uji toksisitas fraksi ekstrak etanol daun pedang …repositori.uin-alauddin.ac.id/6078/1/ainun...
TRANSCRIPT
UJI TOKSISITAS FRAKSI EKSTRAK ETANOL DAUN PEDANG-PEDANG
(Sansevieria trifasciata Prain) TERHADAP LARVA UDANG (Artemia salina
Leach) DENGAN MENGGUNAKAN METODE BRINE SHRIMP
LETHALITY TEST (BSLT)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Meraih Gelar Sarjana Farmasi
Jurusan Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
UIN Alauddin Makassar
Oleh:
AINUN SAFITRI HARLI
NIM. 70100112045
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI ALAUDDIN MAKASSAR
SAMATA-GOWA
2016
ii
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI
Mahasiswa yang bertandatangan di bawah ini:
Nama : Ainun Safitri Harli
NIM : 70100112045
Tempat/Tgl. Lahir : Majene / 28 Agustus 1994
Jurusan : Farmasi
Fakultas : Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Alamat : Kompleks Villa Samata Sejahtera Block B1 no 9
Judul : Uji Toksisitas Fraksi Ektrak Etanol Daun Pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) Tehadap Larva Udang
(Artemia Salina Leach) Dengan Menggunakan Metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Menyatakan dengan sesungguhnya dan penuh kesadaran bahwa skripsi ini
benar adalah hasil karya sendiri. Jika dikemudian hari terbukti bahwa ia merupakan
duplikat, tiruan, plagiat, atau dibuat oleh orang lain, sebagian atau seluruhnya, maka
skripsi dan gelar yang diperoleh karenanya batal demi hukum.
Gowa, November 2016
Penulis,
AINUN SAFITRI HARLI
NIM. 70100112045
iii
PENGESAHAN SKRIPSI
Skripsi yang berjudul “Uji Toksisitas Fraksi Ektrak Etanol Daun Pedang-
pedang (Sansevieria trifasciata Prain) Terhadap Larva Udang (Artemia Salina Leach)
Dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)” yang disusun
oleh Ainun Safitri Harli, NIM : 70100112045, Mahasiswa Jurusan Farmasi pada
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Alauddin Makassar, diuji dan
dipertahankan dalam Ujian Sidang Skripsi yang diselenggarakan pada hari kamis
tanggal 24 November 2016 M yang bertepatan dengan tanggal 24 Shafar 1438 H,
dinyatakan telah dapat diterima sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana dalam Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Jurusan Farmasi.
Gowa, 24 November 2016 M
24 Shafar 1438 H
DEWAN PENGUJI
Ketua : Dr. dr. H. Andi Armyn Nurdin, M.Sc. (.....................)
Sekretaris : Prof. Dr. Mukhtar Lutfi., M.Pd (.....................)
Pembimbing I : Dra. Hj. Faridha Yenny Nonci, M.Si., Apt. (.....................)
Pembimbing II : Dwi Wahyuni Leboe, S.Si., M.Si. (......................)
Penguji I : Surya Ningsi, S.Si.,M.Si.,Apt (......................)
Penguji II : Dr. Nurhidayat Muh. Said, M.Ag (.....................)
Diketahui oleh:
Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
UIN Alauddin Makassar,
Dr. dr. H. Andi Armyn Nurdin, M.Sc.
NIP. 19550203 198312 1 001
iv
KATA PENGANTAR
Segala puji bagi Allah atas nikmat akal dan pikiran yang diberikan serta
limpahan ilmu yang tiada hentinya sehingga penyusun dapat menyelesaikan
penelitian dan penulisan skripsi ini tepat pada waktunya. Shalawat dan salam juga
tak lupa pula kita haturkan kepada Nabi besar junjungan kita Nabi Muhammad saw,
keluarga, dan para sahabat serta orang-orang yang mengikutinya.
Skripsi dengan judul “Uji Toksisitas Fraksi Ektrak Etanol Daun Pedang-
pedang (Sansevieria trifasciata Prain) Terhadap Larva Udang (Artemia Salina Leach)
Dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)” ini disusun
sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Jurusan Farmasi, Universitas Islam Negeri Alauddin
Makassar. Penulis menyadari bahwa tugas akhir ini bukanlah tujuan akhir dari belajar
karena belajar adalah sesuatu yang tidak terbatas.
Dengan selesainya skripsi ini tentunya tak lepas dari dorongan dan uluran
tangan berbagai pihak. Penulis menyadari tentang banyaknya kendala yang dihadapi
dalam penyusunan skripsi ini. Namun berkat doa, motivasi dan kontribusi dari
berbagai pihak, maka kendala tersebut mampu teratasi dan terkendali dengan baik.
Untuk itu penulis menghaturkan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Orang tua tercinta, Ayahanda H. Suharli S.Ag., M.pd dan Ibunda Hj. Sumiati
S.Ag, dengan penuh kasih sayang dan pengorbanan serta dukungan penuhnya
v
baik berupa materi, nasehat, dan doa yang tulus, saudara-saudaraku Annisa Fikrah
Harli, dan Annormansyah Fikrah Harli serta keluarga yang senantiasa
memberikan restu dan doa’nya.
2. Prof. Dr. Musafir Pababbari, M.Si., Rektor Universitas Islam Negeri Alauddin
Makassar.
3. Dr. dr. H. Andi Armyn Nurdin, M.Sc., Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
4. Dr. Nur Hidayah, S.Kep., Ns., M.Kes., Wakil Dekan I Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
5. Dr. Andi Susilawaty, S.Si., M.Kes., Wakil Dekan II Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
6. Dr. Mukhtar Lutfi, M.Pd., Wakil Dekan III Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
7. Haeria, S.Si., M.Si. Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
8. Mukhriani S.Si.,M.Si., Sekretaris Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar
9. Dra. Hj. Faridha Yenny Nonci, M.Si., Apt. Pembimbing pertama dan Dwi
Wahyuni Leboe, S.Si., M.Si. Pembimbing kedua yang telah banyak memberikan
bantuan dan pengarahan serta meluangkan waktu dan pikirannya dalam
membimbing penulis.
vi
10. Surya Ningsi, S.Si.,M.Si.,Apt. Penguji kompetensi yang telah memberikan saran
dan arahannya dalam penyempurnaan skripsi..
11. Dr. Nurhidayat Muh. Said, M.Ag. Penguji Agama yang telah banyak memberikan
bantuan dan pengarahan serta meluangkan waktu dan pikirannya dalam
membimbing penulis.
12. Bapak, Ibu Dosen, Laboran serta seluruh Staf Jurusan Farmasi atas curahan ilmu
pengetahuan dan teman-teman ISOHIDRIS terima kasih atas segala bantuan yang
diberikan pada penulis sejak menempuh pendidikan farmasi hingga saat ini.
Besar harapan saya kiranya skripsi ini dapat bernilai ibadah di sisi Allah swt.
dan bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan. Amin.
Samata, November 2016
AINUN SAFITRI HARLI
NIM. 70100112045
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL .................................................................................................. i
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI ........................................................................ i
KATA PENGANTAR ................................................................................................. iii
DAFTAR ISI ................................................................................................................ vi
DAFTAR TABEL ......................................................................................................... x
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................ xi
DAFTAR GAMBAR .................................................................................................. xii
ABSTRAKS ............................................................................................................... xiii
ABSTRACT ............................................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................................. 1
A. Latar Belakang ........................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah ...................................................................................... 3
C. Definisi Operasional dan Ruang Lingkup Penelitian ................................. 4
1. Defenisi Operasional ........................................................................... 4
2. Ruang Lingkup Penelitian ................................................................... 5
D. Kajian Pustaka ............................................................................................ 5
E. Tujuan dan Manfaat Penelitian .................................................................. 7
1. Tujuan Penelitian ................................................................................ 7
2. Manfaat Penelitian .............................................................................. 8
viii
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................. 9
A. Uraian Tanaman ......................................................................................... 9
1. Klasifikasi Tanaman ........................................................................... 9
2. Nama Daerah....................................................................................... 9
3. Morfologi. .......................................................................................... 9
4. Kandungan Kimia ............................................................................. 10
5. Kegunaan .......................................................................................... 10
B. Uraian Hewan Coba ................................................................................. 11
1. Klasifikasi ......................................................................................... 11
2. Morfologi .......................................................................................... 11
3. Lingkungan Hidup ............................................................................ 13
4. Perkembangan dan Siklus Hidup ...................................................... 14
5. Penggunaan Artemia Salina Leach dalam penelitian ........................ 15
C. Brine Shrimp Lethality Test ...................................................................... 15
D. Toksisitas .................................................................................................. 17
E. Ekstraksi .................................................................................................... 18
F. Fraksinasi ................................................................................................. 21
G. Metode Pemisahan Secara KLT ............................................................... 23
H. Tinjauan Islam .......................................................................................... 26
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................................. 30
ix
A. Jenis dan Lokasi Penelitian ...................................................................... 30
1. Jenis Penelitian .................................................................................. 30
2. Lokasi Penelitian ............................................................................... 30
B. Pendekatan Penelitian .............................................................................. 30
C. Populasi Dan Sampel ............................................................................... 30
1. Populasi Penelitian ........................................................................... 30
2. Sampel Penelitian .............................................................................. 30
D. Instrumen Penelitian................................................................................. 31
1. Alat .................................................................................................... 31
2. Bahan ................................................................................................ 31
E. Tehnik Pengolahan dan Analisis Data ..................................................... 31
1. Penyiapan Sampel ............................................................................. 31
2. Uji Toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test ............. 33
3. Fraksinasi Komponen Kimia ............................................................ 34
4. Kromatografi Lapis Tipis .................................................................. 35
5. Identifikasi Komponen Kimia ........................................................... 36
BAB IV HASIL PENILITIAN DAN PEMBAHASAN .......................................... .. 38
A. Hasil Penelitian ........................................................................................ 38
1. Hasil Ekstraksi ................................................................................. 38
2. Hasil Partisi Cair-Padat ..................................................................... 38
3. Hasil Uji Brine Shrimp Lethality Test .............................................. 38
x
4. Hasil Identifikasi KLT ...................................................................... 39
5. Hasil Fraksinasi Sampel .................................................................... 40
6. Hasil identifikasi Komponen Kimia ................................................. 41
B. Pembahasan .............................................................................................. 41
BAB V PENUTUP ..................................................................................................... 50
A. Kesimpulan .............................................................................................. 50
B. Saran ......................................................................................................... 50
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................. 51
LAMPIRAN ................................................................................................................ 54
DAFTAR RIWAYAT ................................................................................................. 82
xi
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Hasil Ekstraksi .................................................................................................. 38
2. Hasil Ekstraksi Cair-Padat ............................................................................... 38
3. Hasil Uji Brine Shrimp Lethality Test .............................................................. 38
4. Hasil Identifikasi KLT ..................................................................................... 39
5. Hasil Fraksinasi Sampel .................................................................................... 40
6. Hasil Identifikasi Senyawa Kimia ..................................................................... 41
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Skema Kerja Ekstraksi dan Fraksinasi ............................................................. 54
2. Skema Kerja Uji Brine Shrimp Lethality Test ................................................ 55
3. Perhitungan Pengenceran ................................................................................ 56
4. Data Hasil Pengamatan Larva Udang .............................................................. 57
5. Perhitungan % kematian Larva Udang ............................................................ 60
6. Nilai Probit ....................................................................................................... 62
7. Hasil Perhitungan LC50 .................................................................................... 63
8. Hasil Perhitungan LC50 fraksi .......................................................................... 67
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Preparasi Sampel .............................................................................................. 72
2. Proses Rotavapor ............................................................................................... 73
3. Partisi Cair-Padat ............................................................................................... 73
4. Penetasan Larva Udang ..................................................................................... 75
5. Pengujian Larva Udang ..................................................................................... 76
6. Kromatografi Lapis Tipis .................................................................................. 77
7. Kromatografi Cair Vakum ................................................................................. 78
8. Uji Brine Shrimp Lethality Test ........................................................................ 80
xiv
ABSTRAK
Nama : Ainun Safitri Harli
Nim : 70100112045
Jurusan : Farmasi
Judul Skripsi : Uji Toksisitas Fraksi Ekstrak Etanol Daun Pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) Terhadap Larva Udang (Artemia
Salina Leach) Dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT)
Telah dilakukan penelitian tentang Uji Toksisitas Fraksi Ekstrak Etanol Daun
Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) Terhadap Larva Udang (Artemia
Salina Leach) Dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek toksisitas dari ekstrak dan hasil fraksi
dari Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) dengan metode Brine
Shrimp Lethality Test terhadap Artemia salina Leach. Penelitian diawali dengan
pemilihan sampel, pengeringan sampel dan ekstraksi dengan maserasi menggunakan
pelarut Etanol 70%. Ekstrak dipekatkan dengan Rotary evaporator. Ekstrak yang
diperoleh selanjutnya dipartisi terlebih dahulu dengan menggunakan pelarut metanol
dan nantinya akan diperoleh ekstrak larut methanol, ekstrak tidak larut metanol dan
ekstrak etanol. Kemudian ekstrak etanol, ekstrak larut metanol dan ekstrak tidak larut
metanol diuji dahulu toksisitasnya dengan metode Brine Shrimp Lethality Test. Hasil
penelitian menunjukan ekstrak etanol, memiliki tingkat toksik lebih besar terhadap
larva Artemia salina Leach dengan nilai LC50 sebesar 11,56 μg/ml. Ekstrak kemudian
difraksinasi dengan kromatografi kolom cair vakum sehingga diperoleh 3 fraksi
gabungan yaitu fraksi A, B, dan C. Masing-masing fraksi diuji toksisitasnya dan
diperoleh hasil fraksi B yang memiliki tingkat toksik yang lebih besar di bandingkan
fraksi lainnya dengan nilai LC50 sebesar 10,665 μg/ml. Hasil identifikasi fraksi B
menunjukkan adanya senyawa golongan Steroid dan Flavanoid
Kata kunci : Brine Shrimp Letality Test (BSLT), Daun Pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain) Flavanoid dan Steroid
xv
ABSTRACT
Name : Ainun Safitri Harli
Nim : 70100112045
Department : Pharmacy
Title : Toxicity Test Fraction of Ethanol Extract swords leaves (Sansevieria
trifasciata Prain) against larvae of Artemia Salina Leach by Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) Method.
