamente a hipernocicepção mecânica, tanto quando administrados no momento ou 4 dias após a cirurgia (64 ± 4 % e 78 ± 8 %; 50 ± 4 % e 68 ± 12 %, respectivamente). Quando o R-715 ou o SSR-240612 foram administrados por via intratecal (i.t.) ou intracerebroventricular (i.c.v.), na dose de 25 nmol/sítio, no momento da cirurgia, não foi observada inibição significativa da hipernocicepção mecânica. Entretanto, o tratamento pelas vias i.t. ou i.c.v. no 4o dia após a cirurgia, reduziu de forma marcante a hipernocicepção mecânica induzida pela APB (67 ± 7 % e 69 ± 7 %; 40 ± 9 % e 50 ± 3 %, respectivamente).

Conclusões: Estes resultados confirmam e estendem dados anteriores sobre o envolvimento dos receptores B1 para cininas na gênese e na manutenção da dor neuropática, indicando que estes receptores podem representar um importante alvo farmacológico para tratamento desta patologia. 36.082 INHIBITION OF ALLERGIC INFLAMMATORY RESPONSE BY NITRIC OXIDE RELEASING GLUCOCORTICOIDS. 1Oliveira, M. S. S.; 1Barreto, E. O.**; 2Zamuner, S. R.**; 1Pires, A. L. A.; 1Cordeiro, R. S. B.; 3Lagente, V.; 1Martins, M. A.; 2Wallace JL.; 1Silva, P. M. R.; 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Pharmacology University of Calgary, Canada; 3Pharmacologie, INSERM Objetivo: Although glucocorticoids exhibit a wide range of undesired effects, they still constitute an important approach to treat allergic inflammatory diseases. In this study we evaluated the local effect of the prednisolone and the nitric oxide-releasing derivative of prednisolone NCX-1015 on the allergic pleurisy in rats. Métodos e Resultados: Actively sensitized Wistar rats were intrapleurally challenged with antigen (OVA), 14 days after sensitization. Local administration of prednisolone or NCX-1015 (0.8-8.0 µmol/kg) effectively inhibited protein extravasation and leukocyte influx at 6h post-challenge. Late eosinophil infiltration was also sensitive to both compounds. Values of eosinophils were 9.2 ± 1.1 x 10-6/site (mean ± SEM) in antigen-challenged rats and 3.1 ± 0.9 x 10-6/site and 1.5 ± 0.1 x 10-6/site in prednisolone and NCX 1015-treated animals respectively. The doses required for NCX-1015 to produce maximal reduction were about one-third the dose of prednisolone. We also noted that NCX-1015 inhibited cysteinyl leukotriene (cys-LT) generation at 12 and 24 h after antigen challenge, under conditions where prednisolone had no effect. This phenomenon directly correlated with reduced expression of 5-lipoxigenase, a key enzyme responsible for cys-LT synthesis. In addition, we also observed that the local co-administration of prednisolone (2.8 µmol/kg) and the NO donor DETA-NONOate (1.4 µmol/kg) produced greater reduction of the eosinophil recruitment than either drug alone. Conclusões: Since inflammation is critically involved in the context of allergic processes, our findings clearly suggest that strategies such as association of steroids with a NO releasing moiety may constitute a promising therapeutic approach for the treatment of pulmonary allergic diseases. 36.083 NEUTROPHIL INFLUX DISTINGUISHES THERMAL HYPERALGESIC RESPONSE EVOKED BY ALLERGEN PROVOCATION IN ACTIVELY AS COMPARED TO IGE PASSIVELY SENSITIZED RATS. Lavich, T. R.; Siqueira, R. A.**; Farias Filho F. A.*; Cordeiro, R. S. B.; Silva, P. R. M.; Martins, M. A. Fisiologia e Farmacodinâmica, FIOCRUZ Objetivo: Allergen-induced inflammation has been shown to be much more complex in actively sensitized than in IgE passively sensitized animals concerning leukocyte recruitment. This study was undertaken in order to assess the profile of allergen-evoked thermal hyperalgesic response in IgE passively sensitized and actively sensitized rats, and to define the putative role of neutrophils in allergic nociception. Methods and Results:

Wistar rats were passively sensitized with an intraplantar injection of MoAb IgE anti-DNP (1 µg/paw) and challenged with DNP-BSA (1 µg/paw) 24 h later. Rats were actively sensitized with a mixture of Al(OH)3 and ovalbumin injected subcutaneously, and challenged intraplantarly with ovalbumin (12 µg/paw) 14 days later. Thermal hyperalgesia was measured using a modified hot plate test. In passively sensitized rats, hyperalgesic response peaked 15 min post-challenge (6.3 ± 0.7 s) and reduced within 3 h (3.2 ± 0.2). In actively sensitized rats, the hyperalgesic response appeared quite comparable in terms of intensity but plateaued from 15 min to at least 6 h post-challenge. Neutrophil accumulation into the focus of lesion was significantly higher in actively sensitized (1.33 ± 0.08 DO) when compared to passively sensitized rats (0.58 ± 0.11), as revealed by both mieloperoxidase activity and histopatological analysis. Finally, treatment with the selectin inhibitor

fucoidin (10 mg/kg, i.p) reduced neutrophil accumulation (67%, 84%) and hyperalgesic response (57%, 49%) at 3 and 6 h post-challenge in actively sensitized rats. Conclusões: These results indicate that the neutrophil infiltrate may play a crucial role in the longer lasting allergic hyperalgesic response noted in actively sensitized as compared to IgE passively sensitized rats. 36.084 THE NATURALLY OCCURRING COMPOUND INFAR-7 REDUCES ALLERGIC AIRWAY RESPONSES IN MICE. 1Alves, F. M. S.; 2Neves, J. S.; 3Serra, M. F.; 1Pires, A. L. A.; 1Cordeiro, R. S. B.; 1Silva, P. M. R.; 7 Veloso, M. P.; 1Martins, M. A.; 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ ; 2Farmacologia UFRJ; 3Farmácia EFOA Aim:

Plant extracts and isolated compounds have been screened in our laboratory in a systematic effort to discover new antiasthma substances. This study was undertaken in order to investigate the putative capacity to prevent allergic airway responses of INFAR7, a naturally occurring molecule, isolated from a Brazilian plant, whose spasmolitic activity has been detected in our PDTIS prospective program. Methods and Results:

INFAR-7 was first screened in a system of anaphylactic isotonic contraction of guinea pig ileum. In vitro effect on histamine (His)-induced ileum contraction and antigen-induced Hist release were also assessed. The compound was then administered orally into sensitized Balb/c mice for evaluation of its effectiveness on allergen-evoked lung inflammation and airways hyperreactivity. INFAR-7 and the antiallergic azelastine (AZE) inhibited antigen-induced contraction with similar IC50 values (1.5 and 3.8 µM, respectively). Comparable blockade of anaphylactic His release from ileum was also noted. In contrast, AZE was 145-fold more potent than INFAR-7 to prevent spasm by His (IC50 = 20 nM and 2.9µM, respectively). In in vivo settings, 3 daily nasal provocations with ovalbumin (OVA, 25 µg/25 µl) caused eosinophilic accumulation in the bronchoalveolar lavage fluid and hyperreativity to metacholine 24 h later. INFAR-7 (100 mg/kg), administered orally 1 h before challenge, significantly inhibited both lung eosinophilia and hyperreactivity. Conclusion: INFAR-7 presents marked spasmolitic and anti-inflammatory properties and may have clinical value for asthma therapy particularly because of its efficacy following oral administration.

36.085 THE NATURALLY OCCURRING COMPOUND INFAR-7 REDUCES ALLERGIC AIRWAY RESPONSES IN MICE. Alves, F. M. S. Farmácia e Farmacologia, FIOCRUZ Aim:

Plant extracts and isolated compounds have been screened in our laboratory in a systematic effort to discover new antiasthma substances. This study was undertaken in order to investigate the putative capacity to prevent allergic airway responses of INFAR7, a naturally occurring molecule, isolated from a Brazilian plant, whose spasmolitic activity has been detected in our PDTIS prospective program. Methods and Results:

INFAR-7 was first screened in a system of anaphylactic isotonic contraction of guinea pig ileum. In vitro effect on histamine (His)-induced ileum contraction and antigen-induced Hist release were also assessed. The compound was then administered orally into sensitized Balb/c mice for evaluation of its effectiveness on allergen-evoked lung inflammation and airways hyperreactivity. INFAR-7 and the antiallergic azelastine (AZE) inhibited antigen-induced contraction with similar IC50 values (1.5 and 3.8 µM, respectively). Comparable blockade of anaphylactic His release from ileum was also noted. In contrast, AZE was 145-fold more potent than INFAR-7 to prevent spasm by His (IC50 = 20 nM and 2.9µM, respectively). In in vivo settings, 3 daily nasal provocations with ovalbumin (OVA, 25 µg/25 µl) caused eosinophilic accumulation in the bronchoalveolar lavage fluid and hyperreativity to metacholine 24 h later. INFAR-7 (100 mg/kg), administered orally 1 h before challenge, significantly inhibited both lung eosinophilia and hyperreactivity. Conclusion:

INFAR-7 presents marked spasmolitic and anti-inflammatory properties and may have clinical value for asthma therapy particularly because of its efficacy following oral administration.

36.086 PARTICIPAÇÃO DE CITOCINAS NA HIPERNOCICEPÇÃO INFLAMATÓRIA DE ORIGEM IMUNE EM CAMUNDONGOS. Cunha, T. M.; Verri Jr., W. A.**; Parada, C. A.; Cunha, F. Q.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Recentemente nosso grupo demonstrou que a hipernocicepção inflamatória de origem não-imune (induzida por carragenina) em camundongos é mediada por uma cascata de citocinas (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102(5):1755-60, 2005). Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar se em um modelo de inflamação de origem imune as citocinas também medeiam a hipernocicepção. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos C57/BL6 selvagens e deficientes para o receptor para TNF do tipo1 (TNFR1-/-) imunizados com mBSA e falso imunizados (F.I). A hipernocicepção inflamatória foi avaliada utilizando-se o teste de pressão crescente na pata de camundongos. A concentração de citocinas na pata dos animais foi quantificada por ELISA. A administração intraplantar (i.pl.) de mBSA induziu hipernocicepção mecânica dose (10-120µg) e tempo (1-144h) dependente em camundongos imunizados o que não foi observado nos animais F.I nem nos animais imunizados injetados com salina. O pré-tratamento dos animais com IL-1ra (10 mg/kg 30 min antes e 3 h 30 min após) inibiu a hipernocicepção induzida pelo mBSA (90 µg) nos tempos 3, 5 e 7 h (49%, 52% e 55%, respectivamente). Os animais TNFR1-/- apresentaram hipernocicepção reduzida frente à administração i.pl. de mBSA (90 µg) nos tempos de 3, 5, 7 h após a administração do estimulo (58%, 60% e 52% respectivamente). Confirmando a participação do TNFα e da IL-1β na hipernocicepção, a dosagem destas citocinas na pata dos animais foi realizada. A injeção i.pl. de mBSA (90 µg) induziu a liberação de TNFα (180 ± 15 pg/pata) e IL-1β (290 ± 20 pg/pata) na pata de animais previamente imunizados e não nos animais F.I (92 ± 10 pg/pata - 80 ± 16 pg/pata, respectivamente) 3 horas após o estímulo. Conclusões:

Os resultados acima apresentados sugerem que o TNFα e a IL-1β como na hipernocicepção inflamatória de origem não imune também medeiam a hipernocicepção inflamatória de origem imune. 36.087 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE DOS INIBIDORES DE BOMBA PROTÔNICA NA QUIMIOTAXIA DE NEUTRÓFILOS HUMANO IN VITRO. 1Oliveira, R. M.*; 2 Antunes, E.; 1Pedrazzoli Jr., J.; 1Gambero, A.; 1UNIFAG-USF; 2Farmacologia UNICAMP Objetivo:

Inibidores de bomba protônica (PPI), como o omeprazol (OME) e pantoprazol (PANTO) são drogas anti-secretoras gástricas. Acredita-se que estas possuam atividade inibitória sobre a adesão e quimiotaxia de leucócitos. O objetivo foi avaliar a ação de PPIs na quimiotaxia de neutrófilos in vitro utilizando fMLP e IL-8 e, os mecanismos envolvidos. Métodos e Resultados:

Neutrófilos isolados foram utilizados nos ensaios de quimiotaxia com o sistema ChemoTX®. A toxicidade celular foi estimada usando o teste de redução do sal de tetrazolio (MTT). A avaliação dos níveis intracelulares de cálcio foi realizada com neutrófilos marcados com FURA 2-AM. Os resultados mostram que o tratamento prévio de neutrófilos com OME e PANTO inibe a migração em resposta ao fMLP (6775±1693 e 2470±528 neutrófilos para o controle e OME 10-4M, respectivamente; p<0,05 e, 5325±577 e 2772±404 neutrófilos para o controle e PANTO 10-4M, respectivamente; p<0,05). A ranitidina, um antagonista H2, também utilizada como inibidor de secreção ácida não modifica a migração de neutrófilos induzida por fMLP. Quando o estímulo foi a IL-8, observamos uma redução no número de neutrófilos migrados após o tratamento com OME (24826±4435 e 8210±947 neutrófilos para controle e OME 10-5M, respectivamente; p<0,05). O tratamento com os PPI não apresenta efeito citotóxico sobre neutrófilos. O inibidor de v-ATPase,

bafilomicina, não modificou a capacidade migratória dos neutrófilos. A adição de nigericina, um ionóforo de K+, reverte a inibição promovida pelo OME (16385±1312 e 35077±762 neutrófilos para o controle e nigericina 10-7M, respectivamente; p<0,05). A capacidade de influxo de cálcio para o citoplasma também é reduzida em células tratadas com OME (187,78±22,47 e 792,46±120,12 nM antes e após fMLP no controle; 162,95±38,47 e 367,10±103,82 nM antes e após fMLP em células tratadas; p<0,01). Conclusões: Sugerimos que o OME inibe a quimiotaxia de neutrófilos por mecanismos específicos e não citotóxicos, provavelmente pela inibição de uma H+K+ATPase, pois a entrada de K+ para o meio intracelular reverte a inibição e, o inibidor de v-ATPase não modifica a quimiotaxia. Esta inibição pode estar relacionada a uma redução do cálcio intracelular após estimulação com fMLP. Apoio financeiro: FAPESP 36.088 EFEITO EDEMATOGÊNICO DA LECTINA DE SEMENTES DE CANAVALIA MARÍTIMA. 1Fontenele, S.R.**; 1Pires, A. F.**; 1Mota, R. L. M.**; 1Gomes, D.M.**; 2Scarparo, H. C.; 6 Carneiro, V.A.**; 3Cavada, B. S.; 1Criddle, D. N.; 1Assreuy, A. M. S.; 1Departamento de Fisiologia UEC; 2Odontologia UFC; 3Bioquímica Médica UFC Objetivo: A atividade biológica de lectinas de leguminosas pode envolver seus sítios lectínicos. Esses sítios possuem afinidade de ligação específica por açúcares. Dependendo da via de administração utilizada estas lectinas induzem efeitos inflamatórios ou antiinflamatórios. Este trabalho investiga a atividade inflamatória da ConM e o envolvimento de seus sítios lectínicos no modelo experimental de edema de pata. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (150 e 250g) foram mantidos em ciclos de claro-escuro de 12h e manipulados de acordo com as diretrizes do Comitê de Ética em Pesquisa-UECE. O estímulo inflamatório utilizado para indução do edema foi a aplicação S.C. de ConM (0,01; 0,1 e 1 mg/kg), tendo a salina como controle. Para avaliar o envolvimento dos sítios lectínicos neste processo inflamatório, aplicamos ConM (0,1mg/kg) associada ou não aos açúcares ligantes específicos, trealose e manose (1M). Para descartar a atividade inflamatória dos açúcares, estes foram aplicados individualmente na ausência da lectina. As soluções contendo ConM e açúcar foram previamente incubadas a 37ºC por 30 minutos antes da administração. A atividade edematogênica foi mensurada como a diferença entre o volume das patas antes e depois da aplicação do etímulo. As áreas sob as curvas foram calculadas usando o método do trapézio e os resultados expressos em unidades arbitrárias. A ConM mostrou significativa atividade inflamatória nas doses de 0,1mg/kg (n=10) e 1mg/kg (n=7), induzindo aumento em 58±3% e 52±6% no volume da pata, respectivamente. Na presença de trealose (n=6) e de manose (n=6) esse efeito foi de 22±4% e 28±4%, respectivamente. Conclusões: Os resultados sugerem que os efeitos edematogênicos induzidos pela ConM são parcialmente dependentes dos sítios lectínicos. 36.089 O INTERMEDIÁRIO GLICOLÍTICO D-FRUTOSE 1,6 DIFOSFATO APRESENTA ATIVIDADE ANTINOCICE. Valério, D. A. R.; Verri Jr., W. A.**; Cunha, T. M.**; Alves-Filho, J. C.**; Cunha, F. Q.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: A D-Frutose 1,6 Difosfato (DFP) é um açúcar bifosforilado intermediário da via glicolítica. Estudos recentes demonstraram que a DFP possui atividades antiinflamatória como redução do edema de pata (Eur J Pharmacol. 237:251, 1993) e diminuição da produção de PGE2 (Br J Pharmacol. 137:497, 2002). Métodos e Resultados: A hipernocicepção mecânica foi avaliada pela metodologia de pressão crescente na pata de camundongos(Swiss,machos,25-30g,n=5). Os animais receberam tratamento com DFP e em seguida estímulo i.pl. de carragenina(Cg_100µg/pata);KC(20ng/pata);IL1-

β(1ng/pata);dopamina(10µg/pata) ou PGE2(100ng/pata). As respostas nocicepivas foram avaliadas na 3a hora. DFP(300mg/Kg;i.p.) reduziu significativamente a hipernocicepção mecânica induzida pelo estímulo com carragenina(Cg_100µg/pata;43%);KC(20ng/pata;25%) ou dopamina(10µg/pata;44%),mas não afetou a hipernocicepção induzida pela IL1-β(1ng/pata) ou PGE2(100ng/pata). Conclusões: Esses resultados sugerem que a DFP possui atividade antinociceptiva via inibição do componente simpático da hipernocicepção inflamatória. 36.090 ADMINISTRAÇÃO DE UM ANTIOXIDANTE MODULA NEGATIVAMENTE A MIGRAÇÃO CELULAR E HIPERALGESIA NA ARTRITE INDUZIDA POR ZYMOSAN (AZY) EM RATOS 1 Rocha, F. A. C.; 2Leite, A. C. R. M.**; 2Girão, V. C. C.**; 3Silva Jr., F. S.**; 1Melo, I. S. S.*; 1Gulko, P. S.; 1Medicina Clínica UFC; 2Medicina UFC; 3Reumatologia FMUSP Objetivo:

Estudar o efeito de um antioxidante (Phytol) na hiperalgesia e influxo celular (IC) na artrite induzida por zymosan (AZy). Métodos e Resultados:

Ratos (n=6/grupo) receberam Zy (1mg) no joelho e controles receberam salina. A hiperalgesia (incapacitação articular – IA) foi medida a cada hora, até 6h após Zy, através do Tempo de Suspensão da Pata (TSP), em segundos. Às 6h, os animais foram sacrificados e o IC foi avaliado no exsudato articular. Grupos receberam Phytol (200µL, i.d.), 30 min, 1, 3, 5 ou 8 dias antes do Zy. A administração do Phytol reduziu significantemente (P<0,05) o IC, sendo 14520±2916, 9733±1637, 4166±872 e 8850±1167 células/mm3, para os grupos que receberam Phytol 1, 3, 5 ou 8 dias antes do Zy, respectivamente, quando comparado ao controle (27866±5051células/mm3). O tratamento com Phytol reduziu a IA apenas quando dado 5 d antes do Zy, sendo o TSP=17,2±1,19s, em comparação ao controle 36,06±3,31s (P<0,05). Conclusões: A administração de um antioxidante (Phytol) modula negativamente a hiperalgesia e o influxo celular na artrite por zymosan. É possível que isso se deva a um efeito sobre as células sinoviais residentes. 36.091 ENVOLVIMENTO DE NUCLEOTÍDEOS CÍCLICOS NOS EFEITOS ANTI-INFLAMATÓRIOS DO ÓXIDO NÍTRICO INALATÓRIO EM CAMUNDONGOS. 1Coelho, C. F.; 1Sardinha, P. L. L. M.**; 3 Yshii, L.M.**; 2Varriano, A. A.**; 1Bolonheis, S. M.**; 1Carrari, C. C.**; 1Teixeira, S. A.; 3Martins, R. A. B. L.; 1Muscara, M. N.; 1Farmacologia ICB I-USP; 2Farmacologia UNICAMP; 3Fisiologia e Farmacodinâmica UNIVAP Objetivo: Investigar o mecanismo da ação antiinflamatória do óxido nítrico (NO) administrado por via inalatória no modelo de edema de pata induzido por carragenina (Cg) em camundongos. Métodos e Resultados: O edema foi induzido em camundongos Swiss (machos, 20 – 30 g) através da injeção subplantar de Cg (300 µg) na pata posterior esquerda sob anestesia com halotano e o volume (mL) foi mensurado através de hidropletismógrafo no curso das 4 h seguintes. Trinta minutos após a injeação de Cg, os animais inalaram NO (300 ppm a 5L/min durante 5 ou 10 min) e de forma independente ou concomitante grupos de animais receberam sildenafil (1 mg/Kg, i.p) ou rolipram (3 mg/Kg, i.p.). Observou-se que o edema induzido por Cg (0,291±0,005 na 4a.-hora) foi reduzido pela inalação de NO durante 5 (0,113±0,004; p<0,001) ou 10 min (0,139±0,007; p<0,001). A administração de sildenafil resultou em redução significativa do edema (0,232±0,002; p<0,001) sem interferir com os efeitos do NO. O rolipram mostrou atividade anti-edematogênica (0,221±0,003; p<0,001), a qual não foi afetada pela co-administração de NO durante 5 min (0,212±0,003) e não interferiu com os efeitos do NO inalado durante 10 min (0,120±0,002). Conclusões:

O NO administrado por via inalatória (sistêmica) apresenta efeito anti-edematogênico sem aparentemente envolver o GMP cíclico. A participação do AMP cíclico na resposta parece depender da dose de NO e está atualmente sob investigação. 36.092 POST-INFLAMMATORY COLONIC DYSFUNCTION: ROLE OF COX-2 AND PGD SYNTHASE IN PRE-DISPOSITION TO COLON CANCER. 1Zamuner, S. R.; 2 Wallace, J. L.; Pharmacology and Experimental Therapeutics University of Calgary Canada Objetivo: Patients with Inflammatory Bowel Disease are at increased risk of developing colorectal cancer. During and even after resolution of colitis, epithelial function is impaired, leading to elevated bacterial translocation. We have shown that there is elevated expression of COX-2 and increased production of PGD2 in pos-colitis rats. In the present study, we evaluated the potential contribution of COX-2 and PGD2 to the increased susceptibility to colon cancer in post-colitis rats. Métodos e Resultados: Male Wistar rats were given trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) intracolonically to induce colitis. Six weeks later, colonic tissue was examined for expression of COX-2 and PGD synthase by Western blot and PGD2 synthesis by ELISA. Additional groups of rats (control and post-TNBS) were given a carcinogen, azoxymethane (AOM) and the rats were euthanized 3 h later. Beginning five weeks after TNBS, another group of rats was treated twice-daily for one week, with vehicle, a COX-2 or a PGD receptor antagonist, and then treated with AOM weekly (15 mg/kg i.p.), for another 4 weeks. Six weeks later, the numbers of aberrant crypt foci (ACF; pre-cancerous lesions) were blindly counted by light microscopy. Six weeks after colitis there was elevated COX-2 (144%) and PGD synthase (160%) expression, and increased PGD2 synthesis. In post-colitis rats that were given AOM, there was an increase in the expression of COX-2 (440%), and PGD synthase (167%) when compared with controls. Treatment with a selective COX-2 inhibitor (rofecoxib) or DP1 receptor antagonist (BW A868C) significantly decreased (p<0.05) the number of ACF in post-colitis rats treated with AOM. Conclusões: These studies provide data consistent with the notion that elevated PGD2 synthesis, at least partially due to increase expression of COX-2 and PGD synthase, contributes to the increased susceptibility to colon cancer in post-colitis rats. 36.093 ENDOTOXINA DE E. COLI INDUZ ALTERAÇÕES NO EDEMA DE PATA INDUZIDO PELA CARRAGENINA EM RATOS ADX. Rodrigues, L. A.; Fracasso, J. F.; Silva, R. F. P.; Lepera, E. Z. P. Princípios Ativos e Naturais e Toxicologia UNESP-Araraquara Objetivo: O edema de pata induzido pela carragenina (Car) em ou mesmo pela endotoxina de E. Coli (Etx) em ratos é um modelo para estudo das reações inflamatórias, bem como dos múltiplos fatores que podem influenciá-las, inclusive a participação dos hormônios glicocorticóides endógenos, envolvidos. No presente estudo avaliamos os efeitos da administração sistêmica de Etx uma hora antes da indução do edema de pata com carragenina em ratos normais e adrenalectomizados (Adx). Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (220-270g) foram adrenalectomizados. Esses ratos receberam alimentação e solução salina ad libitum até o início dos experimentos (após 6 dias da cirurgia). Os grupos tratados receberam Etx (1 mg/kg) por via intraperitoneal 1 h antes da indução do edema com carragenina ou Etx [ 0,1 ml/pata, posterior direita intraplantar (ipl)] . A medida do edema foi feita pela medida da espessura da pata, com espessímetro (Mitutoyo 2050-08), cujos valores estão mostrados em milímetros (mm); imediatamente, após 2; 4 e 24 horas da injeção ipl de carragenina ou Etx. Os resultados foram apresentados como média ± epm. A análise estatística foi feita por teste “t – student” não-pareado e diferenças para p < 0,05 foram consideradas estatisticamente significativas. Nos grupos (n=6) obtivemos os seguintes resultados, nos tempos 0; 2; 4 e 24 hs respectivamente (mm): controle: Car ipl [ 4,0 ± 0,1; 5,2 ± 0,1; 4,9 ± 0,1; 4,2], Etx ipl [ 4,1 ± 0,1; 4,5 ± 0,1; 4,4 ± 0,1; 4,0 ± 0,1], ratos tratados com Etx (1 mg/ kg) 1 h antes: Car ipl [ 4,0 ± 0,1; 4,4 ± 4,1 ±

0,1; 3,7 ± 0,1]; Etx ipl [ 3,8 ± 0,1; 4,2 ± 0,1; 3,9 ± 0,1; 3,5 ± 0,1], ratos Adx: Car ipl [ 3,8 ± 0,1; 5,9 ± 0,2∗; 5,2 ± 0,2∗; 4,3 ± 0,1], Etx ipl [ 4,1 ± 0,1; 5,1 ± 0,1∗; 4,7 ± 0,2; 4,4 ± 0,1∗], ratos Adx tratados com Etx (1 mg/ kg) 1 h antes: Car ipl [ 4,8 ± 0,1; 4,9 ± 0,1; 4,4 ± 0,1; 4,3 ± 0,1∗], Etx ipl [ 3,7 ± 0,1; 3,7 ± 0,1; 3,6 ± 0,1 e 3,4 ± 0,1∗ ]. (∗ p < 0,05 comparados com tempo zero) Conclusões:

A amplitude do edema de pata induzido pela Car e pela Etx ipl, foi modificada tanto nos animais Adx pré-tratados com Etx quanto nos Adx não pré-tratados, sugerindo que esta resposta inflamatória pode ser influenciada pelos hormônios glicocorticóides originários das glândulas adrenais, influenciados pela Etx sitêmica, neste modelo experimental. 36.094 ASPECTOS MOLECULARES ENVOLVIDOS NO EFEITO HIPERNOCICEPTIVO INDUZIDO PELA ADMINISTRAÇÃO INTRADÉRMICA DE MORFINA. 1Sachs, D.; 2Svidzinski, A. E.*; 3Lisboa, S. F. S.*; 1Parada, C. A.; 1Cunha, F. Q.; 1Ferreira, S. H.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2Farmácia e Farmacologia UEM; 3Ciências Fisiológicas UEM Objetivo: A injeção subcutânea (s.c.) na pata de ratos de doadores de NO ou análogos do GMPc, causam antinocicepção sobre a hipernocicepção induzida por PGE2. Por outro lado, a administração (adm) intradérmica (i.d.) dessas substâncias causa efeito oposto, hipernocicepção. Dados recentes demonstram que a injeção i.d. de morfina (Mph) causa hipernocicepção. O efeito antinociceptivo causado pela adm s.c. de Mph tem sido associado à estimulação da via arginina/NO/GMPc que resulta em abertura de canais de potássio ATP sensíveis (K+ATP) mediada pela proteinoquinase G (PKG). Portanto o objetivo desse trabalho foi investigar se a ativação da via arginina/NO/cGMP/PKG/K+ATP participa do efeito hipernociceptivo induzido pela adm i.d. de Mph. Métodos e Resultados: Utilizando o teste de pressão mecânico eletrônico demonstramos que a injeção i.d. de Mph (10 µg/pata) em ratos (Wistar Machos, 180g) causa hipernocicepção, que atinge um pico hipernociceptivo 15-30 minutos (22.7±3.1 gramas, n=5) e retornando a valores basais em 45-60 minutos (5.6±1.8, n=5), após sua adm O pré-tratamento (30 minutos antes) dos animais com inibidor de NO sintase (L-NMMA, 50 µg/pata/i.d.) ou inibidor de guanilato ciclase (ODQ, 8 µg/pata/10 µl/i.d) inibem (80%; 6,6±0.6 gramas, n=5 para L-NMMA e 84%, 7.7±0.3 gramas, n=5 para o ODQ) a hipernocicepção aguda induzida pela adm i.d. de Mph (10 µg/pata). Entretanto, o pré-tratamento dos animais com inibidor de PKG (KT5823, 1.5 µg/pata/i.d.; 19.5±1.5 gramas, n=5) não inibe a hipernocicepção induzida pela administração i.d de Mph. Além disso, a adm i.d. de diazóxido (600 µg/pata, 7.3±1.9 gramas, n=5) não causa hipernocicepção Conclusões: Sugerimos que a ativação da via arginina/NO/cGMP, mas não da PKG e canais K+ATP, participa da hipernocicepção aguda induzida pela adm i.d. de Mph. 36.095 ATIVAÇÃO PERIFÉRICA DA VIA L-ARGININA/NO/GMPC INDUZ ANTINOCICEPÇÃO NO TESTE DA FORMALINA NA ATM DE RATOS. 1Clemente, J. T.; 1Oliveira, M. C. G.**; 2Parada, C. A.; 1Tambeli, C. H. 1Ciências Fisiológicas FOP-UNICAMP; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Verificar a atividade periférica da via intracelular L-Arginina/NO/GMPc na resposta nociceptiva induzida pela administração de formalina na ATM de ratos. Métodos e Resultados: Neste estudo foram utilizados ratos machos Wistar (200 e 300g), provenientes do CEMIB/UNICAMP. L-Arginina (L-Arg) (100, 300 e 900µg) e o doador de óxido nítrico, SIN-1 (100, 300 e 900µg) foram co-administrados com formalina (1,5%). O inibidor de óxido nítrico, L-NMMA (50, 150, 450µg) e o inibidor do GMPc, ODQ (8 e 80µg) foram co-administrados com formalina (1%). As respostas comportamentais nociceptivas caracterizadas pelo ato de coçar a região periarticular e levantar rapidamente a cabeça, foram quantificadas por 45 min através da utilização de um cronômetro e um contador, e após somadas, foram utilizadas como medida quantitativa única de dor (valor expresso em s; Pain, 94:185, 2001). L-Arg (300µg; média+EPM 92,39+5,66;

n=6) e o SIN-1 (100µg; 161,68+10,65; n=6), reduziram significativamente as respostas nociceptivas induzidas pela formalina (227,34 + 12,29; n=7); a injeção de L-Arg ou SIN-1 na ATM contralateral não afetou na magnitude do comportamento induzido pela formalina (229,77+5,3 e 199,69+2,6; respectivamente n=6 por grupo). O L-NMMA (900µg; 240,81+8,88; n=6) e o ODQ (80µg; 202,28+11,83; n=5) potencializaram o efeito nociceptivo induzido pela formalina (0.5%, 117,64+18,64; n=4). Conclusões:

Os resultados sugerem que a via intracelular L-Arg/ NO/GMPc quando ativada perifericamente apresenta um papel antinociceptivo nas respostas induzidas pela formalina na ATM de ratos. 36.096 ALTERED LEVELS OF RENAL BUT NOT MACROPHAGE AMINOPEPTIDASE ACTIVITIES UNDER DISCRETE NEPHROTOXICITY AFTER ADMINISTRATION OF CYCLOSPORIN. Marinho, C. E.; Olivo, R. A.**; Ribeiro-de-Andrade, T. N.*; Silveira, P. F.; Farmacologia Instituto Butantan Objetivo: The immunosuppressive drug, cyclosporin A (CsA), which is frequently used after organ transplantation, is known to enhance spreading of peritoneal macrophages (Mφ) and to exert a nephrotoxic effect. Aminopeptidase (AP) plays an important activity for Mφ and renal functions. Here we test the hypothesis that soluble (S) or particulate (M) APs participate within Mφ and renal effects induced by CsA. Métodos e Resultados: Healthy Swiss male mice were treated once a day with CsA (25 mg/kg) or ricine oil (control) subcutaneously during 21 days. After, a half of each group was chosen randomly to be submitted to the plasma and renal assays or to obtain Mφs. A half of each group separated to obtain Mφs received intraperitoneal injection of thyoglicollate (TGE). Resident (RE) and TGE Mφ were harvested by washing peritoneal cavities. Renal and Mφ AP activities were evaluated as well as hematocrit (H), and creatinine (Cn), uric acid (U) and osmolality (osm) of plasma. As results (mean±sem, n=10) CsA increased H (36.3%±1.2 to 41.8%±1.9) and osm (473.1±7.3 to 492.6±7.9 mOsm/kg) while Cn (0.23±0.02 or 0.25±0.06 mg/dL) and U (1.4±0.3 or 2.1±0.4 mg/dL) were unaltered. The activity levels of S and M APs detected in RE and TGE Mφs were unaffected by CsA. CsA increased neutral (1.96±0.14), basic (1.98±0.14), cystyl (3.00±0.44), prolyl imino (1.91±0.21) and piroglutamyl (1.64±0.08) S-APs in the renal cortex. Acid (2.23±0.38) and basic (1.19±0.07) S-APs increased in the renal medulla. Increased levels of M form in the cortex were detected for acid (1.40±0.05), pyroglutamyl (1.69±0.15) and cystyl (1.33±0.14) APs. CsA increased cortical S (1.94±0.31) while decreased medullar M (0.62±0.03) prolyl dipeptidyl IV AP activity. Conclusões: CsA effect on Mφ seemed unrelated to APs. The substantial changes on the levels of APs preceded and might contribute to the severity and progression of the nephrotoxicity induced by CsA. Data suggest that AP inhibitors can be further considered in a combination therapy with CsA. 36.097 JM24-1 AND JMF2-1, NON ANAESTHETIC LIDOCAINE DERIVATIVES ACTING ON AIRWAY SPASM AND LUNG ALLERGIC INFLAMMTION IN RATS. Costa, J. C. S.**; Siqueira, R. A.**; Carvalho, V. F.**; Alves, L. A.; Cordeiro, R. S. B.; Silva, P. M. R.; Martins, M. A. Fisiologia e Farmacodinâmica, FIOCRUZ Objetivo: The local anaesthetic (LA) lidocaine has glucocorticoid-sparing properties in atopic asthmatics, but the contribution of topical anaesthesia to this effect remains unclear. We have compared here the anti-inflammatory and spasmolitic activity of lidocaine with those of two structural analogues synthesized and screened for reduced LA activity. Métodos e Resultados: Blockade of Na+ currents was assayed in cultured GH3 cells under patch-clamp conditions. LA activity was screened in a cutaneous pitching test in rats. Lidocaine and analogues were nebulized into sensitized rats for evaluation of their effectiveness on allergen-evoked lung inflammation. In vitro effects on tissue histamine release, and blockade of anaphylactic tracheal contraction were also assessed. The IC50 values for blockade of Na

+ currents following

treatment with JM24-1 (5.2 mM) and JMF2-1 (25.4 mM) were remarkably higher than that of lidocaine (0.18 mM), consistent with the weak LA capacity of the analogues. Lidocaine, JM24-1 and JMF2-1 failed to alter allergen-evoked mononuclear cell infiltration but inhibited neutrophil (50, 80 and 75%, respectively) and eosinophil numbers (70, 75 and 75%, respectively) in the BAL fluid 24 and 48 h post-challenge respectively. Potency ranking for blockade of allergen-evoked histamine release was JMF2-1 (0.16) >> Lidocaine (4.5) > JM24-1 (5.3) (IC50, µM). Comparable effects were obtained for blockade of anaphylactic contraction. Conclusões: These findings show that airway anaesthesia alone does not explain attenuation of allergen-evoked inflammation and spasm by lidocaine, and suggest that JM24-1 and JMF2-1 may have clinical value for asthma therapy with distinct advantages over LAs. 36.098 MAST CELLS, CCL4, CCR5 AND IL-10 ARE INVOLVED IN THE CONTROL OF NEUTROPHIL MIGRATION TO PERITONEAL CAVITIES IN THE OVA IMMUNE MODEL. 1Fernandes, K. S.; 1Ramos, C. L.**; 1Vieira, S. M.**; 1Lemos, H. P.**; 2Silva, J. S.; 1Cunha, F. Q.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2Imunologia FMRP-USP Objetivo: A It is currently accepted that mast cells participate of adaptive immune responses, however the extension of these mechanisms in vivo remains to be elucidated. Thus, we have evaluated whether mast cells are involved in neutrophil (NΦ) migration in an immune model. Métodos e Resultados: Mice (both genders, 18-22g, 4 wk, n=5) were immunized as previously described. Briefly, at the 21th day of immunization, mice were challenged i.p. with OVA (10µg/cavity) or PBS and the NΦ migration determined 4 h after. Thereafter, RPA for CK and CKR was made in OVA IM at 1 h after challenge (CH). At 1.5 h, exudates were collected to measure the CCL4 and CCL5 by ELISA. To deplete mast cells, mice were treated i.p. with 4880 or H2O. Moreover, anti-CCL5, anti-CCL4 or an unrelated Ab (15 µg/cavity) were injected i.p. in IM 15 min before OVA CH. As earlier reported, OVA-IM presented a dose-dependent NΦ migration. At 1 hour of CH, a significant increase in mRNA for CCL3, CCL4 and CCL5 was observed in IM, compared to control. Increases in mRNA CCR1, but not CCR2 and CCR5, were also observed. Moreover, at 1.5 h after OVA CH CCL5 levels (0.5±0.01ngmL-1), but not CCL4, increased significantly in the exudates in IM compared to control. However, OVA-induced NΦ migration was amplified by treatment with anti-CCL4 (4.9±0.3x106), but not anti-CCL5 (3±0.2x106), compared to control (3.4±0.3x106). Interestingly, NΦ migration was higher in CCR5-/-(8±1.2x106) than in WT mice (4.6±0.6x106). Afterward, it was observed that mast cell depleted IM (4880, 23.5±5.3x106; H2O, 16.8±1.7x10

6) presented a higher OVA induced NΦ migration compared to undepleted mice (9.8±1.5x106). Finally, OVA-induced NΦ migration in IL-10-/- IM was significantly higher than the one of WT mice (7±0.05x106; 3.7±x106). Conclusões: Mast cells, CCL4, CCR5 and IL-10 downregulate antigen-induced peritoneal NΦ migration in immunized mice. 36.099 PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DO MÉTODO DO LAVADO BRONCOALVEOLAR INDUZIDO PELO TRATAMENTO SISTÊMICO COM LPS EM CAMUNDONGOS SUÍÇOS. Torres, J. C. S.; Fernandes, E. S.**; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: Foi demonstrado que o tratamento intranasal com LPS promove aumento tempo-dependente do influxo celular, principalmente de polimorfonucleares, para as vias aéreas de camundongos C57/BL6 (Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 279:L1083, 2000). O objetivo do presente trabalho foi avaliar o lavado broncoalveolar em camundongos Suíços após o tratamento endovenoso com LPS. Além disso, foram testadas drogas anti-asmáticas neste modelo. Métodos e Resultados: Camundongos machos Swiss (22-26g, N=8) receberam LPS (10 µg/animal) em diferentes intervalos de tempo (3-12h) após os quais, o lavado broncoalveolar (LBA) foi coletado. O LPS (6h)

aumentou significativamente o número total de células quando comparado com o grupo salina (S) (7,1 ± 1,1 e 1,4 ± 0,6 x 104, respectivamente). Da mesma forma, houve um aumento significativo no número de macrófagos (LPS; 6,8 ± 1,0 e S; 1,4 ± 0,6 x 104) e no número de linfócitos (LPS; 30 ± 5,7 e S; 6,4 ± 3,3 x 102) após a injeção e.v. de LPS. O tratamento com salbutamol (5 mg/kg, i.p., 30 min) foi capaz de bloquear o aumento do número total de células, e o número de macrófagos e linfócitos (82, 82 e 75%, respectivamente). O tratamento com dexametasona (0,5 mg/kg, s.c., 4h) também foi capaz de reduzir o número total de células e o número de macrófagos e linfócitos (49, 49 e 51%, respectivamente). Por sua vez, o tratamento com a teofilina (5 mg/kg, i.p., 30 min) não reduziu de forma significativa a migração celular em animais tratados com LPS. Conclusões: O tratamento e.v. com LPS é capaz de promover o aumento da população de células mononucleares nas vias aéreas de camundongos Suíços. Este aumento é sensível ao tratamento com drogas anti-asmáticas clássicas. Desta forma, o presente modelo parece ser uma ferramenta útil para o estudo de drogas com possível efeito antiasmático. 36.100 ANALGESIA E TOLERÂNCIA À MORFINA EM RATOS JUVENIS SUBMETIDOS À CIRURGIA. 1Dantas, G.; 2Stenzel, B.*; 3Rossi, G.*; 3Moehlecke, M*; 5 Rozisky, J.**; 3Dallegrave, G. J.*; 1Dallegrave, E.; 4Torres, I. L. S.; 1Ferreira, M. B. C.; 1Farmacologia UFRGS; 2Veterinária, UFRGS; 3Medicina UFRGS; 4Farmacologia, UNIVATES Objetivo: A resposta nociceptiva de animais juvenis e bebês humanos a diferentes estímulos nocivos tem sido pouco estudada. O objetivo desse trabalho foi avaliar analgesia e tolerância à morfina em ratos de 21 dias submetidos à cirurgia. Métodos e Resultados:

Os animais foram alocados em três grupos: controle, cirurgia e anestesia e receberam, por via i.p., três doses de morfina (2,5mg/kg, 5,0mg/kg e 7,5mg/kg) ou salina imediatamente após a cirurgia e nos sete dias seguintes. Foram realizadas medidas de latência de retirada da cauda (TFL) imediatamente antes da cirurgia (basal), 30, 60 e 90 minutos após a injeção. No sétimo dia, foram obtidas medidas basais (pré-injeção), 30, 60 e 90 minutos pós-injeção. Não houve diferença nos valores basais iniciais. Aos 30 minutos, o cirurgia/salina (n=16 média=7,84 EPM=0,52) diferiu do controle/salina (n=14 média=5,13 EPM=0,35). Os grupos cirurgia/morfina 2,5mg/kg (n=15 média=8,60 EPM=0,51) 5mg/kg (n=19 média=9,22 EPM=0.37) e 7,5 mg/kg (n=19 média=9.52 SEM=0.28) foram diferentes do controle/salina e dos seus respectivos controles, observando-se também aumento de TFL. Aos 60 minutos, os grupos cirurgia/morfina 2,5mg/kg (média=7,85 EPM=0,57), 5mg/kg (média=7,98 EPM=0,56) e 7,5mg/kg (média=8,23 EPM=0,58) diferiam dos grupos anestesia/salina (média=3,71 EPM=0,27) e controle/salina (n=5,25 EPM=0,73), com maiores latências. Aos 90 minutos, não houve diferença entre os grupos. No sétimo dia, não houve diferença entre os grupos nos diferentes tempos em que as medidas de TFL foram obtidas. Conclusões:

Sugere-se que a cirurgia tenha produzido analgesia induzida por estresse e que esse fenômeno tenha se somado ao efeito analgésico agudo da morfina (observado no 1º dia). Propõe-se também que a administração diária de morfina por sete dias em ratos jovens tenha induzido tolerância ao efeito analgésico do fármaco, o que foi observado nas medidas de TFL do sétimo dia. 36.101 PARTICIPAÇÃO DA VIA NO-GMPC NO EFEITO ANTINOCICEPTIVO DA DEXMEDETOMIDINA. Rangel, R. A. S.**; Tano, T.; Resende, A. C.; Lemos Neto, M.; Soares de Moura, R.; Farmacologia e Psicobiologia UERJ Objetivo:

A dexmedetomidina (DEX) é um derivado imidazólico agonista α2-adrenérgico, oito vezes mais seletivo que a clonidina para esse receptor, usado clinicamente como adjuvante da anestesia. Como a clonidina apresenta efeitos sedativo e antinociceptivo modulado pelo NO-GMPc (Soares de Moura et al, Anesth. & Analg. 93:1217-21, 2001; Pharmacol. Bioch. Behav. 78:247-53, 2004), neste trabalho investigamos a participação da via NO-GMPc no efeito antinociceptivo da DEX. Métodos e Resultados:

O efeito antinociceptivo da DEX foi avaliado pelo teste das contorções abdominais induzidas pelo ac. acético como descrito por Koster et al. (Fed. Proc. 18:412, 1959). A resposta nociceptiva foi expressa pelo número de contorções apresentadas pelos camundongos (Swiss; 20-30g) durante 10 min, iniciando a contagem 5 min após a administração ip de ac. acético 0,8%. Na maior dose empregada (10µg/Kg) a DEX iv reduziu (P<0,01) o número de contorções (6,3±1,3; n=6) quando comparado com o controle (44,4±1,7; n=6). O pré-tratamento com 7-NI (30mg/Kg; n=6), um inibidor da NO sintase ou ODQ (2,5mg/Kg; n=6), um inibidor da guanilato ciclase reduziu (P<0,01) o efeito antinociceptivo da DEX (10µg/Kg) para 21,3±1,5 e 35,8±3,2, respectivamente. O pré-tratamento com glibenclamida (1mg/Kg; n=6) também reverteu a antinocicepção, aumentando as contorções de 5,3±1,4 para 30,2±2,4. Em adição, o bloqueio dos receptores α2-adrenérgicos ou muscarínicos pela ioimbina (1mg/Kg) ou atropina (2mg/Kg) também inibiu o efeito antinociceptivo da DEX (5,5±1,5 vs 39,1±1,5 ou 30,2±2,4, respectivamente). No entanto a naloxona (0,2mg/Kg) não modificou o efeito antinociceptivo da DEX. Conclusões:

Nossos resultados demonstram a participação dos receptores α2-adrenérgicos, muscarínicos, da via NO-GMPc e dos canais de K+ ATP-dependentes no efeito antinociceptivo da DEX 36.102 ATIVIDADE ANTINOCICEPTIVA DA MISTURA DOS TRITERPENOS A- E B-AMIRINA DE PROTIUM HEPTAPHYLLUM MARCH NO MODELO DE DOR VISCERAL INDUZIDA POR ÓLEO DE MOSTARDA. Lima Jr., R. C. P.; Oliveira, F. A.**; Lima, A. F.*; Oliveira, B. B.*; Soares, L. L.*; Amorim, J. T.*; Rao, V. S. N.; Santos, F. A. Fisiologia e Farmacologia UFC Objetivo: O trabalho avalia o efeito antinociceptivo da mistura dos triterpenos α- e β-amirina no modelo de dor visceral induzida por óleo de mostarda e o possível envolvimento do sistema opióide como mecanismo de ação. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss, machos, 20-25 g, divididos em grupos de 8-10 animais, foram pré-tratados com α- e β-amirina (3, 10, 30 e 100 mg/kg, v.o.), veículo (3% Tween 80 em água destilada, 10mL/Kg) ou morfina (5 mg/kg, s.c.) 1,5h; 1,5h e 30min, respectivamente, previamente à instilação intracolônica de óleo de mostarda (0,75% em salina, 50 L/animal). Os animais foram observados, por 20 min, quanto ao número total de expressão dos seguintes comportamentos: lamber o abdômem, arrastar o abdômem contra o solo, contorção e assunção de posição arqueada. Os resultados indicam uma redução significativa (p<0,01) do número total de comportamentos pelos animais tratados com α- e β-amirinas (15,29 ± 3,78; 18,4 ± 3,77 e 21,57 ± 3,85) nas doses de 10, 30 e 100 mg/kg, respectivamente, e morfina (2,14 ± 0,86) quando comparados ao grupo controle (39,28 ± 3,26). Para o estudo do possível envolvimento opióide na ação antinociceptiva, os animais receberam naloxona (2 mg/kg, i.p.) 30min antes da administração de morfina (5 mg/kg, s.c.) ou dos triterpenos (10 mg/kg, v.o.). Após 30 min e 1h, respectivamente, foi instilado o óleo de mostarda. A naloxona promoveu a reversão parcial (p<0,05) do efeito antinociceptivo dos triterpenos (32,25 ± 7,74) e da morfina (19,38 ± 6,32), comparados respectivamente aos grupos que receberam somente triterpernos (15,29 ± 3,78) ou morfina (2,14 ± 0,86). Conclusões:

Os dados revelaram o efeito antinociceptivo da mistura de α- e β-amirina, mediado parcialmente pelo sistema opióide, neste modelo de dor visceral. 36.103 PROPRIEDADE ANALGÉSICA DA LECTINA DA ALGA MARINHA VERMELHA AMANSIA MULTIFIDA LAMOUROUX. 1Vale, T. S. P.; 1Correia, M. V. O*; 1Macedo, M. L. A. P.*; 1Sampaio, D. A.*; 1Rocha, D. S. A.*; 1Neves, S. A.; 2Freitas, A. L. P.; 3Viana, G. S. B.; 1Fisiologia e Farmacologia, Faculdade Medicina Juazeiro do Norte; 2Bioquímica e Biologia Molecular UFC; 3Farmacologia, UFC Objetivo: Estudar a atividade analgésica periférica e central da lectina de alga marinha vermelha Amansia multifida (AM). Métodos e Resultados:

A atividade analgésica da lectina de AM foi determinada, em camundongos Swiss, pelos seguintes testes: placa quente, teste das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético e formalina. No teste de placa quente, foi observado que a lectina de AM nas doses de 1 e 5 mg/Kg i.p. e 5 mg/Kg v.o. aumentou o tempo de reação ao estímulo térmico em relação ao controle em 122% e 50% (T30); 72% e 55% (T60); 79% e 78% (T90), nas doses de 1 e 5 mg/Kg i.p., respectivamente e 98% (T60) e de 72% (T90), na dose de 5 mg/Kg v.o. No teste das contorções abdominais, os resultados obtidos para a lectina de AM, nas doses de 5, 10 e 20 mg/kg (i.p.), sugerem um efeito analgésico dose-dependente, consideradas as percentagens de inibição das contorções abdominais da ordem de 79, 87 e 81 %, respectivamente. Por via oral, os resultados alcançados foram tão expressivos quanto os obtidos por via intraperitoneal. No teste da formalina, o efeito inibitório do tempo de lambedura de pata, foi mais intenso na 2.a fase em todos os grupos testados i.p. e v.o., exceto para aquele utilizando a dose de 1 mg/Kg v.o., onde não houve inibição , a melhor resposta foi obtida com a concentração de 2 mg/Kg (i.p), com uma taxa de inibição de 87%. A naloxona, antagonista opióide, aboliu parcialmente a atividade analgésica da AM, como observado também para a morfina. Conclusões: Esses dados sugerem que o efeito antinociceptivo parece envolver receptores opióides O conjunto de resultados alcançados no presente trabalho mostrou que a lectina de AM pode ser considerada como possuidora de efeito antinociceptivo, com ação periférica e central. 36.104 AVALIAÇÃO DO TRATAMENTO DA ARTRITE INDUZIDA POR ADJUVANTE COMPLETO DE FREUND EM RATOS LEWIS COM EXTRATO HIDRO-ALCOÓLICO DE Brosimum acutifolium. Albuquerque, B. S.; Torres, C. R. B.*; Passos, I. M.*; Brandão, P.G.*; Passos, L. F.**; dos Santos, M. C.; Imunologia, Microbiologia e Parasitologia UFAM Objetivo: A espécie Brosimum acutifolium é utilizada popularmente na Amazônia para tratamento de doenças reumáticas. Objetivamos avaliar a curva dose-reposta do extrato hidro-alcoólico da casca de Brosimum acutifolium em ratos Lewis com artrite induzida por adjuvante. Métodos e Resultados: Ratos Lewis machos e fêmeas foram injetados por via intradérmica na base da cauda com 0,1 mL de solução de 100 mg de Mycobacterium bovis emulsificados em 10 mL de óleo mineral (Difco, USA), e randomicamente divididos em grupos-teste, tratados com 6,75 mg/Kg (Bros0,3), 22,5 mg/Kg (Bros1) e 67,5 mg/Kg (Bros3) de extrato hidro-alcoólico de Brosimum acutifolium; grupos controles tratados com 0,05 mg/kg de dexametasona (Dex), 0,05 mg/kg de metotrexate (Mtx) e 0,3 mg/kg de piroxican (Pir); e grupos controle-positivo tratados com água. A administração das substâncias ocorreu pelo método de gavagem a partir da data de indução da artrite. Durante 28 dias foram analisados os diâmetros dos tornozelos posteriores dos animais com micrômetro Mitutoyo. Verificou-se que o grupo Bros3 apresentou uma resposta de inibição da artrite semelhante ao grupo Mtx, e menor que o grupo controle positivo, porém sem significância estatística. Os animais tratados com Dex e Pir quando comparados com os tratados com Bros3 e Mtx apresentaram uma inibição significativamente maior (F(18, 228) = 9,87; p<0,001). Os machos do grupo Bros3 apresentam uma tendência de redução da artrite maior que das fêmeas do mesmo grupo. Os grupos Bros0,3 e Bros1 não apresentaram inibição significativa da artrite. Conclusões: O extrato hidro-alcoólico de Brosimum acutifolium na dose 67,5 mg/kg demonstrou uma tendência de inibir a artrite induzida por adjuvante, com resposta semelhante ao metotrexate, sugerindo em próximos experimentos o uso de doses maiores (Bros5 e Bros10), apenas em animais machos. 36.105 NEUROKININS AND NITRIC OXIDE MODULATE AIRWAY REMODELING IN A MODEL OF LUNG ALLERGIC INFLAMMATION. 1Prado, C. M.; 1Leick-Maldonado, E. A.; 2Capelozzi, V. L.; 1Martins, M. A.; 1Tiberio, I. F. L. C.; 1Clínica Geral FMUSP; 2Patologia USP Objetivo:

We previously showed that L-NAME increased airway collagen deposition induced by chronic inflammation. In this study we evaluated if neurokinins (NK) and cNOS or iNOS-derived NO modulate airway remodeling. Métodos e Resultados: Methods: NK depletion was performed by capsaicin (CAP) and 14 days after, GP were inhaled with ovoalbumin (OA) or normal saline (NS) 2x/wk/4wks. Chronic L-NAME (NO inhibitor-L) was given in drinking water after 4th inhalation (OA-L and NS-L groups). Chronic 1400W (iNOS inhibitor-W) was given daily i.p. beginning on 7th inhalation (OA-W or NS-W groups). After 72 hours, GP were challenged with OA or NS, lungs were removed and stained with PicroSirius or Resorcina-Fucsine. We measured the area (m2) of collagen and elastic fibres in 8-10 airways/GP through Image Analysis. Mean values of collagen and elastic were expressed by %. Results: Airway area and % of collagen and elastic fibres was increased in OA compared to NS (p<0.05). There were no differences in airway area in OA groups.

GROUPS % of collagen fibers % of elastic fibers

OA 9.20 13.89

CAP-OA 1.7* 7.2*

OA+L 13.5* 11.8

CAP-OA+L 11.9*, ** 8.7

OA+W 2.4* 9.7*

CAP-OA-W 0* 8.1*

Versus OA (P<0.05), **versus CAP-OA (P<0.05). Conclusões: NO derived from cNOS reduced collagen deposition. NK and iNOS-derived NO contribute to airway remodeling increasing both collagen and elastic deposition. Probably the effects of NK in collagen deposition are, at least in part, mediated by NO. 36.106 CARACTERIZAÇÃO DE MODELO DE "AFTERSENSATION" AO CALOR EM RATOS. Bastos, L. C.; Tonussi, C. R. Farmacologia UFSC Objetivo: Aftersensation é a dor evocada que persiste após o término do estímulo, o que difere de hiperalgesia que é uma resposta exacerbada a um estímulo doloroso. Pretendemos nesse trabalho demonstrar um modelo para o estudo da aftersensation. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (180-250g), n=6, receberam injeção intraplantar (i.pl.), 50 µl, de PGE2 250 ng/pata, ou solução de etanol 1% (controle). A nocicepção foi avaliada imediatamente após i.pl. durante 5 min pelo número de lambidas e sacudidas da pata (NLS) e a sensibilidade ao calor (imersão em água a 45, 47 ou 50 °C, durante 5, 7 ou 10 s) pelo NLS (5 min.) a cada hora por 6 h. Indometacina (indo: 0,5, 1 e 2,5 mg/Kg; i.p.) ou solução de bicarbonato de sódio 1,29% (controle) foram administrados 1 h antes da i.pl. e a sensibilização térmica foi induzida por imersão a 50 C/10 s. Resultados de sensibilização térmica são apresentados pelo NLS na 4ª hora. PGE2 e controle não causaram sensibilidade térmica (1-6 h) com: 45 °C/10 s (0±0 e 0,2±0,2); 47°C /10s (0,67±0,67 e

0,2±0,2); 50°C /5 s (1±0,45 e 0,33±0,33); 50 °C/10s causou sensibilização do grupo PGE2 e controle respectivamente: (6,0±1,71 e 4,67±1,36); 50 °C/7s causou aftersensation somente no grupo PGE2: (8±2,54 e 1,17±0,48). Indometacina (2,5 mg/kg) bloqueou tanto a nocicepção inicial ( NLSPGE2:25,67±2,39 e NLSPGE2+indo: 5,83±2,32), quanto a sensibilização tardia (NLSPGE2:6,0±1,71 e NLSPGE2+indo: 2.87±1,12). Conclusões:

PGE2 i.pl. com exposições seguidas em água 50 °C / 7 s causou aftersensation, sem afetar o grupo controle. A indometacina 2,5 mg/Kg preveniu a instalação do quadro de hiperalgesia decorrente de estímulos térmicos repetidos, assim como a nocicepção inicial, sugerindo um mecanismo de ação central. O modelo demonstra uma nova concepção para estudos nociceptivos, sendo possível a avaliação da aftersensation, que dificilmente é avaliada em modelos animais. 36.107 ENDOTHELIN-1 CAUSES PROLONGED HYPERNOCICEPTION TO THERMIC, CHEMICAL AND MECHANICAL STIMULI IN THE MOUSE HINDPAW. 1Frighetto, M.; 2Rae, G. A.; 1CBS-UNOESC; 2Farmacologia UFSC Objetivo: Endothelin-1 (ET-1) causes ETA receptor-mediated overt nociception and hypernociception to capsaicin in the mouse hindpaw (Piovezan et al., Br. J. Pharmac., 129: 961-968, 2000). The current study evaluates if ET-1 is also capable of evoking hypernociception to mechanical and heat stimuli, as well as the possible time courses of such changes in responsiveness to each of these stimuli and capsaicin. Métodos e Resultados: Male Swiss mice received intraplantar (i.pl.) injection of ET-1 (10 pmol) or PBS and were tested at various moments after treatment for nocifensive responses evoked by 20 W radiant heat (i.e. paw withdrawal latency), capsaicin (0.3 ug; paw licking time) or mechanical stimulation (Von Frey hairs, up and down method). Unlike PBS, ET-1 evoked long-lasting increases in nocifensive responsiveness to all three stimuli, starting 1 to 3 h after injection and lasting at least up to 8 h, for heat (peak reduction in paw withdrawal latency, relative to baseline –4.1 0.6 s, at 8 h) and mechanical stimulation (reduction of 50% mechanical threshold from 1.48 0.21 to 0.38 0.08 g, at 8 h), or 12 h for capsaicin (peak increase in licking time from 23.4 3.5 to 69.7 7.8 s, at 6 h) after injection. No hypernociception to these stimuli was evident at 24 h after ET-1 injection. Conclusões: These results indicate that i.pl. ET-1 causes remarkably long-lasting hypernociception to stimulation of triggered in the hindpaw by radiant heat, mechanostimulation or capsaicin. This hypernociception outlasts by far the overt nociceptive effects of the peptide. The identity of the receptors involved in ET-1-induced hypernociception to each stimulus remains to be determined. 36.108 FORMALINA E PGE2 MAS NÃO CAPSAICINA CAUSAM "AFTERSENSATION" AO CALOR EM RATOS. Bastos, L. C.; Tonussi, C. R. Farmacologia UFSC Objetivo: Aftersensation é um fenômeno bastante comum em pessoas que sofrem de dores neuropáticas, entretanto, o estudo desse fenômeno é bastante restrito devido carência de modelos animais adequados. Nosso modelo propõe a indução de nocicepção leve e sensibilizações térmicas seguidas que causam aftersensation por sensibilização central. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (180-250g); n=6, receberam injeção intraplantar (i.pl.; 50µl) de formalina 0,5%, capsaicina 1,6 µg/pata, PGE2 250 ng/pata. A nocicepção foi avaliada pelo número de lambidas e sacudidas da pata (NLS) imediatamente após a i.pl. durante 5 min. A sensibilização ao calor (imersão em água; 50 °C / 7s) foi avaliada pelo NLS a partir da 2ª h, a cada hora durante 6 h. Indometacina (2,5 mg/Kg; i.p.) foi administrada 1 h antes da i.pl. Os grupos controle receberam veículos pela mesma via. Aftersensation após estímulo térmico ocorreu apenas pela i.pl.de formalina e PGE2 em relação aos seus controles, obtido pelo NLS na 4ª h: (4,5±0,67 e 0,33±0,33; 8±2,54 e 1,17±0,48, formalina e PGE2 respectivamente). Apesar do tratamento prévio com indometacina não alterar o NLS inicial

da formalina (27,83±3,28 e 25,83±3,84) e da capsaicina (36,83±4,72 e 36±4,39), foi capaz de bloquear a aftersensation induzida pela formalina (2±0,86 e 1±0,52). Conclusões:

Os resultados mostram que apesar de formalina, capsaicina e PGE2 causarem nocicepção inicial de intensidade semelhante, a capsaicina não causou aftersensation após estímulos térmicos repetidos, sugerindo que a aftersensation não é dependente da nocicepção inicial. Além disso a liberação local de prostaglandinas parece ser fundamental para este processo, pois formalina e PGE2 induziram o processo e indometacina bloqueou o efeito da formalina. 36.109 FEVER TO CINC-1 IN RATS: EFFECT OF ANTIPYRETICS AND FUCOIDAN. Soares, D. M.; Machado, R. R.**; Souza, G. E. P. Física e Quimica Farmacologia FCFRP-USP Objetivo: AIM: Cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1 (CINC-1), like MIP-1α and IL-8, acts as cell activator and chemoattractant though there is no evidence that CINC-1 evokes fever. The ability of CINC-1 to evoke fever when administered i.c.v. (intra-cerebroventricular or i.h. (intrahypothalamic) and the effect of ibuprofen (IBU), indomethacin (INDO), dexamethasone (DEXA) and fucoidan (FUCO, a selectin synthesis inhibitor) on this response was investigated. Métodos e Resultados: Male Wistar rats (≈200 g) received either i.c.v. (3 µl) or i.h. (0.5 µl) different doses of CINC-1 diluted in saline (control animals). The values are mean±s.e.m. of 4-8 animals. Rectal and skin tail temperatures were measured for up to 6 h by telemetry. I.c.v. injection of CINC-1 induced a dose dependent increase in rectal temperature of rats during the whole period of observation (3a h, °C, 1ng: 0.12±0.1; 5ng: 0.8±0.3; 25 ng: 1.06±0.2; 50 ng: 1.3±0,2). INDO (2 mg/kg, i.p.) and IBU (10 mg/kg, i.p.) given 30 min before reduced the fever induced by i.c.v. injection of 25 ng of CINC-1 (3a.h,°C, CINC-1+vehicle: 0.78±0.05; CINC-1+INDO: 0.3±0,07 CINC-1+IBU: 0.2±0.04). I.h. injections of CINC-1 induced a bell-shaped dose dependent increase in rectal temperature of rats (3a h, °C, 5 pg: 1.1±0.5; 12.5 pg: 0.95±0.2; 25 pg: 1.8±0.4; 50 pg: 0.8±0.5; 200 pg: 0.75±0.3). I.h. injection of 25 pg of CINC-1 simultaneously increased rectal and decreased skin tail temperature of rats (2a h, °C, rectal: 1.8±0.4; tail skin: -0.63±0.07). DEXA (0.5mg/kg, s.c.) given 1 h before reduced the fever induced by i.h. injection of 25 pg of CINC-1(4a h, °C, CINC-1 +vehicle: 1.97±0.23; CINC-1+DEXA: 0.91±0.19). FUCO did not alter this response. Conclusões: Centrally injected CINC-1 promotes a thermoregulatory response characterized by an increase in body temperature and decrease in skin tail temperature namely, fever. This fever seems to depend on PGs synthesis and probably other pyrogenic mediators but not on selectin expression. -Santos, DR et al., 2003 Br J.Pharmacol 139:271 36.110 EVALUATION OF THE MYOTOXIC, PROTEOLYTIC AND PHOSPHOLIPASE ACTIVITIES OF DIEFFENBACHIA PICTA SCHOTT JUICE. Lacerda, E. D.; Pereira, N. A.*; Fernandes, F. F. A.*; Pinheiro, D. A.*; Sanches, F. V.; El Kik, C. Z.*; Tomaz, M. A.*; Fernandes, P. D.; Melo, P. A. Farmacologia Básica e Clínica ICB-UFRJ Objetivo:

We investigated the phospholipase, proteolytic and myotoxicity activities of the steam crude juice, of a fresh, a defrozen sample and the ether extract of Dieffenbachia picta Schott. The poisoning by Dieffenbachia picta Schott juice, which is chewed by pets or child leads to an acute inflammation response, severe enough to produce glottis obstruction, respiratory compromise and death. Métodos e Resultados:

The myotoxicity was evaluated in vivo by intramuscular injections of 100 µL of the juice. Before and 2 h after, the animals were anesthetized with diethyl ether and the blood was collected by orbital puncture. The plasma was separated by centrifugation and stored at 4°C for subsequent determination of creatine kinase (CK) activity. Intramuscular injection of D.picta juice increased the plasma CK activity from the control level 243.73 + 18.26 U/L to 2915.27 + 53,24 and 2758.56 + 36.77 for the defrozen sample(n=10 for each group). The evaluation of phospholipase activity was

performed by the modified turbidimetric method (Marinetti 98:554, 1964) and the proteolytic activity by Kunitz method (1947) modified and adapted (Garcia et al., 1978). D. picta juice concentration response curve was determined (wild, 1/10, ether extract) prepared in physiological saline solution. The results were expressed as % of the activity compared to Bothrops jararacussu venom (10 µg/mL) control and D. picta did not show any proteolytic or PLA2 activities. Conclusões: Although d.picta inuced a direct myotoxic effect in mice, our data in vitro showed that the crude juice was dvoid of proteolytic or phospholipase activities 36.111 INHIBITION OF PROSTAGLANDIN F2α RELEASE BY SELECTIVE CYCLOOXYGENASE 2 INHIBITORS ACCOUNTS FOR A REDUCED LEUKOCYTE MIGRATION IN RATS. Menezes, G. B.**; Santos, J. M. M.; Reis, W. G. P.; Francischi, J. N. Farmacologia, UFMG Objetivo:

To investigate whether selective cyclooxygenase 2 (COX 2) inhibitors would play a role in a model of leukocyte migration in rats. Métodos e Resultados:

E. coli lypopolysaccharide (LPS; serotype 0111B4) or prostaglandin (PGE2 and PGF2) were intraperitoneally injected at time zero in adult female Holtzman rats. The animals (n>3/group) were previously treated (½ h before) by subcutaneous route with unspecific (indomethacin, piroxicam), selective COX 1 (SC560) or COX 2 (celecoxib, rofecoxib, SC236) inhibitors and compared with their respective controls. Total (cells/ mm3) and specific (%) cell numbers were obtained under optical microscopy on samples from peritoneal lavage fluid collected at different time intervals over 24 h. Compared with controls, LPS induced a dose (0.03 – 3 g/cavity) and time-dependent increase in leukocyte number (C=12.0±1.3; LPS 0.3=19,0±2.5, ANOVA, p<0.05), which was related predominantly to neutrophil (50 %) and to a lesser extent to macrophage increase. Only the animals treated with selective COX 2 inhibitors and indomethacin showed a significant reduction in leukocyte numbers following 6 h of administration (0.3 µg LPS/cavity). To further verify whether prostaglandins would be involved in leukocyte migration, prostaglandins E2 and F2 (PGF2; 1- 1000 nanogram/cavity) were injected into the peritoneum and the cell number was compared with vehicle-injected animals. Only PGF2α was able to induce neutrophil increase (C=2.75±0.09; PGF2α(100ng)=13.35±2,78) following 3 h of injection. In addition, intraperitoneal reposition of PGF2 restored the abrogated leukocyte response to LPS, shown by animals pretreated with rofecoxib. Conclusões:

Our data suggests that COX 2, through PGF2 release, is the important isoform for neutrophil recruitment in the rat model of LPS-induced inflammation. 36.112 TOLL-LIKE RECEPTOR 4 SIGNALING IS ASSOCIATED WITH NEUTROPHIL MIGRATION IMPAIRMENT AND SEVERITY OF POLYMICROBIAL SEPSIS. 1Alves-Filho, J. C.; 1Moreno, S. E.**; 1Freitas, A**; 1Spiller, F.**; 2Russo, M.; 1Cunha, F. Q. 1Farmacologia FMRP-USP; 2Imunologia ICB lll-USP Objetivo: We have showed that experimental severe sepsis is associated with impaired neutrophil recruitment into infectious site and high mortality rate. This phenomenon appears to be mediated by excessive release of proinflammatory chemokines/cytokines and a concomitant increase of nitric oxide derived from inducible nitric oxide synthase. Toll-like receptor 4 (TLR4) is the major recognition receptor for LPS, a component of Gram-negative bacterial cell walls. In the present study we investigated whether TLR4 is involved in the failure of neutrophil migration in mice with polymicrobial sepsis due to cecal ligation and puncture (CLP) or to polymicrobial inoculation (PI), or with Gram-negative infection (GNI). Métodos e Resultados: TLR4-deficient (C3H/HeJ) or TLR4-normal (C3H/HePas) mice were used. Our findings indicate that TLR4-deficient mice presented incapacity to promote neutrophil recruitment to infectious site after a sub-lethal GNI (C3H/HeJ: 0.4±0.1; C3H/HePas: 5.8±0.8 cellsx106/cavity), resulting in high mortality (100%). However, TLR4 signaling is not essential to display neutrophil migration in sub-lethal

polymicrobial sepsis induced by both CLP and PI models (CLP= C3H/HeJ: 11.2±1.3; C3H/HePas:14.9±1.9/ PI= C3H/HeJ:4.4±0.9; C3H/HePas:5.0±1.1 cellsx106/cavity), but surprisingly, it is crucial to establish the impairment of neutrophil migration in lethal polymicrobial sepsis. We observed that differently from TLR4-normal, the TLR4-deficient mice underwent to lethal CLP or PI did not present failure of neutrophil migration to infectious focus (CLP= C3H/HeJ:10.2±1.2; C3H/HePas:2.6±0.8/ PI= C3H/HeJ: 6.2±0.4; C3H/HePas: 1.6±0.2 cellsx106/cavity). As consequence they present reduced bacteremia (53%) and systemic inflammation, since circulating levels of TNF-α, MIP-2 and lung neutrophil sequestration were diminished 63%, 52% and 51% respectively, resulting in enhanced survival rate (45%). Conclusões: Our results show that TLR4 signaling is detrimental to polymicrobial sepsis, while it is critical to the control of a local Gram-negative infection. Thus, we envisage that the development of specific TLR4 antagonists might have potential therapeutic value for the treatment of polymicrobial sepsis. 36.113 THE ROLE OF SEX HORMONES IN FORMALIN-INDUCED TMJ NOCICEPTION IN RATS. Fischer, L; Clemente, J. T.**; Tambeli, C. H.; Veiga, M. C. F. A. Ciências Fisiológicas FOP-UNICAMP Objetivo: Although the involvement of sex hormones in orofacial pain modulation is suggested by many studies, the literature in this area is still controversial. The aim of the present study was to verify the role of sex hormones in formalin-induced TMJ nociception in rats. The influence of physiological hormonal levels, gonadectomy and hormonal replacement was evaluated. Métodos e Resultados: This study was carried out in males and females (180-280g) Wistar rats. Female diestrous and proestrus phases were determined by daily microscope examination of vaginal smears. These phases were chosen because they represent phases of high and low ovarian hormonal level, respectively. Gonadectomy was performed on male and female rats (21 days of age) and hormone replacement on gonadectomized (Gdx) mature rats by seven daily subcutaneous injections of estrogen, progesterone or testosterone, mature animals. The nociceptive behavior response characterized by flinching the head and rubbing the periarticular region were quantified for 45 minutes (value expressed in seconds) and taken together as a quantitative nociceptive behavior measure (Pain, 94: 185, 2001). The data were analyzed by a one-way analysis of variance and Tukey post-hoc tests (p < 0.05). Diestrus females (mean + EPM: 451.5 + 44.5, n=6) exhibited significantly greater nociceptive response than either males (262.1+ 51.1, n=4) or proestrus females (240.3 + 17.1, n=4). Gdx females (416.6 + 20.3, n=6) exhibited a nociceptive responde similar to that of diestrus females. Estrogen (278.5 +22.1, n=6) and progesterone (244.0 + 21.1, n=6) replacement blocked the enhancement of nociceptive response observed in Gdx females. In male rats, there was no significant difference between gonadectomized (216.8+ 8.1, n=6) and naïve (262.1+ 51.1, n=6) animals, although testosterone replacement (28.897+ 2.486n=6) significantly decreased the nociceptive response. Conclusões: The present findings suggest that females are more sensitive than males to the antinociceptive effects of sex hormones in formalin-induced TMJ nociception. 36.114 LIDOCAINE AND JM24-1 INHIBIT ALLERGIC AIRWAY RESPONSES IN MICE. Campos P. B.; Lima, M. C. R.; Serra, M. F.**; Pires, A. L. A.; Costa, J. C. S.**; Siqueira, R. A.**; Cordeiro, R. S. B.; Silva, P. R. M.; Martins, M. A. Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ Objetivo: Aim: Local anaesthetics (LA), particularly lidocaine (Lido), have received interest as possible new class of pharmacological agents for the treatment of asthma. We sought to study here the putative anti-asthma effects of Lido and JM24-1, a Lido analogue synthesized and screened for reduced LA activity. Métodos e Resultados: Sensitized and boosted DBA2 mice were subjected to 3 daily aerosol provocations with ovalbumin (2% OVA, 30 min) starting at day 19 after sensitization. In the first treatment regime employed

(TR1), Lido or JM24-1 (5%, 30 min) was aerolized concomitantly and 8 h post-provocation. In the second (TR2), these treatments were done only at the last provocation day. We measured AHR to metacholine by whole-body plethysmography and determined total and differential leukocyte numbers in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF), blood and bone marrow (BM) 24 h after the last challenge. Our data demonstrated that the curative treatment (TR2) with Lido or JM24-1 inhibited eosinophil influx into the BALF. Values for saline treated group were 286 ± 78 x10-3, for Lido 82 ± 37 x10-3 (p<0.05) and for JM24-1 52 ± 36 x10-3 (p<0.05). Values for eosinophil counts after TR1 are summarized on Table 1.

Group

BALF (x103)

Blood (x103/mm

3)

BM (x106/femmur)

Sal 0 ± 0 0.21 ± 0.03 0.11 ± 0.04 Ova + saline 251± 107+ 1.73 ± 0.34 + 1.50 ± 0.4+ Ova + JM 24-1 15 ± 5*

1.13 ± 0.12*

0.18 ± 0.03*

Mean ± SEM for 7 mice per group. + and * statistically significant compared to sal and ova, respectively. Conclusões: Aerosolized lidocaine and JM24-1 inhibits allergen-induced lung eosinophilic inflammation and airway hyperreactivity showing great potential to control experimental asthma even in curative treatment regimes. Financial support: FAPERJ, CNPq and PDTIS

36.115 ANÁLISE DO EFEITO DA SOLUÇÃO HIPERTÔNICA (SH) NA EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS ATIVADAS POR CHOQUE TÉRMICO (HSPS) E ATIVIDADE DE METALOPROTEINASES (MMPS) NO PULMÃO EM PANCREATITE EXPERIMENTAL. Moretti, A. I. S.; 2 Rios, E. C. S.*; Soriano, F. G.; Souza, H. P.; Velasco, I. T. Clínica Médica FMUSP Objetivo: Complicações respiratórias são freqüentes e graves na pancreatite aguda (PA), e o fator que mais contribui para a mortalidade precoce da doença. A SH mostra-se eficaz na prevenção da lesão pulmonar por suprimir a ativação de neutrófilos. Estudamos os efeitos da administração de SH na resposta inflamatória, analisando a atividade das MMPs 2 e 9 e expressão das HSPs 70 e 90 no tecido pulmonar. Métodos e Resultados: PA foi induzida pela injeção retrógrada de 0,4 mL de taurocolato de sódio (2,5%) em ratos machos wistar (280 a 320g). O grupo controle não foi submetido a qualquer procedimento. Os animais submetidos a PA foram tratados após 1 hora (h) com solução hipertônica (PA/H) ou solução fisiológica (PA/S). Após 4, 12 e 24 horas, os animais foram sacrificados para detecção das MMPs 2 e 9 (zimografia) e das HSPs 70 e 90 (western blot) no pulmão. A atividade das MMPs 2 e 9 tende a aumentar em todos os grupos com PA, entretanto o grupo PA/H mostra menor atividade dessas MMPs em relação ao PA/S, principalmente em 12h (MMPs 2 e 9) e 24h (MMP9). A expressão das HSPs 70 e 90 aumenta em todos os grupos submetidos a PA e está maior no grupo PA/H em 4h, comparado com PA/S (HSP70-DO=16119±523 vs 9997±5421, p<0.05; HSP90-DO=27010±1414 vs 19203±2121, p<0.05). Em 12h ocorre diminuição da expressão da HSP90 no grupo PA/H (p<0,05 vs PA/S). Em 24h a expressão de HSP 70 e 90 é igual em PA/S e PA/H. Conclusões:

As MMPs estão envolvidas na degradação da matriz extracelular e são importantes na infiltração de polimorfonucleares durante a inflamação. A SH modula a atividade das MMPs 2 e 9 contribuindo para a diminuição do dano tecidual. Em relação às HSPs 70 e 90 são descritos efeitos protetores nos processos inflamatórios. A SH elevou as HSPs em 4 horas, o que pode evidenciar proteção no tecido pulmonar nas fases iniciais da PA.

36.116 ZYMOSAN-INDUCED TIBIO-TARSAL JOINT MONOARTHRITIS: ROLE OF ENDOTHELIN ON MECHANICAL HYPERNOCICEPTION AND LEUKOCYTE MIGRATION. Guerrero, A. T. G.; Verri Jr., W. A.**; Cunha, T. M.**; Parada, C. A.; Cunha, F. Q.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP; Objetivo: There are consistent evidences that endothelin participate in the genesis of inflammatory hypernociception. The aim of this study was to investigate the participation of endothelin in joint movement elicited hypernociception and leukocyte migration in the model using zymosan-induced tibio-tarsal arthritis in mice. Métodos e Resultados: The experiments were performed on male C57BL/6 mice adults, (20-25g), (N=5). Mechanical hypernociception was evaluated with electronic pressure-meter paw test. The leukocyte migration to the tibio-tarsal joint was evaluated by mieloperoxidase colorimetric assay (MPO). The tibio-tarsal injection of zymosan (30µg/5µL) induced mechanical hypernociception and leukocyte migration. Both responses peaked 7h after zymosan injection. The pre-treatment of mice with BQ123 (endothelin ETA receptor antagonist, 10mg/Kg, s.c., 15min), BQ788 (endothelin ETB receptor antagonist, 10mg/Kg, s.c. , 15 min) or Bosentam (endothelin mixed ETA/ETB receptor antagonist, 50-100mg/Kg, v.o., 60 min) inhibited the mechanical hypernociception (4,26±0,12; 5,28±0,19; 4,3±0,20; 5,1±0,17 respectively) induced by zymosan. However, the pre-treatment of mice with endothelin antagonists BQ123 (3,324neutrophils/mg/ joint ±0,144), BQ788 (4,734 neutrophils/mg/joint ±0,133) and bosentan 50 or 100mg/Kg (4,776 neutrophils/mg/joint ±0,855; 4,672 neutrophils/mg/joint ±0,834, respectively) did not affect the zymosan-induced leukocyte migration to the tibio-tarsal joint when compared with zymosan (4,695 neutrophils/mg/joint ±0,0,264). Conclusões: These results suggest that endogenous endothelin mediate zymosan-induced mechanical joint hypernociception while not affecting zymosan-induced leukocyte migration to the tibio-tarsal joint, which might be an independent phenomena in this model. 36.117 ZYMOSAN-INDUCED TIBIO-TARSAL JOINT MONOARTHRITIS: ROLE OF LEUKOTRIENES ON MECHANICAL HYPERNOCICEPTION AND LEUKOCYTE MIGRATION. Guerrero, A. T. G.; Verri Jr., W. A.**; Cunha, T.M.**; Parada, C. A.; Cunha, F. Q.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Intra-articular injection of zymosan induces local inflammation resulting in nociceptor sensitization (hypernociception) and chemotaxis of leucocytes. Among the mediators released during the inflammatory process leukotrienes (LT) are those that induce both nociception and chemotaxis. Thus, the aim of this study was to investigate the participation of LT in joint movement elicited hypernociception and leukocyte migration in a model of zymosan-induced tibio-tarsal arthritis in mice. Métodos e Resultados: The experiments were performed on male C57BL/6 mice adults, (20-25g), (N=5). Mechanical hypernociception was evaluated with the electronic pressure-meter paw test. The leukocyte migration to the tibio-tarsal joint was evaluated by mieloperoxidase colorimetric assay (MPO). The LTB4 levels were determined by ELISA. The tibio-tarsal injection of zymosan (30µg/5µL) induced mechanical hypernociception and increased in MPO activity. Both responses peaked 7h after zymosan injected. The pre-treatment of mice with MK886 (FLAP inhibitor, 3mg/Kg, v.o., 60min) or CP 105696 (LTB4 receptor antagonist, 3mg/Kg, i.p. 45 min) inhibited the mechanical hypernociception (8,36±0,32 or 7,3±0,27 respectively) when compared with zymosan (2,32±0,54). The pre-treatment of mice with MK886 (4,664 neutrophils/mg/joint±0,655) or CP105696 (6,647 neutrophils /mg/joint±0,210) also decrease leukocyte migration, when compared with zymosan (7,879 neutrophils/mg/joint±0,278). Significant LTB4 levels were detected after 5-7 h (0,297pg/joint±0,038; 0,272pg/joint±0,011, respectively) compared with saline group (0,091pg/joint ± 0,012). Conclusões:

These results suggest that LTB4 mediate both zymosan inflammatory arthritis elicited joint movement hypernociception and neutrophil influx. 36.118 TRANSGENIC POLLEN GRAIN AS AN IMMUNOMODULATOR DELIVERY SYSTEM. 1Remer, R. A.**; 2Lima, M. C. R.; 1Ferreira, M. A.**; 2Martins, M. A.; 1Margis, R. 1Genética UFRJ; 2Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ Aim:

Transgenic plants can be considered as advantageous vectors for the production of biomedical materials. Plant-based edible vaccines, appear as a promising public health management alternative for its outstanding economic advantages and for the absence of bacterial or mammalian contaminants. Here, we tested the hypothesis that tobacco pollen grain (TPG) composition could be modified to be used as a potential vaccine delivery system (VDS) without causing allergies. Methods and Results:

To obtain pollen grains with heterologous product in different subcellular localization, N. tabacum plants were transformed with plasmids having the marker gene GUS (β-glucuronidase) enzyme, under the control of a segment of Phaseolus vulgaris chitinase promoter. Pollen grains were tested in normal rats submitted to 1, 2 or 3 successive intrapleural (i.pl.) injections of TPG (5-50 µg). In addition, rats were actively sensitized with TPG (5-500µg) and, 14 days later, challenged i.pl. with the same antigen (10 µg). Ovalbumin actively sensitized and challenged rats were used as positive control. Fluid recovered from pleural cavity were used for both protein quantification and leukocyte counts. Our results demonstrated that, differently from what was observed with ova sensitized rats, no pleural protein extravasation was noted 4h after TPG challenge, in all tested conditions. In addition, while ova challenged led to an increase in neutrophil (4h) (from 0± 0 to 11.0 ± 1.2 x106 /cavity) and eosinophil (24 h) (from 1.2 ± 0.2 to 8.5 ± 1.3 x106 /cavity) (Mean ± SEM for 6 rats per group) pleural counts, TPG sensitized and challenged rats did not trigger cell migration Conclusion:

The strategy of producing TPG can be used for targeting heterologous polypeptides such as antigens, antibodies or immunomodulators, which allows alternative immunization systems. Financial support: Blumevax

36.119 SEARCHING FOR A GLYCOPEPTIDIC ANTIINFLAMATORY FROM RNA-TREATED ASPERGILLUS NIDULANS STRAIN. 1Queiroz, J. C. F.; 2Teixeira, C. F. P.; 3Zucchi, T. M. A. D.; 1Biotecnologia USP; 2Farmacologia Instituto Butantan; 3Parasitologia ICB II-USP Objetivo:

Total RNA from LPS stimulated rat macrophages was used to treat an Aspergillus nidulans (Emericella nidulans) strain resulting in the RT2 which culture supernatant showed anti-inflammatory activity in male Wistar rats (Cell Mol Biol. 42(2):235-40, 1996). Métodos e Resultados:

The proteic fraction presenting such anti-inflammatory activity was purified and biochemically identified. The selection of the proteic fraction presenting the anti-inflammatory property was performed through the observation of podal oedema inhibition after carragenin induction, in male Swiss mice. Biochemical analyses, the method that presented the best results for peptide purification was that of molecular exclusion chromatography, since the peptide didn’t adsorbed to other used chromatographic matrix. The total sugar quantification revealed that the peptide presented 32% of glycosilation. Relative to the pharmacological activity of this peptide, the oedema reduction occurred just in the first hour after oedema induction. The amino acid analyses showed a peculiar pattern with 29%of valine. The mass spectrometry revealed that the proteic sample is a conjugated glycopeptide with 5 peptides with 2.3 to 4.6 KDa. Conclusões: This work show, in first time, an anti-inflammatory activity on a supernatant glycopeptide never found before, but the biochemistry characterization of this sample. 36.120

EFEITO ANTINOCICEPTIVO INDUZIDO PELA ESTIMULAÇÃO ELÉTRICA DO CORTEX SENSITIVOMOTOR EM RATOS NORMAIS. 1Dale, C. S.**; 1Pagano, R. L.; 1Paccola, C. C.; 2Fonoff, E. T.**; 2Ballester, G.; 2Teixeira, M. J.; 1Giorgi, R.; 1Fisiopatologia Instituto Butantan; 2Neurocirurgia Funcional FMUSP Objetivo:

A neuromodulação tem sido amplamente utilizada para o tratamento de diferentes condições neurológicas. Dados clínicos recentes revelaram que a estimulação crônica do córtex motor é efetiva no tratamento de diferentes síndromes neuropáticas dolorosas, sugerindo que o córtex motor possa exercer função importante na modulação da percepção dolorosa enquanto ativa o sistema antinociceptivo endógeno. Este trabalho avaliou o efeito da estimulação elétrica do córtex sensitivomotor sobre respostas comportamentais frente a estímulos nociceptivos em ratos. Métodos e Resultados: Ratos, Wistar, foram submetidos à implantação cirúrgica de eletródios de aço inox sobre o córtex sensitivomotor. Após uma semana os animais foram submetidos à estimulação cortical elétrica (1,0V; 60Hz; 210µs) durante 15 minutos, antes da realização dos experimentos. Ainda sob estimulação elétrica do córtex, os animais foram submetidos aos modelos de pressão de pata de ratos e ao tail-flick. Após a realização dos testes nociceptivos, os animais foram submetidos ao Campo Aberto para avaliação de atividade geral. A estimulação cortical foi capaz de aumentar o limiar de resposta dos animais no modelo de pressão de pata (20%) no lado contralateral à estimulação cortical. No lado ipsi-lateral nenhuma alteração comportamental foi observada. Ainda, o limiar de resposta dos animais também aumentou no tail-flick (40%). Nenhuma alteração foi observada na atividade geral dos animais. Conclusões: A estimulação elétrica cortical sensitivomotora induziu antinocicepção em ratos submetidos a modelo de dor experimental, sem a presença de alterações comportamentais. Estes dados sugerem que a estimulação elétrica do córtex deve estar ativando, direta ou indiretamente, os mecanismos endógenos de controle da dor. 36.121 EFEITO INIBITÓRIO DA CROTOXINA SOBRE A MICROCIRCULAÇÃO SANGUÍNEA E OS LINFÓCITOS DO SANGUE E DA LINFA. 1Zambelli, V. O.; 1Sampaio, S. C.**; 1Sudo, L. S.; 1Greco, K. V.**; 2Zychar, B. C.**; 2Gonçalves, L. R. C.; 2Cury, Y.; 1Farmacologia ICB I-USP; 2Fisiopatologia Instituto Butantan Objetivo: A Crotoxina (CTX), principal toxina do veneno de C. durissus terrificus é uma neurotoxina composta pela associação das subunidades crotapotina (CA), componente não-tóxico e pela fosfolipase A2 (FLA2), responsável pela sua ação tóxica. A CTX altera a distribuição periférica de leucócitos, caracterizada pela queda do número de linfócitos e monócitos. O objetivo deste estudo é ampliar a caracterização do efeito da CTX sobre os leucócitos, analisando a dinâmica dos eventos celulares na microcirculação e determinando o número (no) de leucócitos na circulação sanguínea periférica e linfática. Métodos e Resultados: O no de leucócitos foi determinado em ratos Wistar, antes e em diversos tempos após a administração (s.c.) de CTX (18µg/animal), CA (7,6µg/animal), FLA2 (10,4µg/animal) ou salina (S, 300µL). Para o estudo da microcirculação, a fáscia espermática foi exposta e os eventos de “rolling”, aderência e migração de leucócitos foram analisados em vênulas pós-capilares, por microscópia intravital. Para a obtenção da linfa, o ducto torácico dos animais foi canulado. A CTX e FLA2 diminuíram o nº de leucócitos circulantes na 1ªh, com resposta máxima na 2ªh (50% e 44%, respectivamente), não sendo observadas alterações a partir da 4ªh. Esta redução foi devida à queda do nº de linfócitos (42% e 51%, respectivamente). A análise da microcirculação (células/100µm de vaso) mostrou que 1h após a injeção de CTX houve aumento na aderência (salina-3,25; CTX- 12,2) e migração leucocitária (S-2,25; CTX-11), não sendo observada alteração na 4ªh. A análise da linfa indicou redução no nº de linfócitos, 2h após a injeção de CTX (47%) ou 2h e 4h após a injeção de FLA2 (60% e 57%, respectivamente). Conclusões:

