“VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE MEDICIÓN”

Ponente: Ing. Rocio E. Cortés Colìn

Objetivo: Dar a conocer a los participantes los lineamientos generales para realizar una validación de métodos de medición, que incluye los tipos de validación y parámetros de validación por técnica analítica.

• CONTENIDO• Definición de Validación de métodos.• Objetivos de la validación de métodos. • Alcance de la validación de métodos.• Parámetros de validación de métodos para las técnicas analíticas de:

• Espectrofotometría Ultravioleta-visible• Espectrofotometría de Absorción Atómica e ICP• Cromatografía de gases y cromatografía de líquidos• Métodos volumétricos• Métodos de gravimetría de masa• Medición de pH • Medición de conductividad.

• “La validación es la confirmación por examen y la provisión de evidencia objetiva de que se

cumplen los requisitos particulares para un uso específico propuesto.”

• NMX‐EC‐17025‐IMNC‐2006,

• Requisito 5.4.5.1

• Definición:

- Evaluar las características de desempeño del método.

- Demostrar que el método desarrollado por un laboratorio es útil para la aplicación propuesta.

- Demostrar que las modificacionesrealizadas a un método no afectan su desempeño, obteniendo resultados confiables.

- - Demostrar que un método es equivalente a otro.

• Los objetivos de una validación de métodos pueden ser:

Antes de introducirlos como métodos de rutina. Un método establecido es usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o instrumentos.

Cuando:cambia alguna de sus condiciones, por ejemplo: cambio en

la técnica de extracción.Se desarrolla un nuevo método para un problema particular.Se revisa un método establecido para incorporar mejoras o ampliarlo hacia un nuevo problema, por ejemplo, cambio de matriz.Se debe demostrar la equivalencia entre dos métodos.

Los Métodos deben validarse:

Porque es necesario demostrar que el método es útil para el uso propuesto.Porque la norma NMX‐EC‐17025‐IMNC‐2006, especifica en los requisitos 5.4.5.2 y 5.4.5.3 que: …. el laboratorio debe realizar validación de métodos no normalizados, etc.Porque la norma NMX‐EC‐17025‐IMNC‐2006, especifica en el requisito 5.4.2 que: …..el laboratorio debe confirmar que puede operar adecuadamente métodos normalizados antes de implantar los ensayos o calibraciones, lo cual se interpreta como una VALIDACION PARCIAL.

¿Porque se deben validar los métodos?

5.4.5.2 El laboratorio DEBE validar métodos no normalizados, métodos diseñados/ desarrollados por el laboratorio, métodos normalizados usados fuera de su alcance propuesto y ampliaciones y modificaciones de métodos normalizados para confirmar que los métodos se ajustan al uso propuesto. La validación DEBE ser tan extensiva como sea necesario para satisfacer las necesidades de la aplicación o del campo de aplicación dado. El laboratorio DEBE registrar los resultados obtenidos, el procedimiento usado para la validación, y una declaración acerca de que el método se ajusta para el uso propuesto.

5.4.5.3 El intervalo y la exactitud de los valores que se pueden obtener de los métodos validados(p. Ej. La incertidumbre de los resultados, el límite de detección, la selectividad del método, la linealidad, el límite de repetibilidad y/o reproducibilidad, la consistencia contra influencias externas y/o la sensibilidad cruzada contra interferencias de la matriz del elemento de ensayo/muestra), DEBEN ser relevantes con las necesidades de los clientes, como se evaluaron para el uso propuesto.

METODOSNORMALIZADOS

(ASTM, EPA, SM,AOAC, NMX, NOM,

FDA, etc.)

VALIDACION PARCIAL

METODOS NO NORMALIZADOS

(Métodos desarrollados por el laboratorio, modificados, de revistas científicas, etc.)

VALIDACION TOTAL

Alcance de la validación de métodos.

PRUEBA INICIAL DE DESEMPEÑO

Ó

CONFIRMACION DEL METODO

VALIDACION PARCIAL

También se conoce como:

Parámetros recomendados para la validación:

RecuperaciónSensibilidadSelectividadRobustezLímite de detección.Límite cuantificaciónIntervalo lineal y de trabajoReproducibilidadRepetibilidadSesgo (evaluado a partir de la recuperación)Incertidumbre.

Guías Técnicas sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas.

Espectrofotometría y Cromatografía

√√INCERTIDUMBRE

√√SESGO

(En algunos casos se evalúa a partir de la Recuperación)

√√REPETIBILIDAD√√REPRODUCIBILIDAD√√INTERVALO LINEAL Y DE TRABAJO

√√LIMITE DE CUANTIFICACION Y

LIMITE PRACTICO DE CUANTIFICACION

√√LIMITE DE DETECCION√ROBUSTEZ√SELECTIVIDAD√SENSIBILIDAD

√√RECUPERACION

VALIDACIONPARCIAL

VALIDACION COMPLETAPARAMETRO

Volumetría y gravimetría

√√INCERTIDUMBRE

√√SESGO

(En algunos casos se evalúa a partir de la Recuperación)

√√REPETIBILIDAD

√√REPRODUCIBILIDAD

√√INTERVALO DE TRABAJO

√√LIMITE DE CUANTIFICACION ó

CANTIDAD MINIMA CUANTIFICABLE

LIMITE DE DETECCION

√ROBUSTEZ

√SELECTIVIDAD

SENSIBILIDAD

√√RECUPERACION

VALIDACION PARCIAL

VALIDACION COMPLETAPARAMETRO

pH y conductividad

√√INCERTIDUMBRE

√√SESGO

(En algunos casos se evalúa a partir de la Recuperación)

√√REPETIBILIDAD√√REPRODUCIBILIDAD

pHIntervalo de trabajo √

CONDUCTIVIDADIntervalo lineal √

√INTERVALO LINEAL Y DE TRABAJO

LIMITE DE CUANTIFICACIONLIMITE DE DETECCION

√ROBUSTEZSELECTIVIDADSENSIBILIDADRECUPERACION

VALIDACION PARCIAL

VALIDACION COMPLETA PARAMETRO

Evaluación de los parámetros de

validación de métodos

Recuperación (recobro)• Proporción de la cantidad

de analito, presente en la porción de la muestra óadicionado a ésta, que es cuantificada por el método de ensayo.

• (Harmonised Guidelines for the use of recoveryinformation in Analytical measurement 1999)

• Normalmente se utiliza para evaluar la recuperación en porcentaje (% de recuperación) del analito presente o agregado a una muestra de control de calidad, evalúa la eficiencia de extracción, proceso de preparación o interferencias que pueden existir al aplicar el método de ensayo.

Recuperación (recobro)

• “La fracción de analito adicionada a una muestra de

prueba (fortificada o con “spike”) previa al análisis, el

porcentaje de recuperación (% R) se calcula de la

siguiente manera:

• %R = ((CF‐CU)/CA) * 100

• donde:

• CF = Concentración del analito medida en la muestra fortificada

• CU = Concentración de analito medida en la muestra sin fortificar

• CA = Concentración de analito adicionada.

• (AOAC‐PVMC)

Recuperación (recobro)

¿Qué hacer? ¿Cuántas veces? Calcular/ Determinar Comentarios

Blancos de matriz o muestras

fortificadas con el analito de interés en un intervalo de concentraciones.

ó con MR

10

Determinar la recuperación del analito a varios niveles

de concentración. %R

El criterio de aceptación está en

función de lo establecido en el método ó en la

técnica analítica.

Sensibilidad• El cambio en la respuesta de un

instrumento dividido por el correspondiente cambio del estímulo (señal de entrada).

• (IUPAC “Orange” Book)

• El estímulo puede ser por ejemplo: la cantidad del mensurando presente. La sensibilidad puede depender del valor de estímulo. Aunque esta definición se aplica claramente al instrumento de medición, también puede aplicarse al método analítico en conjunto, tomando en cuenta otros factores como el efecto de los pasos para una concentración.

Sensibilidad

CURVA DE CALIBRACION y = 0.8x - 0.0167R2 = 0.9882

-0.10

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

CONCENTRACION

AB

SOR

BA

NC

IA

CURVA DE CALIBRACION y = 1.0326x + 0.0152R2 = 0.9961

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

CONCENTRACION

AB

SOR

BA

NC

IA

Es la pendiente de la curva de calibración.(Cuando es mayor la pendiente, el método es más sensible)

λ = 460 nm

λ = 720 nm

• Continua…….

GRACIAS POR SU ATENCIÓN