A researched has been done about Toxicity Test Fraction of Ethanol Extract
swords leaves (Sansevieria trifasciata Prain) against larvae of Artemia Salina Leach
by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method. This research aimed do determine
the effect of the toxicity of extractsand fractions result of swords leaves (Sansevieria
trifasciata Prain) by Brine Shrimp Lethality Test Method against larvae of Artemia
salina Leach. The research begins with the selection of the sample, the sample drying
and extraction by maceration using solvent ethanol 70%. Extract concentrated by
rotary evaporator. The extract obtained further partitioned in advance using
the methanol solvent and later obtained methanol soluble extract and methanol
insoluble extracts. Then extract the ethanol, soluble methanol extract and insoluble
methanol extract toxicity first tested with the method of Brine Shrimp Lethality Test.
The results showed extracts have high levels of toxic substances against larvae of
Artemia salina Leach with LC50 values of 11,56 μg/ml. Sample were fractionated on
a column of liquid chromatography in vacuo to give three fractions, namely the
combined fractions A, B, and C. Each fraction was tested for toxicity and fraction B
has achieved results that have high toxic levels the other fraction compared with LC50
values of 10,665 μg / ml. Part of the identification results showed the presence of
steroids, compounds of the class of flavonoids
Keywords : Brine Shrimp Letality Test (BSLT), swords leaves (Sansevieria
trifasciata Prain), Flavonoids and Steroids.
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Secara umum, kini masyarakat dunia semakin banyak yang memilih
menggunakan bahan alami untuk mengatasi masalah kesehatan. Obat herbal dinilai
lebih aman karena efek sampingnya yang relatif kecil dan harganya juga dapat
dijangkau oleh masyarakat luas (Katno, 2008: 4).
Tingginya daya tarik masyarakat terhadap pengobatan alami merupakan
konsep gaya hidup back to nature atau kembali ke alam dengan memanfaatkan
potensi bahan-bahan alam yang memiliki khasiat farmakologis. Pengobatan yang
dilakukan secara tradisional umumnya berasal dari warisan turun-temurun dan telah
menyatu dengan kultur atau tradisi masyarakat setempat (Katno, 2008: 2).
Salah satu tanaman obat yang dimanfaatkan sebagai pengobatan tradisional
adalah daun pedang-pedang yang merupakan tanaman herba yang tidak bertangkai.
Disebut daun pedang-pedang karena sosok tanamannya berbentuk pedang panjang
yang tegak dengan ujung lancip dan bergelombang. Daunnya berdaging tebal, tetapi
mudah patah karena liat. Warna daun bermacam-macam, yaitu hijau abu-abu dengan
bagian pinggir daun berwarna kekuningan memanjang dan hijau abu-abu dengan pita
melintang berwarna hijau gelap. Tanaman ini mudah dikembangbiakkan, yaitu cukup
dengan memisahkan anakan, batang dan setek daunnya (Mursito, 2011: 60)
Bagian yang dimanfaatkan dari daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata
Prain) adalah daun dan rimpangnya. (Hidayat, 2015: 257). Daun pedang-pedang
2
digunakan untuk pengobatan flu, batuk, radang saluran napas (bronkhitis), bengkak
akibat terbentur (memar), keseleo, digigit ular berbisa, borok, bisul dan penyubur
rambut (Dalimartha, 2006: 55)
Daun pedang-pedang mengandung flavonoid, saponin dan polifenol.
Flavonoid merupakan antioksidan ampuh yang bekerja sebagai pencegah kanker dan
juga memiliki efek antimikroba. Saponin memiliki efek menurunkan kadar gula
darah. Polifenol juga merupakan antioksidan. ellagic acid, sejenis senyawa yang
menghambat enzim yang diperlukan sel-sel kanker, yang tampak membantu
memperlambat perkembangan tumor (Mutia, 2010: 4-5)
Senyawa yang diduga memiliki aktivitas anti kanker, harus diujikan terlebih
dahulu pada hewan percobaan. Salah satu metode yang digunakan secara luas dalam
penelitian bahan alam untuk maksud uji toksisitas tersebut adalah Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT). Metode Brine Shrimp Lethality Test merupakan salah satu
metode bioassay yang dipertimbangkan sebagai uji pendahuluan toksisitas dan
digunakan untuk mendeteksi racun jamur, toksisitas ekstrak tanaman, logam berat,
pestisida, dan uji sitotoksisitas. Metode ini sering digunakan untuk praskrining
terhadap senyawa aktif yang terkandung di dalam ekstrak tanaman karena murah,
mudah dan dapat dipercaya dengan menggunakan hewan laut yaitu larva udang
(Artemia salina Leach). Uji ini mengamati mortalitas larva udang (Artemia salina
Leach) yang disebabkan oleh senyawa uji. Senyawa yang aktif akan menghasilkan
mortalitas yang tinggi (Khrisnaraju, 2006: 115-125).
3
Uji Toksisitas merupakan metode uji yang digunakan untuk mengetahui
tingkat toksik dari suatu senyawa yang ditentukan dalam waktu singkat setelah
pemberian suatu sediaan. Uji toksisitas dengan metode BSLT ini memiliki spektrum
aktifitas farmakologi yang luas, prosedurnya sederhana, cepat dan tidak
membutuhkan biaya yang besar, serta hasilnya dapat dipercaya. Selain itu, metode ini
sering dikaitkan sebagai acuan atau landasan dalam pengujian antikanker. Dengan
alasan-alasan tersebut, maka uji ini sangat tepat digunakan dalam penelitian bahan
alam (Khrisnaraju, 2006: 115-125).
Dari penelitian ini, diharapkan dapat menemukan golongan senyawa dari daun
pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) yang memiliki aktivitas toksisitas
terhadap larva udang (Artemia salina Leach) dengan menggunakan metode BSLT.
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang masalah diatas maka dirumuskan suatu
permasalahan sebagai berikut :
1. Apakah ekstrak etanol, ekstrak larut methanol, dan ekstrak tidak larut metanol
daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) memiliki aktivitas toksik
terhadap larva udang (Artemia salina Leach) dengan menggunakan metode
Brine Shrimp Lethality Test ?
2. Berapa nilai LC50 dari ekstrak etanol, ekstrak larut metanol, dan ekstrak tidak
larut metanol daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) terhadap
larva udang (Artemia salina Leach) ?
4
3. Berapa nilai LC50 dari hasil fraksinasi ekstrak teraktif daun pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) terhadap larva udang (Artemia salina Leach)?
4. Bagaimana tinjauan islam tentang penelitian uji toksisitas ekstrak daun
pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) dan hasil fraksinasinya terhadap
larva udang (Artemia salina Leach) ?
C. Definisi Operasional dan Ruang Lingkup Penelitian
1. Definisi Operasional
a. Uji toksisitas
Merupakan metode uji yang digunakan untuk mengetahui tingkat toksik dari
suatu senyawa yang ditentukan dalam waktu singkat setelah pemberian suatu sediaan.
b. Ekstrak
Merupakan suatu hasil dari proses ekstraksi yang mengandung senyawa-
senyawa kimia aktif baik itu dari tumbuhan, hewan, dan mineral.
c. Etanol
Merupakan pelarut yang digunakan untuk mengekstraksi sampel daun
pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
d. Fraksi
Merupakan suatu hasil dari proses pemisahan komponen-komponen kimia
yang terkandung dalam ekstrak yang dipisahkan melalui beberapa metode tertentu.
5
e. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Merupakan salah satu metode untuk menguji bahan-bahan yang bersifat
toksik dan digunakan sebagai suatu bioassay yang pertama untuk penelitian bahan
alam menggunakan larva udang (Artemia salina Leach).
f. Larva udang (Artemia salina Leach)
Merupakan sejenis udang-udangan primitif yang termasuk dalam filum
anthropoda yang digunakan sebagai hewan coba untuk uji toksisitas bahan alam
dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
g. LC50 (Lethal Concentration 50)
Merupakan konsentrasi zat yang menyebabkan terjadinya kematian pada 50%
hewan coba.
2. Ruang Lingkup penelitian
Penelitian ini menentukan toksisitas fraksi dan
ekstrak teraktif daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) dengan
penentuan LC50 dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
D. Kajian Pustaka
Dalam kajian pustaka dibahas beberapa temuan hasil penelitian sebelumnya
untuk melihat kejelasan arah, originalitas, kemanfaatan, dan posisi dari penelitian ini,
dibandingkan dengan beberapa temuan penelitian yang dilakukan sebelumnya.
Chornelia Laimeheriwa, Adenanne C. Wallur, Widya Astuti Lalo. Farmasi
UNSRAT Manado. 2014. uji efek ekstrak etanol daun pedang-pedang (Sansevieria
6
trifasciata Prain) terhadap penurunan kadar gula darah tikus putih jantan galur
wistar (Rattus norvegicus L.) yang diinduksi sukrosa. Penelitian ini bertujuan untuk
menguji efek ekstrak etanol daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
terhadap penurunan kadar gula darah tikus putih jantan galur wistar (Rattus
norvegicus L.) yang diinduksi sukrosa. Jenis penelitian yaitu eksperimen
laboratorium dengan menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap (RAL).
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka disimpulkan bahwa ekstrak
etanol daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) memiliki efek terhadap
penurunan kadar gula darah tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.)
yang diinduksi sukrosa. Dimana senyawa yang berperan dalam penurunan kadar
glukosa darah mencit merupakan senyawa yang berefek sebagai antioksidan.
R. Au dini mahardika, Nur Hidayat, Irnia Nurika. Universitas Brawijaya
Malang. 2014. Ekstraksi antioksidan dari daun pedang-pedang (Sansevieria
Trifasciata Prain) menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE) dan
Pulsed Electric Field (PEF). Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan
perbandingan aktivitas hasil ekstraksi antioksidan pada Sansevieria trifasciata
menggunakan metode MAE dan PEF. Pada penelitian ini didapatkan hasil kadar
antioksidan terbaik untuk pengujian DPPH dilakukan pada perlakuan terbaik yang
diperoleh nilai IC50 100,92 pada EF dan 116,11 pada MAE.
Ermin Katrin, Susanto dan Hendig Winarno. Jurusan Kimia Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau. 2012. Uji Toksisitas
Ekstrak Kulit Batang Pulai Basung (Alstonia Spatulata Bl) Dengan Metode Brine
7
Shrimp Lethality Test. Pada penelitian ini, didapatkan hasil ekstrak diklorometana
kulit batang Pulai Basung (Alstonia spatulata Bl) bersifat toksik terhadap larva udang
A. Salina Leach. dengan nilai LC50 sebesar 163 ppm. Ekstrak ini berpotensi untuk
diteruskan isolasinya untuk mendapatkan senyawa yang bersifat anti tumor atau anti
kanker.
E. Tujuan dan Manfaat Penelitian
1. Tujuan Penelitian
a. Mengetahui aktivitas toksik ekstrak etanol, ekstrak larut metanol, dan ekstrak
tidak larut metanol daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) terhadap
larva udang (Artemia salina Leach) dengan menggunakan metode Brine Shrimp
Lethality Test.
b. Menentukan nilai LC50 larva udang (Artemia salina Leach) setelah pemberian
ekstrak etanol, ekstrak larut metanol, dan ekstrak tidak larut metanol daun
pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain).
c. Menentukan nilai LC50 larva udang (Artemia salina Leach) dari hasil fraksinasi
ekstrak teraktif daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain).
d. Menjelaskan tinjauan Islam tentang penelitian uji toksisitas fraksi ekstrak etanol
daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) terhadap larva udang
(Artemia salina Leach).
8
2. Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini yaitu dapat menambah informasi ilmiah,
pengetahuan serta gambaran kepada penulis dan masyarakat luas terutama dalam
penemuan senyawa aktif yang bersifat toksik dari bahan alam khususnya daun
pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) terhadap larva udang (Artemia salina
Leach) yang dapat mendukung pengembangan ekstrak daun pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) sebagai sumber senyawa bioaktif.
9
BAB II
TINJAUAN TEORETIS
A. Uraian Tanaman Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
1. Klasifikasi tanaman
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Liliopsida
Bangsa : Liliales
Suku : Agavaceae
Marga : Sansevieria
Spesies : Sansevieria trifasciata Prain
(Agromedia, 2007: 183)
2. Nama Daerah
Lidah mertua (Indonesia), letah menyamak (sumatera), pacing towo (Jawa),
mandafika (Madura), lidah mertua (Sunda), daun pedang-pedang (Makassar)
\(Wahyuni, 2008: 87)
3. Morfologi
Terna menahun ini memiliki akar rimpang yang menjalar. Daun tunggal. Kaku
dan keras, permukaan licin, berkumpul sebagai roset akar, yaitu 2-6 helai daun yang
berkumpul di pangkal akar. Helaian daun berbentuk panjang dan menyempit dengan
bagian tepimelengkung ke dalam menyerupai tulang, ujung runcing, pangkal
menyempit, kedua permukaan daun berwarna hijau dengan garis-garis bergelombang
horizontal dan tepi daun berwarna kuning emas, panjang 30-120 cm, lebar 2.5-8 cm.
