UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANAUNIDAD IZTAPALAPA

CBS

“EFECTO DE LA SEMILLA MADURA DE Carica papaya SOBRE LAMOVILIDAD Y VIABILIDAD ESPERMÁTICA”.

PDI que presenta:

ANDREA RAMÍREZ HERNÁNDEZ

PARA OBTENER EL GRADO DE LICENCIATURA

Asesores:

DRA. REYNA FIERRO PASTRANA

DR. FRANCISCO ALARCÓN AGUILAR

Lugar de realización:

LABORATORIO DE FARCOLOGÍA Y LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR DELDEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD, UAM-I.

JULIO-2004

INTRODUCCIÓN

Las altas tasas de crecimiento en la población mundial representan un grave

obstáculo para el bienestar de la humanidad, la cual primordialmente depende de los

recursos económicos y naturales disponibles en el mundo. En los últimos años la

población mundial sobrepasó los seis mil millones de habitantes, actualmente sólo se

necesitan 50 años para que la población se duplique; En el caso de México en 1950

tenía 28 millones de habitantes y en 1994 su población llegó a 92 millones de

habitantes, triplicándose en 44 años; en la actualidad se necesitan 38 años para que la

población se duplique. Debido a esto, existe una gran preocupación por controlar el

incremento de la población, particularmente en los países del tercer mundo (Silva et al,

2003).

Desde la antigüedad, el hombre ha tenido la necesidad de buscar diferentes

formas para inhibir la fertilidad. La prescripción médica más antigua de un

anticonceptivo data del año de 1850 A.C. y se encuentra en el papiro egipcio Petri. Se

aconsejaba a las mujeres que emplearan un supositorio vaginal confeccionado con

excremento de cocodrilo y miel; esta mezcla pastosa, al parecer impedía la penetración

de esperma al cérvix. Otros intentos por impedir la concepción los llevó a usar

sustancias tales como el excremento de ratón, amuletos y la inducción del estornudo

durante el coito (Méndez, 1989).

Durante el inicio del siglo XX se han llevado a cabo varios intentos por controlar

el crecimiento de la población, y no fue sino hasta 1950 que se hicieron grandes

progresos en el desarrollo de anticonceptivos eficaces para controlar la natalidad. En

1960 se pusieron en el mercado los primeros anticonceptivos orales y se propusieron

algunos anticonceptivos espermicidas (Silva et al, 2003).

En la actualidad, la mayoría de los métodos anticonceptivos están enfocados a

mujeres, siendo métodos basados en la administración de hormonas esteroides

(píldoras orales, preparaciones inyectables e implantables), aparatos intrauterinos

internos o con medicamentos (DIUs), método de barrera (condones femeninos),

métodos químicos (jabones y geles espermicidas), método quirúrgico (salpingotomia),

así como algunas vacunas y combinaciones entre estos métodos (Griffin, 2001).

Algunos de estos métodos han encontrado gran aceptación en mujeres de

diferentes partes del mundo y han tenido un gran impacto en la planeación familiar, sin

embargo, las medidas disponibles para la regulación de la natalidad no son totalmente

seguras, el rango de opciones es limitado, no siempre son aceptadas por la población y

presentan algunas inconveniencias para su uso, como lo es su inseguridad después de

un uso prolongado, efectos colaterales, permanencia del efecto, etc (Griffin, 2001).

Los métodos anticonceptivos disponibles para el hombre son una minoría con

respecto a la amplia gama de anticonceptivos femeninos, siendo éstos solamente el

método de barrera (condón) y método quirúrgico (vasectomía). El condón, además de

ser una barrera que impide el contacto de los gametos para que no se lleve a cabo la

fecundación, contiene Nonoxinol-9 el cual actúa como espermicida. El uso de éste no

produce efectos secundarios, sin embargo no es un método totalmente seguro. Por su

parte, la vasectomía es un método drástico y puede ser definitivo.

