uji efek penghambatan enzim xantin oksidase ...tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan...

UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI

EKSTRAK ETANOL SARANG SEMUT (Myrmecodia armata DC.) DAN

EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Dany Kristianto

NIM: 148114168

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI

EKSTRAK ETANOL SARANG SEMUT (Myrmecodia armata DC.) DAN

EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Dany Kristianto

NIM: 148114168

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018


ii


iii


iv


v


vi

PRAKATA

Puji dan syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yesus Kristus atas

berkat, rahmat, dan penyertaan-Nya hingga penelitian dan penyusunan skripsi

dengan judul “Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Kombinasi

Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia armata DC.) dan Ekstrak Etanol

Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh. Walp.)” dapat penulis selesaikan.

Penelitian ini merupakan bagian dari penelitian Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt.

dengan nomor SK 025/LPPM/USD/IV/2017 dengan judul proposal “Efek

Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Ekstrak Daun Sidaguri (Sida

rhombifolia L) dan Daun Salam (Eugenia polyantha Wight)”

Skripsi ini penulis susun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh

gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.

Selama proses penyusunan skripsi ini penulis sadar bahwa pembuatan skripsi ini

tidak lepas dari dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada

kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada:

1. Ibu Aris Widayanti, M.Sc., Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

2. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si, Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi dan

selaku Dosen Pembimbing Akademik atas kesabaran, arahan, bimbingan,

semangat, serta dukungannya selama proses penelitian hingga penyusunan

skripsi ini.

3. Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si.,Apt.,selaku Dosen Penguji yang telah memberi

kritik dan saran yang sangat membangun dalam penelitian ini.

4. Bapak Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc., selaku Dosen Penguji yang

telah memberi kritik dan saran yang sangat membangun dalam penelitian ini.

5. Dr. Dewi Setyaningsih, Apt., selaku Kepala Penanggung Jawab Laboratorium

Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan semua

fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian.

6. Bapak Yohanes Wagiran, selaku laboran laboratorium Farmakognosi-

Fitokimia yang telah membantu selama penelitian.


vii

7. Keluarga tercinta Bapak Waluyo dan Ibu Darsini serta Adik Febry Kurniawan

yang selalu memberikan semangat, doa, dan dukungan pada penulis.

8. Rekan seperjuangan penelitian dan satu bimbingan ini yakni Martin

Vincentius, Agnes Puspitasari, Wisnu Adji, Lalla Ragha, Christofel Adiwijaya,

Axel Kevin, dan Sheela Apriana, terima kasih atas semangat dan kerjasamanya

selama ini.

9. Teman-teman FSM D 2014 dan Keluarga Besar Farmasi 2014, terima kasih

atas kebahagiaan dan kebersamaan selama ini.

10. Teman-teman satu meja praktikum yakni Dismas, Wita, Sari, Kevin, Delpin,

dan Diana, terima kasih atas kebersamaan saat suka duka menjalani praktikum

maupun membuat laporan praktikum.

11. Rekan satu regu pencinta alam yakni Stepanus Sinung, Yeremia Dika,

Alfapetra, Silva, Hapsara, Yohanes Dinar. Terima kasih atas segala semangat,

kebersamaan dan kenangan selama sejak bangku SMA hingga saat ini.

12. Serta semua pihak yang telah banyak membantu penulis yang tidak dapat

penulis tulis satu persatu.


viii

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ...........................................................................................i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................ii

HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................iv

PERNYATAAN PUBLIKASI ............................................................................v

PRAKATA ..........................................................................................................vi

DAFTAR ISI .......................................................................................................viii

DAFTAR TABEL ...............................................................................................x

DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................xi

DAFTRA LAMPIRAN .......................................................................................xii

ABSTRAK ..........................................................................................................xiii

ABSTRACT ..........................................................................................................xiv

PENDAHULUAN ..............................................................................................1

METODE PENELITIAN ....................................................................................2

Alat dan Bahan Penelitian .........................................................................2

Determinasi Tanaman ................................................................................3

Pengumpulan Bahan ..................................................................................3

Pembuatan Ekstrak Etanol Tunggal...........................................................3

Pembuatan Ekstrak Etanol Kombinasi ......................................................4

Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase .............................................................4

Pembuatan Larutan ....................................................................................4

Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5 ..................................................4

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase .............................................4

Pembutan Larutan Substrat Xantin ............................................................5

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol ...................................................5

Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum ..............................5

Pengujian Blanko .......................................................................................5

Pengujian Kontrol Blanko .........................................................................6

Pengujian Larutan Uji Sampel ...................................................................6

Pengujian Larutan Kontrol Sampel ...........................................................6


ix

Pengujian Larutan Uji Allopurinol ............................................................7

Pengujian Larutan Kontrol Allopurinol .....................................................7

Perhitungan Nilai IC50 ...............................................................................7

Analisis Data ..............................................................................................7

HASIL DAN PEMBAHASAN ...........................................................................8

Penyiapan Bahan .......................................................................................8

Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT .......................................9

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase ......................................11

KESIMPULAN DAN SARAN ...........................................................................13

UCAPAN TERIMAKASIH ................................................................................13

DAFTAR PUSTAKA .........................................................................................14

LAMPIRAN .......................................................................................................16

BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................33


x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid.......................................................................10

Tabel II. Perbandingan IC50 ekstrak etanol sarang semut-daun salam- kombinasi-allopurinol ...........................................................................12


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (4:1:5), yang diukur pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm ......................................................................................10

Gambar 2. Simplisia daun salam .......................................................................20

Gambar 3. Simplisia sarang semut ....................................................................20

Gambar 4. Ekstrak etanol daun salam ...............................................................21

Gambar 5. Ekstrak etanol sarang semut ............................................................21

Gambar 7. Kurva Allopurinol Repetisi 1 ..........................................................23



Gambar 10. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 1 .......................................25



Gambar 13. Kurva Kombinasi Repetisi 1 ..........................................................27




xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat pengesahan Determinasi......................................................16

Lampiran 2. Certificate of Analysis Xanthine Oxidase ....................................18

Lampiran 3. Certificate of Analysis Xanthine ..................................................19

Lampiran 4. Certificate of Analysis Quercetin .................................................20

Lampiran 5. Simplisia Salam dan Sarang Semut ..............................................21

Lampiran 6. Ekstrak Etanol Daun Salam dan Sarang Semut ............................22

Lampiran 7. Data Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase .........................24

Lampiran 8. Sertifikat CE & BU ......................................................................29

Lampiran 9. Uji Statistik ...................................................................................30


xiii

ABSTRAK Hiperurisemia adalah keadaan di mana terjadi peningkatan kadar asam urat darah di atas normal. Enzim yang berperan dalam sintesis asam urat adalah xantin oksidase (XO) yang mengkatalisis oksidasi hipoxantin dan xantin menjadi asam urat. Obat yang digunakan sebagai penghambat aktivitas enzim xantin oksidase salah satunya adalah allopurinol. Allopurinol bekerja mengurangi sintesis asam urat dengan cara menghambat aktivitas enzim xantin oksidase. Umbi sarang semut dan daun salam sering digunakan sebagai obat tradisional untuk asam urat.Tanaman tersebut diketahui memiliki kandungan flavonoid.