Bunga mejemuk dalam tandan dengan panjang 30-80 cm, 3-8 kuntum bunga
10
membentuk bulir, berwarna hijau muda, harum, mekar menjelang malam. Buah buni,
berbiji 1-3 bulat, diameter 3 mm, dan berwarna merah tua (Dalimartha, 2006: 54-55).
4. Kandungan kimia
Beberapa bahan kimia yang terkandung dalam daun pedang-pedang,
diantaranya vitamin C, tannin, steroid, abamagenin, kardenolin, flavonoid, saponin
dan polifenol (Dalimartha. 2006: 55)
Buah daun pedang-pedang memiliki rasa pahit, manis, serta bersifat seidikit
sejuk dan sedikit astrigent. daun pedang-pedang memiliki rasa pedas dan bersifat
netral. Sementara itu, akarnya memiliki rasa tawar dan bersifat netral. Beberapa
bahan kimia yang terkandung dalam buah daun pedang-pedang, diantaranya vitamin
C, tanin, glucogollin, gallic acid, ellegolic acid, corilogin, terchebin, chebulagic
acid,cebulinic acid, chebulic acid, -3,6- digolloylglucose, muric acid, phylembic acid,
dan ebilicol. Biji daun pedang-pedang mengandung linolenic acid, linoleic acid, oleic
acid, dan strearic acid. Daun pedang-pedang mengandung amlaic acid, lupeol, R-
sistesterol, ellogiic acid, gallic acid,-3,6-digolloylglu-cose, corilagin, chebulagic acid,
chebulinic acid, dan glucogulli. Daun pedang-pedang mengandung lupeal, ellogic
acid, dan b-sisterol. Bahan kimia yang tekandung akan masuk ke dalam limpa dan
lambung (Hariana, 2013: 222-223).
5. Kegunaan
Efek farmakologi daun pedang-pedang di antaranya untuk mengobati demam,
flu, batuk, sakit tenggorokan, sakit gigi, sariawan, gusi berdarah dan bernanah,
kencing manis, kekurangan vitamin C, menghilangkan dahak dan haul, serta dipheria.
Akar daun pedang-pedang untuk mengobati darah tinggi, radang saluran napas, sakit
ulu hati (epigastric poin), diare, sifilis, kanker, digigit lipan, TBC kelenjar
11
(Tuberculosus lymhpodenopathy), antalmentik, ambeien (wasir), astrigent,
hypotensif, serta membersihkan panas dan racun. Daun pedang-pedang digunakan
untuk mengobati bengka (edema), eksim, bisul, digigit lipan, digigit bular berbisa,
fistula ani (anal fistula), penyubur rambut, penyakit telinga, dan sakit gigi. Buah daun
pedang-pedang digunakan sebagai penurun panas (antipiretik), anti radang,
menyejukkan tenggorokan, memelihara paru-paru, sebagai obat batuk, serta
digunakan sebagai diuretik. Daunnya untuk diuretik, sementara itu, akarnya untuk
atrigen, hypotensif serta membersihkan panas dan racun (Hariana, 2013: 223)
B. Uraian Hewan Coba
1. Klasifikasi (Singgih, 2013: 8)
Filum : Arthopoda
Class : Crustaceae
Subclass : Branchiopoda
Bangsa : Anostraca
Famili : Artemiidae
Suku : Artemia
Jenis : Artemia salina Leach
2. Morfologi
Artemia merupakan salah satu jenis pakan alami yang hidup di laut. Telur
artemia yang baru menetas merupakan jenis pakan awal bagi larva patin (sampai
umur 7 hari) yang kandungan proteinnya cukup tinggi yaitu sekitar 55%. Artemia
12
merupakan golongan zooplankton yang hidup sebagai planktonik yaitu melayang
dalam air. Artemia termasuk jenis udang-udangan yang mempunyai ukuran relatif
kecil dengan sistem osmoregulasi yang efisien sehingga mampu beradaptasi pada
kisaran salinitas yang luas (5-150 ppt) (Kholish, 2010: 131).
Tingkat hidup Artemia salina Leach mengalami beberapa tingkatan, tetapi
secara jelas dapat dilihat dalam 3 bentuk yang sangat berlainan yaitu bentuk telur,
nauplius (larva) dan artemia dewasa. Secara berkala, pada saat air laut atau danau
menguap, partikel-partikel yang berwarna coklat, berdiameter sekitar 0,2-0,3 mm
akan naik ke permukaan, oleh angin akan dibawa hanyut ke darat. Partikel tersebut
merupakan telur-telur yang inaktif atau tidur dari Artemia salina Leach. Sepanjang
telur-telur tersebut terhidrasi dan dalam keadaan dispauze, akan memiliki ketahanan
dan kestabilan dalam penyimpanan yang lama. Jika telur-telur tersebut (yang
embrionya dalam keadaan dispauze) direndam dalam larutan bergaram (air laut), telur
akan menyerap air laut hingga menggembung. Proses penyerapan ini berlangsung
secara hiperosmotik yaitu adanya tekanan osmosis di dalam telur yang lebih tinggi
daripada diluarnya (Mudjiman, 1988: 15).
Setelah telur menggembung dan metabolisme berlangsung terus, untuk
mencapai tingkatan ini dibutuhkan waktu sekitar 15 jam. Terjadinya pemecahan
cangkang telur yang keras itu dibantu oleh kegiatan enzim yaitu enzim penetasan
pada pH lebih dari 8. Sekitar 17 jam perendaman, embrio yang keluar dari cangkang
yang masih dibungkus oleh selaput penetasan tumbuh terus hingga akhirnya keluar
13
dari selaputnya menjadi makhluk hidup baru yaitu waktu 19 jam, hingga rata-rata
berkisar 24-36 jam. Dalam pengembangan selanjutnya, banyak mengalami
metamorfosis. Pada tingkatan Instar I, kandungan energi masih cukup tinggi. Sekitar
24 jam kemudian, mereka sudah berubah menjadi Instar II mulai mempunyai mulut,
saluran pencernaan dan dubur. Oleh karenanya mereka sudah mencari makanan.
Demikian seterusnya sampai Instar XV. Setelah itu berubah menjadi artemia dewasa.
Proses ini biasanya berlangsung 1-3 minggu (Mudjiman, 1988: 15-25).
Tubuh terbagi atas bagian kepala, dada dan perut. Pada bagian kepala terdapat
2 tungkai mata, 2 antena dan 2 antenula. Dada terbagi atas 11 segmen yang masing-
masing mempunyai sepasang kaki renang, sedangkan perut terbagi atas 8 segmen.
Artemia salina dewasa bentuknya telah sempurna. Reproduksi Artemia salina dapat
dengan bertelur atau dengan melahirkan anak. Pergantian reproduksi ini
dimungkinkan oleh jumlah klorofil dalam makanannya dan faktor oksigen dalam
lingkungan. Konsentrasi oksigen yang rendah dan klorofil yang tinggi dalam
makanannya menyebabkan reproduksi dengan telur, dan sebaliknya akan
menyebabkan reproduksi dengan melahirkan anak (Mudjiman, 1988: 15-25).
Kandungan kimia yang terdapat dalam tubuh Artemia salina adalah protein
dan asam lemak yang tinggi. Nilai nutrisi Artemia dewasa mempunyai keunggulan
yaitu kandungan proteinnya meningkat dari rata-rata 47% pada nauplius menjadi 60%
pada Artemia dewasa yang telah dikeringkan (Singgih, 2013: 66).
3. Lingkungan Hidup
14
Artemia salina Leach hidup planktonik diperairan berkadar garam tinggi, suhu
yang dikehendaki berkisar antara 25oC-30
oC, oksigen terlarut sekitar 3 mg/L dan pH
antara 7,3-8,4. Artemia salina Leach tidak dapat mempertahankan diri dari pemangsa
musuh-musuhnya karena tidak mempunyai alat atau cara untuk membela diri, salah
satu cara menghindarkan diri dari pemangsa hewan lain dengan berpindah ke kondisi
alam berupa lingkungan hidup berkadar garam tinggi. Pada umumnya pemangsa
tidak dapat hidup lagi pada kondisi itu. Makanan Artemia salina Leach terdiri atas
ganggang renik, bakteri dan cendawan. Dalam pemeliharaan makanan yang diberikan
adalah katul padi, tepung terigu, tepung kedelai dan ragi (Mudjiman, 1995: 15-25).
4. Perkembangan dan Siklus Hidup
Perkembangbiakan artemia tidak selalu terjadi melalui perkawinan, karena
hewan ini mempunyai dua cara reproduksi diri yaitu jenis biseksual dan jenis
partenogenenesis. Perkembangbiakan jenis biseksual harus melalui proses
perkawinan antara induk jantan dan induk betina. Pada jenis partenogenesis tidak ada
perkawinan karena memang tidak pernah ada jantannya. Jadi, betina akan beranak
dengan sendirinya tanpa perkawinan. Pada kondisi lingkungan yang optimal, baik
induk yang bereproduksi secara biseksual maupun partenogenesis akan menghasilkan
nauplius. Sebaliknya bila kondisi lingkungan kurang menguntungkan, induk artemia
yang semula siap melahirkan akan menghasilkan telur bercangkang tebal yang
disebut kista. Dengan demikian selain bersifat ovovivipar (melahirkan telur yang
15
sudah menjadi anak) dalam melahirkan, artemia juga bersifat vivipar (mengeluarkan
telur) (Ghufran, 2010: 137-138).
5. Pengggunaan Artemia salina Leach dalam Penelitian
Suatu metode uji hayati yang tepat dan murah untuk skrining dalam
menentukan toksisitas suatu ekstrak tanaman aktif yaitu dengan menggunakan hewan
uji Artemia salina Leach. Artemia sebelumnya telah digunakan dalam bermacam-
macam uji hayati seperti uji pestisida, polutan, mikotoksin, anestetik, komponen
seperti morfin, kekarsinogenikan dan toksikan dalam air laut. Uji dengan organisme
ini sesuai untuk aktifitas fakmakologi dalam ekstrak tanaman yang bersifat toksik.
Penelitian menggunakan Artemia salina Leach memiliki beberapa keuntungan antara
lain cepat, murah, mudah dan sederhana. Penetasan telur Artemia salina Leach yang
baik perlu memperhatikan beberapa faktor yaitu: hidrasi dari kista-kista, aerasi,
penyinaran, suhu, derajat keasaman (pH), dan kepadatan telur dalam media penetasan
(Singgih. 2013: 67).
Penelitian dengan larva Artemia salina Leach telah digunakan oleh Pusat
Kanker Purdue, Universitas Purdue di Lafayette untuk senyawa aktif tanaman secara
umum dan tidak spesifik untuk zat anti kanker. Namun demikian hubungan yang
signifikan dari sampel yang bersifat toksik terhadap larva Artemia salina Leach
ternyata juga mempunyai aktifitas sitotoksik. Berdasarkan hal tersebut maka larva
Artemia salina Leach dapat digunakan untuk uji sitotoksik (Singgih. 2013: 67-68).
C. Brine Shrimpt Lethality Test (BSLT)
16
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode untuk
menguji bahan-bahan yang bersifat toksik dan digunakan sebagai suatu bioassay yang
pertama untuk penelitian bahan alam. Metode ini menggunakan larva Artemia salina
Leach sebagai hewan coba. Uji toksisitas dengan metode BSLT ini merupakan uji
toksisitas akut dimana efek toksik dari suatu senyawa ditentukan dalam waktu
singkat, yaitu rentang waktu selama 24 jam setelah pemberian dosis uji. Prosedurnya
dengan menentukan nilai LC50 dari aktivitas komponen aktif tanaman terhadap larva
Artemia salina Leach. Suatu ekstrak dikatakan toksik berdasarkan metode BSLT jika
harga LC < 1000 μg/ ml (Carballo, 2002: 16).
Penelitian Carballo dkk tahun 2002 tentang “A Comparison Between Two
Brine Shrimp Assays to Detect In Vitro Cytotoxicity in Marine Natural Products”
menunjukkan adanya hubungan yang konsisten antara toksisitas dan letalitas Brine
shrimp pada ekstrak tanaman. Metode BSLT dapat dipercaya untuk menguji aktivitas
farmakologis dari bahan-bahan alami. Apabila suatu ekstrak tanaman bersifat toksik
menurut harga LC50 dengan metode BSLT, maka tanaman tersebut dapat
dikembangkan sebagai obat anti kanker. Namun, bila tidak bersifat toksik maka
tanaman tersebut dapat diteliti kembali untuk mengetahui khasiat lainnya dengan
menggunakan hewan coba lain yang lebih besar dari larva Artemia salina seperti
mencit dan tikus secara in vivo (Carballo, 2002: 17).
Nilai LC50 merupakan nilai yang menunjukkan besarnya konsentrasi suatu
bahan uji yang dapat menyebabkan 50% kematian jumlah hewan uji setelah
17
perlakuan 24 jam. Melalui metode tersebut, pelaksanaan skrining awal suatu senyawa
aktif akan berlangsung relatif cepat dengan biaya yang relatif murah. Hal ini
dikarenakan hanya ekstrak atau senyawa yang memiliki aktivitas antikanker
berdasarkan metode BSLT tersebut yang selanjutnya dapat diyakinkan efek
antikankernya terhadap biakan sel kanker (Mukhtar, 2007: 31).