Estes resultados indicam que a CTX promove migração leucocitária para o tecido extravascular e queda no nº de linfócitos na circulação sanguínea periférica. Ainda, a CTX e FLA2 diminuem o nº destas células na linfa. 36.122 PROTEIN DEFICIENCY DURING LACTATION: PERMANENT ALTERATIONS IN NEUTROPHIL PHAGOCYTIC ACTIVITY AND IN ARGININE/NITRIC OXIDE SYSTEM IN ADULT LIFE. 1Silva, S. V.; 1Souza, E. P. G.**; 1Nascimento, A. B.*; 1Brunini, T. M. C.; 1Mendes-Ribeiro, A. C.; 2Moura, A. S.; 1Freitas, M. S.; 1Barja-Fidalgo, C. 1Farmacologia e Psicobiologia UERJ; 2Fisiologia UERJ Objectives:

We have demonstraded that undernutrition during early lactation programmed to an imbalance between the insulin and glucocorticoid secretion, leading to inhibitory efects on the development of acute inflammation. As polymorphonuclear neutrophils (PMN) play a major role in innate immunity and host defense against infection, this study evaluated the profile of activation and functionality of PMN derived from adult rats offspring of dams fed with either a protein free diet (UN-Group) or 22% protein diet (C-Group) during the first 10 days of lactation. Methods and Results:

In basal conditions, UN rats showed lower number of blood PMN, though no difference in PMN number was observed in the bone marrow pool. Compared to controls, blood PMN from UN-group, presented a higher content of F-actin, showed a significantly enhanced phagocytic activity against opsonized zymosan, and spontaneously produced superoxide (O-

2) and nitric oxide (NO). Surprisingly, these cells in basal conditions expressed high levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS). However, arginine (arg) transport is deficient and total L-arg influx (Y+L system) was significantly lower in PMN from UN compared to C-group. LPS treatment in vivo enhanced O-

2

production by PMN from UN rats, but not in cells from controls. LPS increased NO production by PMN of both groups, inducing iNOS in control cells, but no further increase in iNOS expression was detected in endotoxemic UN rats. Conclusion:

The data indicate that postnatal maternal undernutrition program to permanent alterations in blood leukocytes activation and functionality in progeny, which are unable to properly mount an inflammatory response, predisposing to chronic diseases in adult life. 36.123 EFFECT OF ENDOGENOUS ADRENAL CORTICAL HORMONES AND THE MECHANISM OF CORTICOSTERONE ACTION ON THE PINEAL NAS PRODUCTION. 1Fernandes, P. A. C. M.; 1Cecon E *; 2Cavalcanti, D. M. D. H.**; 2Farsky, S. H. P.; 1Ferreira, Z. S.; 1Markus, R. P.; 1Fisiologia IB-USP; 2Análises Clínicas e Toxicológicas USP Objetivo:

Adrenalectomy (ADX) abolishes nocturnal melatonin (MEL) plasma surge in chronic inflamed mice (Inflamm.Res 50: 6, 2001), while in vitro corticosterone (CORT) inhibition of NFκB pathway results in a potentiation of MEL production (J. Pineal Res. 38: 182, 2005). Pineal MEL production is dependent on the transcription of the enzyme arylalkylamine N-acetyltransferase (AA-NAT), the rate limiting step of melatonin synthesis, which transforms 5-HT in N-acetylserotonin (NAS). Our aim was to determine the effect of endogenous adrenal cortical hormones and the mechanism of corticosterone action on the pineal NAS production. Métodos e Resultados: Pineal glands from adrenalectomized (ADX, 7 days) and control (C) male rats (2-3 months; 240-300g) treated or not with Bacillus Calmett-Guerin (BCG, 2 days; groups: BCG and BCG+ADX) were cultivated for 48h and stimulated with noradrenaline (NA, 10 mM, 5 h). BCG, but not ADX and ADX+ BCG increased (two-fold, p<0.05) 5-HIAA (C = 54.89 ± 7.82 ng/well) and NAS (C=19.6 ± 5.4 ng/well, n=4). No change in 5-HT was observed. A possible CORT potentiation of AA-NAT mRNA transcription was investigated by real time RT-PCR in control pineals cultivated for 48 h. AA-NAT mRNA transcription was significantly up-regulated by NA (65.4 ± 13.4, n=9, cycle threshold) and CORT promotes a 3-fold increase in AA-NAT mRNA transcription (186.9 ± 78.1, n=4, p<0.05). Conclusões:

Here we show that corticosterone acts directly on AA-NAT transcription, and that endogenous glucocorticoids modulates the synthesis of pineal indoleamines. Therefore, during an inflammatory response MEL production is dependent both on sympathetic innervation and cortical adrenal hormone release. 36.124 PRENATAL LIPOPOLYSACCHARIDE (LPS) EXPOSURE DEPRESSES THE PULMONAR INFLAMMATION IN ADULTS OFFSPRINGS: ROLE OF NITRIC OXIDE (NO) Datti, M.; Datti, F.**; de Nucci, G.; Antunes, E. Farmacologia UNICAMP Objetivo:

The ability of the early environment to program the hypothalamo-pituitary-adrenal axis (HPA) promoting neuroendocrinological and immune alterations in adult life has been well documented. We have investigated whether prenatal administration of LPS affects the allergen-induced airway leukocyte migration in adult offspring, and the modulatory role of NO in this inflammatory response. Métodos e Resultados: Pregnant Wistar rats were divided in 5 groups: 1) Control (non-manipulated during pregnancy); 2) Saline (i.p. administration of saline in 17th day of pregnancy); 3) LPS (i.p administration of LPS at 7 µg/Kg in 17th day of pregnancy); 4) Aminoguanidine (administration of aminoguanidine in drinking water from the 13th day of pregnancy to birth); 5) AG+LPS. In adult life, the male offsprings were sensitized with ovalbumin (OVA; 200 µg, sc, in AlOH3). Fourteen days after OVA sensitization, animals were challenged intratracheally with OVA (0.4 ml, 0.25%), and 48h thereafter the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid was examined regarding the leukocyte counts. Prenatal LPS administration reduced significantly (p<0.01) the eosinophil influx (0.82±0.16 x 106 cells/BAL) as compared with saline (2.04±0.37 x106 cells/BAL). Pretreatment with aminoguanidine restored the eosinophil influx in LPS-injected rats (2.32±0.24 x106 cells/BAL). When given alone, aminoguanidine had no significant effect in the OVA-induced cell influx. Conclusões:

Prenatal LPS administration decreases the organism capacity to respond properly to a pulmonary allergic stimulus in adult life. Here we demonstrated that NO plays a critical role in this process, since the iNOS inhibitor aminoguanidine was able to abolish this phenomenon. 36.125 RAT SKIN EDEMA CAUSED BY A GALACTOSE-BINDING LECTIN FROM BOTHROPS JARARACUSSU SNAKE VENOM. Marcelino Pereira, E.; Camargo, E. A.**; Panunto, P. C.**; Marcondes, S.; Antunes, E.; Hyslop, S. Farmacologia UNICAMP Objetivo: A galactose-binding lectin from Bothrops jararacussu snake venom causes hemagglutination, inhibits platelet-aggregation, and induces edema in mouse hind paws. In this work, we investigated the edema caused by this lectin in rat skin and examined some of the mediators involved. Métodos e Resultados: Male Wistar rats (~250 g) were anesthetized with sodium pentobarbital (50 mg/kg, i.p.) and the dorsal skin was shaved for the injection of test agents. Edema formation was assayed as described elsewhere (Br. J. Pharmacol., 86: 855,1985). Venom or lectin (1-100 µg/site, i.d.) was injected into rats pretreated with human 125I-albumin. In some experiments, venom (30 µg/site) or lectin (50 µg/site) was injected after treating the rats with: (1) L-NAME (100 nmol/site), (2) indomethacin (5 mg/kg, i.p.), or (3) cyproheptadine (2 mg/kg, i.p.) (total volume/site = 100 µl). The edema was expressed as the mean±SEM of the volume (µl) of protein extravasation. The venom and lectin produced dose-dependent edema, with maximum effect at >30 µg/site and 100 µg/site (n=4), respectively. L-NAME significantly (p<0.05) inhibited edema caused by µl, n=4) and lectin (50 the venom (30 µg/site) (191±26 µl versus 68±15 µg/site) (74±15 µl versus 18±6 µl, n=4). Cyproheptadine inhibited venom-induced edema (142±13 µl versus 64±8 µl, n=4, p<0.05), but had no effect on that induced by the lectin (66±5 µl versus 50±14 µl, n=4). In contrast, indomethacin inhibited lectin-induced edema (83±10 µl versus 36±12 µl, n=4, p<0.05), with no effect µl versus 102±14 µl, n=4, before and after on that caused by venom (125±20 treatment, respectively). Conclusões:

The edema caused by B. jararacussu venom lectin is mediated by nitric oxide and arachidonic acid metabolites (most likely prostaglandins). Histamine and serotonin apparently do not contribute to this response. 36.126 METHOTREXATE AFFECTS PROLYL DIPEPTIDYL AMINOPEPTIDASE IV AND EXHIBITS OPPOSITE EFFECT THAN THAT OF CYCLOSPORIN ON PROLYL OLIGOPEPTIDASE OF ELICITED MURINE MACROPHAGES. Olivo, R. A.; Nascimento, N. G.**; Teixeira, C. F. P.; Silveira, P. F. Farmacologia Instituto Butantan Objetivo:

Methotrexate (MTX) and cyclosporin A (CsA) are immunomodulators that belong to the most commonly used group of drugs for cytotoxic therapy. However, their exact mechanisms of action are not yet clarified. Peptidases are a family of enzymes relevant for modulation of macrophage (Mφ) functions. The present study aims to evaluate the interference of both MTX and CsA on two prolyl peptidase activities of Mφ, membrane-bound prolyl dipeptidyl aminopeptidase IV (DPPIV/CD26) and soluble prolyl oligopeptidase (POP), which cleave inflammatory mediators such as interferon-gamma, and the nociceptive mediators bradykinin and substance P, respectively. Métodos e Resultados:

Healthy male Swiss mice were daily treated for 21 days with MTX (0.1 mg/kg, p.o.) or saline (control) or by subcutaneous injection of CsA (25 mg/kg) or ricine oil (control). Four days before the fluorometric measurement of enzyme activities a half of each group received intraperitoneal injection of thyoglicollate (TGE). Resident (RE) and TGE Mφs were harvested by washing peritoneal cavities. As results (mean±sem) MTX significantly increased DPPIV (1.988±0.136) and POP (1.602±0.177) activities while CsA inhibited POP activity (0.791±0.068) in TGE Mφ. DPPIV and POP activities in RE Mφ were unaffected by MTX and CsA. Conclusões:

The effect of MTX on DPPIV activity of TGE Mφs but not on RE Mφs suggests that DPPIV is related to the immunossupressor action of MTX. Considering that the opposite effects of MTX and CsA on POP activity correlate to their effects on pain phenomena, this study indicates the relevance of prolyl peptidases activities during treatment of inflammatory diseases with both drugs and provides scope for additional studies on combined therapy with MTX and CsA. 36.127 EFFECT OF NITROSTEROIDS ON THE EXPRESSION OF MATRIX METALLOPROTEINASES (MMP) 2 AND 9 IN EXPERIMENTAL SILICOSIS. 1Lima, J. G. M. E.*; 1Ferreira, T. P. T.; 1Farias Filho, F. A.*; 1Jurgilas, P. B.**; 1Perales, J. E.; 1Cordeiro, R. S. B.; 2Lagente, V.; 3Wallace, W.; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R. 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Pharmacologie INSERM France; 3Pathology University of Calgary Canada Aim: Inhalation of crystalline silica dusts leads to silicosis, a chronic fibrotic process, resistant to treatment so far. The extracellular matrix degradation is a multistep system involving MMPs, shown to play an important role in the development of pathological processes including pulmonary fibrosis. In this study, we tested the curative effect of flunisolide (FLU) as well as the NO-releasing derivative termed NO-flunisolide (NO-FLU) on silicosis in mice, focusing on the lung expression of MMP 2 and 9. Methods and results: Intranasal injection of silica (10 mg) into Swiss-Webster mice led to an increase in the number of leucocytes in the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, with maximal response occurring at 7 days. Values of leucocytes increased from 1.3 ± 0.1 (mean ± SEM) in controls to 3.7 ± 0.2 x 10-5/BAL in silicotic animals. In parallel, we noted an intense inflammatory response in the lung tissue at earlier time points, followed by a fibrosis and granuloma formation at day 28. By means of zymography and immunohistochemistry techniques, we detected the presence of active forms of MMP 2 and 9 in the BAL fluid and an intense staining of silicotic ganulomas for both MMPs, respectively. The intranasal administration of FLU as well as of NO-FLU (0.005 and 0.022 µmol/kg) into silica-injected mice, from 0-7 and from 21-28 days, markedly reduced MMP 2 and 9 expression as noted in the

BAL fluid and in lung tissue. At comparable doses, NO-FLU seemed to be more potent than FLU to inhibit some inflammatory parameters of the disease. Conclusion: Our findings indicate that NO-FLU as well as FLU do constitute a promising therapy for silicosis, acting by a mechanism at least partially dependent on their ability to down-regulate MMP 2 and 9 expression in the lungs. 36.128 INHIBITION BY NITROSTEROIDS OF SILICA-INDUCED PULMONARY FIBROSIS MICE. 1Farias Filho F. A; 2Lima, J. G. M.**; 1Ferreira, T. P. T.*; 3Savino, W.; 4Hogaboam, C. M.; 5Wallace, J. L.; 6Lagente, V.; 1Cordeiro, R. S. B.; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R.; 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Morfologia UFRJ; 3Imunologia FIOCRUZ; 4Department of Pathology, University of Michigan; 5Pharmacology University of Calgary; 6Faculté de Pharmacie, INSERM Objetivo:

Silicosis is a chronic disease characterized by an extensive fibrotic response, in which quantitative and qualitative alterations of extracellular matrix (ECM) deposition and fibroblast proliferation were described. In this study, we tested the effect of flunisolide (FLU) as well as the NO-releasing derivative termed NO-flunisolide (NO-FLU) on silicosis in mice, focusing on the production of profibrotic cytokines and ECM deposition. Métodos e Resultados:

Silica particles were intranasally injected into anaesthetized Swiss-Webster mice. Cytokines were quantified by means of ELISA system and ECM expression by immunohistochemistry. Lung histological examination of mice on day 28 after silica instillation revealed an extensive leukocyte infiltration and numerous granulomas, mostly of peribronchiolar distribution As compared to controls, silicotic mice exhibited a marked increase in the generation of profibrotic cytokines such as IL-13 (from 0.11 ± 0.0 to 0.36 ± 0.07), TNF (from 0.0 ± 0.0 to 0.009 ± 0.001) and TGFß (from 0.02 ± 0.0 to 0.14 ± 0.02 ng/mg protein). Up-regulation of ECM expression including fibronectin and laminin, around and inside the granulomas, was also detected. The intranasal administration of FLU as well as NO-FLU (0.022 µmol/kg), from 21-28 days, markedly reduced leucocyte influx as well as generation of TGFß in the lungs of silicotic mice. Silica-induced increase in the expression of fibronectin and laminin was also inhibited by treatment with both compounds. Conclusões:

Our findings indicate that the administration of NO-FLU as well as FLU seems to be a promising therapy for silicosis, as attested by the suppression of fibrosis formation as well as blockade of profibrotic cytokine generation and up-regulation ECM components. 36.129 INIBIÇÃO PELA LIDOCAÍNA DA ATIVAÇÃO DE MACRÓFAGOS POR PARTÍCULAS DE SÍLICA IN VITRO. Guimarães, T. S.*; Ameixoeira, V.*; Jurgilas, P. B.; Carvalho, V. F.**; Carmo, M. T. C.*; Costa, J. C. S.**; Martins, M. A.; Silva, P. M. R. Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ Objetivo: Inalação de sílica cristalina leva à ocorrência de inflamação pulmonar e fibrose, sendo os macrófagos considerados como células alvos importantes nestes processos. Lidocaína (LIDO) é um anestésico local que apresenta propriedades antiinflamatórias. Neste estudo, avaliamos o efeito da LIDO sobre a ativação de macrófagos (Mφ) induzida por sílica in vitro, enfocando a liberação de óxido nítrico (NO), radicais livres (RL) e de metaloproteinases de matriz (MMP), subtipos 2 e 9. Métodos e Resultados:

Macrófagos peritoneais de camundongos Swiss-Webster foram incubados com sílica a 37ºC, em atmosfera de 5%CO2:95%O2, por diferentes intervalos de tempo. Tratamento com LIDO (1-1000 µM) foi realizado de forma concomitante à estimulação com sílica. A partir da obtenção de amostras do sobrenadante das células foi feita análise da liberação de NO (método indireto de Griess), RL (técnica de quimioluminescência) e de MMPs (técnica de zimografia). Notamos que Mφ estimulados com sílica apresentaram elevação nos níveis de NO e RL, em comparação com os controles, nos tempos de 24 h e 30 min respectivamente. Valores de NO e RL aumentaram de 6,9 ± 0,2 µM e 4500 ± 90 x103 cpm (média ± EPM) em Mφ controles, para 14,5 ± 0,2 µM (p<0.01) e

7000 ± 230 x103 cpm (p<0.01) em Mφ ativados, respectivamente. Maior liberação de MMP 2 e 9 foi detectada a partir de Mφ estimulados com sílica, em comparação aos controles. O tratamento com LIDO (1 -1000µM) inibiu de forma concentração dependente a liberação de NO, RL e de MMPs a partir dos Mφ ativados. Conclusões:

Nossos dados mostram que a LIDO foi capaz de inibir de forma direta a ativação de Mφ pela sílica in vitro, e indicam que o uso da LIDO representa uma alternativa terapêutica promissora no caso de doenças inflamatórias crônicas, incluindo a silicose, onde a participação de Mφ seja crucial. 36.130 LASSBIO 552, A PHTALIMIDE DERIVATIVE, PREVENTS AIRWAY EOSINOPHILIA AND HYPERREACTIVITY IN A MURINE MODEL OF ALLERGIC INFLAMMATION. 1Cardozo, S.; 2Neves, J. S.; 2Serra, M. F.; 2Pires, A. L. A.; 2Campos, P. B.*; 2Silva, P. M. R.; 3Lima, L. M.; 3Barreiro EJ; 2Martins, M. A.; 1Farmácia, UFRJ; 2Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 3Fármacos LASSBIO-UFRJ Objetivo: Recent study shows that LASSBio552 prevents allergen-evoked eosinophil recruitment into the pleural space of sensitized rats, in a mechanism at least partially associated with suppression of CD4+ T cell influx and CysLT production. In this work we thought to investigate the effect of LASSBio 552 on lung inflammation and airways hyperreactivity in a murine model of asthma. Métodos e Resultados:

Sensitized and boosted A/J mice were challenged with ovalbumine (OVA, 25 µg/ 25 µL, intranasal instillations) on days 19 and 20 post-sensitization. LASSBio552 (40 mg/kg, i.p.) was administered 1 h before provocation. Airway responsiveness (AHR) was measured by recording the Penh values evoked by inhaled metacholine 24 h post-challenge, using whole-body plethysmography. Eosinophil numbers were evaluated in samples of bronchoalveolar lavage (BALF), blood and bone marrow at the same time-point. Allergen provocation increased eosinophil numbers from zero to 374 ± 4.9 x 103 (Mean ± SEM, n=8) in BALF. Increased values were also noted in blood (0.6 ± 0.2 to 2.3 ± 0.2 x 103/ µL, n=8) and bone marrow (0.5 ± 0.1 to 2.7 ± 0.1 x 106/femur, n=8). Following LASSBio 552, eosinophil numbers reduced to 163 ± 4.2 x 103, 0.9 ± 0.1 x 103/µL and 1.7 ± 0.1 x 106/femur in BALF, blood and bone marrow (n=8), respectively. Reduction in the AHR was also noted. Conclusões: These findings show that LASSBio 552 inhibits airway inflammation and hyperreactivity following allergic provocation in mice, indicating that it may have clinical value for controlling asthma. 36.131 INFLAMMATORY ACTIVITY OF POLISTES LANIO LANIO WASP VENOM. 1Yshii, L. M.; 2Souza, G. H. M. F.**; 2Hyslop, S.; 1Muscará, M. N.; 3Eberlin, M. N.; 4Ribela, M. T. P.; 2Antunes, E.; 1Costa, S. K. P.; 1Farmacologia ICB I-USP; 2Farmacologia UNICAMP; 3IQ-UNICAMP; 4IPEN-CNEN Objetivo:

Wasp stings can cause life-threatening allergic reactions, intense pain and inflammation. Polistes spp. wasps are common in Brazil , but little is known about their venom. The inflammatory activity and mechanisms of Polistes lanio lanio venom (PLLv) were examined in the skin microvasculature. Métodos e Resultados: Anesthetized C57BL/6 mice (25-30 g) or Wistar rats (200-250 g) were injected i.v. with 125I-BSA (0.03 MBq). Skin edema was assessed as described (Br. J. Pharmacol 139:59, 2003) and mouse paw edema (Eur. J. Pharmacol 399:235, 2000) was measured for up to 4 h. The results were expressed as the mean±S.E.M. PLLv (0.3-30 g/site) caused potent, dose-dependent edema in the dorsal skin of both species. In mouse paws, PLLv (EC50% 7 µg/site) caused long-lasting edema (>4 h) that was more potent than carrageenan (300 g/paw). In mouse skin, PLLv (7 µg)-induced edema was unaffected by the bradykinin (BK) B2 receptor antagonist HOE 140 but was reduced by the B1 antagonist Des-Arg

9-[Leu8]-BK (269±28 and 94.5±35 l/site for control and treated mice, n=3). Dialysis of PLLv (MW cutoff 2000) reduced the edema by 50%. The substance P (SP) NK1 receptor antagonist SR140333 (1 nmol), but not NK2, inhibited the skin (89±17 and 17±6 l/site for PLLv and PLLv+SR140333; n=5; p<0.01) and paw edema (not shown). Neonatal treatment of rats with capsaicin also reduced the edema (27±6 and 9±2.8 l/site for control and treated rats; n=3).

Preliminary analysis by mass spectrometry (Q-TOF/CapLC) showed that PLLv contains a variety of peptides with MW from 1173 to 3581. Conclusões:

PLLv causes potent, long-lasting edema that is mediated by sensory nerve like-neuropeptides (SP), substances with a MW < 2000 and possibly the tissue kallikrein-kinin system. 36.132 LIPOXIN A4 INHIBITS MOUSE PAW OEDEMA INDUCED BY SEVERAL INFLAMMATORY MEDIATORS. 1Menezes de Lima Jr., O.; 1Kassuya, C. A. L.**; 1Nascimento, A. F. Z.; 2Henriques, M. G. M. O.; 1Calixto, J. B.; 1Farmacologia UFSC; 2Far-Manguinhos FIOCRUZ Objetivo: This study investigated the possible inhibitory action of Lipoxin A4 (LXA4) in the mouse paw-oedema induced by several inflammatory agents, such as bradykinin (BK), platelet-activating factor (PAF) and histamine, in order to clarify some of the mechanisms involved in the anti-inflammatory action of this lipidic mediator. Métodos e Resultados: Methods & Results: Male Swiss mice (18 - 30 g) received an intraplantar injection of PAF (3 nmol/paw), BK (3 nmol/paw) or histamine (100 nmol/paw) in the right paw, and the same volume (20 - 50 µL) of sterile saline in the contra-lateral paw. In another group, LXA4 (1 – 20 ng/paw) was co-administered with the inflammatory mediators. The effect of aspirin (ASA – 300 mg/kg p.o.) and the LXA4 receptor (ALX) antagonist BOC2 (200 ng/paw) on BK- and PAF-induced paw oedema was also investigated. The change in paw volume was evaluated by plethysmometry at several time intervals (10 – 240 min) and expressed as µL of oedema (n > 5). LXA4 significantly inhibited the oedema induced by BK (77.8%), PAF (85.7%) and histamine (90%). BOC2 did not affect the oedema induced by BK or PAF but reduced the antioedamatogenic action of ASA against both mediators (from 95% to 36% and from 85.4% to 0% of inhibition, respectively). Conclusões: Conclusions: Our results demonstrate an anti-oedematogenic action of LXA4 that appears to occur independently of the actions of this lipoxygenase-derivate on neutrophil influx, as LXA4 action is already significant at early stages of the reaction (10 – 15 min), where no leukocyte infiltration is observed. Additionally, LXA4 inhibited histamine-induced oedema that is classically described as being independent of neutrophil migration. The reversion of the inhibitory action of ASA by BOC2 indicates a role for ASA-triggered lipoxins in the anti-oedematogenic action of this drug. 36.133 SYSTEMIC EVALUATION OF INFLAMMATORY CELLS AFTER PERIMUSCULAR INJECTION OF BOTHROPS JARARACUSSU VENOM: HEPARIN EFFECTS. 1Fonseca, T. F.; 1Sanches, F. V.*; 1Soares, T. B.*; 1Melo, P. A.; 2Elias, S. C.; 1Farmácia e Farmacologia UFRJ; 2Farmácia UFF Objetivo: Local tecidual damage induced by B. jararacussu venom promotes o edema, hemorrhagic and necrosis, with intense inflamatory response. We examined the effect of treatment with heparins and antibotropic serum (SAB) on inflamatory cells found in blood, in response to damage induced by B. jararacussu crude venom. Métodos e Resultados: The mice were treated, by intravenous route, with heparin (H – 10 mg/Kg), low molecular weight heparin (LMWH – 10 mg/Kg) or specific polivalent antivenom (PAV – 1 mL/Kg) both 15 and 240 min after B jararacussu venom (1 mg/Kg) perimuscular injection. We analyzed the percentage of leucocytes, neutrophils, monocytes and the hematocrit on the 2, 4 and 24 hours following venom injection and treatments. The animals that received only the venom injection did not show alterations in the percentage of leucocytes 2 h after the injection, on the other hand the treated animals with LMWH, H and PAV showed 2.4, 3.4 and 1.6 fold increase, respectively. The similar results were observed at percentage of neutrophils cells in the treated animals, and the animals that received only the venom we also observed a 35 % increase. The monocytes percentage was a 19% increase 24 h after the venom injection while the treatments prevent this augment. Only the treatment with LMWH induced a significantly decrease in hematocrit (17%), 24 h after the venom injection.

Conclusões: These data suggest that heparins reduce inflammatory cell migration to skeletal muscle after being damaged by B. jararacussu venom. Financial Support: CAPES , CNPQ-PIBIC, FAPERJ, PRONEX. 36.134 ESTUDO DA ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DO EXTRATO METANÓLICO DA CAPSICUM FRUTESCENS – SOLANACEAE (PIMENTA MALAGUETA). 1Pires, P. A.; 1Malvar, D. C.*; 1Blanco, L. C.*; 1Vignoli, T.*; 2Cunha, A. F.**; 2Dantas, T. N. C.; 2Maciel, M. A. M.; 1Côrtes, W. S.; 1Vanderlinde, F. A. 1Ciências Fisiológicas IB-UFRRJ; 2Química UFRN Objetivo:

O C. frutescens é um arbusto nativo das Américas, cujos frutos e folhas são empregados popularmente contra bronquites, artrites, cefaléias, inflamação da garganta e ferimentos inflamados. Estudos anteriores revelaram que o extrato metanólico das partes aéreas do C. frutescens (EM-CF), quando administrado pela via oral em camundongos apresentou atividade antinociceptiva; produzindo uma inibição dose dependente da dor no teste das contorções abdominais pelo ácido acético (ID50=530mg/kg) e ausência de efeito no teste da placa quente (XIII Simpósio de Plantas Medicinais do Brasil, Manaus, 2004, resumo pg. 178). Este trabalho tem como objetivo prosseguir na investigação das atividades antinociceptiva e antiinflamatória do EM-CF, cujos resultados poderão explicar algumas de suas indicações populares. Métodos e Resultados: Utilizando o teste da formalina, grupos de camundongos Mus musculus, machos, albinos (n=6 a 8), pesando entre 25 e 35 gramas, foram tratados oralmente com veículo (água), com o EM-CF (1g/kg) ou com a indometacina (10mg/kg), 60 minutos antes da injeção intraplantar de formalina 1,2% (20µL), na pata posterior direita. O efeito antinociceptivo foi avaliado durante as duas fases de nocicepção: nos primeiros 5 minutos (dor neurogênia) e no período de 15 a 30 minutos (dor inflamatória) após a aplicação do formaldeído. O grupo tratado com EM-CF não modificou a reatividade durante a primeira fase da resposta nociceptiva (144,4±10,8 seg) e inibiu significativamente (p<0,05) em 62,8% a reatividade da segunda fase (42,9±18,4 seg), quando comparados aos valores experimentais do grupo veículo (137±14,2 seg na 1a fase e 115,2±22,8 seg na 2a fase). O pré-tratamento com a indometacina, controle positivo da 2a fase de nocicepção, não modificou a dor neurogênica (131,7±10,7 seg) e reduziu em 82,5% (p<0,01) a dor inflamatória (20,1±12,6 seg). Conclusões:

A ausência de inibição somente na 1a fase de nocicepção do teste da formalina, e a não efetividade no teste da placa quente, são resultados indicativos que a atividade antinociceptiva do extrato metanólico da C. frutescens pode envolver mecanismos antiinflamatórios. 36.135 EFEITO DA GLUTAMINA E ALANIL-GLUTAMINA NA MUCOSITE ORAL INDUZIDA POR ANTINEOPLÁSICOS EM HAMSTERS. Silva, L. R.; Macedo, F. D. B.*; Bellaguarda, E. A. L*; Leitão, R. F. C.**; Ribeiro, R. A; Brito, G. A. C. Fisiologia e Farmacologia UFC Objetivo: A mucosite oral é um efeito colateral limitante da terapia do câncer.Agentes que aceleram a restauração do epitélio normal prometem tratar e prevenir a mucosite.Um protótipo desses agentes é o aminoácido glutamina (Gln),combustível metabólito de muitas células epiteliais e seu derivado estável e altamente solúvel,a alanil-glutamina(Ala-Gln).Objetivou-se estudar a participação desses aminoácidos na prevenção e recuperação da mucosite oral induzida por antineoplásicos. Métodos e Resultados:

A mucosite foi induzida em hamsters pela administração de 5-fluorouracil(5-FU)no 1º e 2º dia de experimento (60 e 40 mg/Kg, i.p., respectivamente),seguido de trauma mecânico superficial nas bochechas, com o auxílio de uma agulha, no 4° dia.A estimulação mecânica foi realizada com o uso do anestésico hidrato de cloral a 10%, Os animais foram tratados com Gln ou Ala-Gln (100mM, oral-gavagem) 1 hora antes da administração de 5-FU e,diariamente, até o sacrifício,no 10° e 14°dias.As mucosas jugais foram excisadas e avaliadas,atribuindo-se escores de zero a três considerando parâmetros macroscópicos (presença de eritema, úlceras e/ou abscessos) e

histológicos(presença de congestão vascular,infiltrado inflamatório,úlceras e/ou abscessos).`Gln, tampouco Ala-Gln, foram capazes de reverter,de forma significativa,as alterações induzidas pela mucosite experimental,observadas no 10° dia.No entanto, nos animais tratados por 14 dias com esses agentes foi observado redução dos parâmetros macroscópicas (p<0.05) recebendo mediana e variação 2(1-2)para Gln e para Ala-Gln e dos parâmetros histopatológicos (p<0.05) recebendo mediana e variação 2(1-2)para Gln e para Ala-Gln em relação aos animais que não receberam tratamento cujas medianas e variação foram 3(2-3)para análise macroscópica e histopatológica, respectivamente. Conclusões:

Nossos resultados sugerem que Gln e Ala-Gln não são capazes de prevenir a mucosite oral induzida por 5-FU, no entanto, contribuem para melhora na recuperação da mucosa. 36.136 EFEITO DA FUCOIDINA SOBRE A ENTERITE INDUZIDA PELA TOXINA A DO CLOSTRIDIUM DIFFICILE (TXA) EM CAMUNDONGOS. 1Cavalcante, I. C.**; 2Barreto, A. R. F.; 2Castro, M. V.*; 1Souza, M. H. L. P.; 1Ribeiro, R. A.; 2Brito, G. A. C. 1Farmacologia, UFC; 2Morfologia UFC Objetivo: A toxina A do C. dificille (TxA) desempenha papel importante na patogenia da diarréia induzida por antibióticos e da colite pseudomembranosa, uma condição caracterizada por intensa secreção, inflamação e destruição da mucosa. O polissacarídeo Fucoidina, um homopolímero sulfatado da L-fucose, por interferir na função da L-selectina, é, sabidamente, um inibidor da rolagem leucocitária, uma etapa precoce e essencial do processo de extravasamento leucocitário para sítios de inflamação. Avaliou-se o efeito do pré-tratamento sistêmico com Fucoidina na inflamação e secreção induzidas por TxA em alças ileais isoladas de camundongos. Métodos e Resultados: Utilizaram-se camundongos Swiss machos pesando 25-30g. Fucoidina (25 mg/kg) ou PBS foi administrado por via intravenosa (plexo ocular) cinco minutos antes da injeção de TxA (5 µg/alça) ou PBS nas alças ileais isoladas. Após 3 horas da administração de TxA, os animais foram sacrificados e as alças ileais removidas. As razões peso/comprimento da alça e volume de secreção/comprimento da alça foram calculadas. Amostras de tecido foram coletadas para dosagem de atividade de mieloperoxidade (MPO), de atividade de adenosina desaminase (ADA) e para avaliação histopatológica. O pré-tratamento sistêmico dos animais com Fucoidina (25 mg/kg) reduziu de forma significativa (p<0,05) o aumento das razões peso/comprimento (PBS= 58,983 ± 3,920 Vs Fucoidina= 39,318 ± 4,375; n=5-6) e volume/comprimento (PBS= 19,717 ± 6,053 Vs Fucoidina =4,800 ± 2,939; n=5-6) induzido pela TxA (5 µg/alça), quando comparado com o tratamento somente com PBS. O pré-tratamento sistêmico com Fucoidina (mas não com PBS) reduziu significativamente (p<0,05) o conteúdo tecidual de MPO (PBS =2,244 ± 0,275 Vs Fucoidina =1,163 ± 0,303; n=5), reduziu (p<0,05) a atividade de ADA no tecido ileal (PBS =4,206 ± 0,316 Vs. Fucoidina =2,772 ± 0,258; n=5-6) e reduziu o infiltrado celular inflamatório e a destruição da mucosa induzidas pela TxA nas alças ileais demonstradas na análise histopatológica, avaliados em cortes de tecido do íleo na coloração HE. Conclusões: Nossos resultados mostram que a Fucoidina exerce uma atividade antiinflamatória e protetora da mucosa no modelo de enterite induzida por TxA em alça isolada do íleo em camundongos, sugerindo a participação de neutrófilos na patogênese da lesão induzida por TxA. Adicionalmente, nossos dados sugerem que o aumento da atividade de ADA induzido pela TxA está relacionado com a infiltração neutrofílica. 36.137 REGULAÇÃO DA FUNCIONALIDADE DE LEUCÓCITOS POR ESTRÓGENO E PROGESTERONA, EM MODELO DE INFLAMAÇÃO ALÉRGICA PULMONAR. 1Ligeiro de Oliveira, A. P.; Domingos, H. V.; Oliveira-Filho, R. M.; Tavares de Lima., W. Farmacologia ICB I-USP Objetivo: Neste estudo avaliamos a participação do estrógeno (E) e da progesterona (P) na modulação da atividade funcional de fagócitos pulmonares e leucócitos da medula óssea em ratas variectomizadas (OVx).

Métodos e Resultados: Ratas foram sensibilizadas (OA/alúmen) após 1 (OVx-1 dia) ou 7 dias de OVx (OVx-7 dias) ou falsa operação (Sham). Após 14 dias foram desafiadas (OA, 1%), 24 h após sacrificadas e realizados lavados broncoalveolar (LBA) e femural (LF). As células assim obtidas foram incubadas, estimuladas ou não com LPS (200 µg/ml) e o sobrenadante da incubação recolhido 24 h após para quantificação de TNF e nitritos como índice de produção de NO. O tratamento com E e P aumentou a liberação de TNF em relação aos respectivos grupos OVx não tratados (OVx-1+P: 55 ± 4 vs 35 ± 3 e OVx-7+E: 43 ± 3 vs 20 ± 2; OVx-7+P: 70 ± 5 vs 20 ± 2 U/ml) e de nitritos pelos fagócitos pulmonares nos grupos OVx-1+E (40 ± 4 vs 25 ± 2 µM/2x106 cels) e OVx-7+P (23 ± 2 vs 16 ± 2 µM/2x106 cels). Houve redução de liberação de nitritos nos grupos tratados com progesterona OVx-1+P (12 ± 1 vs 25 ± 2 µM/2x106 cels) e com estradiol no grupo OVx-7+E (9 ± 0,8 vs 16 ± 2 µM/2x106 cels). Em leucócitos da medula óssea, tanto E como P reduziram a liberação de nitritos nos grupos OVx-1 (OVx-1+E: 26 ± 2 vs 32 ± 3 e OVx-1+P: 12 ± 1 vs 32 ± 3 µM/2x106 cels ) e 7 dias (OVx-7+E: 5 ± 0,5 vs 12 ± 1 e OVx-7+P: 7 ± 0,6 vs 12 ± 1 µM/2x106 cels ). Conclusões: Com relação à produção de TNF, a inflamação alérgica pulmonar é exacerbada por influência dos hormônios sexuais femininos; quanto à produção de nitritos, observamos certa dualidade de efeitos entre E e P, na dependência do tempo de OVx transcorrido. Em relação à medula óssea, esses hormônios parecem desempenhar efeito inibitório sobre a funcionalidade leucocitária. 36.138 ESTUDO DO PERFIL ANTIINFLAMATÓRIO E ANALGÉSICO DE DERIVADOS TIENILACILIDRAZÔNICOS ANÁLOGOS AO LASSBIO 294. 1Louback, L. S.; 2Brito, F. C. F.**; 1Kummerle, A. E.**; 1Fraga, C. A. M.; 1Barreiro, E. J.; 1Miranda, A. L. P. 1Lassbio FF-UFRJ; 2Farmacologia e Terapêutica Experimental UFRJ Objetivo: A atividade analgésica e antiinflamatória do composto LASSBio 294 foi anteriormente descrita (Miranda et al., 6ème Congrès SFP, 2002). Uma nova série de compostos tienilacilidrazônicos (LASSBio 785 – 789) foi sintetizada no intuito de otimizar as atividades farmacológicas observadas para o composto protótipo. O objetivo deste trabalho é descrever as propriedades analgésicas e antiinflamatórias dessa nova série. Métodos e Resultados: A atividade analgésica foi avaliada através do teste de contorções abdominais induzidas por ácido acético 0,1N. A hiperalgesia foi estudada através do ensaio modificado da placa quente (51,0 ± 1,0 0C), utilizando como agente algésico carragenina 1%. A atividade antiinflamatória foi avaliada empregando-se a metodologia do edema de pata de rato induzida por carragenina 1,0%. Na dose de 100 µmol/kg, v.o., os compostos LASSBio 785 e 789 (n=10) inibiram as contorções em 40,2* e 63,0%*, respectivamente. Na dose de 300 µmol/kg, i.p., os compostos não foram capazes de inibir a formação de edema e a hiperalgesia associada (n = 10). Já o composto LASSBio 294 (300 µmol/kg, i.p) inibiu a hiperalgesia em 48,3%*, na quarta hora após o estímulo, apesar de seu fraco perfil antiinflamatório (16,0%) (*p<0,05). Conclusões: As modificações estruturais introduzidas no composto LASSBio 294 não promoveram alterações no perfil analgésico, porém levou à perda das atividades antiinflamatória e anti-hiperalgésica. Esses resultados sugerem uma ação analgésica distinta, dissociada do efeito antiinflamatório para LASSBio 785 e 789 quando comparadas a LASSBio 294. 36.139 INTERAÇÃO LEUCÓCITO-ENDOTÉLIO INDUZIDA PELOS VENENOS DE BOTHROPS JARARACA (VBj) E CROTALUS DURISSUS TERRIFICUS (VCdt). Zychar, B. C.; Sousa e Silva, M. C. C.; Gonçalves, L. R. C. Fisiopatologia Instituto Butantan Objetivo: O VBj causa intensas reações locais como edema, dor, hemorragia e necrose, devido a uma gama de componentes existentes no veneno. Já o VCdt possui atividades neurotóxica, miotóxica e

coagulante, baixa atividade inflamatória local. O presente estudo, investigou o efeito do VBj ou VCdt na interação leucócito-endotélio da microcirculação do cremaster de camundongos. Métodos e Resultados:

O VBj (1µg), VCdt (1,5µg) ou salina (100µl) foram injetados no subcutâneo da bolsa escrotal de camundongo swiss. Após 2 e 24h da injeção, o cremaster foi exposto e a microcirculação analisada em microscópia intravital. Dez min após a exposição da microcirculação foram avaliados, durante 1 min, em uma porção de 100 µm de uma vênula pós-capilar (diâmetros de 20 e 40µm), os leucócitos em rolling, aderentes, e migrados para o tecido, que foram contados em uma distância de 50µm de cada lado do mesmo segmento vascular. O VBj reduziu significativamente os leucócitos em rolling (2h: 55%; 24h: 40%), mas aumentou a adesão celular (2h: 219%; 24h: 110%) e a migração celular (2h: 140%: 24h: 385%) quando comparados com grupos controle. Por outro lado, 2h após a injeção de VCdt houve um aumento significativo de rolling (48%) e adesão (154%), porém, nesse tempo, não houve alteração da migração celular. Não foram observadas diferenças significativas de leucócitos em rolling e aderidos no tempo de 24h, mas houve um aumento significativo de células migradas (245%). Conclusões:

Os resultados obtidos com os dois venenos confirmam observações clínicas e experimentais. O VBj é altamente flogístico e induz uma rápida interação leucócito-endotélio que resulta numa significativa migração celular. Por outro lado, o VCdt não induz um aumento de migração celular, apesar do aumento de rolling e adesão na 2ah. O aumento de migração observado tardiamente, não acompanhado por alterações dos outros parâmetros avaliados, pode ser devido à ação miotóxica desse veneno. 36.140 A ISQUEMIA E REPERFUSÃO INTESTINAL (I/R-I) INDUZ O AUMENTO DA PRODUÇÃO DE ÓXIDO NÍTRICO (NO), LEUCOTRIENO B4 (LTB4), IL-6 E IL-10 EM CULTURA DE EXPLANTS DE TECIDO PULMONAR. Soares, A. L.; Cavriani, G.**; 3 Lopes do Nascimento, F. L..*; Oliveira-Filho, R. M.; Vargaftig, B. B.; Tavares de Lima, W. T. Farmacologia ICB I-USP Objetivo:

A I/R-i é conseqüência comum de patologias como choque hemorrágico ou séptico. O indivíduo sujeito a I/R-i pode desenvolver resposta inflamatória pulmonar exacerbada a injúria secundária, desencadeando a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). Este quadro está consistentemente ligado a produção de mediadores inflamatórios. Neste trabalho utilizamos cultura de explants pulmonares de animais submetidos ou não a I/R-i para avaliar os efeitos da estimulação in vitro sobre a liberação de citocinas, NO e LTB4. Métodos e Resultados: A isquemia intestinal foi induzida em camundongos C57Bl/6, machos, 7-12 semanas de idade, por 45 minutos, seguida de 2 horas de reperfusão e sacrifício. Como controle foram utilizados animais não manipulados (Basal). Fragmentos de pulmão perfundidos com PBS e heparina foram cultivados em meio DMEM estimulados ou não com LPS (100 µg/ml). A concentração de LTB4 e IL-6 foi determinada na 2ª hora e IL-1, IL-10 e nitratos e nitritos (NOx, indicador da produção de NO) na 22ª hora de cultura. Resultados: (média ± erro padrão)

NOx(uM/mg) LTB4(pg/mg) IL-6(pg/mg) IL-10(pg/mg)

Basal (-) 0,8±0,8 23,7±4,5 73,1±6,4 20,3±3,8

Basal (+) 1,5±0,3 25,3±6,8 68,2±2,8 48,0±9,1θ

I/R-i (-) 2,3±0,5* 35,6±10,1 126,2±10,0

* 28,0±4,8

I/R-i (+) 4,3±0,7*,θ 120,1±20,8

*,θ 122,3±10,1

* 127,8±32,9

*,θ

(+): estimulado com LPS (100 µg/ml). * P<0,05 em relação ao respectivo grupo basal. θ P<0,05 em relação ao respectivo grupo não estimulado. Conclusões:

A I/R-i exacerba a produção pulmonar de NO, LTB4 e IL-10 em resposta a estimulação in vitro com LPS. A produção de IL-6 está aumentada nos grupos I/R-i e parece não ser afetada pelo LPS in vitro. O aumento na liberação de LTB4 e NO podem ser correlacionados respectivamente com

infiltração neutrofílica e alterações na permeabilidade vascular pulmonar, características marcantes da SDRA. 36.141 TRATAMENTO COM INIBIDOR DE GLICAÇÃO NÃO-ENZIMÁTICA AMINOGUANIDINA REVERTE O COMPROMETIMENTO MASTOCITÁRIO EM RATOS DIABÉTICOS. Florim L.*; Carvalho, V. F.; Barreto, E. O.**; Cordeiro, R. S. B.; Martins, M. A.; Silva, P. M. R. Fisiologia e Farmacodinâmica, FIOCRUZ Objetivo:

Foi demonstrado que tratamento com inibidores da formação de produtos finais de glicação avançada mostrou-se eficaz em corrigir disfunções de células endoteliais e redução do infiltrado celular inflamatório, verificados na condição diabética experimental. Neste estudo, avaliamos o efeito do inibidor de glicação enzimática, aminoguanidina, sobre a diminuição no número e na reatividade de mastócitos detectada na cavidade pleural de animais diabéticos. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos foram tornados diabéticos mediante injeção de aloxana e a análise da população mastocitária realizada 21 dias após a indução da diabetes. Avaliação quantitativa de mastócitos foi feita em câmara de Neubauer e de reatividade mediante o uso de células isoladas através de gradiente contínuo de Percoll. Aminoguanidina (250 mg/kg, p.o.) foi injetada diariamente, sendo o tratamento iniciado 3 dias após a injeção de aloxana. Verificamos que ratos diabéticos tratados com aminoguanidina apresentaram inibição parcial da resposta de hiperglicemia, sem que nenhuma modificação na perda de peso corporal ou da hipoinsulinemia fosse notada. Aminoguanidina mostrou-se capaz de reverter o fenômeno de mastocitopenia pleural na diabetes. Valores de mastócitos foram de 425,7 ± 25,86 x 103 céls/sítio (média ± EPM) para ratos controles e de 257,4 ± 13,49 x 103 céls/sítio e 420,75 ± 36,27 x 103 céls/sítio para ratos diabéticos não tratados ou tratados com aminguanidina, respectivamente. A refratariedade de mastócitos diabéticos à estimulação com bradicinina in vitro foi igualmente sensível ao tratamento com aminoguanidina. Conclusões: Nossos resultados indicam que o aumento na formação de produtos finais da glicação não-enzimática parece contribuir de forma importante tanto para a redução no número quanto na reatividade de mastócitos verificada no quadro diabético. 36.142 ATIVIDADE ANGIOGÊNICA DE FOSFOLIPASE A2. 1Higuchi, D. A.**; 2Bello, C. A.*; 1Ramalho, J. D. S.*; 2Richardson, M.; 2Sanchez, E. O. F.; 2Magalhães, A.; 1Araujo, R. C.; 1Pesquero, J. L.; 1CIIB-UMC; 2Bioquímica Fundação Ezequiel Dias Objetivo: Fosfolipases A2 (PLA2) são enzimas lipolíticas que clivam a ligação éster do carbono 2 dos fosfolipídios de membranas, produzindo ácidos graxos livres, principalmente o ácido aracdônico. Este é convertido em componentes lipolíticos bioativos como os eicosanóides. Seus derivados são importantes mediadores de inflamação e participam do processo de regulação da vascularização, crescimento e metástase tumoral. Este trabalho tem como objetivo o isolamento e caracterização de fosfolipases do veneno da serpente Bothrops leucurus e verificar sua possível participação em processo tumoral e inflamatório. Métodos e Resultados: A fração apresentando atividade fosfolipase foi purificada a partir de veneno liofilizado, em duas etapas cromatográficas, na seqüência Sephacryl S-200 e Phenyl-Superose. A massa molecular, estimada em gel de poliacrilamida 12,5% é de 14 kDa. Teste de atividade angiogênica foi feito injetando-se 5 µg da PLA2 purificada, em camundongos machos sadios de peso em torno de 30 g, nos quais foram implantados tumor de Erlich (2,5 x 106 células) subcutâneo dorsal. Espera-se sete dias para o crescimento do tumor e no oitavo dia inicia-se o tratamento por mais nove dias com injeções diárias de PLA2 ou salina (grupo controle). Após sacrifício, os tumores são dissecados, pesados e homogeneizados em 5 mL de reagente de Drabkin. Centrifugam-se 2 mL do homogenato a 4000xg por cerca de 30 min, faz-se a leitura em espectrofotômetro a 540 nm. O tratamento com 5 µg de PLA2 aumentou a massa tumoral quando comparada com o grupo

controle (0,38 ± 0,035g versus 0,17 ± 0,019g). Os níveis de hemoglobina no tumor também aumentaram com o tratamento com PLA2 (0,19 ± 0,022 versus 0,11 ± 0,016). Conclusões: Nossos resultados mostram que fosfolipase A2, em dose de 165 µg/kg, é capaz de potencializar, em camundongo, o processo tumoral e inflamatório em torno de 50%. 36.143 EFEITOS PRÓ E ANTINOCICEPTIVOS DA MICROINJEÇÃO DE GLICINA NA SUBSTÂNCIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL DE RATOS. 1Martins, M. A.; 2Carobrez, A. P.; Tonussi, C. R.

