universidad de guayaquil facultad de ciencias químicas...
TRANSCRIPT
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
Facultad de Ciencias Químicas
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN
TEMA:
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTOS DE LA PLANTA
CALAGUALA (Phlebodium pseudoaureum) SOBRE LOS
MICROORGANISMOS Staphylococcus aureus, Escherichia coli Y Cándida
albicans.
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA
OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS
Autores:
Saltos Burgos Carolina Lisbeth
Tapia Castro Lainus Jerel
TUTOR:
Q.F. María Auxiliadora Alarcón Perasso Mgs
GUAYAQUIL- ECUADOR
2019
I
AGRADECIMIENTO
Agradezco infinitamente en primer lugar a Dios por darme fuerza y valor para
superar obstáculos, dificultades y poder culminar este triunfo en esta etapa de mi
vida.
A mi madre Sulay Burgos Cali y a mi padre José Luis Saltos Aspiazu por brindarme
la fuerza y la ayuda necesaria, con ese amor incondicional, en el trayecto de mi
vida, corrigiendo mis faltas y celebrando mis triunfos, gracias por sus sabios
consejos y su constante apoyo.
A mis hermanas por brindarme su amor y lealtad incondicional a lo largo de mi vida.
A mi familia, gracias por siempre estar ahí, por permanecer siempre unida, en
especial a mi abuelito Pedro Burgos y mi tío Edison Burgos, por superar las
dificultades, con el amor y el cariño que los caracteriza.
A mí enamorado, André Rueda gracias por el apoyo para continuar y jamás
renunciar, el amor, la paciencia incondicional que tanto lo caracteriza.
A mi tutora María Auxiliadora Alarcón Perasso Mgs por compartir conocimientos,
su asesoramiento, su tiempo, su cariño, alegrías y constante dedicación en la
realización de esta investigación.
Finalmente, a mi compañero y gran amigo de tesis Lainus Tapia, gracias por haber
logrado nuestro objetivo principal con mucha perseverancia y dedicación. Y mis
amigos incondicionales que siempre están conmigo, gracias.
Carolina Lisbeth Saltos Burgos
II
AGRADECIMIENTO
Agradezco a cada uno de los profesores que me brindaron su experiencia, su
amistad, su paciencia a lo largo de mi vida estudiantil.
A la facultad de Ciencias Químicas por contribuir con mi formación profesional.
A mi tutora la Q.F. Ma. Auxiliadora Alarcón por la ayuda brindada, por el
conocimiento científico brindado, por el tiempo, la paciencia prestada y su valiosa
guía en la realización de este proyecto de titulación.
Finalmente, mi compañera y gran amiga de tesis Carolina Saltos, gracias por el
apoyo, por el tiempo empleado, por cumplir nuestro objetivo principal con mucha
perseverancia y dedicación.
Lainus Jerel Tapia Castro
III
DEDICATORIA
Se lo dedico primero a Dios, al creador de todas las cosas, el que me ha guiado en
el transcurso de mi vida y permitirme, con su fuerza y amor, llegue a este momento
tan especial en mi vida.
A mi madre y mi padre por ser ese pilar fundamental en mi vida, como también mis
hermanas, mi abuelito y mi tío, por el apoyo incondicional.
A mi familia en general porque me brinda su apoyo incondicional, por compartir
buenos y malos momentos, pero siempre unidos.
Esto es por y para ustedes….
Carolina Lisbeth Saltos Burgos
IV
DEDICATORIA
Dedico este esfuerzo en primer lugar a Dios, por siempre estar presente en mi vida,
por brindarme sabiduría y las fuerzas necesarias para superar cada etapa de ella.
A mis amados padres por ser un pilar fundamental para mí, por apoyarme en cada
decisión, por su ayuda incondicional a lo largo de mi vida y de la mi carrera,
formando parte de esta meta alcanzada.
A mi hermano por creer siempre en mí y darme esa motivación, esa seguridad,
que entre tantas cosas me ayudo a alcanzar este objetivo.
A mis amigos y compañeros, con los cuales compartimos muchos momentos
difíciles y siempre nos hemos apoyado en lo más posible.
Lainus Jerel Tapia Castro
V
INDICE GENERAL
RESUMEN ....................................................................................................... XII
ABSTRACT ..................................................................................................... XIII
INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1
CAPÍTULO I: PROBLEMA .................................................................................. 3
Planteamiento del problema. .............................................................................. 3
Hipótesis............................................................................................................. 3
Justificación ........................................................................................................ 4
Objetivos ............................................................................................................ 5
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO ...................................................................... 6
II.1 CALAGUALA ................................................................................................ 6
II.1.1 Hábitat .................................................................................................... 6
II.1.2 Propiedades medicinales ....................................................................... 7
II.1.3 Otros usos ................................................................................................. 8
II.1.4 Parte utilizada ........................................................................................ 8
II.1.5 Principios activos ................................................................................... 8
II.1.6 Composición química (rizoma) ............................................................... 9
II.1.7 Acción de la calaguala ........................................................................... 9
II.1.8 Usos medicinales tradicionales de la calaguala ................................... 10
II.2 Escherichia coli. ......................................................................................... 10
II.2.1 Taxonomía ........................................................................................... 10
II.2.2 Características ..................................................................................... 11
II.2.3 Síntomas .............................................................................................. 12
II.2.4 Fuentes y transmisión .......................................................................... 13
II.2.5 Prevención ........................................................................................ 14
II.3. Staphylococcus aureus ............................................................................. 14
II.3.1 Taxonomía ........................................................................................ 15
II.3.2 Características .................................................................................. 15
II.3.3 Morfología ......................................................................................... 16
II.3.4 Otras Características ........................................................................ 16
VI
II.3.5 Epidemiologia ................................................................................... 17
II.3.6 Diagnóstico ....................................................................................... 17
II.3.7 Tratamiento ....................................................................................... 18
II.4 Cándida albicans. .................................................................................... 18
II.4.1 Morfología. ........................................................................................ 19
II.4.2 Clasificación taxonómica .................................................................. 19
II.4.3 Epidemiología. .................................................................................. 20
II.4.4 Formas clínicas. ................................................................................ 20
II.4.4.1 Bucal. ............................................................................................. 20
II.4.4.2 Intertriginosa. ................................................................................. 21
II.4.4.3 Vulvovaginitis. ................................................................................ 21
II.4.4.4 Balanitis. ........................................................................................ 21
II.4.4.5 Candidiasis por el pañal. ................................................................ 21
II.4.6 Onicomicosis y perionixis. ................................................................. 22
II.4.7 Esofagitis. ......................................................................................... 22
II.4.8 Endocarditis. ..................................................................................... 22
II.4.9 Tracto urinario. .................................................................................. 22
II.4.10 Sistema nervioso central. ................................................................ 23
II.4.11 Peritonitis. ....................................................................................... 23
II.4.12 Ocular. ............................................................................................ 23
II.4.13 Tratamientos. .................................................................................. 23
II.5 Antibiograma ........................................................................................ 24
II.5.1 Discos para antibiograma ................................................................. 24
II.5.2 Método por difusión en agar ............................................................. 24
II.5.3 CMI (Concentración Inhibitoria Mínima) ............................................ 25
II.5.4 Extracto ............................................................................................. 28
II.5.5 Obtención de extractos ..................................................................... 29
VII
CAPITULO III. MATERIALES Y MÉTODOS .................................................... 30
III.1 Tipo de investigación .......................................................................... 30
III.2 Diseño de la investigación...................................................................... 30
III.3 Lugar de la investigación........................................................................ 31
III.4 Período de la investigación. ................................................................... 31
III.5 Recursos empleados. ............................................................................ 31
III.5.1 Talento humano. .............................................................................. 31
III.5.2 Muestra ............................................................................................ 31
III.6 Metodología ........................................................................................... 32
III.7 Recolección y selección del material vegetal. ........................................ 32
III.8 Comprobación taxonómica..................................................................... 33
III.9 Secado y trituración del material vegetal................................................ 34
III.10 Factores de estudio. ............................................................................. 34
Equipos ......................................................................................................... 34
Materiales ..................................................................................................... 35
Reactivos ...................................................................................................... 35
III.11 Obtención de los extractos ................................................................... 36
III.11.1 Extracto alcohólico ......................................................................... 36
III.11.2 Extracto acuoso ............................................................................. 36
III.12 Análisis microbiológico ......................................................................... 36
III.12.1 Dilución de la cepa en caldo cerebro corazón: dilución de 0.5
MacFarland ................................................................................................ 37
III.12.2 Preparación de solución Caldo cerebro corazón al 0.5
MacFarland. ............................................................................................... 38
CAPITULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. ................................................ 40
IV.1 Resultados: Extracto alcohólico ............................................................. 40
IV. 2 Resultados: Extracto acuoso ................................................................ 41
IV. 3 Discusión .............................................................................................. 43
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. .................................................. 44
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................ 46
ANEXOS .......................................................................................................... 49
VIII
ÍNDICE DE TABLAS
TABLA I Equipos utilizados en el análisis microbiológico ............................. 34
TABLA II Materiales usados en el laboratorio de Microbiología ................... 35
TABLA III Reactivos que se utilizaron en el análisis microbiológico ............. 35
TABLA IV Resultados del Extracto Alcohólico.............................................. 40
TABLA V Resultados del Extracto Acuoso ................................................... 42
IX
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico 1 Resultado de la actividad antimicrobiana del extracto alcohólico ........ 41
Gráfico 2 Halo de inhibición del extracto acuoso ................................................. 42
X
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 Antibiograma ..................................................................................................25
Figura 2 Diámetro de halos de inhibición ...................................................................27
Figura 3 Interpretación de las pruebas de sensibilidad según el CLSI ...................27
Figura 4 Clasificación taxonómica de la planta Phlebodium pseudoaureum .......33
XI
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo 1 Preparación de la muestra .................................................................... 49
Anexo 2 Preparación del extracto alcohólico ....................................................... 49
Anexo 3 Cepas patrón ......................................................................................... 50
Anexo 4 Primera prueba del análisis microbiológico con las diferentes
concentraciones del extracto alcohólico ............................................................... 52
Anexo 5 Preparación de cajas petri para el análisis microbiológico .................... 52
Anexo 6 Preparación de las diluciones de los extractos de las cepas control ..... 53
Anexo 7 Resultados de ensayos con el extracto alcohólico ................................ 54
Anexo 8 Discos control ........................................................................................ 55
Anexo 9 Preparación del Extracto Acuoso .......................................................... 56
Anexo 10 Diluciones del extracto acuoso para el análisis microbiológico ........... 56
Anexo 11 Resultados de los ensayos en el extracto acuoso ............................... 57
XII
FACULTAD: CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA: QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTOS DE LA PLANTA CALAGUALA
(Phlebodium pseudoaureum) SOBRE LOS MICROORGANISMOS
Staphylococcus aureus, Escherichia coli Y Cándida albicans.