D. Toksisitas
Toksisitas merupakan kemampuan suatu molekul atau senyawa kimia yang
dapat menimbulkan kerusakan pada bagian yang peka didalam maupun dibagian luar
tubuh mahluk hidup. Suatu senyawa kimia dapat dikatakan sebagai racun jika
senyawa tersebut dapat menimbulkan efek yang merusak. Efek yang ditimbulkan
sangat tergantung dengan kadar racun (toksin) yang diberikan dengan dilakukan
pengukuran besarnya kadar atau konsentrasi bahan yang dapat menimbulkan
pengaruh pada organisme uji (Ambara, 2007: 9). Setiap zat kimia baru harus terlebih
dahulu dilakukan penelitian mengenai sifat-sifat ketoksikannya sebelum
diperbolehkan digunakan secara luas. Oleh karena itu, dalam proses pemanfaatan dan
pengembangan obat tradisional bersumber hayati, harus dilakukan beberapa langkah
pengujian sebelum digunakan dalam pelayanan kesehatan. Setelah diketahui obat
alam tersebut berkhasiat secara empirik maka dilakukan uji praklinik untuk
menentukan keamanannya melalui uji toksisitas dan menentukan khasiat melalui uji
farmakodinamik serta uji klinik pada orang sakit atau orang sehat. Setelah terbukti
18
manfaat dan keamanannya, maka obat tradisional tersebut dapat digunakan dalam
pelayanan kesehatan (Oktora, 2006: 97-100).
Uji toksisitas secara kuantitatif dapat ditinjau dari lamanya waktu, yang dapat
diklasifikasikan menjadi toksisitas akut, sub akut, dan kronis. Toksisitas akut adalah
efek total yang didapat pada dosis tunggal dalam 24 jam setelah pemaparan.
Toksisitas akut bersifat mendadak, waktu singkat, biasanya reversibel. Uji toksisitas
atas dasar dosis dan waktu spesifik toksisitas akut. Dosis merupakan jumlah racun
yang masuk ke dalam tubuh. Besar kecilnya dosis menentukan efek secara biologi
(Verma, 2008: 601-605).
E. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa
aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian
semua atau hampir semua pelarut diuapkan dari massa atau serbuk yang tersisa
diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Dirjen POM,
1995: 7).
Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik dan memisahkan senyawa yang
mempunyai kelarutan berbeda–beda dalam berbagai pelarut komponen kimia yang
terdapat dalam bahan alam baik dari tumbuhan, hewan, dan biota laut dengan
menggunakan pelarut organik tertentu (Ditjen POM, 2000: 82).
Umumnya, zat aktif yang terkandung dalam tanaman maupun hewan lebih
larut dalan pelarut organik. Proses terekstraksinya zat aktif dalam tanaman adalah
19
pelarut organik akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif, zat aktif akan terlarut sehingga terjadi perbedaan konsentrasi
antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel. Maka larutan
terpekat akan berdifusi ke luar sel, dan proses ini akan berulang terus sampai terjadi
suatu keseimbangan antara konsentrasi zat aktif di dalam sel dan di luar sel (Gennaro,
2000: 1047).
Metode ekstraksi menggunakan pelarut dapat dilakukan secara dingin yaitu
maserasi dan perkolasi, serta secara panas yaitu refluks, soxhlet, digesti, infus, dan
dekok (Ditjen POM, 2000: 82). Berikut adalah metode yang umum digunakan
menurut (Darwis, 2000: 33) adalah :
1. Maserasi
Maserasi merupakan proses perendaman sampel dengan pelarut organik yang
digunakan pada temperatur ruangan (29oC). Proses ini menguntungkan karena
perendaman dalam waktu tertentu akan memecah dinding dan membran sel, sehingga
senyawa metabolit dapat keluar. Maserasi merupakan cara yang sederhana, maserasi
dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut. Pelarut akan
menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang mengandung zat-zat aktif
sehingga zat aktif akan larut. Adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di
dalam sel, maka larutan yang pekat didesak keluar (Khunaifi, 2010: 12).
2. Perkolasi.
20
Merupakan proses melewatkan pelarut organik pada sampel sehingga pelarut
akan membawa senyawa organik bersama-sama pelarut.
3. Metode Soklet.
Menggunakan soklet dengan pemanasan dan pelarut akan dapat dihemat
karena terjadinya sirkulasi pelarut yang selalu membasahi sampel. Cocok untuk
senyawa yang tidak terpengaruh panas.
4. Destilasi Uap.
Proses destilasi lebih banyak digunakan untuk senyawa organik yang tahan
pada suhu yang cukup tinggi, yang lebih tinggi dari titik didih pelarut yang
digunakan.
5. Pengempasan.
Metode ini lebih banyak digunakan dalam proses industri pada isolasi Crude
Palm Oil (CPO) dari buah kelapa sawit dan isolasi katekin dari gambir.
Pada penelitian ini metode yang digunakan adalah metode maserasi dimana
maserasi merupakan proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar).
Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan
penyarian maserat pertama, dan seterusnya (Depkes RI, 2000: 82-84).
Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi adalah heksan dan etanol yang
merupakan senyawa nonpolar dan polar. Pelarut organik yang umum digunakan
untuk memproduksi konsentrat, ekstrak, absolut atau minyak atsiri dari bunga, daun,
21
biji, akar, dan bagian lain dari tanaman adalah etil asetat, n-heksana, petroleum eter,
benzen, toluen, etanol, isopropanol, aseton, dan air (Mukhopadhyay, 2002: 32).
Menurut Hukmah (2007), ada dua pertimbangan dalam memilih jenis pelarut
yaitu pelarut harus mempunyai daya larut yang tinggi dan pelarut tidak berbahaya dan
beracun. Pelarut yang sering digunakan dalam proses ekstraksi adalah aseton, etil
asetat, etanol, n-heksana, isopropil alkohol, dan metanol. Adapun pelarut yang
digunakan pada penelitian ini yaitu etanol. Pelarut etanol memiliki rumus molekul
C2H5OH dan bersifat volatile dan etil asetat adalah senyawa organik dengan rumus
CH3COOC2H5. Senyawa ini merupakan ester dari etanol dan asam asetat. Senyawa
ini berwujud cairan tak berwarna dan memiliki aroma khas. Etil asetat diproduksi
dalam skala besar sebagai pelarut.
Etanol termasuk dalam alkohol primer, yang berarti bahwa karbon yang
berikatan dengan gugus hidroksil paling tidak memiliki dua atom hidrogen yang
terikat dengannya juga. Reaksi kimia yang dijalankan oleh etanol kebanyakan
berkutat pada gugus hidroksilnya. Etanol termasuk dalam alkohol rantai tunggal,
dengan rumus kimia C2H5OH dan rumus empiris C2H6O. Etanol merupakan isomer
konstitusional dari dimetil eter. Etanol sering disingkat menjadi EtOH, dengan "Et"
merupakan singkatan dari gugus etil (C2H5) (Lei dkk., 2002: 149-156).
F. Fraksinasi
Fraksinasi pada prinsipnya adalah proses penarikan senyawa pada suatu
ekstrak dengan menggunakan dua macam pelarut yang tidak saling bercampur.
22
Pelarut yang umumnya dipakai untuk fraksinasi adalah n-heksan, etil asetat, dan
metanol. Untuk menarik lemak dan senyawa non polar digunakan n-heksan, etil
asetat untuk menarik senyawa semi polar, sedangkan metanol untuk menarik
senyawa-senyawa polar. Dari proses ini dapat diduga sifat kepolaran dari senyawa
yang akan dipisahkan. Sebagaimana diketahui bahwa senyawa-senyawa yang bersifat
non polar akan larut dalam pelarut yang non polar sedangkan senyawa-senyawa yang
bersifat polar akan larut dalam pelarut yang bersifat polar juga (Mutiasari, 2012: 9).
Vacum Liquid Chromatography atau kromatografi cair vakum adalah
kromatografi kolom yang dipercepat dan bekerja pada kondisi vakum. Prinsip yang
digunakan adalah adanya perbedaan sifat fisik dan kimia dari senyawa yaitu
kecenderungan dari molekul untuk melarut dalam cairan (kelarutan), menguap
(keatsirian), dan melekat pada permukaan serbuk labus (adsorpsi, penyerapan).
Modifikasi kromatografi cair yang dibantu dengan menggunakan vakum dapat
diaplikasikan untuk memperoleh beberapa fraksi dalam waktu yang cepat dan tidak
menggunakan fase diam serta fase gerak yang terlalu banyak (Pelletier et al.,1986
982-900).
Kolom kromatografi dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT
10-40 μm) dalam keadaaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum.
Vakum dihentikan, pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan
penjerap lalu divakumkan lagi. Kolom dihisap sampai kering dan siap dipakai.
Cuplikan dilarutkan ke dalam pelarut yang cocok, dimasukkan langsung pada bagian
23
atas kolom atau pada lapisan penjerap dan dihisap sampai kering pada setiap
pengumpulan fraksi. Oleh karena itu, kromatografi vakum cair menggunakan tekanan
rendah untuk meningkatkan laju aliran fase gerak (Hostettmann et al., 1995).
Metode yang umum digunakan untuk memisahkan komponen-komponen
senyawa yaitu metode kromatografi. Untuk tujuan kualitatif dapat digunakan
kromatografi lapis tipis (KLT) sedangkan untuk pemisahan senyawa dalam jumlah
besar dapat digunakan kromatografi kolom (Mutiasari, 2012: 9).
Fraksi-fraksi yang dihasilkan dianalisis secara keseluruhan dengan metode
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan eluen tertentu. Fraksi-fraksi yang
mempunyai kromatogram yang sama digabung hingga diperoleh beberapa fraksi.
G. Metode Pemisahan Secara Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis adalah metode pemisahan fitokimia. Lapisan yang
memisahkan terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada
penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan
dipisah berupa larutan, ditotolkan berbentuk bercak atau pita (awal), kemudian pelat
dimasukkan di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang
cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan).
Senyawa yang tidak berwarna selanjutnya harus ditampakkan (dideteksi) (Rohman,
2007: 353).
Fase diam yang digunakan dalam KLT adalah bahan penyerap. Penyerap yang
umum adalah silika gel, alumunium oksida, selulosa, kiselgur, selulosa dan
24
turunannya. Dua sifat yang penting dari penyerap adalah besar partikel dan
homogenitasnya, karena adhesi terhadap penyokong sangat tergantung pada hal
tersebut. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit
kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensinya dan
resolusinya (Rohman, 2007: 354).
Fase gerak yang dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak
sepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara naik
(ascending), atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan menurun
(descending). Fase gerak adalah medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa
pelarut. Ia bergerak di dalam fase diam karena adanya gaya kapiler. Laju rambat
tergantung kepada viskositas pelarut dan struktur lapisan (misalnya butiran
penyerap). Agar pemisahan baik dan reproduksibel perlu diperhatikan pemilihan
kondisi kerja yang meliputi sifat pengembangan, kejenuhan bejana dan lain-lain
(Rohman, 2007: 354).
Bercak pemisahan pada KLT umumnya merupakan bercak yang tidak
berwarna. Terdapat berbagai kemungkinan untuk deteksi senyawa tak berwarna pada
kromatogram. Deteksi paling sederhana adalah jika senyawa menunjukkan
penyerapan di daerah Ultra Violet (UV) gelombang pendek (radiasi utama pada kira-
kira 254 nm) atau jika senyawa tersebut dapat dieksitasi ke fluorosensi radiasi UV
gelombang pendek dan atau gelombang panjang (366 nm). Jika dengan kedua cara itu
senyawa tidak dapat dideteksi, maka harus dicoba dengan menggunakan reaksi kimia.
25
Pada sistem KLT dikenal istilah kecepatan rambat suatu senyawa yang diberi simbol
Rf (retentition factor). Harga Rf ditentukan oleh jarak rambat senyawa dari titik awal
dan jarak rambat fase gerak dari titik awal. Harga Rf ini dapat digunakan untuk
identifikasi senyawa yang dianalisa. Penentuan harga Rf adalah sebagai berikut:
Rf
(Rohman, 2007: 366).
Nilai Rf nilai dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor :
a. Ukuran partikel dari absorben
b. Derajat keaktifan dari lapisan adsorben
c. Kemurnian pelarut
d. Konsentrasi pelarut
e. Kejenuhan ruang elusi
f. Temperatur
g. Keterampilan bekerja
Kromatografi lapis tipis (KLT) memiliki beberapa kelebihan yaitu pemisahan
senyawa yang amat berbeda seperti senyawa organik alam dan senyawa organik
sintetik, kompleks anorganik-organik, dan bahkan ion anorganik, dapat dilakukan
dalam beberapa menit dengan alat yang harganya tidak terlalu mahal. Selain itu
pelarut dan cuplikan yang digunakan jumlahnya sedikit (Rohman, 2007: 366).
26
H. Tinjauan Islam
Saat ini, tanaman obat menjadi salah satu alternatif obat yang dipilih oleh
masyarakat luas. Hal ini karena tanaman obat tidak mempunyai efek samping yang
besar bila dibandingkan dengan obat modern yang terbuat dari bahan kimia sintetis.
Selain itu, tanaman obat pun semakin populer dengan makin meluasnya informasi
dan penanganan medis secara tradisonal yang ditayangkan di televisi sehingga
membuat masyarakat luas makin tertarik untuk mencoba dan memanfaatkan tanaman
obat.
Dalam ilmu pengetahuan modern disebutkan bahwa Al-Qur’an memiliki
beberapa tumbuhan yang dapat mencegah sampai menyembuhkan penyakit. Allah
menyuruh manusia supaya memperhatikan keragaman dan keindahan disertai seruan
agar merenungkan ciptaanNya yang menakjubkan. Rasululluh saw. bersabda, dalam
hadits Abu Hurairah RA :
ما أن زل الله داء إل أن زل له شفاءArtinya :
Tidaklah Allah menurunkan suatu penyakit melainkan Allah menurunkan
obatnya pula” (H.R. Al-Bukhari: 5678).