Por lo anterior es necesario hacer una serie de investigaciones para encontrar el

anticonceptivo ideal, tanto masculino como femenino, con las siguientes características:

a) seguridad y efectividad; b) protección a largo plazo (no permanente); c) actividad

farmacológica selectiva, sin los disturbios metabólicos y endócrinos que muchas veces

acompañan a los métodos existentes; d) que no requieran la introducción de un objeto o

un implante; e) libre de efectos secundarios; f) que preferentemente pueda aplicarse

antes de tener contacto sexual y g) ser económicamente accesible a todas las clases

sociales (Silva et al, 2003). Actualmente no existe un anticonceptivo con estas

características en el mercado. Para poder buscar un anticonceptivo que tenga la mayor

parte de las características mencionadas, es importante conocer el proceso de la

fertilización.

La fertilización es un proceso que involucra el reconocimiento y fusión de

gametos (espermatozoide y un óvulo). El espermatozoide es una célula especializada,

cuyo propósito fundamental es conducir la información genética masculina hacia el

gameto femenino para unirse y formar un nuevo organismo. En los mamíferos, los

espermatozoides se producen dentro de los túbulos seminíferos por medio del proceso

llamado espermatogénesis, el cual puede ser dividido en tres etapas: 1. Multiplicación

de las células tallo (espermatogónias) por el proceso de mitosis. 2. Reducción del

número cromosómico diploide a haploide por el proceso de meiosis. 3. Diferenciación

de las células precursoras a células especializadas llamadas espermatozoides (Knobil y

Nelly, 1994).

Para que el espermatozoide logre una fertilización eficiente, es necesario que

pase por tres eventos importantes: maduración, capacitación y reacción acrosomal

(Austin, 1987). Dentro de estos eventos, la movilidad espermática es de gran

importancia ya que aporta un movimiento vigoroso del flagelo para poder llegar al óvulo,

proporcionando un gran empuje para atravesar las células de la granulosa hasta llegar

a la zona pelúcida (Lamirande et al, 1997). Por lo tanto, si se altera al espermatozoide

en alguno de estos eventos, entonces éste será incapaz de llevar a cabo la fertilización

y por tanto se puede considerar como factor causante de infertilidad (Knobill y Neill,

1994). Esta célula representa un blanco de estudio para la creación de posibles formas

de anticoncepción.

Los espermatozoides de mamíferos son células alargadas que constan de una

cabeza aplanada que contiene al núcleo y una cola que contiene el aparato necesario

para la movilidad celular, ambas estructuras, están unidas por el cuello. La célula

espermática está completamente cubierta por el plasmalema o membrana plasmática

(Garner y Hafez, 1993). En la mayoría de las especies animales los espermatozoides

tienen tamaño y forma uniforme, miden aproximadamente entre 60 y 65 µm de longitud.

La cabeza del espermatozoide se caracteriza por presentar un núcleo de forma

oval y plano que contiene cromatina altamente condensada. La cabeza se divide en

región acrosomal y post-acrosomal. El acrosoma es una estructura situada entre la

membrana plasmática y la parte anterior del núcleo. Contiene enzimas hidrolíticas que

son de importancia durante la fertilización, entre las que se encuentran la proacrosina,

hialuronidasa y esterasas (Cormark, 1988). El flagelo está compuesto por el cuello o

segmento conector, segmento medio, segmento principal y segmento caudal o terminal.

El cuello forma una placa basal en la superficie posterior del núcleo. La placa basal del

cuello es continua en sentido posterior, y tiene nueve fibras gruesas que se proyectan

hacia atrás a través de la mayor parte del flagelo (cola). La región del flagelo entre el

cuello y el anillo es el segmento medio. El centro de este segmento medio, junto con

toda la longitud de la cola, forma el axonema, que es el responsable del movimiento

(Garner y Hafez, 1993; Hafez y Hafez, 2000). El axonema central está formado por dos

microtúbulos centrales rodeados de nueve pares de túbulos periféricos (disposición de

9 + 2) de tubulina y actina (Alberts et al, 1994).