Autores: Carolina Lisbeth Saltos Burgos
Lainus Jerel Tapia Castro
Tutor: Q. F María Auxiliadora Alarcón Perasso Mgs
RESUMEN
El presente estudio logró analizar la actividad antibacteriana y antimicótica del
extracto alcohólico y acuoso, obtenido por maceración del rizoma de la planta
calaguala (Phlebodium pseudoaureum). Se comparó contra antibióticos
seleccionados, utilizando un grupo de cepas control para el estudio en común:
Staphylococcus aureus ATCC 29213, E. coli ATCC 25922 y Cándida albicans
ATCC 10231”. Analizándose por el método de difusión en placa se postula la
hipótesis de que el rizoma de la planta calaguala (Phlebodium pseudoaureum)
contiene metabolitos secundarios, que presentan una actividad antibacteriana y
antimicótica. El presente estudio demostró la actividad antibacteriana de la planta
calaguala (Phlebodium pseudoaureum) en extracto alcohólico, que se determinó
por el método de difusión con un rango de sensibilidad aceptable frente al
microorganismo S. aureus y C. albicans según la norma CLSI que sirve de guía
para el estudio.
Palabras claves: Staphylococcus aureus ATCC 29213, E. coli ATCC 25922 y
Cándida albicans ATCC 10231, CLSI, antibacteriana.
XIII
FACULTAD: CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA: QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF EXTRACTS FROM THE PLANT CALAGUALA
(Phlebodium pseudoaureum) on the microorganisms Staphylococcus aureus,
Escherichia coli and Candida albicans.
Authors: Carolina Lisbeth Saltos Burgos
Lainus Jerel Tapia Castro
Tutor: Dra. María Auxiliadora Alarcón Perasso M. Sc.
ABSTRACT
The present study analysed the antibacterial and antifungal activity of the alcoholic
and aqueous extract, obtained by maceration of the rhizome of the calaguala plant
(Phlebodium pseudoaureum). It was compared against selected antibiotics, using a
group of control strains for the common study: Staphylococcus aureus ATCC 29213,
E. coli ATCC 25922 and Candida albicans ATCC 10231 ". Analyzing by the method
of diffusion in plaque the hypothesis was postulated that the rhizome of the plant
calaguala (Phlebodium pseudoaureum) contains secondary metabolites, with
antibacterial and antifungal activity. The present study showed the antibacterial
activity of the plant calaguala (Phlebodium pseudoaureum) in alcoholic extract,
which was determined by the diffusion method with an acceptable range of
sensitivity against the microorganism S. aureus and C. albicans according to the
standard CLSI wed as an guide for the study.
Key words: Staphylococcus aureus ATCC 29213, E. coli ATCC 25922 and Candida
albicans ATCC 10231, CLSI, antibacterial.
1
INTRODUCCIÓN
Desde hace muchos años, el ser humano ha recurrido a prácticas naturales en
busca de una curación para sus afecciones, conociendo que existen especies
vegetales, que han demostrado una gran actividad medicinal. Así mismo existen un
gran número de plantas que han sido utilizados por el hombre como alimento,
sombra y armas. Desde los pueblos primitivos hasta los más modernos, le han
atribuido un poder mágico a cierto grupo de especies, reforzado con los mitos,
concediéndole una intervención directa en la vida del ser humano y sobre todo en
su destino.
La exuberante biodiversidad vegetal que forma parte de la historia, pero sobre todo
la cultura de los pueblos indígenas, su uso, y la aplicación de estos productos como
remedios para la variedad de estas enfermedades constituye un conocimiento que
ha sido transmitido de generación a generación.
Aproximadamente la décima parte de especies de plantas del planeta determina
que nuestro país se encuentre dentro de los países considerados totalmente como
mega diverso. Muchas plantas son utilizadas con fines terapéuticos, por su uso
ancestral, aunque no se puede condicionar la sabiduría habitual, ya que es
necesario la aprobación científica de ciertas propiedades de las plantas medicinales
para descartar cualquier tipo de toxicidad.
Debido a un gran número de plantas con propiedades medicinales dentro de
nuestro país, que no se han logrado estudiar de manera correcta, es necesario
realizar la evaluación de la actividad antimicrobiana y antimicótica de los extractos
de calaguala, ya que es muy reducido la información obtenida de esta especie de
nuestro país. Como se conoce, el tipo de suelo, clima, temperatura, etc. pueden
estimular una modificación de los componentes químicos de cada especie.
2
Mediante el presente trabajo de investigación, se pretende valorar por medio de
ensayos, la actividad antimicrobiana de esta especie, aportando datos importantes
a nivel científico, garantizando la seguridad y eficacia en el uso de esta planta.
3
CAPÍTULO I: PROBLEMA
Planteamiento del problema.
¿Presentarán los rizomas de la calaguala metabolitos secundarios con un
potencial de actividad antibacteriana y antimicótica?
Hipótesis
Los rizomas de la calaguala contienen metabolitos secundarios que
representan un potencial de actividad antibacteriana y antimicótica.
4
Justificación
En la actualidad, la creciente y alarmante resistencia de los microrganismos
a los fármacos existente, nos obliga a buscar alternativas efectivas para
contrarrestar las futuras enfermedades.
El uso de la medicina natural ha crecido con el pasar de los años, llegando
a elaborar productos farmacéuticos que pueden disminuir dolencias a un gran grupo
de personas, aunque otras no han podido resolver su enfermedad.
La calaguala es una de las plantas que ha ayudado a solucionar numerosos
problemas de salud, siendo aplicada en la medicina ancestral.
Para demostrar los beneficios que esta posee, se evalúa mediante la
demostración de su actividad antimicrobiana verificando así, la veracidad de su
actividad en la medicina ancestral.
5
Objetivos
Objetivo General
Evaluar la actividad antimicrobiana y antimicótica del extracto acuoso y
alcohólico de la planta calaguala sobre lo microorganismos S. aureus, E. Coli
y C. albicans.
Objetivos Específicos
Analizar la actividad antimicrobiana y antimicótica del extracto acuoso de la
planta calaguala sobre los microorganismos S. aureus, E. Coli y C. albicans.
Analizar la actividad antimicrobiana y antimicótica del extracto alcohólico de
la planta calaguala sobre lo microorganismos S. aureus, E. Coli y C. albicans.
Comparar el poder antibacteriano y antimicótico de los extractos acuoso y
alcohólico de la planta Calaguala sobre lo microorganismos S. aureus, E.
Coli y C. albicans.
6
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO
II.1 CALAGUALA
Phlebodium pseudoaureum (L.) John Smith (Polypodium leucotomos Poir)
(P. decumanum Willd.) (P. Calaguala) Phlebodium aureum.
II.1.1 Hábitat
La calaguala integra en la familia de las Polipodiáceas es una planta que no
crece en la tierra, y si lo hace es muy raro. Florece en la corteza y ramas de otros
vegetales o en rocas, está constituido de un rizoma rastrero y escamoso, algo
delgado que posee un sabor entre agridulce, inodoro del que salen hojas densas,
glabras verdes sobre tallos azul café (Caceres, 2016).
Las hojas son elípticas entre 30 a 120 cm de largo y aproximadamente 20 a
40 cm de ancho. La calaguala es procedente de Centroamérica y su superficie se
puede extender desde México a Sudamérica. El hábitat favorito por la calaguala
son los bosques y zonas montañosas, donde suele crecer sobre las rocas.
Se afirma que la calaguala prospera en tierras cálidas y profundas. Se indica
igualmente que crece en forma indómita en los árboles de " encino" americano (no
debe confundirse con la encina europea) (Perez , 2011).
La calaguala contiene en su composición una sustancia similar a una goma,
y en menor cantidad, una resina roja, amarga y acre. También, se observa una
cantidad considerable de polisacáridos, un colorante, y en menor proporción ácido
málico, en mayor proporción sal, cal y ácido silícico (Perez , 2011).