Penelitian dilakukan dengan determinasi tanaman salam dan tanaman sarang semut, pengumpulan daun salam dan umbi sarang semut, pembuatan simplisia, pembuatan ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut, uji kandungan flavonoid, uji efek penghambatan enzim xantin oksidase dan analisis data.

Hasil uji efek penghambatan enzim xantin oksidase oleh allopurinol sebagai pembanding diperoleh nilai IC50 sebesar 0,168µg/mL, ekstrak etanol umbi sarang semut diperoleh nilai IC50 sebesar 21,55 µg/mL, sedangkan kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut diperoleh nilai IC50 sebesar 11,58 µg/mL. Dari hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa kombinasi ekstrak etanol daun salam dan ekstrak etanol umbi sarang semut lebih baik dibandingkan ekstrak etanol tunggal sarang semut dalam aktivitas penghambatan xantin oksidase namun tidak lebih baik bila dibanding dengan allopurinol.

Kata kunci: sarang semut, daun salam, xantin oksidase, ekstrak etanol


xiv

ABSTRACT

Hyperuricemia is a condition in which an elevated uric acid level is above normal level. The enzyme that plays a role in uric acid synthesis is xanthine oxidase (XO) which catalyzes the oxidation of hypoxanthine and xanthine into uric acid. Drugs used as inhibitors of xantin oxidase enzyme activity are allopurinol. Allopurinol works to reduce uric synthesis by inhibiting xanthine oxidase enzyme activity. Myrmecodia armata DC. and Syzygium polyanthum Wigh. Walp. is used as traditional medicine for gout. The plant is known to contain flavonoids.

The research was conducted by determination of Syzygium polyanthum Wigh. Walp. and Myrmecodia armata DC., preparation to simplicia form, ethanol extract of Myrmecodia armata DC. and combination of ethanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and of Myrmecodia armata DC., flavonoid content test, xantin oxidase enzyme inhibition effect and data analysis.

The result of inhibition effect of xanthine oxidase enzyme by allopurinol as comparator obtained IC50 value of 0.168 μg / mL, extract ethanol Myrmecodia armata DC. obtained IC50 value 21,55 μg / mL, and combination of etanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and ethanol extract of Myrmecodia armata DC. obtained IC50 value 11,58 μg / mL. From the results obtained can be concluded that the combination of ethanol extract Syzygium polyanthumWigh. Walp. and ethanol extract of Myrmecodia armata DC. is better than ethanol extract of Myrmecodia armata DC. in the activity of inhibition of xanthine oxidase but not better when compared with allopurinol.

Keywords: Myrmecodia armata DC., Syzygium polyanthum Wigh. Walp., xanthine oxidase, ethanol extract


1

PENDAHULUAN

Hiperurisemia adalah peningkatan kadar asam urat darah di atas normal.

Konsentrasi asam urat yang normal adalah 7,0 mg/dL untuk pria dan 6,0 mg/dL

untuk wanita. Hiperurisemia dapat terjadi karena peningkatan metabolisme asam

urat, penurunan pengeluaran asam urat urin atau gabungan dari keduanya (Sudoyo,

2009). Peningkatan kadar asam urat (hiperurisemia) dapat mengakibatkan

gangguan pada tubuh manusia seperti perasaan linu-linu di daerah persendian dan

sering disertai timbulnya rasa nyeri (Andry, 2009). Hiperurisemia yang

berkepanjangan dapat menyebabkan terjadinya gout. Gout merupakan penyakit

akibat adanya penumpukan kristal monosodium urat pada jaringan akibat

peningkatan kadar asam urat (Sudoyo, 2009).

Asam urat merupakan senyawa kimia hasil akhir dari metabolisme asam

nukleat atau metabolisme purin dalam tubuh. Berdasarkan penyelidikan bahwa

90% dari asam urat merupakan hasil katabolisme purin yang dibantu oleh enzim

guanase dan xantin oksidase (Shamley, 2005). Xantin oksidase (XO) mengkatalisis

reaksi hipoxantin dan xantin menjadi asam urat. Allopurinol adalah salah satu obat

sintetis yang digunakan untuk terapi asam urat. Allopurinol bekerja dengan cara

menghambat enzim XO. Dalam penggunaan allopurinol sebagai penurun asam urat,

allopurinol juga dapat menyebabkan efek samping seperti alergi, demam,

menggigil, leukopenia, gagal ginjal dan hati, dan ganggunan pencernaan (Dipiro et

al., 2008). Oleh karena itu agar terhindar dari efek samping dari allopurinol maka

perlu dicari alternatif pengobatan yang lebih aman dengan menggunakan obat

tradisional. Telah diketahui bahwa Indonesia memiliki kekayaan hayati yang

diantaranya berpotensi sebagai inhibitor xantin oksidase dan antigout, yaitu sarang

semut (Myrmecodia armata DC.) dan daun salam (Syzygium polyanthum Wigh.

Walp.).

Tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan polifenol, dan

asam ellagat (Azmi et al., 2012) serta alkaloid dapat berperan sebagai obat untuk

penyakit gout dengan menghambat kerja enzim xantin oksidase. Flavonoid

berpotensi sebagai inhibitor xantin oksidase (Cos et al., 1998), saponin dan

polifenol juga memiliki kemampuan sebagai inhibitor xantin oksidase yang


2

mekanisme inhibisinya belum diketahui. Uji penapisan kimia dari tumbuhan sarang

semut menunjukan bahwa tumbuhan tersebut mengandung senyawa aktif dari

golongan flavonoid. Ekstrak etanol daun salam mampu menurunkan kadar asam

urat tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.) yang diinduksi potasium

oksonat. Telah dilakukan sebelumnya penelitian pemberian ekstrak etanol 70%

umbi sarang semut (Hydnophytum moseleyanum Becc.) pada dosis 119 dan 179

mg/200 g bb dapat menurunkan kadar asam urat (p<0,05) tikus putih jantan yang

diinduksi kalium oksonat dengan efektivitas masing-masing 58,59 dan 46,37%

(Natasha, 2012). Penelitian sebelumnya juga menunjukan bahwa efek

penghambatan enzim xantin oksidase oleh kombinasi ekstrak daun sidaguri dan

rimpang jahe merah lebih baik bila dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya (Rizki,

2016). Efek yang dimungkinkan muncul dari kombinasi ekstrak yang dilakukan

dapat berupa efek sinergis, aditif maupun antagonis (Bulusu, 2016).

Dalam penelitian ini, dilakukan penelitian untuk menentukan efek

penghambatan enzim xantin oksidase sarang semut dengan membandingkan IC50

ekstrak tunggal sarang semut dengan ekstrak kombinasi daun salam dan umbi

sarang semut untuk mengetahui efek tunggal maupun efek yang dihasilkan dari

kombinasi ekstrak etanol.

METODE PENELITIAN

Alat dan Bahan Penelitian

Bahan-bahan yang diperlukan yaitu umbi sarang semut yang diperoleh dari

Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat, daun salam dari CV Merapi Farma, air

bebas CO2, KH2PO4 1 M, KH2PO4 1 M, HCl 1 N, dapar fosfat 0,05 M, NaOH 1 M,

DMSO, substrat xantin (Sigma Aldrich), allopurinol (Sigma Aldrich), enzim xantin

oksidase (Sigma Aldrich). Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-

Vis (Shimadzu), kromatografi lapis tipis (KLT), lempeng KLT silika gel GF254,

timbangan analitik (Mettler Toledo), rotary evaporator (Buchi), pH meter, vortex,

ultrasonic, mikrotube (Eppendorf), mikropipet (Socorex), dan alat gelas yang lazim

digunakan dalam penelitian (Pyrex).


3

Determinasi Tanaman

Determinasi dilakukan terhadap tanaman sarang semut dan salam dilakukan

di laboratorium Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gajah Mada

Yogyakarta.

Pengumpulan Bahan

Tanaman sarang semut diambil dari Papua pada bulan Mei 2017, tepatnya

Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat. Tanaman sarang semut diambil dari

pohon induk yaitu pohon matoa. Sarang semut dipanen dari ujung pangkal

umbinya, kemudian dicuci dan dibersihkan dengan air mengalir untuk

menghilangkan pengotor. Sarang semut dipotong dengan ukuran sedang,

dibersihkan kembali dari pengotor, dikeringkan kembali selama 1-2 minggu di

bawah sinar matahari hingga kering yaitu jika dapat hancur ketika diremas dengan

tangan. Daun salam diambil dari CV Merapi Farma dengan spesifikasi berupa daun

segar, warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan

keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu untuk

menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu dan serangga. Bagian daun

dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan.kemudian

dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat lalu

ditiriskan sampai sisa air menghilang.

Pembuatan Ekstrak Etanol Tunggal Sarang Semut

Umbi sarang semut dan daun salam dikeringkan dalam oven pada suhu 40ºC

sampai kering, dikatakan kering jika dapat hancur ketika diremas dengan tangan.

Umbi sarang semut dan daun salam yang telah kering kemudian diserbuk

menggunakan blender, lalu diayak dengan ayakan no.40 mesh. Ditimbang kurang

lebih 10 g serbuk kering sarang semut ditambah etanol 96% sebanyak 100 mL

kemudian dimaserasi sambil sekali-kali diaduk selama 24 jam, setelah itu disaring

dengan corong Buchner sampai diperoleh maserat . Maserasi dilakukan berulang–

ulang dengan pelarut yang sama sampai filtrat hasil maserasi jernih. Maserat yang

diperoleh dipekatkan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu lebih

kurang 50oC sehingga diperoleh ekstrak kering etanol.


4

Pembuatan Ekstrak Etanol Kombinasi Sarang Semut dan Daun Salam

Ditimbang kurang lebih 10 g serbuk kering daun salam ditambah etanol

96% sebanyak 100 mL kemudian dimaserasi sambil sekali-kali diaduk selama 24

jam, setelah itu disaring dengan corong Buchner sampai diperoleh maserat.

Maserasi dilakukan berulang–ulang dengan pelarut sama sampai filtrat hasil

maserasi jernih. Maserat yang diperoleh dipekatkan menggunakan vacuum rotary

evaporator pada suhu lebih kurang 50oC sehingga diperoleh ekstrak kering etanol.

Kemudian dengan perbandingan 1:1, ekstrak etanol kering sarang semut dan

daun salam dikombinasikan untuk pembuatan ekstrak etanol kombinasi.

Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase

Pengujian efek inhibitor xantin oksidase dilakukan pada ekstrak etanol

sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan daun salam . Prosedur

penelitian merujuk pada Owen et.al. (1999) dan Umamaheswari et.al. (2009).

Pembuatan Larutan

Pembuatan larutan meliputi pembuatan larutan dapar pH 7,5; pembuatan

larutan HCl 1 N; pembuatan larutan NaOH 2 N; pembuatan larutan enzim xantin

oksidase 0,1 U/mL; pembuatan larutan induk substrat xantin 1 mM; pembuatan

larutan seri substrat xantin 0,15 mM; pembuatan larutan uji ekstrak daun salam; dan

pembuatan larutan pembanding allopurinol.

Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5

KH2PO4 ditimbang 6,805 gram kemudian dilarutkan ke dalam 600 mL

Aquadest Bebas CO2 selanjutnya ditambahkan 18 mL larutan NaOH 2 N kemudian

dimasukkan ke dalam labu takar 1000 mL dan ditambahkan menggunakan

Aquadest Bebas CO2 dan di-adjust pH menggunakan NaOH 0,2 N atau HCl 0,2 N

sampai pH 7,5.

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase

Label kemasan enzim xantin oksidase menunjukan perhitungan 0,8

unit/mg protein. Pembuatan konsentrasi larutan enzim 0,1 unit/mL.Total mg protein

adalahh 5,126 unit/6,408 mg protein. Enzim xantin oksidase ditimbang sebanyak

9,0875 mg, kemudian dilarutkan menggunakan dapar fosfat dimasukkan di dalam

labu takar 10,0 mL hingga batas tanda.


5

Pembuatan Larutan Substrat Xantin

Substrat xantin 15,21 mg ditimbang kemudian dilarutkan menggunakan

beberapa tetes NaOH 0,2 N hingga larut dan dimasukkan dalam labu takar 100 mL

dan ditambahkan menggunakan Aquadest Bebas CO2. Larutan substrat xantin

dibuat dengan cara mengencerkan larutan induk hingga diperoleh larutan substrat

xantin dengan konsentrasi 0,15 mM.

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol

Allopurinol sebanyak 10 mg ditimbang dan dilarutkan dengan beberapa

tetes NaOH 1 N kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan

dengan aquadest bebas CO2 sampai batas tanda sehingga didapatkan konsentrasi

1000 µg/mL. Standar allopurinol dibuat dengan cara mengencerkan larutan induk

sehingga didapatkan larutan standar allopurinol dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5;

dan 10 µg/mL.

Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum

Penentuan optimasi panjang gelombang dilakukan sebelum uji inhibisi

dengan tujuan untuk menentukan kondisi optimum dimana panjang gelombang

menghasilkan serapan maksimum. Penentuan optimasi panjang gelombang

dilakukan dengan mengambil larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 3,9 mL

dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 2 mL larutan substrat

diinkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan 0,1 mL larutan xantin oksidase

digojok hingga homogen kemudian inkubasi selama 30 menit. Kemudian

ditambahkan 1 mL HCl 1 N untuk menghentikan reaksi. Kemudian optimasi

dilakukan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 200-400 nm

dan didapatkan panjang gelombang 291,5 nm.

Pengujian Larutan Blanko

Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M diambil dan dimasukkan ke

dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan larutan substrat xantin sebanyak 2

mL, prainkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan larutan enzim xantin

oksidase sebanyak 0,1 mL dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit. Reaksi

dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya pada


6

panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian

dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Kontrol Blanko

Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M diambil dan dimasukkan ke

dalam tabung reaksi dan ditambahkan larutan substrat xantin sebanyak 2 mL,

dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian ditambahkan 0,1 ml dapar fosfat

dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit dan ditambahkan HCl 1 N

sebanyak 1 mL untuk menghentikan reaksi dan diukur serapannya pada panjang

gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian dilakukan

sebanyak 3 kali.

Pengujian Larutan Uji Sampel

Sebanyak 1 mL larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan larutan

substrat xantin sebanyak 2 mL dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian

ditambahkan 0,1 mL enzim xantin oksidase dan diinkubasi pada suhu 30oC selama

30 menit dan ditambahkan HCl 1 N sebayak 1 mL untuk menghentikan reaksi,

diukur serapannya pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan

spekrofotometer UV. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Larutan Kontrol Sampel

Sebanyak 1 mL larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan larutan

substrat xantin sebanyak 2 mL dilakukan prainkubasi selama 15 menit. Kemudian

ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30 menit

dan ditambahkan HCl 1 N sebayak 1 mL untuk menghentikan reaksi, diukur

serapannya pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV.

Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Larutan Uji Allopurinol

Larutan standar allopurinol dimasukan 1 mL ke dalam tabung reaksi

kemudian ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan

larutan substrat xantin sebanyak 2,0 mL kemudian dilakukan prainkubasi selama

15 menit. Kemudian ditambahkan larutan enzim xantin oksidase sebanyak 0,1 mL


7

dan digojog hingga homogen diinkubasi pada suhu optimum selama 30 menit.

Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya

pada panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian


Pengujian Larutan Kontrol Allopurinol

Larutan standar allopurinol dimasukan 1 mL ke dalam tabung reaksi

kemudian ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 2,9 mL dan

larutan substrat xantin sebanyak 2,0 mL kemudian dilakukan prainkubasi selama

15 menit. Kemudian ditambahkan larutan dapar fosfat 0,05 M sebanyak 0,1 mL dan

digojog hingga homogen diinkubasi pada suhu optimum selama 30 menit. Reaksi

dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL, diukur serapannya pada

panjang gelombang 291,5 nm menggunakan spekrofotometer UV. Pengujian


Perhitungan Nilai IC50

Perhitungan % Aktivitas inhibitor xantin oksidase dapat dihitung dengan

rumus : % Inhibisi = (1-𝐵𝐵𝐴𝐴) x 100%

Keterangan :

A = absorbansi blanko – absorbansi kontrol blanko

B = absorbansi sampel – absorbansi kontrol sampel

Nilai IC50 dihitung menggunakan rumus persamaan regresi untuk

menentukan y = a + bx. Aktivitas inhibisi dinyatakan dengan Inhibition

Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi sampel yang dapat menghambat kerja

enzim xantin oksidase sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah

mengganti y = 50.

Analisis Data

Data uji KLT yang didapatkan dibuat dalam bentuk tabel dan grafik, dan

selanjutnya hasilnya dideskripsikan. Data uji efek penghambatan enzim xantin

oksidase dihitung nilai absorbansi sampel yang didapatkan, persen inhibisi, setelah

didapatkan persen inhibisi kemudian dilanjutkan dengan menghitung nilai IC50

menggunakan metode regresi linear. Analisis Shapiro-Wilk digunakan untuk

melihat normalitas distribusi data dan data yang didapatkan terdistribusi normal


8

maka dapat dilakukan uji Anova satu arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk

mengetahui apakah ada perbedaan data antar kelompok. Pada uji Anova satu arah

yang dilakukan didapatkan hasil nilai P < 0,05, yang selanjutnya dilakukan dengan

analisis Post-Hoc untuk dapat mengetahui bahwa kedua kelompok yang berbeda

bermakna. Hasil nilai P < 0,05 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rerata

bermakna antara dua kelompok data.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penyiapan Bahan

Bahan yang digunakan pada penelitian ini berupa simplisia dari umbi sarang

semut dan daun salam. Umbi sarang semut diambil dari Papua pada bulan Mei

2017, tepatnya Kecamatan Bomberay, Fakfak, Papua Barat yaitu dari pohon matoa.

Sarang semut dipanen dari ujung pangkal umbinya. Daun salam diambil dari CV

Merapi Farma. Kedua bahan tersebut dideterminasi di Laboratorium Sistematika

Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Determinasi

tanaman berfungsi untuk mengetahui dan memastikan jenis tanaman yang akan

digunakan pada saat penelitian secara detail dan lengkap serta dapat

dipertanggungjawabkan secara ilmiah. Hasil dari determinasi menunjukkan bahwa

tanaman yang diambil benar merupakan tanaman salam dan tanaman sarang semut.

Bagian yang digunakan untuk determinasi adalah keseluruhan bagian tanaman yang

meliputi akar, batang, dan daun. Daun salam yang dipilih dengan spesifikasi berupa

daun segar, warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan

keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu untuk

menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu dan serangga. Tanaman

sarang semut dan daun salam dikeringkan dalam oven pada suhu 40ºC sampai

kering, dikatakan kering jika daun dapat hancur ketika diremas dengan tangan.

Selanjutnya umbi sarang semut dan daun salam yang telah kering kemudian

diserbuk menggunakan blender kemudian diayak.

Metode yang digunakan untuk ekstraksi serbuk simplisia daun salam dan

sarang semut menggunakan metode ekstraksi pelarut dingin yaitu maserasi.

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia menggunakan pelarut dengan

beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Pada


9

proses pembuatan ekstrak, masing-masing bahan dilakukan secara terpisah.

Masing–masing ditimbang kurang lebih 10 g serbuk kering umbi sarang semut

maupun daun salam ditambah etanol 96% sebanyak 100 mL kemudian dimaserasi

sambil sekali-kali diaduk selama 24 jam, setelah itu disaring dengan corong

Buchner sampai diperoleh maserat. Maserasi dilakukan berulang–ulang dengan

pelarut sama sampai filtrat hasil maserasi jernih. Maserat yang diperoleh dipekatkan

menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu lebih kurang 50oC sehingga

diperoleh ekstrak kering etanol.

Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT

Uji kandungan yang dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis

(KLT). Pemakaian KLT bertujuan untuk memisahkan dan mengetahui kandungan

senyawa pada ekstrak etanol yang telah dibuat. Standar pembanding yang

digunakan adalah standar quersetin yang merupakan flavonoid golongan flavonol

yang mempunyai gugus keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksi pada atom C-

3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol. Quersetin membentuk

backbone bagi banyak flavonoid lain seperti rutin, hesperidin, naringenin, dan

tangeritin. Quersetin adalah flavonoid yang jumlahnya melimpah di alam

(Lakhanpal, 2007). Fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 F254 dan fase

gerak yang digunakan n-butanol-asam asetat-air (4:1:5). Fase gerak berfungsi

sebagai pelarut pengelusi yang bergerak naik di fase diam. Hasil positif adanya

flavonoid pada elusi ditunjukkan dengan dengan adanya bercak berwarna kuning

terang pada panjang gelombang 366 nm dibawah sinar tampak. Pada 4 titik

penotolan sampel ditotolkan ekstrak etanol umbi sarang semut, ekstrak daun etanol

salam, ekstrak etanol kombinasi umbi sarang semut- daun salam, dan quersetin.


10

Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi dengan fase diam

silika gel 60 F254 dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (4:1:5), yang diukur pada

panjang gelombang 254 nm (A) dan 366 nm (B). Keterangan : i = sarang semut, ii = daun

salam, iii = kombinasi sarang semut-daun salam, iv = quersetin.

Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid

Panjang gelombang Sampel KLT Nomor bercak Rf

254 nm

i 1 0,93 ii 2 0,93 iii 3 0,93 iv 4 0,93

366 nm

i 5 0,67 6 0,93

ii 7 0,47 8 0,93

iii 9 0,67 10 0,93

iv 11 0,93

Berdasarkan hasil uji KLT pada ekstrak etanol umbi sarang semut dan

kombinasi dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol umbi sarang semut dan

kombinasi memiliki hasil positif yaitu mengandung senyawa flavonoid yang

ditandai dengan adanya bercak kuning. Dan hal tersebut diperkuat dengan adanya


11

banyak bercak yang muncul, tetapi terdapat bercak diantara ketiganya yang

memiliki nilai retardation factor (Rf) yang sama dengan standar quersetin yaitu

0,93. Rf yang didapat tersebut kurang ideal karena dapat dipengaruhi oleh

kelembaban, ketebalan layer, jarak elusi, dan temperatur lingkungan (Srivastava,

2011).

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan

menggunakan spektrofotemetri pada panjang gelombang maksimum. Prinsip

pengukuran uji efek penghambatan enxim xantin oksidase adalah mengukur jumlah

asam urat yang terbentuk pada reaksi yang dikatalis oleh xantin oksidase (Rinayanti

et al, 2016).

Pengujian terdiri dari uji pendahuluan, pengujian blanko, pengujian

sampel,dan pengujian pembanding. Sebelum pengujian dilakukan, perlu adanya

optimasi panjang gelombang yang bertujuan untuk menetukan kondisi optimum

dan uji aktivitas xantin oksidase terhadap sampel. Optimasi dilakukan pada panjang

gelombang 200-400 nm, dan didapatkan hasil dari optimasi panjang gelombang

maksimum 291,5 nm. Pada penelitian yang dilakukan Ummamaheswari et al

(2007) yang menjadi acuan penelitian ini menunjukkan panjang gelombang

maksimum yang berbeda, yaitu pada panjang gelombang maksimum 290 nm.

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase menggunakan dapar

fosfat pH 7,5; suhu 30o C; waktu prainkubasi 15 menit dan inkubasi 30 menit;

konsentrasi substrat 0,15 mM (Iswantini, 2014).

Standar allopurinol digunakan dalam pengujian terhadap sampel dengan

menggunakan variasi konsentrasi yaitu 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL yang

diencerkan menggunakan larutan induk dengan konsentrasi 1000 µg/mL. Dari hasil

pengujian diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 0,168 µg/mL untuk memberikan

50% efek penghambatan terhadap aktivitas enzim xantin oksidase.

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase menggunakan

sampel ekstrak etanol sarang semut dan kombinasi ekstrak etanol umbi sarang

semut dengan ekstrak etanol daun salam dengan perbandingan 1:1. Konsentrasi

yang digunakan yaitu 10; 25; 50; 75; dan 100 µg/mL yang diencerkan


12

menggunakan larutan induk dengan konsentrasi 100.000 µg/mL. Pengujian sampel

dilakukan dengan berbagai varian konsentrasi bertujuan untuk melihat pengaruh

konsentrasi sampel dalam peningkatan daya inhibisi. Dan untuk mengetahui

pengaruh inhibisi sampel tersebut pada aktivitas enzim, dilakukan pengujian

aktivitas enzim tanpa penambahan sampel (blanko).

Hasil pengukuran uji penghambatan enzim xantin oksidase ekstrak etanol

sarang semut diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 21,552 µg/mL. Pada penelitian

sebelumnya diperoleh nilai IC50 ekstrak etanol daun salam sebesar 24,263 µg/mL

(Puspitasari, 2018). Dan untuk kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak

etanol daun salam diperoleh rata-rata nilai IC50 sebesar 11,582 µg/mL. Tabel II. Perbandingan IC50 ekstrak etanol sarang semut-daun salam-kombinasi-allopurinol

Sampel IC50 (µg/mL)

Sarang semut 21,552

Salam 24,263

Kombinasi sarang semut-salam 11,582

Allopurinol 0,168

Bila membandingkan hasil dari pengujian terhadap allopurinol yaitu rata-

rata nilai IC50 sebesar 0,168 µg/mL, rata-rata nilai IC50 kombinasi ekstrak etanol

umbi sarang semut dengan ekstrak etanol daun salam (rata-rata nilai IC50 sebesar

11,582 µg/mL) lebih kecil dibanding ekstrak etanol umbi sarang semut (rata-rata

nilai IC50 sebesar 21,552 µg/mL). Hasil tersebut menunjukan bahwa kombinasi

ekstrak etanol umbi sarang semut dengan ekstrak etanol daun salam memiliki efek

penghambatan yang lebih besar dibandingkan ekstrak etanol umbi sarang semut

dalam penghambatan aktivitas xantin oksidase.

Kombinasi menunjukan hasil yang lebih baik dikarenakan adanya efek

yang sinergis kandungan metabolit sekunder dalam ekstrak etanol umbi sarang

semut dan daun salam. Hasil analisis statistik dengan menggunakan uji one way

Anova menyatakan bahwa adanya perbedaan nilai IC50 antara dua kelompok

dengan nilai signifikansi 0,000 (P< 0,05) dan uji Post Hoc yang menunjukan nilai

IC50 antara dua kelompok tersebut berbeda bermakna.


13

KESIMPULAN

Hasil penelitian uji efek penghambatan enzim xantin oksidase kombinasi

ekstrak etanol umbi sarang semut dan ekstrak etanol daun salam lebih baik

dibandingkan dengan ekstrak etanol umbi sarang semut terhadap penghambatan

xantin oksidase, yaitu dengan rata-rata nilai IC50 sebesar 11,582 µg/mL.

SARAN

Dapat dilakukan penelitian lebih lanjut yaitu dengan isolasi dan

identifikasi jenis senyawa flavonoid yang terdapat dalam ekstrak etanol umbi

sarang semut dan daun salam yang dapat menghambat enzim xantin oksidase dan

apakah senyawa tersebut berkontribusi terhadap penurunan kadar asam urat. Dapat

dilakukan juga penelitian uji efek penghambatan enzim xantin oksidase dengan

perbandingan kombinasi yang berbeda, seperti 2:1, 3:1, atau seterusnya dengan

harapan dapat menunjukan efek yang setara atau lebih baik dari allopurinol.

Ucapan Terimakasih

Penelitian ini dilaksanakan dengan pembiayaan dari Lembaga Penelitian

dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Sanata Dharma dengan nomor

kontrak 070/Penel./LPPM-USD/IV/2017.


14

DAFTAR PUSTAKA

Andry, Saryono, Arif Setyo Upoyo. 2009. Analisis Faktor–Faktor yang Mempengaruhi Kadar Asam Urat pada Pekerja Kantor di Desa Karang Turi, Kecamatan Bumiayu, Kabupaten Brebes. Jurnal Keperawatan Soedirman (The Soedirman Journal of Nursing), Volume 4 No.1 Maret 2009. Aru W, Sudoyo. 2009. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam, jilid II, edisi V. Jakarta: Interna Publishing. Baughman D. C & Hackley, J. C. 2000. Azmi,S. et.al. 2012. Xanthine Oxidase Inhibitory Activity from Potential Malaysian Medicinal Plant as Remedie for Gout.International Food Research Journal,19(1): 159 – 165 Bulusu, K.C. et.al. 2016 . Modelling of compound combination effects and

applications to efficacy and toxicity: state-of-the-art, challenges and perspectives. Drug Discovery Today vol.21

Cos P et al. 1998. Structure-Activity Relationship and Classification of Flavonoids as Inhibitors of Xanthine Oxidase and superoxide Scavengers. JNat Prod 61:71-76.

Dipiro, J.T., et.Al. 2008. Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach, Seventh Edition. Mc-Graw Hill. Iswantini D, Yulian M, Mulijani S, Trivadila, 2014, Inhibition Kinetics of Sida rhombifolia L Extract toward Xanthine Oxidase by Electrochemical

Method, Indonesian Journal of Chemistry.14 (1), 71 – 77 Lakhanpal P., Rai D.K. , 2007, Quercetin: A Versatile Flavonoid, Internet Journal

of Medical Update, Vol. 2 Liu X, Chen R, Shang Y, Jiao B, Huang C. 2008. Lithospermic acid as a novel

xanthine oxidase inhibitor has anti-inflammatory and hypouricemic effects in rats. Chem-Biol Interact. 176:137-142.

Maimun. 2007. Asam Urat dan Hiperuresemia. Majalah Kedokteran Nusantara Volume 40(1). Universitas Sumatera Utara.

Milian et al. 2004. Reactive Oxygen Species (ROS) Generation Inhibited by Aporphine and Phenanthrene Alkaloids Semi-Synthesized from Natural Boldine. Chem. Pharm. Bull.(6): 696-699.

Natasha, Y., 2012. Efek Pemberian Ekstrak Etanol 70% Umbi Sarang Semut (Hydnophytum moseleyanum Becc.) dalam Penurunan Kadar Asam Urat pada Tikus Putih Jantan. Skripsi. Universitas Indonesia.

Owen, P.L. adn Johns, T. 1999. Xantine oxidase inhibitory activity of northeastern NorthAmerican plant remedies used for gout. Journal of Ethnopharmacology 64, 149–160.

Puspitasari, A., 2018. Karakterisasi dan Identifikasi Kandungan Simplisia Daun Salam serta Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (Eugena


15

Polyantha wight.). Skripsi. Universitas Sanata Dharma. Rizki, K. P. 2016. Pengaruh Pemberian Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sidaguri

(Sida rhombifolia L.) dan Rimpang Jahe Merah (Zingiber officinale) pada Mencit Jantan Hiperurisemia. Skripsi. Universitas Jember, Jember.

Shamley, D. 2005. Pathophysiology an Essential Text for the Allied Health Professions. USA: Elsivier limited. Sinaga, A.F, Bodhi, W, Colo, W.A, 2014, Uji Efek Ekstrak Etanol Daun Salam (

Syzygium Polyanthum ( Weight)) Terhadap Penurunan kadar Asam Urat Tikus Putih Jantan Galur Wistar Yang Diinduksi Potasium Oksanat, Pharmacon, 3(2), UNSRAT.

Simarmata, Y.B.C, Saragih, A, Bahri, S, 2014, Efek Hipourikemia Ekstrak Daun Sidaguri pada Mencit Jantan, Journal of Pharmacetics and Pharmacology, 1(1021-28.

Sowndhararajan K, Joseph JM, Rajendrakumaran D. 2012. In vitro xanthine oxidase inhibitory activity of methanol extracts of Erythrinaindica Lam. Leaves and stem bark. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine S1415-S1417.

Srivastava, M.M. 2011. High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC). Springer-Verlag Berlin Heidelberg.

Sudarsono, Gunawan, D., Wahyuono, S., Donatus, I.A., dan Purnomo, 2002, Tumbuhan Obat II, Hasil Penelitian, Sifat-sifat dan Penggunaan, Pusat Studi Obat Tradisional, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Umamaheswari, M., Asokkumar, K., Sivashammugam, A. T., Kemyaraju, A.,

2009. In Vitro Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of The Fractions of Erythrina stricta Roxb. Jornal of Ethnopharmacology, 124 :646-648.

Zuhra, dkk. 2008. Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid Dari Daun Katuk (Sauropus androgonus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera Vol. 3, No. 1.


16

LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat pengesahan Determinasi


17


18

Lampiran 2. Certificate of Analysis Xanthine Oxidase


19

Lampiran 3. Certificate of Analysis Xanthine


20

Lampiran 4. Certificate of Analysis Quercetin


21

Lampiran 5. Serbuk Simplisia Daun Salam dan Umbi Sarang Semut

Gambar 2. Simplisia daun salam

Gambar 3. Simplisia sarang semut


22

Lampiran 6. Ekstrak Etanol Daun Salam dan Umbi Sarang Semut

Gambar 4. Ekstrak Etanol Daun Salam Gambar 5. Ekstrak Etanol Umbi Sarang Semut


23

Lampiran 7. Data Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

a. Blanko (Enzim dan Substrat)

Repetisi

Absorbansi

BR-KR Blanko Blangko rata-

rata (BR) Kontrol Kontrol rata-rata

(KR)

1 0,616

0,638

0,151

0,152 0,486 2 0,664 0,152

3 0,634 0,152

b. Pembanding (Allopurinol)

Repetisi Konsentrasi (ppm)

Absorbansi %

Inhibisi IC50

(ppm) Regresi Linear Sampel

(s) Kontrol sampel (KS)

S-KS

1

0,5 0,306 0,060 0,246 49,383

0,201 y = 2,0811x + 49,581 r = 0,993

1 0,289 0,054 0,235 51,646 2,5 0,274 0,059 0,215 55,761 5 0,259 0,069 0,190 60,905 10 0,243 0,096 0,147 69,753

2

0,5 0,305 0,061 0,244 49,794

0,125 y = 2,0494x + 49,743 r = 0,996

1 0,289 0,055 0,234 51,852 2,5 0,275 0,059 0,216 55,555 5 0,259 0,068 0,191 60,699 10 0,243 0,096 0,147 69,753

3

0,5 0,305 0,059 0,246 49,383

0,179 y = 2,065x + 49,631 r = 0,994

1 0,289 0,056 0,233 52,058 2,5 0,275 0,058 0,217 55,349 5 0,259 0,069 0,190 60,905 10 0,243 0,097 0,146 69,969

Kontrol Blanko 0,152 Blanko 0,638 Rata-rata IC50 0,168


24

Gambar 7. Kurva Allopurinol Repetisi 1



y = 2,065x + 49,631r = 0,994

01020304050607080

0 2 4 6 8 10 12

% In

hibi

si

Konsentrasi

Konsentrasi Allopurinol Vs % Inhibisi

y = 2,0811x + 49,581r = 0,993

01020304050607080

0 2 4 6 8 10 12

% In

hibi

si

Konsentrasi


y = 2,0494x + 49,743r = 0,996

01020304050607080

0 2 4 6 8 10 12

% In

hibi

si

Konsentrasi



25

c. Ekstrak etanol sarang semut


Absorbansi %

Inhibisi IC50


(s) Kontrol sampel (KS)

S-KS

1

10 0,469 0,173 0,296 39,089

23,683 y = 1,0618x + 24,854 R = 0,978

25 0,453 0,185 0,268 44,863

50 0,427 0,193 0,234 51,847

75 0,399 0,235 0,164 66,261

100 0,374 0,284 0,090 81,483

2

10 0,460 0,173 0,287 40,954

22,410 y = 0,9217x + 29,345

R = 0,987

25 0,443 0,185 0,258 46,909

50 0,416 0,193 0,223 54,122

75 0,407 0,237 0,170 65,018

100 0,392 0,285 0,107 77,976

3

10 0,438 0,172 0,266 45,274

18,562 y = 0,8167x + 34,839 R = 0,980

25 0,424 0,186 0,238 51,030

50 0,412 0,194 0,218 55,141

75 0,398 0,239 0,159 67,280

100 0,391 0,284 0,107 77,979



26

Gambar 10. Kurva Ekstrak Etanol Tunggal Repetisi 1



y = 1,0618x + 24,854R = 0,978

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)

Konsentrasi Ekstrak Etanol Sarang Semut Vs % Inhibisi

y = 0,9217x + 29,345R = 0,987

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50 60

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)


y = 0,8167x + 34,839R = 0,980

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50 60

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)



27

a. Kombinasi Ekstrak Etanol Umbi Sarang Semut dan Daun Salam


Absorbansi %

Inhibisi IC50


(s)

Kontrol sampel (KS)

S-KS

1

10 0,285 0,106 0,179 63,166

9,883 y = 0,6954x + 56,874

R = 0,9984

25 0,260 0,123 0,137 71,813

50 0,240 0,131 0,109 77,570

75 0,225 0,150 0,075 84,570

100 0,207 0,166 0,041 91,562

2

10 0,285 0,109 0,176 63,787

10,951 y = 0,6934x + 57,594

R = 0,9979

25 0,261 0,124 0,137 71,811

50 0,239 0,139 0,100 79,424

75 0,222 0,150 0,072 85,188

100 0,210 0,170 0,040 91,770

3

10 0,282 0,111 0,171 64,812

13,913 y = 0,671x + 59,334

R = 0,9957

25 0,260 0,134 0,126 74,067

50 0,239 0,142 0,097 80,043

75 0,223 0,155 0,068 86,012

100 0,208 0,171 0,037 92,390



28

Gambar 13. Kurva Kombinasi Repetisi 1



y = 0,6954x + 56,874R = 0,9984

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)

Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Etanol Vs % Inhibisi

y = 0,6934x + 57,594R = 0,9979

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)


y = 0,671x + 59,334R = 0,9957

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

0 10 20 30 40 50

% In

hibi

si

Konsentrasi (ppm)



29

Lampiran 8. Sertifikat CE & BU


30

Lampiran 9. Uji Statistik

Tests of Normality

Kelompok perlakuan

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-

Wilk

Statistic df Sig. Statistic

IC-50 (ppm) Allopurinol .274 3 . .944

Ekstrak etanol tunggal sarang semut .180 3 . .999

Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam .220 3 . .986

Oneway

Test of Homogeneity of Variances IC 50 (ppm)

Levene Statistic df1 df2 Sig. 2.744 2 6 .142

ANOVA

IC 50 (ppm) Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 956.422 2 478.211 534.580 .000

Descriptives IC 50 (ppm)

N Mean Std. Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound

Upper Bound

Allopurinol 3 .16833 .039107 .022578 .07119 .26548 .125 .201

Ekstrak etanol tunggal sarang semut

3 24.27000 1.505623 .869272 20.52983 28.01017 22.740 25.750

Kombinasi ekstrak etanol sarang semut dan ekstrak etanol daun salam

3 5.69667 .644386 .372036 4.09592 7.29741 5.100 6.380

Total 9 10.04500 10.964653 3.654884 1.61682 18.47318 .125 25.750


31

Within Groups 5.367 6 .895

Total 961.789 8

Post Hoc Tests Multiple Comparisons

Dependent Variable: IC 50 (ppm)

(I) Group (J) Group

Mean Difference (I-

J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower

Bound Upper Bound

Tukey HSD

Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut

-24.101667* .772250 .000 -26.47114 -21.73219


-5.528333* .772250 .001 -7.89781 -3.15886


Allopurinol 24.101667* .772250 .000 21.73219 26.47114


18.573333* .772250 .000 16.20386 20.94281


Allopurinol 5.528333* .772250 .001 3.15886 7.89781


-18.573333* .772250 .000 -20.94281 -16.20386

LSD Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut

-24.101667* .772250 .000 -25.99129 -22.21204


-5.528333* .772250 .000 -7.41796 -3.63871


Allopurinol 24.101667* .772250 .000 22.21204 25.99129


18.573333* .772250 .000 16.68371 20.46296

Allopurinol 5.528333* .772250 .000 3.63871 7.41796


32



-18.573333* .772250 .000 -20.46296 -16.68371

Tamhane Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut

-24.101667* .869565 .004 -30.68231 -17.52102


-5.528333* .372721 .013 -8.32496 -2.73171


Allopurinol 24.101667* .869565 .004 17.52102 30.68231


18.573333* .945539 .002 13.56904 23.57762


Allopurinol 5.528333* .372721 .013 2.73171 8.32496


-18.573333* .945539 .002 -23.57762 -13.56904

Games-Howell

Allopurinol Ekstrak etanol tunggal sarang semut

-24.101667* .869565 .002 -29.21664 -18.98669


-5.528333* .372721 .008 -7.70676 -3.34991


Allopurinol 24.101667* .869565 .002 18.98669 29.21664


18.573333* .945539 .001 14.33104 22.81562


Allopurinol 5.528333* .372721 .008 3.34991 7.70676


-18.573333* .945539 .001 -22.81562 -14.33104

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


33

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skirpsi yang berjudul “Uji Efek Penghambatan

Enzim Xantin Oksidase Kombinasi Ekstrak Etanol

Sarang Semut (Myrmecodia armata DC.) dan Ekstrak

Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh.

Walp.)” memiliki nama lengkap Dany Kristianto.

Penulis lahir di Wonosobo pada tanggal 23 September

1995 sebagai anak pertama dari dua bersaudara, dari

pasangan Waluyo dan Darsini. Penulis menempuh

pendidikan formal di TK Kristen Wonosobo (2000-

2002), SD Kristen 1 Wonosobo (2002-2008), SMP Negeri 1 Wonosobo (2008-

2011), SMA Negeri 1 Salatiga (2011-2014) dan kemudian melanjutkan kuliah di

Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2014. Semasa

kuliah, penulis aktif dalam kegiatan fakultas, seperti Divisi Publikasi, Dekorasi, dan

Dokumentasi Pelepasan Wisuda (2015), seksi Acara Pharmacy Badminton

Tournament (2015), seksi Dana dan Usaha Pelepasan Wisuda (2016), Divisi

Publikasi, Dekorasi, dan Dokumentasi Pharmacy Badminton Tournament (2016),

dan asisten praktikum Farmakognosi Fitokimia (2017).


uji efek penghambatan enzim xantin oksidase ...tanaman yang kaya akan kandungan tanin, flavonoid dan...

Documents