Farmacologia UFSC Objetivo: Em trabalhos anteriores vimos que a glicina (100 nmoles) aplicada diretamente na substância cinzenta periaquedutal dorsal (SCPd) promoveu antinocicepção em modelos de dor somática profunda e superficial. E que no modelo de nocicepção profunda a antinocicepção dependeu de vias diferentes daquela da nocicepção superficial. O objetivo deste estudo foi investigar qual receptor envolvido na antinocicepção no modelo de incapacitação articular induzida por formalina e se em doses mais baixas a glicina também induz efeito antinociceptivo. Métodos e Resultados: Glicina (Gli) nas doses de 50 e 100 nmoles e o ácido 7-cloroquinurênico (7-CLKIN; 10 nmoles, antagonista Gli-B/NMDA) foram microinjetados na SCPdorsolateral (SCPdl), 5 min antes da formalina (50 l - 5%) aplicada no joelho direito de Ratos Wistar Machos (250-350 g, n=04-09). Glicina, 100 nmoles, induziu efeito antinociceptivo sobre o tempo de elevação da pata (TEP) observado aos 20 min de teste (TEP

controle: 42,61,2 s, TEP

gli100: 36,014,0 s; p<0,001) e este

efeito foi totalmente bloqueado pelo 7-CLKIN (TEP7-CLKIN+gli100

: 46,134,1 s; p<0,001). Glicina, na

dose de 50 nmoles induziu efeito pró-nociceptivo observado principalmente no período de quiescência (TEP

controle: 11,060,7 s, TEP

gli50: 24,085,8 s; p<0,001).

Conclusões: Os resultados mostram que a glicina dependendo da concentração pode ativar vias pró e antinociceptivas dentro da SCPdl e que o receptor NMDA parece estar envolvido no efeito antinociceptivo. O que nos leva a sugerir que SCPdl pode ser responsável por coordenar tanto a inibição quanto a facilitação da nocicepção em modelos de dor profunda. 36.144 REATIVIDADE DO MÚSCULO LISO DAS VIAS AÉREAS DE CAMUNDONGOS DESPROVIDOS DE TLR-4 EXPOSTOS IN VITRO AO LPS, POSSÍVEIS MECANISMOS. Kuang Shia, M.; Domingos, H. V.; Oliveira-Filho, R. M.; Lima, W. T.; Vargaftig, B. B. Farmacologia - ICB I, USP Objetivo:

1) Avaliar os efeitos da exposição do LPS sobre a reatividade das vias aéreas isoladas de camundongos. 2) Investigar os possíveis mecanismos envolvidos com a inflamação pulmonar e correlacioná-los com a reatividade colinérgica das vias aéreas após exposição in vitro ao LPS. Métodos e Resultados:

Camundongos machos (Balb/c, C3H/HeJ, C3H/HePas) provenientes do biotério (ICB) foram sacrificados. As traquéias foram removidas e incubadas (estufa CO2) com LPS (90min) ou com TNF (1h) sendo grupo controle formado de camundongos não manipulados (basal). Decorrido o tempo de estudo, as traquéias foram montadas em cubas de vidros contendo Krebs-Henseleit (37º C, 5% CO2 e 95% O2). Após 40 min de equilíbrio construíram-se curvas concentração-efeito à metacolina (MCh) em sistema Myobath (WPI). Tratamento com IL-10 (1ng/ml) foi realizado junto à incubação com o LPS. Conclusões:

O LPS causa hiperreatividade (HR) de traquéia frente à Mch após 90 minutos de incubação. Esse efeito depende de mecanismos clássicos de ação de LPS, pois a contratilidade da traquéia proveniente de animais desprovidos de TLR-4 por mutação espontânea não foi alterada pelo LPS. Este possivelmente exerça seus efeitos através da liberação de citocinas induzida pela liberação primária de TNF-α, que desempenharia papel essencial na modulação da HR das vias aéreas. Tratamento com IL-10 reduziu a HR de traquéia ao nível basal. Finalmente, os efeitos do LPS são

dependentes de epitélio, que provavelmente libera mediadores diretamente envolvidos com a HR das vias aéreas. 36.145 EFEITO DO ANTIOXIDANTE EBSELEN SOBRE A NOCICEPÇÃO INDUZIDA PELO GLUTAMATO EM CAMUNDONGOS. 1Coelho, I. S.; 2Meotti, F. C.**; 2Zeni, G.; 2Nogueira, C. W.; 2Rocha, J. B. T.; 1Santos, A. R. S.; 1Ciências Fisiológicas CCB-UFSC; 2Química, UFSM Objetivo:

Trabalhos prévios têm demonstrado que alterações no estado redox do receptor glutamatérgico, NMDA, são capazes de modificar a transmissão nociceptiva gerada pela ativação deste receptor no sistema nervoso central. Além disso, substâncias antioxidantes como o organocalcogênio Ebselen são capazes de regular a atividade do receptor NMDA por atuar em seu sítio redox. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel modulatório do Ebselen em um modelo de nocicepção periférica induzida pela administração intraplantar (i.pl) de glutamato (GLU). Métodos e Resultados:

Foram utilizados camundongos Swiss (25-35g n=6-8), fêmeas. A resposta nociceptiva foi caracterizada pelo tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo (TLM) a pata injetada com GLU (10 µmol/pata) durante 15 min. Em seguida ao teste, a região plantar foi retirada e homogeneizada em tampão para a dosagem dos grupos tiólicos (–SH) totais reduzidos (Ellman, Arch Biochem Biophys, 82: 70, 1959). O TLM induzido pela injeção de GLU foi de 175±28 s e a co-admnistração de Ebselen (2-100 nmol/pata) não alterou significativamente esta resposta. Por outro lado, a administração de Ebselen (100 nmol/pata) induziu comportamento nociceptivo (TLM) de 108±12 s, sendo que, o MK-801 (5 nmol/pata, co-administrado com Ebselen) reduziu em 70±5,4% a nocicepção causada pelo Ebselen (p<0,01). O bloqueador de grupos –SH, iodoacetato (200 nmol/pata), co-administrado com GLU reduziu em 42±8% o TLM induzido pelo GLU. A administração prévia (5 min) do Ebselen, porém não do DTT (100 nmol), preveniu completamente a ação antinociceptiva do iodoacetato. Além disso, o iodoacetato diminuiu em 45±14,5% (p<0,05) os níveis de grupos tiólicos totais reduzidos (SH) na pata e a administração prévia do Ebselen e do DTT não foram capazes de prevenir de forma significativa esta diminuição. Conclusões:

Os resultados aqui apresentados demonstram que o antioxidante Ebselen não alterou o TLM induzido pelo GLU, mas foi capaz de causar nocicepção per se. O efeito nociceptivo do Ebselen depende, em parte, da ativação dos receptores ionotrópicos NMDA sensíveis ao MK-801. Além disso, a oxidação de grupos tiólicos dos nociceptores primários, causada pelo iodoacetato, diminui a nocicepção induzida por glutamato, sendo que, a administração prévia de um antioxidante preveniu esta antinocicepção. Estudos estão em andamento visando esclarecer os mecanismos bioquímicos pelos quais este antioxidante esteja interagindo com estes nociceptores. 36.146 ANTYPIRETIC EFFECT OF ACETAMINOPHEN. Batista B. L. P.; Melo, M. C. C.; Vercesi, J. A.; Souza, G. E. P. Física e Química FCFRP-USP Objetivo: Given orally to humans beings acetaminophen promotes antipyretic effect at dose as low as 0.1 mg/kg1. However, the mechanisms by which acetaminophen exerts this effect are not clearly understood. Aiming to elucidate these mechanisms we firstly investigated the effect of acetaminophen (ACET) given by different routes of administration on the LPS-induced fever in rats. Métodos e Resultados: Fever was induced in Male Wistar rats (≅200 g) by i.p. (intraperitoneally) or i.v. (intravenously) injected LPS (50 µg/kg). ACET (diluted in ethanol 10% plus 2 drops of Tween 80) was given i.p (50, 75,150 mg/kg) or per os (p.o., 50, 75, 150, 300 and 450 mg/kg) 30 min before LPS. Changes in rectal temperature were measured for up to 6 h by telethermometry. ACET 450 mg/kg administered p.o. abolished fever to i.v. LPS (2.5h, n=6: LPS: 1.12+0.2; ACET+LPS: 0.017+0.2) while at 150 mg/kg it was ineffective. ACET 150mg/kg administered i.p. abolished the fever to i.p. injected LPS (2.5 h, n=6, LPS: 1.28+0.1; ACET + LPS 0.3+0.1) while promoted a brief and strong antipyretic effect (from 2 to 2.5h) on fever to i.v. LPS (2.5 h, n=8: LPS: 1.1+0.187; ACET+ LPS: -0.056 + 0.1). Conclusões:

Rats are less sensible than humans to the antipyretic effect of orally given ACET. Given i.p. ACET was more effective on fever to i.p. than to i.v. injected LPS. Fever to i.p. injected LPS depend on vagus nerve and nucleus tractus solitarium (NTS) to signally the hypothalamus to trigger fever2. Increased glutamate release in the NTS was observed on fever to i.p. but not to i.v. LPS3 and acetaminophen given i.p. inhibits glutamate release4. So, the antipyretic effect of acetaminophen given i.p. could be related to the inhibition of glutamate release. 1-Drwal-Klein & Phelps. Clin. Pharmacol. 11:1005, 1992 2- Blatteis & Sehic. News Physiol Scie. 12: 1, 1997 3- Mascarucci et al. Neuroscie. 86: 1285, 1998 4- Huang et al., Neuroscie Let. 355: 33, 2004 36.147 AVALIAÇÃO DO ESTRESSE OXIDATIVO E DA LASERTERAPIA NO MÚSCULO GASTROCNÊMIO DE RATOS. 1Dahmer, C. R.; 1Correa, D. S. F.; 2Zettler, C. G.; 3Moreira, A. J.**; 4Porawski, M.; 3Marroni, N. A. P.; 1Fisioterapia, ULBRA; 2Patologia FFFCMPA; 3Fisiologia Digestiva UFRGS; 4Fisiologia, ULBRA Objetivo: Avaliar a ação do LASER sobre a lesão no músculo gastrocnêmio e verificar o estresse oxidativo neste tecido. Métodos e Resultados: Foram utilizados 50 ratos,Wistar,machos,pesando + 250g,divididos em 5 grupos, com n=10 em cada:controle (CO); controle+LASER(CO+L); trauma(T); trauma+LASER durante 14 dias (T+L14); trauma+LASER durante 7 dias (T+L7), aplicação do LASER foi iniciada 7 dias após a lesão,até o 14º dia. O trauma foi causado com aparelho similar a uma prensa, com haste liberada em queda livre à altura de 180mm, com energia de impacto de 0,8J. A laserterapia foi empregada com dose de 5J/cm² em um único ponto. Os animais tiveram o músculo gastrocnêmio retirado bilateralmente em 3 períodos: às 12 horas,7 e 14 dias após o início do experimento. A lipoperoxidação (LPO) foi analisada pela medida das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e quimiluminescência (QL), e foi medida a atividade da enzima superóxido dismutase (SOD).Para análise estatística foi utilizado ANOVA seguido do teste de Tukey (p<0,05).Quanto a LPO verificou-se aumento significativo de TBARS (2,6+0,5/1,15+0,2) e QL (9267,47+1478/2989,36+797) no grupo T comparando-se 7 e 14 dias,respectivamente. No grupo CO+L avaliado por TBARS notou-se aumento significativo às 12 horas quando comparado com 7 e 14 dias (3,46+0,01/2,02+0,34/1,48+0,17), e o grupo T+L14 manteve o mesmo comportamento (2,98+0,73/1,05+0,2/0,52+0,06), respectivamente. A SOD,no grupo T+L7 aumentou significativamente comparando-se às 12 horas e 7 dias (30,2+0,004/11,57+2,9). Conclusões: A utilização da laserterapia em animais controles (CO+L) causou dano ao tecido, e aumento na LPO, entretanto, quando utilizada em tecido lesado (T+L) mostrou-se eficaz em reduzir os níveis da LPO,e aumentar a atividade da enzima SOD. 36.148 INSTILAÇÃO NASAL DE PARTÍCULAS DE SÍLICA EM CAMUNDONGOS: CARACTERIZAÇÃO DE UM NOVO MODELO EXPERIMENTAL. 1Ferreira, T. P. T.; 2Farias Filho F.A. *; 2Lima, J. G. M.**; 1Serra, M. F.**; 3Lagente, V.; 4Hogaboam, C. M.; 1Cordeiro, R. S. B.; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R. 1Fisiologia e Farmacodinâmica FIOCRUZ; 2Morfologia, UFRJ; 3Pharmacie INSERM; 4Pathology University of Michigan Objetivo:

A silicose é uma doença inflamatória crônica, de ampla incidência mundial, e cuja patogênese necessita ser melhor investigada. Para tanto, objetivamos desenvolver um modelo experimental de silicose, não invasivo, que teve como base a instilação de sílica por via nasal. Métodos e Resultados:

Foram utilizados camundongos Swiss Webster e a sílica (10 mg) instilada em animais previamente anestesiados. O infiltrado leucocitário foi avaliado no lavado broncoalveolar (BAL) e tecido pulmonar, nos tempos 7, 14 e 28 dias após indução da silicose. Citocinas e quimiocinas foram quantificadas por meio de ELISA. Verificamos que o número de leucócitos totais no BAL de

animais silicóticos mostrou-se significativamente aumentado, apresentando-se de forma decrescente ao longo do tempo. Resposta máxima foi detectada aos 7 dias de reação (1,3 ± 0,1 x10-5/BAL nos controles e 3,7 ± 0,2 x10-5/BAL nos animais silicóticos). Células mononucleares mostraram igual perfil de resposta, enquanto que neutrófilos mantiveram-se em número aumentado de forma constante em todos os tempos analisados. Através de histopatologia, notamos a ocorrência de um marcado infiltrado leucocitário no pulmão, com a presença de granulomas em 28 dias. Detectamos, ainda, aumento nos níveis das CXC quimiocinas KC e MIP-2, indutoras de recrutamento neutrofílico, enquanto que as citocinas TNF-α, INF-γ, TGF-β e IL-13 mostraram-se presentes em tempos mais tardios, de forma concomitante à ocorrência do processo fibrótico. Conclusões: Os resultados indicam que o sistema de instilação nasal de sílica apresenta-se como um modelo de fácil execução e capaz de reproduzir características básicas verificadas na doença em humanos, mostrando-se promissor em estudos referentes à patogênese da silicose e na busca por terapias eficazes no controle da doença. 36.149 VARIAÇÃO DA MASSA CORPÓREA EM RATOS COM DOENÇA PERIODONTAL EXPERIMENTAL TRATADOS COM GEL DE AROEIRA DO SERTÃO (MYRACRODRUON URUNDEUVA) E ALECRIM PIMENTA (LIPPIA SIDOIDES). Botelho, M. A.**; Mustafa, S.; Fontenele, T. S.*; Araújo, A. B.*; Ribeiro, R. A.; Brito, G. A. Fisiologia e Farmacologia DFF-UFC Objetivo:

Avaliar a variação da massa corpórea em ratos com doença periodontal experimental tratados com substâncias a base de aroeira (Myracrodruon urundeuva) e alecrim pimenta (lippia sidoides) Métodos e Resultados: Foram utilizados 24 ratos machos da raça Wistar, com massa corpórea média de 177,95±18,38 gramas. Os animais foram anestesiados com hidrato de cloral 10% por via intraperitoneal. Induziu-se a doença periodontal experimental (DPE) através da inserção cirúrgica de um fio de sutura de náilon (3.0) ao redor do segundo molar superior esquerdo de modo que o nó cirúrgico ficasse voltado para a face vestibular da boca do animal. Os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos. No grupo um foi utilizado um gel à base de Alecrim-pimenta; no grupo dois, gel com Aroeira; no grupo três, gel base (sem principio ativo). Os tratamentos foram aplicados sobre a região afetada por dez dias, no horário de 7:00 e 18:00 horas, quando na aplicação do gel, eram suspensas alimentação e água por duas horas. Os valores percentuais médios de massa corpórea obtidos para os grupos foram: grupo um,12,62±2,72; grupo dois, 15,74±2,76; grupo três, 7,50±2,89. O grupo tratado com o alecrim pimenta e aroeira obteve recuperação do peso de maneira estatisticamente significante em relação ao grupo gel base (p<0,05). Conclusões: Os dados deste estudo sugerem que as ações antiinflamatórias do gel de alecrim pimenta e de aroeira interferem de maneira favorável no processo inflamatório e na dor induzidas pela DPE, permitindo a alimentação e proporcionando um melhor ganho de peso em relação aos animais tratados com o gel base. 36.150 PAPEL DO LIPOPOLISSACARÍDEO (LPS) DA E. coli NA LESÃO GÁSTRICA (LG) POR INDOMETACINA (INDO) EM RATOS – ADESÃO E ROLLING LEUCOCITÁRIO. 1Gomes, A.S.; 1Santos, C. L.*; 2Lemos, H. P.**; 2Cunha, F. Q.; 1Ribeiro, R. A.; 1Souza, M.; 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Investigar o papel da glutationa e da adesão dos leucócitos no efeito do LPS na LG induzidas por INDO em ratos. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos foram tratados com LPS na dose de 300 µg/Kg, i.v. Após 6 horas, a LG foi induzida pela administração de INDO (20 mg/Kg, v.o.). Decorridas 3 horas, os ratos foram sacrificados e a LG, a infiltração de neutrófilos e os níveis de glutationa foram determinados. Em outro grupo experimental, microscopia intravital foi realizada nas vênulas mesentéricas pós-capilares de ratos para determinação da adesão e rolling dos leucócitos. LPS (1,4±0,8mm,

5,8±1,5UMPO/mg) reduziu significativamente (p<0,001) a LG e a infiltração de neutrófilos induzida por INDO (42,0±7,4mm, 27,0±4,1UMPO/mg). Foi capaz de reverter, de forma significativa (p<0,001), o efeito da INDO (136 mg NPSH/g), aumentando os níveis de glutationa a níveis semelhantes ao do grupo do controle (LPS = 225 mg NPSH/g; Controle = 219 mg NPSH/g). Na microscopia intravital, o LPS foi capaz de diminuir de forma significativa (p<0,001) a adesão leucocitária (15 cel. aderidas/100µm2) induzida por INDO (34 cel. aderidas/100µm2). Entretanto, durante a avaliação do rolling, o LPS induziu um aumento significativo (505 cel. roladas/10µm/min) (p<0,001) de leucócitos quando comparado com o grupo INDO (321 cel.roladas/10µm/min). Conclusões: O LPS é capaz de proteger a mucosa gástrica das lesões induzidas por indometacina por um mecanismo dependente da inibição da infiltração de neutrófilos, da diminuição da adesão leucocitária e pelo aumento dos níveis de glutationa. 36.151 EFEITO PARADOXAL DO ÓXIDO NÍTRICO (NO) NO INFLUXO CELULAR (IC) EM ARTRITE E PERITONITE. 1Leite, A. C. R. M.**; 1Girão, V. C. C.**; 2Castro, R.**; 1Gadelha P. M. M.*; 3Cunha, F. Q.; 4Rocha, F. A. C. 1Medicina UFC; 2Fisiologia e Farmacologia UFC; 3FMRP-USP; 4Medicina Clínica UFC Objetivo:

Investigamos o efeito de inibidores da NO sintase (NOS) no IC na artrite ou peritonite induzidas por zymosan (Zy) ou LPS, em ratos ou camundongos. Métodos e Resultados:

Ratos (n=6/grupo) receberam Zy 10-1000µg ou LPS 1-10µg intra-articular (i.a.). Outros grupos receberam Zy (1mg) ou LPS 10µg i.p. Camundongos (n=6/grupo) receberam 100µg de Zy i.a. ou i.p. Controles receberam veículo. Após sacrifício, o IC (célsx103/mm3) e os níveis de leucotrieno B4 (LTB4) foram avaliados nos exsudatos articular e peritoneal. Grupos receberam, 30min antes do Zy ou de LPS, L-NAME (LN) 1-30mg/kg ou 1400W 1mg/Kg, administrados i.p nos animais submetidos à artrite e s.c., na peritonite. Na artrite por Zy (10-100µg) em ratos, LN 1-3mg/kg reduziu o IC (50-75%), quando comparado ao controle (P<0,05). Na AZy 1mg, o IC foi de 20.5±3 e 12.2±2.8, nos grupos LN 30mg/kg e 1400W, respectivamente, sendo menor que o controle (48.2±10) (P<0,05). Na artrite por LPS (1 ou 10µg), o IC foi de 2.7±0.27 e 2.4±0.27, respectivamente, sendo reduzido por LN 30mg/Kg (1.3±0.3 e 1.1±0.08) (P<0,05). Na artrite por Zy em camundongos, o IC no controle (3.1±0.47) foi reduzido para 1.1±0.3 e 1.6±0.4 nos grupos tratados com LN 3 ou 10mg/Kg (P<0,05). Na peritonite por Zy ou por LPS em ratos, o IC, que foi de 5.2±0.9 e 1.7±0.2, foi aumentado por LN 30mg/Kg (10.6±1.2 e 2.7±0.2). 1400W também aumentou significantemente o IC na peritonite por Zy, sendo de 9.360±0.9 (P<0,05). De forma análoga, em camundongos, LN 30mg/kg aumentou o IC na peritonite por Zy, sendo 6.5±0.5, em relação ao controle (4.7±0.5)(P<0,05). Os níveis de LTB4 não diferiram nos vários grupos. Conclusões: A inibição da NOS promove redução da migração celular na cavidade articular, ao passo que o incrementa no peritônio. Esse efeito independe do estímulo e da espécie e não parece depender de diferenças na liberação de leucotrieno B4. 36.152 AVALIAÇÃO DA REATIVIDADE DAS VIAS AÉREAS APÓS EXPOSIÇÃO AO FORMALDEÍDO E SUA RELAÇÃO COM A INFLAMAÇÃO ALÉRGICA PULMONAR. 1 Kuang Shia, M.; 2 Domingos, H. V.; 3 Oliveira-Filho, R. M.; 4 Lima, T.; 5 Vargaftig, B.B. Farmacologia ICB I-USP Objetivo: 1) Avaliar os efeitos da exposição aguda e prolongada ao formaldeído sobre a reatividade das vias aéreas isoladas de ratos. 2) Investigar farmacologicamente alguns dos mecanismos envolvidos com a inflamação pulmonar e correlacioná-los com a reatividade colinérgica das vias aéreas após exposição in vitro ao formaldeído. Métodos e Resultados: Decorridos 14 dias de sensibilização com ovoalbumina (10mgOVA/10mg alúmen, sc) ratos (Wistar 160-180g) foram sacrificados. Suas traquéias foram removidas e incubadas (estufa CO2) com FA(48h) ou OVA(24h) seguido de incubação com FA (48h). O controle consistiu de ratos não

manipulados(basal). Decorrido o tempo de estudo, traquéias foram montadas em cubas de vidro contendo Krebs-Henseleit (37ºC, 5% CO2, 95% O2). Após 40 min de equilíbrio construíram-se curvas concentração-efeito à MCh em sistema Myobath(WPI). Além disso, segmentos de traquéia foram tratados com indometacina(3µM), montelucaste(1µM) ou L-arginina(1mM). Paralelamente, grupo de rato foi tratado com o composto 48/80 (5 mg/kg, 5 dias, sc). Resultados:

Grupos Emax (g) Grupos Emax (g)

Basal 12.60 ± 1.58 OVA/FA 10,43 ± 1,97†

FA 23,86 ± 0,86** 48/80 13,01 ± 2,13†

OVA 18,48 ± 3,02* indometacina 10,65 ± 1,61†

montelucaste 10,35 ± 0,35†

L-arginina 13,71 ± 2,52†

*P<0,05 e **P<0,01 em relação ao C (basal) n: 4-9 animais †NS em relação ao grupo C (basal) n: 4-9 animais Conclusões: A traquéia de ratos expostos ao FA (48 h) exibe HR quando comparada ao grupo basal. Entretanto, não é exacerbada com períodos de incubação inferiores, e desaparece com 72 h de incubação. Os tratamentos farmacológicos indicaram que estes efeitos são possivelmente devido à ação em alvos como a musculatura lisa e mastócitos, os quais são capazes de liberar mediadores diretamente relacionados com a HR das vias aéreas. 36.153 PARTICIPAÇÃO DO ÓXIDO NÍTRICO NA FAGOCITOSE INDUZIDA POR FOSFOLIPASES A2 SECRETÓRIAS (SFLA2) EM MACRÓFAGOS (MФ).

1Zuliani, J. P.; 2Gutiérrez, J. M.; 1Teixeira, C. F. P.; 1Farmacologia, Instituto Butantan; 2Microbiologia, Instituto Clodomiro Picado Objetivo: A fagocitose é um processo de defesa, realizado por mФ, dependente de uma variedade de sinais intracelulares que coordenam as alterações do citoesqueleto e os mecanismos bioquímicos envolvidos na estimulação funcional deste processo. Em resposta a mediadores inflamatórios, os m produzem uma grande quantidade de NO, que, pode difundir-se rapidamente pela membrana celular e interagir com moléculas intracelulares como a guanilato ciclase solúvel (sGC), originando o GMPc que ativa uma proteína quinase dependente de GMPc (PKG). O objetivo deste estudo foi verificar a participação da iNOs, sGC e PKG, além da mobilização do Ca2+, na sinalização da fagocitose induzida por duas sFLA2: a MT-III, uma FLA2Asp49 com alta atividade enzimática e a MT-II, uma FLA2Lys49, destituída de atividade enzimática, isoladas do veneno da serpente Bothrops asper. Métodos e Resultados: Os m foram obtidos do peritônio de camundongos Swiss machos, 96h após a injeção de tioglicolato. A fagocitose de partículas de zimosan não opsonizado, foi avaliada in vitro, na presença ou ausência de inibidores específicos das diferentes vias. Os dados obtidos mostraram que as duas sPLA2 estimularam o processo de fagocitose, significativo aos 5min e máximo na 1

ah de sua incubação com os m. Os tratamentos dos m com L-NAME, um inibidor da cNOS, aminoguanidina ou L-NIL, inibidores da iNOS, reduziram a taxa de fagocitose induzida pelas duas sFLA2 (p<0,05). Além disso, os tratamentos com ODQ, Rp-cGMPs e tapsigargina, inibidores da sGC, PKG e da mobilização de Ca2+, respectivamente, reduziram a fagocitose induzida pelas duas sFLA2 (p<0,05). Conclusões: Os resultados sugerem que a estimulação da fagocitose pelas duas sFLA2 envolve a participação da iNOS, sGC, PKG e mobilização do Ca2+ intracelular. O efeito das duas sFLA2 deve decorrer de sua interação a receptores β-glucano, envolvidos na fagocitose e presentes na membrana dos m. 36.154

INVESTIGAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIEDEMATOGÊNICA DO 1,5-DIFENIL-3-HIDRAZINOPIRAZOL(A) DHP. 1Malvar, D. C.; 1Pires, P. A.*; 2Farias, J. C. M.*; 2Mafra, J. C. M.; 2Freitas, A. C. C.; 3Maciel, M. A. M.; 1Côrtes, W. S.; 1Vanderlinde, F. A. 1Ciências Fisiológicas IB-UFRRJ; 2UNIG; 3Química, UFRN Objetivo:

Derivados pirazólicos têm sido planejados e avaliados quanto às suas atividades analgésicas e antiinflamatórias. Em estudos anteriores, a atividade analgésica do DHP, quando administrado pela via oral, foi observada através da diminuição dose dependente do número das contorções abdominais induzidas por ácido acético (ID50 = 1,68 mg/kg) e pela inibição da segunda fase de nocicepção (dor inflamatória) no teste da formalina, sendo, entretanto, não efetivo na primeira fase de nocicepção (dor neurogênica) e no teste da placa quente (FeSBE 2004 – Resumo 17.012). Objetivando definir o(s) mecanismo(s) envolvidos com o efeito analgésico do DHP, este estudo investiga a atividade antiedematogênica, que é um efeito característico de drogas antiinflamatórias. Métodos e Resultados:

Na avaliação da atividade antiedematogênica do DHP (diluído em DMSO a 2%), foi utilizado o teste do edema de orelha induzido por óleo de cróton (2,5% v/v em acetona). Grupos de camundongos (n=8) albinos (Mus musculus), machos, pesando entre 25 e 35g, foram tratados oralmente com DHP (10 mg/kg), com a dexametasona (0,5 mg/kg – controle positivo) ou com o DMSO a 2% (veículo), 1 hora antes das aplicações tópicas de 10 µL de óleo de cróton na orelha direita e do veículo acetona na orelha esquerda de cada animal. Após 4 horas, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical, retirados fragmentos de 6 mm de diâmetro de cada orelha e pesados em balança analítica. O edema foi caracterizado pela diferença média (∆) entre os pesos das orelhas direita e esquerda. A administração do composto DHP inibiu significativamente (p < 0,01) em 54,1% (∆ = 3,9±0,7 mg) o edema, quando comparado ao grupo tratado com o veículo (∆ = 8,5±1,0 mg), e da mesma forma que o grupo controle positivo dexametasona, cuja inibição do edema foi de 55,3% (∆ = 3.8±0,7 mg) (p < 0,01). Conclusões:

A evidencia do efeito antiedematogênico, juntamente com a inibição somente da dor inflamatória do teste da formalina, sugerem que atividade analgésica do DHP, observada no teste das contorções abdominais, envolve a participação de mecanismos antiinflamatórios. 36.155 ANALISE DO MECANISMO DE AÇÃO ANTINOCICEPTIVA DA INOSINA. Nascimento, F. P.; Ostroski, R.**; Almeida, R.C.**; Santos, A. R. S. Ciências Fisiológicas, UFSC Objetivo:

Estudos anteriores demonstram que a inosina, nucleosídeo endógeno, possui ações anti-inflamatória, imunomodulatória e neuroprotetora. Recentemente demonstramos que a inosina também apresenta importante efeito antinociceptivo em modelos de nocicepção química em camundongos. Neste sentido, o presente estudo analisa o possível envolvimento das fibras aferentes primárias do tipo C, bem como da proteína Gi/o e dos receptores adenosinérgicos A1 e A2A na antinocicepção produzida pela inosina em camundongos. Métodos e Resultados:

Foram utilizados camundongos suíços de ambos os sexos (25 – 35g; N = 6 a 10 por grupos). O possível envolvimento da proteína Gi/o e dos receptores adenosinérgicos (A1 e A2A), bem como das fibras aferentes do tipo C na antinocicepção causada pela inosina, foi analisada no modelo das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético (0,6%, i.p.). A administração de inosina pela via i.p. ou oral (1-300 mg/kg) produziu redução significativa e dependente da dose das contorções abdominais causadas pelo AA, com DI50 de 1,9 (0,6-5,9) e 131,8 (105,9-164,1) mg/kg e inibições de 86±6 e 69±5%, respectivamente. A antinocicepção causada pela inosina (10 mg/kg, i.p. 30 min antes) no modelo do AA, foi significativamente revertida pelo pré-tratamento dos animais via i.p., 20 min antes, com 8-fenilteofilina (1 mg/kg, antagonista seletivo A1), ZM241385 (3 mg/kg, antagonista seletivo A2A) e pelo pré-tratamento 7 dias antes com toxina pertussis (0,5 µg/sítio, i.t., inibidora da proteína Gi/o). Além disso, o efeito antinociceptivo da inosina, no teste do AA, foi completamente revertido pelo tratamento neonatal com capsaicina (50 mg/kg, s.c.). Conclusões:

Estes resultados estendem os dados anteriores e mostram que a atividade antinociceptiva da inosina, no modelo de nocicepção visceral induzida pelo AA, depende da ativação dos receptores adenosinérgicos do tipo A1 e A2A, interação com a proteína Gi/o e da participação das fibras aferentes primárias do tipo C. 36.156 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTINOCICEPTIVA DA ASSOCIAÇÃO ENTRE TIOCOLCHICOSIDO E DICLOFENACO SOBRE A DOR NEUROPÁTICA EM RATOS. 1Vilanova, M. F.*; 2Beirith, A. 1Farmácia Bioquímica FURB; 2Ciências Naturais FURB Objetivo:

O tiocolchicosido é um gabamimético, que atua farmacologicamente como miorrelaxante, e o diclofenaco é um analgésico não esteroidal com acentuadas propriedades anti-reumática, antinflamatória e antipirética. Foi demonstrado em um estudo anterior (Anais da XXXVI reunião da SBFTE, pg 240, 2004) que o uso intramuscular (i.m.) de doses cerca de 20 vezes menores do que as utilizadas na clínica de tiocolchicosido (0,1 mg/i.m.) e diclofenaco (1,0 mg/i.m.) são capazes de, isoladamente, reduzir a hipernocicepção térmica causada pela constrição do nervo ciático em ratos. Portanto, o objetivo do presente estudo é investigar doses destes fármacos que não apresentem atividade antinociceptiva isoladamente no modelo de dor neuropática induzida pela constrição do nervo ciático, com o objetivo de verificar seu possível efeito sinérgico. Métodos e Resultados:

Foram utilizados ratos Wistar machos (140-160 g) e os resultados expressos como média ± e.p.m. A dor neuropática foi induzida pela constrição do nervo ciático, que foi exposto e levemente contraído com três nós feitos com fios de sutura (4.0) com intervalos de aproximadamente 1 mm. A partir do quarto dia após a cirurgia, todos os grupos de animais, exceto os do grupo falso-operado apresentaram hipernocicepção térmica. A média da redução do limiar ao estímulo térmico foi 47,97 ± 12,36%. O diclofenaco (0,1 mg/i.m.) e o tiocolchicosido (0,01 mg/i.m.) foram administrados durante 7 dias, a partir do sétimo dia após a cirurgia. As doses administradas neste estudo, 10 vezes menores do que as aplicadas no estudo anterior, não foram capazes de reduzir a hipernocicepção térmica apresentada pelos animais, nem quando administradas em associação. Conclusões:

A utilização de doses 10 vezes menores do que a do estudo anterior foi insuficiente para a observação precisa de um possível efeito sinérgico entre estes fármacos. Estudos utilizando doses intermediárias são necessários para descartar a ausência deste efeito. 36.157 ENVOLVIMENTO DA VIA L-ARGININA-ÓXIDO NÍTRICO E DO SÍTIO REDOX NA ANTINOCICEPÇÃO CAUSADA PELO ÁCIDO ASCÓRBICO EM CAMUNDONGOS. 1Rosa, K. A.; 1Gadotti, V. M.**; 2Rosa, A. O. D.**; 3Ferreira, J.; 4Rodrigues, A. L. S.; 3Calixto, J. B.; 1Santos, A. R. S.; 1Ciências Fisiológicas UFSC; 2Ciências Biológicas, UFSC; 3 Farmacologia UFSC; 4Bioquímica CCB-UFSC Objetivo: Estudos anteriores do nosso grupo demonstraram que o ácido ascórbico (AA), substância encontrada endogenamente na forma de ânion ascorbato, apresenta significativo efeito antinociceptivo em camundongos, em parte, por modular a transmissão glutamatérgica. Neste trabalho, avaliou-se o envolvimento da via da L-arginina óxido nítrico e da modulação redox na ação antinociceptiva do AA no modelo de nocicepção induzida pela injeção intraplantar (i.pl.) de glutamato (GLU) em camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss (25-35g n=6-12) de ambos os sexos. A resposta nociceptiva foi caracterizada pelo tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo (TLM) a pata injetada pela via i.pl. com GLU (10 mol/pata). O AA (0,01-3 g/pata, em associação com o GLU) foi capaz de reduzir de forma significativa e dose dependente o TLM induzido pela injeção i.pl. de GLU, com DI50 de 0,31 (0,26-0,38) g/pata e inibição de 83±4%. O efeito antinociceptivo do AA (0,1 µg/pata, co-administrado) e da L-NOARG (10 µg/pata, inibidor da sintase do óxido nítrico, co-administrado) foi significativamente revertido pelo pré-tratamento dos animais pela via i.pl., 10 min antes, com L-arginina (60 µg/pata, precursor de óxido nítrico), com reversão de 76±7 e 100%,

respectivamente. Além disso, a antinocicepção causada pelo AA (0,1 µg/pata, co-administrado) e pelo DTNB (400 ng/pata, agente oxidante, co-administrado) no modelo do GLU foram completamente (100%) revertidos pelo pré-tratamento dos animais pela via i.pl., 10 min antes, com ditiotreitol (DTT, 0,3 µg/pata, agente redutor). Conclusões:

Estes resultados estendem dados anteriores e demonstram que a antinocicepção causada pelo AA em camundongos depende, pelo menos em parte, da modulação do sítio redox do receptor NMDA e da inibição da via da L-arginina-óxido nítrico. 36.158 PARTICIPAÇÃO COLINÉRGICA E NORADRENÉRGICA NO EFEITO ANALGÉSICO DO SILDENAFIL. 1Bezerra, M. M.; 1Graça, J. R. V.**; 2Pinto, V. P. T.; 3Cristino Filho, G.; 1Oliveira-Neto, R. M.*; 1Colares, D.*; 1Girão, V. C. C.**; 1Rocha, F. A.; 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Bioquímica, UFC; 3Neurociência, UFC; Objetivo: Em estudo anterior mostramos que Sildenafil (Sil), inibidor da fosfodiesterase-5 (FDE5), produz analgesia. Esta enzima é responsável pelo término de ação de GMP-c. Foi demonstrado uma relação entre síntese de AMP-c e hiperalgesia e síntese de GMP-c e antinocicepção. Uma vez que simpatomiméticos estimulam a síntese de AMP-c, enquanto a ativação de receptores muscarínicos leva à geração de GMP-c, decidimos investigar a possível modulação noradrenérgica e/o colinérgica na atividade antinociceptiva do Sil. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss machos (30g) foram pré-tratados (i.p.) com sildenafil–Sil (2,5 ou 5mg/kg) ou betanecol-Bet(0,5 ou 2mg/kg) ou propranolol-Prop(0,5 ou 2mg/kg). Em seguida receberam ácido acético 0,6%(0,1 ml/10 g de peso-i.p). A nocicepção foi quantificada pelo número de contorções abdominais durante 30min. Outra série de animais recebeu co-administração (i.p.) de Sil(2,5mg)+Bet(0,5mg) ou Sil(2,5mg)+Prop(0,5mg). O grupo não-tratado (NT) recebeu salina. Após 4h o exsudato peritoneal foi coletado para contagem total de células (câmara de Neubauer). Sil(5mg/Kg), Prop(2mg/Kg) ou Bet(2mg/Kg) reduziram (p<0,05) o número de contorções (33±10, 38±6, 36±7, respectivamente) em relação ao NT (77±5), sendo inefetivos nas menores doses. Já a co-administração de Sil+Bet ou Sil+Prop, nas menores doses, reduziu (p<0,05) o número de contorções (39±6 e 29±10, respectivamente), em relação ao NT. Nenhuma das drogas isoladas (Sil 2,5 ou 5; Bet 0,5 ou 2; Prop 0,5 ou 2) ou co-administradas (Sil 2,5+Bet 0,5; Sil 2,5+Prop0,5) foi capaz de reduzir o influxo celular (2675±308, 3425±496, 3667±601, 3766±601, 4250±1307, 2817±330, 3880±766, 4080±882 células /mm3, respectivamente), comparado ao NT (2683±445). Conclusões: O efeito analgésico do Sil pode ser modulado pela regulação das concentrações de AMP-c/GMP-c nos nociceptores uma vez que foi potencializado pela co-administração de agentes colino e simpatomiméticos e independe do influxo celular. 36.159 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE FARMACOLÓGICA DA N-(4-METIL-ACETOFENIL) ISATINA. 1Vignoli, T.*; 1Blanco, L. C.*; 1Malvar, D. C.*; 1Pires, P. A.*; 2Rodrigues, J. F.**; 2Silva, F.A.; 2Netto-Ferreira, J. C.; 1Vanderlinde, F. A.; 1Côrtes, W. S.; 1Ciências Fisiológicas IB-UFRRJ; 2Química UFRRJ Objetivo:

Investigar as propriedades antinociceptivas e anti-inflamatórias do derivado isatínico N-(4-metil-acetofenona)isatina (4-MAI). Métodos e Resultados: Utilizamos camundongos SW-55 machos com peso entre 20 e 35 g, divididos em grupos de 6 animais. O 4-MAI foi solubilizado em DMSO 20% e administrado por via oral. Utilizamos os métodos das contorções abdominais (Fed.Proc.,18:412,1959), placa quente (JPET., 80:300,1944), formalina (Pain, 30:103,1987) e edema de orelha (Arneim.-Forsch./DrugRes.32:230,1982). Nas contorções abdominais, os animais foram tratados com o 4-MAI nas doses 20, 40 e 80mg/kg; DMSO, NaCl 0,9% (salina) e indometacina 10mg/kg. Aos 60 min pós-tratamento administrou-se ácido acético 1,2% (i.p, 0,01mL/g) e determinou-se o n° de contorções abdominais acumuladas

(c.a.) durante 30 minutos. Comparativamente ao grupo DMSO (35,38±6,40), a dose de 80mg/kg da 4-MAI inibiu as contorções em 51,24% (17,25±3,15) e a indometacina inibiu as contorções em 65,94% (17,5±2,89). Na placa quente, antes e após o tratamento com a 4-MAI 40 e 80mg/kg, fentanil 0,3mg/kg, s.c, DMSO e salina, mediu-se o tempo de reação (segundos) na placa aquecida a 55 ±1 oC. A 4-MAI não alterou o tempo de reação em comparação ao DMSO. Na formalina, utilizou-se a 4-MAI na dose de 80 mg/kg, DMSO; salina e indometacina. Aos 60 minutos pós-tratamento aplicou-se formalina 3,0% na região plantar da pata direita, monitorando-se o tempo de lambedura e mordedura (segundos) da fases I (dor neurogênica, 0 a 5 min) e II (dor inflamatória, 15 a 30 min). Comparativamente ao grupo DMSO (156,5±23,84), a 4-MAI 80mg/kg (39,63±16,45) inibiu a fase II em 74,68% (P<0,001, n=6). No edema de orelha, utilizou-se a 4-MAI 80mg/kg, DMSO, salina e dexametasona 0,5mg/kg. Uma hora depois foram aplicados 10 µL de óleo de cróton 2,5% v/v em acetona na orelha direita e acetona na orelha esquerda. Após 4 horas os animais foram sacrificados e tiveram removidas amostras de 6 mm de diâmetro de cada orelha. Estas foram pesadas, calculando-se a diferença de peso (mg) entre as amostas. A 4-MAI 80 mg/kg (11,83±0,52) não apresentou alteração se comparada ao DMSO (12,37±0,96). Conclusões:

Na dose de 80mg/kg a 4-MAI apresentou leve atividade antinociceptiva, sem envolvimento de mecanismos centrais. Não se observando atividade anti-inflamatória para este derivado. 36.160 EFFECT OF REACTIVE COMPOUND 1,2-NAPHTHOQUINONE IN THE RAT AIRWAYS. 1Teles, A. M.; 1Yshii, L.M.**; 2Kumagai, Y.; 1Tavares de Lima, W. T.; 1Muscara, M. N.; 1Costa, S. K. P.; 1Farmacologia ICB I-USP; 2Medicina University of California Objetivo: Respiratory disorders are thought to be associated with acute exposure to airborne combustion such as diesel exhaust pollutant (DEP) and reactive organic compound 1,2- naphthoquinone (1,2-NQ). We have shown that 1,2-NQ produced a potent oedema in the mouse cutaneous microvasculature (XXXVI SBFTe, 2004), but it is unknown the potential importance of 1,2-NQ to inflammatory airway diseases. Métodos e Resultados:

C57BL/6 mice (25-30 g) or Wistar rats (250 g) were used. Edema formation in rat airways (nasal mucosa, trachea, bronchi and lung) in response to intratracheal (i.tr.) or nasal administration of test agents (50-100 ml) was assessed by i.v. 125I-BSA (0.03 MBq; Br.J.Pharmacol.139:59,2003). Isometric contractions of isolated mouse trachea were recorded at 1 g tension. The results are expressed as the mean±S.E.M. Neither DEP nor 1,2-NQ (3 µg or 10 µg) produced contractile effect when directly applied to the trachea over 5 min (n=5). After 30 min, the intranasal application of ovalbumin (OVA 5% in 50 ml) caused a significant edema formation in the nasal mucosa (95±21* ml) of rats in comparison to vehicle treated rats (42±4.6 ml). No significant changes were observed in the trachea, bronchi or lung of these animals. The intratracheal injection of OVA 5% (100 ml) showed a significant edema in the trachea (357.6±42.4* ml), bronchi (799±95.8** ml) but not lung of rats as compared to its vehicle (163±28 and 444±65 ml for trachea and bronchi, n=4). The same approach with 1,2-NQ (10 mM) did not produce a significant edema in the airways of rats as compared to vehicle (not shown). Conclusões: The allergen OVA (30 min), but not 1,2-NQ, increases airway venular permeability to cause transient extravasation and lamina propria distribution of plasma in the large airways (trachea and bronchi but not lung) of non-sensitized rats. Thus, suggesting that the extravasation response is a useful measure of active inflammation. We are currently experimenting higher concentrations of 1,2-NQ and DEP in order to establish their role in airway disorders. 36.161 PARTICIPAÇÃO DO SISTEMA LINFÁTICO NA HIPORREATIVIDADE BRÔNQUICA PROVOCADA POR ISQUEMIA E REPERFUSÃO INTESTINAL (I/R-i). 1 F., R., Coelho; 2 Cavriani, G.**; 3 Oliveira-Filho, R. M.; 4 Tavares de Lima, W. Farmacologia ICB I-USP Objetivo:

Dados anteriores mostraram que a I/R-i induz redução na reatividade brônquica em ratos, por mecanismos ainda não completamente esclarecidos. Sabe-se que durante o período isquêmico há geração de grande quantidade de citocinas pró-inflamatórias, as quais podem atingir o pulmão por meio do ducto linfático torácico durante a reperfusão, acarretando um quadro de disfunção pulmonar. Neste trabalho objetivamos avaliar a importância da drenagem linfática intestinal para o estabelecimento da hiporreatividade brônquica causada pela I/R-i. Métodos e Resultados: Grupos de ratos Wistar com ducto linfático intacto (n = 5) ou submetidos a secção do ducto linfático torácico (n = 5), foram posteriormente operados para indução de isquemia intestinal (45 min) e reperfusão (2 h). A reatividade dos brônquios intrapulmonares foi avaliada com metacolina (MCh) e KCl em registros da contração isométrica. Um grupo paralelo de animais intactos (basal) teve os brônquios incubados (2h) com a linfa retirada de animais I/R-i. Além disso, dado que após a I/R-i há aumento nos níveis de TNF na linfa regional, brônquios de animais intactos foram incubados com 1 nM de TNF durante 20 minutos, e a seguir testados quanto a sua reatividade, como acima. A resposta máxima foi avaliada em animais submetidos a I/R-i, a secção do ducto linfático impediu a hiporreatividade à MCh que foi observada em animais I/R-i com ducto pérvio (11,0 ± 1,6 vs. 6,0 ± 0,2 g/100 mg); o mesmo foi observado com relação ao KCl (9,0 ± 1,3 vs. 6,1 ± 0,4 g/100 mg). A linfa de ratos I/R-i diminuiu (5,4 ± 0,3) e o TNF aumentou (19,1 ± 1,9) a reatividade de ratos intactos em relação à reatividade basal (12,7 ± 0,5 g/100 mg). Conclusões:

Estes resultados sugerem que a linfa tem importante papel no estabelecimento da hiporeatividade brônquica após I/R-i, possivelmente carreando para o pulmão os mediadores gerados durante o período isquêmico, porém o TNF não estando associado a diminuição de reatividade. 36.162 PARTICIPAÇÃO DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS (IL-1b E TNF-a) E DE RECEPTORES GLUTAMATÉRGICOS NA AÇÂO ANTINOCICEPTIVA DA DIACEREÍNA EM CAMUNDONGOS. 1Gadotti, V. M.; 1Pinto, H. F. 1Oliveira, G. L. M.*; 2Kaster, MP**; 3Quintão, N. L. M.**; 1Santos, A. R. S.; 1Ciências Fisiológicas UFSC; 2Bioquímica UFSC; 3Farmacologia UFSC Objetivo:

Demonstrou-se recentemente que a diacereína (DCR), um conhecido inibidor da síntese e da atividade de várias citocinas pró-inflamatórias, tais como a IL-1β, IL-6 e o TNF-α, apresenta importante efeito antinociceptivo e anti-hiperalgésico em ratos e camundongos. O presente estudo analisa o efeito antinociceptivo da DCR na nocicepção induzida por citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α), bem como, por agonistas de receptores glutamatérgicos em camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss (25-35g n=6-12) de ambos os sexos. A nocicepção foi caracterizada pelo tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo (TLM) os membros posteriores (patas posteriores, cauda e abdômen) após a injeção intratecal (i.t.) de IL-1β (1 pg/sítio), TNF-α (0,1 pg/sítio), glutamato (GLU, 175 nmol/sítio), NMDA (450 pmol/sítio), cainato (CA, 110 pmol/sítio), AMPA (135 pmol/sítio) ou trans-ACPD (50 nmol/sítio). A DCR (5-50 mg/kg, i.p.) reduziu de forma significativa o TLM induzido pela injeção i.t. de IL-1β e TNF-α com DI50s de 11,0 (9,5-12,8) e 4,7 (3,1-7,0) mg/kg e inibições de 93±5 e 100%, respectivamente. A DCR (25 mg/kg, i.p.) também reduziu de forma significativa o TLM induzido pela injeção i.t. de GLU, NMDA, CA e trans-ACPD com inibições de 53±8, 61±13, 43±15 e 43±10%, respectivamente. Contudo, a DCR (25 mg/kg, i.p.) não reduziu o TLM causado pela injeção i.t. de AMPA. Conclusões: Estes resultados estendem dados anteriores e indicam que a DCR apresenta importante efeito antinociceptivo, em parte, por modular as ações de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α) e dos receptores glutamatérgicos, tanto ionotrópicos (NMDA e CA) quanto metabotrópicos. 36.163 ASSOCIAÇÃO DE ANTIINFLAMATÓRIOS Á SOROTERAPIA NO TRATAMENTO DO EDEMA DE PATA INDUZIDO PELO VENENO DE BOTHROPS JARARACA. Araújo, S. D.; Nunes, F. P. B.**; Gonçalves, L. R. C. Fisiopatologia Instituto Butantan

Objetivo: O veneno da serpente Bothrops jararaca (VBj) desencadeia intensas reações locais, como edema, dor, hemorragia, podendo haver necrose de pele e músculo. A eficiência do soro antibotrópico (SAB) contra a ação tóxica sistêmica deste veneno é inquestionável, porém o SAB é pouco eficiente em prevenir reações locais, mesmo quando aplicado pouco tempo depois do envenenamento. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar os efeitos da associação de antiinflamatórios à soroterapia sobre o edema, em camundongos inoculados com o VBj. Métodos e Resultados: Camundongos Swiss machos (18-22g), receberam 2,0 µg de VBj (30 µl) em uma das patas posteriores, e salina (sal) (30 µl) na pata contralateral. Grupos de animais (n=6) receberam os seguintes tratamentos, 15, 30 ou 45 minutos após a injeção de VBj:1) sal (ip) (0,5ml) + sal i.v. (0,2 ml); 2) dexametasona (Dx) (1mg/Kg) (i.p) (0,5ml) + sal i.v. (0,2 ml); 3) SAB i.v. (0,2ml) + sal i.p. (0,5ml) , 4) Dx (i.p) (0,5ml) + SAB (i.v) (0,2ml). O edema foi avaliado com o auxílio de um paquímetro 1, 2, 4 ,6 e 24 horas após a injeção do VBj. Os resultados demonstraram que os grupos tratados com SAB, Dx ou Dx + SAB, 15 e 30 minutos após a injeção de VBj, apresentaram respectivamente uma redução de 23%, 21% e 32% de edema quando comparados ao pico de edema do grupo controle. Dos grupos tratados 45 minutos após a injeção de VBj, apenas o grupo Dx + SAB apresentou uma redução significativa de edema em relação ao grupo controle. O mesmo perfil foi observado com a associação de indometacina (indo) ao SAB. Por outro lado, a associação de prometazina ao SAB, não resultou em alteração de edema, quando comparado ao grupo tratado apenas com SAB. Conclusões:

Estes dados sugerem que a associação de Dx ou indo à soroterapia melhore o tratamento do edema inflamatório observado no envenenamento botrópico em camundogos. 36.164 5-HYDROXYTRYPTAMINA INDUZ HIPERALGESIA NO TECIDO SUBCUTÂNEO ATRAVÉS DE MECANISMOS INDIRETOS. 1Oliveira, M. C. G.; 1Clemente, J. T.**; 2Parada, C. A.; 1Tambeli, C. H.; 1Ciências Fisiológicas FOP-UNICAMP; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dos eicosanóides e das aminas simpatomiméticas na hiperalgesia mecânica induzida pela 5-Hydroxytryptamina (5-HT) no tecido subcutâneo da pata de ratos. Métodos e Resultados: A hiperalgesia mecânica induzida pela administração de 5-HT (0,1; 1,0; 10µg), no tecido subcutâneo da face dorsal da pata dos ratos (Wistar, 200-250g), foi quantificada através de um analgesímetro de pressão (Randal Sellito) 0, 30, 60, 120 e 180 min. após a administração de 5-HT. O pico da resposta hiperalgésica foi atingido 60 min. após a administração de 5-HT (1,0µg), média ± EPM: 22.78g ± 3.80, n=6 e essa resposta foi significativamente maior que a induzida pela administração de NaCl (0,9%): 1,67g ± 2,58, n=6, p<0.05, teste T. A depleção das aminas simpatomiméticas pelo tratamento diário (3 dias) com guanetidina (30mg/Kg,i.p.) reduziu significativamente a hiperalgesia induzida pela administração de 5-HT (1,0µg): 1,11g ± 3,30, n=6, p<0.05, teste Tukey. O antagonista de adrenoceptor β1 (atenolol; 6,0µg), β2 (ICI 118,55; 1,5µg), o inibidor da COX (indometacina; 100µg) ou o antagonista seletivo do receptor 5-HT3 (tropisetron; 150µg) reduziu significativamente a hiperalgesia induzida pela 5-HT(1,0µg) quando co-administrado com a mesma: -5,56g ± 1,70; -9,44g ± 2,88; 2,78g ± 2,88; -2,22g ± 2,31, respectivamente, n=6, p<0,05, teste Tukey, mas não quando administrado na pata contralateral a que recebeu 5-HT (1,0µg): 29,44g ± 3,96; 19,44g ± 3,72; 23,89g ± 3,37; 23,33g ± 2,48, respectivamente, n=6, p<0,05, teste T. Conclusões: A hiperalgesia mecânica induzida pela 5-HT no tecido subcutâneo da pata dos ratos é mediada por mecanismos indiretos que envolvem a liberação prévia de eicosanóides e aminas simpatomiméticas. 36.165

ANÁLISE DA PARTICIPAÇÃO DO TNFA NAS RESPOSTAS INFLAMATÓRIAS CAUSADAS PELA CARRAGENINA NA PATA DE CAMUNDONGOS. Rocha, A. C. C.*; Fernandes, E. S.**; Quintão, N. L. M.**; Campos, M. M.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a participação do fator de necrose tumoral alfa (TNFα) nas respostas inflamatórias induzidas pela carragenina (Cg) na pata de camundongos. Métodos e Resultados: Foram usados camundongos machos Suíços, camundongos C57/BL6 ou camundongos com deleção gênica para o receptor p55 do TNFα (25-35g, N = 6). O edema de pata foi induzido pela injeção intraplantar (i.pl.) de Cg (300 µg/pata). A migração de neutrófilos foi quantificada pela medida da atividade da mieloperoxidase (MPO) 6h após o tratamento com Cg. A injeção i.pl. de Cg (300 µg/pata) produziu edema de pata marcante e bifásico, com respostas máximas em 4h (fase aguda) e 48h (fase tardia), além de induzir aumento acentuado da atividade da MPO. O anticorpo anti-TNFα (100 µg/kg, e.v., 15 min), inibiu de forma significativa o edema de pata causado pela Cg em 4h e 48h (64 ± 3 % e 29 ± 12 %). Uma inibição semelhante do edema causado pela Cg também foi observada após o tratamento com o inibidor da síntese de TNFα, a talidomida (30 mg/kg, s.c., 30 min), tanto em 4h, quanto em 48 h (75 ± 4 % e 41 ± 11 %). A talidomida ainda produziu inibição significativa da atividade da MPO (44 ± 2 %). Finalmente, o edema causado pela Cg foi significativamente inibido em animais com deleção gênica para o receptor p55 do TNFα em 4h e 48 h (64 ± 3 e 77 ± 2 %), sendo que a atividade da MPO também foi significativamente reduzida nestes animais (64 ± 4 %). Conclusões:

Os resultados obtidos indicam que a citocina TNFα possui um papel essencial na formação do edema (nas fases aguda e tardia), e na migração de neutrófilos induzidos pela Cg em camundongos. Estes dados contribuem para a melhor compreensão dos mecanismos envolvidos com a resposta inflamatória. 36.166 A NOVEL METHOD FOR SUBARACHNOID DRUG DELIVERY IN THE MEDULLARY REGION OF RATS. 1Fischer, L; 1Tambeli, C.H.; 2Parada, C.A.; 1Ciências Fisiológicas FOP-UNICAMP; 2FMRP-USP Objetivo: Drug administration to the medullary cerebrospinal fluid is a useful tool in the orofacial pain research, and is currently accomplished by a moderate invasive procedure through a catheter implantation. This study describes a novel method for direct subarachnoid drug delivery to the medullary dorsal horn region of rats, without introducing a catheter. Métodos e Resultados: Experiments were performed on 250 – 320g Wistar rats. For subarachnoid injection (s.i.) rats were anesthetized with halothane and dorsally positioned. A 30-gauge needle connected a polyethylene cannula was first inserted just bellow the occipital bone up to 4mm, and slightly inclined in a cranial direction. The needle was advanced more 2mm to perforate the atlanto-occipital membrane and reach the medullary subaracnoid space. The injection procedure was tested by the administration of Evans blue dye (0.1%, 10µl). To verify whether s.i. induces motor impairment, a rota-rod test was performed. The reliability of the method was demonstrated by a pharmacological validation; that is, the effect of s.i. morphine was evaluated on the temporomandibular joint (TMJ) formalin test (Pain, 2: 185, 2001). The Data were analyzed by a one-way ANOVA and Tukey post-hoc tests (p < 0.05). A diffuse staining was evident along spinal cervical canal and in the brain region after the s.i. of Evans Blue dye. The time of permanence in the rota-rod test before and after s.i. of saline or morphine was the same (120 s, cut-off). S.i. morphine (6 and 9µg/10 µl) blocked in a dose dependent manner (mean + EPM: 122.2 + 16.6, n=6 and 75.1 + 15.9, n=6; respectively) the nociceptive response to formalin injected in the TMJ region (281.5 + 25.5, n=6). This effect was prevented by the co-administration of naloxone (202.1 + 38.4, n=6), which alone had no effect (236.2 + 23.6, n=5). Conclusões:

This non-invasive method for subarachnoid drug delivery in the medullary dorsal horn region may be very useful in trigeminal pain studies. Since the method does not require surgical exposition of neck muscles, it may be particularly useful in behavioral studies when head finch or head withdraw are evaluated. 36.167 AVALIAÇÃO MORFOMÉTRICA E DE PERMEABILIDADE INTESTINAL EM RATOS TRATADOS COM INDOMETACINA E CELECOXIB. 1 Maciel, J. G.; 2Braga, A. B. C*; 2Aguiar, C. V.*; 2Bezerra, L. B. M.*; 2Oriá, R. B.; 2Brito, G. A. C.; 2Figueredo, N. L.*; 2Pereira, F. W; 2Rolim, M. F.; 2Lima, A. A. M.; 1Medicina Experimental e Ciências Bioquímicas UFC; 2Fisiologia e Farmacologia, UFC Objetivo:

As drogas antiinflamatórias, analgésicas e antipiréticas estão entre os fármacos mais utilizados na prática clínica. De importância nessa classe estão os “antiinflamatórios não esteroidais” (AINEs) Efeitos colaterais como a toxicidade gastrintestinal limitam sua utilidade clínica. Objetivou-se avaliar as alterações morfofuncionais em ratos tratados com inibidores seletivos de COX Celecoxib (CEL) e não seletivos Indometacina (IND). Métodos e Resultados:

Ratos Wistar, de ambos os sexos, (180-250g), foram tratados por 3 dias com IND 5mg/kg/dia, CEL 20mg/kg/dia ou PBS 1ml/dia via gavagem. Realizou-se avaliação de permeabilidade intestinal (n=8/grupo) pelo teste de lactulose e manitol (L/M) e análise morfométrica (n=6/grupo). IND causa maior excreção urinária de manitol (40,23 ± 11,7 vs 13,3 ± 7,8) e lactulose (33,6 ± 11,25 vs 2,3 ± 0,3) sem alterar a taxa L/M. O CEL demonstrou alteração somente na taxa de excreção urinária de manitol (11,3 ± 2,8 vs 13,32 ± 7,8). IND causou redução da altura dos vilos em todos os segmentos, 411,8 ± 11; 359,2 ± 11,8; 271 ± 9 e 226,9 ± 7 contra alturas no grupo-controle de 774,6 ± 11,2; 541,9 ± 6,2; 446,5 ± 6 e 413,9 ± 3, 7, respectivamente em DUO, JEJ, IME e ILE. IND reduziu a profundidade das criptas em DUO (204,5 ± 7,1 vs 251,5 ± 6,9;) enquanto no JEJ observou-se um aumento (195,4 ± 5,1 vs 176,3 ± 3,7;).CEL reduziu a altura dos vilos em todos os segmentos, 612,3 ± 10, 4, 453,5 ± 7,58, 336 ± 7,4 e 240,3 ± 5,5 , contra alturas no grupo-controle de 647,8 ± 11,2, 524,2 ± 12,2, 424,6 ± 7,9, 287,8 ± 6,7 respectivamente em DUO, JEJ, IME e ILE. CEL reduziu a profundidade das criptas em IME (123,2 ± 4,9 vs 162,2 ± 3,7) e no ILE (173 ± 4,5 vs 207,3 ± 5,8). Conclusões: As alterações de permeabilidade intestinal do grupo IND sugerem lesão com perda da integridade da barreira intestinal, que, associadas à redução da altura dos vilos em todos os segmentos intestinais, podem explicar a fisiopatologia dos danos gastrintestinais dessa droga. Esse dano, como foi visto, mostrou-se mais nítido com o uso de inibidor não seletivo de COX. 36.168 EFEITO ANTINOCICEPTIVO DA INOSINA NA ALODÍNIA MECÂNICA E TÉRMICA AO FRIO CAUSADA PELA CONSTRIÇÃO PARCIAL DO NERVO CIÁTICO EM CAMUNDONGOS. Ostroski, R.**; Nascimento, F. P.; Almeida, R. C.**; Santos, A. R. S. Ciências Fisiológicas CCB-UFSC Objetivo: Estudos anteriores demonstram que a inosina, nucleosídeo endógeno, possui ações anti-inflamatória, imunomodulatória e neuroprotetora. Recentemente Demonstrou-se que a inosina causou significativo efeito antinociceptivo em vários modelos de nocicepção aguda em camundongos. O presente estudo analisa o possível efeito da inosina na alodínia mecânica e térmica ao frio induzida pela constrição parcial do nervo ciático (CPNC), um modelo de nocicepção crônica. Métodos e Resultados:

Foram utilizados camundongos suíços de ambos os sexos (25 – 35g; N = 6 a 10 por grupos). A alodínia mecânica e térmica ao frio induzida pela CPNC foi avaliada em diferentes intervalos de tempo através da porcentagem de retirada da pata (ipsilateral) frente ao estímulo mecânico causado pela aplicação do filamento de Von Frey ou pela placa de metal mantida a temperatura de 1 ± 1 °C. A inosina (30 mg/kg, i.p.) reduziu de forma significativa e tempo dependente (0,5 até 8 h após sua administração) a alodínia mecânica causada pela CPNC, com inibição máxima de 100%.

Além disso, a inosina (10 mg/kg, i.p.) administrada 30 min antes, também reduziu de forma significativa e tempo dependente a alodínia térmica ao frio causada pelo CPNC com inibição de 42±13 a 70±11%, sendo que este efeito prolongou-se por 6 horas. Conclusões:

Estes resultados estendem os dados obtidos anteriormente e mostram claramente que a inosina também foi efetiva em reduzir de forma tempo dependente a alodínia mecânica e térmica ao frio presente na nocicepção crônica de origem neuropática causada pela CPNC. 36.169 LECTINA DE LEGUMINOSA REDUZ PERDA ÓSSEA PERIODONTAL EM RATOS 1Bezerra, M. M.; 1Lopes, R. N.*; 1Belarmino, A. P.*; 1Graça, J.**; 2Cavada, B. S.; 2Pinto, Teixeira, V. P.; 1Lopes, L. O. L*; 1Lima, V; 2Teixeira, EH; 1Brito, GAC; 1Rocha, FA; 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Departamento de Bioquímica Médica, UFC Objetivo: Neutrófilos estão associados com Perda Óssea Alveolar (POA) que caracteriza a Doença Periodontal (DP), principal causa de perda de dentes em adultos. A interação leucócito-endotélio, via moléculas com domínio lectínico, é essencial para resposta inflamatória. Lectinas inibem migração de neutrófilos in vitro. Decidimos investigar o efeito de lectinas de sementes de Dioclea violácea (DvL) e de lectinas isoladas da alga Bryothamnion seaforthii (BS) na DP em ratos Métodos e Resultados: Ratos Wistar (~180g) foram submetidos à DP através da colocação de um fio de nylon (3.0) nos segundos molares superiores e tratados (e.v.) por 7d com DvL (0,5, 1 ou 2mg/kg) ou BS (2mg/kg). O grupo não-tratado (NT) recebeu salina (e.v.). Animais e ração consumida foram pesados diariamente. No 7º dia os animais foram sacrificados e a POA medida como a distância (mm) entre a junção cemento-esmalte e osso alveolar. DvL 1mg/kg reduziu (p<0,05) a POA (2,7±0,26), comparado ao NT (5,5±1,3). DvL 0,5 ou 2mg/kg ou BS não reduziram (p>0,05) a POA (3,9±0,75; 6,65±2,84; 8,1±1,11) comparados ao NT. Animais tratados com DvL 1mg/kg consumiram 50% da ração disponível enquanto aqueles tratados com DvL (0,5 ou 2mg/kg) ou BS 2mg/kg e o grupo NT consumiram 18, 12, 10 e 14%, respectivamente. Animais tratados com DvL perderam apenas 17g após 7d, enquanto aqueles tratados com DvL (0,5 ou 2mg/kg) ou BS 2mg/kg e o grupo NT perderam 46, 57, 47 e 48g, respectivamente Conclusões: A DvL reduziu a POA provavelmente por bloquear ligações entre moléculas de adesão complementares, prevenindo a migração de leucócitos, podendo representar uma nova abordagem anti-inflamatória. É possível que doses menores que 1mg/kg não assegurem concentrações satisfatórias de lectinas nos sítios receptores, enquanto doses maiores do que 1mg/kg promovam toxicidade 36.170 RECUPERAÇÃO DA BARREIRA MORFOFUNCIONAL INTESTINAL NA INJÚRIA INDUZIDA INDOMETACINA E CELECOXIB EM RATOS SUPLEMENTADOS COM ALANIL-GLUTAMINA. 1Maciel, J. G.; 2Aguiar, C. V.*; 2Oriá, R. B.; 2Bezerra, L. B. M.*; 2Braga, A. B. C*; 2Pereira, F. W.; 2Figueredo, N. L*; 2Rolim, M. F. ; 2Brito, G. A. C.; 2Lima, A. A. M.; 1Experimental e Ciências Bioquímicas, UFC; 2Fisiologia e Farmacologia UFC Objetivo: Os AINEs são bem conhecidos como causadores de danos gastrintestinais. Estudos anteriores do grupo, realizados com inibidor dual de COX, Indometacina (IND), e inibidor seletivo COX-2, Celecoxib (CEL), demonstraram um importante dano à estrutura da mucosa intestinal. A suplementação da solução de reidratação oral com nutrientes como alanil-glutamina (AGL) podem melhorar a absorção intestinal e no restabelecimento da mucosa lesada. Objetivou-se avaliar o impacto do uso de derivado glutamínico na lesão intestinal induzida por AINEs. Métodos e Resultados: Ratos Wistar, de ambos os sexos, 180-250g, foram tratados por 3 dias com IND 5mg/kg/dia, CEL 20mg/kg/dia ou PBS 1ml/dia via gavagem; PBS 0,5ml/dia ou AGL 0,6mg/dia via subcutânea. Realizou-se análise morfométrica (n= 6-10/grupo). Resultados: No grupo PBS/AGL não foi observado diferença significativa no trofismo da mucosa intestinal em relação ao grupo de animais normais PBS/PBS. No grupo IND/AGL houve aumento da altura de vilos em DUO (481,3 ± 16,5 vs

413,8 ± 10, 7µm), JEJ (378,8 ± 13,8 vs 325± 7,6µm) e ILE (70 ± 14,9 vs 253,8 ± 13,5µm) em relação à IND/PBS. Não se observaram diferenças na profundidade das criptas. No grupo CEL/AGL houve aumento da altura dos vilos em DUO (524,6 ± 15,1 vs 437,7 ± 14,10µm) e JEJ (594,1 ± 14,8 vs 547,2 ± 15,6µm) e de criptas em DUO (200,4 ± 8,1 vs 177,5 ± 7,1µm) em relação ao grupo CEL/PBS. Conclusões: A alanil-glutamina estimula o trofismo intestinal ao nível de vilos e criptas. Estes dados sugerem um potencial uso terapêutico deste composto na recuperação da barreira funcional intestinal em ensaios de AINEs. 36.171 SENSIBILIZAÇÃO NOCICEPTIVA EM CAMUNDONGOS INDUZIDA POR PRÉVIO EPISÓDIO INFLAMATÓRIO AGUDO. Funez, M. I.; Villarreal, C. F.; Cunha, F. Q.; Parada, C. A.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Baseados no fato de que dores crônicas de origem inflamatória podem seguir a um episódio de inflamação aguda neste trabalho nós avaliamos se um evento inflamatório agudo, induzido por injeção intraplantar (i.pl.) de carragenina (CG), altera a resposta nociceptiva a estímulos inflamatórios administrados posteriormente (5 dias depois). Métodos e Resultados: O limiar nociceptivo mecânico de camundongos (suíços, machos, 20-25g) foi avaliado utilizando-se o teste de pressão crescente na pata (Ugo Basile, valores expressos em gramas, média de cinco animais ± epm). A administração i.pl. de CG (100µg/25µL) induziu hipernocicepção aguda (6,3±0,604) e aumentou a resposta nociceptiva a baixas doses de PGE2 (9ng/25µL) ou dopamina (DP) (3µg/25µL), 5 dias depois (5,7±0,682 e 5,6±0,332, respectivamente). Esta sensibilização é dependente da liberação de aminas simpatomiméticas e de eicosanóides visto que o pré-tratamento dos animais com antagonista dopaminérgico, clorpromazina (3µg/25µL/i.pl.), ou com o inibidor não seletivo de ciclooxigenase, indometacina (5mg/Kg/i.p.), preveniu seu desenvolvimento (1,2±1,179 e 0,1±0,510, respectivamente). Concordando com esta idéia, a administração prévia de PGE2 (90ng/25µL) ou DP (30µg/25µL) também induziu sensibilização nociceptiva uma vez que a resposta a baixas doses de PGE2 ou DP, 5 dias depois, foi mais intensa e duradoura do que em animais tratados com salina (6±0,447 e 6±0,57, respectivamente). Adicionalmente, morfina (6mg/Kg/subcutânea) embora tenha prevenido a hipernocicepção aguda da CG (-0,2±0,339), não preveniu o desenvolvimento da sensibilização nociceptiva (5,917±0,539). Conclusões: Estes resultados indicam que após um episódio de inflamação aguda pode ocorrer sensibilização dos nociceptores evidenciada em nosso trabalho por aumento na resposta nociceptiva a estímulos que em condições normais produzem discreta hipernocicepção. E provavelmente este fenômeno não é resultado da experiência nociceptiva e sim da ativação de vias de sinalização intracelular. 36.172 CARACTERIZAÇÃO FARMACOLÓGICA DA RESPOSTA EDEMATOGÊNICA CAUSADA PELA PROSTAGLANDINA E2 (PGE2) EM CAMUNDONGOS. Claudino, R. F.; Kassuya, C. A. L.

**; Ferreira, J.; Calixto, J. B. Farmacologia UFSC Objetivo: A PGE2 é sintetizada em vários tecidos e exerce inúmeras ações no organismo, especialmente no controle da dor e da inflamação. Essa diversidade de efeitos é decorrente da ação em múltiplos subtipos de receptores (EP1-4). Sabe-se que a administração periférica de PGE2 produz edema, entretanto, pouco é conhecido sobre os receptores e as vias de sinalização envolvidas neste processo. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os subtipos de receptores envolvidos, bem como investigar alguns dos mecanismos envolvidos no edema causado pela PGE2 na pata de camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss machos (25-35 g, N=5-8 por grupo). O edema de pata foi avaliado após a injeção intraplantar (i.pl.) de PGE2 (0,1-10 nmol/pata) com o uso de um

pletismômetro. A injeção i.pl. de PGE2 causou edema proporcional a dose empregada, com DE50 de 0,42 (0,29-0,54) nmol/pata e efeito máximo de 80±3 µl. A co-administração do antagonista do receptor EP3 (L-826,266, 10 nmol/pata), mas não de antagonistas dos receptores EP1, EP2 ou EP4, inibiu significativamente o edema da PGE2 em 80,8 ± 5,5%. Igualmente, o inibidor da PKC (GF109203X, 30 nmol/pata) reduziu o edema induzido pela PGE2 (inibição de 54,54±5,8%). Além disso, os inibidores das PK ativadas por mitógeno (MAPKs): ERK (PD98059), p38 (SB203589) e JNK (SP600125) (30 nmol/pata), inibiram o edema da PGE2 com inibições de 64,0±3,6%; 48,6±2,2% e 51,5±4,9%, respectivamente. Adicionalmente, a co-injeção do antagonista do receptor NK1 (FK 888, 1 nmol/pata), mas não de antagonistas dos receptores NK2 ou NK3, foi capaz de reduzir esse edema, com inibição de 61,5 ±3,8 %. Conclusões:

Esses resultados demonstram que a PGE2 produz edema via ativação de receptores EP3 e com possível envolvimento das MAPKs e da PKC. Adicionalmente, a ativação do receptor NK1 apresenta um papel importante no edema induzido pela PGE2. 36.173 DOR NEUROPÁTICA ESTÁ ASSOCIADA COM REDUÇÃO DA ATIVIDADE DA CATALASE NA MEDULA ESPINAL DE RATOS. 1 Guedes, R. P.**; 1Teixeira, C. M.; 1Dal Bosco, L.*; 2LLesuy, S.; 1Belló-Klein, A.; 1Partata, W. A.; 1Fisiologia UFRGS; 2Bioquímica Universidad Buenos Aires Objetivo:

As lesões nervosas periféricas causam produção de radicais livres no local do trauma, entretanto não é conhecido se isto também ocorre em outros níveis do sistema nervoso envolvidos na nocicepção. O estudo de antioxidantes pode ser uma forma de esclarecer se há participação de sistemas relacionados ao estresse oxidativo na dor neuropática. Por isso, este trabalho tem o objetivo de determinar a atividade da catalase (CAT) na medula espinal após axotomia. Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos Wistar machos para a realização da axotomia, na qual o nervo ciático direito foi seccionado; no grupo sham, o nervo foi exposto porém não houve secção; foi considerado ainda um grupo controle, no qual os animais não sofreram manipulação. Após a denervação, o limiar nociceptivo dos animais foi testado através do teste da placa quente (análise por teste de Kruskal-Wallis seguido de Dunn). Os ratos foram sacrificados 3, 7 e 15 dias (n=5 para cada grupo) após a lesão e a medula espinal foi removida e homogeneizada para a medida da atividade da CAT (pmol/mg de proteína), os dados foram analisados através de ANOVA de uma via seguido de Student-Newman-Keuls. A medida do limiar nociceptivo indicou que após 3 (2,9s±0,3) e 7 (5,4s±0,3) dias de lesão os animais denervados desenvolveram hiperalgesia, a qual desapareceu aos 15 dias. A lesão provocou uma redução da atividade da CAT em 30% no período de 3 dias e de 40% após 7 dias. Conclusões:

Ocorre diminuição da atividade da CAT após a denervação e, portanto, das defesas antioxidantes primárias na medula espinal após o desenvolvimento da dor neuropática no período concomitante ao desenvolvimento de hiperalgesia. 36.174 PARTICIPAÇÃO DA COX-2 NA INIBIÇÃO DA FAGOCITOSE E DE METABÓLITOS OXIDATIVOS NA ATIVIDADE FUNGICIDA INDUZIDA PELO C-TERMINAL DA S100A9 MURINA EM CÉLULAS PERITONEIAS ADERENTES. 1Pagano, R. L.; 2Sampaio, S. C.; 3Juliano, L.; 3Juliano, M. A.; 1Giorgi, R.; 1 Fisiopatologia Instituto Butantan; 2Farmacologia ICB I-USP; 3Biofísica UNIFESP Objetivo:

O C-terminal da proteína ligante de cálcio S100A9 inibe as atividades de espraiamento e fagocitose de células peritoneais aderentes (CPA) (Inflamm. Res., 2005, in press). No presente trabalho, foi investigado o mecanismo de ação do peptídeo sintético idêntico à porção C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m- H92-G110), tanto sobre a inibição da atividade fagocítica, bem como sobre a atividade fungicida em CPA. Métodos e Resultados:

Células residentes obtidas da cavidade peritoneal de camundongos Swiss (1x105 células/ml) foram aderidas a lamínulas de vidro para a avaliação dos ensaios de fagocitose, via receptor manose, e

atividade fungicida. A participação de eicosanóides no mecanismo de inibição do pS100A9m foi investigada utilizando: indometacina (Indo), inibidor de cicloxigenase (COX); zileuton (ZLT), inibidor da 5-lipoxigenase e celecoxib (CXB), inibidor específico da COX-2, em ensaios in vivo e ex-vivo. O peptídeo (0,25µg/ml) foi incubado por 1 h com as CPA, previamente tratadas com os diferentes inibidores, ou administrado (1µg/ml, v. ip.), 1 h antes da coleta das CPA, em animais pré-tratados com os fármacos. O efeito inibitório do pS100A9m foi revertido, pela Indo e pelo CXB, tanto nos ensaios in vitro como ex-vivo. Para a avaliação do efeito do pS100A9m sobre a atividade fungicida, as CPA foram incubadas com o peptídeo (0,25 ou 0,5µg/ml), durante 30, 60, 90 ou 120 min, antes da incubação com leveduras Candida albicans. O pré-tratamento com o pS100A9m induziu o aumento na morte deste patógeno aos 30 min (0,25µg: 71%; 0,5µg: 86%) e aos 60 min (0,5µg: 36%). Quanto a participação de reativos do oxigênio, neste efeito, o peptídeo (0,25µg/ml) induziu 78% de aumento de O2

-, detectado pelo ensaio de redução do NBT. Ainda, quanto a participação dos reativos do nitrogênio, o peptídeo induziu o aumento de 197% de nitrito, detectado por Reação de Griess. Conclusões: Estes dados, em conjunto, sugerem um efeito dual do pS100A9m sobre a funcionalidade de células peritoneais aderentes, induzindo efeito supressor da atividade fagocítica, via COX-2, e estimulando a atividade fungicida, via O2

- e NO. 36.175 AVALIAÇÃO DA INCAPACITAÇÃO ARTICULAR, EDEMA E EXTRAVASAMENTO PLASMÁTICO INDUZIDO POR FORMALINA NO JOELHO DE RATOS. Souza-Silva, E.; Oliveira, D. T.*; Martins, M. A.**; Tonussi, C. R. Farmacologia UFSC Objetivo:

Dor superficial e profunda sofrem modulação afetiva diferente. Formalina normalmente é utilizada como modelo de dor superficial, nosso objetivo foi avaliar a nocicepção, edema e exudação plasmática induzidos por formalina no joelho de ratos como um modelo de dor somática profunda. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (280–420g) N=05–06 receberam formalina (FOR) (5; 3; 1 ou 0,5%; 50 ul; i.art.). Os animais controle (C) receberam 50 ul de salina. Foi aplicado Azul de Evans (AE), (25 mg/kg; 0,1 ml/100 g, i.v.) 60 min antes do início do teste. A incapacitação articular foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP; s) durante marcha de 60 s, por 60 min em intervalos de 5 min; edema pela medida do diâmetro articular (DA; cm); extravasamento plasmático (EP; ug/ml) pela dosagem de AE no fluído sinovial. EP foi coletado 60 min após o início do teste, 5µl deste foram adicionados a 245 µl de salina para leitura de absorbância (610 nm). As articulações dos animais que receberam FOR 1, 0,5% ou C, 60 µl de salina foram utlizados para lavagem da cavidade articular e destes 5 µl foram diluídos em 245 µl de salina para leitura da absorbância. FOR intraarticular induz resposta nociceptiva bifásica com picos em 0 e 20 min do teste. FOR produziu incapacitação dose-dependente aos 0 min com TEP=54,7±1,8 s (5%); 44,1±3,2 s (3%); 24,6±5,9 s; 11,6±2,2 s (0,5%); TEPcontrole=9,8±0,4 s. Aos 20 min o TEP foi: 51,1±3,5 s (5%); 49,4±7,9 s (3%); 30,6±8,4 s (1%); 13,7±2,8 s (0,5%); TEPcontrole=9,7±0,71s. FOR 5 e 3% aumentaram o DA (C=0,001±0,017 cm; FOR 5%=0,16±0,02 cm, P<0,001; FOR 3%=0,09±0,03 cm, P<0,05;).FOR (5, 3 e 1%) aumentaram o EP (P<0,001; EP C=0,166±0,48 µg/ml; FOR 5%=18±5,7 µg/ml, P<0,001; FOR 3%=12,20±1,74 µg/ml, P<0,001; FOR 1%=2,66±0,56 µg/ml, P<0,05). FOR 0,5% não alterou o EP (EP C=0,16±0,47 µg/ml; FOR 0,5%=1,83±0,65 µg/ml). Conclusões:

O modelo de incapacitação articular permite avaliar em paralelo a nocicepção, o edema e o extravasamento plasmático, proporcional à concentração de formalina, sugerindo sua utilização para o estudo de drogas que modificam a dor e a inflamação neurogênica. 36.176 EFEITO ANTINOCICEPTIVO DO ÀCIDO OLEANÓLICO NO MODELO DE DOR VISCERAL INDUZIDA POR ÓLEO DE MOSTARDA: ENVOLVIMENTO DO ÓXIDO NÍTRICO, SISTEMAS OPIÓIDE E ADRENÉRGICO. 1Lima Júnior, R. C. P.; 1Maia, J. L.**; 1Martins, R. D.**; 1Menezes, A. M. A.**; 1Batista, C. K. L. P.**; 2David, J. M.; 3David, J. P.; 1Santos, F. A.; 1Rao, V. S. N. 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Farmácia UFBA; 3IQ-UFBA

Objetivo:

O ácido oleanólico (AO), um triterpenóide comumente encontrado em plantas medicinas, tem demonstrado efeito gastroprotetor e antiinflamatório. Este trabalho visa avaliar o potencial antinociceptivo do AO isolado de Eriope blanchetii Benth no modelo de dor visceral induzida por óleo de mostarda (OM) intracolônico, bem como sugerir os possíveis mecanismos de ação. Métodos e Resultados:

Camundongos Swiss machos (20-25g, n=6-8), foram pré-tratados com AO (3, 10 e 30 mg/kg, v.o.), veículo (3% Tween 80 em água destilada, 10 mL/Kg, v.o.), ou morfina (5 mg/kg, s.c.), 1,5h; 1,5h; 30min; respectivamente, antes da instilação intracolônica de OM (0,75% em salina, 50 µL/animal). Em seguida, foi registrado, por 20min, o número total dos comportamentos: lamber abdômem, arrastar abdômem contra o solo, contorção e retração abdominais. AO, nas doses de 10 e 30 mg/kg e morfina (5 mg/kg) reduziram significativamente (p<0,001), os comportamentos nociceptivos (31,50 ± 5,07; 19,00 ± 3,27; 8,67 ± 1,63, respectivamente) quando comparados ao grupo controle (54,40 ± 1,03). Na elucidação do mecanismo de ação antinociceptivo, naloxona (2 mg/kg, i.p.), um antagonista do sistema opióide, L-NAME (20 mg/kg, i.p.), um inibidor do NOS, e ioimbina (2 mg/kg, i.p.), um antagonista α2-adrenérgico, foram administrados aos animais concomitantemente com AO (30 mg/kg, v.o.). A naloxona reverteu parcialmente (p<0,05) o efeito antinociceptivo do AO (controle: 54,40 ± 1,03; naloxona + AO: 34,00 5,60; naloxona + morfina 21,00 3,36; p<0,05) o mesmo não sendo observado com ioimbina ou L-NAME. Conclusões: Os resultados indicaram uma atividade antinociceptiva visceral do ácido oleanólico, sugerindo uma participação parcial do sistema opióide como mecanismo de ação. 36.177 ANTAGONISM OF MYOTOXIC AND PHOSPOLIPASE ACTIVITIES OF APIS MELLIFERA VENOM BY SURAMIN. 1 El Kik, C. Z.; 2 Fernandes, F. F. A.*; Sanches, F. V.*; 4 Arruda, E. Z.; 5 Melo, P. A. Farmacologia Básica e Clínica ICB-UFRJ Objetivo: In this work we evaluate the ability of suramin, a polysulfonated naphtylurea derivative, to antagonize the phospholipase (PLA2) activity and the myotoxicity of the crude venom of Apis mellifera. Myotoxicity was assessed by in vivo by evaluation plasma creatine kinase (CK) activity or in vitro by the analyses of the rate of CK release. The PLA2 activity was evaluated by the modified Marinett method (1965). Métodos e Resultados: Adult male mice weighting 20-25 g were separated in groups of 5 animals. Control group received i.m. injection of phisiologyc saline solution and the other groups received i.m. injection of bee venom and were treated with suramin by i.p. route 15 min. before or after the venom injection, or 30 min. after pre incubation with bee venom. Two hours after i.m injection, the blood was collected in the orbital plexus, centrifuged and plasma CK was analyzed in a spectrophotometer. In the in vivo experiments the i.m. injection of bee venom (1.0 mg/kg) induced an increase of plasma CK activity which was 48% inhibited by suramin (10.0 mg/Kg) in a pre incubation injection. The pre treatment and post treatment in this same dose did not affect this myotoxic effect. Myotoxicity in vitro was analysed by perfusion of extensor digitorius longus (EDL) muscle and measured the rate of CK release. These muscles exposed to the bee venom (25 g/ml) showed an increase of 0.4 ± 0.1 (n=4) to 12.64 ± 2.3 U.g-1.h-1 (n=4) of the rate of CK release at 60 min. When we added suramin (10 ƒÝM) we observed a significant reduction to 1.86 ± 0.6 U.g-1.h-1 (n=4). Bee venom shows concentration-dependent PLA2 activity that was inhibited by suramin (1 – 30 M) also in a concentration-depedent way. Conclusões: Being suramin a polyaniontic molecule, its effect seems to be due to the interaction of its charges with the polycations present in the bee venom, showing that suramin protect the sarcolema against damage caused by bee venom components. Financial Support: CAPES , FAPERJ, CNPq -PRONEX. 36.178

PAPEL DOS MASTÓCITOS NO COMPROMETIMENTO DA RESPOSTA ALÉRGICA NA PELE DORSAL DE RATOS DIABÉTICOS. 1Carvalho, V. F.**; 1Campos, L. V.**; 1Barreto, E. O.**; 1Farias Filho F. A.; 2Primez, C.; 1Cordeiro, R. S. B.; 1Martins, M. A.; 1Silva, P. M. R. 1Fisiologia e Farmacodinâmica, FIOCRUZ; 5 Imunologia, FIOCRUZ Objetivo:

Sabe-se que a depleção mastocitária contribui para a refratariedade de animais diabéticos frente à estimulação alergênica pleural. Neste estudo investigou-se a influência do estado diabético sobre o processo inflamatório alérgico na pele dorsal de ratos, com especial enfoque sobre o extravasamento protéico e a população mastocitária. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos foram tornados diabéticos por injeção de aloxana (40 mg/kg, i.v.) e a sensibilização foi realizada através da injeção s.c. de Al(OH)3 + ovoalbumina (OVO), 11 dias após a indução do diabetes. O desafio antigênico constou da administração intradérmica de OVO (1,5 – 6 mg/sítio), na região dorsal de animais sensibilizados e previamente injetados i.v. com o corante vital Azul de Evans. O extravasamento protéico foi analisado em fragmentos de pele, extraídos 1 h após a estimulação, mediante quantificação do conteúdo de corante extravasado. Avaliação de mastócitos foi feita com base em cortes histológicos (5 µm) corados com Giemsa. Animais diabéticos, na condição de marcada hiperglicemia, apresentaram-se claramente menos reativos à estimulação antigênica dérmica. Valores de extrasamento protéico induzido por OVA (6 mg) reduziram de 2,9 ± 0,27 µg/sítio (média ± SEM) em ratos sensibilizados para 1,7 ± 0,1 µg/sítio (p<0.01) em ratos diabéticos sensibilizados. A análise histológica da pele dorsal de animais diabéticos revelou uma significativa redução na espessura medida entre a região de epiderme e a camada muscular. Nenhuma modificação foi notada no quantitativo da população de mastócitos presentes nas várias regiões. Conclusões:

Nossos resultados mostram que a resposta inflamatória alérgica na pele dorsal de ratos está inibida no diabetes por aloxana, e que este fenômeno parece dever-se ao comprometimento na reatividade, porém não no número, da população mastocitária dérmica. 36.179 FUNÇÃO QUIMIOTÁTICA E FAGOCÍTICA DE CÉLULAS MONONUCLEARES EM PACIENTES COM NEOPLASIA DE COLO UTERINO. 1Garcia, C. B.; 1Pereira, A. H. M.*; 2Micheli, D. C.*; 3Fernandes Jr, P. C.**; 3Murta, E. F. C.; 1Murta, B. M. T. 1Ciências Biológicas, FMTM; 2Farmacologia, FMTM; 3Ginecologia e Obstetrícia, FMTM Objetivo:

Avaliar as funções quimiotática e fagocítica de células mononucleares de pacientes com lesões neoplásicas do colo uterino e verificar se ocorrem diferenças, considerando o estadiamento das neoplasias. Métodos e Resultados:

Foram estudadas 16 pacientes com lesões neoplásicas de colo uterino, sem tratamento anterior. Destas, 8 tiveram diagnóstico de neoplasia intraepitelial cervical grau III ou carcinoma microinvasivo (grupo Microinvasivo), e 8 apresentaram carcinoma invasivo (grupo Invasivo). Os controles foram mulheres voluntárias sadias (n=13). As células mononucleares foram purificadas do sangue venoso periférico, antes de qualquer tratamento. A função quimiotática foi avaliada em microcâmara de quimiotaxia em resposta aos estímulos (fMLP, MCP-1 e RANTES, 10-7 M), comparados ao RPMI (migração aleatória), e os resultados foram expressos em n° de células/campo. Foi observada migração das células mononucleares das pacientes a todos os estímulos testados, sem diferenças quando comparado ao grupo controle. Porém, considerando o estadiamento da neoplasia, foi observado aumento do número de mononucleares emigrados (mediana; min-máx) no grupo Invasivo, de forma significativa para MCP-1 (4,20; 0,40 - 42,80) comparado ao grupo Microinvasivo (1,35; 0,10 - 4,40). O ensaio de fagocitose foi realizado utilizando-se zimozan sensibilizado como partícula fagocítica, e os resultados foram expressos pelo índice fagocítico. As células mononucleares das pacientes apresentaram atividade fagocítica (31,30 ± 4,10, n=14) semelhante ao grupo controle (32,20 ± 3,30, n=14). Considerando o estadiamento, houve certa redução na fagocitose dos mononucleares obtidos das pacientes do

grupo invasivo (27,50 ± 4,40, n=6) comparado ao grupo não invasivo (34,10 ± 6,40, n=8), porém de forma não significativa. Conclusões:

Pacientes com lesões neoplásicas de colo uterino em estádios mais avançados podem apresentar aumento da migração de células mononucleares circulantes, o que poderia ser favorecido por fatores quimiotáticos liberados no local da lesão. 36.180 SEGURANÇA E EFICÁCIA DO DICLOFENACO E DO CELECOXIB NA PERIODONTITE INDUZIDA EM RATOS. Barroso, M. V. B**; Lima, V.**; Alencar, N. M. N.; Camarão, G. C.; Marinho, M. M.; Frota, R. B.*; Moraes, M. O.; Moraes, M. E. A. Fisiologia e Farmacologia UNIFAC-UFC Objetivo:

Periodontite é a principal doença crônica responsável por perda de dentes em adultos. Ale de fatores locais, envolve fatores sistêmicos que eventualmente interferem na progressão da resposta inflamatória. O objetivo desse estudo foi avaliar a segurança e eficácia do diclofenaco e celecoxibe na periodontite induzida em ratos. Métodos e Resultados:

A periodontite foi induzida através da inserção de fio de náilon em torno dos 2os molares superiores direitos de ratos Wistar machos (180-220g), sob anestesia. Grupos de 6 animais cada receberam via sc diclofenaco (DCF 1, 5, 10 e 25mg/kg), celecoxibe (CLX 3, 9 e 27mg/kg) ou 0,5 mL de salina por 10 dias. Os ratos foram mortos no 11od e parâmetros locais e sistêmicos foram avaliados: perda óssea alveolar; mucosa gástrica, dosagens séricas de ALT, AST, uréia e creatinina (0 e 11d), hemograma completo (0 e 6h; 1, 7 e 11d) e variação de peso. Os resultados mostraram que DCF (1 e 5mg/kg) reduziu a perda óssea em 41% e 54,5%, respectivamente, enquanto as maiores doses levaram os animais a óbito. DCF induziu neutrofilia nos dias 7 e 11 e perda de peso a partir do 7odia. CLX (3, 9 e 27mg/kg) reduziu a perda óssea de forma significante em 64%, 53% e 75,4%, respectivamente. CLX não alterou os nos de leucócitos, plaquetas, nem a variação de peso. Tanto DCF (inibidor não seletivo das COXs), como CLX (inibidor seletivo de COX-2) não alteraram a mucosa gástrica, nem os níveis séricos de AST, ALT, uréia e creatinina, indicando preservação das funções hepática e renal. Conclusões: O uso sub-crônico de CLX apresentou eficácia significante aliada à baixa toxicidade sistêmica, enquanto que a inibição não seletiva de COX por DCF, mesmo em baixas doses, aliou riscos sistêmicos, demonstrando que o controle sub-crônico da periodontite por AINEs seletivos para COX-2 pode ser uma abordagem segura e eficaz. 36.181 PERFIL DO CONTEÚDO TOTAL DE HISTAMINA DURANTE A COLITE COM RECIDIVA INDUZIDA POR ÁCIDO TRINITROBENZENO SULFÔNICO (TNBS) EM RATOS WISTAR. Luchini, A. C.; Oliveira D. M. C.**; Santos, B. P.*; di Stasi, L. C.; Gomes, J. C. Farmacologia, UNESP-Botucatu Objetivo:

A relação entre o desenvolvimento das doenças inflamatórias intestinais (DII) e mastócitos não está bem esclarecida. Objetivamos avaliar esta relação através do número destas células e do dano tecidual que ocorre durante a colite com recidiva induzida em ratos Wistar por tratamento com TNBS. Métodos e Resultados: A colite foi induzida por administração intracolônica de 0,25 mL de uma solução de TNBS, 10 mg em etanol 50% em ratos anestesiados. Os controles receberam 0,25 mL de solução salina a 0,9%. No 14° dia foi administrada a segunda dose de 10 mg de TNBS, reproduzindo as recidivas comuns das DII em humanos. Animais foram mortos a cada 2 dias (total de 28 dias). Segmentos do cólon foram analisados de acordo com a área de lesão e classificados com índices de 0 - 10 expressos em mediana e intervalo interquartil. As lesões permaneceram intensas até o 10° dia, 7 (6 – 8) após a primeira administração de TNBS e nos 4 dias após a recidiva 7 (6 – 8). Nos períodos de reparação tecidual (11º dia ao 14º dia) e após o 18º dia, os índices de lesão foram menores 3 (1 – 5). Dosagens de histamina (média ± EPM em µg/g de tecido, n = 4 a 5) foram realizadas através do

método fluorométrico automático, assumindo-se que a concentração de histamina é diretamente proporcional ao número de mastócitos. A concentração manteve-se constante do dia 0 até o 10º dia (1,94 ± 0,30), aumentando daí para diante até o 14º dia (3,97 ± 0,29). Após a recidiva a concentração de histamina continuou aumentar, sendo de 8,80 ± 1,82 no 28º dia. Conclusões:

A concentração de histamina e conseqüentemente o número de mastócitos aumentam durante o desenvolvimento de colite com recidiva em ratos. Este aumento de concentração é acompanhado de reparação tecidual o que sugere a participação de mastócitos neste processo. 36.182 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DA FRAÇÃO DE FOLHAS DA SCHINUS TEREBINTHIFOLIUS RADDI (AROEIRA) EM CAMUNDONGOS. Oliveira, C. R.; Rosas, E. C.; Heringer, A. P.; Oliveira, R. R; Figueiredo, M. R.; 6 Henriques, M. G. M. O. Far-Manguinhos FIOCRUZ Objetivo:

As cascas e folhas secas da aroeira (Anacardiaceae) são utilizadas na medicina popular principalmente contra problema do trato urinário, diarréias, bronquite e gripes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiinflamatória da partição acetato de etila do extrato metanólico da folha da aroeira. Métodos e Resultados:

Após secagem e moagem, as folhas da aroeira sofreram maceração dinâmica com metanol. O extrato obtido foi submetido à partição líquido-líquido com solventes em ordem crescente de polaridade. A fração em acetato de etila (STMAc), rica em substâncias fenólicas, foi administrada p.o. em camundongos Swiss machos, pesando entre 20 e 25g, na dose de 100 mg/Kg de peso do animal 1h antes da injeção intratorácica de Zimosan (Zim) (100µg/cav.) e da injeção sub-plantar de Zim (500µg/pata) ou carragenina (Car) (300 g/pata). Após 4h da indução da pleurisia por Zim observou-se um aumento no número de leucócitos totais presentes na cavidade (de 1,58 ± 0,15 para 12,46 ± 1,14 X10-6/cav; n.7), aumento de neutrófilos (de 0,02 ± 0,01 para 10,15 ± 0,99 X10-6/cav; n.7) e extravasamento protéico (de 0,144 ± 0,036 para 0,465 ± 0,130 µg ptn/cav). O tratamento com STMAc reduziu em 60% o acúmulo de leucócitos totais (de 12,46 ± 1,14 para 7,66 ± 1,09 X10-6/cav), o acúmulo de neutrófilos em 53,5% (de 10,15 ± 0,99 para 4,72 ± 0,91 X10-6 /cav., n. 7) e 90% da exsudação protéica (de 0,465 ± 0,130 para 0,058 ± 0,031 µg ptn/cav). Tratamento oral com STMAc (1h) inibiu o edema de pata induzido por Zim em 20% (de 231,67 ± 13,72 para 184,67 ± 9,45 µL/pata) e o edema induzido por Car em 84% (de 50 ± 3,91 para 8,33 ± 3,31 µL/pata). Conclusões: Nossos resultados demonstram um efeito antiinflamatório da fração acetato do extrato metanólico das folhas da S. terebinthifolius, confirmando o uso popular da aroeira. 36.183 INIBIÇÃO DA RESPOSTA INFLAMATÓRIA PELO PRECONDICIONAMENTO ISQUÊMICO (PCI). 1Souza-Filho, M.V.P.; 2Loiola, R. T.*; 2Rocha, E. L.*; 2Gomes, A. S.**; 2Souza, M. H. L. P.; 2Ribeiro, R. A.; 1Cirurgia, UFC; 2, 3, 4, 5, 6 Fisiologia e Farmacologia, UFC Objetivo: A lesão de reperfusão (LR) ocorre quando há retardo do restabelecimento do fluxo sanguíneo para órgãos e tecidos. O PCI, uma das estratégias propostas para atenuar a LR, consiste na indução de curtos períodos de isquemia seguidos de reperfusão realizados antes da isquemia prolongada. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito antiinflamatório (AI) do PCI. Métodos e Resultados: O PCI foi induzido através da isquemia da pata de ratos Wistar por 10 min seguida de 30 min de reperfusão. Diferentes grupos foram submetidos à indução de edema de pata (EP), ipsilateral (IPS) e contralateral (CON), por carragenina (Cg) ou dextran (Dx), cistite hemorrágica (CH) por ifosfamida (IFO), lesão gástrica (LG) por indometacina (INDO) ou confecção de retalho cutâneo de dorso (RCD). Os controles (C) receberam o mesmo tratamento, porém sem PCI. O EP foi calculado pela variação do volume das patas (ml), o edema vesical (EV) pelo peso úmido vesical

(mg), o aumento da permeabilidade vascular (APV) pelo extravasamento de azul de Evans (mg), o índice de lesão gástrica (ILG) pela soma das extensões das lesões encontradas (mm), a infiltração neutrofílica (IN) pela atividade da mieloperoxidade (U/mg) e o índice de sobrevida (IS) pela área de tecido viável do RCD (cm2). O EP e o APV induzidos por Cg (100mg, sc) ou Dx (200mg, sc), tanto IPS quanto CON, foram reduzidos pelo PCI (EP IPS Cg–58,7%; APV IPS Cg–42%; EP IPS Dx– 46,5%; APV IPS Dx–44,6%; EP CON Cg–52,4%; APV CON Cg–43,1%; EP CON Dx–48,4%; APV CON Dx–45,4%; p<0,01). O PCI inibiu o EV e o APV da CH induzida por IFO (200mg/kg, ip) (EV–39%; APV–54%; p<0,001). Tanto a ILG quanto a IN induzidas por INDO (20mg/kg, vo) foram bloqueadas pelo PCI (ILG–90,2%; IN–63,9%; p<0,001). O PCI aumentou o IS do RCD em 36,4% (p<0,01). Conclusões: O PCI apresenta um efeito AI local e sistêmico em modelos de inflamação aguda, sendo o esclarecimento deste mecanismo importante para o desenvolvimento de novas abordagens clínicas profiláticas e/ou terapêuticas. 36.184 LACK OF EFFECT OF SUPEROXIDE DISMUTASE ON THE INHIBITION OF HUMAN PLATELET ADHESION BY LIPOPOLYSACCHARIDE (LPS). Morganti, R. P.; Marcondes, S.; de Nucci, N.; Antunes, E. Farmacologia UNICAMP Objetivo:

We have previously reported that LPS inhibits human platelet adhesion to fibrinogen, but the underlying mechanisms have not been elucidated yet (Morganti, R.P. Reunião SBFTE, 2004). Superoxide anion (O2

-) produced by platelets is reported to inhibit or to stimulate the cells, depending on the experimental approach employed. In the present study we used the O2

- scavenger superoxide dismutase (SOD) to further understand the inhibition of platelet adhesion by LPS. Métodos e Resultados:

Human washed platelet adhesion was evaluated using fibrinogen-coated 96-well microtiter plates. Platelets were pretreated with LPS (0.01–300 µg/ml) and/or SOD (100 U/ml) for 5 to 120 min, after which they were transfered to fibrongen-coated plates and maintained for 15 min in absence or presence of thrombin (50 mU/ml). Adhered platelets were incubated with the acid phosphatase substrate p-nitrophenyl phosphate disodium for 1h. A microplate reader set at 405 nm read the plate. Levels of cAMP and cGMP were also measured. LPS (0.01-300 µg/ml) dose- and time-dependently inhibited the spontaneous platelet adhesion (for 0.01 µg/ml: 4±1 and 36±3% inhibition at 5 an 60 min, respectively; for 10 µg/ml: 25±3 and 58±5% inhibition at 5 an 60 min, respectively). In thrombin (50 mU/ml)-stimulated platelets, LPS also time- and dose-dependently inhibited adhesion. Pre-incubation of platelets with SOD (100 U/ml) did not change the inhibitory effects of LPS on platelet adhesion (LPS 0.1 µg/ml at 15 min: 26±7 and 25±9% inhibition in absence and presence of SOD, respectively). No changes in the cAMP and cGMP levels were found in LPS-treated platelets. Conclusões: Superoxide anion does not play a role in the inhibition of platelet adhesion by LPS. 36.185 CHARACTERIZATION OF INFLAMMATORY RESPONSE INDUCED BY BOTHROPS MOOJENI SNAKE VENOM IN MICE. Sampaio, M. C.; Nascimento, N. G.**; Fernandes, C. M.**; Olivo, R. A.**; Teixeira, C. Farmacologia Instituto Butantan Objetivo: Snakes from genus Bothrops are responsible for the majority of snakebites in Brazil. Envenomation caused by Bothrops moojeni results in severe local effects in the victims with haemorrhage, myonecrosis and local inflammation. However, the events and mechanisms involved in the inflammatory reaction induced by this snake venom are still unclear. The aim of this study was to evaluate the inflammatory reaction induced by Bothrops moojeni venom in terms of oedema and leukocyte influx. Métodos e Resultados:

Male Swiss mice (20g) were used. Oedema was mensuared by plethismography after intraplantar injection of BmV (0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 3.0 and 6.0 µg/paw) or saline (control). Leukocyte infiltration was evaluated in peritoneal washes harvested 1 – 48h after intraperitoneal (i.p.) injection of BmV (1.5, 3.0 and 6.0 µg/animal). Total leukocyte counts were determined in Neubauer chamber and differential cell counts in Hema3 stained smears. Results showed that all doses of BmV induced a significant paw oedema from 15min up to 6h, reaching normal values at 24h. The i.p. injection of BmV caused a significant increase in the total leukocyte influx into mice peritoneum from 3 up to 48h. Neutrophils were the predominant cells in the early periods whereas the number of mononuclear cells did not significantly increased until 48h after BmV injection. Conclusões:

These data demonstrate that BmV is able to induce inflammation in mice with features of an acute process. 36.186 ESTUDO DA ATIVIDADE ANALGÉSICA E ANTIINFLAMATÓRIA DA SUBSTÂNCIA MRC A2 ISOLADA DE MAYTENUS RIGIDA (CELASTRACEAE). 1Martins, M. V.; 2Estevam, C. S.**; 3Santos, B. V. D. O.; 3Júnior, J. X. A.; 4Miranda, A. L. P.; 4Barreiro, E. J.; 2Sant’ana, A. E. G.; 5Alexandre-Moreira, M. S.; 1CCS-UFRJ; 2Química UFAL; 3UFAL; 4Farmácia UFRJ; 5Fisiologia, UFAL Objetivo:

A entrecasca do caule de Maytenus rígida apresenta propriedades terapêuticas, sendo empregada nos casos de dores em geral, infecções e inflamações (MOTA, C. N; ALBUQUERQUE, U. P. (2002). As muitas fases da jurema: de espécie botânica à divindade Afro-indigena.). Neste trabalho, investigamos uma possível atividade antinociceptiva e antiinflamatória da substância MRC A2, uma substância inédita, isolada de Maytenus rigida (Celastraceae). Métodos e Resultados:

Foram utilizados modelos clássicos de nocicepção aguda (ensaio de contorções abdominais induzidas por ácido acético, nocicepção induzida por formalina e dor induzido por estímulo térmico (“hot plate”) em camundongos Swiss (25-30g). A substância MRC A2 produziu uma significante inibição no número de contorções abdominais (DI50 44,18 mg/Kg, v.o), bem como o padrão de referência, Dipirona (65 % de inibição, 33 mg/Kg, i.p). A MRC A2 inibiu de forma significativa o efeito algésico no ensaio de “hot plate” aumentado o tempo de latência (5s), bem como as duas fases do ensaio de formalina (50%- 1ª fase e 30 %-2ª fase, 100 mg/Kg, v.o). Conclusões: Nossos resultados permitem-nos inferir que a MRC A2 possui uma atividade antinociceptiva (central e periférica), bem como uma atividade antiinflamatória, observada pela inibição da segunda fase no ensaio de formalina e que pode estar associada a inibição de mediadores químicos, tais como prostaglandinas e leucotrienos. Apoio Financeiro: CNPq, FAPEAL e FAPERJ. 36.187 ANÁLISE DO EFEITO DA SOLUÇÃO HIPERTÔNICA NA EXPRESSÃO DE METALOPROTEINASES (MMPS) 2 E 9 NO FÍGADO EM PANCREATITE EXPERIMENTAL. 1Rios, E. C. S.; 2Moretti, A. I. S.**; 2Souza, H. P.; 2Velasco, I. T.; 2Abatepaulo, F.; 2Soriano, F. G.; 1Clínica Médica FMUSP 2Emergências Clinicas FMUSP Objetivo: Pancreatite aguda (PA) produz alterações morfológicas e funcionais no fígado em conseqüência da resposta inflamatória. A solução hipertônica (SH) tem se mostrado como uma estratégia para atenuar reações inflamatórias. Investigamos se a administração de SH atenua o desenvolvimento da injúria hepática. Métodos e Resultados:

PA foi induzida pela injeção retrógrada de 0,4 mL de taurocolato de sódio (2,5%) em ratos machos wistar (280 a 320g). O grupo controle não foi submetido a qualquer procedimento. Os animais submetidos a PA foram tratados após 1 hora (h) com solução hipertônica (PA/H) ou solução fisiológica (PA/S). Após 4, 12 e 24 horas, os animais foram sacrificados para dosagem de mieloperoxidase (MPO), zimografia (detecção das MMPs -2 e -9), western blotting (detecção de HSP47) e quantificação de colágeno (sirius-red) no fígado. Os níveis de MPO aumentaram em todos os grupos submetidos a PA e diminuiram no grupo PA/H nos períodos 4h (3,47±1,05 vs

PA/S=5,97±1,50; p<0.05) e 12h (3,92±1,09 vs PA/S=8,05±2,88). O grupo PA/H mostra menor atividade das MMPs -2 e –9 em relação ao PA/S, principalmente em 12h (MMP –2 e –9) e 24h (MMP –2). Em 12h há um aumento do colágeno dos animais submetidos a PA. Em 24h a quantidade de colágeno total no grupo PA/S é menor do que em 12h e no grupo PA/H a quantidade de colágeno total é mantida em 24h (1755±826 vs PA/S=436,59±269,6; p<0.05). Ocorre um aumento na expressão de HSP47 no grupo PA/H, em 12h (0,99±0,1 vs PA/S=0,67±0,23) e 24h (1,15±0,47 vs PA/S=0,79±0,35). Conclusões:

As alterações de MMPs, HSP47 e colágeno no fígado durante a PA são concomitantes. A administração de SH reduz a inflamação e acelera o remodelamento da matriz extracelular, iniciando um mecanismo de reparo tecidual. 36.188 ATIVIDADE ANTINOCICEPTIVA DO EXTRATO OBTIDO DA WEDELIA PALUDOSA NA NOCICEPÇÃO INDUZIDA POR AGONISTAS GLUTAMATÉRGICOS E POR CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS (IL-1B E TNF-A) EM CAMUNDONGOS. Molin,; Rohr, J. F.*; Erthal, V.**; Gadotti, V. M.**; Santos, A. R. S. Ciências Fisiológicas CCB-UFSC Objetivo: Dados preliminares do nosso grupo de pesquisa demonstraram que o extrato hidroalcoólico (EH) obtido das partes aéreas da Wedelia paludosa (WP), planta utilizada na medicina popular em diversas patologias, apresenta importante efeito antinociceptivo em camundongos. Este trabalho analisa o possível envolvimento dos receptores glutamatérgicos e da substância P (SP), bem como, de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α) no efeito antinociceptivo causado pelo EH de WP em camundongos. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss (25-35g n=6-12) de ambos os sexos. A nocicepção foi caracterizada pelo tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo (TLM) a pata injetada com glutamato (GLU, 10 µmol/i.pl.). Em outra série de experimentos, a nocicepção foi induzida por citocinas pró-inflamatórias, por agonistas glutamatérgicos e pela SP, sendo avaliado o TLM nos membros posteriores (patas posteriores, cauda e abdômen) após a injeção intratecal (i.t.) de IL-1β (1 pg/sítio), TNF-α (0,1 pg/sítio), GLU (175 nmol/ sítio), NMDA (450 pmol/sítio), trans-ACPD (50 nmol/sítio) ou SP (0,1 nmol/sítio). O EH da WP (0,3-30 mg/kg, i.p.) reduziu de forma significativa o TLM induzido pela injeção i.pl. de GLU, com DI50 de 4,0 (2,9-5,7) mg/kg e inibição de 93±4%. Além disso, o EH da WP (10 mg/kg, i.p.) também reduziu de forma significativa o TLM induzido pela injeção i.t. de IL-1β, TNF-α, GLU e NMDA com inibições de 52±12, 60±14, 100 e 85±11%, respectivamente. Contudo, o EH da WP (10 mg/kg, i.p.) não foi capaz de reduzir de forma significativa o TLM induzido pela injeção i.t. de trans-ACPD e SP. Conclusões: Estes resultados confirmam e estendem os dados anteriores e indicam que o EH obtido da Wedelia paludosa apresenta importante efeito antinociceptivo em camundongos. O mecanismo de ação responsável pelo efeito antinociceptivo do EH da W. paludosa não está completamente elucidado, mas parece depender da modulação da ação de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α) e dos receptores glutamatérgicos ionótropicos do subtipo NMDA. 36.189 ENVOLVIMENTO DAS MAPKS ERK1/2 E P38 NA HIPERNOCICEPÇÃO MECÂNICA AGUDA INDUZIDA PELA ADMINISTRAÇÃO DE INTERLEUCINA-1B. Braz, D.; Cunha, F. Q.; Ferreira, S. H. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: A interleucina-1β (IL-1β) exerce a maioria de suas ações biológicas pela ligação ao seu receptor do tipo I e a subseqüente ativação de diversos sinalizadores intracelulares, dentre eles as proteinoquinases ativadas por mitógenos (MAPKs). Com o intuito de avaliar os mecanismos moleculares envolvidos na hipernocicepção mecânica aguda (HMA) induzida pela IL-1β, avaliamos a participação das MAPKs ERK1/2 e p38 . Métodos e Resultados:

A HMA foi avaliada em ratos Wistar machos (180-200g) pelo teste de pressão constante na pata de rato (∆ do tempo de reação expresso em segundos, média de cinco animais ± e.p.m.). A administração intratecal (i.t.) de IL-1β (0.16pg/10µL) induziu HMA bilateral, avaliada na 3ª hora após o estímulo (15.7±0.5 pata direita-PD; 15.2±0.7 pata esquerda-PE). Para avaliar a importância das MAPKs ERK1/2 e p38 administramos os inibidores destas quinases (PD98059 e SB203580, respectivamente) 30 minutos antes do estímulo com IL-1β. O PD98059 é um inibidor da MAP2K MEK e é esta quinase que fosforila e ativa a ERK1/2. O pré-tratamento i.t. com PD98059 (10µg/10µL) inibiu em 65.5% a HMA induzida pela administração i.t. de IL-1β (5.4±1.2 PD; 5.1±1 PE). O pré-tratamento i.pl. com PD98059 (10µg/50µL) inibiu em 43.6% a HMA induzida pela administração i.t. de IL-1β (8.7±0.9 PE). O pré-tratamento i.t. com SB203580 (5.4µg/10µL) inibiu em 51.4% a HMA induzida pela administração i.t. de IL-1β (6.8±0.2 PD; 8.2±1 PE). O pré-tratamento i.pl. com SB203580 (27µg/50µL) inibiu em 40.2% a HMA induzida pela administração i.t. de IL-1β (9.1±0.6 PE). A administração i.t. ou i.pl. de PD98059 e SB203580 ou seus veículos (DMSO 2% + salina) não alterou, per si, o limiar nociceptivo mecânico dos animais. Conclusões: Estes dados indicam que na HMA induzida pela IL-1β há o envolvimento das MAPKs ERK1/2 e p38 e contribuem para o esclarecimento dos eventos moleculares que ocorrem na dor inflamatória. 36.190 EXPRESSÃO DE COX-2 E PAPEL DOS INIBIDORES DE COX NA CISTITE HEMORRÁGICA INDUZIDA POR IFOSFAMIDA, E SEU METABÓLITO ACROLEÍNA. 1Macêdo, F. Y. B.*; 1Mota, J. M. S. C.; 2Almeida, P. R. C.; 1Schmitt, F.; 1Baltazar, F; 2Ferreira, F. V.; 1Ribeiro, R. A. 1Fisiologia e Farmacologia UFC; 2Patologia UFC Objetivo:

Cistite Hemorrágica (CH) é um efeito adverso da quimioterapia com ifosfamida (IFS), pela formação do metabólito urotóxico acroleína (ACR). Já demonstramos a participação de citocinas inflamatórias, tais como: TNF-⟨, IL-1 e a expressão de iNOS na patogenia da CH. Investigamos a expressão de ciclooxigenase-2 (COX-2) na CH induzida por IFS e ACR, bem como o efeito de inibidores de COX no tratamento da CH. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (150-200g, n=6) foram tratados com IFS (400mg/kg, ip) ou ACR (75 g, intravesical - ive) ou salina (ip ou ive). Um dos grupos recebeu tratamento com 3 doses de Mesna (80 mg/kg, i.p.), sendo a primeira dose concomitante à administração de IFS, e as outras 4 e 8 horas após. Quatro outros grupos receberam pré-tratamento 30 min antes com celecoxib (0,5 ou 1,5 ou 4,5 mg/kg, vo), ou indometacina (1,0 mg/kg, sc). CH foi avaliada 24 hs após sua indução com IFS, e 3 e 6hs após a indução com ACR pelo peso úmido vesical (PUV) e por análise macroscópica e microscópica (Critérios de Gray e imunohistoquímica para COX-2 através de reação com anticorpo monoclonal). IFS e ACR produziram aumento do PUV (279,9%;145,98%-ACR 3 hs após e 120,25% com ACR –6 hs após). Celecoxib 0,5 ou 1,5 ou 4,5 mg/kg inibiram o aumento do PUV em 68,74%; 63,89% e 62,59%, respectivamente. Indometacina (1,0 mg/kg) inibiu em 69,59% e Mesna em 80%. A expressão de COX-2 pela imunohistoquímica foi marcante no tecido vesical dos grupos que receberam apenas IFS e ACR, sendo reduzida pelo pré-tratamento com Mesna, celecoxib nas três doses ou indometacina. Conclusões: COX-2 demonstrou ser importante na patogenia da CH induzida por IFS e ACR, e o tratamento com celecoxib, indometacina ou mesna atenuou a CH possivelmente pela redução da atividade e expressão de COX-2. 36.191 DIFFERENT EFFECTS OF CNOS AND INOS-DERIVED NITRIC OXIDE IN LUNG MECHANICS IN A MODEL OF CHRONIC AIRWAY INFLAMMATION IN GUINEA PIGS: MODULATION BY NEUROPEPTIDES. 1Tiberio, I. F. L. C.; 2Prado, C. M.; 2Leick-Maldonado, E. A.; 1Angeli, P.; 2Martins, M. A. 1Clínica Médica USP; 2Clínica Geral FMUSP Objetivo:

We evaluated the role of cNOS and iNOS-derived nitric oxide (NO) in airway responsiveness to antigen challenge in guinea pigs (GP) with lung chronic inflammation and the possible interactions between neurokinins (NK) and NO. Métodos e Resultados:

NK depletion was done by capsaicin pretreatment (CAP). After 14 days, GP received aerosols of ovalbumin (OA) or normal saline (NS) 2x/week/4weeks. After 4th inhalation, chronic L-NAME treatment (L) (unspecific inhibitor of NO) was given ad libtum in sterile drinking water (OA-L or NS-L groups). The treatment with 1400W (specific iNOS inhibitor-W) was given daily beginning in the 7th inhalation (OA-W and NS-W groups). After 72 hours GP were anesthetized, mechanically ventilated and we analyzed the % of maximal increase of elastance (%Ers) and resistance (%Rrs) of

respiratory system after OA or NS challenge. OA showed an increase in %Rrs (280.75 23.67) and %Ers (482.68 92.75) compared to NS (P<0.001). In sensitized GP, L increased %Rrs and W decreased this response. Considering Ers, OA-L was grater than OA-W (P<0.001). CAP reduced both %Rrs and %Ers in OA group. L-NAME increased both %Rrs and %Ers previously attenuated by CAP pretreatment (P<0.05). Conclusões: In this model NO produced by cNOS contributes to bronchodilation and both iNOS-induced NO and NK contribute to bronchoconstriction. The effects of NK is partially mediated by cNOS-derived NO. 36.192 EFFECTS OF NEUROKININS ON NNOS EXPRESSION IN BRONCHIAL EPITHELIAL AND INFLAMMATORY CELLS IN AIRWAYS OF GUINEA PIGS. 1Miyamoto, L.*; 1Prado, C. M.; 1Yano, L; 2Leick-Maldonado, E. A.; 2Martins, M. A.; 2Tiberio, I. F. L. C. 1Clínica Geral FMUSP; 2Clínica Médica FMUSP, FMUSP Objetivo:

We assessed the role of substance P (SP) and neurokinin A (NKA) in pulmonary recruitment of nNOS positive polimorphonucleated (nNOS+PMN) and mononucleated (nNOS+LMN) cells as well as in the regulation of nNOS expression in bronchial epithelial (BE) cells induced by stimulation of capsaicin-sensitive nerve terminals in guinea pigs (GP). The infusion of capsaicin (CAP) induces acute release of neuropeptides. Métodos e Resultados:

GP were anesthetized, received CAP (10mg/kg i.c.) and lungs were removed 30 minutes (CAP-30) or 24 hours (CAP-24) after CAP treatment. Another groups of GP received SP, NKA or vehicle (Ve) and lungs were removed after 30 min. We evaluated the number of nNOS+LMN and nNOS+PMN cells using morphometry and nNOS+BE% by an Image Analyzer. After 24 hours of CAP infusion (CAP-24 group) there was an increase in number of both nNOS+LMN, nNOS+PMN and nNOS+BE% compared to CAP30 and Ve (P<0.05). The injection of both SP e NKA increased the number of nNOS+LMN and nNOS+PMN compared to Ve (P<0.05). However, only the SP injection increased the number of nNOS+BE% compared to NKA and Ve groups (P<0.01). Conclusões:

Our results suggest that neurokinins contribute to the airway recruitment of nNOS positive inflammatory cells and up-regulate nNOS expression in BE. The later effect described may represent a contra-regulatory mechanism since activation of excitatory e-NANC system induces an intense airway constriction. 36.193 A AMIFOSTINA (ETHYOL®) NÃO ALTERA A COLITE INDUZIDA POR IODOACETAMIDE EM RATOS. Lopes, L. O.; Mota, A. C. L.*; Souza M. H. L. P. Fisiologia e Farmacologia Objetivo:

A amifostina é uma importante droga citoprotetora, agindo como doadora de grupos sulfidrilas (SH). Foi demonstrado que a amifostina (AMF) é capaz de diminuir a lesão colônica induzida por ácido acético (Dig Dis Sci. 1992 Dec;37(12):1866-73) e, recentemente, que previne a lesão colônica induzida por radioterapia em pacientes portadores de câncer (Semin Radiat Oncol. 2002 Jan;12(1 Suppl 1):81-5.). Trabalhos anteriores demonstraram que drogas bloqueadoras de SH causam colite ulcerativa em ratos. Nosso trabalho tem por objetivo estudar o efeito da amifostina

na colite induzida por iodoacetamide (IO), um bloqueador de SH, já empregado em modelos de doença inflamatória intestinal. (Jpn J Pharmacol 1997 Apr;73(4):299-399). Métodos e Resultados:

Ratos Wistar foram submetidos a jejum prévio de 24h com livre acesso à água. Realizou-se a lavagem do cólon distal com SF a 0,9%. Após 30min, foi administrado AMF, na dose de 90mg/Kg, por via intra-peritonial (IP) ou intra-retal. (IR). Decorridos 30min, a colite foi l/animal), diluído emµinduzida pela administração intra-retal de IO a 3% (100 metilcelulose a 1%. Após 1 dia da indução da colite, os animais foram sacrificados e a extensão da lesão colônica macroscópica, o peso do cólon e a atividade de Mieloperoxidase (MPO) foram aferidos. Os grupos controles receberam Salina e/ou IO a 3%. Após 1 dia da administração de IO observou-se uma significativa lesão colônica (IO=541,1±148,5mm²;Controle=0mm²), aumento no peso do cólon (IO=173,7±26,6mg/cm;Controle=77,98±22,22mg/cm) e na atividade de MPO(IO=21,9±11,2U/mg;Controle=2,02±0,8U/mg) no cólon quando comparados com o controle. O tratamento com AMF, tanto por via IP quanto por via IR, não modificou a lesão colônica (IP=489,8±131,8mm²;IR=515,6 ±131,6mm²), peso do cólon (IP=159,3±33,0mg/cm;IR=172,3±27,5mg/cm) e atividade de MPO (IP=24,3±10,3U/mg;IR=15,6±15,0U/mg), quando comparados o grupo com IO. Conclusões:

O tratamento com Amifostina, não alterou a colite induzida por Iodoacetamide em ratos. 36.194 ANÁLISES POSTURAIS PARA PREVENÇÃO DE LESÕES MÚSCULO-ESQUELÉTICAS NO COMPARTIMENTO DE CARGAS DE UMA AERONAVE EM MANUTENÇÃO. Takara, L. S.; Nascimento, R. B.*; Carvalho, E. C. F.*; Beline, T. F.*; Barroso, V. V.*; 6 Siqueira, A. C. B..*; Gil Coury, H. J. C. Fisioterapia UFSCar Objetivo:

Objetivo: Identificar e analisar posturas e problemas ergonômicos no compartimento de carga de uma aeronave, com a finalidade de prevenir possíveis riscos de distúrbios osteomusculares relacionados ao trabalho (LER/DORT). Métodos e Resultados:

Materiais e Resultados: Foram analisados 6 indivíduos do sexo masculino, trabalhadores mecânicos da área de manutenção do compartimento de carga de uma aeronave, durante aproximadamente 2 meses. Em relação ao posicionamento físico individual as mensurações foram realizadas através de fotografias (Digital Still Câmera MVC-FD 73) e filmadora (JVC). Com a finalidade de se obter uma análise subjetiva da dor, do desconforto e do esforço físico aplicou-se respectivamente um questionário geral, Escala Visual Analógica (EVA) e Escala de Borg. Para avaliação de riscos potencias empregou-se os protocolos de Análise Rápida dos Membros Superiores (RULA) e Roteiro para Avaliação de Riscos Músculo-Esqueléticos (RARME). Foram observadas as posturas de cócoras, ajoelhada, semi-ajoelhada, decúbito ventral e lateral, ou seja, posturas de baixa vantagem biomecânica, podendo predispor a desconfortos e lesões. Os resultados deste estudo mostraram que a média do nível de esforço aumentou gradativamente no decorrer do turno (início: 11,16; final: 12,8) assim como do desconforto (início: 51,6; final: 68,3). O protocolo RULA não foi sensível na avaliação das posturas, pois todas se mostraram de alto risco (7). De acordo com o RARME a postura semi-ajoelhada foi a única que apresentou médio risco (16,5), sendo as outras consideradas de alto risco (cócoras, ajoelhado e decúbito lateral: 22,5; decúbito ventral – 27,5). Conclusões:

Conclusão: A postura ocupacional dos operários nesse tipo de atividade é prejudicial para a saúde dos mesmos, proporcionando-lhes grandes riscos de Lesões Músculo-Equeléticas. 36.195 ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DE EXOPOLISSACARÍDIO SECRETADO POR QUEFIR EM RATOS. 1Moreira, M. E. C.; 1dos Santos, M. H.; 2Carvalho, J.C.T.; 1Schneedorf, J.M.; 1Fitofármacos UNIFENAS; 2Farmácia EFOA Objetivo:

O quefirano constitui um polissacarídio secretado por algumas bactérias presentes em fermentado de grãos de quefir, que apresenta propriedades antimicrobianas e imunogênicas. Com base nisto, teve o presente trabalho o objetivo de avaliar o potencial antiinflamatório de quefirano, através de ensaios de edema de pata em ratos. Métodos e Resultados:

O isolamento do exopolissacarídio foi feito a partir do cultivo contínuo dos grãos de quefir em solução aquosa de açúcar mascavo (50 g/L). Os grãos foram fervidos durante 1 h, seguindo-se ciclos de centrifugação (12000 g, 20 min) e precipitação em etanol gelado (93° GL), e secagem em estufa (50°C, 24 h). Para realização dos experimentos foram utilizados ratos Wistar machos pesando entre 135 e 200 g, subdivididos em nove grupos (n=6), e estimulados distintamente conforme segue. Os animais do grupo 01, 04 e 07 receberam 0,1 mL de carragenina a 10 mg/mL na região plantar da pata direita. Os grupos 02, 05 e 08 receberam na mesma região 0,1 mL de dextrana a 0,5 mg/mL, e os animais dos grupos 03, 06 e 09 receberam 0,1 mL de histamina a 0,5 mg/mL. Todos os animais receberam igual volume de NaCl a 0,9 % na região plantar da pata esquerda, como controle. Trinta minutos antes das experiências, foi administrado nos animais por v.o. para os grupos 01, 02, e 03, 1 mL de quefirano 20 mg/kg. Os animais do grupo 04 foram tratados com 1 mL de indometacina a 10 mg/kg, e os grupos 05 e 06 foram tratados com igual volume de ciproeptadina a 10 mg/kg. Os grupos 07, 08 e 09 foram tratados com 1 mL de solução NaCl 0,9 %. O edema produzido nas patas de cada animal foi monitorado durante 5 h medindo o diâmetro das patas com paquímetro analógico. A análise estatística dos dados foi conduzida média±EPM, seguido por ANOVA e teste de Tukey-Kramer (p<0,05). Conclusões:

O quefirano foi capaz de inibir o processo inflamatório induzido por carragenina em 67±8 %, por dextrana em 29±4 %, e por histamina em 66±11 %. Com base nos resultados obtidos pode-se concluir que o potencial antiinflamatório foi significativo para o modelo testado, evidenciando inibição da liberação de prostaglandinas, histamina e citocinas. 36.196 ATIVIDADE ANTIINFLAMATÓRIA DO EXTRATO DE NECTANDRA FALCIFOLIA. Melo, J. O.; Truiti, M. C. T.; Caparroz-Assef, S. M.; Cuman, R. K. N.; Bersani-Amado, C. A. Farmácia e Farmacologia UEM Objetivo:

Plantas do gênero Nectandra sp são utilizadas popularmente no tratamento da dor e das doenças reumáticas. Neste estudo investigamos o efeito do extrato bruto das folhas de N. falcifolia (Nf) na pleurisia e no edema de pata e de orelha. Métodos e Resultados:

O edema de pata foi induzido pela injeção subplantar de 200mg de carragenina na pata posterior esquerda do rato. Na pata contralateral foi injetada salina (controle). O volume das patas foi medido pletismograficamente 1, 2 e 4h após o estímulo. A pleurisia foi induzida pela injeção intrapleural de 200mg de carrragenina em ratos. Após 4h o exsudato pleural foi coletado para a determinação do volume e do número de leucócitos migrados. Nestes experimentos os animais receberam vo Nf (250, 500 e 750mg/kg) 30min antes da indução da reação inflamatória. O edema de orelha foi induzido pela aplicação de 20µl de óleo de Cróton (200µg) na face interna de ambas orelhas de camundongos. A seguir 20µl de Nf (2,5; 5 e 7,5mg) foi aplicado na orelha esquerda e 20µl do veículo na orelha direita. Após 6h os animais foram sacrificados, as orelhas seccionadas e pesadas. Para comparação das médias (n=8-10) foi utilizada Análise de Variância. Nf nas doses de 500 e 750mg/kg reduziu significativamente o edema de pata quando comparado ao controle (C=74±2; Nf500=57±4; Nf750=54±2mL). A redução foi semelhante à causada pela indometacina (53±5mL). Na pleurisia, Nf (250 e 500mg/kg) reduziu significativamente o volume do exsudato inflamatório quando comparado ao controle (C=0,87±0,05; Nf250=0,64±0,05; Nf500=0,68±0,03mL), mas não modificou a migração de células. Nf (2,5, 5,0 e 7,5 mg) reduziu significativamente a resposta inflamatória induzida pelo óleo de cróton, quando comparado ao controle. A redução foi de: Nf2,5=22%; Nf5=23%; Nf7,5=23%. A inibição causada pela indometacina (1mg/orelha) foi de 39%. Conclusões:

No conjunto os resultados mostraram que o Nf apresenta atividade antiinflamatória quando administrado por via oral e tópica. 36.197 AVALIAÇÃO NOCICEPTIVA DE EXTRATOS VEGETAIS CONTENDO ANTOCIANOSÍDEOS EM CAMUNDONGOS. 1Guterres, L. B.; 2Ramirez, M. R.**; 1Dickel, O. E.**; 1Baisch, A. L. M.; 5 Raseira, M.C.B.; 1Zuanazzi, J. A.; 2Henriques, A. T.; 1Barros, D. M.; 1Ciências Fisiológicas, FURG; 2Departamento de Farmácia, UFRGS; 3Alimentos e Nutrição Experimental EMBRAPA Objetivo:

Os antocianos são uma classe de flavonóides abundante em frutos e têm sido objeto de diversos estudos relacionados as suas propriedades nutracêuticas. Extrato de frutas contendo antocianosídeos testados experimentalmente apresentaram diversas atividades biológicas e farmacológicas, entre elas a antinocicepção. Métodos e Resultados:

O extrato foi preparado a partir de várias espécies de mirtilo (Vaccinium spp. Reade-Ericaceae).Os frutos foram liofilizados, sendo a percentagem de antocianos de 1.373 g%. Camundongos machos Mus muscullus (45-60 dias, 30-40 g) receberam o EA por gavagem nas doses de 3.2 e 6,4 mg/kg (n=10/grupo). O teste da formalina sub-plantar mostrou que o pré-tratamento dos animais com ambas as doses não modificou a resposta nociceptiva na primeira fase em relação ao tempo (s) que animal permaneceu lambendo a pata (38,6 ± 3,1; 37,5 ± 7,6 respectivamente), na segunda fase somente a dose de 6,4 mg/kg apresentou resposta antinociceptiva significativa (13,2 ± 3,6). No teste da placa quente, as duas doses do EA causaram significativo aumento do tempo de permanência sobre a placa nos tempos de 90, 120 e 150 min após a administração do EA (15 ± 1,5; 13,7 ±. 1,8; 22,9 ± 2,4 - 3,2 mg/kg; e 21,1 ± 2,3; 23,1 ± 2; 25,4 ± 1,8 - 6,4 mg/kg). No teste do “tail-flick” as duas doses do extrato apresentaram prolongamento significativo do tempo de permanência da cauda do animal na fonte de calor nos tempos de 30, 60, 120 e 150 min após a administração do EA (25,8 ± 2,1; 28,2 ± 1,2; 26,6 ± 1,8; 30 ± 0 - 3,2 mg/kg e 23,4 ± 2,8; 23,8 ± 2,8; 24,7 ± 2,2; 26,9 ± 1,3 - 6,4 mg/kg). Os resultados expressos em média ± erro padrão foram analisados através do ANOVA/Tukey (p<0,05). Conclusões:

Os dados sugerem claramente um efeito analgésico do EA nas doses analisadas. 36.198 AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTINOCICEPTIVA DA ELETROACUPUNTURA NOS PONTOS IG4 E E36 EM MODELO DE NOCICEPÇÃO OROFACIAL EM RATOS. 1Almeida, R. T.**; 2Salgado, C. L.; 1Duarte, I. D.; 1Fisiologia e Farmacologia, UFMG; 2CBS-UFMG Objetivo: Com a necessidade de se entender, à luz da ciência, como a acupuntura funciona, várias pesquisas têm sido realizadas. Os objetivos deste trabalho são: avaliar se a eletroacupuntura nos pontos IG4 e E36 induz ação antinociceptiva quando aplicada em modelo de dor que envolva a região orofacial, e avaliar a participação de opióides endógenos nessa possível antinocicepção. Métodos e Resultados: O limiar nociceptivo orofacial (latência de resposta de retirada/afastamento da face em segundos, s) foi avaliado utilizando o estímulo térmico progressivo (resistência acoplada a cronômetro) na região onde se localizam as vibrissas (lado direito) de ratos (Wistar, machos, 180-220 g, n=5). Foi testado, também, o limiar de retirada da cauda do animal ao mesmo estímulo, no sentido de avaliar possíveis efeitos medulares e/ou sistêmicos. Para o estímulo de acupuntura foram testados os pontos IG4 e E36 nas freqüências de 3, 5, 30 e 100 Hz, com 20 ou 30 minutos de estimulação. O tempo de avaliação foi de 180 minutos após a acupuntura. A eletroacupuntura provocou antinocicepção, elevando o limiar de 3,4 para 6,7 s quando o ponto E36, na frequência de 100 Hz, com 20 minutos de estimulação foi utilizado; porém somente para o estímulo orofacial, sendo ineficiente para o teste da cauda. A antinocicepção foi revertida pela injeção, 10 minutos antes da eletroacupuntura, do antagonista opióide naloxona a 1 mg/kg/subcutâneo, porém sem retorno aos níveis basais (de 6,5 para 5,3 s de limiar). Conclusões:

Nossos resultados indicam que, no modelo estudado, a eletroacupuntura no ponto E36 induziu antinocicepção, que foi restrita à região orofacial, quando utilizados os parâmetros acima descritos. Essa antinocicepção possui duração de 150 minutos. Além disso, sugerimos a participação de opiódes endógenos no efeito da eletroacupuntura. 36.199 AVALIAÇÃO FARMACOLÓGICA DO EDEMA DE PATA EM CAMUNDONGOS INDUZIDOS PELO COMPOSTO 48/80. Brito, F. A.; Sampaio, A. L. F.; 3 Henriques, M. G. M. O. Farmacologia Aplicada FIOCRUZ Objetivo: Estudar os mediadores envolvidos na formação do edema de pata induzido pelo C48/80. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos Swiss de 18 a 25g. O pré-tratamento (1h) com diferentes fármacos foi realizado via i.p., em diferentes doses (n=8). O edema foi avaliado por pletismografia 30 min após o estímulo sub-plantar com C48/80 (100ng/pata). O tratamento com dexametasona (0,5-1mg/kg), inibiu o edema induzido pelo C48/80 em 50% em sua maior dose (p≤0,05). O tratamento com o diclofenaco de sódio, (10-100mg/kg), inibiu o edema pelo C48/80 em torno de 40% (de 91,4±4,9 p/ 60,1±7,8µLde edema). O tratamento com o salbutamol (5-50mg/kg), agonista de receptores β2 adrenérgico, inibiu a formação do edema de 76,4±6,9 para 33,8 ±5,5µL. A cetirizina (3-30mg/kg) um antagonista de receptores H1, inibiu de 76,8±11,0 p/ 38,5±8,3 µL o edema induzido pelo C48/80. O antagonista de receptores de serotonina, a metisergida (5-50mg/kg) levou a uma inibição de 45% na maior dose (87,6±10,25 p/ 47,5±8,3 µL). Avaliou-se ainda, o efeito do tratamento com WEB 2170 (2-8mg/kg), um antagonista de receptores de PAF e do CP-105696, um antagonista de leucotrieno B4,(1-4mg/kg). Em ambos os tratamentos, a atividade anti-edematogênica foi estatisticamente significativa, mostrando uma inibição de 45% e 35% nas maiores doses, respectivamente. Conclusões: Nossos resultados corroboram a participação de mastócitos neste fenômeno demonstrando a participação das aminas vasoativas histamina e serotonina na formação do edema. Além disto, demonstramos que há participação de prostaglandinas, PAF e LTB4 na formação do edema de pata induzido pelo C48/80. O edema foi também foi sensível ao tratamento com dexametasona e salbultamol, drogas utilizadas no tratamento de doenças alérgicas. Em conjunto, nossos dados sugerem que o edema de pata induzido pelo composto 48/80 pode ser utilizado como um modelo de triagem de novos fármacos com atividade antialérgica. 36.200 B1 AND B2 KININ RECEPTOR BLOCKADE AND HYPOTHALAMIC KININ B1 RECEPTOR MRNA EXPRESSION IN FEBRILE RESPONSES INDUCED BY LPS IN DIABETIC RATS. 1Cardoso, O. D. O.; 2Melo, M. C. C.; 2Soares, D. M.**; 2Figueiredo, M. J.**; 1Pessini, A. C.**; 1Souza, F. H. V.**; 3Geroldo, E. A.**; 3Lindsey, C. J.; 2Souza, G. E. P.; 1Farmacologia FMRP-USP; 2Física e Quimica FCFRP-USP; 3Biofísica UNIFESP Objetivo: LPS (E.coli)-induced fever depends on kinin B2 receptor stimulation and hypothalamic B1 receptor (hB1r)

a gene product expression. Streptozotocin (SZT) promotes β pancreatic cell destruction, diabetes and B1 receptor expression in several tissues

b. Here we investigated the relationship between fever and hB1r mRNA expression in STZ diabetic rats that were pre-treated with B1 and B2 antagonists. Métodos e Resultados: Male Wistar rats (≅200g) were rendered diabetic (glycaemia > 250mg/dl) by STZ (60mg/kg, ip) 28 days before the LPS challenge. Body temperature (bT) was measured by telemetry during 6 h after ip LPS (50 g/kg) or saline injection pre-treated (30 minutes) with B1 (DALBK-0,7±0,1°C n=4) and B2 (HOE-140-0,7±0,1°C n=9) antagonists. However, diabetic rats showed a significant reduction (0,4±0,1°C n=7) of the second phase (4-6 h) of LPS-induced fever. Kinin receptor antagonists did not alter the LPS fever in diabetic rats. Amplification of hB1r and actin cDNA (RT-PCR), showed that diabetic rats express mRNA (0,10±0,05B1/actin od-bkg n=7). The hB1r expression tripled (0,3±0,1B1/actin od-bkg n=7) after pre-treatment with either kinin receptor antagonist. The LPS

induced hB1r mRNA in non-diabetic rats was not altered with pre-treatment. However, in STZ-LPS treated animals B1 receptor antagonist caused a ten-fold increase of hB1r expression, while actin mRNA expression went unchanged. Conclusões: These data suggest that in diabetic state, the febrile response is not modulated by kinin receptors. Also receptor B2 could have a modulatory role in the expression of the B1 receptor. a -J. Pharm. Pharmac., 27, 793, 1975. b -Br. J. Pharmacol. 130, 375, 2000. 36.201 BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF A FIBRINOLYTIC PROTEINASE FROM BOTHROPS LEUCURUS ( WHITE-TAILED JARARACA) SNAKE VENOM. 1Bello, C. A.; 1Hermogenes, A. L.*; 1Pires, P. F.,*; 1Magalhães, A.*; 1Richardson, M.; 2Veiga, S. S.; 3Gremski, L. H.; 1Sanchez, E. F.; 1Bioquímica Fundação Ezequiel Dias; 2Biologia Celular, UFPR; 3Clínica Médica FMUSP Objetivo: In investigations aimed at characterizing snake venom clot-dissolving enzymes, we have purified a fibrinolytic proteinase from the venom of Bothrops leucurus (white-tailed jararaca). Métodos e Resultados: The proteinase was purified to homogeneity by combination of molecular sieve chromatography on Sephacryl S-200 and ion exchange chromatography on CM-Sepharose. The enzyme called leucurolysin-a (leuc-a), is a 23 kDa metalloendopeptidase since it is inhibited by EDTA. PMSF, a specific serine proteinase inhibitor had no effect on leuc-a activity. The amino acid sequence was established by Edman degradation of overlapping peptides generated by a variety of selective cleavage procedures. Leuc-a is related in amino acid sequence to reprolysins. The protein is composed of 200 amino acid residues in a single polypeptide chain, possessing a blocked NH2-terminus and containing no carbohydrate. The proteinase showed proteolytic activity on dimethylcasein and on fibrin (specific activity = 8.4 units/mg and 5.5 units/µ g, respectively; crude venom = 4.3 units/mg and 7.5 units/µ g). Leuc-a degrades fibrin and fibrinogen by hydrolysis of the alpha chains. Moreover, the enzyme was capable of cleaving plasma fibronectin but not the basement membrane protein laminin. Leuc-a cleaved the Ala14-Leu15 and Tyr16-Leu17 bonds in oxidized insulin B-chain.The pH optimum of the proteolysis of dimethylcasein by leuc-a was about pH 7.0. Antibody raised in rabbit against the purified enzyme reacted with leuc-a and with the crude venom of B. leucurus. Conclusões: In vitro studies revealed that leuc-a dissolves clots made either from purified fibrinogen or from whole blood and unlike some other venom fibrinolytic metallopeptidases, leuc-a is devoid of

hemorrhagic activity when injected (up to 100 µ g) subcutaneously into mice. studies revealed that leuc-a dissolves clots made either from purified fibrinogen or from whole blood and unlike some other venom fibrinolytic metallopeptidases, leuc-a is devoid of hemorrhagic activity when injected (up to 100 g) subcutaneously into mice. 36.202 CHARACTERIZATION OF INFLAMMATORY RESPONSE INDUCED BY BOTHROPS MOOJENI SNAKE VENOM IN MICE 1 Sampaio, M. C.*; 2 Nascimento, N. G.; 3 Fernandes, C. M.**; 4 Olivo, R. A.**; 5 Teixeira, C. F. P.; Farmacologia Instituto Butantan Objetivo: Snakes from genus Bothrops are responsible for the majority of snakebites in Brazil. Envenomation caused by Bothrops moojeni results in severe local effects in the victims with haemorrhage, myonecrosis and local inflammation. However, the events and mechanisms involved in the inflammatory reaction induced by this snake venom are still unclear. The aim of this study was to evaluate the inflammatory reaction induced by Bothrops moojeni venom in terms of oedema and leukocyte influx. Métodos e Resultados: Male Swiss mice 20g (n=7/group) were used. Oedema was mensuared by plethismography after intraplantar injection of BmV (0.75, 1.5 and 3.0 µ g/paw) or saline (C). Leukocyte infiltration was evaluated in peritoneal washes harvested 1 – 48h after intraperitoneal (i.p.) injection of BmV (1.5

and 3.0 µ g/animal) or saline (C). Total leukocyte counts were determined in Neubauer chamber and differential cell counts in Hema3 stained smears. Results showed that all doses of BmV induced a marked increase of paw volumes, maximal at 6h (Bmv 0.75= 67.3± 3.6; 1.5= 82.8 5; 3.0= 84.5± 3.3 vs control= 0% of volume increase), reaching normal values at 24h. The i.p. injection of BmV (3.0 µ g/animal) caused a significant increase in the total leukocyte influx into mice peritoneum at 3h (BmV= 17.8± 2.7; C= 3.7± 0.8 x 105 cells), 6h (23.1± 2.7;C= 8.7± 1.8 x 105 cells) and 48h (20.7± 2.3; C= 11.3± 1.9 x 105 cells). Neutrophils were the predominant cells in the early periods (3 and 6 h) whereas the number of mononuclear cells did not significantly increased until 48h after BmV injection (BmV= 19.4± 2.0; C= 9.7± 1.6 x 105 cells). Conclusões: These data demonstrate that BmV is able to induce inflammation in mice with features of an acute process. 36.203 CHRONIC NITRIC OXIDE INHIBITON MODULATES INFLAMMATORY CELLS APOPTOSIS INDUCED BY DEXAMETHASONE IN GUINEA PIGS WITH CHRONIC AIRWAY INFLAMMATION. 1Leick-Maldonado, E. A.; 1Fernandes, F. T.; 2Prado, C. M.; 2Kasahara, D. I.**; 1Martins, M. A.; 1Tiberio, I. F. L. C.; 1Clínica Médica FMUSP; 2Clínica Geral FMUSP Objetivo:

We reasoned that apoptotic effects of dexamethasone (D) in inflammatory cells could be modifed by chronic nitric oxide (NO) inhibition induced by L-NAME (L). Métodos e Resultados: GP were inhaled with ovalbumin (OA) or nomal saline (NS) (2xwk/4wks). After 4th inhalation, GP were daily treated with vehicle (OA and NS groups), L (OA-L and NS-L groups) and/or D (OA-D and OA-D-L groups). After 72 hs of 7th inhalation, GP were anesthetized, challenged (with OA or NS), lungs removed and stained with HE and TUNEL. Using morphometry we evaluated: eosinophils (EOS), mononuclear cells (MN) and apoptotic cells in both bone marrow (Bm) and airways (Aw). Apoptotic index (AI) were expressed in %. In Aw, MN and EOS were greater in OA than in NS and these responses were attenuated by D (P<0.05). OA-L showed greater values of MN than controls, OA and OA-D (P<0.001). Although D reduced MN, L reverted this response in OA-D-L (P<0.001). L increased EOS in Aw compared to controls and OA-D (P<0.05). OA-L values of EOS in Aw were similar to OA. There were no differences between EOS in Aw in OA-D and OA-D-L. OA-D had increased AI in Aw compared to controls, OA and OA-L (P<0.05). EOS values in Bm of OA were greater than NS and OA-D (P<0.05). L reverted the effetcs of D in Bm EOS (P<0.05). Conclusões:

The pro-apoptotic effects of D treatment reducing MN cells is partially modulated by NO. 36.204 CONTRIBUTION OF NITRIC OXIDE ON THE RELEASE OF TISSUE-PLASMINOGEN ACTIVATOR FROM RAT AORTA. Fracasso, J. F.; Rodrigues, L. A.; Silva, R. F. P.; Lepera, E. Z. P. Princípios Ativos Naturais e Toxicologia FCFA-UNESP; Objetivo: The endotelium release tissue plasminogen activator [t-PA] wich initiates fibrinolisis that control the deposition of fibrin in the vascular system. Kinin induced the release of t-PA by the increased expression of endothelial NO synthase. We studied the participation of NO induced t-PA release from rat aorta by using an inhibitor of NO synthase, NωNLA. Métodos e Resultados: Three groups [G] of animals were treated with saline 0,9% [GI], with NwNLA.-Sigma (30 mg/kg i.v.) [GII] and with NωNLA. + L-arginine (L-arg 100 mg/kg i.v. 10 minutes after NωNLA) [GIII] [n = 6 rats in each group]. The results was measured as fibrinolisis area (FA). Values are reported as means ± SEM. Students umpaired t-test were used to compare means between groups. Conclusões: The results was measured as FA in fibrin plate [mm2] and show significant differences between groups: GI = 475,6 ± 15; **GII = 40,4 ± 18;

**GIII = 136,5 ± 8; differs significantly from GII [p < 0,001] and L-arg in GIII was capable to revert the inhibition of t-PA release produced by NωNLA ** [p < 0,001]. These finding suggest that excessive NO production mediates t-PA induced fibrinolitic activity. These results show that NO-induced t-PA release is important in the antithrombotic against cardiovascular disease or disseminate intravascular coagulation produced during septic shock, the overproduction of NO produce a fall in the blood pressure that is prevented by NωNLA, but abolished the capacity of aorta to liberate t-PA and this shift to haemostatic balance favor of a DIC. 36.205 DADOS ADICIONAIS DO ENVOLVIMENTO DO SISTEMA SEROTONÉRGICO E DOS CANAIS DE CÁLCIO NA AÇÃO ANTINOCICEPTIVA DA AGMATINA. 1Gadotti, V. M.; 2Paszcuk, A. F.**; 3Rodrigues, A. L. S.; 2Calixto, J. B.; 1Santos, A. R. S.; 1Ciências Fisiológicas UFSC; 2Farmacologia UFSC; 3Bioquímica, UFSC Objetivo:

Recentemente demonstrou-se que a agmatina (AGM) apresenta significativo efeito antinociceptivo em diversos modelos de nocicepção em camundongos, por modular, pelo menos em parte, os sistemas glutamatérgico, opióide, imidazólico e a via da L-arginina-óxido nítrico. Neste trabalho, investigou-se o possível envolvimento dos canais de cálcio, bem como a participação do sistema serotonérgico na atividade antinociceptiva da AGM no modelo das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético em camundongos. Métodos e Resultados:

Foram utilizados camundongos Swiss (25-35 g) de ambos os sexos. A possível participação dos canais de cálcio e do sistema serotonérgico (5-HT) na ação antinociceptiva da AGM, foi analisada no modelo das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético (0,6%, i.p.). A AGM (1-30 mg/kg, i.p. 30 min antes) causou redução significativa e dependente da dose da nocicepção causada pelo ácido acético, com DI50 de 5,6 (3,9-8,0) mg/kg e inibição de 83±4%. A antinocicepção causada pela AGM (10 mg/kg, i.p., 30 min antes) no modelo do ácido acético, foi significantemente revertida pelo pré-tratamento dos animais durante 4 dias consecutivos com p-cloro-fenilalanina (PCPA) (100 mg/kg, i.p. inibidora da síntese de serotonina) em 55±19%. Além disso, o efeito antinociceptivo da AGM (10 mg/kg, i.p.) e da buspirona (2,5 mg/kg, i.p., controle positivo), no teste do ácido acético, foram revertidos pelo pré-tratamento dos animais pela via intracerebroventricular (i.c.v.) com cloreto de cálcio (CaCl2) (200 nmol/sítio, doador de íons Ca2+), com reversão de 79±12 e 83±13%, respectivamente. Conclusões:

Estes resultados estendem os dados anteriores e demonstram que a atividade antinociceptiva da AGM depende, pelo menos em parte, da liberação de serotonina endógena sensível ao tratamento com PCPA e de como um bloqueio dos canais de cálcio. 36.206 DURAÇÃO DO EFEITO DO C-TERMINAL DA S100A9 MURINA SOBRE A DOR NEUROPÁTICA EXPERIMENTAL E PARTICIPAÇÃO DE RECEPTORES OPIÓIDES. 1Paccola, C. C.; 1Gutierrez, V. P.; 1Longo, I.; 2Juliano, L.; 2Juliano, M. A.; 1Giorgi, R. 1Fisiopatologia Instituto Butantan; 2Bioquímica UNIFESP Objetivo: Avaliar a duração do efeito inibitório do peptídeo sintético idêntico ao C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) sobre o modelo de dor neuropática experimental e a possível participação de receptores opióides neste efeito. Métodos e Resultados: A dor neuropática foi induzida pela constrição crônica do nervo ciático, por meio de 4 ligaduras frouxas ao redor do mesmo, e determinada no 14° dia após a cirurgia pela avaliação da hiperalgesia mecânica (teste de pressão da pata) e da alodinia (filamentos de von Frey). O peptídeo foi administrado pelas vias intraplantar ou oral (8µg/animal), para a determinação da duração do efeito local ou sistêmico, respectivamente, ou pela via intratecal (0,5µg/animal), para determinar a duração do efeito central. No 14º dia, os fenômenos algogênicos foram avaliados antes dos tratamentos e em diferentes tempos após os mesmos. O pS100A9m injetado centralmente reverteu tanto a hiperalgesia (112%) quanto a alodinia (14%) apenas na 1ª hora após

sua administração. O efeito anti-hiperalgésico local foi observado após 1 (80%), 3 (80%) e 5h (97%) do tratamento com o peptídeo. Sistemicamente, a anti-hiperalgesia foi observada após 1 (138%), 3 (106%) e 5h (116%). O efeito anti-alodínico local foi observado na 1ª (15%) e na 3ª hora (14%), e o sistêmico apenas na 1ª hora (11%). A participação de receptores opióides, avaliada no 14º dia após a constrição do nervo ciático, foi realizada pelo tratamento dos animais com naloxona (1µg/pata), imediatamente após a administração intratecal do pS100A9m. Os fenômenos algogênicos foram avaliados 1h após o último tratamento. A naloxona não interferiu com a reversão da hiperalgesia e da alodinia induzida pelo pS100A9m. Conclusões: Os dados obtidos demonstram que o efeito anti-hiperalgésico do pS100A9m é mais eficaz que o efeito anti-alodínico e ainda, que o peptídeo administrado localmente apresenta maior atividade inibitória sobre a hiperalgesia e alodinia, quando comparado com as demais vias. Tendo em vista que a naloxona não interferiu com o efeito inibitório do peptídeo, sugere-se que os receptores opióides não estão envolvidos neste efeito. 36.207 EFEITO ANTINOCICEPTIVO DA AGMATINA NA ALODÍNIA TÉRMICA AO FRIO CAUSADA PELA CONSTRIÇÃO PARCIAL DO NERVO CIÁTICO EM CAMUNDONGOS. 1Paszcuk, A. F.; 2Tibola, D.*; 2Gadotti, V. M.**; 1Quintão, N. L. M.**; 3Rodrigues, A. L. S.; 1Calixto, J. B.; 2Santos, A. R. S.; 1Farmacologia UFSC; 2Ciências Fisiológicas UFSC; 3Bioquímica UFSC Objetivo: Recentemente demonstrou-se que a agmatina (AGM), um possível neurotransmissor em mamíferos, apresenta importante efeito antinociceptivo quando analisada em diversos modelos de nocicepção aguda e crônica em camundongos. O objetivo do presente estudo foi analisar o possível efeito da AGM na alodínia térmica ao frio causada pela constrição parcial do nervo ciático (CPNC), bem como, avaliar o efeito antiinflamatório da AGM no edema de pata induzido pelo CFA. Métodos e Resultados: Foram utilizados camundongos suíços fêmeas (20-30 g, N=4-6). A alodínia térmica ao frio foi avaliada através da aplicação de 20 µl de acetona sobre a pata ipsilateral dos animais que sofreram a CPNC, sendo o tempo que o animal permaneceu lambendo e/ou mordendo a pata com acetona cronometrado durante 5 minutos e considerado como indicativo de nocicepção. A atividade antiedematogênica e antiinflamatória da AGM foi analisada em relação ao edema causado pela injeção intraplantar (i.pl.) de adjuvante completo de Freund (CFA), bem como pela atividade da enzima mieloperoxidase nas patas dos camundongos que receberam o CFA. A AGM (30 mg/kg, i.p.) reduziu a alodínia ao frio causada pela CPNC com inibição de 97±3%, sendo que seu efeito permaneceu significativo por até 4 horas após o tratamento. No entanto, a AGM não foi capaz de inibir de maneira significativa o edema de pata causado pela injeção de CFA como verificado no pico máximo de 24h (120 ±11,4µl para o grupo controle versus 146,6±10,2 µl para o grupo tratado com AGM). Da mesma forma a AGM não foi capaz de diminuir a atividade da enzima mieloperoxidase (1,35±0,47 DO/mg de tecido para o grupo controle e 1,74 ± 0,48 DO/mg de tecido para grupo tratado com AGM). Conclusões: Estes resultados estendem os dados anteriores e demonstram que a AGM também é eficaz em reduzir a alodinia térmica ao frio presente na dor crônica de origem neuropática causada pela CPNC. No entanto, a AGM não foi capaz de inibir a atividade da enzima MPO bem como o edema de pata causados pelo CFA. 36.208 EFEITO DA MEPIVACAÍNA INTRATECAL SOBRE O EDEMA E A MIGRAÇÃO DE NEUTRÓFILOS INDUZIDOS POR CARRAGENINA EM RATOS. 1Brock, S. C.; 2Martins, M. A.**; 2Tonussi, C. R.; 1Neurociências, UFSC; 2Farmacologia UFSC Objetivo:

A atividade antidrômica das fibras aferentes nociceptivas pode interferir no processo inflamatório periférico. Nosso objetivo foi verificar se o bloqueio medular com anestésico local altera o edema e a migração de neutrófilos para o sítio inflamatório e ainda, se este efeito é segmentar ou sistêmico. Métodos e Resultados:

Ratos Wistar machos (200-300g), n=6, anestesiados com halotano, receberam injeção intraplantar (i.pl.) de carragenina (300 µg/pata; 50 µl) logo após a injeção intratecal (i.t., lombar, L5-L6) de mepivacaína 3% ou salina (controle) (20 µl). Após 1 hora mediu-se o aumento do volume da pata traseira (AVPt; grupo 1) ou da pata dianteira (AVPd; grupo 2) e medições subsequentes foram feitas de hora em hora até 4 horas. Ao final, realizou-se eutanásia dos animais e coletou-se o tecido subcutâneo plantar para verificação da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO) e dosagem de proteína tecidual. Mepivacaína produziu menor AVPt que o grupo controle na quarta hora após aplicação de carragenina (P<0,05; AVPt controle: 0,99 ± 0,12; AVPt mepivacaína: 0,68 ± 0,05). Mepivacaína não apresentou diferença significativa do AVPd (AVPd controle: 0,67 ± 0,03; AVPd mepivacaína: 0,73 ± 0,04). Tanto o grupo 1 quanto o grupo 2 não apresentaram diferença significativa na atividade da MPO. Conclusões:

O bloqueio lombar apenas afetou o edema da pata traseira, não tendo efeito sobre a pata dianteira. Isto mostra que a diminuição do edema de pata induzido por carragenina foi segmentar, provavelmente envolvendo o bloqueio do reflexo da raiz dorsal e não um efeito sistêmico do procedimento intratecal, como por exemplo, inibição do sistema nervoso simpático. Além disso, este tratamento não alterou a migração de neutrófilos, porém tempos de pré-tratamento maior podem ser necessários para confirmar estes dados. 36.209 EFEITO DO FLAVONÓIDE MIRICITRINA SOBRE AS ALTERAÇÕES MORFOLÓGICAS INDUZIDAS PELO ADJUVANTE COMPLETO DE FREUND EM CAMUNDONGOS. 1Meotti, F. C.; 2Pizzolatti, M. G; 3Mizusaki, C.; 4Santos, A. R. S. 1Química UFSM; 2Química, UFSC; 3Ciências Morfológicas UFSC; 4Ciências Fisiológicas UFSC Objetivo:

Trabalhos prévios do nosso grupo demonstraram que o flavonóide miricitrina (MI) reduz o edema, a alodínia e a atividade da enzima mieloperoxidase em animais injetados intraplantarmente (i.pl.) com Adjuvante Completo de Freund (CFA). Desta forma, este trabalho tem por objetivo investigar o efeito da MI sobre as alterações morfológicas do tecido cutâneo, bem como sobre a migração de células inflamatórias na pata de camundongos injetados com CFA. Métodos e Resultados:

Camundongos Swiss, adultos, fêmeas (25-35g) foram divididos em 4 grupos (n=5) que receberam: 1) salina intraperitoneal (i.p.) (10 ml/kg) e salina i.pl. (0,02 ml); 2) salina i.p. e CFA (0,02 ml, i.pl.); 3) MI (30 mg/kg) i.p. 30 min antes da injeção i.pl. de CFA e 4) MI (30 mg/kg) 22 h após da injeção i.pl. de CFA. Após 24 h da injeção i.pl. de CFA ou salina os animais foram sacrificados e a pata foi cortada longitudinalmente em duas partes iguais. A proximidade distal foi fixada em PFA 4% e corada com hematoxilina-eosina para análise das alterações morfológicas. A proximidade medial foi fixada em solução de Zenker e corada através de May-Grünwald-Giemsa para a quantificação celular. A administração de CFA causou alterações do tecido epitelial e conjuntivo com hiperplasia das células epidérmicas e dispersão das fibras de colágeno da derme papilar e reticular; massiva migração de células inflamatórias com granulomas isolados, angiogênese e hiperplasia de fibroblastos. O número de polimorfonucleares aumentou de 5,2±3,1/mm2 (grupo 1) para 141,6±13,9/mm2 (grupo 2), contudo, não ocorreram alterações no número de mastócitos, linfócitos e macrófagos. O tratamento prévio ou posterior com MI reduziu as alterações morfológicas do tecido epitelial e da derme papilar, sem prevenir as alterações na derme reticular e a migração de polimorfonucleares, 119,8±8,8/mm2 (grupo 3) e 133,0±4,3/mm2 (grupo 4). Conclusões:

Os resultados aqui apresentados demonstraram que o flavonóide MI foi ineficaz em diminuir a migração de neutrófilos, na dose que reduz o edema e a alodinia, induzida pelo CFA. Por outro lado, MI foi capaz de prevenir as alterações morfológicas do tecido epitelial e derme papilar explicando, em parte, sua ação antiedematogênica. Estudos estão em andamento visando elucidar os mecanismos pelos quais a MI é capaz de reduzir as alterações morfológicas do tecido cutâneo, o edema e alodínia induzida pelo CFA. 36.210

EFEITO DO LPS SOBRE A HIDRÓLISE DE NUCLEOTÍDEOS EM PLAQUETAS E SORO DE RATOS. 1Vuaden, F. C.; 2Fürstenau, C. R.**; 2Sarkis, J. J. F.; 2Bonan, C. D.; 1Bioquímica ICBS-UFRGS / Ciências Fisiológicas PUC-RS 2Ciências Fisiológicas PUC-RS Objetivo: O lipopolissacarídeo (LPS) é uma endotoxina bacteriana que induz efeitos inflamatórios e pró-coagulantes. Os nucleotídeos extracelulares exercem ações sobre o processo inflamatório, podendo-se destacar a propriedade pró-inflamatória do ATP, a influência sobre a agregação plaquetária induzida por ADP e os efeitos antiinflamatórios e imunossupressores da adenosina. Os nucleotídeos são degradados até adenosina por nucleotidases. Considerando os efeitos do LPS e as diversas ações promovidas pelos nucleotídeos, este estudo tem como objetivo avaliar o efeito in vitro de diferentes concentrações de LPS (25, 50, 75, 100 µg/mL) sobre a atividade da enzima nucleosídeo pirofosfato fosfodiesterase (NPPase) e sobre a hidrólise de nucleotídeos em plaquetas e soro de ratos. Métodos e Resultados: Plaquetas e soro de ratos Wistar machos adultos foram preparados diariamente. O fosfato liberado pela hidrólise dos nucleotídeos e a atividade fosfodiesterásica foram determinados como previamente descrito (Anal Biochem. 157:375-80, 1986; Thromb Res. 15;91:83-9, 1998). Em plaquetas, nas concentrações de 75 e 100 µg/mL de LPS, houve um aumento significativo na hidrólise de ADP (36% e 40%, respectivamente) e AMP (43% e 33%, respectivamente), por outro, lado a hidrólise de ATP permaneceu inalterada. Em soro não foi observada alteração nas atividades enzimáticas nas concentrações testadas. A NPPase, em soro, apresentou uma diminuição significativa na hidrólise do substrato artificial ρ-5’-timidina monofosfato nas concentrações de 50, 75 e 100 µg/mL de LPS (37%, 31% e 36%, respectivamente). Conclusões: Os resultados sugerem que alterações observadas nas atividades nucleotidásicas de sistema circulatório poderiam modular os níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares, os quais podem atuar na regulação de eventos relacionados ao processo inflamatório. 36.211 EFEITO DO VENENO DE BOTHROPS ASPER (VBA) E DE UMA MIOTOXINA (MT-III) SOBRE A EXPRESSÃO DE CICLOOXIGENASES E PRODUÇÃO DE PROSTAGLANDINAS, POR MACRÓFAGOS E NEUTRÓFILOS. 1Moreira, V.; 1Teixeira, C. F. P.; 1Amaral, R. B.*; 2Zamuner, S.R.; 3Gutiérrez J.M.; 1Farmacologia, Instituto Butantan; 2Pharmacology University of Calgary; 5Microbiologia Instituto Clodomiro Picado Objetivo: Avaliar a capacidade do VBa e da MT-III induzirem a expressão das ciclooxigenases 1 e 2 (COX-1 e COX-2) e a liberação das prostaglandinas E2 e D2 (PGE2 e PGD2) em neutrófilos e macrófagos isolados de camundongos, in vitro. Métodos e Resultados:

Os neutrófilos foram obtidos 4 h após a administração i.p. de 1,5 mL de glicogênio de ostra a 4%, em camundongos Swiss machos e os macrófagos residentes foram coletados do peritôneo de animais intactos. 1x106 células foram incubadas com VBa 5 µg/mL ou MT-III 6,5 µg/mL ou meio RPMI como controle (C) por 1, 3, 4½ e 6 h. No precipitado celular analisou-se a expressão das COX-1 e 2 por western blot e no sobrenadante fez-se a dosagem imunoenzimática de PGE2 e PGD2. O VBa induziu a expressão de COX-2 nas 3 e 4½ h, em ambas as células (macrófagos 140% e neutrófilos 50%), mas em neutrófilos houve expressão até 6 h (140%). A MT-III induziu a expressão entre 3 e 4½ h em macrófagos (700 a 1000%) e em neutrófilos de 1 a 6 h (180 a 250%). O VBa e a MT-III não afetaram a expressão protéica de COX-1 em nenhum dos tipos celulares. Tanto o veneno como a toxina induziram a liberação de PGE2 em neutrófilos (VBa=10502±323; MT-III=10199±631; C=4392±531 pg/mL, n=3) e em macrófagos (VBa=39854±623; MT-III=33959±2938; C=9873±449 pg/mL, n=3) e a liberação de PGD2 em neutrófilos (VBa=1035±167; MT-III=973±252; C=250±67 pg/mL, n=3) e em macrófagos (VBa=772±114; MT-III=876±83; C=211±65 pg/mL, n=3). Conclusões:

O VBa e a MT-III induzem a expressão de COX-2 mas não da COX-1, tanto em macrófagos como em neutrófilos. Em neutrófilos, a ação do VBa e da MT-III é mais precoce e prolongada do que em macrófagos. A liberação de PGE2 e D2 a partir dos 2 tipos celulares, indica que a COX-2 induzida é uma enzima ativa. A MT-III pode contribuir para o efeito do veneno bruto sobre a COX-2 e formação de PGs. 36.212 EFEITO DO VENENO DE SERPENTES CROTALUS DURISSUS TERRIFICUS (VCDT) SOBRE A INFLAMAÇÃO AGUDA INDUZIDA POR CARRAGENINA EM CAMUNDONGOS. Nunes, F. P. B.; Araújo, S. D.**; Sampaio, S. C.; Sousa e Silva, M. C. C. Fisiopatologia Instituto Butantan Objetivo: Ao contrário dos venenos das serpentes do gênero Crotalus, a reação local gerada pela ação direta do veneno da espécie Crotalus durissus terrificus (VCdt) é caracterizada por edema discreto sem lesões teciduais marcantes. A literatura demonstra que este veneno induz uma discreta resposta inflamatória além de inibir algumas funções de macrófagos. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do VCdt sobre a resposta inflamatória aguda induzida por carragenina (Cg) em camundongos. Métodos e Resultados: O VCdt (1,5µ g/50µ L s.c.) ou salina (50µ L) foram injetados em camundongos Swiss, machos (18-22g) (n=6) antes e depois da injeção de Cg e o edema de pata e a migração celular para a cavidade peritoneal foram avaliados. O desenvolvimento do edema foi mensurado com o auxílio de um paquímetro, em diferentes intervalos de tempo após a injeção intraplantar de 50µ L de Cg no coxim plantar direito dos animais (6mg/mL) ou salina (pata contralateral). A migração celular foi avaliada 4 hs após a injeção intraperitoneal de 200 L de Cg (1,5mg/mL) ou salina, e a contagem total de células realizada em Câmara de Neubauer e a diferencial em esfregaços sanguíneos corados pancromicamente. O pré e pós-tratamento com o VCdt reduziram a migração celular e o edema quando comparados aos respectivos controles. A inibição da migração celular foi de 51% no pré-tratamento (tratado 1,05 ± 0,11; controle 2,12 ± 0,22; p<0,001) e de 41% no pós-tratamento (tratado 1,12 ± 0,09; controle 1,88 ± 0,04; p<0,001). A redução do edema foi maior em 72hs. A inibição foi de 40% tanto para o pré-tratamento (tratado 22,71 ± 1,0; controle 37,80 ± 1,55; p<0,001) como para o pós-tratamento (tratado 26,86 ± 0,92; controle 44,64 ± 1,68; p<0,001). Conclusões: O VCdt, inibe o edema e a migração celular induzidos por Cg, indicando uma ação antiinflamatória deste veneno. 36.213 ESTUDO DA RESPOSTA INFLAMATÓRIA EM RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS ATRAVÉS DO AUMENTO DA PERMEABILIDADE VASCULAR. 1Sartoretto, S. M.; 1Miranda, C. R.; 1Tasca, R. S; 2Fernandes, C. A. M**; 1Cuman, R. K. N; 1Silva, M. A. R. C. P. 1Farmácia e Farmacologia UEM; 2Farmácia e Farmacologia UFMG Objetivo:

Introdução: Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) apresentam alterações vasculares que podem interferir na resposta inflamatória. O objetivo deste trabalho foi estudar esta resposta através do aumento da permeabilidade vascular a diferentes mediadores da inflamação em SHR. Métodos e Resultados:

Metodologia: Neste estudo, ratos SHR e normotensos (NTR) receberam solução de azul de Evans 2,5% em salina (25 mg/Kg de peso corporal) por via endovenosa. Diferentes doses de histamina (1,0; 5,0 e 10,0 µg), serotonina (0,01; 0,05; 0,10 e 0,20 µg) e bradicinina (0,1; 0,5 e 1,0 µg), em volume de 0,1 ML, foram injetadas intradermicamente na região dorsal dos animais. Após 30 minutos, os animais foram sacrificados, exsanguinados e as regiões da pele correspondentes as manchas formadas pelo extravazamento do corante foram cortadas e colocadas em 5 mL de solução de acetona+sulfato de sódio 0,5% (2:1) durante 48 horas, para extração do corante. A solução foi filtrada e sua absorbância determinada em espectrofotômetro, no comprimento de onda de 620 nm. Resultados: Em doses maiores das drogas testadas houve diferença significativa na resposta de aumento de permeabilidade vascular em animais SHR, quando comparada à obtida nos animais NTR: bradicinina: 0,1mg: SHR: 2,77±0,47; NTR: 2,00±0,26; 0,5mg: SHR: 3,50±0,52;

NTR: 2,12±0,27; 1,0mg: SHR: 4,62±0,55*; NTR: 3,97±0,58; SHR (n=13), NTR (n=13); histamina: 1mg: SHR: 2,76±0,43; NTR: 3,45±0,77; 5mg: SHR: 5,65±0,66; NTR; 4,81±0,80; 10mg: SHR: 8,57±0,57*; NTR: 5,87±0,79; SHR (n=12) NTR (n=12); serotonina: 0,01mg: SHR: 2,65±0,71; NTR: 2,17±0,35; 0,05mg: SHR: 4,61±0,62; NTR: 3,58±0,46; 0,10mg: SHR: 5,75±0,98; NTR: 3,52±0,44; 0,20mg: SHR: 9,51±1,07*; NTR: 6,73±0,71; SHR (n=8) NTR (n=8). Conclusões:

Conclusão: Estes resultados indicam que há uma alteração da resposta inflamatória, avaliada através do aumento da permeabilidade vascular a diferentes mediadores químicos em ratos SHR . 36.214 ESTUDO DO EFEITO MIOTÓXICO DO VENENO DE Agkistrodon contortrix laticinctus NA PREPARAÇÃO FRÊNICO-DIAFRAGMA DE CAMUNDONGO: INIBIÇÃO PELA SURAMINA. Serafim, A. D.; Arruda, E. L.*; Fernandes, F. F. A.*; Melo, P. A. Farmacologia Básica e Clínica ICB-UFRJ Objetivo: Avaliar o efeito miotóxico do veneno de A. c. laticinctus na preparação frênico-diafragma de camundongos na ausência e presença da suramina. Métodos e Resultados: Camundongos suiços machos (30 ± 5g) foram separados em grupos (n= 4-8). Após eutanásia sob anestesia com éter etílico, foi feita a preparação frênico-diafragma, banhada em solução nutridora apropriada a 37°C, acoplada a transdutor de tensão e polígrafo GRASS, com estímulos de 4-8 V (indiretos) e de 12-15 V (diretos); 2 ms; 0,5 Hz. A preparação foi testada com estímulos indiretos (frênico) ou diretos (músculo diafragma). Após 30 min. de estabilização adicionou-se o veneno bruto de A. c. laticinctus (12,5 - 50 µg/ml) ou o veneno associado a suramina ( 20, 25 e 50 µM ). A adição do veneno nas concentrações de 12,5 - 25 µg/ml diminui de forma tempo e concentração-dependente a amplitude do abalo produzido tanto por estímulos diretos (90 - 120 min.) quanto indiretos (45- 60 min.) nesta preparação. O efeito antimiotóxico da suramina foi concentração-dependente, sendo observada nas concentrações 20, 25 e 50 µM uma inibição de 5, 40 e 100%, respectivamente, no efeito depressor do veneno de A. c. laticinctus (25 µg/ml). Conclusões: Estes dados mostram inicialmente que a suramina protege a função frênico-difragma do efeito depressor deste veneno viperídeo, confirmando nossas observações anteriores que demonstram sua atividade antimiotóxica. 36.215 EVALUATION OF ANTIOFIDIC ACTIVITY OF COMBRETUM LEPROSUM MART FRUIT EXTRACT. 1 Fernandes, F.F.A.; 2 El Kik, C.Z.*; 3 Lancarovichi, R.*; 4 Facundo, V.; 5 Melo, P. A. Farmacologia Básica e Clínica ICB-UFRJ Objetivo: Objectives: In this work we evaluated the ability of the fruit extract of Combretum leprosum in inhibiting the snake venom activity. The Combretum gender (Combretaceae) is distributed in Asia , Africa and Americas , including about 250 species, with cosmopolita distribution. It presents about 10% of its species with known ethnopharmacology use, mainly in the treatment of snakebites, cancer, leprosy, abdominal pain, tropical fevers, as cicatrizant agent and others. Métodos e Resultados: Methods and Results: We evaluated the inhibition of azocaseinolytic activity of many different crude snake venoms according with the method described by Garcia et al. (1978) and the phospholipase A2 activity (Marinetti et al., 1965). Also we tested the anti-hemorrhagic activity of this extract against B. jararaca (10 g/g) crude venom (Kondo et al., 1960). The proteolytic activity of B. jararacussu (10 µg/mL) crude venom was completely inhibited by the extract in a concentration-dependent way (1 – 100 µg/mL). Besides this inhibition was partial against B. newviedi, B. asper, A. c. laticinctus and C. v. viridis crude venoms. The proteolytic activity of trypsin was 50% inhibited by 100 µg/mL of the crude extract. The B. jararacussu phospholipase A2 activity was also inhibited completely by the crude extract (100 µg/mL). Moreover, the hemorragy caused by B. jararaca (10 µg/g) crude venom was also completely inhibited by the extract (100 µg/mL). Conclusões:

Conclusion: Our results show that the Combretum leprosum crude extract was able to inhibit 50% of proteolytic activity of trypsin and completely the proteolytic and phospholipase activity of Bothrops jararacussu venom. This inhibition was partially against B. newviedi, B. asper, A. c. laticinctus and C. v. viridis crude venoms. Besides, the extract was also able to inhibit completely the hemorrhagic activity of Bothrops jararaca venom. 36.216 HEME/ HEME-OXYGENASE (HO)/ CARBON MONOXIDE (CO)/ BILIVERDIN (BVD) PATHWAY DOWN- MODULATE THE NEUTROPHIL (NF) MIGRATION IN ACUTE INFLAMMATION. Freitas, A.; Dal Secco, D.**; Alves-Filho, J. C.**; Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: We investigated the role of (HO), the enzyme that catalyzes heme degradation, on (Nφ) migration into inflammatory site. Métodos e Resultados: Adult Balb/c mice (18-20g, N=5) were used. Nφ migration, leukocyte (LØ) rolling and adhesion was determined 4 h after carrageenan (Cg) injection. The pretreatment with ZnDPBG (an HO inhibitor; sc; 4.5µmol/kg) increased the Nφ migration, LØ rolling and adhesion after challenge ip with Cg 250µg/cavity (Cg250µg/cavity:5.1x106±0.3;35.5.±7.5;0.4±0.07; ZnDPBG:7.7x106±0.4;59±11;1.2±0.2), while the pretreatment with hemin (an HO inducer; sc; 1.5µmol/kg), or with HO products: BVD (sc;15µmol/kg) or DMDC ( a CO donor; sc; 7.5µmol/kg) decreased the Cg induced Nφ migration, LØ rolling and adhesion (Cg500µg/cavity:9.0x106±0.5;45±2;0.77±0.3; hemin:2.9x106±0.9;14±0.3;0.2±0.03; BVD:3.2x106;20±0.3;0.3±0.05; DMDC: 3.3x106;9±1.7;0.2±0.04). Next, the involvement of guanylate cyclase (sGC) in the inhibitory effects of CO and BVD on Nφ migration was evaluated. The pretreatment with ODQ (sGC inhibitor;ip;5µmol/kg) reversed the inhibitory effect of DMDC on Nφ migration, LØ rolling and adhesion induced by Cg. However, the inhibitory effect of BVD was not affected by the pretreatment with ODQ (Cg500µg/cavity:5x106±0.9;27±1.7;0.8±0.08; ODQ:7x106±0.4;58±7.3;1.1±0.1; DMDC:2x106±0.3;8.2±2.7;0.2±0.1; ODQ+DMDC:7x106±0.8;70±1.1;0.8±0.1; BVD:3x106±0.4;9.2±0.2;0.2±0.1; ODQ+BVD:3.5x106±0.5; 9.23±0.3; 0.2±0.05). We also investigated the relationship between HO products and nitric oxide (NO) on Cg-induced Nφ migration. The pretreatment with aminoguanidine (an inducible NO synthase inhibitor,AG;sc;50 mg/kg) ) did not affect the inhibitory effect of BVD or DMDC on Nφ migration. Interestingly the pretreatment with ZnDPBG blocked the inhibitory effect of SNAP (a donor of NO;sc;3mg/kg) on Cg-induced Nφ migration (Cg500µg/cavity:8.6±0.6; AG:11.2±0.4; BVD:3.1±0.3; AG+BVD:3.9±0.9; DMDC:4±0.8; AG+DMDC:5.2±1.1; ZnDPBG: 9.9±1.0; SNAP:3.1±0.4; ZnDPBG+SNAP:9.3±1.2 N∅x106/cavity). Conclusões: The results suggest that HO down-modulates N migration and is involved in the inhibitory effect of NO on Cg-induced N migration via CO and BVD. Moreover, sCG is involved in the inhibitory effect of CO. 36.217 INFLUENCE OF THE TREATMENT WITH CHLORPROPAMIDE ON INFLAMMATORY RESPONSE IN SODIUM MONOGLUTAMATE OBESE RATS. 1Sartoretto, S. M; 2Toledo, D. P.**; 1Souza, J.**; 1Bersani-Amado, C. A; 2Fortes, Z. B.; 1Cuman, R. K. N. 1Farmácia e Farmacologia UEM; 2Farmacologia - ICB I, USP Objetivo:

Introduction: The acute inflammatory response is reduced in sodium monoglutamate (MSG) obese rats (Toledo et al., SBFTE p.151, 2002). Objective: In the present study we investigated the influence of chlorpropamide (Chl) treatment on the altered inflammatory response in the MSG obese rats. Métodos e Resultados:

Methods: Newborn Wistar rats were injected with MSG (4g/kg/day/s.c) during 5 days. Three months after, the inflammatory response was studied by carrageenan induced paw edema (200 mg/paw) in MSG-control, MSG-Chl (200mg/kg, per os, by 7 days), and normal (C) rats. Results: The reduced

inflammatory response observed in MSG animals was reversed by the treatment with Chl (1h: MSG= 0,19±0,03mL: MSG+Chl= 0,17±0,03mL; C= 0,50±0,07mL; 2h: MSG= 0,43±0,04mL; MSG+Chl= 0,53±0,08mL*; C= 1,07±0,09mL; 4h: MSG= 0,61±0,06mL; MSG+Chl= 0,67±0,09mL*; C= 1,27±0,09mL; 24h: MSG= 0,04±0,01mL; MSG+Chl= 0,08±0,02mL; C= 0,05±0,01mL) MSG (n=12), MSG+Chl (n=10) Control (n=8). Conclusões:

Conclusion: The chlorpropamide treatment was effective in restoring the decreased inflammatory response observed in MSG obese rats. 36.218 KC, MIP-2, IL1-BETA, TNF-ALFA E PROSTAGLANDINAS ESTÃO ENVOLVIDOS NA MIGRAÇÃO DE NEUTRÓFILOS INDUZIDA PELO HIDRÓXIDO DE CÁLCIO PARA BOLHA DE AR SUBCUTÂNEA DE CAMUNDONGOS. 1Costa, M. M. T. M.; 1Oliveira, S. H. P.; 2Gomes-Filho J E.; 1Ciências Básicas UNESP-Araçatuba; 2Odontologia UNESP-Araçatuba Objetivo: A pasta de hidróxido de cálcio é um material que tem sido amplamente estudado na odontologia por ser considerado biocompatível, antimicrobiano e conduzir ao efeito mineralizador. No entanto, os mecanismos envolvidos neste processo ainda não foram completamente esclarecidos, sendo o objetivo do presente estudo investigar o padrão da migração celular induzida pelo hidróxido de cálcio. Métodos e Resultados: O modelo experimental empregado foi a bolha de ar subcutânea, com grupos experimentais de 6 camundongos balb/c machos. Os animais foram estimulados com hidróxido de cálcio, sendo alguns grupos pré-tratados com drogas antiinflamatorias (indometacina, 5mg/Kg; meloxicam, 5mg/Kg; dexametasona,1mg/Kg e MK886, 1mg/Kg) com o objetivo de avaliar os mediadores químicos envolvidos neste processo. O pré-tratamento com tioglicolato a 3% e com o composto 48/80 foi realizado para determinar o papel das células residentes. A detecção dos mediadores inflamatórios TNF-α, IL1-β, KC e MIP-2, no exsudato, foi realizada através do método de ELISA. O hidróxido de cálcio induziu uma migração de neutrófilos, dose-dependente, alcançando o pico 96 horas após a injeção do estímulo. Esta migração foi inibida após o pré-tratamento com indometacina, meloxicam e dexametasona o que não ocorreu com o MK886. A migração de neutrófilos foi dependente de KC, MIP-2, IL1-β, TNF-α e Prostaglandina, não sendo estes mediadores liberados por macrófagos ou por mastócitos. A liberação de MIP-2, KC e IL-1β foi dependente da produção de prostaglandinas e óxido nítrico, o que não ocorreu com o TNF-α. Conclusões: O hidróxido de cálcio induziu uma migração de neutrófilos para bolha de ar subcutânea, sendo esta migração dependente de KC, MIP-2, IL1-β, TNF-α e Prostaglandinas. 36.219 LEUCOTRIENO E ÓXIDO NÍTRICO ESTÃO ENVOLVIDOS NO RECRUTAMENTO DE EOSINÓFILOS PARA O PULMÃO INDUZIDO POR OVALBUMINA EM CAMUNDONGOS 1Sanches, M. P.; 2Oliveira, S. H. P.; 1Cunha, F. Q. 1Farmacologia FMRP-USP; 2Ciências Básicas UNESP-Araçatuba Objetivo: Introdução: Estudos em humanos e animais tem mostrado que os leucotrienos estão envolvidos na eosinofilia pulmonar, produção de muco e também na hiperreatividade brônquica. Este trabalho teve como objetivo investigar os mediadores envolvidos na eosinofilia pulmonar em camundongos imunizados com clara de ovo coagulada e desafiados por ovalbumina (OVA) intratraqueal. Métodos e Resultados: Métodos: Os animais foram imunizados 14 dias antes do desafio com OVA. A dose utilizada de OVA para o desafio intratraqueal foi de 600ng/cavidade. Para a realização da cirurgia os animais foram anestesiados com ketamina (150mg/kg) e xilasina (7,5mg/kg). Os animais foram pré-tratados com as seguintes drogas: MK886 (1mg/kg), aminoguanidina (30mg/kg) e dexametasona (1mg/kg). Resultados:: O recrutamento de eosinófilos para a cavidade pulmonar induzida pela OVA (2,03+0,24 e n=7) foi inibido pelo tratamento dos animais com MK886 em 54,27% (0,93+0,47 e n=3), aminoguanidina (0,09+0,05 e n=5) em 95,56% e dexametasona (0,00+0,00 e n=4) em 100%.

Estes resultados revelam que os leucotrienos estão envolvidos na migração de eosinófilos em animais imunizados, pois o MK886 é um inibidor da 5-lipoxigenase, enzima responsável pela produção dos leucotrienos. O óxido nítrico também esta envolvido no processo, uma vez que o inibidor a óxido nítrico sintase induzida (aminoguanidina) foi capaz de inibir a migração de eosinófilos para a cavidade pulmonar. Além disso, citocinas ou quimiocinas pode estar envolvida no processo, visto que a migração de eosinófilos foi inibida pela dexametasona, um glicococorticóide. Conclusões: Conclusão: Estes resultados sugerem que a migração de eosinófilos em animais imunizados é dependente da presença dos leucotrienos, óxido nítrico e citocinas e/ou quimiocinas. 36.220 MELATONINA INIBE A PRODUÇÃO DE ÓXIDO NÍTRICO EM CÉLULAS ENDOTELIAIS ESTIMULADAS COM BRADICININA. Tamura, E. K.; Markus, R. P. Fisiologia IB-USP Objetivo:

A melatonina, hormônio que marca o escuro, inibe calmodulina em concentrações compatíveis com as concentrações plasmáticas noturnas (Experientia. 49: 635, 1993). A bradicinina (BK) atuando em receptores constitutivos, estimula a enzima óxido nítrico sintase, por um mecanismo dependente de cálcio-calmodulina, levando à produção de óxido nítrico. Nosso objetivo foi avaliar se a melatonina poderia inibir a produção de óxido nítrico induzido por BK em células endoteliais cultivadas. Métodos e Resultados:

Culturas primárias de células endoteliais foram obtidas de cremaster de ratos (3,5 a 5 meses/ 350 a 450 gramas) por migração. Células de primeira passagem, aderidas em lamínulas de vidro foram carregadas com 4-amina-5-metilamina-2´,7´-difluorosceina diacetato M, 40 min.). Após selecionar campos contendo cerca de 3 a 8 células,µ(DAF-FM, 5 estas foram estimuladas de forma cumulativa com BK (1 – 100 nM), na presença ou ausência de melatonina (0,1 – 1,0 nM). A variação da concentração de óxido nítrico intracelular foi medida por microscopia confocal (Zeiss, LSM 510). A diferença entre os valores de fluorescência no basal e BK 100nM foi de 20 vezes, permitindo uma excelente definição de resposta. BK induziu um aumento dependente da concentração de óxido nítrico (pD2 = 8,38 ± 0,09, n = 3). Melatonina 0,1 nM não alterou a curva concentração-resposta de BK, enquanto a concentração de 1,0 nM bloqueou totalmente a resposta, caracterizando um antagonismo não competitivo. Conclusões:

Melatonina atuou como antagonista não competitivo em relação à produção de óxido nítrico por BK. Considerando a relevância do óxido nítrico na manutenção do tônus vascular, nossos dados mostram pela primeira vez, uma provável correlação entre os efeitos fisiológicos da BK e concentrações de melatonina encontradas no plasma no período de escuro. 36.221 MIP-2-INDUCED NEUTROPHIL MIGRATION IS DEPENDENT OF MACROPHAGES, TNF-ALPHA, LTB4 AND PAF RELEASE. Ramos, C. D. L.; Fernandes, K. S.; Freitas, A.**; Dal Secco, D.**; Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: MIP-2 is a CXC chemokine, homologous to hGRO-α, with potent chemotactic activity to neutrophils(Nφ) both in vivo and in vitro. In this study, we investigate the mechanisms involved in the murine MIP-2-induced Nφ migration to peritoneal cavities. Métodos e Resultados: We observed that i.p. injection of MIP-2 in Balb/c (18-20g) mice induced a dose- and time-dependent Nφ migration into peritoneal cavities, with peak in 30 ng/cavity at 4th h (C:0.3±0.1; MIP-2:5.8±0.7 Nφx106/cavity; n=5). The pretreatment of mice with MK886 (MK; 5-LO inhibitor; vo; 1 mg/kg), thalidomide (thal; TNFα synthesis inhibitor; sc; 50 mg/kg) or BN50730 (BN; PAF antagonist; sc; 10 mg/Kg) partially inhibited the MIP-2-induced Nφ migration (MK:1.7±0.2; thal:2.5±0.6; BN:2.9±0.17 Nφx106/cavity; n=5). Moreover, dexamethasone completely inhibited MIP-2-induced Nφ migration (sc; 0,5 mg/kg; 1.0±0.3 Nφx106/cavity). The involvement of TNFα was confirmed by

i.p. injection of MIP-2 in p55-/- mice, when MIP-2 induced a sharp Nφ migration compared to WT mice (WT:3.4±0.5; p55-/-:1.6±0.2 Nφx106/cavity; n=5). MIP-2-induced Nφ migration was seem to be dependent of resident macrophages(Mφ), since that the increase of peritoneal Mφ by thioglycolate treatment, significantly enhanced the MIP-2-induced Nφ migration (C:2.8±0.6; Tg:5.46±0.9 Nφx106/cavity; n=5). Confirming the dependence of Mφ, i.p. injection of Supernatant(SN) from MIP-2-stimulated(st) Mφ culture in naïve mice induced significant Nφ migration, with peak in 30ng/mL at 6th h (Medium:0.28±0.16; MIP-2:3.77±0.6 Nφx106/cavity; n=5). As observed in vivo, the in vitro treatment of culture with thal or MK886, significantly inhibited the Nφ migration induced by MIP-2-st Mφ SN (thal:1.6±0.4; MK:1.85±0.3 Nφx106/cavity; n=5). This effect was enhanced when the SN from MIP-2-st Mφ treated with thal or MK was injected in BN pretreated mice (TALI+BN:1.0±0.2; MK+BN:0.9±0.2 Nφx106/cavity; n=5). Strikingly, the injection of MIP-2 in peritoneal cavities depleted from mast cell with distillated water or 48/80 treatment significantly increased the MIP-2-induced Nφ accumulation (MIP:2.78±0.6; H2O:5.6±0.5; 48/80:5.8±0.6 Nφx10

6/cavity). Conclusões: The results suggest that MIP-2-induced Nφ recruitment to peritoneal cavities depends on resident Mφ, TNFα, LTB4 and PAF. Interestingly, we also observed that MIP-2-induced Nφ migration is negatively controlled by peritoneal mast. 36.222 MIP-2/CXCL2 ACTING ON CXCR2 RECEPTOR MEDIATES NEUTROPHIL MIGRATION IN IMMUNE INFLAMMATION VIA SEQUENTIAL RELEASE OF MIP-1ALPHA, TNFALPHA AND LTB4. 1Ramos, C. D. L.; 1Fernandes, K. S.; 2Silva, J. S.; Cunha, F. Q.; 1Farmacologia, FMRP-USP; 2Imunologia FMRP-USP Objetivo: Recently, we showed that ovalbumin(OVA)-induced neutrophil(Nφ) migration to peritoneum in immunized mice depends on the sequential release of MIP-1α, TNFα and LTB4 (J Leukoc Biol; 2005; in press). In this present study, we investigated the involvement of CXC chemokine MIP-2 in Nφ migration induced by OVA challenge in immunized mice. Métodos e Resultados: Firstly, we observed an increased mRNA expression for MIP-2, KC and CXCR2, which was correlated to significant amounts of MIP-2 (C: 0.2±0.1; OVA: 1.9±0.3 ng/mL; n=3) and KC (C: 0.4±0.1; OVA: 1.3±0.2 ng/mL; n=3) proteins detected in the peritoneal exudates from OVA-challenged immunized mice (Balb/c; 18-20g). The pretreatment of mice with repertaxin (a novel CXCR2 antagonist; 1.9±0.5 Nφx106/cavity; n=5) or the use of an antibody against MIP-2 (2.3±0.7 Nφx106/cavity; n=5) significantly inhibited the OVA-induced Nφ migration (5.3±0.2 Nφx106/cavity; n=5). The KC neutralization was ineffective in inhibiting Nφ migration. Indeed, neutrophils migrate in response to MIP-2 by a mechanism dependent of TNFα and LTB4 production, once the pretreatment of mice with thalidomide (thal; sc; 50 mg/Kg) or MK886 (MK, vo; 1 mg/Kg) significantly inhibited the Nφ migration induced by this chemokine (C: 0.3±0.1, MIP-2: 5.8±0.7; thal: 2.5±0.6; MK: 1.7±0.2; Nφx106/cavity; n=5). Since it was previously described that the release of TNFα and LTB4 in OVA-induced Nφ migration is dependent of MIP-1α production, we tested the hypothesis that MIP-2 could also induce MIP-1α production. Thus, we observed that MIP-2-induced Nφ migration was abrogated in MIP-1α-/- mice (WT: 2.9±0.2; MIP-1α-/- 0.4±0.05 Nφx106/cavity; n=5). Confirming this result, it was also blocked by the use of anti-MIP-1α (1.4±0.3 Nφx106/cavity; n=5). In addition, MIP-1α was detected in the peritoneal exudates from MIP-2-injected mice (C: 14.05±1.6; MIP-2: 45.7±10.4 ng/mL; n=3). Conclusões: In summary, we showed that MIP-2 is pivotal in OVA-induced Nφ migration, which binds to CXCR2 inducing sequential release of MIP-1α, TNFα and LTB4. These results suggest that CXC chemokines can be acting through CC chemokine release and that the developing of specific CXCR2 antagonists could have potential therapeutic to Nφ-mediated immune inflammatory diseases. 36.223

NEUTROPHIL MIGRATION INDUCED BY KC IS DEPENDENT OF MACROPHAGES, TNFA, LTB4 AND IL-1 RELEASE. Freitas A.; Ramos, C. D. L.**; Dal Secco, D.**; Fernandes, K. S. S.; Cunha, F. Q. Farmacologia FMRP-USP Objetivo: We investigated the mechanisms involved in KC (a CXC chemokine)-induced neutrophil (Nφ) migration to peritoneal cavity Métodos e Resultados: Adult Balb/c, C57BL-6 or p55 deficient mice (p55-/-) weighing 18-20g (N=5) were used in this study. Administration of KC i.p. in Balb/c mice induced a dose- and time-dependent Nφ migration into peritoneal cavity, with peak in 3 ng/cavity at 4oh (PBS:1.2±0.3; KC:6.4±0.6 Nφx106/cavity). The pretreatment with MK886 (5-LO inhibitor; v.o.; 1 mg/kg), IL-1ra (IL-1 receptor antagonist;i.v.;10mg/kg) or thalidomide (TNFα synthesis inhibitor; s.c. ; 50 mg/kg), partially inhibited KC-induced Nφ migration (KC:4.8±0.3; MK886:1.8±0.08; IL-1ra:1.3±0.17; thalidomide:2.7±0.16 Nφx106/cavity), but it was completely inhibited by dexamethasone (glucoccorticoid; sc; 0,5 mg/kg; 0.25±0.08 Nφx106/cavity). Administration of KC i.p. in p55-/- mice promoted a decrease of Nφ migration when compared with WT mice, confirming the involvement of TNFα (WT:PBS:0.046±0.027; WT:KC:3.42±0.47; p55-/-:PBS: 0.16±0.07; p55-/-:KC:1.57±0.23 Nφx106/cavity). KC-induced Nφ migration was seen to be dependent of residential macrophages (M)φ, since the increase of peritoneal Mφ induced by tioglicolate significantly increased KC-induced Nφ migration (KC:2.9±0.5; Tg-KC:4.8±0.9 Nφx106/cavity). Confirming the dependence of Mφ, we observed that the i.p. administration of KC-stimulated macrophage supernatant in naïve mice induced significant Nφ migration, with peak in 10ng/mL at 6oh (Medium: 2.3±0.5; KC:8.4±0.9 Nφx106/cavity). Interestingly, the injection of KC into the peritoneal cavity depleted from mast cell with distillated water or 48/80 treatment significantly increased the Nφ accumulation (KC:2.9±0.5; H2O: 5.4±0.4; 48/80:6.4±0.8 Nφx106/cavity) Conclusões: The results suggest that KC induces Nφ recruitment to the peritoneal cavity dependent of resident M,φ TNFα, LTB4 and IL-1 production. On the other hand, we observed that KC-induced Nφ migration is down-regulated by peritoneal mast cell. 36.224 O AUMENTO DE CÁLCIO CITOPLASMÁTICO INDUZIDO POR TAPSIGARGINA, ATIVA MAXI-K+ EM AORTA DE RATOS, TORNANDO-A RESPONSIVA AOS AGONISTAS DABK E LPS. Farias Jr., N. C.; Feres, T.; Paiva, A. C. M.; Paiva, T. B. Biofísica, UNIFESP Objetivo: Em contraste com a aorta de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), a dos ratos normotensos (NWR) não responde ao des-Arg9BK (DABK), um agonista do receptor B1 de bradicinina nem ao lipopolissacarídeo de E. coli (LPS), devido os canais de potássio dependentes de cálcio de alta condutância (Maxi-K+) estarem inoperantes nesses animais. Decidimos verificar se o aumento de Ca+2 citoplasmático induzido por tapsigargina (TAP), bloqueador da Ca+2/ATPase do retículo sarcoplasmático, seria capaz de ativar os Maxi-K+ presentes na membrana da célula muscular lisa da aorta, tornando-a responsiva àqueles agonistas. Métodos e Resultados: Anéis de aorta de NWR machos, pesando entre 250 e 350g foram usados para medidas eletrofisiológicas de potencial de membrana. Nossos resultados mostraram que esta preparação em presença de TAP apresentou um potencial de membrana hiperpolarizado (-68,95 mV ±1,6; N=5), semelhante ao potencial de repouso de anéis de aorta de SHR (-70,04 mV ±0,9; N=5). Após a adição de TAP, tanto o DABK quanto o LPS aumentaram as respostas hiperpolarizantes, (-89,03 mV ±1,3; N=5) e (-87,28 mV ±0,5; N=5), respectivamente. Estas respostas foram abolidas tanto pelo antagonista de receptor B1 de bradicinina Lys-Leu8DABK, (-51,67 mV ±0,9; N=5) e (-53,56 mV ±1,8; N=5) em presença de DABK e LPS respectivamente, quanto pelo bloqueador seletivo de Maxi-K+, iberiotoxina (-51,11 mV ±0,8; N=5) em presença de DABK e (-51,87 mV ±0,6; N=5) em presença de LPS. Conclusões:

Nossos resultados indicam que o aumento de cálcio citoplasmático é responsável por ativar os Maxi-K+, mediadores das respostas hiperpolarizantes induzidas por DABK e LPS em aorta de ratos normotensos. 36.225 PAPEL DE INIBIDORES DE ÓXIDO NÍTRICO NA ARTRITE INDUZIDA POR ZIMOZAN NA ARTICULAÇÃO TEMPOROMANDIBULAR DE RATOS. Silva, L. R.; Leitão, A. K. A*; Farrapo, A. R*; Chaves, H. V.**; Ribeiro, R. A; Brito, G. A. C. Fisiologia e Farmacologia UFC Objetivo:

Montar modelo experimental de artrite na articulação temporomandibular(ATM) e estudar a participação do óxido nítrico(NO) neste modelo. Métodos e Resultados:

Métodos:Foram utilizados ratos Wistar fêmeas(170-200g) nos quais se injetou 40 microlitros de Zimozan(Zy:0,25, 0,5, 1 ou 2mg) na ATM esquerda dos animais para indução de artrite. Esses animais foram sacrificados nos tempos de 3, 6, 24 e 48h. Inibidores da síntese de óxido nítrico L-NAME(10, 30 e 100mg/kg i.p.) e 1400W(0,5 e 1mg/kg i.p.) foram injetados 1h antes da indução da artrite. Parâmetros de contagem celular do líquido sinovial, dosagem de nitrito pelo método de Griess e análise histopatológica foram avaliados . Observamos que Zy(2mg) induziu aumento significativo do número de células na contagem celular(p<0,0001) (Zy2mg:1939x103 ± 331,257,n=10; salina:20,445x103 ± 4,975,n=11) e aumento da dosagem de nitrito(p<0,05) (Zy2mg:56,75 ± 16,755,n=4; salina:8,375 ± 6,669,n=4) no líquido sinovial na 6ªh. A análise histopatológica mostrou que Zy(2mg) induziu espessamento da membrana sinovial e intenso infiltrado inflamatório com predominância de neutrófilos. Tanto L-NAME 100mg/kg(p<0,05) (Zy2mg:3728,572x103 ± 527,616,n=7; Zy2mg + L-NAME 100mg/kg:1699x103 ± 384,552,n=10) quanto 1400W 1mg/kg(p<0,0001) (Zy2mg:2523x103 ± 412,637,n=5; Zy2mg + 1400W 1mg/kg:35x103 ± 13,874,n=5) foram capazes de reverter o aumento do número de células no líquido sinovial da ATM, assim como as alterações histopatológicas. Conclusões:

Esses resultados sugerem a participação do NO na artrite induzida por Zy na ATM. 36.226 PERFIL CLÍNICO E LABORATORIAL DO PACIENTE COM SEPSE EM UM HOSPITAL UNIVERSITÁRIO.PERFIL CLÍNICO E LABORATORIAL DO PACIENTE COM SEPSE EM UM HOSPITAL UNIVERSITÁRIO. 1Oliveira, A. P. V.; 2Murta, B. M. T.; 1Farmacologia FMT-AM; 2Ciências Biológicas FMTM Objetivo:

Conhecer as características clínicas e laboratoriais do paciente com sepse no Hospital Escola (HE)/FMTM. Métodos e Resultados:

Foram analisadas as fichas de notificação de infecção hospitalar e prontuários de 83 pacientes que desenvolveram sepse no HE/FMTM, entre 01/01 a 09/04. Foram 47 (56,6%) homens e 36 (43,4%) mulheres com idade de 51,5 ± 2,0 anos. A mortalidade foi de 72,3%, sendo 29 (48,3%) homens e 31 (51,7%) mulheres. Do grupo sobrevivente, 18 (78,3%) eram homens e 5 (21,7%) mulheres (p < 0,05, teste exato de Fisher). O cateter venoso central foi utilizado em 57 (68,7%) pacientes e não foi associado à mortalidade. Doenças de base como AIDS, diabetes mellitus e/ou câncer foram descritas em 38 (45,8%) pacientes. Em 27 (32,5%) casos não foram descritas doenças e 18 (21,7%) apresentavam outras doenças que não as relatadas acima. Não houve diferença significativa na frequência dos tipos de doenças de base entre homens e mulheres. O sítio infeccioso não foi detectado em 31 (37,4%) casos e nos demais pacientes o sítio broncopulmonar foi o mais comum, identificado isolado ou associado a outos sítios em 32 (38,6%) casos, seguido de infecção urinária (8,4%), de pele (6%), intraabdominal (4,8%) ou outros sítios (4,8%). Considerando a origem da sepse, a sobrevida foi maior em pacientes cujo sítio infeccioso não foi detectado (41,9%) seguido de infecção cutânea (40%), enquanto que menos de 20% dos pacientes com infecção broncopulmonar, urinária ou intraabdominal sobreviveram. O leucograma no diagnóstico mostrou leucocitose em 39 (47%) casos, leucopenia em 8 (9,6%) e estava normal em 34 (41%) pacientes. A anãlise do leucograma em tempo mais próximo do restabelecimento ou

óbito mostrou que o leucograma normal foi mais frequente no grupo sobrevivente e a leucocitose no grupo não sobrevivente ( p < 0,05, teste exato de Fisher). Conclusões:

A sepse apresenta elevada mortalidade principalmente nas mulheres, o que não foi associado a doenças de base descritas. A leucocitose na evolução da sepse foi associada ao pior prognóstico. O conhecimento do perfil do paciente com sepse pode direcionar medidas visando melhoria na conduta diagnóstica e terapêutica da doença. 36.227 QUIMIOTERAPIA REDUZ FUNÇÃO QUIMIOTÁTICA DE NEUTRÓFILOS EM PACIENTES COM CÂNCER DE MAMA. 1Mendonça, M. A. O.; 2Cunha, F. Q.; 3Murta, E. F. C.; 4Murta, B. M. T.; 1Patologia Clínica, FMTM; 2Farmacologia FMRP-USP; 3Ginecologia e Obstetrícia FMTM; Ciências Biológicas, FMTM Objetivo:

Avaliar o efeito da quimioterapia neoadjuvante (QT) sobre a função quimiotática de neutrófilos em pacientes com câncer de mama. Métodos e Resultados:

Neutrófilos purificados (1 x 106 mL) 2,53 anos)±do sangue venoso de pacientes com câncer de mama (n=23, idade 53,25 2,24 anos) foram avaliados±e voluntárias sadias (controles, n=25, idade 48,21 em microcâmara de quimiotaxia. Nos dois grupos houve aumento significativo da migração de neutrófilos aos estímulos (10-7 M) fMLP, LTB4 e IL-8 comparado à migração aleatória (RPMI) e sem diferenças entre os grupos. Nas pacientes submetidas à QT (n=14), a função quimiotática do neutrófilo foi avaliada ao final do 3º ou 4º ciclo e após recuperação da aplasia medular. Houve redução do número de neutrófilos emigrados (mediana; mín-máx) ao fMLP (3,2; 0,0 - 21,6) comparado à resposta antes do tratamento (11,2; 3,0 – 71,1). Destas pacientes, 9 (64,3%) desenvolveram infecção bacteriana (pneumonia e/ou urinária) documentada e foram analisadas separadamente. Neste grupo houve significativa redução da migração de neutrófilos ao fMLP (4,5; 1,9 – 17,8) e LTB4 (5,5; 2,4 – 9,5) no tempo pós-QT comparado ao tempo pré-QT (42,4; 9,4 – 87,0; 24,7; 15,2 – 33,6, respectivamente). Em seguida, neutrófilos obtidos de controles foram incubados (30 min, 37ºC, 5% CO2) com soro normal ou soro das pacientes (0,5%, 5% e 50%) que apresentaram infecções. A incubação com soro das pacientes, reduziu, dose-dependente, a quimiotaxia de neutrófilos em resposta ao fMLP, LTB4 ou IL-8 0,001 comparado aos neutrófilos incubados com soro normal). Não foram<(p encontradas diferenças nos níveis séricos de metabólitos de óxido nítrico (ELISA) entre asα(reação de Griess) ou das citocinas IL-6, IL-8, IL-10 e TNF- pacientes nos tempos pré e pós-QT. Conclusões:

Mulheres com câncer de mama apresentaram função quimiotática de neutrófilos preservada ao diagnóstico, porém, o tratamento quimioterápico reduziu a migração das células aos estímulos quimiotáticos, favorecendo a incidência de infecções. Fatores circulantes estão envolvidos no mecanismo de inibição da quimiotaxia de neutrófilos. 36.228 ROLE OF CYCLOOXYGENASES ON EDEMA-FORMING ACTIVITY INDUCED BY BOTHROPIC VENOMS. 1Olivo, R. A.**; 1Moreira, M.**; 1Teixeira, C. F.; 2Wallace, J. L.; 2Zamuner, S. R.; 1Farmacologia Instituto Butantan; 2 Pharmacology and Experimental Therapeutics University of Calgary Objetivo: The venoms of Bothrops asper (BaV) and Bothrops jararaca (BjV), cause pronounced oedema in the victims through poorly understood mechanisms. In the present study, we examined the possible role of cyclooxygenases (COX) in the genesis of mouse paw oedema caused by BaV and BjV injections. Métodos e Resultados: Swiss male mice were injected i.p. with BaV or BjV (each, 250 µg/kg) or saline (control) for evaluation of alterations in vascular permeability (VP) by extravasation of Evans blue dye. The edema was measured by plethismography after subplantar injection of BaV (2.5 µg/paw) or BjV (0.75 µg/paw). Pharmacological mediation of VP and edema was studied by pretreatment of

animals with selected anti-inflammatory drugs. Paw tissue was examined for expression of COX-1 and COX-2 by Western blot and PGE2 synthesis by ELISA. Both venoms induced significantly increment in VP (BjV 5.5 ± 1.2 and BaV 4.9 ± 0.7 vs. 1.5 ± 0.3 µg/mL in control; n=7) and paw volume (60% increase for BjV and 65% increase for BaV, n=5). Treatment with indomethacin (2 mg/kg, i.v), rofecoxib (3 mg/kg, v.o) and dexamethasone (2 mg/kg, i.v) significantly (P<0.05) reduced BaV- and BjV-induced increase in VP and edema. Treatment with SC-560 (30 mg/kg, p.o) significantly reduced the edema formation induced by BjV but had no effect on edema induced by BaV. Both venoms induced significant increments in the levels of PGE2 (BaV=165.6 ± 8.7 and BjV=107.7 ± 9.8 vs. 46.6 ± 8.7 pg/mL in control; n=5). BaV and BjV significantly increased the expression of COX-1 (206% and 172%) and COX-2 (91% and 69%), respectively, when compared with controls. Conclusões: These results demonstrate that injection of BaV and BjV results in a rapid increase in VP and edema that are, at least partially, mediated by arachidonic acid metabolites formed by cyclooxygenases 2 36.229 ROLE OF ENDOTHELIN RECEPTORS ON PRURITIC BEHAVIOR IN MICE. 1Trentin, P. G.; Fernandes, M.**; Rae, G. A. Farmacologia UFSC Objetivo:

Endothelin-1 (ET-1) and the mast cell degranulator compound 48/80 cause scratching bouts (i.e. pruritus) when injected to the dorsum (Trentin et al., 36o Cong. Bras. Farmacol. Ter. Exp., P199, 2004). The aim of this study was to characterize the effects of selective blockade of either ETA (BQ-123) or ETB receptors (BQ-788 and A-192621) on pruritic behavior evoked by these stimuli. Métodos e Resultados:

BQ-123, BQ-788 (10 nmol/site) or vehicle was co-administered with ET-1 (10 pmol/site) or compound 48/80 (10 ug/site) into the dorsum of male Swiss mice (30- 35 g). A-192621 (20 mg/kg) or vehicle was injected intraperiatoneally 1 h before intradermal injection of ET-1 (10 pmol/site) or compound 48/80 (10 ug/site). Scratching bouts were registered during the first 40 min following ET-1, compound 48/80 or PBS injection. Results: BQ-123 reduced scratching bouts evoked by ET-1 (PBS + PBS = 6,67 ± 2,20; ET-1 + PBS = 33,0 ± 3,57; ET-1 + BQ-123 = 10,0 ± 1,83; 87% inhibition; n = 6-8), but not by compound 48/80 (P>0.05, ANOVA). However, local BQ-788 Injection evoked scratching per se (51,17 ± 8,3 bouts). Thus, we investigated the effect of systemic injection of the non-peptidergic ETB receptor antagonist A-192621, which significantly reduced scratching bouts evoked by ET-1 by 64% (vehicle + PBS = 6,78 ± 1,67; vehicle + ET-1 = 45,88 ± 5,46; A-192621 + ET-1 = 21,0 ± 4,15), but not those triggered by compound 48/80. Conclusões:

Thus, both endothelin ETA and ETB receptors are involved in ET-1- evoked scratching bouts in the mouse. In the mouse hind paw, mast cell-derived endothelins appear to be implicated in the nociceptive effect of compound 48/80. Nonetheless, they do not seem to mediate the pruritic action of this agent in the dorsum. 36.230 THE EFFECT OF IBUPROFEN IN THE CHANGE IN BODY TEMPERATURE INDUCED BY CECAL LIGATION AND PUNCTURE (CLP) IN RATS 1Figueiredo, M. J.; 1Melo, M. C. C.; 1Vercesi, J. A.; 2Torres-Dueñas, D.**; 2Cunha, F. Q.; 1Souza, G. E. P.; 1Física e Quimica FCFRP-USP; 2Farmacologia FMRP-USP Objetivo: Sepsis is the systemic response to severe infection1 in which the fever is the most frequent manifestation2. This study investigated changes in body temperature and survival induced by CLP-sepsis and the effect of ibuprofen on these events. Métodos e Resultados: Body temperature (bT) was measured by biotelemetry in male Wistar rats (200-250 g), each 30 min, by 48 h, after surgical procedure (sham or CLP) and the survival was monitored by 7 days. Rats received ibuprofen (10 mg/kg) or saline, 30 min or 1h before or 1h after CLP. After puncture of antimesenteric cecal surface (four times with a 16-gauge needle) the body temperature increased

from 37.5±0.08 to 39.0±0.3 ºC, 6th h, P< 0.001 and the rate of survival was 42% (48h). Ibuprofen given 1 h thereafter, but not 30 min or 1h before, reduced the increase in body temperature to CLP (38.6±0.43 to 37.7±0.06 ºC, 6th h, P< 0.001). In addition, only given 1h prior ibuprofen reduced to 20% (20h) the survival when compared to Sal- CLP group. Conclusões: These preliminary data show that CLP as performed here constitute a model to study fever by infection and is sensible to pos-treatment with ibuprofen, a non-selective COX-1 and COX-2 inhibitor. However, the benefits or damage of fever blockage in this experimental model (CLP) needs to better investigate. 1 Balk, Chest, 235:243, 1997. 2 Young, Arch Intern Med, 1895: 1906, 1987. 36.231 EFFECTS OF INOS INHIBITION ON NNOS EXPRESSION IN INFLAMMATORY AND BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS IN GUINEA PIGS WITH CHRONIC LUNG INFLAMMATION. 1Yano, L.; 1Prado, C. M.; 1Miyamoto, L.*; 1Leick-Maldonado, E. A.; 2Martins, M. A.; 2Tiberio, I. F. L. C. 1Clínica Geral FMUSP; 2Clínica Médica - FMUSP, FMUSP Objetivo:

We previously showed that nNOS expression in lymphomononuclear (LMN), polymorphonuclear (PMN) and bronchial epithelial (BE) cells is up-regulated by chronic lung inflammation in guinea pigs (GP). We hypothesise that iNOS inhibition modulates nNOS expression in these cells. Métodos e Resultados:

GP received inhalations of ovalbumin (OA) or normal saline (NS) 2x/wk/4wks. iNOS inhibition was done by treatment with 1400W ip for 4 days beginning in the 7th inhalation (OA-W and NS-W). Afterwards, GP were anesthetized, mechanically ventilated and challenged with OA or NS. We evaluated: total LMN, nNOS+LMN, total PMN, nNOS+PMN cells around distal airways. The % of nNOS expression in BE cells (nNOS+BE) was obtained using the Image Analysis as a ratio between nNOS+ epithelial area and total epithelial area. OA showed greater number of LMN, nNOS+ LMN, PMN, nNOS+ PMN and nNOS+BE compared to NS groups (p<0.05). In OA-animals, W reduced total LMN and PMN (P<0.001). The % of nNOS+BE was reduced by W in OA-animals (p<0.001). W reduced only the population of PMN and LMN cells that did not express nNOS (p<0.05). Conclusões:

The iNOS inhibition downregulates nNOS expression on BE. Considering nNOS expression in inflammatory cells, there are different subpopulations of PMN and LMN cells. We speculate that the reduction of nNOS negative inflammatory cells by iNOS blockage may be related to an anti-apoptotic effect of iNOS-derived NO. 36.232 MELATONINA E COMPOSTOS INDÓLICOS PREVINEM A PRODUÇÃO DE ÁCIDO HIPOCLOROSO POR LEUCÓCITOS ATIVADOS. Paino, I. M. M.; Brunetti, I. L.; Fonseca, L. M. D.; 4 Ximenes, V. F. Análises Clínicas FCF-UNESP-Araraquara Objetivo:

Medir a eficiência dos seguintes compostos indólicos, endógenos ou não, como supressores da produção de ácido hipocloroso (HOCl) por leucócitos de ratos ativados: melatonina, indol, 2-metil-indol, 3-metil-indol, 2,3 dimetil-indol, 2,5 dimetil-indol, 2-fenil-indol, 5-metoxi-2-metil-indol, triptofano, e ác. 3-indolacético. Métodos e Resultados:

Leucócitos de Rattus albinus norvergicus (2 x 106 células/mL) foram isolados, e incubados à 37C em tampão PBS-D, suplementado de glicose 1 mg/mL, taurina 5 mM e os indóis, nas concentrações de 10 e 50 µM. As células foram estimuladas pela adição de PMA (acetato de forbol miristato), 0,1 µM. Após 30 min., a reação foi finalizada pela adição de catalase 20 µg/mL. A liberação de HOCl foi medida pela produção de taurina-cloramina acumulada, a qual foi medida pela oxidação de TMB (5,5 tetrametilbenzidina) em espectrofotômetro à 655 nm. Para determinar se a inibição provocada pelos indóis, na produção de HOCl, é ligada à propriedade antioxidante, o ácido ascórbico foi comparado. Análise estatística: Teste t de Student's. A produção de HOCl pelo

controle, na ausência dos indóis, foi de 38 µM, e desta forma, calculou-se a % de inibição. Adicionando-e os indóis, a % de inibição foi, para 10 e 50 µM, respectivamente: melatonina 45 ±4 e 72 ± 3; indol 59 ± 5 e 82 ± 3; 2-metil-indol 55 ± 2 e 77 ± 6; 3-metil-indol 48 ± 3 e 73 ± 4; 2,3 dimetil-indol 62 ± 2 e 75 ± 3; 2,5 dimetil-indol 53 ± 7 e 77 ± 6; 2-fenil-indol 66 ± 8 e 79 ± 7; 5-metoxi-2-metil-indol 53 ± 2 e 72 ± 8; triptofano: 25 ± 4 e 41 ± 3; ác. 3-indolacético 33 ± 4 e 55 ± 7; ácido ascórbico: 5 ± 2 e 13 ± 4; (p<0,05). Conclusões: Estes resultados demonstram que os derivados indólicos são inibidores efetivos da geração de ácido hipocloroso por leucócitos estimulados. Este efeito não está ligado à sua ação como moléculas antioxidantes, mas sim à capacidade das mesmas em inibir a atividade clorinante da enzima mieloperoxidase dos leucócitos.