En el segmento medio, esta disposición de 9 + 2 de los microtúbulos está

rodeada por nueve fibras gruesas o densas que al parecer están relacionadas con los

nueve pares del axonema. El axonema y las fibras densas asociadas del segmento

medio están cubiertos de manera periférica por numerosas mitocondrias. La vaina

mitocondrial, dispuesta en un patrón helicoidal alrededor de las fibras longitudinales de

la cola, es la fuente de energía necesaria para la movilidad espermática. El segmento

principal, que continúa en sentido posterior desde el anillo citoplásmico y se extiende

casi hasta la punta de la cola, está formado por el axonema en el centro y sus fibras

gruesas asociadas. La vaina fibrosa da estabilidad a los elementos contráctiles de la

cola (Hafez y Hafez, 2000). El segmento caudal o terminal, posterior a la terminación de

la vaina fibrosa, contiene sólo el axonema central cubierto por la membrana plasmática

(Hafez y Hafez, 2000).

El axonema es el que proporciona la movilidad al espermatozoide. Los pares

externos de los microtúbulos del patrón 9+2 generan las ondas de flexión de la cola por

un movimiento deslizante entre pares adyacentes (Hafez y Hafez, 2000). Por tanto, el

movimiento flagelar está impulsado por la proteína motora dineína, que utiliza la energía

de hidrólisis del ATP para hacer deslizar los microtúbulos.

ANTECEDENTES

En la actualidad las investigaciones que se llevan a cabo en los países

desarrollados como Estados Unidos de América e Inglaterra y algunos países en

desarrollo como la India y China se dirigen a la búsqueda de nuevos anticonceptivos

espermicidas que han mostrado no tener efectos secundarios importantes (Silva et al,

2003). En el caso de México se ha realizado una larga búsqueda de formas efectivas

para el control de la natalidad, los pueblos primitivos desarrollaron técnicas

anticonceptivas utilizando plantas medicinales (Secretaria de Salud, 1993).

México es un país de gran diversidad florística, se estima que la flora medicinal

en uso contiene alrededor de 5000 plantas (Lozoya, 1982; Aguilar, 1994.), y su

población a través del tiempo y de un largo proceso de aprendizaje ha sabido

apropiarse de esos recursos naturales para su beneficio (Lozoya, 1987; Carrera, 1982;

Bodenstein, 1973).

Los extractos naturales obtenidos de plantas han demostrado tener un potencial

farmacológico muy importante sobre diferentes enfermedades que aquejan al hombre

en la actualidad, así la etnobotánica ha jugado un papel importante en el desarrollo de

nuevas drogas por muchos siglos. Esta importancia del reino vegetal como fuente de

drogas curativas o para el tratamiento de ciertas enfermedades, ha llevado a comprobar

que el 25 % de los fármacos existentes en el mercado son derivados de plantas

(Méndez, 1989).

Un largo número de plantas ha sido seleccionado con actividad espermicida in

vitro. De 1600 plantas estudiadas, 90 mostraron propiedades para coagular el semen.

Este dato se puede correlacionar con los resultados de experimentos obtenidos por

diferentes grupos de investigadores en estudios in vitro e in vivo, y la información

encontrada en la medicina tradicional (Farnsworth et al, 2002; Griffin, 2001). Esto es de

gran interés para el desarrollo de inhibidores de la fertilidad masculina, que sean

totalmente selectivos, existiendo la posibilidad de que las drogas derivadas de las

plantas pudieran tener este efecto (Farnsworth et al, 2002).

Se ha reportado un número considerable de plantas de uso en la medicina

tradicional que pueden ser estudiadas para efectos inhibitorios de la fertilidad en

machos (Farnsworth et al, 1982), entre las que se encuentran: Aristolachea indica L.;

Balanites roxburghii Planch.; Calotropis procera; Gossypium species; Phytolacca

dodecandra, Azadirachta indica, Sapindus mukorossi, Samanea saman, Sedum

praealtum y Carica papaya, entre otras (Farnsworth et al, 2002; Silva et al, 2003; Kamal

y Yadav, 1993; Udoh y Kehinde, 1999; Gupta et al, 2000; Lohiya et al, 2000; Watcho et

al, 2001).

C. papaya (papaya) pertenece a la familia Caricacea, es un arbusto de 3 a 4

metros de altura perennifolio, originario del sur de México y América Central. Se cultiva

en diversas regiones tropicales del país como Veracruz, Tabasco, Oaxaca, Chiapas,

Yucatán y Nayarit. El fruto y las demás partes de la planta contienen un jugo lechoso

que posee una enzima proteolítica llamada papaína, la papaína tiene diferentes usos.

Se utiliza para ablandar carnes y mariscos, como agentes desinflamatorios en casos de

infecciones y tramautismos. La semilla contiene de 20 a 30 % de aceite no secante que

tiene aplicaciones en la industria farmacéutica. (Niembro, 1986). La semilla mide 4.0

mm de longitud (Moreno, 1980). El extracto de semilla de papaya administrado a ratas

albino machos adultos por vía intramuscular a razón de 0.5 mg/kg durante 7 días

reduce la respuesta contráctil de la cauda del túbulo seminífero de manera reversible

(Verma et al, 2002).

El extracto clorofórmico de la semilla de C. papaya administrado diariamente por

vía oral a monos langur adultos a una dosis de 50 mg/kg durante 360 días provocó

azoospermia a los 90 días de tratamiento actuando a nivel del desarrollo de las células

germinales; estudios a nivel de microscopía electrónica mostraron cambios deletéreos

en la pieza media. Los efectos fueron reversibles (Lohiya et al, 2001).

JUSTIFICACIÓN

Las altas tasas de crecimiento en la población mundial representan un grave

obstáculo para el bienestar de la humanidad, el cual primordialmente depende de los

recursos económicos y naturales disponibles en el mundo. Entre 1990 y 2005, por

ejemplo, el número de habitantes sobre el planeta se espera aumente a 3.2 billones. En

México se espera que de 98.9 millones de habitantes en el año 2000, aumente a 130.2

en el 2025.

Así, el control del crecimiento de la población usando métodos anticonceptivos

es una necesidad de nuestro tiempo. Sin embargo, las medidas disponibles para la

regulación de la natalidad no son totalmente seguras y no siempre son aceptadas por la

población. Por lo tanto, hay una necesidad urgente de desarrollar nuevos métodos de

anticoncepción, tanto para hombres como para mujeres.

Este proyecto está dirigido a la búsqueda de sustancias con actividad

anticonceptiva que sirvan como fuente de materia prima para la obtención de nuevos

agentes anticonceptivos masculinos. Así, este trabajo podría servir para realizar

estudios básicos de biología de la reproducción y ayudar a encontrar formas

alternativas de regulación de la natalidad.

OBJETIVO GENERAL

Determinar el efecto sobre la movilidad y viabilidad espermática del extracto

acuoso obtenido de la semilla madura de C. papaya, empleando como modelo

espermatozoides de cerdo in vitro.

OBJETIVOS PARTICULARES

• Evaluar el efecto sobre la viabilidad y movilidad de los espermatozoides

expuestos a extracto acuoso de la semilla completa de C. papaya.

• Evaluar el efecto sobre la viabilidad y movilidad de los espermatozoides

expuestos a extracto acuoso de la semilla sin mucílago de C. papaya.

HIPÓTESIS

Si los extractos de la semilla de C. papaya administrados por vía oral a ratas y

monos disminuyen la fertilidad, entonces dicho efecto podría relacionarse a una acción

directa sobre la movilidad y/o viabilidad espermática.

MATERIAL Y MÉTODO

Obtención del extracto

El fruto de C. papaya fue obtenido comercialmente en la ciudad de México. La

semilla fue extraída, lavada con agua destilada y separada en dos grupos. El primero

de ellos se puso a secar a temperatura ambiente y a la sombra durante 7 días. Al

segundo grupo se le desprendió el mucílago y se puso a secar. Una vez secas, ambas

semillas maduras fueron procesadas en la misma forma: molidas en un mortero, se

tomaron 40 g del pulverizado y fueron sometidos a extracción continua durante 5 horas

en un equipo soxhlet con cloroformo (250 ml). Después de filtrar, el disolvente fue

evaporado en un rotavapor. El residuo de las extracciones (40 g de la semilla) se secó

en la sombra a temperatura ambiente por 2 días. Una vez seco, el material se colocó en

un matraz con 300 ml de agua destilada y se sometió a temperatura de reflujo durante 4

horas a punto de ebullición. Trascurrido el tiempo, la muestra se filtró

y el filtrado resultante fue sometido a un proceso de liofilización para obtener,

finalmente, el extracto acuoso.

El rendimiento del extracto acuoso de la semilla madura completa fue de 2.9 g

mientras que el rendimiento del extracto acuoso de la semilla sin mucílago fue de 1.8 g.

Colecta del semen

Se obtuvo el eyaculado de cerdos adultos (> 18 meses de edad) por el método

de la mano enguantada, posteriormente se filtró por medio de una gasa para obtener

únicamente la fracción rica en espermatozoides; en el lapso de una hora se transportó

al laboratorio en una caja de poliuretano a temperatura de 28 a 30º C para su estudio.

Evaluación del semen

En la evaluación básica se analizaron la movilidad progresiva y las

anormalidades de la cabeza y cola, en un microscopio de campo claro a 400x. Se

utilizaron únicamente eyaculados con movilidad progresiva mayor al 85% y

anormalidades espermáticas menores al 15%.

Dilución del semen

De la suspensión de semen se tomó una alícuota para diluirla, en una solución

de almacenamiento a 30ºC para obtener una concentración final de 50x106

espermatozoides en 1000 µl para su uso. La solución de almacenamiento (Reading) se

preparó según Revell y Glossop (Revell y Glossop, 1989). Cada 100 ml contenía: D-

glucosa (1.15 g), NaHCO3 (0.175 g), EDTA (0.234 g), citrato de sodio (1.164g) Tris

(0.548g), ácido cítrico (0.41 g), cisteina (0.007g), trehalosa (0.1g), alcohol polivinílico

(PVA) tipo II (0.01 g), KCL (0.075 g), sulfato de estreptomicina (0.05 g), ajustado a una

osmolaridad de 284 mosm/kg y un pH de 6.4.

Concentración del extracto

Se emplearon los extractos acuosos de la semilla madura con y sin mucílago de

C. papaya. Se preparó una solución al 10 % con 0.15 g del extracto acuoso disuelto en

1500 µl de medio TALP-HEPES (T-H) suplementado con BSA (0.03 g/5 ml) y piruvato

de sodio 1 mM (200 µl/5 ml)(Sigma Chemicalls St. Louis, MO EUA) a un pH de 7.3.

Preparación de la muestra de espermatozoides

Lavado de espermatozoides. Se tomaron 3000 µl de la muestra diluida de

espermatozoides y se centrifugaron a 1500 rpm durante 5 minutos, se decantó el

sobrenadante y el sedimento fue resuspendido en 1000 µl de medio T-H suplementado,

se centrifugó nuevamente a 1500 rpm /5 minutos. El sobrenadante fue decantado y el

sedimento fue resuspendido en 3000 µl de medio T-H suplementado, para ser utilizados

posteriormente

Tratamiento

Por cada extracto se prepararon cajas de cuatro pozos con las concentraciones

finales de 1, 2,3, 4 y 5 % disueltas en medio T-H suplementado, dichas cajas y la

muestra de espermatozoides se incubaron por separado a 37 oC en una atmósfera al

5% de CO2 y humedad a saturación durante 10 minutos. Transcurrido este tiempo, se

agregaron a cada pozo 250 µl de los espermatozoides diluidos, para obtener una

concentración de 12 x106 espermatozoides por pozo, siendo el volumen final de cada

pozo de 750 µl.

Una vez agregados los espermatozoides se evaluó la movilidad y viabilidad

espermática de cada tratamiento. Posteriormente, los tratamientos fueron incubados

durante 1, 30 y 60 minutos, a 37 ºC en una atmósfera al 5% de CO2 y humedad a

saturación y se evaluaron la movilidad y la viabilidad. Así mismo, se realizó un control

únicamente con el medio T-H suplementado. Los experimentos se repitieron cinco

veces.

Evaluación de los parámetros de movilidad y viabilidad

Se evaluó la movilidad por observación directa al microscopio invertido a 400x al

minuto 1, 30 y 60. Se estimó el porcentaje de espermatozoides móviles.

La viabilidad espermática se evaluó utilizando la tinción de eosina-nigrosina de

acuerdo a los criterios descritos (Flowers, 1998; Jouannet et al, 1998; Rillo et al, 1996),

en una proporción 1:1. Se colocaron 20 µ de espermatozoides de cada tratamiento

sobre un portaobjetos y se agregaron 20 µl de eosina-nigrosina. Se mezclaron ambas

alícuotas y se dejó reposar durante 20 segundos, posteriormente se hizo el frotis y se

dejó secar a 37ºC. Se observó al microscopio óptico a 400x. Se contaron 100 células y

se determinó el porcentaje de espermatozoides vivos. Se consideraron como

espermatozoides vivos aquéllos que no presentaron tinción, y como espermatozoides

muertos los teñidos en coloración púrpura.

Análisis de datos

Se usó la prueba estadística no paramétrica de U de Mann-Whitney (p<0.05).

RESULTADOS

Los espermatozoides tratados con el extracto acuoso de la semilla completa de

C. papaya al 1% no mostró diferencia estadística en cuanto a movilidad con respecto al

control durante el estudio. Sin embargo, las concentraciones de 2, 3, 4 y 5 % mostraron

diferencia estadística con respecto al control (p<0.05) a los tiempos 1, 30 y 60 minutos.

Se observa que a concentración de 5% la movilidad se inhibe (Tabla 1).

MOVILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos

1 30 600 90 + 0 90 + 0 85 + 31 90 + 0 90 + 3 80 + 22 85 + 5* 60 + 4* 30 + 4*3 75 + 0* 20 + 3* 5 + 3*4 25 + 5* 0* 0*5 5 + 0* 0* 0*

Tabla 1. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura completa de C. papaya sobre la movilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).

Los porcentajes de viabilidad de los espermatozoides tratados con el mismo

extracto presentaron una diferencia estadística en todas las concentraciones probadas

con respecto al control (p<0.05), durante el periodo de incubación (Tabla 2).

VIABILIDAD (%)Concentración

(%) Tiempo en minutos

1 30 600 91 + 1 88 + 2 85 + 21 88 + 3* 82 + 5* 80 + 4*2 82 + 2* 78 + 4* 75 + 4*3 79 + 3* 74 + 5* 68 + 6*4 77 + 6* 71 + 6* 64 + 5*5 72 + 5* 67 + 3* 61 + 3*

Tabla 2. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura completa de C. papaya sobre la viabilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).

Por otro lado, la movilidad de los espermatozoides tratados con el extracto

acuoso de la semilla sin mucílago de C. papaya a concentración de 1%, no mostró

diferencia estadística con respecto al control. La concentración de 2% presenta una

disminución de la movilidad de 85% (un minuto) a 10% a los 60 minutos de incubación.

Las concentraciones de 3, 4 y 5% muestran una inhibición total de la movilidad al final

del estudio. Cabe señalar que la concentración de 5% inhibe la movilidad espermática a

partir de la adición del extracto (Tabla 3).

MOVILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos

1 30 600 90 + 0 90 + 0 85 + 31 90 + 0 88 + 3 82 + 42 85 + 4 30 + 11* 10 + 3*3 65 + 5* 5 + 5* 0*4 30 + 8* 0* 0*5 0* 0* 0*

Tabla 3. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura sin mucílago de C. papaya sobre la movilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).

La viabilidad de los espermatozoides tratados con dicho extracto a concentración 1 y

2% muestran una diferencia estadística con respecto al control. Con las otras

concentraciones se observaron diferencias en algunos tiempos solamente.

VIABILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos

1 30 600 94 + 1 88 + 3 84 + 31 88 + 1* 83 + 2* 81 + 3*2 89 + 1* 83 + 2* 80 + 2*3 90 + 1* 85 + 4 80 + 3*4 87 + 1* 84 + 3 83 + 15 93 + 3 90 + 2* 86 + 2

Tabla 4. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura sin mucílago de C. papaya sobre la viabilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).

DISCUSION

El objetivo principal de este trabajo fue estudiar el efecto del extracto acuoso de

la semilla madura de C. papaya sobre la movilidad y viabilidad espermática, en

espermatozoides de cerdo in vitro para usarse en el control de la natalidad.

En trabajos anteriores se probó el extracto acuoso de la corteza de C. papaya en

ratas macho sprague-Dawley administrado oralmente en una dosis de 5-10 ml por

animal durante 4 semanas; se encontró pérdida de la fertilidad, la cual se atribuye a la

declinación en la movilidad y a las alteraciones en la morfología de espermatozoides de

epidídimo (Kusemiju et al, 2002).

El extracto acuoso de la semilla madura sin mucílago de C. papaya presenta una

disminución en la movilidad a concentración de 2% con respecto al tiempo hasta

disminuirla al 10% al minuto 60. Cabe señalar que las concentraciones de 3, 4 y 5%

presentan una inhibición total al minuto 60, 30 y 1, respectivamente. Sin embargo, los

porcentajes de viabilidad se mantienen altos en todas las concentraciones y a los

tiempos estudiados. Esto indica que este extracto tiene propiedades espermiostáticas

pero no espermicidas, contrariamente a lo que encontraron Lohiya et al (2000). Ellos

probaron el extracto cloroformo, la fracción cromatográfica benceno del extracto

cloroformo y las subfracciones metanol y acetato etílico de la semilla de C. papaya en

un estudio in vitro utilizando espermatozoides de humano a concentraciones de 0.1,

0.5, 1 y 2 %; observaron inhibición total de la movilidad a los 25 minutos con todas las

concentraciones probadas; la prueba de viabilidad mostró un efecto espermicida y no

espermiostático (Lohiya et al, 2000).

Así mismo, encontramos que el extracto acuoso de la semilla madura completa

de C. papaya disminuye la movilidad espermática a concentraciones de 2 y 3% con

respecto al control durante el periodo de incubación, las concentraciones de 4 y 5%

presentan una inhibición total de la movilidad a partir del minuto 30 y 1 respectivamente.

La viabilidad muestra una tendencia a disminuir gradualmente conforme al tiempo de

tratamiento y concentración del extracto. Nuestros resultados indican que el mucílago

de la semilla de C. papaya contiene alguna sustancia con propiedad espermicida.

Se ha visto que el extracto acuoso de la semilla de C. Papaya disminuye la

fertilidad en ratones sin causar efectos nocivos en el organismos (Chinoy et al, 1994),

pero no afectó la fertilidad en conejos (Lohiya et al, 2000) probablemente debido a

alguna respuesta especie-específica de dichos organismos. Hasta donde sabemos,

todavía no se ha determinado cuál es la sustancia activa que causa dicha disminución

de la fertilidad, es por ello que es importante continuar con esta línea de investigación.

CONCLUSIONES

El extracto acuoso de la semilla completa de C. papaya reduce la movilidad de

los espermatozoides de manera dosis (y tiempo) dependiente.

Este extracto reduce la viabilidad en un 40 %, pero no induce letalidad en el 50 %

de los espermatozoides, ni aún a la concentración más alta probada (5%).

El extracto acuoso de la semilla sin mucílago induce un mayor efecto sobre la

movilidad, sin embargo no afectó la viabilidad de los espermatozoides.

PERSPECTIVAS

Se considera importante continuar con esta línea de investigación, realizando

estos mismos estudios solamente con el mucílago de la semilla de C. papaya y

determinar la sustancia que tiene efecto espermicida.

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