wiwi anggraeni_universitas brawijaya_laporan akhir
DESCRIPTION
peternakanTRANSCRIPT
i
LAPORAN AKHIR
PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA
JUDUL PROGRAM
LG-SIMON (Leaky Gut Syndrome Immunotherapy Intravenous) :
Pemanfaatan Immunoglobulin (IgG) pada Kolostrum Sapi untuk Terapi
Imun Sindrom Kebocoran Usus Secara Intravenous
BIDANG KEGIATAN
PKM PENELITIAN
Diusulkan oleh :
Wiwi Anggraeni 135050101111192 2013
Yuli Fitria Sari 135050101111197 2013
Triana Fakuwita 135100200111009 2013
Miftahul Munir 125050100111125 2012
Ashri Almiahsari 135070501111024 2013
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2015
ii
iii
LG-SIMON (Leaky Gut Syndrome Immunotherapy Intravenous) :
Pemanfaatan Immunoglobulin (IgG) pada Kolostrum Sapi untuk Terapi
Imun Sindrom Kebocoran Usus Secara Intravenous
Wiwi Anggraeni,Yuli Fitria S,Triana Fakuwita, Miftahul Munir,Ashri Almiahsari
Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya
Fakultas Teknologi Pangan Universitas Brawijaya
Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya
Abstrak
Leaky Gut Syndrome merupakan suatu kondisi peningkatan permeabilitas usus
dimana jaringan dalam saluran pencernaan rusak yang memungkinkan protein
seperti gluten, bakteri jahat, dan partikel yang tidak tercerna masuk kedalam aliran
darah. Meningkatnya permeabilitas mukosa intestin merupakan salah satu kunci
dari berbagai teori penyebab Autism Spectrum Disorder (ASD). Immunoglobulin
yang terdapat dalam kolostrum sapi merupakan pilihan utama untuk mengurangi
gejala leaky gut. Banyak studi yang menjelaskan bahwa kolostrum sapi
mengandung immunoglobulin yang lebih tinggi dibanding ASI.Banyak studi
yang menjelaskan bahwa probiotik merupakan salah satu pilihan untuk
memperbaiki sistem pencernaan yang rusak. Dengan membuat kolostrum sebagai
kefir akan menambah kualitas dari kolostrum tersebut. Penelitian ini didesain
untuk mengetahui pengaruh pemberian probiotik kefir kolostrum sebagai terapi
Leaky Gut Syndrome pada penderita ASD sehingga mencegah peningkatan
permeabilitas small intestine dan stomach serta mengembalikan flora normal usus.
Penelitian ini merupakan penelitian experimental laboratorik. Penelitian ini
menggunakan 6 tikus betina Rattus norvegitus strain wistar yang dibuntingkan.
Tikus dibagi menjadi 2 kelompok dimana terdapat kontrol negatif dan kontrol
positif (pemberiian VPA). Setelah tikus melahirkan dan anaknya berusia 2 bulan,
anak tikus dibagi menjadi 3 kelompok dengan perlakuan kontrol negatif, kontrol
positif dan terapi kefir kolostrum.Setelah terapi kefir tikus ditest menggunakan
test fisik dan kemudian tikus dibedah lalu diambil organ stomach dan small
intestinnya untuk pengukuran permeabilitasnya dengan metode spesimen jaringan
stomach dan small intestine untuk pembuatan preparat histopatologi dengan
pengecatan eosis dan hematoxlyn untuk pengecekan ketebalan mukosa dan
muscle organ. Analisa statistik menunjukkan bahwa pemberian probiotik kefir
kolostrum pada kelompok perlakuan secara signifikan menunjukkan bahwa
terdapat pengaruh terhadap berat badan dan skor berenagnya (p,0,05). Analisa
statistik juga menunjukkan bahwa pemberian probiotik kefir kolostrum pada
kelompok perlakuan secara signifikan dapat meningkatkan ketebalan dari muscle
stomach(p<0,05), sedangkan tidak memberikan perbedann terhadap mukosa
stomach (p>0,05) dan secara signifikan dapat meningkatkan ketebalan mukosa
dan muscle ileum serta duodenum (p,0,05). Pemberian kefir kolostrum belum
dapat meningkatkan ketebalan jejenum namun secara significan memberikan
perbedaan terhadap ketebalan mukosaa dan muscle jejenum (p,0,05). Kesimpulan
penelitian ini adalah bahwa pemberian kefir kolostrum berpotensi dalam
mengurangi gejala Leaky Gut Syndrome pada ASD melalui peningkatan
ketebalan mukosa dan muscle stomah dan small intestine.