Ungkapan “setiap penyakit pasti ada obatnya”, artinya bisa bersifat umum,
sehingga termasuk di dalamnya penyakit-penyakit mematikan dan berbagai penyakit
yang tidak bisa disembuhkan oleh para dokter. Allah sendiri telah menjadikan untuk
penyakit tersebut obat-obatan yang dapat menyembuhkannya. Akan tetapi ilmu
tersebut tidak ditampakkan Allah untuk menggapainya. Karena ilmu pengetahuan
27
yang dimilki oleh manusia hanyalah sebatas yang diajarkan oleh Allah swt. Oleh
sebab itu, kesembuhan terhadap penyakit dikaitkan oleh rasulullah dengan proses
kesesuaian obat dengan penyakit yang diobati. Karena setiap ciptaan Allah swt. Itu
pasti ada penawarnya (Ar-Rumaikhon, 2008: 31-32).
Setiap yang diciptakan olehnya diperuntukkan kepada manusia sebagai
khalifah di muka bumi ini untuk dimanfaatkan sebaik-baiknya dan setiap penyakit
pasti ada obatnya yang menjadi penawarnya agar penyakit itu dapat sembuh.
Semua penyakit memiliki obatnya, manusialah yang perlu berusaha untuk
mencari dan menggunakan obat-obat tersebut bagi penyembuhan penyakitnya. Yang
tidak dapat diobati hanyalah kematian dan ketuaan. Kematian dan ketuaan merupakan
hal yang tidak bisa ditolak, dimajukan, dan dimundurkan, tapi berjalan sesuai
ketetapan yang telah ditentukan oleh Allah swt. meskipun manusia berusaha untuk
melakukan hal-hal yang dapat mencegah dari kematian, seperti berobat pada saat
sakit, tetapi bila Allah swt. telah menetapkan kematiannya maka ia akan meninggal
saat itu pula. Demikian halnya dengan ketuaan, seberapa besar pun upaya yang
dilakukan oleh manusia untuk menghindarinya, tapi usia manusia akan terus
bertambah, tidak dapat berkurang atau kembali, dan seiring itu pula fungsi-fungsi
organ dari tubuhnya akan berkurang.
Allah swt berfirman dalam Qs. Thaha/20:53
28
Terjemahnya:
Dia Yang telah menjadikan bagi kamu bumi sebagai hamparan dan yang
telah menjadikan bagi kamu di bumi itu jalan-ja]an, dan menurunkan dari
langit air hujan. Maka Kami tumbuhkan dengannya berjenis-jenis tumbuh-
tumbuhan yang bermacam-macam.
Menurut tafsir Al-Misbah menyatakan Dia, yakni Allah, Yang telah
menjadikan bagi kamu, wahai Fir’aun dan seluruh manusia, sebagaimana besar bumi
sebagai hamparan dan menjadikan sebagian kecil lainnya gunung-gunung untuk
menjaga kestabilan bumi dan Dia, yakni Tuhan itu juga, Yang telah menjadikan bagi
kamu di bumi itu jalan-jalan yang mudah kamu tempuh, dan menurunkan dari
langit air, yakni hujan, sehingga tercipta sungai-sungai dan danau, maka Kami
tumbuhkan dengannya, yakni dengan perantara hujan itu, berjenis-jenis tumbuh-
tumbuhan yang bermacam-macam jenis, bentuk, rasa, warna dan manfaatnya. Itu
semua Allah ciptakan buat kamu dan binatang-binatang kamu (Shihab, 2009: 604)
Al-Qur’an dan sunnah memberikan perhatian besar kepada umat Islam dalam
segala bidang kehidupan, termasuk dalam menjaga kesehatan dan menyembuhkan
sakit. Rasulullah saw. telah mengajarkan bagaimana cara memohon kesehatan dan
kesembuhan kepada Allah swt, mengajarkan berikhtiar dengan cara cara halal dan
diridhai (Muhadi, 2009: 5). Rasulullah saw. mengajarkan bahwa Allah swt. adalah
Zat Yang Maha Menyembuhkan sebagaimana dalam firman-Nya QS. Asy-syu’ara/
26 : 80
Terjemahnya :
Dan apabila aku sakit, Dialah yang menyembuhkan aku (Departemen agama
RI, 2009 : 371).
29
Firman-Nya wa idza maridhtu dan apabila aku sakit, berbeda denga redaksi
lainnya. Perbedaan pertama adalah penggunaan kata idza apabila dan mengandung
makna besarnya kemungkinan atau bahkan kepastian terjadinya apa yang
dibicarakan, dalam hal ini adalah sakit. Ini mengisyaratkan bahwa sakit berat atau
ringan, fisik atau mental merupakan salah satu keniscayaan hidup manusia.
Perbedaan kedua adalah redaksinya yang menyatakkan “Apabila aku sakit” bukan
“Apabila Allah menjadikan aku sakit”. Namun, demikian, dalam hal penyembuhan
seperti juga dalam pemberian hidayah, makan dan minum secara tegas beliau
menyatakan Yang melakukannya adalah Dia, Tuhan semesta alam itu. (Shihab, 2007:
69).
Dalam Al-Qur’an terdapat beberapa ayat yang menerangkan tentang urusan
kesehatan untuk dipelajari dan diperhatikan oleh segenap umat manusia, terutama
para pengikut Al-Qur’an. Karena dengan ilmu ini, kaum muslimin akan memperoleh
kesehatan bagi jasmaninya dan dengan kesehatan tubuhnya itulah mereka akan dapat
melaksanakan tugas-tugas kewajibannya dalam agama (Chalil, 2008: 24).
30
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Lokasi penelitian
1. Jenis Penelitian
Penelitian ini adalah penelitian kuantitatif yang dilakukan secara
eksperimental. Perlakuan dengan pemberian ekstrak daun Pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) terhadap larva udang (Artemia salina Leach).
2. Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmasi Biologi Fakultas Ilmu
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
B. Pendekatan Penelitian
Pendekatan penelitian yang digunakan yaitu pendekatan eksperimental.
C. Populasi dan Sampel
1. Populasi
Populasi penelitian ini adalah daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata
Prain) yang diperoleh dari kelurahan bontoparang kecamatan parangloe kabupaten
Gowa provinsi Sulawesi Selatan.
2. Sampel
Sampel yang digunakan adalah daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata
Prain).
31
D. Instrumen Penelitian / Pengumpulan Data
1. Alat-alat yang digunakan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah aerator, cawan porselin,
chamber, corong, dispo 5 ml, Erlenmeyer
(Pyrex) 100 ml, gelas piala 250 ml, gelas
ukur
(Pyrex) 5 dan 10 ml, lampu uv 254 dan 366 nm, mikropipet
(Socorex) 0,5-1,
1- 10, 10-100, 100-1000 μl, pipa kapiler, rotavapor
(IKA), sendok tanduk,
seperangkat alat uji BSLT, seperangkat alat kromatografi cair vakum, spatel besi,
timbangan analitik
(Precisa), timbangan kasar
(O’Hauss), vial dan wadah maserasi.
2. Bahan-bahan yang digunakan
Bahan-bahan yang digunakan adalah air laut, air suling, ekstrak daun pedang-
pedang (Sansevieria trifasciata Prain), etanol 70%, etil asetat, metanol, n-heksan,
kertas wokmen, lempeng silica gel F254, pereaksi AlCl3 5%, dragendorf, FeCl3 5%,
H2SO4 10%, KOH Liebermann Bouchard, ragi, silica gel 60 PF254, dan larva udang
(Artemia salina Leach).
E. Tekhnik Pengolahan dan Analisis Data
1. Penyiapan Sampel
a. Pengambilan Sampel
Sampel penelitian yang digunakan adalah daun pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain). Pengambilan sampel dilakukan pada pagi hari pukul 08.00-10.00
WITA. Daun yang digunakan adalah seluruh daun yang tidak rusak, tidak berjamur
dan tidak berwarna kuning atau terlalu tua.
32
b. Pengolahan Sampel
Sampel yang telah dikumpulkan kemudian dibersihkan dari kotoran, lalu
dicuci dengan air bersih. Setelah itu sampel dikeringkan dengan cara diangin-
anginkan, terlindung dari sinar matahari kemudian diserbukkan hingga menjadi
simplisia.
c. Ekstraksi Sampel
Sampel daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) yang telah kering
ditimbang sebanyak 400 gram kemudian dimasukan kedalam bejana maserasi
kemudian sampel dibasahi dengan pelarut etanol 70% lalu dituangi dengan pelarut
etanol 70% hingga sampel terendam semua. Wadah maserasi ditutup dan disimpan
selama 3 x 24 jam di tempat yang terlindung sinar matahari langsung sambil sesekali
diaduk, selanjutnya disaring, dipisahkan antara ampas dan filtrat.
Ampas diekstraksi kembali dengan penyari yang baru dengan jumlah yang
sama. Hal ini terus dilakukan hingga cairan penyari tampak bening. Ekstrak etanol
yang diperoleh kemudian dikumpulkan dan diuapkan cairan penyarinya dalam
rotavapor 40oC sampai diperoleh ekstrak etanol kental. Ekstrak sampel disaring
dengan kertas whatman menggunakan rangkaian pompa vakum.
Setelah didapatkan ekstrak etanol kental maka dilakukan ekstraksi cair-padat
dengan pelarut metanol menggunakan alat sentrifuge yang bertujuan untuk
memisahkan tingkat kepolaran ekstrak yang didapatkan.
33
2. Uji Toksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
a. Penyiapan larva Udang
Langkah awal dalam penyiapan larva udang yaitu dengan menetaskan telur
udang dalam wadah penetas yang berisi air laut (pembuatannya menggunakan 39
gram garam tidak beriodium dalam 1 L air). Alat penetas dilengkapi dengan lampu
sebagai sumber cahaya dan diberi aerator yang berfungsi sebagai oksigen dan
menjaga agar telur tidak mengendap. Wadah penetas yang digunakan berbentuk
kerucut. Telur dimasukkan pada wadah dan akan menetas kira-kira 24 jam setelah
ditaburkan. Setelah itu dipindahkan kedalam wadah bersekat yang ditutupi salah satu
sisinya dengan lakban hitam selama 2x24 jam. Larva udang akan siap untuk
digunakan dalam pengujian setelah berumur 48 jam.
b. Pembuatan Konsentrasi Sampel dan Kontrol
Ekstrak dari daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) ditimbang
sebanyak 50 mg. Kemudian ekstrak tersebut dilarutkan dalam pelarut etanol 70%
sebanyak 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10000 μg/ml sebagai larutan stok.
Untuk membuat konsentrasi 10 μg/ml, 100 μg/ml dan 1000 μg/ml, maka dari larutan
stok tersebut dipipet ke dalam vial masing-masing 5 μl, 50 μl, dan 500 μl
menggunakan mikropipet, kemudian tiap vial di tambahkan air laut hingga 5 ml.
Pembuatan kontrol pelarut dilakukan dengan memasukkan pelarut etanol 70% tanpa
sampel kedalam vial dengan volume 500 μl.
34
c. Pelaksanaan uji
Pengujian sampel dilakukan dengan cara memasukkan masing-masing sampel
ke dalam vial yang kemudian diuapkan dengan diangin-anginkan hingga pelarutnya
hilang.
Selanjutnya vial diisi air laut 1 ml, lalu sepuluh ekor Artemia salina Leach.
umur 48 jam yang sehat (bergerak aktif) dipilih secara acak, dimasukkan ke dalam
vial yang berisi sampel yang bebas pelarut menggunakan pipet tetes kemudian
ditambahkan air laut sampai 5 ml.
Satu tetes suspensi ragi Saccharomyces cerevicease (3 mg/10 ml air laut)
ditambahkan ke dalamnya sebagai makanan Artemia salina Leach. Vial diletakkan di
bawah lampu penerangan selama 24 jam. Setelah 24 jam jumlah larva yang hidup
dihitung dengan bantuan kaca pembesar. Persen kematian larva dihitung dengan
menggunakan rumus:
% kematian larva =
x 100 %
d. Analisis dan Pengolahan Data
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan dihitung dengan menggunakan
analisis probit untuk mendapatkan LC50.
3. Fraksinasi Komponen Kimia
a. Persiapan Kolom Kromatografi Cair Vakum
Sinter glass kromatografi cair vakum dibersihkan kemudian dipasang tegak
lurus. Adsorben (silika gel 60 PF254) dimasukkan dalam sinter glass kemudian di
35
tambahkan cairan pengelusi metanol, selanjutnya pompa vakum dijalankan hingga
adsorben (silika gel) rapat.
b. Pemisahan Komponen Kimia
Ekstrak yang memiliki nilai LC50 yang lebih rendah ditimbang sebanyak 3g.
Kemudian ditimbang silika gel sebanyak 20g. Silika gel ditambahkan sedikit demi
sedikit kemudian diaduk hingga homogen, didiamkan hingga kering. Setelah kering
dimasukkan ke dalam sinter glass dan bagian atasnya ditutup dengan kertas saring.
Ekstrak yang memiliki nilai LC50 yang rendah difraksinasi menggunakan
kromatografi kolom cair vakum (KCV) memakai fase diam silika gel 60 PF254 dan
fase gerak dengan gradien kepolaran yang meningkat berdasarkan profil KLT yang
diperoleh. Masing-masing fraksinasi diuji toksisitasnya dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT).
4. Kromatografi Lapis Tipis
a. Penjenuhan Chamber
Cairan pengelusi yang digunakan dimasukkan ke dalam chamber setinggi
lebih kurang 0,5 cm kemudian diberi kertas. Kejenuhan chamber ditandai dengan
naiknya cairan pengelusi pada kertas saring hingga melewati kaca penutup.
b. Penotolan Sampel Pada Lempeng
Ekstrak etanol dari sampel ditotolkan pada lempeng bagian batas bawahnya.