Igualmente, entre los principales compuestos químicos de la calaguala se
encuentran los glicósidos de la saponina basados en polipodosapogenina, la
7
osaldina (compuesto dulce), ecdisteroides polipodinas A y B, derivados de
floroglucina, además de otras sustancias como el aceite esencial, aceite fijo, tanino,
etc (Perez , 2011)
Esta planta no tiene contacto con el suelo, crece sobre la espesura o también
sobre rocas, se alimenta de lo que encuentra en entorno. Según la medicina
ancestral, ayuda en enfermedades en las que se encuentra comprometido el
sistema inmunológico como la psoriasis y el mal del pinto o vitíligo. Tiene nutrientes
que depura la sangre. Está indicada para combatir problemas del corazón y vías
pulmonares o respiratorias muy afectadas con padecimientos asmáticos, tos,
bronquitis, etc. (Mendoza A. , 2016).
Es de gran utilidad tomarla cuando la piel ya está muy envejecida y pierde
elasticidad, depura el torrente sanguíneo y alimenta la piel, es un antioxidante que
limpia la apariencia cutánea.
De acuerdo a la práctica ancestral, depura la sangre eliminando el colesterol,
ayudando a tener una mayor oxigenación. Es una planta pectoral, alivia y evita el
dolor de angina de pecho. Cuando el corazón está espástico o cuando los músculos
se esclerosan y reducen poco a poco sus funciones motoras, las venas estrechan
el paso a la circulación de la sangre, que se dificulta. Esta planta ayuda a
contrarrestar este proceso.
II.1.2 Propiedades medicinales
A la calaguala se le otorga la capacidad de avivar los linfocitos que combaten
las infecciones, lo que la hace muy eficaz para prevenir o calmar infecciones en
personas con el sistema inmunológico deprimido.
También se la emplea como antiespasmódico y sudorífico en afecciones
respiratorias de tipo alérgico, como bronquitis con espasmos, y en procesos
gripales.
8
Además, se la atribuye una propiedad diurética y antirreumática, para disminuir
el ácido úrico y reducir la inflamación en artritis reumatoide y gota. Así mismo es
eficiente para tratar el herpes zoster.
II.1.3 Otros usos
Con regularidad la calaguala es empleada en alteraciones cutáneas,
asociadas a crisis nerviosas y estrés. Regula la activación celular en la piel y
disminuye la aparición de células muertas y la descamación. Es un medicamento
natural que combate la psoriasis y el vitíligo (despigmentación parcial de la piel).
También se ha ensayado como renovador de la piel, después de terapias
con radioterapia y, por su acción similar a la de los corticoides, para aliviar
reacciones alérgicas como urticarias, eccemas atópicos y dermatosis.
II.1.4 Parte utilizada
El rizoma es la parte principal mientras que las hojas son partes secundarias.
El rizoma posee un sabor agradable (por la presencia de osladina), ligeramente
agrio, y de bajo aroma.
El extracto de los rizomas y las hojas del helecho ha sido usado de manera
tradicional por los nativos oriundos de Honduras como un remedio contra varias
enfermedades incluyendo diferentes afecciones cutáneas (Mendoza M. V., 2017).
II.1.5 Principios activos
Saponinas
Calagualina formada por un cetosteroide.
Aceite esencial.
Ácido málico.
Mucílagos.
9
Taninos.
Resinas.
Minerales:
Hierro
Potasio
Calcio
Azúcares:
Pentosas
Colorante amarillo
Fermentos amilolíticos
Almidón
II.1.6 Composición química (rizoma)
Esteroides: ecdisterona, ecdisonas (una de ellas conocida como
polipodoaureína). Saponinas: calagualina (heterósido compuesto por glucosa,
fructosa y una aglicona triterpénica), polipodinas A y B
Otros: mucílago (desoxihexosa), oleorresina, nitrato de potasio, osladina y
almidón.
II.1.7 Acción de la calaguala
La acción más resaltable atribuida a la calaguala es combatir con cierta
eficacia la psoriasis y las dermatosis atróficas. Es una planta que en realidad es un
inmunorregulador o regulador del sistema defensivo, con lo cual se le supone útil
para todas aquellas enfermedades llamadas autoinmunes. Se usaba antiguamente
como antiinflamatorio en enfermedades cutáneas. Actualmente se investiga su
acción en el vitíligo (despigmentación de la piel) y su acción antioxidante, así como
sus mecanismos de acción en procesos tumorales y en otros trastornos (Alonso,
2018).
10
II.1.8 Usos medicinales tradicionales de la calaguala
Diurética.
Antivírica.
Colagoga.
Febrífuga.
Diaforética.
Tranquilizante.
Antipsoriásica.
Antiespasmódica.
Inmunosupresora.
Laxante.
Expectorante.
Antitumoral.
II.2 Escherichia coli.
Es un bacilo corto, Gram negativo, con una sola cadena espiral de ADN,
anaerobio facultativo, móvil con flagelos perítricos, tiene información genética en
los plásmidos, que son responsables de la producción de toxinas y de la resistencia
a los antimicrobianos. La mayoría de las bacterias pertenecientes a la especie E.
coli, forman parte de la microflora normal del intestino del hombre y de los animales
de sangre caliente, encontrándose habitualmente en sus heces (Romero Cabello,
2007).
II.2.1 Taxonomía
Reino: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
11
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Género: Escherichia
Especie: E. coli
II.2.2 Características
E. coli se singulariza por ser un bacilo Gram negativo, no esporulante, fabricante
de indol a partir de triptófano, no utiliza el citrato como fuente de carbono y no
produce acetoína. Además, es fermentadora de glucosa y la lactosa con producción
de gas (Canet, 2016).
Como toda bacteria Gram negativa, la cubierta de E. coli está compuesta de tres
elementos: la membrana citoplasmática, la membrana externa y, entre estas, un
espacio periplásmico integrado por péptido-glucano. Esta última le da a la bacteria
su forma y rigidez, que le permite resistir presiones osmóticas ambientales que
pueden ser elevadas (Canet, 2016).
E. coli es una bacteria láctica y micrococacea, su óptimo de desarrollo se
encuentra en el entorno de la temperatura corporal de los animales de sangre
caliente (alrededor de 35 a 43 ºC). La temperatura límite de crecimiento se sitúa
cerca de 7 ºC, lo que indica que un manejo eficiente de la cadena de frío en las
industrias alimentarias es importante para reducir en lo máximo posible el
crecimiento de E. coli en los alimentos. La congelación tiene un menor efecto sobre
la población de E. coli en el alimento, no garantiza la destrucción de un número
suficiente de bacterias viables para asegurar su inocuidad. Sin embargo, E. coli es
sensible a temperaturas mayores a 70 ºC, a partir de la cual son fácilmente
eliminadas; por ello, es muy importante la pasteurización de alimentos como la
leche, zumos, etc., para garantizar su eliminación (Canet, 2016).
12
Además de la temperatura, el pH y la actividad de agua pueden influir en la
proliferación de E. coli. Las condiciones óptimas de desarrollo para estos
parámetros son de 7,2 y 0,99 respectivamente. El desarrollo de E. coli se detiene a
pH extremos (inferiores a 3,8, o superiores a 9,5), y valores de aw inferiores a 0,94.
Por ello, el grado de acidez de un alimento puede constituir un factor de protección
y garantizar su seguridad (Canet, 2016).
E. coli presenta múltiples características, y constituye el taxón bacteriano
mejor estudiado, aunque el conocimiento de las cepas salvajes es aún parcial.
Parece, que las facultades de adaptación de esta bacteria son poco comunes,
debido a la adquisición de nuevos genotipos a partir de plásmidos, bacteriófagos, y
otros elementos que transmiten su material genético. Además, su conocida
capacidad de ubicuidad favorece la aparición reiterada de cepas con nuevas
propiedades, incluyendo capacidades patógenas no fácilmente reconocibles
(Canet, 2016).
II.2.3 Síntomas
Entre los síntomas de la enfermedad causada por E. coli productora de
toxina Shiga destacan los calambres abdominales y la diarrea, que puede progresar
en algunos casos a diarrea sanguinolenta (colitis hemorrágica). También puede
haber fiebre y vómitos. El periodo de incubación varía entre tres y ocho días, con
una mediana de tres a cuatro días. La mayoría de los pacientes se recuperan en el
término de diez días, pero en un pequeño porcentaje de los casos (especialmente
niños pequeños y ancianos) la infección puede conducir a una enfermedad
potencialmente mortal, como el síndrome hemolítico urémico (SHU). El SHU se
caracteriza por una insuficiencia renal aguda, anemia hemolítica y trombocitopenia
(deficiencia de plaquetas) (OMS, 2018).
Se estima que hasta un 10% de los pacientes con infección por E. coli
productora de toxina Shiga pueden desarrollar síndrome hemolítico urémico, con
una tasa de letalidad de 3%-5%. Globalmente, el SHU es la causa más común de
insuficiencia renal aguda en los niños de corta edad. Pueden aparecer también
13
complicaciones neurológicas (como convulsiones, accidente cerebrovascular y
coma) en el 25% de los pacientes con SHU, así como secuelas renales crónicas,
generalmente leves, en aproximadamente un 50% de los supervivientes.
Las personas que sufren diarrea sanguinolenta o calambres abdominales
intensos deben buscar atención médica. Los antibióticos no deben formar parte del
tratamiento de los pacientes con enfermedad por E. coli productora de toxina Shiga,
y posiblemente aumentan el riesgo de SHU posteriormente.
II.2.4 Fuentes y transmisión
La mayor parte de la información disponible sobre E. coli productora de
toxina Shiga guarda relación con el serotipo O157: H7, pues es el más fácil de
distinguir bioquímicamente de otras cepas de E. coli. El reservorio de este patógeno
es principalmente el ganado bovino. También se consideran reservorios
importantes otros rumiantes, como ovejas, cabras y ciervos, y se ha detectado la
infección en otros mamíferos (como cerdos, caballos, conejos, perros y gatos) y
aves (como pollos y pavos) (OMS, 2018).