Kata Kunci : Leaky Gut, Kolostrum, Probiotik, Permeabilitas
iv
DAFTAR ISI
Halaman Sampul ................................................................................................................ i
Halaman Pengesahan .......................................................................................................... ii
Abstrak ............................................................................................................................... iii
Daftar Isi ............................................................................................................................ iv
Daftar Gambar ..................................................................................................................... v
Daftar Tabel ....................................................................................................................... v
Daftar Lampiran .................................................................................................................. v
BAB 1 PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
1.1 Latar Belakang Masalah ...................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................................ 1
1.3 Tujuan ................................................................................................................ 1
1.4 Luaran ................................................................................................................ 1
1.5 Manfaat .............................................................................................................. 1
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................... 2
2.1 Leaky Gut Syndrome dan ASD ........................................................................... 2
2.2 Antibiotik dan Probiotik ...................................................................................... 2
2.3 Kolostrum ......................................................................................................... 2
BAB 3 METODE PENELITIAN........................................................................................ 3
3.1 Rancangan Penelitian........................................................................................... 3
3.2 Waktu dan Tempat Pelaksanaan .......................................................................... 3
3.3 Variabel yang Diamati ......................................................................................... 4
3.4 Objek dan Sampel Penelitian ............................................................................... 4
3.5 Metode Penelitian ................................................................................................ 4
3.6 Analisis Data ....................................................................................................... 5
BAB 4 HASIL YANG DICAPAI dan POTENSI KHUSUS .............................................. 5
4.1 Hasil dan Pembahasan ......................................................................................... 5
v
4.1.1 Kadar IgG pada Kefir Kolostrum ..................................................................... 6
4.1.2 Hasil Uji berat badan, olfactorius offspring dan berenang ............................... 7
4.1.3 Hasil Uji Ketebalan Mukosa dan Muscle ......................................................... 8
4.2 Potensi Khusus .................................................................................................... 10
BAB 5 PENUTUP .............................................................................................................. 10
5.1 Kesimpulan ......................................................................................................... 10
5.2 Saran ................................................................................................................... 10
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................................... 10
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Rancangan Penelitian .................................................................................... 3
Gambar 2. Diagram Hasil Uji IgG ............................................................................... 6
Gambar 3. Diagram Tes Berat Badan ................................................................................. 7
Gambar 4. Diagram Skor Berenang ...................................................................... 8
Gambar 5. Diagram Ketebalan Muscle Organ .................................................................... 9
Gambar 6. Diagram Ketebalan Mukosa Organ ................................................................... 9
Gambar 7. Diadram Prosentase .......................................................................................... 12
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Data Tes Berat Badan, Olfactorius dan Berenang ................................................ 5
Tabel 2. Data Tes Ketebalan Mukosa dan Muscle Organ ................................................... 6
Tabel 3. Indeks Keberhasilan Program ............................................................................... 11
Tabel 4. Rincian Biaya .................................................................................................. 12
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Indeks Keberhasilan Program ......................................................................... 11
Lampiran 2. Rincian Biaya ................................................................................................. 12
Lampiran 3. Data Pendukung Kegiatan ........................................................................... 14
1
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah
Sekitar 70% penduduk diperkirakan menderita Leaky Gut Syndrome /
Sindrom Kebocoran Usus data dari International Center for Nutritional Research
(http://www.icnr,org). Penelitian menunjukkan bahwa Leaky Gut Syndrome
mempengaruhi jutaan orang di seluruh dunia. LGS adalah suatu kondisi lemah
kronis yang sering tidak terdiagnosis oleh profesional medis. Banyak yang tidak
mengakui tentang kondisi ini. Akibatnya, banyak orang tidak mengetahui,
sehingga mereka saat ini berurusan dengan gejala yang disebabkan oleh usus
bocor yang telah berkembang dari waktu ke waktu.
LGS adalah suatu kondisi peningkatan permeabilitas usus dimana jaringan
dalam saluran pencernaan rusak yang memungkinkan protein seperti gluten,
bakteri jahat, dan partikel yang tidak tercerna masuk kedalam aliran darah.
Meningkatnya permeabilitas mukosa intestin merupakan salah satu kunci dari
berbagai teori penyebab Autism Spectrum Disorder (ASD). Sindrom kebocoran
usus tidak dapat diatasi secara medik konvensional dengan penggunaan antibiotik
atau obat-obatan kimia karena akan semakin membuat kebocoran usus bertambah
parah.
Kolostrum sapi mengandung IgG hingga 80% atau 40 kali dari jumlah IgG
kolostrum manusia. Kolostrum meminimalisir jumlah bakteri pathogen di dalam
usus karena kandungan immunoglobulin, lactoferrin dan proline rich polypeptides
(PRP)-nya mampu menghambat pertumbuhan koloni bakteri pathogen sebelum
mereka merusak fungsi epithel usus dan masuk ke dalam tubuh lewat lapisan
terluar usus tersebut . Nutrisi dan Epithelial Growth Factor yang terdapat di dalam
kolostrum akan memacu pertumbuhan sel epithel usus sehingga mempercepat
perbaikan lapisan usus yang telah rusak untuk berfungsi kembali secara normal.
Sehingga kolostrum sapi merupakan pilihan utama untuk mengurangi gejala
sindrom kebocoran usus.
1.2 Rumusan Masalah
1. Bagaimana cara mengatasi Leaky Gut Syndrome yang evektif?
2. Bagaimana pemanfaatan kolostrum sapi agar tepat guna?
1.3 Tujuan
Tujuan yang ingin dicapai dalam penulisan ini adalah untuk mengatasi
penyakit Leaky Gut Syndrome dengan memanfaatkan kolostrum sapi yang
memiliki banyak manfaat namun belum optimal pemanfaatannya di masyarakat.
1.4 Luaran
Membuat sebuah probiotik dalam bentuk kefir kolostrum untuk mengatasi
LGS, artikel ilmiah penelitian, hak paten dan dipublikasi dalam seminar.
1.5 Manfaat
Memberikan solusi alternative untuk mengatasi Leaky Gut Syndrome bagi
industri farmasi secara global dan memberikan sumbangan inovatif bagi
perkembangan ilmu Teknologi Hasil Ternak, terutama penggunaan kolostrum sapi
2
untuk kesehatan.
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Leaky Gut Syndrome dan ASD
Leaky gut adalah suatu kondisi peningkatan permeabilitas usus dimana
jaringan dalam saluran pencernaan rusak yang memungkinkan protein seperti
gluten, bakteri jahat, dan partikel yang tidak tercerna masuk kedalam aliran
darah (Fasano, 2012). Kelainan yang dapat ditemukan pada mukosa usus anak
dengan ASD yaitu timbulnya lubang-lubang kecil pada mukosa usus dan
meningkatnya permeabilitas usus yang dikenal sebagai leaky gut
(Ratnawati,2003). Umumnya, bahkan hampir semua anak dengan ASD
mengalami gangguan fungsi ( malfunction ) pada sistem imunnya. Gangguan
fungsi ini dapat berupa : salah mengidentifikasi sel pada dirinya sendiri sebagai
sel asing, sehingga akan menyerang terhadap sel dirinya sendiri. Hal ini
menyebabkan terjadinya reaksi radang pada saluran gastrointestinal, dan
selanjutnya akan menyebabkan berbagai gangguan gastrointestinal yang sering
didapatkan pada anak dengan ASD (Camilleri,2012)
2.2 Antibiotik dan Probiotik
Pemberian antibiotik yang terlalu sering menyebabkan terbunuhnya
lactobacillus di usus, akibatnya terjadilah yeast overgrowth di saluran pencernaan.
Bentuk mycelium dan chlamydospore dari jamur candida albicans bisa melakukan
invasi ke dalam jaringan, sedangkan bentuk yeast biasanya berkelompok dalam
crypta intestin sehingga sulit dideteksi. Jamur dan yeast ini menempel pada
dinding usus sambil mengeluarkan toxin yaitu gliotoxins dan immunotoxins
lainnya yaitu mannan yang dapat melemahkan sistem imunitas tubuh. Akhirnya
terjadi lagi reinfeksi dan diberi lagi antibiotik yang akan membunuh bakteri
komensal dalam usus, terjadilah vicious cycle. Yeast juga memproduksi suatu
enzim seperti phospholipase ( phospholipid breakdown ) dan protease ( protein
breakdown ). Enzim ini dapat merusak mukosa usus sehingga timbul
lubanglubang kecil di mukosa usus, ditambah dengan adanya hipermeabilitas
dinding usus maka terjadilah Leaky Gut Syndrome ( Ratnawati, 2003 ).
Bakteri probiotik mampu menstimulasi sistem imun antara lain
meningkatkan fungsi fagositosis makrofag, monosit dan neutrofil, serta mampu
merangsang sekresi IgM. Probiotik juga memiliki kemampuan memperbaiki
keseimbangan mikroflora usus, sehingga dapat mempertahankan kesehatan host
(Resnick, 2010)
2.3 Kolostrum
Dr.C.E.Bruce menunjukkan bahwa kolostrum manusia hanya mengandung
2% IgG (immunoglobulin yang terpenting untuk tubuh), sementara dalam
kolostrum sapi mengandung IgG 40x lebih banyak. Berita baiknya, kolostrum sapi
mudah untuk didapatkan dalam jumlah yang besar (Bruce, C.E. 1969).
3
Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi IgG total hasil
pemerahan pertama cukup tinggi, dengan konsentrasi sebesar 25.75±3,13mg.mlˉ¹.
Imunoglobulin utama yang terkandung di dalam kolostrum sapi adalah
immunoglobulin gamma (IgG), oleh karena itu, kolostrum merupakan sumber lgG
yang sangat bermanfaat (Esfandiari, 2008).
Since colostrum can decrease Leaky Gut Syndrome i.e. intestinal
permeability and enhance the assimilation of nutrients, using colostrum as a
foundation supplement can enhance the bioavailability of nutrients and protect the
digestive tract from toxins and pathogenic invaders. This effect can also be
increased when combined with probiotics (Pamela, 1998)
BAB 3. METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian
Gambar 1. Rancangan Penelitian
3.2 Waktu dan Tempat Pelaksanaan
Penelitian dilakukan selama 4 bulan. Pengambilan kolostrum akan
dilakukan di daerah Pujon sebagai sentra sapi perah tertinggi di Malang.
Pembuatan kefir dilakukan di Laboratorium Teknologi Hasil Ternak. Pengecekan
IgG dilakukan di Laboratorium Kimia Fakultas MIPA, pemeliharaan tikus putih (
Rattus norvegicus) jenis Strain wistar dilakukan di Laboratorium Farmakologi,
4
test berat badan, test renang dan test perilaku dilakukan di Laboratorium
Farmakologi Universitas brawijaya dan uji Histologi dilakukan di Laboratorium
Anatomi Mikroskopis Universitas Brawijaya.
3.3 Variabel yang Diamati
Variabel bebas penelitian ini adalah pemberian kefir kolostrum dengan
lama fermentasi 48 jam. Variabel tergantung adalah berat badan, olfactorius
offspring, renag dan dan histologi organ stomach, duodenum, jejenum, ielun,
colon.
3.4 Objek dan Sampel Penelitian
Sampel penelitian adalah model tikus putih (Rattus novergicus) strain
Wistar betina siap reproduksi yang dibuntingkan sebanyak 6 ekor, dalam
penelitian ini menggunakan anak tikus dari induk yang dibuntingkan yang
berumur 4 minggu.
3.5 Metode Penelitian
3.5.1 Pembuatan Kefir Kolostrum
Kolostrum yang diambil dari pemerahan pertama setelah melahirkan
dikondisikan dengan suhu 30 ͦ C dan diaduk secara terus menerus agar tidak
menggumpal. Grain kefir sebanyak 5 gram/100 ml kolstrum ditaruh diwadah
tupperware. Kolostrum yang telah dikondisikan dimasukkan dalam wadah
kemudian difermentasi selama 18 jam. 24 jam, 36 jam dan 48 jam
3.5.2 Pengukuran kadar IgG
Untuk mengetahui konsentrasi IgG pada sampel kefir kolostrum
digunakan alat brix refraktrometer. Cara kerja refraktometers mengukur
pembiasan cahaya dalam larutan cair. Konsentrasi yang lebih tinggi dari protein
(termasuk IgG) akan menghasilkan pembiasan cahaya yang lebih besar melalui
sampel. Caranya sampel kolostrum dan kefir kolostrum yang sudah diberi
perlakuan tadi diteteskan sebanyak 2-3 tetes dalam prisma dan penutup sampel
diturunkan. Instrumen akan menampilkan pembacaan digital pada skala Brix.
Setiap menggunakan refraktometer, prisma dan sampel penutup harus dibersihkan
setelah menguji sampel untuk menghindari residu yang dapat mempengaruhi
pengukuran berikutnya. Pembacaan brix refraktrometer didasarkan pada nilai
ambang 22. Nilai di atas 22 baik sedangkan nilai di bawah 22 tidak begitu baik.
3.5.3 Pembuntingan tikus
Tikus betina yang siap kawin dikandangkan dengan tikus jantan dengan
perbandingan 1:1. Hari pertama setelah pencampuran dihitung sebagai hari
pertama tikus betina bunting.
3.5.4 Pemberian valproic acid dan Kefir kolostrum
Valproic acid diberikan dengan dosis 800 mg/kg bb dengan cara oral
menggunakan sonde lambung diberikan pada saat kehamilan ke-9. Kefir
kolostrum diberikan pada anak tikus, anak tikus yang berusia 4 miggu selama 1
bulan diberikan kefir kolostrum secara oral menggunakan sonde laambung dengan
dosis 1 cc/100 g BB.
5
3.5.5 Test leaky Gut Syndrome
3.5.5.1 Tes Berat Badan, Tes Ollfactorius, dan Tes Berenang
Semua tes dilakukan diatas jam 2. Sebelum tes anak tikus dari masing-
masing perlakuan yang berumur 4 minggu dikondisikan, tes berat badan
dilakukan dengan cara menimbang anak tikus dengan timbangan digital, tes
olfactorius dilakukan dengan menggunakan kandang yang dipojok kanan dan
pojok kiri ditaruh cawan petri yang berisi sekam bersih dan sekam kotor,
kemudian waktu kaki pertama mencapai cawan petri dihitung sebagai waktu tikus
telah selesai melakukan tes, kandang dan cawan petri yang digunakan dibersihkan
dengan etanol 5 %, tes renang dilakukan dengan menggunakan tabung berenang,
tikus direnagkan selama 10 detik, kemudian dilihat bagaimana keadaan tikus
selama berenang dan dicocokan dengan skor sebagai berikut, 0: kepala dan hidung
dibawah permukaan air, 1:Hidung dibawah permukaan air, 2:Hidung dan kepala
diatas permukaan tapi telinga dibawah permukaan air, 3:Sama dengan no 2 tapi
sebagian telinga ada yang dibawah dan diatas permukaan air dan 4: Sama dengan
no 3 tapi telinga diatas permukaan air
3.5.5.2 Uji Histologi
Sebelum diambil organnya, anak tikus dianestesikan dengan ether dan.
Diambil organ stomach, duodenum, jejenum, ileum, dan colon kemudian
direndam pada formalin 10 % dan dibiarkan selama 18 jam pada suhu 4 ͦ C.
Sampel yang sudah siap dibagi menjadi 4 bagian yaitu, stomach, duodenum,
jejenum, ileum, keempat bagian diiris dengan ukuran 5 µm dan diwarnai dengan
hemstoxylin dan eosin kemudian diamati dengan perbesaran mikroskop untuk
melihat profil morfologi organ tikus apakah terdapat pengaruh pemberian Vpa dan
kefir kolostrum pada kesehatan organ pencernaan . .
3.6 Analisis Data
Data yang diperoleh dalam penelitian ini dianalisa secara
statistikamenggunakan SPSS.Data berat badan, dan data skor renang diuji dengan
Kruskal Wallis dan Mann Whitney. Data Histology untuk analisis statitik dengan
analysis of variance (ANOVA). Apabila berbeda nyata dilakukan uji lanjut
duncan.
BAB 4 HASIL YANG DICAPAI DAN POTENSI KHUSUS
4.1 Hasil dan Pembahasan
Pada penelitian ini diperoleh data hasil uji IgG pada kolostrum dan data
dari tes berat badan, tes olfactorius offspring, tes renang dan tes histology.
Tabel 1. Data Tes Berat Badan, Tes Olfactorius Offspring, Tes Renang
Sampel Berat
Badan
Olfactorius Offspring Berenang
(S) Bersih (S) Kotor (S)
Kn 54 7 4
Kn 50 8 4
Kn 50 3 4
6
P1 30 5 3
P1 31 8 0
P1 31 6 2
P2 39 5 4
P2 49 7 4
P2 44 8 3
Tabel 2. Data Ketebalan Mukosa dan Muscle Organ
Sampel Ketebalan Mukosa (Pixel) Ketebalan Muscle (Pixel)
TMuL TmuD TmuJ TMuI TmsL TMsD TMsJ TMsI
Kn 725.50 529.06 799.81 657.89 184.47 54.23 73.76 68.38
Kn 763.47 523.35 774.40 640.73 178.79 60.41 75.56 67.15
Kn 783.41 510.88 783.10 659.10 175.96 61.01 71.24 62.17
P1 701.78 299.77 558.08 578.46 143.59 47.07 68.44 42.15
P1 751.68 251.56 526.16 563.94 146.14 35.35 65.91 44.89
P1 766.18 258.50 530.19 545.77 152.18 20.00 63.85 48.91
P2 786.17 679.03 490.72 613.49 181.89 84.15 61,47 60.81
P2 743.96 674.89 487.67 624.44 165.08 83.55 60.12 65.01
P2 769.98 670.17 476.83 635.91 194.76 81.01 59.46 61.96
Keterangan Kn= Kontrol negatif tanpa perlakuan ; P1= Perlakuan pemberian VPA
tanpa terapi kefir kolostrum ; P2=Perlakuan pemberian VPA dengan terapi kefir
kolostrum.TMu=Tebal Mukosa;TMs=Tebal Muscle;L=Lambung;D=Duodenum ;
J=Jejenum;I=Ileum.
4.1.1 Kadar IgG pada kefir kolostrum
Kegiatan ini dilakukan untuk menetukan kdar IgG yang paling banyak
terdapat dalam kefir. Kegiatan ini dapat digunakan sebagai acuan untuk membuat
kefir yang diberikan pada tikus. Pada kegiatan ini didapatkan hasil fermentasi
yang memiliki konsentrasi IgG paling tinggi.Pada pembuatan kefir berikutnya
akan digunakan perlakuan yang memiliki konsentrasi IgG paling tinggi yaitu
fermentasi 48 jam
14
14,1
14,2
14,3
14,4
14,5
14,6
14,7
14,8
14,9
15
48 36 24 18
IgG 1
IgG 2
IgG rata rata
7
Gambar 2. Diagram Hasil Uji IgG
Gambar 5 menunjukkan hasil dari test IgG.Biru merupakan uji IgG pada
ulangan pertama, merah merupakan uji IgG ulangan kedua dan hijau adalah rata-
rata nilai IgG pada uji pertama dan kedua.
4.1.2 Hasil Uji berat badan, olfactorius offspring dan berenang
Pada Tabel 1 terlihat bahwa berat badan tertinggi terdapat pada tikus
kontrol negatif(sehat) sedang terendah pada tikus P1(sakit). Hal ini sesuai dengan
(Vemale com) yang menyatakan bahwa bayi yang lahir dengan bobot di bawah
normal beresiko 63 persen lebih tinggi untuk mengalami autisme. Sedangkan pada
anak-anak yang lahir dengan bobot berlebih resikonya mencapai 60 persen. Pada
gambar juga terlihat skor berenag tertinggi terdapat pada tikus kontrol negatif dan
skor berenag terendah pada tikus P1. Pada tikus P2(terapi) mulai menunjukkan hal
yang positif yaitu kenaikan berat badan dan kenaikan skor berenag. Hal ini terjadi
mungkin karena pemberian kefir kolostrum pada tikus autis mengurangi keadaan
leaky gut syndrome yang diderita. Hal ini sesuai dengan Resnick, 2010 yang
menyatakan bahwa bakteri probiotik mampu menstimulasi sistem imun antara lain
meningkatkan fungsi fagositosis makrofag, monosit dan neutrofil, serta mampu
merangsang sekresi IgM. Probiotik juga memiliki kemampuan memperbaiki
keseimbangan mikroflora usus, sehingga dapat mempertahankan kesehatan host).
Pada Gambar 2 terlihat bahwa tikus kontrol negatif cenderung memilih sekam
yang kotor . Tikus P1 cenderung memilih sekam yang bersih kemudian pada tikus
P2 tikus mulai memilih sekam yang kotor meskipun waktunya tidak secepat
dengan tikus kontrol negatif. Pada tes offspring olfactory tikus yang sehat akan
cenderung memilih sekam yang kotor karena pada tikus terdapat syaraf
olfactorius, yaitu kemampuan syaraf hewan untuk membaui rumahnya, apabila
tikus autis pertumbuhan syaraf ini akan lambat
Dari hasil uji Kruskal Wallis dapat diketahui bahwa “ Nilai p-value
sebesar 0,027 < nilai kritik 0,05, karena itu Ho ditolak, bahwa terdapat cukup
bukti dimana terdapat perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan terhadap berat
badan” dan dari hasil uji Kruskal Wallis dapat diketahui bahwa “ Nilai p-value
sebesar 0,046 < nilai kritik 0,05, karena itu H0 ditolak, bahwa terdapat cukup
bukti dimana terdapat perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan terhadap tingkat
kemampuan berenang”. Pada gambar telihat bahwa
0
10
20
30
40
50
60
Sehat Sakit Terapi
BB 1
BB 2
BB 3
8
Gambar 3. Diagram Tes Berat Badan
Gambar 4. Diagram Skor Berenang
4.1.3 Hasil Uji Ketebalan Mukosa dan Muscle
Pada tabel 2 terlihat bahwa tikus kontrol negatif menunjukkan
ketebalan mukosa dan muscle pada ileum, lambung dan duodenum yang lebih
tebal dibandingkan dengan tikus P1, kemudian tikus yang diberikan kefir
kolostrum ketebalan mukosa dan muscle pada lambung, ileum dan duodenumnya
meningkat. Penurunan ketebalan mukosa dan muscle pada lambung, ileum dan
duodenum tikus yang diberikan VPA tanpa pemberian kefir disebabkan karena
tikus mengalami penyakit leaky gut syndrome. Hal ini sesuai dengan Kim (2013),
yang menyatakan bahwa di stomach dan ileum, ketebalam mukosa dan muscle
menurun secara dengan signifikat, penurunan ketebalan ini mungkin hasil dari
peningkatan permeabilitas dan vulnerability to external attacs. Tikus yang
diberikan kefir kolostrum memiliki ketebalan mukosa dan muscle pada lambung,
ileum dan duodenum mendekati tikus normal, hal ini menunjukkan bahwa kefir
kolostrum dapat munurunkan peningkatan permeabilitas yang artinya mengurangi
kondisi leaky gut syndrome.
Dari hasil uji ANOVA dapat diketahui bahwa “ Nilai p-value sebesar
0,027 < nilai kritik 0,05, karena itu Ho ditolak, bahwa terdapat cukup bukti
dimana terdapat perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan terhadap ketebalan
muscle lambung” dan dari hasil uji ANOVA dapat diketahui bahwa “ Nilai p-
value sebesar 0,549 > nilai kritik 0,05, karena itu H0 diterima, bahwa terdapat
cukup bukti dimana tidak terdapat perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan
terhadap ketebalan mukosa lambung”. Dari hasil uji ANOVA antar ketebalan
mukosa dan muscle pada ileum dan duodenumtikus dapat diketahui bahwa” Nilai
p-value sebesar 0,000 < nilai kritis 0,05, karena itu Ho ditolak, bahwa terdapat
cukup bukti dimana terdapat perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan terhadap
ketebalan mukosa dan muscle pada ileum tikus
Pada tabel 2 terlihat bahwa tikus kontrol negatif menunjukkan
ketebalann mukosa dan muscle pada jejenuum yang lebih tebal dibandingkan
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
Sehat Sakit Terapi
Skor 1
Skor 2
Skor 3
9
dengan tikus P1, kemudian tikus yang diberikan kefir kolostrum ketebalan
mukosa dan musclenya sangat rendah, pemberian kefir kolostrum belum dapat
meningkatkan ketebalan jejenum. Hal ini sesuai dengan Wresdiyati (2013) yang
menyatakan bahwa ukuran jejenum yang lebih panjang sehingga paparan bakteri
cenderung lebih lama didalam jejenum selain itu, jejenum memiliki regenerasi sel
epitel vili yang lebih lambat bila dibandingkanduodenum dan ileumsehingga
eliminasi bakteri cenderung lebih lambat dalam jejenum.
Dari hasil uji ANOVA antar ketebalan mukosa dan muscle pada
jejenum tikus dapat diketahui bahwa” Nilai p-value sebesar 0,000 < nilai kritis
0,05, karena itu Ho ditolak, bahwa terdapat cukup bukti dimana terdapat
perbedaan dari ketiga kelompok perlakuan terhadap ketebalan mukosa jejenum
tikus”
Gambar 5. Diagram Ketebalan Muscle Organ
Keterangan TMsL;Tebal Muscle Lambung TMsD;Tebal Muscle Duodenum
TMsJ;Tebal Muscle Jejenum TMsI ;Tebal Muscle Ileum. Biru merupakan
Perlakuan Kontrol Negatif (sehat);Merah merupakan perlakuan kontrol psitif
(sakit);hijau merupakan perlakuan terapi kefir kolostrum.
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
TMsL TMsD TMsJ TMsI
Sehat
Sakit
Terapi
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
TMuL TMuD TMuJ TMuI
Sehat
Sakit
Terapi
10
Gambar 6. Grafik Ketebalan Mukosa Organ
Keterangan TMuL;Tebal Mukosa Lambung TMuD;Tebal Mukosa Duodenum
TMuJ;Tebal Mukosa Jejenum TMuI ;Tebal Mukosa Ileum. Biru merupakan
Perlakuan Kontrol Negatif (sehat);Merah merupakan perlakuan kontrol psitif
(sakit);hijau merupakan perlakuan terapi kefir kolostrum.
4.2 Potensi Khusus
Dengan adanya kefir kolostrum maka masalah yang berkaitan dengan
Leaky Gut Syndrome dan ASD dapat diatasi, Jurnal Ilmiah, Seminar Nasional dan
Hak Paten.
BAB 5 PENUTUP
5.1 Kesimpulan
1. Pemberian valproic acid berpengaruh terhadap leaky gut syndrome
2. Pemberian kefir kolostrum berpengaruh terhadap leaky gut syndrome
3. Penyimpanan kolostrum yang terlalu lama berpengaruh terhadap kadar
IgG
5.2 Saran
Untuk penelitian selanjutnya digunakan variable yang lebih banyak untuk
diagnosa leaky gut syndrome.
DAFTAR PUSTAKA
Bruce, CE. 1969 Natural History, , Feb. Dr. C. E. Bruce demonstrates that
humancontains only 2% IgG (the body’s most important immunoglobulin)
whilecontained a phenomenal up to 20 times that amount.
Camilleri, M., et al. “Intestinal barrier function in health and gastrointestinal
disease”. Neurogastroenterology and Motility Vol. 24, No. 6 (2012): 503–
512.
Esfandiari A, Wibawan IWT, Murtini S, Widhyari SD, Prasetyo BF.
2008.Produksi Kolostrum Antivirus Avian Influenza Dalam
RangkaPengendalian Inveksi Virus Fluburung. Jurnal Ilmu Pertanian
Indonesia.13(2): 69-79.
Fasano, A. “Leaky gut and autoimmune diseases”. Clinical Reviews in Allergy &
Immunology Vol. 42, No. 1 (2012): 71–78
Ratnawati, H.2003.Leaky Gut sebagai Penyebab Gangguan Gastrointestinalpada
ASD JKM. 2(2): 42-55
Resnick, C. 2010. Nutritional Protocol for the Treatment of Intestinal
Permeability Defects and Related Conditions. Natural Medicine Journal
2(3) :14-23.
Research Center for Nutritional Research. www.centerfornutritionalresearch.org:
diakses pada 19 september 2014 pukul 11:02 am.
11
LAMPIRAN
Lampiran 1 Keberhasilan Program
Tabel 3. Indeks keberhasilan program
Kegiatan Proporsi Tercapai Belum Tercapai
Persiapan 5 % 5 % 0
Membuat
kandang tikus
5 % 5 % 0
Membuntingk
an tikus
10 % 10 % 0
Memberikan
obat valproic acid
10 % 10 % 0
Membuat
kefir
10 % 10 % 0
Menganalisa
konsentrasi IgG
10 % 10 % 0
Membuat
laporan kemajuan
5 % 5 % 0
Memberikan
kefir kolostrum pada
anak tikus
10 % 10 % 0
Menganalisa
pengaruh VPA
10% 10 % 0
Menganalisa
pengaruh kefir
kolostrum
10 % 10 % 0
Tabulasi data 6 % 6 % 0
Hak paten 5 % 5 % 0
Publikasi
ARtikel
2 % 2 %
Membuat
laporan akhir
2 % 2 % 0
12
Jumlah 100 % 100 % 0
Gambar 7. Diagram Prosentase
100 % sudah terlaksana 0 % belum terlaksana
Lampiran 2 Penggunaan Dana
Tabel 4. Rincian Biaya
No Tanggal Uraian Pemasukan Pengeluaran Saldo
1 24 Februari
2015
Dana
Universitas
9.652.000. 9.652.000
29 Februari
2015
Pembelian
pulsa modem
35.000 9.617.000
2 26 Februari
2015
Pembelian
logbook
100.000 9.517.000
8 April 2015 Foto kopi +
print dan
penjilidan
proposal
18.000 9.499.000
3 10 April 2015 Pembelian
bahan kandang
300.000 9.199.000
4 13 April 2015 Pembelian
tikus
300.000 8.899.000
5 14 April 2015 Pembelian
tupperwaare
128.000 8.771.000
6 14 April 2015 bensin 31.000 8.740.000
7 14 April 2015 Pembelian
kolostrum
50.000 8.690.000
8 14 April 2015 Pembuatan
kefir
50.000 8.640.000
9 15 April 2015 Pembelian 67.000 8.573.000
Belum terlaksana
Terlaksana
13
valproic acid
ke 1
10 16 April 2015 Test IgG 50.000 8.523.000
11 22 April 2015 Pembelian
valproic acid
ke 2
200.000 8.323.000
12 23 April 2015 Print+fotocopy
proposal dan
jurnal
33.600 8.289.400
14 4 Mei 2015 Pembuatan
etik
250.000 8.039.400
15 8 Mei 2015 Membeli kue
untuk rapat
monev univ
30.000 8.009.400
16 9 Mei 2015 Membeli nasi
bungkus
sebelum
monev univ
40.000 7.969.400
17 10 Mei 2015 Pembelian
handspon dan
masker
87.000 7.882.400
18 10 Mei 2015 Konsumsi
anggota
31.500 7.850.900
19 20 Mei 2015 Prin dan
fotocopy
laporann
kemajuan
48.000 7.802.900
20 20 Mei 2015 Membeli
kolostrum
100.000 7.702.900
21 23 Mei 2015 Membeli
peralatan
kandang
penampung
urine
45.000 7.657.900
22 04 juni 2015 Membeli
mannitol
16.000 7.641.900
23 05 juni 2015 Konsumsi
anggota
22.000 7.619.900
24 06 juni 2015 Transportasi
survey lab
untuk test
23.000 7.596.900
14
urine
25 06 juni 2015 Beli
lampu,handuk,
sabun
75.000 7.521.900
26 07 juni Beli etanol 30.000 7.491.900
27 08 juni Beli etanol 30.000 7.461.900
28 09 Juni Beli etanol 30.000 7.431.900
29 10 juni Scan nota 25.000 7.406.900
30 10 juni Transportasi 50.000 7.356.900
31 10 juni Konsumsi 50.000 7.306.900
15 juni Print Jurnal
dan Fotocopy
54.000 7.252.900
16 juni Beli kolostrum 100.000 7.152.900
13 juli Tes Histologi 2.500.000 4.652.900
10 juli Sewa Lab 3.500.000 1.152.900
11 juli Beli ojek glas 500.000 652.900
13 juli Pengamatan
preparat
300.000 352.900
13 juli Pengukuran 300.000 52.900
12 juli Transportasi 50.000 2.900
Jumlah 9.649.100 2.900
Lampiran 3 Data Pendukung Kegiatan
Diskusi Anggota Membuat Kandang
15
Pembelian bahan-bahan kefir Pembuatan Kefir
Menganalisa IgG
Pembuntingan
16
Memberi makan tikus Menimbang tikus
Membeli valproic acid di RSSA Pemberian valproic acid
Laboratorium kimia analisis Pembuatan Etik
POLINEMA menanyakan isolasi IgG
Toko bahan kimia membeli botol fil Ke apotik menanyakan obat valproic acid
17
Membuat kandang penampung urin
Memberikan kolostrum
18
Melakukan tes offspring
Melakukan tes renang
Melakukan bimbingan
19
Stomach
Sehat Sakit
Terapi
Duodenum
Sehat Sakit
Terapi
20
Jejenum
Sehat Sakit
Terapi
Ileum
Sehat Sakit
Terapi
21
Kruskal-Wallis Test “Skor Renang”
Ranks
PERL
AKU
AN N Mean Rank
SKOR 1 3 2.17
2 3 7.00
3 3 5.83
Total 9
Test Statisticsa,b
SKOR
Chi-Square 6.168
df 2
Asymp.
Sig. .046
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable:
PERLAKUAN
Kruskal-Wallis Test “Berat Badan”
Ranks
PERLAKU
AN N Mean Rank
BB PEMBERIA
N 3 2.00
TANPA 3 8.00
TERAPI 3 5.00
Total 9
Test Statisticsa,b
BB
Chi-Square 7.261
22
df 2
Asymp.
Sig. .027
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable:
PERLAKUAN
One Way ANOVA Ketebalan Muscle
Oneway
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval
for Mean
Minimum Maximum
Lower Bound
Upper
Bound
TMsL sehat 3 1.7974E2 4.33381 2.50213 168.9742 190.5058 175.96 184.47
sakit 3 1.4730E2 4.41158 2.54703 136.3444 158.2623 143.59 152.18
terapi 3 1.8058E2 14.88352 8.59301 143.6039 217.5494 165.08 194.76
Total 9 1.6921E2 18.30122 6.10041 155.1391 183.2742 143.59 194.76
TMsD sehat 3 58.5500 3.75324 2.16693 49.2264 67.8736 54.23 61.01
sakit 3 34.1400 13.57550 7.83782 .4166 67.8634 20.00 47.07
terapi 3 82.9033 1.66689 .96238 78.7625 87.0441 81.01 84.15
Total 9 58.5311 22.27419 7.42473 41.4097 75.6526 20.00 84.15
TMsJ sehat 3 73.5200 2.16998 1.25284 68.1295 78.9105 71.24 75.56
sakit 3 66.0667 2.29901 1.32733 60.3556 71.7777 63.85 68.44
terapi 3 60.1933 .77261 .44607 58.2741 62.1126 59.46 61.00
Total 9 66.5933 6.00865 2.00288 61.9747 71.2120 59.46 75.56
TMsI sehat 3 65.9000 3.28830 1.89850 57.7314 74.0686 62.17 68.38
sakit 3 45.3167 3.40014 1.96307 36.8703 53.7631 42.15 48.91
terapi 3 62.5933 2.17045 1.25311 57.2016 67.9850 60.81 65.01
Total 9 57.9367 9.92006 3.30669 50.3114 65.5619 42.15 68.38
23
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
TMsL 2.213 2 6 .191
TMsD 3.172 2 6 .115
TMsJ 1.052 2 6 .406
TMsI .393 2 6 .691
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
TMsL Between Groups 2159.952 2 1079.976 12.473 .007
Within Groups 519.526 6 86.588
Total 2679.478 8
TMsD Between Groups 3566.796 2 1783.398 26.597 .001
Within Groups 402.319 6 67.053
Total 3969.115 8
TMsJ Between Groups 267.648 2 133.824 37.906 .000
Within Groups 21.182 6 3.530
Total 288.831 8
TMsI Between Groups 733.091 2 366.545 40.600 .000
Within Groups 54.169 6 9.028
Total 787.260 8
Oneway ANOVA Ketebalan Mukosa
Oneway
Descriptives
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval
for Mean
Minimum Maximum
Lower Bound
Upper
Bound
TMuL sehat 3 7.5746E2 29.41908 16.98511 684.3790 830.5410 725.50 783.41
sakit 3 7.3988E2 33.78269 19.50444 655.9592 823.8008 701.78 766.18
terapi 3 7.6670E2 21.29492 12.29463 713.8038 819.6028 743.96 786.17
Total 9 7.5468E2 27.46461 9.15487 733.5699 775.7923 701.78 786.17
TMuD sehat 3 5.2110E2 9.29711 5.36769 498.0014 544.1920 510.88 529.06
sakit 3 2.6994E2 26.06268 15.04730 205.2000 334.6866 251.56 299.77
24
terapi 3 6.7470E2 4.43316 2.55949 663.6841 685.7093 670.17 679.03
Total 9 4.8858E2 177.50596 59.16865 352.1357 625.0220 251.56 679.03
TMuJ sehat 3 7.8577E2 12.91370 7.45573 753.6906 817.8494 774.40 799.81
sakit 3 5.3814E2 17.38284 10.03599 494.9620 581.3247 526.16 558.08
terapi 3 4.8507E2 7.30000 4.21466 466.9391 503.2075 476.83 490.72
Total 9 6.0300E2 139.46250 46.48750 495.7952 710.1959 476.83 799.81
TMuI sehat 3 6.5257E2 10.27446 5.93196 627.0502 678.0965 640.73 659.10
sakit 3 5.6272E2 16.37893 9.45638 522.0358 603.4108 545.77 578.46
terapi 3 6.2461E2 11.21101 6.47268 596.7637 652.4630 613.49 635.91
Total 9 6.1330E2 41.35849 13.78616 581.5124 645.0943 545.77 659.10
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
TMuL .512 2 6 .623
TMuD 6.464 2 6 .032
TMuJ 1.698 2 6 .260
TMuI .301 2 6 .751
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
TMuL Between Groups 1113.987 2 556.993 .679 .542
Within Groups 4920.451 6 820.075
Total 6034.438 8
TMuD Between Groups 250496.218 2 125248.109 478.440 .000
Within Groups 1570.705 6 261.784
Total 252066.923 8
TMuJ Between Groups 154553.876 2 77276.938 443.936 .000
Within Groups 1044.434 6 174.072
Total 155598.310 8
TMuI Between Groups 12685.156 2 6342.578 38.092 .000
Within Groups 999.041 6 166.507
Total 13684.197 8