Lempeng dielusi dengan eluen dalam chamber, sampai cairan pengelusi mengelusi
lempeng sampai batas akhir. Lempeng dikeluarkan dan diangin-anginkan, lempeng
siap untuk diamati penampakan nodanya.
36
c. Penampakan Noda Pada Lampu UV 254 nm dan 366 nm.
Lempeng yang telah dielusi diamati penampakan noda yang terbentuk
dibawah sinar lampu UV 254 nm dan 366 nm.
d. Penampakan Noda dengan H2SO4 10%
Setelah diamati di bawah lampu UV, lempeng disemprot dengan larutan
H2SO4 10%, kemudian dipanaskan pada pemanas listrik hingga terbentuk noda.
5. Identifikasi Komponen Kimia
Fraksi dengan LC50 paling rendah ditotolkan pada lempeng KLT kemudian
dielusi dengan eluen yang sesuai dengan profil KLT yang diperoleh.
Kromatogramnya diamati di bawah UV 254 dan 366 nm kemudian disemprot dengan
menggunakan pereaksi penampak noda antara lain sebagai berikut :
a. Alkaloid
Pereaksi yang digunakan yaitu Dragendorf, jika sampel positif mengandung
alkaloid, maka timbul warna jingga dengan latar belakang kuning.
b. Steroid
Pereaksi yang digunakan Liebermann-Burchard atau pereaksi Salkowski.
Kromatogram terlebih dahulu dipanaskan, kemudian diamati di lampu UV 366 nm,
munculnya noda berflouresensi coklat atau biru menunjukkan adanya triterpen,
sedangkan munculnya warna hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.
c. Flavanoid
Pereaksi yang digunakan yaitu Aluminium Klorida diamati di lampu UV 366
nm, jika sampel yang mengandung senyawa flavanoid maka noda akan berfluoresensi
37
kuning.
d. Fenol
Pereaksi yang digunakan Besi (III) Klorida, jika sampel positif mengandung
fenol akan dihasilkan warna hijau atau biru.
e. Khumarin
Pereaksi yang digunakan KOH etanolik, jika sampel positif mengandung
senyawa khumarin akan dihasilkan warna merah terang.
38
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Penelitian
1. Ekstraksi Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
No
. Sampel
Berat
sampel
Berat
Ekstrak
Volume Pelarut
(Etanol 70%)
Lama
perendaman
1. Daun Pedang-
pedang 400 gram 19,985 gram 6 liter 3 x 24 jam
No Sampel Metode Berat ekstrak
1. Daun Pedang-pedang Partisi Cair-Padat 6,5 gram
2. Partisi Cair-Padat
Tabel 2. Hasil Partisi Cair-Padat Ekstrak Etanol Daun Pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain)
No Ekstrak Berat ekstrak Volume Pelarut (Metanol)
1. Larut metanol 2,8 gram 900 ml
2. Tidak Larut metanol 2,3 gram 900 ml
3. Uji Brine Shrimp Lethality Test
Tabel 3. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain) dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test
Ekstrak
Kematian larva
(%) Konsentrasi
(μg/ml)
Nilai Probit LC50
(μg/ml
)
Persamaan
Regresi
1000 100 10 1000 100 10
Etanol 90% 74% 48% 6.28 5.64 4.95 11.56 y = 4.293 + 0.665x
Larut
methanol 82% 56% 38% 5.92 5.15 4.69 29.44 y = 4.023 + 0.615x
Tidak larut
methanol 84% 62% 44% 5.99 5.31 4.85 21.28 y = 4.243 + 0.57x
39
Tabel 4. Hasil Uji Toksisitas Fraksi Ekstrak Etanol Daun Pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) dengan menggunakan metode Brine Shrimp
Lethality Test
4. Identifikasi KLT
Tabel 5. Hasil Identifikasi KLT Ekstrak Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata
Prain)
Ekstrak
Kematian larva
(%) Konsentrasi
(μg/ml)
Nilai Probit LC50
(μg/ml)
Persamaan
Regresi
1000 100 10 1000 100 10
Fraksi A 60% 42% 22% 5,25 4,77 4,23 309,02 Y=3,73 + 0,51x
Fraksi B 94% 76% 50% 6.55 5.71 5.00 10,665 Y = 4.203 + 0.775x
Fraksi C 64% 48% 6% 5,36 4,95 3.45 271,01 Y= 2,676 + 0,955x
No. Ekstrak UV 254 nm UV 366 nm
Perbandingan
Noda N.Rf Noda N.Rf
1. ethanol - -
1 0,61 Heksan : Etil
Asetat
3 : 1
2 0,49
3 0,32
4 0,16
40
5. Fraksinasi Sampel
Tabel 6. Hasil Fraksinasi Daun Pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
No Ekstrak Eluen Fraksi Perbandingan Volume Berat Fraksi
1. Methanol Heksan :
Etil
Asetat
A 12:1 61 ml
0,271 gram A 9:1 60 ml
A 6:1 60 ml
B 3:1 60 ml
1,216 gram
B 1:1 60 ml
B 1:3 60 ml
B 1:6 60 ml
B 1:9 60 ml
B 1:12 61 ml
Etil B Etil 60 ml
Etil :
Metanol
B 9:1 60 ml
B 6:1 60 ml
C 3:1 60 ml
0,412 gram
C 1:1 60 ml
C 1:3 60 ml
C 1:6 60 ml
Metanol C Metanol 60 ml
41
6. Identifikasi Senyawa Kimia
Fraksi B yang memiliki toksisitas tertinggi selanjutnya diidentifikasi dengan
berbagai pereaksi sebagai berikut :
Tabel 7. Hasil identifikasi komponen kimia Daun Pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain) dengan menggunakan metode BSLT.
No. Pereaksi Jenis Senyawa Hasil
1. Dragendorf Alkaloid -
2. AlCl3 Flavanoid +
3. Lieberman-Bouchard Steroid +
4. KOH Khumarin -
5. FeCl3 Fenol -
B. Pembahasan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain). Daun pedang-pedang digunakan untuk mengobati
bengkak (edema), eksim, bisul, digigit lipan, digigit bular berbisa, fistula ani (anal
fistula), penyubur rambut, penyakit telinga, dan sakit gigi.
Pengambilan Sampel dilakukan pada saat terjadi fotosintesis maksimal yaitu
sekitar pukul 08.00 – 12.00 WITA dimana pada saat fotosintesis maksimal terjadi
pembentukan zat aktif (senyawa metabolit primer maupun sekunder). Daun pedang-
pedang (Sansevieria trifasciata Prain) diambil dengan cara dipotong langsung bagian
pangkalnya, diambil daun yang tidak rusak, tidak terlalu tua dan tidak berwarna
kuning sehingga diharapkan kandungan zat aktif dalam daun tersebut sudah cukup
banyak. Sampel yang telah diperoleh dibersihkan dengan cara dicuci bersih dengan
air mengalir. Setelah itu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan dengan tidak
42
disinari matahari langsung. Setelah cukup kering sampel dipotong-potong kecil untuk
memudahkan dalam proses pengeringan selanjutnya dan hal ini dilakukan untuk
memperbesar luas permukaan sampel sehingga kontak antara cairan penyari dan
sampel lebih besar sehingga memudahkan penyarian komponen kimia yang terdapat
dalam sampel. Tujuan pengeringan ini dimaksudkan untuk menghindari
pertumbuhan mikroba sebagaimana telah diketahui bahwa medium berair dan lembab
akan lebih mudah ditumbuhi mikroba atau jamur. Setelah sampel benar-benar kering,
dilakukan sortasi dengan memisahkan sampel yang utuh dan layak untuk dijadikan
sampel untuk pengujian selanjutnya dengan sampel yang rusak atau tidak layak.
Selanjutnya sampel diekstraksi dengan menggunakan metode yang sesuai. Adapun
tujuan dari proses ekstraksi ini adalah untuk menarik komponen kimia yang terdapat
dalam simplisia.
Kepolaran pelarut merupakan pertimbangan penting dalam ekstraksi senyawa
flavonoid. Untuk daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) diekstraksi
dengan pelarut etanol 70%. Penggunaan pelarut etanol 70 % pada ekstraksi simplisia
awal dengan jumlah yang lebih banyak dimaksudkan untuk memaksimalkan
hidrolisis (pemecahan) dan penarikan senyawa yang terdapat dalam sampel daun
pedang-pedang. Dengan pemecahan lemak tersebut maka akan memudahkan dalam
mengekstraksi senyawa target flavonoid yang memiliki sifat polar. Senyawa polar
biasanya akan lebih baik diekstraksi dengan pelarut golongan polar seperti etanol.
Etanol 70% memiliki tingkat kepolaran tinggi dimana senyawa polar diharapkan larut
dalam pelarut ini. Pada ekstraksi ini, metode yang digunakan adalah maserasi, hal ini
43
disebabkan karena sampel memiliki struktur agak keras, dimana pada metode ini
sampel tidak dipanaskan langsung dengan cairan penyari sehingga kemungkinan
untuk rusaknya struktur kimia senyawa yang terdapat dalam sampel yang tidak tahan
pada pemanasan dapat dihindari. Adapun prinsip dari metode ini adalah penyarian
komponen zat aktif dari simplisia, dengan cara merendam serbuk simplisia dalam
cairan penyari. Cairan penyari akan masuk ke rongga sel menembus dinding sel dan
melarutkan zat aktif yang ada dalam sel. Karena perbedaan konsentrasi zat aktif di
dalam dan di luar sel menyebabkan terjadinya difusi zat aktif yang ada dalam sel akan
keluar sel. Demikian seterusnya sampai terjadi kesetimbangan.
Setelah diperoleh ekstrak etanol 70% yang cair maka dipekatkan dengan
bantuan alat Rotary evaporator. Prinsip pemekatan ekstrak pada alat ini yaitu dengan
cara memisahkan ekstrak dengan cairan penyarinya berdasarkan titik didihnya,
sehingga akan didapatkan ekstrak yang lebih pekat atau ekstrak yang lebih kental.
Ekstrak etanol daun lidah mertua yang diperoleh sebanyak 19,985 gram.
Pada ekstrak etanol daun pedang-pedang. (Sansevieria trifasciata Prain).
dilakukan partisi cair padat. Proses ini dilakukan dengan menggunakan alat
sentrifuge. Pelarut yang digunakan pada metode ini adalah metanol. Hal ini
disebabkan karena metanol merupakan pelarut yang bersifat semipolar yang dapat
melarutkan senyawa kimia polar maupun non polar, selain itu metanol sulit di
tumbuhi oleh jamur maupun bakteri. Hasil yang diperoleh dari partisi cair padat yaitu
ekstrak larut metanol yang diperoleh sebanyak 2,8 gram dan ekstrak yang tidak larut
metanol yang diperoleh sebanyak 2,3 gram.
44
Selanjutnya ekstrak yang diperoleh diuji efek toksiknya terhadap Artemia salina
Leach dengan menggunakan konsentrasi 10, 100, dan 1000 μg/ml. Metode ini
merupakan metode uji hayati yang sederhana, cepat, mudah, murah dan sederhana
yang biasanya menggunakan larva udang (Artemia salina Leach). Daya toksisitas
suatu senyawa dapat diketahui dengan menghitung jumlah kematian larva udang
dengan parameter Lethal Concentration 50 (LC50). Suatu ekstrak dinyatakan toksik
bila LC50 dibawah 1000 μg/ml dan diatas 1000 μg/ml dinyatakan tidak toksik.
Kontrol negatif dilakukan untuk melihat apakah respon kematian hewan uji benar –
benar berasal dari sampel dan bukan disebabkan oleh pelarut yang digunakan.
Metode BST dilakukan untuk mendeteksi keberadaan senyawa toksik yang dipakai
untuk memonitor dalam isolasi senyawa dari tumbuhan yang berefek toksik dengan
menentukan LC50 dari senyawa aktif. Larva diuji pada saat berumur 48 jam karena
pada umur tersebut Artemia salina Leach mengalami pertumbuhan yang sangat cepat
sehingga diasumsikan sebagai pertumbuhan sel yang abnormal seperti sel kanker.
Hasil dari uji BSLT pada ekstrak etanol, diperoleh nilai LC50 yaitu 11,56
μg/ml dengan % kematian larva pada konsentrasi 1000 ppm = 90% dan nilai probit =
6,28; % kematian larva pada konsentrasi 100 ppm = 74% dan nilai probit = 5,64; dan
% kematian larva pada konsentrasi 10 ppm = 48% dan nilai probit = 4,95. Pada
ekstrak larut metanol diperoleh nilai LC50 = 29,44 μg/ml, % kematian larva pada
konsentrasi 1000 ppm = 82% dan nilai probit = 5,92; % kematian larva pada
konsentrasi 100 ppm = 56% dan nilai probit = 5,15; % kematian larva pada
konsentrasi 10 ppm = 38% dan nilai probit = 4,69;. Pada ekstrak tidak larutl metanol
45
diperoleh nilai LC50 = 21,28 μg/ml, % kematian larva pada konsentrasi 1000 ppm =
84% dan nilai probit = 5,99; % kematian larva pada konsentrasi 100 ppm = 62% dan
nilai probit = 5,31; % kematian larva pada konsentrasi 10 ppm = 44% dan nilai probit
= 4,85. Hasil pengujian menunjukkan bahwa ekstrak Etanol memiliki efek toksik
yang lebih besar terhadap larva Artemia salina Leach. Ekstrak yang mempunyai
toksistas yang paling tinggi selanjutnya diuji dengan uji KLT dengan tujuan
mendapatkan pemisahan noda dan eluen yang baik digunakan pada saat fraksinasi.