E. coli O157: H7 se transmite al hombre principalmente por el consumo de
alimentos contaminados, como productos de carne picada cruda o poco cocida y
leche cruda. La contaminación fecal del agua y de otros alimentos, así como la
contaminación cruzada durante la preparación de estos (con carne de vacuno y
otros productos cárnicos, superficies y utensilios de cocina contaminados), también
es causa de infecciones. Ejemplos de alimentos implicados en brotes de E. coli
O157: H7 son las hamburguesas poco cocidas, el salami curado, la sidra fresca no
pasteurizada, el yogur y el queso elaborado con leche cruda (OMS, 2018).
Un número creciente de brotes se asocian al consumo de frutas y verduras
(como las coles de Bruselas, las espinacas, la lechuga, las ensaladas de col y de
otro tipo) contaminadas por el contacto con las heces de animales domésticos o
salvajes en algún momento durante su cultivo o manipulación. También se ha
aislado E. coli productora de toxina Shiga en masas de agua (estanques y arroyos),
14
pozos y abrevaderos, y se ha observado que puede sobrevivir durante meses en el
estiércol y en los sedimentos de recipientes de agua. Se ha informado de casos de
transmisión por el agua, tanto por agua de bebida contaminada como por aguas de
recreo (OMS, 2018).
Los contactos de persona a persona son una forma de transmisión
importante por vía oral-fecal. Se ha informado de un estado de portador
asintomático, en el que la persona no muestra signos clínicos de la enfermedad,
pero puede infectar a otros. La excreción de E. coli productora de toxina Shiga dura
aproximadamente una semana o menos en los adultos, pero puede prolongarse
más en los niños. Se ha observado que otro factor de riesgo importante de infección
por E. coli productora de toxina Shiga son las visitas a granjas y otros lugares donde
el público en general puede entrar en contacto directo con el ganado (OMS, 2018).
II.2.5 Prevención
Para prevenir la infección hay que aplicar medidas de control en todas las
etapas de la cadena alimentaria, desde la producción agropecuaria en la granja
hasta la elaboración, fabricación y preparación de los alimentos en las cocinas tanto
de establecimientos comerciales como de los hogares (OMS, 2018).
II.3. Staphylococcus aureus
El patógeno humano Staphylococcus aureus se caracteriza por ser uno de
los microorganismos más importantes, produciendo infecciones de heridas
quirúrgicas, de prótesis y otras a nivel nosocomial, como también se destaca en la
comunidad y nivel hospitalario. Las infecciones por S. aureus son muy continuas
en la comunidad, a menudo son agudas, piogénicas, y superficiales, así mismo
puede producir infecciones profundas con menor frecuencia como osteomielitis,
endocarditis aguda y neumonía (Seija, 2006).
El S. aureus es causante de varias infecciones producidas por toxinas como
el síndrome de piel escaldada, la intoxicación alimentaria, y el síndrome del shock
15
toxico. El integrante de la flora normal de la piel, Staphylococcus epidermidis,
produce infecciones crecientes de piel, colonizando cuerpos extraños, así mismo
es causa de infecciones profundas en huéspedes inmunocomprometidos. En la
mujer joven se encuentra una infección urinaria baja que es causada por el
Staphylococcus saprophyticus (Seija, 2006).
II.3.1 Taxonomía
Reino: Prokaryotae
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Straphilococcaceae
Género: Staphilococcus
Especie: S. aureus
II.3.2 Características
El género S. aureus está formado por cocos Gram positivos, con un diámetro
de 0.5 a 1.5 μm. Son bacterias sin movilidad, no esporuladas, no poseen cápsula,
aunque existen algunas cepas que desarrollan una cápsula de limo, son anaerobias
facultativas (Garcia, 2014).
Los estafilococos producen catalasa (enzima capaz de desdoblar el peróxido
de hidrógeno en agua y oxígeno libre); característica que se utiliza para diferenciar
el género Staphylococcus de los géneros Streptococcus y Enterococcus que son
catalasa negativos. Los estafilococos fueron clasificados inicialmente en un género
común en la familia Micrococacea además de los géneros Micrococcus,
Stomacoccus y Planococcus (Garcia, 2014).
16
II.3.3 Morfología
Se observa asociación en racimos irregulares (similar a un racimo de uvas)
carecen flagelos, no producen esporas y rara vez pueden tener capsula. Tienen
una forma esférica y un diámetro de alrededor de una micra (Andres, 2016).
Para obtener una morfología macroscópica debemos obtener un aislamiento
de la cepa a estudiar en la caja de Petri, ya que se observa las características de
las colonias. Cuando se incuban los cultivos por 24 a 48 horas en temperatura
ambiente, se va a observar la producción del pigmento satisfactoria. El
Staphylococcus aureus en medios no selectivos presentas colonias de 1 a 3 mm
de diámetro, levemente convexas, elevadas, de bordes enteros y respectivamente
pigmentadas con un color que puede varias de crema a amarillo (Seija, 2006).
En agar nutritivo chocolate, soya tripticasa y sangre, se ven colonias
blanquecinas, de forma circular, bordes redondeados, superficie lisa y convexa.
Algunas cepas producen un pigmento carotenoide que les da un color dorado
(Seija, 2006).
II.3.4 Otras Características
Colonias convexas, brillantes y lisas.
Adquirir un Endo pigmento en donde se lo conoce como aureus dando color
amarillo naranja a blanco porcelana color dorado.
Fermenta maltosa, lactosa y glucosa.
El crecimiento se encuentra dentro de un rango de temperatura de 65 a 50º
C siendo óptimo entre 30 a 40º C
17
II.3.5 Epidemiologia
Durante varias décadas se han reportado un gran número de brotes
epidémicos de S. aureus a nivel mundial, sobre todo en los hospitales, centros de
atención y clínicas. Estas infecciones por S. aureus resultan reemergentes debido
a que la bacteria se ha tornado resistente a diversos antibióticos con los que
normalmente se les trata. Actualmente, estos brotes se dividen como infecciones
nosocomiales e infecciones adquiridas en la comunidad (Garcia, 2014).
Las infecciones por S. aureus se clasifican en 3 subgrupos: adquiridas en
hospitales (nosocomiales), adquiridas en la comunidad y hospitales (no
nosocomial) e infecciones iniciales en el proceso de la enfermedad. Un estudio
realizado en Carolina del Norte entre finales del 2000 y finales del 2001,
identificaron 504 infecciones al torrente sanguíneo de las cuales el 35% fueron
nosocomiales, 28% adquiridas en la comunidad y 37% asociados en la comunidad
de inicio (Garcia, 2014).
II.3.6 Diagnóstico
Los datos clínicos y epidemiológicos son fundamentales para orientar el
diagnóstico microbiológico, así como la sospecha del agente etiológico
causante de la infección, por lo que se requiere del aislamiento y la
identificación de S. aureus a partir de muestras clínicas. Entre dichas
muestras se encuentra la sangre, tejidos, líquidos normalmente estériles,
aspirados de abscesos, las cuales al ser teñidas con la tinción de Gram
permiten observar la forma y agrupación, así como una respuesta
inflamatoria con la presencia de leucocitos polimorfonucleares (Garcia,
2014).
18
II.3.7 Tratamiento
Se ha tratado de combinar la vancomicina con la rifampicina, ácido fusídico
o fosfomicina, aunque en los ensayos clínicos aleatorios no se ha demostrado la
ventaja de dichas combinaciones sobre la vancomicina sola. Estos antibióticos no
deben prescribirse solos porque seleccionan mutantes resistentes, pero pueden ser
útiles cuando se combinan con la vancomicina para el tratamiento de las
infecciones óseas, articulares, endocarditis o meningitis, gracias a su mayor
distribución tisular.
Las cepas SARM (S. aureus resistente a meticilina) son, a menudo,
resistentes a los aminoglucósidos, quinolonas, clindamicina y macrólidos. Además,
no siempre la demostración de sensibilidad in vitro frente a estos antimicrobianos
lleva aparejados buenos resultados terapéuticos. La asociación de vancomicina
con gentamicina, si la cepa SARM es sensible a ésta, podría emplearse en casos
de endocarditis infecciosa sobre prótesis valvulares (Camarena & Sanchez , 2011).
El tratamiento de elección para la infección por S. aureus es la penicilina,
pero en la mayoría de los países, la resistencia a la penicilina es muy común y la
terapia de primera línea es más una penicilina penicilinasa-resistente (por ejemplo,
oxacilina o flucloxacilina). El uso de la terapia de combinación con gentamicina es
controvertido debido al riesgo de daño a los riñones. La duración del tratamiento
depende del sitio de la infección y la gravedad (Newsmedical, 2012).
II.4 Cándida albicans.
Son agentes patógenos que se encuentran en todas partes, es decir su
distribución geográfica es universal como por ejemplo en los vegetales, suelo,
aguas, aire en ciertos alimentos y son parte de la biota natural de la piel y
membranas mucosas en los humanos y otros mamíferos (Vasquez & Sobel, 2011).
19
II.4.1 Morfología.
Es un hongo con forma alargadas de seudohifas, ya que es dimorfo, y
blastoconidios, fermentadores de azúcares. Las células son unicelulares, redonda
u ovaladas, de crecimiento rápido, sus colonias cremosas o pastosas.
II.4.2 Clasificación taxonómica
Reino: Fungi
División: Deuteromycota
Clase: Blastomycetes
Familia: Cryptococcaceae
Género: Cándida
Especie: albicans
Estos microorganismos se los ha clasificado como Levaduras del Phylum
ascomycotina, del género Cándida, de las cuales hay más de 150 especies
identificadas. De las más reportadas como patógenas tenemos unas 17 especies,
siendo la más típica causante de enfermedades agudas y crónicas, la Cándida
albicans sobre todo el serotipo B. (Vasquez & Sobel, 2011)
Le sigue la Cándida tropicalis y la Cándida parapsilosis que están entre el
15% y el 30% de más frecuentes en las enfermedades y entre las menos presentes
tenemos a las Cándidas krusei y la dubliniensis que constituyen menos del 1% de
los casos clínicos más frecuentes (Vasquez & Sobel, 2011).
La especie Cándida se la puede reconocer porque se presenta como una
levadura mitospórica de forma alargada y algo redondeado, llegando a medir entre
2x6 o 3x9 um. Su reproducción es por gemación y al ser una levadura forma las
hifas (Vasquez & Sobel, 2011).
20
II.4.3 Epidemiología.
Producen la enfermedad llamada Candidiasis, siendo los casos de tipo
superficial las más comunes o típicas, tiene relación con problemas en la
hidratación y cambios en el pH de la piel, boca, faringe y otros tejidos superficiales
(Rojas & Bonifaz, 2016).
Es de fácil tratamiento y que por lo general no son causantes de la muerte
de los pacientes, no así los casos de tipos sistémicas que son invasivas que pueden
ser agudas o crónicas y que si pueden causar la muerte del paciente (Rojas &
Bonifaz, 2016).
Todo esto se relaciona con que el sistema inmune se encuentra reprimido
en estos pacientes, por lo que se llega a observar en pacientes que tienen el VIH
avanzado hasta en el 1% (Rojas & Bonifaz, 2016).
Así también se ha demostrado que no existe relación con la edad, raza o
sexo, salvo que se trate de la Candidiasis urogenital que es más frecuente en las
mujeres que en los hombres, pero sí existe una relación directa con el tipo de
actividad o trabajo que se esté realizando porque las condiciones pueden favorecer
su desarrollo ya que son oportunistas (Rojas & Bonifaz, 2016).
II.4.4 Formas clínicas.
II.4.4.1 Bucal.
La más común es la pseudomembranosa que se presenta en los neonatos y
ancianos, se lo encuentra por lo general presente en lengua, carrillo y paladar en
una capa blanca, adherente y membranosa causante de dolor, pérdida del sentido
del gusto y ardor entre otros síntomas (Suscal-Espinoza & Vite-Cano, 2018).
Se observa la estomatitis hipertrófica que es frecuente en aquellas personas
que usan dentadura postiza siendo algunos de los síntomas: la lengua fisurada,
21
gingivitis y algunas hemorragias en las encías (Suscal-Espinoza & Vite-Cano,
2018).
II.4.4.2 Intertriginosa.
Está presente en los pliegues de tejido epitelial que cuelgan en los individuos
obesos, se lo identifica porque presenta descamaciones finas, fisuras, pústulas o
vesículas (Lung & Shu, 2016).
II.4.4.3 Vulvovaginitis.
Se manifiesta en los ciclos menstruales y en el embarazo por lo que se
presenta en el 75% de las mujeres en edad reproductiva, produciendo eritema
intenso en la vulva y la mucosa vaginal que se pueden extender hasta el periné, los
síntomas son: prurito, sensación urente, disuria y dispareunia. Los pacientes VIH
positivo son los que más frecuentemente vuelven a recaer (Lung & Shu, 2016).
II.4.4.4 Balanitis.
Se presenta de forma asintomática en algunos pacientes que aún no se han
circuncidado, manifestándose la existencia de pápulas muy localizadas, el glande
se presenta eritematoso y con dolor que pueden llegar a ser crónicos ( (Lung & Shu,
2016).
II.4.4.5 Candidiasis por el pañal.
Se produce debido a que no hay un cambio de pañal a tiempo y la piel en
contacto con la orina producen unas placas eritematosas, con presencia de
descamación, pápulas y pústulas que en algunos casos se combina con la
presencia de bacterias (Husein, 2012).
22
II.4.6 Onicomicosis y perionixis.
Es una infección que se presenta en la uña del pie, en donde el ataque por
Cándida se combina con otros hongos, produciendo edema, dolor y exudado.
II.4.7 Esofagitis.
Es muy común en pacientes que padecen del VIH y los síntomas son:
náuseas, disfagia, vómitos, hematemesis y dolor retroesternal. También puede
presentarse asintomática y se lo diagnostica por medio de una endoscopia en
donde se comprueba las lesiones porque aparece una forma de empedrado.
La Candidiasis es común en pacientes que son VIH positivos en donde
suelen estar atacando los diversos órganos como por ejemplo los intestinos en
donde por medio del análisis de las heces se encuentran colonias de levaduras
superior al 70%, produciendo diarreas, fiebres, etc. También atacan la región
pulmonar causando cuadros muy severos de bronquitis y neumonías, esta última
puede causar hasta la muerte del paciente (Cervera, Gurguí, & Lumbreras, 2011).
II.4.8 Endocarditis.
Se manifiesta generalmente en pacientes que reciben nutrición parenteral
debido a la infección de las válvulas cardíacas o si el paciente ha sido operado a
corazón abierto. También se presenta en individuos que son drogodependientes
por vía venosa en donde se puede presentar una endocarditis fúngica (Cervera,
Gurguí, & Lumbreras, 2011).
II.4.9 Tracto urinario.
Hay mayor riesgo de padecer esta infección por el uso de sondas urinarias
y el porcentaje de infección llega al 11% de los casos en que las Cándidas estén
presentes, los síntomas más frecuentes son: fiebre, dolor en el flanco, anuria hasta
el fallo renal. En las mujeres la vaginitis se la relaciona con la presencia de las
23
Cándidas (Pineda-Murillo, Cortez-Figueroa, Uribarren-Berrueta, & Castanon-
Olivares, 2017).
II.4.10 Sistema nervioso central.
Su afectación es directamente a las meninges y al parénquima
produciéndose unos microabscesos en ambas partes en donde la autopsia revela
que la muerte se debió a un aumento de la tensión intracraneal y baja de glucosa
(Peman & Zaragoza, 2012).
II.4.11 Peritonitis.
Se presenta por lo general en pacientes que se someten a diálisis peritoneal
continua ambulatoria y en aquellos que se le ha practicado una cirugía al intestino.
Esta peritonitis es causada en la mayoría de las veces por la Cándida albicans
(Peman & Zaragoza, 2012).
II.4.12 Ocular.
Se manifiesta en pacientes que han sido sometidos a cirugías y los que
sufren de endoftalmitis, los síntomas son: dolor ocular, visión borrosa, etc. Pueden
producir hasta la ceguera (Peman & Zaragoza, 2012).
II.4.13 Tratamientos.
Los tratamientos pueden ser de tipo tópico. En muchos casos la simple
aplicación de ciertos productos van a producir un alivio o mejora en el paciente
hasta la cura total como es el caso de la aplicación del vinagre blanco diluido, la
solución saturada de bicarbonato de sodio, el colorante violeta de genciana,
algunos fármacos como la Nistina, Imidazoles como el Ketoconazol, Clotrimazol y
el Econazol (Peman & Zaragoza, 2012).
24
Otros casos requerirán de tratamientos sistémicos por medio de: Terbinafina,
Itraconazol, Fluconazol, Anfotericina B, Campofunginas, Voriconazol, Posaconazol,
etc. Todos estos fármacos se deben de usar a través de un control realizado por un
especialista debido a que los compuestos azólicos pueden originar infecciones más
severas y resistentes como es el caso de Candidas krusei y Candidas glabrata
(Peman & Zaragoza, 2012).
II.5 Antibiograma
El antibiograma microbiológicamente es la prueba para determinar la
susceptibilidad (sensibilidad, intermedio o resistencia) de una bacteria a un grupo
de antibióticos. En el laboratorio de microbiología son utilizadas las técnicas del
antibiograma que en general estudia la actividad de los antimicrobianos frente a los
microorganismos de interés (Aguila, 2016).
En un ensayo de actividad antimicrobiana de extractos vegetales, se debe
seleccionar los microorganismos a utilizar, y escoger antimicrobianos
estandarizados como controles positivos (Rodriguez, 2016).
II.5.1 Discos para antibiograma
Los discos para antibiograma tienen la concentración que otorga una
correlación necesaria con la concentración mínima inhibitoria, dado el antibiótico,
según los resultados estandarizados de resistencia o susceptibilidad.
Cada tubo de discos para antibiograma contiene 50 discos. Al momento de
usarlos en cada ensayo se deben almacenar a una temperatura de 2 y 8 ºC. Los
discos que se utilizan a largo plazo, deben almacenarse a -20ºC (Aguila, 2016).
II.5.2 Método por difusión en agar
Basado en el método Kirby- Bauer en el antibiograma disco placa que
determina la sensibilidad del microorganismo al antimicrobiano. Se ubican en la
25
superficie de agar en una placa de Petri ya solidificado los discos de papel filtros
saturado con concentraciones conocidas de los agentes microbianos.
El periodo de incubación es de 18-24 horas; los antimicrobianos se difunden
en el agar, y los discos aparecen rodeados por una zona de inhibición. La
concentración mínima inhibitoria (CMI) obtenidas por el método de dilución se la
determina en microorganismos en crecimiento. Si la concentración del
antimicrobiano es efectiva, se forma un halo de inhibición alrededor del disco.
Para interpretar la CMI de una cepa, se mide el diámetro, expresado en mm
del halo de la zona de inhibición. Por lo tanto, la lectura se interpreta mediante una
tabla de ese fármaco, se verifica y se reporta si el microorganismo es (S) sensible,
(I) intermedio (R) resistente al antimicrobiano (Rodriguez, 2016).
Figura 1 Antibiograma
Fuente: (Aguila, 2016)
II.5.3 CMI (Concentración Inhibitoria Mínima)
Es la base para medir la sensibilidad bacteriana a un antibiótico o también
es la capacidad del antimicrobiano para inhibir el crecimiento de las bacterias
(Aguila, 2016).
TSA: Agar de
tríptico soya
TSB: Caldo
tripticasa soya
SS: Sales biliares
26
Hay diferentes métodos cualitativos para categorizar una cierta cepa
microbiana en función de su sensibilidad frente al antibiótico en estudio (Aguila,
2016).
La lectura de los halos de inhibición permite categorizar el resultado como
sensible, intermedio y resistente para un determinado antimicrobiano (Aguila,
2016).
Sensible: Cuando un aislamiento microbiano es inhibido in vitro por una
concentración de un antimicrobiano lo que permite producir una alta
probabilidad para un efecto terapéutico exitoso (Aguila, 2016).
Intermedio: Cuando un aislamiento microbiano es inhibido parcialmente in
vitro por una concentración de un antimicrobiano que sugiere un efecto
terapéutico imprevisible (Aguila, 2016).
Resistente: Cuando un aislamiento microbiano no es inhibido in vitro por
una concentración dada de un antimicrobiano, lo que se asocia con una alta
probabilidad de efecto terapéutico nulo o muy reducido (Aguila, 2016).
27
Interpretación de los halos de inhibición en el antibiograma
Figura 2 Diámetro de halos de inhibición
Fuente: (Estrella, 2016).
Figura 3 Interpretación de las pruebas de sensibilidad según el CLSI
Fuente: (Estrella, 2016).
28
II.5.4 Extracto
Se denomina extracto a las preparaciones que tienen una consistencia
liquida, semisólidas y solidas que se pueden obtener de los tejidos vegetales o
tejidos animales en condiciones secas (Castillo & Martinez , 2016).
Los extractos pueden ser de diversas naturalezas, siendo llamados extractos
ajustados a los que se encuentra dentro de un rango de tolerancia aceptable siendo
relacionado al metabolito con la actividad terapéutica conocida (Castillo & Martinez
, 2016).
Mientras que los extractos conocidos como estandarizados se los obtiene
por el ajuste del extracto con reactivos inertes, los extractos cuantificados son
conocidos por el ajuste a un rango definido de constituyentes (Castillo & Martinez ,
2016)
Generalmente los extractos se preparan aplicando varios métodos
apropiados, usualmente se ha de usar etanol u otro tipo de solventes adecuados.
La droga obtenida de origen vegetal o animal debe pasar primeramente por un
tratamiento preliminar, inactivación de las enzimas, una molienda o también
trituración, eliminando materias indeseadas antes de la extracción (Castillo &
Martinez , 2016).
Para la preparación de los diferentes extractos de los tejidos vegetales o
animales en contacto con solventes orgánico, estos deben de cumplir con las
normas vigentes en la farmacopea. En la situación que se presenten los extractos
que sean de naturaleza densas y secos se debería de eliminar el solvente orgánico
por evaporación, se puede usar solvente recuperado o reciclado, pero el
procedimiento de recuperación ha de ser controlado para que el solvente cumpla
los patrones apropiados antes de ser nuevamente usado o para la mezcla con otros
materiales usualmente aceptados (Castillo & Martinez , 2016).
29
En las extracciones donde se utiliza un solvente conocido se conduce a las
proporciones típicas de un constituyente caracterizado en la materia extraíble. Pero
durante el proceso de estandarización y cuantificación, se pueden aplicar
procedimientos de purificación para incrementar estas proporciones en relación al
valor esperado; a estos extractos se los conoce como “refinados” (Castillo &
Martinez , 2016).
II.5.5 Obtención de extractos
Todas las plantas contienen mezclas de compuestos llamados bioactivos
como los lípidos, grasas, fitoquímicos, fragancias, pigmentos y sabores que son
útiles a nivel de la agroindustria alimentaria y no alimentaria, en la industria
farmacéutica y en la industria cosmética (Geankopolis, 1999).
Para lograr separar estos compuestos (solutos) de la fase sólida,
generalmente se pone en contacto con una fase líquida; ambas fases entran en
contacto íntimo con los solutos los cuales se difunden desde el sólido a la fase
líquida, lo que permite una separación de los componentes fuera su estructura
natural original (Geankopolis, 1999).
Los extractos son una mezcla de soluciones fitoquímicas de plantas
terapéuticas los cuales se obtienen por medio del método de maceración, filtración,
usando diferentes solventes (agua destilada, alcohol, etc.), a partir de material seco
(Alvarez & Bague, 2012).
La trituración del vegetal se realiza con el fin de reducir las partículas que al
empapar la muestra triturada con el disolvente inicia el proceso de maceración
durante un tiempo determinado. La filtración tiene como objetivo separar el residuo
que queda y obtener la solución clarificada (Castillo & Martinez , 2016).
30
CAPITULO III. MATERIALES Y MÉTODOS
III.1 Tipo de investigación
De acuerdo a las características y al alcance de los resultados, es un estudio
de tipo:
Experimental: Debido a la introducción y manipulación de los extractos para
la determinación del efecto antibacteriano, ya que se cuenta con un grupo
control positivo, un grupo control negativo y grupo experimental del extracto
acuoso y alcohólico de los rizomas de la calaguala en diferentes
concentraciones.
Transversal: Debido a que el estudio se realizó en un determinado tiempo,
ya que las variables fueron observadas en un solo momento después de
trascurrir un corto periodo de tiempo con una aproximación de 72 horas
después de realizado el cultivo.
In vitro: Debido a que la investigación se lleva a cabo en medios de cultivo
que sirven para el desarrollo de las bacterias y se manipulo de manera
intencional las condiciones de la investigación.
Analítico: Debido a que nos permite analizar los diferentes componentes
que presentan los extractos y como estos influyen en la acción
antibacteriana.
III.2 Diseño de la investigación.
La investigación de este trabajo es experimental, se realizó con medios de
cultivos, cepas biológicamente activas y la especie botánica con actividad
31
terapéutica. Para la recolección de datos, se anotaron los datos obtenidos a través
de una medición de los halos de inhibición obtenidos en cultivos realizados
utilizando diferentes concentraciones.
III.3 Lugar de la investigación.
La investigación se realizó en:
Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Ciencias Químicas en la
Universidad de Guayaquil.
III.4 Período de la investigación.
El trabajo se lo realizó de octubre a enero del 2019
III.5 Recursos empleados.
III.5.1 Talento humano.
Investigadores: Saltos Burgos Carolina Lisbeth, Tapia Castro Lainus Jerel.
Tutora: Q.F. Alarcón Perasso María Auxiliadora, Mgs.
III.5.2 Muestra
Calaguala (Phlebodium pseudoaureum) (Rizoma): Actividad antimicótica y
antibacteriana.
32
III.6 Metodología
Técnica procedimental
En este trabajo se evalúa la actividad antimicótica y antibacteriana de la
planta calaguala contra la presencia de E. coli, S. aureus y C. albicans.
III.7 Recolección y selección del material vegetal.
La recolección de la planta se realizó en el mercado Florida de la ciudad de
Guayaquil. Se seleccionó los rizomas a los cuales se le practicaron los análisis.
33
III.8 Comprobación taxonómica.
Figura 4 Clasificación taxonómica de la planta Phlebodium pseudoaureum
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
34
III.9 Secado y trituración del material vegetal.
En un kilogramo del rizoma de la planta calaguala, se seleccionó los rizomas
en mejores condiciones, se los llevó a lavar con agua de la llave y jabón para quitar
cualquier residuo no deseado.
Una vez seleccionado el material, se picó finamente, se envolvió en papel
periódico y se procedió a secar al ambiente por el lapso de 5 días.
Posterior a esto, se trituró el material vegetal desecado y se procedió con el
análisis.
III.10 Factores de estudio.
Los factores de estudio de esta investigación fueron:
Preparación de los extractos alcohólicos y extractos acuosos de la
Calaguala.
Equipos
TABLA I Equipos utilizados en el análisis microbiológico
Equipos Descripción
Estufa Memmert
Autoclave Memmert
Incubadora Memmert
Mini Vortex WWR Scientific products
Desimetro Densimat
Refrigeradora Durex
Mechero de Bunsen ------------------------
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
35
Materiales
TABLA II Materiales usados en el laboratorio de Microbiología
Materiales Asa
Probeta Hisopo
Gradilla Alcohol
Cajas Petri Algodón
Pipeta automática Tubos de ensayo
Pipetas serológicas Puntas para pipeta automática
(amarilla y azul)
Vasos de precipitación ---------------------------------
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
Reactivos
TABLA III Reactivos que se utilizaron en el análisis microbiológico
Reactivos
Cepas ATCC
Discos Blancos
Disco Fluconazol
Agar Müller Hinton
Disco Gentamicina
Disco Ciprofloxacina
Caldo cerebro corazón
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019).
36
III.11 Obtención de los extractos
III.11.1 Extracto alcohólico
Se pesó 30 gramos del rizoma triturado en un matraz esterilizado añadiendo
120 ml alcohol 50:50; al día siguiente, se observó la absorción total del alcohol,
adicionando luego 60 ml más de alcohol, con un total de 180 ml de alcohol 50:50.
Se le procedió a cubrir con papel aluminio, y se maceró por un tiempo de 8 días
homogenizando todos los días hasta el 8vo día; a continuación se procedió a filtrar
colocando en botellas de vidrio, las mismas que fueron transportadas al laboratorio
de Microbiología para posterior análisis.
III.11.2 Extracto acuoso
Se pesó 30 gramos del rizoma triturado en un matraz esterilizado al cual se
le adiciono de agua llevada a ebullición y luego entibiada, se procedió a envolver
en papel aluminio, manteniéndolo por 24 horas con homogenizaciones continuas.
A continuación, se procedió a filtrar colocando en botellas de vidrio para
posterior análisis microbiológico.
PRECAUCIÓN: Es importante resaltar que el extracto acuoso tiene un
tiempo de vida útil de 24 horas después de haber sido procesado.
III.12 Análisis microbiológico
La prueba de sensibilidad tiene como objetivo conocer si los
microorganismos ensayados son sensibles o resistentes a los antimicrobianos y
sirven para elegir de forma óptima el tratamiento antibacteriano y anti fúngico.
37
Cepas Control
Escherichia coli ATCC 25922
Staphylococcus aureus ATCC 29213
Cándida Albicans ATCC 10231
Es importante destacar que las cepas fueron donadas por el Laboratorio
Clínico de la Clínica Alcívar.
Para su reactivación las cepas fueron incubadas en agar Mueller Hinton.
Extracto Alcohólico y Acuoso
Para el presente trabajo de investigación del extracto al 100%, se procedió
a trabajar además las diluciones al 70 y 40%.
III.12.1 Dilución de la cepa en caldo cerebro corazón: dilución de 0.5
MacFarland
En un tubo de
ensayo
agregar 5 ml
de la solución
caldo cerebro
corazón
posteriorment
e inocular con
el asa la cepa
control
Llevándolo al tubo
de ensayo y rotar
contra las
paredes del
mismo para
remover el exceso
del inoculo
agitando
Homogenizándolo
en el mini vortex de
muestras en la
solución de
MacFarland
cerebro corazón
ajustando la escala
de 0.5 mediante el
equipo Densimat.
38
III.12.2 Preparación de solución Caldo cerebro corazón al 0.5 MacFarland.
Extracto Alcohólico: Método por difusión
1. Se preparó el agar Mueller Hinton precautelando que se adicione en la caja
Petri con la cantidad suficiente de agar que alcance los 4 mm de espesor,
para una correcta reacción antimicrobiana.
2. Posterior a esto se procedió a embeber los discos blancos con el extracto
alcohólico al 100%, para obtener la concentración necesaria.
3. Luego se procede a preparar las cepas control en 3 tubos S.aureus, E. coli,
C. albicans usando el Caldo cerebro corazón hasta obtener una
concentración de 0.5 de MacFarland.
4. Inocular uniformemente las cepas control sobre la superficie del agar en la
caja Petri. Se colocan los discos blancos embebidos del extracto alcohólico
y los discos control, sobre la superficie del agar y presionar sutilmente para
que los discos tengan un toque uniforme.
5. Los discos se colocan conservando la distancia según norma establecida
CLSI (Clinical Laboratoy Standards Institute), basado en el trabajo de Kirby
Bauer.
39
6. Por lo tanto, son 3 cajas Petri control y 3 cajas Petri para los discos
embebidos para cada extracto. Es importante recalcar que el trabajo se
realizó por triplicado con sus diferentes concentraciones.
7. Incubar las cajas a 37ºC +- 2ºC y leer las cajas después de 24 horas.
Extracto Acuoso: Método por difusión
1. Se preparó el agar Mueller Hinton precautelando que se adicione en la caja
Petri la cantidad suficiente de agar que alcance los 4 mm de espesor, para
una correcta reacción antimicrobiana.
2. Posterior a esto se procedió a embeber los discos blancos con el extracto
acuoso al 100%, y sus diluciones del 70 y 40%.
3. Luego se procedió a preparar las cepas control en 3 tubos S. aureus, E. Coli,
C. albicans usando el Caldo cerebro corazón en una concentración de 0.5
de MacFarland.
4. Inocular uniformemente las cepas control sobre la superficie del agar en la
caja Petri, en lo cual se colocan los discos blancos embebidos del extracto
acuoso con sus diversas concentraciones como también los discos control.
Presionar sutilmente para que los discos tengan un toque uniforme.
5. Los discos se colocan conservando la distancia según la norma establecida
por la CLSI (Clinical Laboratoy Standards Institute, basado en el trabajo de
Kirby Bauer.
6. Por lo tanto, son 3 cajas Petri control y 9 cajas Petri para los discos
embebidos con el extracto acuoso por triplicado.
7. Incubar las cajas a 37ºC +- 2ºC y leer las cajas después de 24 horas.
40
CAPITULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
IV.1 Resultados: Extracto alcohólico
Se pudo observar que de las diluciones realizadas al 40% - 70% y 100% del
extracto alcohólico, solamente la concentración del 100% presentó sensibilidad
frente a los microorganismos S. aureus y C. Albicans (Tabla IV y grafico 1).
El antibiótico disco control que se utilizó fue Ciprofloxacina para S. aureus,
Gentamicina para E. coli y Fluconazol para C. albicans.
TABLA IV Resultados del Extracto Alcohólico
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
Halos de inhibición
Según los criterios que han sido emitidos por la Sociedad Latinoamérica de
Fitomedicina en el documento que dice “Técnicas de Comprobación de la Actividad
Terapéutica las Plantas Medicinales”, se indica que, si el halo es mayor a 9 mm, el
resultado es positivo, es decir es susceptible.
Cepa
testeada
Discos
control
Concentraci
ón del disco
control
Halo de
inhibición
del disco
control
Discos
con el
extracto
Halos de
inhibición
Staphylococ
cus aureus
Ciproflox
acina 5 µg 15 mm - 12 mm
Echerichia
coli
Gentamic
ina 30 µg 15 mm - 6 mm
Candida
albicans
Fluconaz
ol 25 µg 10 mm - 8 mm
41
Si el halo es menor a 9, de entre 6 – 9 mm se considera que la actividad es
intermedia o susceptible dependiendo de las concentraciones de los extractos.
Si el halo es inferior a 6 mm se considera negativo o llamado también
resistente; todos estos valores se aplican solamente para los extractos de origen
vegetal (Morales & Dentone, 2017).
Gráfico 1 Resultado de la actividad antimicrobiana del extracto alcohólico
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
IV. 2 Resultados: Extracto acuoso
El resultado obtenido del extracto acuoso, frente a los diferentes
microorganismos analizados demostró ser resistente a todos ellos.
Nota: El antibiótico disco control que se utilizó fue Ciprofloxacina para S.
aureus, Gentamicina para E. coli y Fluconazol para C. albicans.
0
2
4
6
8
10
12
STAPHYLOCOCCUS AUREUS ESCHERICHIA COLI CANDIDA ALBICANS
12
6
8
mili
me
tro
s
Resultado de la actividad antimicrobiana del extracto alcoholico.
Halo de inhibicion
42
TABLA V Resultados del Extracto Acuoso
Cepas
testeadas
Discos
control
Concentraci
ón del disco
control
Halo de
inhibición
del disco
control
Discos
del
extracto
Halos de
inhibición
40
%
70
%
100
%
Staphylococcus
aureus
Ciproflo
xacina 5 µg 15 mm -
6
mm
6
mm
6
mm
E. coli Gentami
cina 30 µg 15 mm -
6
mm
6
mm
6
mm
Candida
albicans
Flucona
zol 25 µg 10 mm -
6
mm
6
mm
6
mm
Gráfico 2 Halo de inhibición del extracto acuoso
Elaborado por: (Saltos & Tapia, 2019)
0
1
2
3
4
5
6
7
Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans
mm
Porcentaje
Halo de inhibición de diferentes concentraciones del extracto acuoso
40% 70% 100%
43
IV. 3 Discusión
Para poder realizar el análisis microbiológico de la calaguala primeramente
se procedió a realizar los extracto alcohólicos y acuosos, con la finalidad de extraer
los compuestos de una gran variedad de polaridades, generando un menor costo y
toxicidad que otros tipos de solventes orgánicos, permitiendo poner a prueba la
efectividad de sus metabolitos secundarios, frente a los siguientes
microorganismos: C. Albicans, E. coli y S. aureus.
Con los extractos alcohólicos se demostró sensibilidad microbiana frente a
las cepas de S. aureus y C. Albicans, frente a los extractos acuosos no se apreció
sensibilidad antimicrobiana frente a ninguna de las cepas ensayadas
44
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
CONCLUSIONES
Se logró evaluar la actividad antimicrobiana y antimicótica del extracto
alcohólico y acuoso obtenido a partir de la planta Calaguala empleando el método
de difusión sobre los microorganismos S. aureus, E. Coli y C. albicans.
La cepa de S. aureus, fue la que presento mayor sensibilidad frente al
extracto alcohólico al igual que la cepa de C. albicans
En el extracto acuoso las cepas S. aureus, E. Coli y C. albicans son
totalmente resistentes. Cabe indicar que el trabajo se realizó por triplicado según
mandan los procedimientos para este tipo de trabajos.
45
RECOMENDACIONES
Se recomienda continuar con nuevos estudios sobre la actividad
antimicrobiana y antimicótica empleando otros tipos de microorganismos de la
familia de las Enterobacteriaceae: Enterococcus así como hongos y levaduras.
Analizar la posibilidad de elaborar productos a base de esta planta calaguala
Phlebodium pseudoaureum, con los beneficios terapéuticos ya que esto ayudaría
a muchas personas de una forma natural.
Realizar más ensayos con otros órganos de la planta Phlebodium
pseudoaureum para analizar la actividad antibacteriana y antimicótica.
46
BIBLIOGRAFÍA
1. Aguila, A. (1 de Agosto de 2016). Antibiograma. Obtenido de
http://www.telmeds.org/wp-content/uploads/2016/11/Antibiograma.pdf
2. Alonso, J. (Septiembre de 2018). Calaguala. Obtenido de
file:///C:/Users/PERSONAL/Downloads/Tratado_de_fitof%C3%A1rmacos_y
_nutrac%C3%A9uticos_----_(Pg_230--233)%20(1).pdf
3. Alvarez, N., & Bague, A. (2012). Tecnología Farmacéutica. Club
Universitario. 158N:978-84-994:-732-8.
4. Andres, M. S. (2016). Staphylococcus aureos . Obtenido de
https://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/Staphylococcus-
aureus.pdf
5. Caceres, A. (Septiembre de 2016). Calaguala. Obtenido de
https://www.casapia.com/Paginacast/Paginas/Paginasdemenus/MenudeInf
ormaciones/PlantasMedicinales/Calaguala.htm
6. Camarena , J., & Sanchez , R. (2011). Infeccion por Staphylococcus aureus
resistente a meticilina. Obtenido de Departamento de Microbiología.
Hospital Universitario Doctor Peset. Valencia:
https://seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/sarm.pdf
7. Canet, J. J. (19 de Enero de 2016). Seguridad e higiene alimentaria.
Obtenido de http://www.betelgeux.es/blog/2016/01/19/escherichia-coli-
caracteristicas-patogenicidad-y-prevencion-i/
8. Castillo , E., & Martinez , I. (2016). Manual de fitoterapia. Barcelona-
España: Elsevier.
9. Cervera, C., Gurguí, M., & Lumbreras, C. (2011). Factores de riesgo de la
enfermedad por citomegalovirus en el receptor de un trasplante de órgano
sólido. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica, 29 suppl 6, 11-
17. doi:10.1016/S0213-005X(11)70051-9
10. Estrella, M. C. (2016). DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LAS
MICOSIS Y ESTUDIOS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIFÚNGICOS.
Obtenido de
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/bibliograf
ia/antifungicos.pdf
47
11. Garcia, E. C. (24 de Febrero de 2014). Características generales del
Staphylococcus. Obtenido de http://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-
2014/pt141e.pdf
12. Geankopolis, C. J. (1999). Procesos de transporte y operaciones unitarias.
Mexico: Continental.
13. gsk. (Junio de 2017). ANTIBIÓTICOS. Obtenido de Análisis microbiológico
y antibiograma :
https://gskpro.com/content/dam/global/hcpportal/es_CO/pdfs/homepage/ant
iinfecciosos/co-ta-ai-Analisis-microbiologico-y-antibiograma.pdf
14. Husein, E. A. (2012). Candidiasis cutánea generalizada en recién nacido a
término. Biomedica, 32, 170-173.
15. Lung, & Shu. (2016). Vulvovaginal candidosis: contemporary challenges
and the future of prophylactic and therapeutic approaches. En Mycoses
Diagnosis, Therapy and Prophylaxis of fungal Diseases (págs. 262-273).
Oxford - UK: John Wiley & Sons.
16. Mendoza, A. (05 de Abril de 2016). CALAGUALA (POLYPODIUM
LEUCOTOMOS POIR). Obtenido de
http://apromeci.org.mx/2016/04/05/calaguala-polypodium-leucotomos-poir/
17. Mendoza, M. V. (2017). EXTRACTO PURIFICADO DE CALAGUALA.
Obtenido de http://www.bvs.hn/RMH/pdf/1985/pdf/Vol53-1-1985-3.pdf
18. Mensa, J. (2016). Guía de tratamiento antimicrobiano de la infección por
Staphylococcus aureus. Obtenido de http://seq.es/seq/0214-
3429/26/sup/guia.pdf
19. Morales, S., & Dentone, S. (2017). Scielo. Obtenido de Determinación in
vitro de la actividad antimicótica del aceite de romero (Rosmarinus
officinalis) sobre Microsporum canis:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1609-
91172017000100005
20. Newsmedical. (18 de 10 de 2012). Obtenido de http://www.news-
medical.net/health/Staphylococcus-Aureus-Treatment.aspx
21. OMS. (7 de Febrero de 2018). OMS. Obtenido de
http://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/e-coli
22. Peman, J., & Zaragoza, R. (2012). Opciones terapéuticas para el
tratamiento antifúngico en el paciente crítico. Revista Iberoamericana de
Micologia, 29, 108 - 113.
23. Perez , A. (7 de Octubre de 2011). Terapia Natural. Obtenido de
http://terapias-naturales-personales.blogspot.com/2011/10/calaguala-
polypodium-calaguala.html
24. Pineda-Murillo, J., Cortez-Figueroa, A., Uribarren-Berrueta, J., & Castanon-
Olivares, L. (2017). Candidosis vaginal. Revisión de la literatura y situación
48
de México y otros países latinoamericanos. Revista médica Risaralda,
23(1), 38 - 44.
25. Rodriguez, J. G. (2016). Procedimientos en Microbiología Clínica. Obtenido
de
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmi
crobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia11.pdf
26. Rojas, & Bonifaz. (2016). Superficial Mycoses Associated with Diaper
Dermatitis. (pág. 191). Panama: Medical.
27. Romero Cabello, R. (2007). Microbiología y Parasitología Humana: Bases
etiologicas de las enfermedades infeccionsas y parasitarias. Mexico:
Medica Panamericana.
28. Seija, V. (2006). Etiopatogenia microbiológica. En I. d. Higiene, Temas de
Bacteriología y Virología Médica (págs. 257-265). Montevideo: FEFMUR.
Obtenido de http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Staphylococcus.pdf
29. Suscal-Espinoza , J., & Vite-Cano, G. (2018). Repositorio Institucional de la
Universidad de Guayaquil. Obtenido de Actividad antimicótica de extractos
acuosos y etanólicos de la planta senna pistaciifolia contra la presencia de
candida albicans(hongos):
http://repositorio.ug.edu.ec/bitstream/redug/28419/1/BCIEQ-T-
0276%20Suscal%20Espinoza%20Johan%20Nicolas%3b%20Vite%20Cano
%20G%C3%A9nesis%20Katherine.pdf
30. Vasquez, & Sobel. (2011). Fundamento de la micología clinica. (págs. 167-
206). New York: Springer.
49
ANEXOS
Anexo 1 Preparación de la muestra
Anexo 2 Preparación del extracto alcohólico
Fotografía 1: Preparación del rizoma Fotografía 2: el rizoma en
trozos pequeño y secado
Fotografía 3: Triturado y pesado para el extracto alcohólico
Fotografía 4: Homogenización diaria del
extracto alcohólico durante 8 días
Fotografía 5: Filtrado y listo a
realizar su análisis
50
Anexo 3 Cepas patrón
Fotografía 6: Cepa de Escherichia coli ATCC 25922 sembrada en
Mac Conkey y Agar soya tripticasa.
Fotografía 7: Cepa Cándida Albicans ATCC 10231
sembrada en CHROM-Agar
51
.
Fotografía 8: Cepa Cándida Albicans ATCC 10231 sembrada
en Agar Saboraud
Fotografía 9: Cepa de Staphylococcus aureus ATCC 29213
sembrada en Agar Manitol Sal
52
Anexo 4 Primera prueba del análisis microbiológico con las diferentes concentraciones del extracto alcohólico
Anexo 5 Preparación de cajas petri para el análisis microbiológico
Fotografía 10: Preparación de las diluciones del
extracto alcohólico.
Fotografía 11: Cajas Petri con su respectivo agar Mueller Hilton
53
Anexo 6 Preparación de las diluciones de los extractos de las cepas control
Fotografía 13: Dilución del extracto en diferentes
concentraciones
Fotografía 12: Dilución de la cepa control en Caldo cerebro corazón
en una concentración de 0.5 de MacFarland.
54
Anexo 7 Resultados de ensayos con el extracto alcohólico
Fotografía 14: Resultado del extracto alcohólico 100% en S. aureus
Fotografía 15: Resultado del extracto alcohólico al 100% en E.
coli
55
Anexo 8 Discos control
Fotografía 17: Discos control con su respectivo antibiótico para cada
microorganismo
Fotografía 16: Resultado del extracto alcohólico al 100% en C.
albicans
56
Anexo 9 Preparación del Extracto Acuoso
Anexo 10
Anexo 10 Diluciones del extracto acuoso para el análisis microbiológico
Fotografía 19: Preparación de las diluciones del extracto acuoso
Fotografía 18: Agua en ebullición y entibiada, pesado y filtrado para el
extracto acuoso
57
Anexo 11 Resultados de los ensayos en el extracto acuoso
Fotografía 20: Resultados del extracto acuso de las
diferentes concentraciones en Staphulococcus aureus
Fotografía 21: Resultados del extracto acuoso de las diferentes
concentraciones en E. coli
Fotografía 22: Resultados del extracto acuoso de las diferentes
concentraciones en C. Albicans