Thrombozytenfunktionstestung in der Transfusionsmedizin

Petra Jilma

Klinisches Institut für Labormedizin

AKH-Wien

• Unterschiedliche Messmethoden

• Testung von Spendern

• Untersuchung von Thrombozyten-

konzentraten

• Testung der Empfänger

Thrombozytentransfusionen sollen Hämostase verbessern!

H. Mani et al: Fortschritte in der Thrombozytenfunktionsdiagnostik;Hämostaseoligie 2010

Thrombozytenfunktion

4

1) PFA-100® Plättchenfunktionsanalyser

•Printer

•LCD Bildschirm

•Tastatur

•Behälter für Starterlösung

•Meßzelle

•Kasette für

Meßzelle

•Karusell

Das System

3 unterschiedliche Messzellen, unterscheiden sich druch den zugebenen Aktivator

•Kollagen/Epinephrin: vergleichbare schwächere Aktivierung durch Adrenalin/Kollagen Stress•Kollagen/ADP: relativ starke Aktivierung durch recht hohe Menge ADP•Innovance PFA-P2Y: Aktivierung durch ADP/PGE1 Kollagenstress

Messprinzip

Aufbau der Messzelle

Durch Adhäsion: Verschluss Messgröße: Verschlusszeit (s) = Zeit bis zum Stillstand des Blutflusses

Simulation von Flussbedingungen im arteriellen Stromgebiet

Anwendung

• Aspirin- und Clopidogreleinnahme

• Von Willebrand Disease Diagnostik

• V. a. Thrombasthenie Glanzmann und Bernard

Soullier Syndrom

• Screening bei Patienten mit erhöhtem

perioperativem Blutungsrisiko

ASA 500 mg

i.v.

2) MultiplateEinfaches, standardisiertes und schnelles Testverfahren aus antikoaguliertem Vollblut (Hirudin oder Heparin) • 5 Kanäle für hohen Durchsatz • Hohe Sensitivität • Parallelbestimmung (2 Sensorenpaare) zur Qualitätskontrolle

Testmethode•doppelt ausgeführter thrombogener Sensor, Magnetrührer•die Thrombozyten adhärieren nach Zufabe eines Aktivators (z.Bsp TRAP) und aggregieren auf den Sensoroberflächen und erhöhen den elektrischen Widerstand

Impedanzaggregometrie

3) Lichttransmissionsaggregometrie (Born)(LTA)

Prinzip: Herstellung von PRP und PPP, Zusatz von Agonisten: Kontinuierliche Registrierung der im Verlauf der Aggregation sich ändernden Transmission von Licht

Nachteile: eingeschränkte Standardisierbarkeit, keine physiologischen Bedingungen, kein shear stress, aufwendig, in Speziallabors

4) Thrombelastogramm (TEG)Der Ablauf der Gerinnung und die Verfestigung des Gerinnsels wird aufgezeichnet.

5) FlowzytometrieVorteile:

• Wenig Material notwendig• Messung unterschiedlicher Aspekte der Thrombozyten-

Funktion: z.Bsp: Aktivierung (Expression von P- selectin), Aggregation (Expression der Fibrinbindungsstelle)

• keine Scherkräfte

Nachteile:• Nicht überall verfügbar• personal- und zeitintensiv

6) IMPACT R

High shear 1800-1

percentage of the well surface covered by platelets aggregates (percentage SC): platelet adhesion average size of the aggregates (AS in µm2): platelet aggregation

Testung der Thrombozytenspender

Screening mittels Point of Care-Geräten, z. Bsp: PFA-100, Multiplate, ROTEM1)“High incidence of defective high-shear platelet function

among platelet donors”1)

11% der Spender: CEPI-CT, CADP-CT

durch Einnahme von Cyclooxygenasehemmern

P. Harrison et al. Transfusion 2004;44:764-770

20 % der Spender: CEPI-CT9%: TXB2

Hohe Spendefrequenz: negativer Einfluss auf die Thrombozytenfunktion

2) „Impaired platelet function among platelet donors“

P. Jilma-Stohlawetz et al.: Thromb Haemost 2001:880-6

3) “Influence of multicomponent apheresis on donors’ haematol. and coagulat. parameters and platelet function”

• Untersuchung von 48 Multikomponentenspendern am Tag 0 vor und nach Apherese, Tag 2, 14 und 42.

• Am Tag 2 war die Plättchenfunktion signifikant beeinträchtigt (gemessen mittels Aggregometrie und ROTEM)

• Gerinnungsparameter (PTZ, aPTT, Fibrinogen, D-Dimer, Faktor VIII und vWF) blieben nahezu unverändert.

S. Macher et al. Vox sang. 2012, 194-200

Testung der Thrombozytenkonzentrate

Viele Studien, unterschiedliche Aspekte können untersucht werden, z.Bsp. •Verschiedene Apheresemaschinen•Lagerungsdauer•Einfluss der Lagermedien•Manipulationen, wie Plasmadepletion und Filtration

Aber nicht alle Methoden sind geeignet!!

TRAP-6 induced MEA

inducible aggregation differs between Amicus and Trima/MCS+

TRAP-6 induced LTA

Jilma-Stohlawetz et al.: Transfusion 2009: 1564-68

Vergleich: Apheresemaschinen

Lagerung von Thrombozytenkonzentraten

C. Shams Hakimi et al. Platelets 201526:132-37

In vitro assessment of platelet concentrates with Multiplate

Transfusion 2008:129-35

platelet P-selectin increases during storage, while induced P-selectin declines

Lagerung von Thrombozytenkonzentraten

Einfluss der Plasmadepletion auf die Thrombozytenfunktion

Vox Sang. 2012: 258-60

Testung der Thrombozytenfunktion des Empfängers

• Problematisch, da alle Testsysteme > 100Plt/G benötigen, sonst nur sehr eingeschränkte Aussagekraft

• Nur sehr wenige Studien• am besten Vollblutmethoden

improved in vivo platelet function after PC transfusion

platelet function was determined under high shear conditions by Impact-R: adhesion increased, while the size of aggregates did not change

Horvath M et al. Transfusion 2010: 1036-42

Thromboelastometry in patients with liver cirrhosis before and after platelet transfusion

Tripodi A et al. 2013; Liver: 362-67

Zusammenfassung

• Es gibt keine „beste Methode“, die Testsysteme messen unterschiedliche Aspekte der Thrombozytenfunktion

• Besonders bei Apheresekonzentraten ist die Thrombozytenfunktion des Einzelspenders von großer Bedeutung: stichprobenartige Überprüfung überlegenswert, besonders bei Dauerspendern

• Noch keine Daten, ob die unterschiedliche in vitro Ergebnisse einen Einfluss auf Recovery und Thrombozytenfunktion der Empfänger haben

Vielen Dank für die Aufmerksamkeit !Fragen? Email: petra.jilma@meduniwien.ac.at