Selanjutnya masing-masing ekstrak dari sampel diidentifikasi dengan metode
kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan perbandingan eluen tertentu. Namun
jika pada penampakan noda belum didapat jumlah noda yang maksimal atau posisi
noda yang terlalu ke atas atau ke bawah maka perbandingan eluen yang digunakan
dapat dimodifikasi kembali. Ekstrak yang ditotolkan pada lempeng dibuat dalam
konsentrasi yang rendah, karena jika konsentrasinya terlalu pekat, maka akan
diperoleh noda yang berekor atau yang bertumpuk. Selanjutnya lempeng dielusi
dalam chamber yang telah jenuh. Penjenuhan chamber ini dimaksudkan agar proses
elusi dari eluen hanya berasal dari eluen dari dasar chamber dan bukan dari eluen
yang menguap jika chamber tidak jenuh. Setelah itu lempeng dimasukkan dalam
chamber yang telah dijenuhkan.
Setelah lempeng dielusi, dikeluarkan dari chamber kemudian dibiarkan hingga
mengering. Selanjutnya noda-noda pada lempeng diamati dibawah lampu UV 254
nm, 366 nm kemudian disemprot dengan H2SO4 10% dan dipanaskan di atas pemanas
hingga tampak noda pada lempeng. Pada UV 254 nm, lempeng akan berflouresensi
46
sedangkan sampel akan tampak berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu UV
254 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan indikator
fluoresensi yang terdapat pada lempeng. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan
emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang
tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian
kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Pada UV 366 nm noda akan
berflouresensi dan lempeng akan berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu UV
366 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor
yang terikat oleh auksokrom yang ada pada noda tersebut. Fluoresensi cahaya yang
tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika
elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi
kemudian kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang
tampak pada lampu UV 366 terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak
berfluororesensi pada sinar UV 366 nm.
Sedangkan penampakan noda oleh H2SO4 10 % adalah karena asam sulfat ini
bersifat reduktor sehingga dapat memutuskan ikatan rangkap yang akan
mengakibatkan pergeseran panjang gelombang ke arah yang lebih panjang sehingga
dapat terlihat oleh mata. Konsentrasi asam sulfat yang digunakan adalah 10%, karena
jika konsentrasinya terlalu rendah maka kemampuan pemutusan ikatannya tidak
maksimal. Proses pemanasan dimaksudkan untuk membantu proses pemutusan ikatan
rangkap oleh asam sulfat. Warna noda yang tampak dari hasil pengamatan dengan
lampu UV 366 nm dengan H2SO4 10 % berbeda walaupun dengan nilai Rf yang
47
sama. Hal ini dikarenakan oleh emisi yang dipancarkan berbeda pada saat elektron
tereksitasi ke keadaan dasar.
Hasil identifikasi ekstrak etanol daun pedang-pedang. (Sansevieria trifasciata
Prain). dengan eluen heksan : Etil Asetat (3 :1), pada penampak noda UV 254 nm
tidak diperoleh noda. Sedangkan pada UV 366 nm diperoleh 4 noda dengan
perbandingan cairan pengelusi Heksan : Etil Asetat ; 3 : 1, dan nilai Rf-nya yaitu
0.61, 0.49, 0.32 dan 0.16
Metode yang digunakan selanjutnya adalah KCV (kromatografi cair vakum).
Metode ini dipakai karena cepat dan mudah dalam proses pemisahan komponen
kimia. Metode ini dilakukan menggunakan fase diam silika gel 60 PF254 dan fase
gerak dengan gradien kepolaran yang semakin meningkat yaitu berturut-turut heksan
: Etil Asetat {(12:1), (9:1), (6:1), (3:1), (1:1), (1:3), (1:6), (1:9), (1:12)}, Etil Asetat,
Etil Asetat : metanol {(9:1), (6:1), (3:1), (1:1), (1:3), (1:6)}, metanol. Hasil fraksinasi
tersebut selanjutnya dianalisis mengunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT).
Hal ini dilakukan dengan tujuan pengelompokan lebih lanjut terhadap fraksi-fraksi
yang diperoleh berdasarkan kesamaan profil kandungan kimia dari bercak KLT yang
terbentuk. Berdasarkan hal tersebut maka diperoleh 3 fraksi yaitu fraksi A (fraksi 1, 2
dan 3), fraksi B (fraksi 4,5,6,7,8,9,10,11,12,), dan fraksi C (13,14,15,16 dan 17),
Selanjutnya semua Fraksi yang telah digabungkan kemudian dilakukan uji BSLT
untuk mengetahui aktifitas toksisitas antara sebelum proses KCV dan setelah proses
KCV.
48
Fraksi yang diperoleh selanjutnya diuji kembali dengan metode BSLT (Brine
Shrimp Lethality Test) dengan konsentrasi 10 μg/ml, 100 μg/ml dan 1000 μg/ml. Hal
ini dilakukan untuk mengetahui apakah efek toksik hasil fraksinasi lebih besar atau
lebih kecil dibandingkan dengan efek toksik ekstrak awal. Hasil pengamatan
menunjukkan bahwa fraksi B memiliki efek toksik lebih besar terhadap larva Artemia
salina Leach dengan nilai LC50 = 10,665 μg/ml, dibandingkan dengan fraksi A yang
memiliki nilai LC50 sebesar 309,02μg/ml, dan Fraksi C 271,01 μg/ml. Fraksi yang
lain menjadi kurang toksik setelah difraksinasi, diduga toksisitas fraksi tersebut
disebabkan oleh efek sinergi dari senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak. selain
itu pada fraksi B kemungkinan terdapat senyawa yang bersifat toksik sebagaimana
diketahui bahwa disetiap fraksi memiliki senyawa yang berbeda-beda berdasarkan
dilakukannya fraksinasi yaitu pemisahan senyawa berdasarkan tingkat kepolarannya
Selanjutnya fraksi yang memiliki nilai LC50 yang lebih rendah dilakukan
identifikasi senyawa kimia dengan cara ditotolkan pada lempeng KLT kemudian
dielusi dengan dengan heksan: etil asetat (3 : 1). Kromatogramnya disemprot dengan
menggunakan pereaksi penampak noda seperti H2SO4 10% sebagai pereaksi
penampak umum, dragendorf untuk golongan alkaloid atau komponen kimia yang
mengandung senyawa nitrogen, FeCl3 5% untuk senyawa golongan fenol, pereaksi
Lieberman-Bouchard untuk golongan senyawa steroid, terpenoid seperti triterpen dan
sterol, pereaksi AlCl3 5% untuk senyawa golongan flavonoid dan KOH etanolik
untuk senyawa kumarin. Pada uji menggunakan H2SO4 menunjukkan 2 noda. Fraksi
B memberikan hasil negatif terhadap preaksi Dragendorf dengan tidak adanya noda
49
berwarna jingga dengan latar kuning sedangkan pereaksi Liebermann-Burchard
memberikan hasil positif dengan adanya noda berwarna hijau kebiruan menunjukkan
adanya komponen kimia golongan steroid. Fraksi B menunjukkan hasil positif
terhadap pereaksi AlCl3 dengan adanya noda berfluoresensi kuning yang
menunjukkan adanya senyawa golongan flavonoid.
Meyer, et al., (1982) menyatakan bahwa penentuan potensi bioaktif dilakukan
dengan membandingkan LC50 masing – masing ekstrak dengan ketentuan McLaughin
(1991) dikatakan toksik ketika nilai LC50 < 1000, tidak toksis ketika nilai LC50 >
1000, memiliki potensi sebagai pestisida ketika nilai LC50 200 – 1000.
Dari hasil penelitian diperoleh bahwa fraksi B memiliki nilai LC50 10,665
µg/ml. ini menunjukan bahwa fraksi B memiliki potensi nilai LC50 sebagai
antikanker. Dan adapun golongan senyawa yang terdapat pada fraksi B yaitu
flavanoid dan steroid
50
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan :
1. Ektrak etanol, ekstrak larut metanol dan ekstrak tidak larut metanol daun pedang-
pedang (Sansevieria trifasciata Prain) memiliki aktivitas toksik terhadap Larva
Udang (Artemia salina Leach).
2. Ekstrak etanol daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain) memiliki
aktivitas toksik yang lebih besar dengan nilai LC50 11,56 μg/ml dibandingkan
dengan ekstrak larut metanol dengan nilai LC50 29,44 μg/ml dan ekstrak tidak
larut metanol dengan nilai LC50 21,28 μg/ml.
3. Fraksi B dari hasil fraksinasi daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata Prain)
lebih toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach dengan nilai LC50 10,665
μg/ml dibandingkan fraksi lainnya.
B. Saran
Perlu dilakukan isolasi dan identifikasi lebih lanjut mengenai senyawa aktif
dari ekstrak etanol daun pedang-pedang terutama fraksi
51
KEPUSTAKAAN
Agromedia, Redaksi. Buku pintar tanaman hias. Jakarta: Agromedia Pustaka. 2007
Ali bin Sulaiman Ar Rumaikhon, Fiqih Pengobatan Islam. Solo: Al Qowam, 2008.
Ambara. Toksisitas Senyawa Kimia. Yogyakarta: Penebar Swadaya, 2007.
Carballo, J.L. et al. A Comparison Between Two Brine Shrimp Assays to Detect In
Vitro Cytotoxicity in Marine Natural Products. BMC Biotechnology, 2002.
Chalil, Achjar. Pembelajaran Berbasis Fitrah. Jakarta: Balai Pustaka, 2008.
Dalimartha, Setiawan. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 4. Jakarta: Puspa suara.
2006
Darwis, D. Teknik Dasar Laboratorium Dalam Penelitian Senyawa Bahan Alam
Hayati. Padang: Workshop Pengembangan Sumber Daya Manusia Dalam
Bidang Kimia Organik Bahan Alam Hayati. Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam. Universitas Andalas, 2000.
Departemen Agama RI. Al-Qur’an dan Terjemahnya. Semarang: PT. Karya Toha
Putra. 2005.
Departemen Agama. Mushaf Al-Burhan edisi Wanita Tajwid. Bandung: CV. Media
Fitrah Rabbai, 2009.
Depkes RI. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I). Jilid II. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI dan Kesejahteraan Sosial RI Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan, 2000.
Direktorat jendral POM. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Cetakan Pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, 2000.
Dirjen POM. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta : Departemen Kesehatan RI,
1995
Ghufran, Muh., Tamsil. Pembenihan Ikan Laut Ekonomis. Yogyakarta: Lilly
Publisher, 2010.
Hariana Arief. Tumbuhan obat dan khasiatnya. Jakarta: Katalog, 2013.
52
Hostettmann et al.Cara Kromatografi Preparatif. ITB: Bandung. 1995.
Katno. Tingkat Manfaat Keamanan Dan Efektivitas Tanaman Obat Dan Obat
Tradisional. Jawa Tengah: Badan Penelitian Dan Pengembangan Kesehatan
Departemen Kesehatan RI, 2008.
Krishnaraju AV, Rao TV, Sundararaju D, Vanisree M, Tsay H-S, Subbaraju GV.
Assessment of bioactivity of Indian medicinal plants using Brine shrimp
(Artemia salina) lethality assay. International Journal of Applied Science and
Engineering, 2006.
Lei, Z., Wang H., Zhou R., Duan Z. Influence of salt added to solvent on extractive
distillation. Chem Eng J, 2002.
Mudjiman, A. Makanan Ikan. Jakarta: PT. Penerbit Swadaya. 1988.
Mukhopadhyay, M. Natural Ekstracts Using Supercritical Carbon Dioxide.CRC
Press. London. New York: Woshington DC, 2002.
Mursito, Bambang. Tanaman hias berkhasiat obat. Jakarta: Penebar swadaya. 2011
Mursyidi, A. Statistik Farmasi Dan Biologi. Cetakan I. Jakarta: Ghalia Indonesia,
Mustafa, Ahmad Al Maragi. Terjemah Tafsir Al-Maragi. Semarang: KaryaToha
Putra, 1993.
Mutiasari, IR. Identifikasi golongan senyawa kimia fraksi aktif; Journal. Jakarta:
FMIPA-UI, 2012.
Raina. Ensiklopedi Tanaman Obat untuk Kesehatan. Yogyakarta: Absolut Jogja.
2011.
Rohman, Abdul. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar, 2007.
Shihab M. Quraish. Tafsir Al-Misbah Pesan, Kesan dan Keserasian Al-Qur’an Vol.
11. Jakarta: Lentera Hati, 2002.
Verma, R.J., Dave, M, dan Mathuria, N. A Study on Toxicity of Gasoline and GM-10
on Liver of Mice and it’is Amelioration By Black Tea Extract. Acta Poloniae
Pharmaceutica-Drug Research, 2008.
53
Wahyono, Hakim, L., Nurlaila., Sulistio, M., dan Ilyas, R. Uji Toksisitas Akut Ekstrak
Etanolik Terstandar dari Kulit Akar Senggugu (Clerodendru serratum L.
Moon). Majalah Farmasi Indonesia, 2007.
Wahyuni, Sri, dkk. Seri Tumbuhan Obat Berpotensi Hias. Jakarta: PT Elex Media.
2008.
Singgih dan Bagus Sediadi. Artemia. Jakarta: Penebar Swadaya, 2013.
Wonorahardjo, Surjani Ph.D. Metode-metode Pemisahan Kimia Sebuah Pengantar.
Jakarta: Indeks. 2013
Yuniarti, Titin. Ensiklopedia Tanaman obat Tradisional. Yogyakarta : Pressindo.
2008.
54
Lampiran 1. Skema Kerja Ekstraksi dan Fraksinasi Daun Pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) dengan Metode BSLT.
Maserasi dengan etanol 70%
Diuapkan dengan Rotavapor
Uji BSLT dengan konsentrasi 10, 100, 1000 μg/ml
Uji BSLT dengan konsentrasi 10, 100, 1000 μg/ml
400 gram sampel daun pedang-pedang
Ekstrak etanol cair Ampas
Partisi dengan metanol Ekstrak Etanol kental
Kapulaga
Ekstrak Larut metanol Ekstrak Tidak Larut metanol
Ekstrak Teraktif
Fraksinasi dengan KCV
KLT
Fraksi A Fraksi C
Fraksi Teraktif
UV 254 UV 366 AlCl3 KOH FeCl3 LB Dragendorf
Analisis dan Pengolahan Data
Hasil dan Pembahasan
Fraksi B
55
Lampiran 2. Pelaksanaan Uji Brine Shrimp Lethality Test Ekstrak Etanol,
Ekstrak Larut Metanol dan Ekstrak tidak Larut Metanol dan
Fraksi
5 Replikasi
Dibawah sinar lampu selama 24 jam
Ekstrak daun pedang-pedang
Dibuat stok 10 mg/ml
Kontrol Air Laut Kontrol pelarut 10 μg/ml 100 μg/ml 1000 μg/ml
10 ekor larva udang berumur 48 jam
Hitung larva udang mati
Hitung LC50
56
Lampiran 3. Pehitungan pengenceran
Stok : 50 mg / 5 ml = 10000 ppm
1) 1000 μg/ml
V1.N1 = V2.N2
V1.10000 = 5000 . 1000
V1 = 500 μl
2) 100 μg/ml
V1.N1 = V2.N2
V1.10000 = 5000 . 100
V1 = 50 μl
3) 10 μg/ml
V1.N1 = V2.N2
V1.10000 = 5000 . 10
V1 = 5 μl
57
Lampiran 4. Data hasil pengamatan Larva Udang (Artemia salina Leach)
Tabel 8. Data hasil pengamatan larva udang (Artemia salina Leach) yang mati setelah
24 jam perlakuan dengan ekstrak etanol daun pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain)
Ekstrak Etanol
Replikasi Konsentrasi Kontrol
Pelarut
Kontrol
air laut 1000 100 10
I 10 8 5 0 0
II 9 8 5 0 0
III 9 7 5 0 0
IV 9 7 5 0 0
V 8 7 4 0 0
Jumlah 45 37 24 0 0
90% 74% 48% 0% 0%
Ekstrak metanol
Replikasi Konsentrasi Kontrol
Pelarut
Kontrol
air laut 1000 100 10
I 9 6 4 0 0
II 8 5 3 0 0
III 8 5 4 0 0
IV 8 6 4 0 0
V 8 6 4 0 0
Jumlah 41 28 19 0 0
82% 56% 38% 0% 0%
58
Ekstrak tidak larut metanol
Replikasi Konsentrasi Kontrol
Pelarut
Kontrol
air laut 1000 100 10
I 10 7 5 0 0
II 9 6 5 0 0
III 8 6 4 0 0
IV 8 6 4 0 0
V 7 6 4 0 0
Jumlah 42 31 22 0 0
84% 62% 44% 0% 0%
59
Lampiran 5. Data hasil pengamatan Larva Udang (Artemia salina Leach)
Tabel 9. Data hasil pengamatan larva udang (Artemia salina Leach) yang mati setelah
24 jam perlakuan dengan fraksi daun pedang-pedang (Sansevieria trifasciata
Prain)
Fraksi
Konsentrasi % kematian larva
1000 100 10 1000 100 10
A
6 4 2
60% 42% 22%
6 4 0
6 5 3
5 4 3
7 4 3
B
10 8 6
94% 76% 50%
10 8 5
10 7 5
9 8 4
8 7 5
C
6 5 1
64% 48% 6%
7 5 0
7 5 2
6 5 3
6 4 0
60
Lampiran 6. Perhitungan %Kematian larva udang (Artemia salina Leach)
Ekstrak Etanol 70%
1. Konsentrasi 1000 =
= 90%
2. Konsentrasi 100 =
= 74%
3. Konsentrasi 10 =
= 48%
4. Air Laut =
= 0%
5. Pelarut =
= 0%
Ekstrak larut metanol
1. Konsentrasi 1000 =
= 82%
2. Konsentrasi 100 =
= 56%
3. Konsentrasi 10 =
= 38%
4. Air Laut =
= 0%
5. Pelarut =
= 0%
Ekstrak tidak larut metanol
1. Konsentrasi 1000 =
= 84%
2. Konsentrasi 100 =
= 62%
3. Konsentrasi 1000 =
= 44%
61
4. Air Laut =
= 0%
5. Pelarut =
= 0%
Fraksi A
1. Konsentrasi 1000 =
= 60%
2. Konsentrasi 100 =
= 42%
3. Konsentrasi 10 =
= 22%
Fraksi B
1. Konsentrasi 1000 =
= 94%
2. Konsentrasi 100 =
= 76%
3. Konsentrasi 10 =
= 50%
Fraksi C
1. Konsentrasi 1000 =
= 64%
2. Konsentrasi 100 =
= 48%
3. Konsentrasi 10 =
= 6%
62
Lampiran 7. Tabel 10. Harga probit sesuai presentasenya
Sumber : Mursyidi, A. Statistik Farmasi Dan Biologi. Cetakan I. Jakarta: Ghalia
Indonesia, 1984. Hal. 157.
Persentase
Probit
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
-
3,72
4,17
4,48
4,75
5,00
5,25
5,52
5,84
6,28
2,67
3,77
4,19
4,50
4,77
5,03
5,28
5,55
5,88
6,34
2,95
3,82
4,23
4,53
4,80
5,05
5,31
5,58
5,92
6,41
3,12
3,87
4,26
4,56
4,82
5,08
5,33
5,61
5,95
6,48
3,25
3,92
4,29
4,59
4,85
5,10
5,36
5,64
5,99
6,55
3,36
3,95
4,33
4,61
4,87
5,13
5,39
5,67
6,04
6,64
3.45
4,01
4,36
4,64
4,90
5,15
5,41
5,71
6,08
6,75
3,52
4,05
4,39
4,67
4,92
5,18
5,44
5,74
6,13
6,88
3,59
4,08
4,42
4,69
4,95
5,20
5,47
5,77
6,18
7,05
3,66
4,12
4,45
4,72
4,97
5,23
5,50
5,81
6,23
7,33
99
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
7,33 7,37 7,41 7,46 7,51 7,58 7,66 7,75 7,88 8,09
63
Lampiran 8. Hasil perhitungan LC50 ekstrak etanol daun pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain)
Tabel 11. Data Hasil perhitungan LC50 ekstrak etanol daun pedang-pedang
(Sansevieria trifasciata Prain) menurut metode Grafik Probit Log-
konsentrasi.
Ekstrak Etanol
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 90 6.28
100 2 74 5.64
10 1 48 4.95
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasarkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 4,293
y = 0.665x + 4.2933 R² = 0.9995
0
2
4
6
8
0 1 2 3 4
nila
i pro
bit
Log Konsentrasi
ekstrak etanol
Series1
Linear (Series1)
64
b = 0,665x
r = 0,9997
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 4,293 + 0,665x
5 = 4,293 + 0,665x
x =
= 1,063
LC50 = Antilog 1,063
LC50 = 11,56 μg/ml
Ekstrak metanol
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 82 5.92
100 2 56 5.15
10 1 38 4.69
y = 0.615x + 4.0233 R² = 0.9793
0
2
4
6
8
0 2 4
nila
i pro
bit
log konsentrasi
ekstrak larut metanol
Series1
Linear (Series1)
65
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasarkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 4,023
b = 0,615x
r = 0,979
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 4,023 + 0,615x
5 = 4,023 + 0,615x
x =
= 1,469
LC50 = Antilog 1,469
LC50 = 29,44 μg/ml
66
Ekstrak Tidak Larut Metanol
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 84 5.99
100 2 62 5.31
10 1 44 4.85
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasrkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 4,243
b = 0,57x
r = 0,987
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
y = 0.57x + 4.2433 R² = 0.9877
0
2
4
6
8
0 1 2 3 4
nila
i pro
bit
log konsentrasi
ekstrak tidak larut metanol
Series1
Linear (Series1)
67
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 4,243+ 0,57x
5 = 4,243+ 0,57x
x =
= 1,328
LC50 = Antilog 1,328
LC50 = 21,28 μg/ml
Lampiran 9. Hasil perhitungan LC50 fraksi daun pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain)
Tabel 12. Data Hasil perhitungan LC50 fraksi daun pedang-pedang (Sansevieria
trifasciata Prain) menurut Metode Grafik Probit Log-konsentrasi
Fraksi A
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 60 5,25
100 2 42 4,77
10 1 22 4.23
y = 0.51x + 3.73 R² = 0.9988
0
1
2
3
4
5
6
0 1 2 3 4
nila
i pro
bit
log konsentrasi
FRAKSI A
Series1
Linear (Series1)
68
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasrkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 3,73
b = 0,51x
r = 0.998
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 3,75 + 0,51x
5 = 3,75 + 0,51x
x =
= 2,490
Lc50 = Antilog 2.490
Lc50 = 309,02 μg/ml
69
Fraksi B
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 94 6,55
100 2 76 5,71
10 1 50 5,00
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasarkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 4,203
b = 0,775x
r = 0.998
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
y = 0.775x + 4.2033 R² = 0.9977
0
2
4
6
8
0 2 4
Nila
i pro
bit
log konsentrasi
FRAKSI B
Series1
Linear (Series1)
70
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 4,203 + 0,775x
5 = 4,203 + 0,775x
x =
= 1,028
Lc50 = Antilog 1,028
Lc50 = 10,665 μg/ml
Fraksi C
Konsentrasi
Log
Konsentrasi
(X)
%Kematian Nilai Probit
(Y)
1000 3 64 5,36
100 2 48 4,95
10 1 6 3.45
Persamaan garis linear:
Y = a + bx
Y = Persentase respon kematian dalam satuan probit
y = 0.955x + 2.6767 R² = 0.9021
0
1
2
3
4
5
6
0 1 2 3 4
nila
i pro
bit
log konsentrasi
FRAKSI C
Series1
Linear (Series1)
71
x = Log – konsentrasi ekstrak
a = Intersep
b = Slop
Berdasarkan hasil perhitungan regresi diperoleh :
a = 2,676
b = 0,955x
r = 0.902
Sehingga diperoleh persamaan Regresi :
Nilai LC50 :
Y = a + bx
Untuk log LC50 (y) = 5
y = 2,676 + 0,955x
5 = 2,676 + 0,955x
x =
= 2,433
Lc50 = Antilog 2.433
Lc50 = 271,01 μg/ml
72
Lampiran 10. Tanaman Daun Pedang-pedang
Gambar 1.
Tanaman Daun Pedang-Pedang
Gambar 2.
Sampel yang telah kering
73
Lampiran 11. Proses Rotavapor
Gambar 3.
Proses Rotavapor
74
Lampiran 11. Partisi Cair-Padat
Gambar 4.
Proses sentrifuge
75
Lampiran 12. Penetasan larva
Gambar 5.
Penetasan Larva
Gambar 6.
Seleksi Larva Uji
76
Lampiran 13. Pengujian Larva
Gambar 7.
Diisi masing-masing vial dengan konsentrasi ekstrak yang telah dilarutkan dengan
konsentrasi 1000 ppm, 100 ppm, dan 10 ppm kemudian diuapkan
77
Lampiran 14. Profil Kromatografi Lapis Tipis
Gambar 8.
Profil KLT dilihat pada
UV 366
Gambar 9.
Profil KLT dilihat pada
UV 254
Gambar 10.
Profil KLT disemprot
dengan H2SO4
78
Keterangan :
Fase Gerak : Heksan : Etil (3 : 1)
Fase Diam : Silika Gel GF254
Lampiran 15. Proses Kromatografi Cair Vakum
Gambar 11.
Proses KCV
Gambar 12.
Profil KLT pada UV 366
79
Gambar 14.
Disemprot dengan H2SO4
Gambar 13.
Profil KLT pada UV 254
80
Lampiran 16. Uji Brine Shrimp Lethality Test pada Fraksi B
Gambar 15.
Larutan stok yang dimasukkan kedalam vial sesuai dengan konsentrasi masing-
masing
Gambar 16.
Vial yang berisi larutan stok
81
Lampiran 17. Identifikasi Komponen Kimia
A B C D E
Gambar 17. Identifikasi komponen kimia
A = Alkaloid, jika positif maka timbul warna jingga latar belakang kuning (-)
B = Steroid, jika positif maka muncul warna hijau kebiruan (+)
C = Flavonoid, jika positif maka noda akan berfluuoresensi kuning (+)
D = Fenol, jika positif fenol akan warna hijau atau biru (-)
E = Khumarin, jika positif maka muncul warna merah terang (-)
82
RIWAYAT HIDUP
Ainun Safitri Harli yang sering dipanggil dengan sebutan
ainun oleh keluarga dan teman-temanya, ia lahir di kota majene
provinsi sulawesi barat, pada tanggal 28 Agustus 1994. Ia
merupakan anak pertama dari pasangan SUHARLI dan
SUMIATI. ia memiliki seorang adik perempuan yang bernama
Annisa fikrah harli, dan seorang adik laki-laki bernama
Annormansyah fikri harli
Ia mulai memasuki pendidikan dasar di SD Negeri 26 PAKKOLA, Kabupaten
Majene Profinsi Sulawesi Barat pada tahun 2000-2006, dan melanjutkan sekolah di
SMP Negeri 2 Majene pada 2006-2009, karena pekerjaan kedua orangtua dipindah
tugaskan ke kota Mamuju, maka ia sekeluarga berdomisili di kota Mamuju dan ia
melanjutkan sekolah di Madrasah Aliyah Negeri Mamuju pada tahun 2009-2012.
Setelah itu ia melanjutkan ke jenjang perguruan tinggi di Jurusan Farmasi Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar