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FAC. DE C. QUÍMICAS/UNACH / CAMPUS IV

M.C. CONSUELO CHANG RUEDA 1

U n i v e r s i d a d A u t ó n o m a d e C h i a p a s F a c u l t a d d e C i e n c i a s Q u í m i c a s

C a m p u s I V

BIOQUIMICA CLINICA II

TEMA 2. ENZIMAS SERICAS DEL PLASMA

TITULAR DEL CURSO :

M.C. CONSUELO CHANG RUEDA

CICLO ENERO - DICIEMBRE - 2015



UNIDAD II.- ENZIMAS CELULARES DEL SUERO

Objetivos Específicos: • Reconocerá las principales enzimas séricas del plasma

• Identificará las principales aplicaciones clínicas de las enzimas

organoespecíficas y no organoespecíficas.

• Conocerá los métodos de diagnostico enzimático para él diagnostico de

enfermedades cardiacas, pancreáticas, hepáticas, etc.

2.1 Origen y significado.

2.2 Características.

2.3 Unidades de actividad enzimática

2.4 Clasificación y distribución.

2.4.1 Principales enzimas celulares de diagnóstico.

2.4.2 Destino de las enzimas celulares.

2.4.3 Enzimas séricas más importantes y su significado.

2.5 Metodología enzimática.

2.5.1 Técnicas calorimétricas.

2.5.2 Técnicas cinéticas.

Tiempo Estimado: 6 hrs.



DEFINICION Y CARACTERISTICA DE LAS ENZIMAS. Las enzimas son proteínas, o sea substancias orgánicas producidas por la célula viva, con funciones catalíticas especificas. Como catalizadores tienen las siguientes propiedades: 1.- Producen efectos en cantidades mínimas. 2.- Resultan inalterables de la reacción . 3.- En cantidades pequeñas respecto al substrato, las enzimas no afectan el equilibrio de la reacción reversible, sino aumentan la velocidad con la cual se alcanza el equilibrio. Las enzimas poseen todas las propiedades características de las proteínas. Se conocen hasta unas 2000 enzimas, de las que mas de 100 se han podido cristalizar. Los pesos moleculares oscilan entre 12,700 (ribonucleasa) y 1,000,000 (glutamato-deshidrogenasa). ESTRUCTURA Y CLASIFICACION. En los últimos años ha sido posible aclarar en muchos casos la composición y la estereoestructura de la enzimas. Muchas de estas contienen un grupo prostético (por ejemplo una vitamina o un metal) que no es de naturaleza proteica. La parte proteica de las enzimas constituye como otras proteínas, un componente polímero con estructura polipeptídica. La cadena polipeptidica, a su vez se compone de aminoácidos unidos entre si a través de enlaces peptídicos (enlaces amidicos) en los que los restos aminoácido están alineados a los lados.

REPRESENTACION ESQUEMATICA DEL ENLACE POLIPEPTIDICO H O O H R4

I II II I I N C C N C C C N C C N II I I I II I O R1 H R2 O H Se distinguen:



ESTRUCTURA PRIMARIA : Correspondiente a la secuencia de aminoácidos en la cadena proteica, la cual esta acondicionada por enlaces covalentes que pueden ser no solo peptídicos sino también pueden haber enlaces bisulfuro. La estructura primaria la determinan los enlaces covalentes amidicos y carboxílicos. Ejemplo: Papaína, la Quimiotripsina. ESTRUCTURA SECUNDARIA: Correspondiente a la reticulación transversal por puentes de hidrogeno entre grupos CO y NH. En la naturaleza la estructura secundaria que más se encuentra es la alfa espiral. ESTRUCTURA TERCIARIA: Esta se origina por el acomodamiento de la cadena poli peptídica en forma compacta tridimensional (en el caso de las enzimas, esta es un glóbulo esférico). La cadena poli peptídica tiende a acomodarse de tal manera que sus partes hidrofobias de los residuos de los aminoacidos se escondan buscando de esta forma manera el equilibrio termodinamico; ademas en la formación de esta estructura tridimensional participan otros tipos de enlaces; entre ellos tenemos: enlaces por puentes de hidrogeno entre grupos peptídicos, puentes de H entre grupos laterales, en lace ionico, interacciones hidrofobicas. ESTRUCTURA CUATERNARIA: Correspondiente a la composicion de grandes moleculas de subunidades. Se presenta cuando la macromol proteica tiene más de una cadena polipeptidica y no estan unidas entre si por enlaces covalentes sino tambien por los enlaces arriba mencionados. Las estructuras secundarias y terciarias ocasionan cierto plegado y enrrollado de la proteina enzimatica. Se extiende por complejo multienzimatico, una forma de organización todavia más elevada, constituida por varias enzimas muy juntas en el espacio , que hace discurrir por orden, una tras otra toda una cadena de reacciones. Este complejo se encuentra en las estructuras subcelulares. Por ejemplo, las enzimas que participan en la sintesis de acidos grasos en el citosol. De suma importancia para la enzimologia es la relativa inestabilidad de ls estructura enzimatica (proteica). Una alteracion en la estructura o desnaturalizacion son equivalentes auna perdida enzimatica ( de actividad). La estabilidad depende, entre otras cosas, de la temperatura, la concentracion de iones H (pH) y de la concentracion de sales. Según su accion catalitica, las enzimas se dividen en 6 clases: 1.- OXIDOREDUCTASAS. (Lactado deshidrogenasa, etc) 2.- TRANSFERASAS (Alanina aminotransferasa) 3.- HIDROLASAS (Colinesterasa) 4.- LIASAS ( Aldolasa) 5.- ISOMERASAS ( Fosfoglucosa isomerasa, PGI) 6.- LIGASAS (Piruvato carboxilasa).



Las proteínas son electrolitos multivalentes que contienen grupos ionizables. El grado de ionizacion influye en la actividad de una enzima y depende del pH. En forma de electrolitos, las proteinas se desplazan en el campo electrico. Las moleculas con carga positiva se desplazan hacia el catodo y las cargas negativas hacia el anodo. Cuando mas alta es la carga neta, tanto más rapida es la migracion de la molécula. Una mezcla de proteínas con diferentes cargas netas puede, por ello, fraccionarse electroforéticamente. Este procedimiento se usa para la separacion de isoenzimas.

LAS ENZIMAS desde el punto de vista clínico son proteínas , o sea sustancias orgánicas, producidas por la célula via. La vida va unida a complejas transformaciones materiales que están acopladas energéticamente unas con otras y que transcurren a temperatura constante, relativamente baja.- Esta peculiaridad esta posibilitada por la acción de las enzimas, que pueden designarse como catalizadores biológicos. La mayoría de ellas catalizan específicamente una reacción química determinada; la sustancia transformada se denomina SUSTRATO, y la susbstancia resultante de la reacción se denomina PRODUCTO. Otras obran menos específicamente y aceleran diversas reacciones, por lo general análogas. En muchos casos, la misma reacción puede estar catalizada por enzimas diversas que se producen en células distintas. La mayoría de la enzimas pueden definirse además como CATALIZADORES QUIMICOS: Aceleran ls reacción en ambos sentidos, es decir tanto adelante como hacia atrás, sin consumirse en ella.

IN VITRO: La reacción catalizada transcurre hasta que se llega al estado de equilibrio que se instauraría sin catalisis (equilibrio químico). IN VIVO: En la célula viva, la actividad catalítica de las enzimas esta gobernada por la regulación biológica. Una enzima se combina temporalmente con la sustancia (SUBSTRATO) sobre el cual actua para formar un complejo SUBSTRATO – ENZIMA que se rompe para formar los productos de raccion y libera a la enzima para continuar su función catalitica. Como todo catalizador las enzimas participan directamente en la reacción y permanecen inalteradas. SUBSTRATO (S) + ENZIMA (E) = E - S + E + P + + +



Una enzima es activa porque posee un sitio espécifico que tiene afinidad por el substrato. A este sitio se le llama CENTRO O SITIO ACTIVO DE LA ENZIMA. Es el responsable de la actividad de la enzima, cada enzima puede tener varios centros o sitios activos, dependiendo de la naturaleza de la misma. El sitio activo puede ser de naturaleza proteíca, constituyendo parte de la molécula misma de la enzima, o bien pued eser de naturaleza no proteíca, llamandosele COENZIMA y por si mismo no es activo. El resto de la molecula proteíca (APOENZIMA) no es activa y solso se convierteen enzima activa (HALOENZIMA) al combinarse con su coenzima. LA COENZIMA constituye en estos casos el centro activo de la haloenzima. La coenzima puede estar unida fuertemente a la proteina, es decir, a la parte proteíca dela enzima (APOENZIMA) y entonces se le denomina GRUPO PROSTETICO. Por lo tanto puede diferenciarse entre la coenzima ( la parte no proteíca de la enzima) que no esta unido a esta tan firmemente, y el grupo próstetico que si esta unido firmemente al resto de la proteina y no puede separarse facilmente de ella. Para ejercer su efecto, muchas requieren en grupo próstetico de bajo pesomolecular llamadas coenzimas. Cuando se trata de un ión inorganico se habla de un ACTIVADOR O COFACTOR. Si esta substancia esencial es un componente organico complejo, hidrosoluble de naturaleza no próteica se llama COENZIMA. Las enzimas son muy labiles, de tal forma que pueden alterarse presentandose 2 fenomenos principalmente la INACTIVACION Y LA DESNATURALIZACION. La inactivación es un proceso reversible que puede reestablecerse al desaparecer el agente causante de la misma, pero la desnaturalizacion es un proceso irreversible, practicamente una vez que se ha desnaturalizado una enzima no es posible que esta recupere su actividad, especialmente cuando esta desnaturalizacion ha sido muy profunda al grado de romper los enlaces peptídicos de las proteínas. En los organismos vivos, las enzimas son degradadas rápidamente y el organismo repone su suministro de enzimas por nuevas sintesis. Las enzimas se producen intracelularmente y van a parar al plasma y a los fluidos del organismo, no se sabe con certeza porque se encuentran en la sangre. Algunas actuan en ella, pero la presencia de la mayoría probablemete abecede a la constante destrucción celular.

VARIANTES ENZIMATICAS: Las variantes enzimaticas moleculares se

subdividen en tres grupos. ISOENZIMAS: Enzimas de funcion semejante, tipicas de los tejidos , organos y organelas celulares de la misma especia, pero poseen diferentes propiedades fisicas y quimicas (detrminadas geneticamente) ejemplo LDH.



HETEROENZIMAS: Enzimas de funcion semejante, especificas de las diversas especies biologicas ejemplo: LDH del hombre y LDH del conejo. ALOENZIMAS: Variantes de enzimas e isoenzimas condicionadas genéticamente que sólo aparecen en parte de los componentes de una especie. La mayoría de la aloenzimas no conducen a manifestaciones patológicas, por ejemplo las aloenzimas de la fosfatasa alcalina , entre otras. Sirven para caracterizar el tipo bioquímico de un individuo y son de utilidad práctica en Medicina legal y en Genética. Todas las enzimas se caracterizan por su: 1.- ACTIVIDAD. 2.- ESPECIFICIDAD. Actuan sobre substratos espécificos en condiciones particulares. El grado de espeficidad varia de una enzima a otra,Algunas muestran especificidad absoluta, otras tienen especificidad de grupo, otras tienen estereoespecificidad. 3.- SENSIBILIDAD. A la influencia del pH, temperatura, concentración del substrato y tiempo de exposición de la enzima sobre el substrato, que son los factores que gobiernan la velocidad de reaccion enzimatica. Su cantidad en el plasma es muy baja, y como se parecen mucho quimicamente, no se estudian por su concentración sino por su actividad, la que se expresa en unidades. Las unidades en que se expresan los resultados son arbitrarias y varian según el método empleado. El empleo de unidades diferentes para expresar los resultados en cada laboratorio hace que realmente sea dificil comparar los resultados y evaluar los datos existentes en la literatura por lo que en la actualidad se pugna por el empleo de ua “UNIDAD INTERNACIONAL” (UI) para expresar los valores de actividad enzimatica. La UNIDAD INTERNACIONAL es la cantidad de enzima (actividad enzimatica) que reacciona con un micromol (nM) de substrato por minuto en condiciones optimas de concentracion de substrato y pH, así como temperatura a la cual se lleve acabo la reacción. La actividad enzimatica deberá indicarse como mU/ml, o bien como U/l. La unidad enzimatica no es una medida de la concentracion de la enzima, sino un dato de la actividad de la misma, en un volumen deteminado, por ello debe indicarse como unidad volumen.



Es necesario tomar en cuenta que aun cuando los resultados de una deteminación enzimatica se expresan en UI, solo se podran obtener resultados similares en los diferentes laboratorios si las determinaciones se hacen siguiendo el mismo método y condiciones es decir empleando el mismo substrato, tampon, temperatura, pH optimo, etc. Utilizando otros métodos de estudio, electroforesis, cromatograficos e inmunologicos, se ha podido apreciar el hecho de que enzimas con la misma especificidad puedan tener diferente estructura si proceden de diferentes órganos. A los grupos enzimas con esos caracteres, se les conoce como isoenzimas; las fosfatasas alcalinas, por ejemplo, abarcan varias isoenzimas: óseas, placentarias, hepáticas, intestinal.

Desde el punto de vista de diagnostico, es conveniente clasificar a las enzimas según su origen y función en: 1.- Enzimas especificas del plasma.

2.- Enzimas de secresión. 3.- Enzimas celulares. Las enzimas específicas se originan en el hígado pero son liberadas activamente al plasma, donde llevan acabo su actividad catalitica. Son de interes clinico porque se encuentran en el plasma a niveles más bajos que los normales como resultado de lesion en el hígado. La pseudocolinesterasa o colinesterasa sérica y las enzimas de la coagulacion son ejemplos clinicos importantes. Actuan en el propio plasma sanguineo. La enzimas de secrecion y las enzimas celulares se localizan en el plasma sanguineo, en concentraciones mucho mas bajas que sus concentraciones en ciertos tejidos, pero no desempeñan funciones fisiologicas importantes en el plasma. Entre las enzimas de secresion se encuentran la amilasa., lipasa y las fosfatasas. Aunque se secretan a alta velocidad, se dispone rapidamente de ellas y son eliminadas por loscanales de eliminación usuales como la orina, bilis y el tracto intestinal, y a sus niveles normales son relativamente bajos y constantes. Sin embargo, si esta bloqueado alguno de los caminos usuales de eliminacion, o se acelera subitamente la velocidad con que son liberadas al liquido extracelular, puede ocurrir aumento importante de los niveles de estas enzimas an plasma. Las enzimas de metabolismo celular estan situadas en el interior de las celulas tisulares y en ellas estan presentes en concentraciones muy altas. Algunas existen libres en el liquido celular y otras estan contenidas en estructuras celulares como mitocondrias y lisosomas. Cuando las enzimas se localizan exclusivamente en un solo sitio, se llaman enzimas uniloculares, como GTP y GLDH en citoplasma y GLDH en mitocondria. Cuando pueden estar localizadas en 2 o mas sitios diferentes se les llama biloculares, como GOT y MDH en citoplasma y mitocondria.



Si una enzima está presente en concentraciones apreciables solo en un organo, un aumento en el nivel de la enzima apuntaría a la fuente de la enzima y de este modo identificaria la enfermedad o el organo afectado. Estas enzimas reciben el nombre de ENZIMAS-ORGANO-ESPECIFICAS. Ejemplo de ella se tienen la Fosfatasa ácida presente en glandula prostática. Debe considerarse que las enzimas celulares o enzimas organo especificas serán eliminadas de su lugar de origen en una proporcion mayor a lo normal, solo cuando se presente daño celular o una alteracion de la permeabilidad celular. Ademas es importante considerar que el aumento de los niveles enzimaticos no siempre debe asociarse a una necrosis celular, ya que existen tambien daños reversibles o que permiten la elevacion de los niveles enzimaticos temporal, por ejemplo en hepatitits aguda, existe una relacion directa entre el incremento de la actividad enzimatica del suero y la gravedad de una lesion ocurrida. Lo que constituye la base fundamental del diagnostico enzimatico.

DESTINO DE LAS ENZIMAS CELULARES.

La salida, distribucion y transporte de enzimas en el espacio extracelular son cuestiones investigadas hasta el momento, pero la explicacion hasta el momento es la siguiente: Antes de que las enzimas lleguen al plasma sanguineo, deben pasar la membrana celular. Las enzimas especificas del plasma pueden pasar activamente a travez de la membrana celular. Contra un gradiente de concentración en el espacio extracelular por lo que se realiza un trabajo que implica gasto de energia por parte de la célula. Por el contrario las enzimas inespecifias del plasma son diseminadas y difundidas en el plasma inespecificamente, inmediatamente despues de su salida se producen modificaciones de la actividad catalitica de las enzimas, la que puede disminuir o aumentar y así mismo sufrir modificaciones en su camino. Cuando existen condiciones patologicas (enfermedades, intoxicaciones), la membrana puede ser lesionada de forma reversible o irreversible. Tras la lesion irreversible de la membrana celular aparece rapidamente la muerte celular. Las celulas necroticas colaboran, si es que lo hacen en muy escasa medida al aumento de las enzimas en suero; la parte principal procede de celulas todavia vivas. Normalmente se encuentra en el plasma un nivel de enzimas muy constante, con las oscilaciones que dependen por ejemplo de la edad, peso, etc. La concentración de las enzimas celulares se mantienen la desintegracion normal de las células, es decir la destrucción celular fisiológica. Todas las proteinas estan sometidas a transformacion constante. Así tambien las enzimas del organismo vivo se neoforman y transforman continuamente ( por ejemplo la activacion del tripsinogeno a tripsina) y finalmete se inactivan y descomponen. Al igual que las restantes proteinas del plasma sanguineo, se supone que muchas enzimas se desintegran hasta el grado de aminoacido y despues se vuelven a utilizar.



TEORIA DEL TEST ENZIMATICO. La determinacion de las actividades enzimaticas en suero o plasma sanguineo, celulas sanguineas, orina o extractos y homogenados tisulares, constituye actualmente un instrumento muy importante en el diagnostico clinico. Las enzimas altamente purificadas y cristalizadas que se encuentran en el comercio, facilitan la determinacion cuantitativa y especifica de metabolitos en liquidos corporales y extractos tisulares. En esta exposicion vamos a describir la teoria que forma base de la ejecucion eficaz y óptima de los test enzimaticos en el laboratorio clinico-quimico.

ENZIMAS COMO AYUDA AL DIAGNOSTICO Las actividades de las numerosas enzimas presentes en cada célula

corporal se mantienen a niveles relativamente constantes por un equilibrio entre la síntesis de las enzimas y su degradación . Una pequeña fracción de algunas de las enzimas pasa continuamente a través de las membranas celulares y puede comprobarse en los líquidos corporales. Por ejemplo en el plasma sanguíneo.

En el suero y plasma, las actividades de las enzimas varían sólo en límites relativamente estrechos, incluso en los individuos sanos. En muchas enfermedades aumenta la cesion enzimatica desde las celulas del organo ebfermo, sea debido a la permeabilidad elevada de la membrana celular, sea por la descomposicion más o menos completa de la estructura celular. Alteraciones de las actividades enzimaticas en el plasma (suero) no solo son indicativos de transtornos sino que constituyen ademas ayudas muy valiosas en el diagnostico diferencial, pronostico y valoracion de la eficacia de la terapeutica. Las determianciones en plasma o suero y a veces en otros liquidos corporales, pertenecen a la rutina del laboratorio clinico, las detreminaciones tisulares (muestras) estan confinadas o reservadas al laborarorio especializado. ENZIMAS COMO REACTIVOS:Hoy en dia se encuentra en el comercio gran numero de enzimas cristalizadas o por lo menos altamente purificadas en los test enzimaticos copulados y como catalizadores especificos para la determinacion cuantitativa de metabolitos. PRINCIPIOS DE MEDICION: La porcion cuantitativa de enzimas en las proteinas totales del plasma o del suero es tan diminuta, que no puede ser separada y diferenciada con los metodos usuales. Para medirlas se sirve por ello de su funcion, su capacidad de catalizar determinadas reacciones quimicas. La velocidad de reaccion catalizada es la medida de la llamada “actividad enzimatica”, que puede ser equiparada en la practica a la cantidad de enzima.



Fundamentalmente, hay 2 caminos para medir una actividad enzimatica: 1.- Mediante la determinacion del consumo de un substrato transformado en la reaccion enzimatica, bajo condiciones exactamente definidas y estrictamente controladas. 2.- Mediante la medida dl producto formado en la reaccion enzimatica (concentracion del metabolito). Cada uno de los 2 caminos permite por su parte 2 procedimientos de medicion: 1.- Medida en dos puntos: Reaccion parada. Todos los participantes en la reaccion son incubados con el suero conteniendo las enzimas, durante un periodo fijo, al cabo del cual se interrumpe la reaccion enzimatica midiendose, ya sea la cantidad de substrato no transformado para el primer caso, en el cual el substrato debe tener una concentracion alta, y solo una pequeña parte de este deberá consumirse durante el tiempo de medicion. Para el segundo caso sea la medicion del producto formado, y esto va aser posible solo despues de una segunda transformacion quimica del producto o substrato a una compuesto coloreado. 2.- Medicion continua: Metodo cinetico. Si en una reaccion intervienen las coenzimas NAD o NADP como suministradores o receptores de hidrogeno, se puede seguir la reaccion enzimatica directamente en el fotometro, por que tales compuestos absorben la luz uv en su estado reducido, pero no en su estado oxidado, se decir despues de ceder el H. Esto se basa en el hecho de que los nicotinamida-adenin-dinucleotidos en forma reducida (NADH y NADPH) absorben la luz con al pico entre 338.5 y 340.5nm, mientras que las formas oxidadas NAD y NADP no muestran absorcion entre 300 y 400 nm. La prueba conteniendo enzimas, se incuba con todos los participantes en la reaccion, midiendose en intervalos de tiempo regulares el cambio de extinsion originado por la coenzima que recibe y libera hidrogeno. La velocidad de las variaciones de coenzima es proporcional a la actividad enzimatica buscada. Mediante la “copulacion de la reaccion con un sistema de deshidrogenasa, el test óptico puede servir tambien para la medicion de reacciones enzimaticas que no son dependientes de nicotinamida-adenin-dinucleotidos.



Por ejemplo la determinacion de la actidad de GOT tenemos que GOT cataliza la reaccion. GOT Aspartato + alfacetoglutarato ----------------> Glutamato + oxalacetato Para dicha determinacion de la actividad con el test optico, se añaden NADH y un exceso de MDH a la solucion reactiva y la reaccion prosigue de la manera siguiente: MD Oxalacetato + NADH + H ----------------à malato + NDH Por cada mol de aspartato transformado en oxalacetato se forma un mol de NAD, la velocidad de la disminucion de extinsion es el parametro de la actividad de GOT. La reaccion MDH sirve de reaccion indicadora. Si la reaccion enzimatica investigada no es posible la copulacion con una reaccion dependientede NAD y NADP, se tratara de emplear substratos sinteticos cuyo cambio de extincion puede leerse directamente en el espectro visible (con menor frecuencia en el ultravioleta).

ENZIMAS SERICAS DE INTERES DIAGNOSTICO. Aunque se han podido identificar más de 50 enzimas en la sangre, algunas no tienen valor clinico o solo lo poseen en casos especiales, como la ceruloplasmina (degeneracion hepatolenticular de Wilson). Las que tienen mayor aplicación y que se determinan rutinariamente en el laboratorio comun son las siguientes: Transaminasas, Fosfatasas acida y alcalina, Deshidrogenasa lacticas, Creatinfosfoquinasa, lipasa y amilasa. Generalmente se prefieren las determinaciones hechas en los sueros a las realizadas en plasma, ya que algunos anticoagulantes usados para obtencion del plasma interfieren en la actividad enzimatica. Las cuales serán descritas a continuación para estudiar su principal aplicación en la detección de enfermedades



MARCADORES PANCREATICOS: LIPASA: ES UNA ENZIMA QUE HIDROLIZA LOS TRIGLICERIDOS EMULSIFICADOS. Las cadenas de ésteres de los carbonos 1 y 3 del glicerol son preferentemente divididos, liberando dos moles de cadenas largas de ácidos grasos y 1 mol de 2-acilmonoglicérido por mol de triglicérido. El páncreas es el principal órgano productor de lipasa la cual es secretada en el jugo pancreático junto con otras enzimas digestivas. Algunas lipasas se encuentran en mucosa gástrica e intestinal. Normalmente el suero contiene baja actividad de lipasa sérica se eleva rápidamente en pancreatitis aguda y permanece elevada por un periodo más largo de tiempo que la amilasa.

ALFA AMILASA. En el humano la alfa amilasa es una enzima que rompe los enlaces alfa 1-4 glucosídicos presentes en las cadenas de almidón, rompiendolo en varias unidades. El producto final es una mezcla de glucosa, maltosa y dextrinas. La alfa amilasa es excretada por las glándulas salivales y pancreáticas en sus respectivos jugos los cuales entran al tracto gastrointestinal. Esta enzima es importante para la digestion e ingestión del almidón ; pero la amilasa del pancreas juega un papel más importante ya que la amilasa de la saliva es inactiva en las condiciones ácidas que prevalecen en el estomago. La alfa amilasa en sangre es excretada por el riñón y depurada renalmente con una estimación de 1-3 mL por minuto. Los valores normales son generalmente consideradas entre 60 y 150 Unidades Somogyi; valores normales de alfa amilasa en orina son de 35 a 260 unidades por hora. La elevacion de la alfa amilasa en suero ocurre por pancreatitis aguda y otras condiciones caracterizadas por edema e inflamación del pancreas, por incremento en la presion interna. Otras condiciones en las que la elevacion ha sido reportada incluye trauma cerebral, embarazo ectópico, ruptura esplenica, carcinoma broncogénico y pneumonía.



MARCADORES HEPATICOS: TRANSAMINASAS Desde el punto de vista catabolico los aminoácidos (a.a.) constan de dos fracciones : el grupo amino y el resto de la molécula. La perdida del grupo amino se efectua por : 1) transaminacion, 2) desaminacion. 1) transaminacion: Es el intercanbio que lleva a cabo un a.a. y un alfa cetoacido cambiando el grupo amino por el grupo cetona y viceversa. Las enzimas encargadas de este proceso son las aminotransferasas y por lo general su acción es reversible, tiene como coenzima el fosfato de piridoxal. La trasaminacion se desarrolla en la siguiente secuencia: 1) El fosfato de piridoxal con el grupo aldehido se une al radical amino del a.a.

con perdida de una molécula de agua y formacion de doble enlace. 2) Hay reacomodo del doble enlace . 3) Finalmente por la introduccion de una molécula de agua se separa el grupo

amino y se forma un grupo cetona.,el piridoxal queda como piridoxamina. En la segunda fase de reacción el fosfato de piridoxamina se une a un cetoacido sediendo una molécula de agua, se reacomoda el doble enlace con la introduccion de una molécula deagua, el radical amino queda en el ácido y se reconstruye el fosfato de piridoxal. Hay dos transaminasas cuya elevacion sanguinea se correlaciona con la clínica de diagnostico,pronostico y evolucion del padecimiento. TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA ( TGO). E n la actualidad se le denomina como aspartato aminotranferasa; cambia de manera reversible el grupo amino del glutamato al oxalacetato para dejar alfa cetoglutarato y aspartato. Su elevacion sanguinea se encuentra en casos de inflamacion del higado o en un infarto del miocardio.



TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA (TGP). • alanina amino tranferasa: por transaminacion reversible toma glutamato y

oxalacetato para dejar alfa cetoglutarato y aspartato. Su elevacion en la sangre indica el mismo tipo de lesiones que el anterior. Estas dos enzimas no son especificas de algún tejido por lo que sirve poco en el diagnostico, pero sirve mucho en el pronostico para controlar la evolucion del padecimiento. Los a.a. que sufren transaminacion son: alanina,arginina,aspartato,cisteina,fenilalanina,glutamato,lisina,triptofano,tirosina y valina.

TRANSAMINASAS. TGO (AST) TGP (ALT) Son enzimas representadas por proteínas simples, conjugadas y sentetizadas por células de diferentes tejidos: Hepatocito,Miocardio,Renal,Nervioso y Musculo estriado. Las cantidades de estas enzimas son pequeñas. En el suero hay mas TGO que TGP . En el hapatocito la tgp se encuentra en el citoplasma y la tgo se encuentra en el citoplasma y mitocondrias. TGP:Se indica en todo proceso inflamatorio necrotico del higado principalmente, es empleada para descartar hepatitis viral activa. Esta enzima tiene una concentración muy elevada en el higado mientras que en el corazon,musculo y riñon estas concentraciones son relativamente vajas. Es una enzima citoplasmatica del hepatocito, que se livera facilmente cuando existe una alteracion celular. Su elevada manifestacion en la ictericia de origen viral. Y su aumento ligeramente en el infarto del miocardio e intensamente se predomina la estasis hepatica por insuficiencia cardiaca. VALORES NORMAL ES: Adultos: 7 a 56 U/L Niños: 10 a 35 U/L Neonatos: 6 a 50 U/L Los valores son ligeramente mayores en varones y en negros; en el recien nacido se encuentra mas elevada debido a la mayor permeabilidad del hepatocito. Los valores bajos: Corresponden a la baja nutricion con piridoxina (vitamina B6). Tambien en la mujer que toma anticonseptivo y en paciente que se les practica hemodialisis. Esta prueba se utiliza para diagnosticar hepatopatias y vigilar la evolucion del tratamiento del hepatitis, cirrosis pos neocrotica activa y los efectos del tratamiento. SIGNIFICADO CLINICO: (elevacion moderada o alta) La tgp ayuda a distinguir entre ictericia hemolitica y ictericia producida por problemas hepaticos. Enfermedades que causan elevacion: *Enfermedades hepatocelulares. *Cirrosis activa (elevacion leve)



*Tumor hepatico metastasico (elevacion leve). *Ictericia obstructiva biliar (elevacion moderada) *Hepatitis viral(30 a 50 veces mayor que lo normal). *Infarto al miocardio. *Pancreatitis(elevacion leve). *Quemaduras graves. TGO: Esta presente en la epidermis de la piel, miocardio,musculo esqueletico estriado.pancreas,riñones,cerebro,higado,bazo y pulmones. Los G.R. contienen unas diez veces mas tgo que en el suero. Esta enzima es liberada en la circulacion cuando hay lesion o muerte celular. Cualquier enfermedad que provoque cambios metabolicos, provoca aumento de la TGO. VALORES NORMALES: Edad.:0 a5 dias=35 140 U/L;6 dias-3años:20 a60 U/L;3 a 6 años de 15 a20 U/L; DE 6 A 12 años: 10 a 50 U/L;12 a18 años; de 10 a40 U/L.;Adultos: 5 a40 U/L. SIGNIFICADO CLINICO:La tgo se utiliza para diagnosticar enfermedades cardiacas y hepaticas . ENFERMEDADES:

• Infarto al miocardio. • Hepatitis aguda y cronica. • Mononucleosis infecciosa. • Traumatismo o radiacion del musculo esqueletico. • Dermatomitosis. • Gangrena.

NOTA: Todas estas causan elevacion de la tgo. ENFERMEDADES: *Hiperrazohemia. *Diálisis renal cronica. *Ligeramente durante el embarazo. NOTA: Todas estas causan disminucion de la tgo. FOSFATASAS: A las fosfatasas que se activan mejor a un ph de 9- 11 se les llama alcalinas. Los huesos son ricos en ellos por que abundan en los osteoblastos. Normalmente la fosfatasa alcalina total en suero consiste de isoenzimas de origen hepático, ósea, y en algunos individuos de intestino. Elevaciones fisiológicas de fosfatasa alcalina se observan en la infancia y en tercer trimestre del embarazo. En esta última es a expensas de la isoenzima placentaria.



Esta enzima cataliza la hidrólisis de monésteres del ác. Fosfórico; sus valores normales por litro en suero son de 15 – 69 unidades internacionales ( U.I ) la cifra de 100 unidades se aceptan como máximo normal del incremento y en la etapa final del embarazo. La principal utilidad clínica de esta prueba reside en el estudio de los problemas hepáticos, porque la fosfatasa alcalina se eleva mucho ( 100 – 400 U.I ) en los procesos obstructivos de las vías biliares ( litiasis, tumores ) y en las lesiones ocupantes del espacio de la glándula ( carcinoma hepático primario o secundario, abscesos ); en cambio en las hepatitis y en las cirrosis, y la elevación es moderada ( 70 – 100 U:I ). No se conoce la razón del ascenso de ésta enzima en los problemas hepatobiliares; es posible que exista una mayor formación de fosfatasa alcalina por los hepatocitos o las células de los canalículos biliares junto con un obstáculo a la excreción. Sin embargo, se ha visto que las cifras no se elevan en la atresia congénita de las vías biliares extrahepática. También se observan elevación importante en todas las lesiones que se acompañan de actividad osteoblástica: osteítis deformante, raquitismo, osteomalacia, hiperparatiroidismo, metástasis de carcinomas. En la consolidación de fracturas, el ascenso es moderado. Ejemplo de fosfatasa alcalina normal es en una enfermedad ósea generalizada es el mieloma múltiple FOSFATASA ÁCIDA:-

SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:- Las fosfatasas ácidas se encuentra presente en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas las cantidades de estas enzimas en próstata, estomago, hígado, músculo, bazo, y eritrocitos y plaquetas. Las distintas isoenzimas se diferencian entre si por su ph óptimo, P.M. , y requerimiento de activadores e inhibidores. La fosfatasa ácida prostática (FacP ) constituye un valiosos auxilar en el diagnóstico de cáncer prostático pero en etapas avanzadas, cuando el tumor ha hecho metástasis, una de las formas neoplásicas de mayor mortalidad, por lo cual en si no ha sido utilizada com prueba oportuna para dicho diagnóstico. En este sentido, la determinación cinética de FacP usando x-naftil fosfato como sustrato ha mostrado sensibilidad y especificidad comparable a las técnicas radioinmunológicas, con semejante poder discriminatorio y evidente ventajas de orden práctico.



COLINESTERASA la colinesterasa se origina en el higado y cundo existe alteracion hepatica, su

concentracion disminuye en relacion directa con los hepatocitos alterados.

existen dos tipos : la colinesterasa verdadera o acetilcolinesterasa, cuya función

es hidrolizar la acetilcolina en la placa motora principal. se encuentra

principalmente dentro de los eritrocitos y en las terminaciones nerviosas de los

nervios colinergicos. es capaz de producir crisis de apnea postanestesicas,

cuando hay deficiencia de esta y metabolismo insuficiente de la succinil colina.

frecuencia 1/1500 pacientes . la otra es la colinesterasa del suero o plasma ,

conocida como pseudocolinesterasa que esta influenciada por los insecticidas

especialmente fosforados. su deficiencia inhibe la actividad de la colinesterasa del

suero y desencadena transitoriamente transtornos visuales con obnubilkacion

mental, por lo que es de importancia en pilotos fumigadores.

USOS

De screen en el preoperatorio de pacientes con sensibilidad a los

anestecicos donde la succinil colina no despolariza los relajantes musculares y

origina crisis de apnea . en los pilotos fumigadores que emplean insecticidas a

base de fosforo o carbamato. para valorar el daño del hepatocito en hepatitis viral

y atrofia aguda, donde sus niveles son tanto más bajos cuanta mayor sea la

alteración hepatica .

RANGOS NORMALES

son variables según el metodo empleado. con el sistema cinetico con

butiriltiocolina como substrato, las cifras normales fluctuan entre 3200 a 9000

unidades internacionales.

INTERPRETACION

las pacientes que toman estrogenos o contraceptivos bajan sus niveles. la

colinesterasa verdadera es estable en el medio ambiente hasta 80 dias, se debe

mantener en congelador hasta el momento de procesarla.

PREPARACION DEL PACIENTE

no se requiere ninguna preparacion



TOMA DE MUESTRA

no es necesario estar en ayunas y se puede emplear el suero o plasma usando

anticuagulante edta

VALOR CLINICO

de utilidad en pilotos fumigadores y en anestecia

GAMMA-GLUTAMILTRANSFERASA Es una enzima microsomal que regula el transporte de aminoácidos a través de la membrana celular, catalizando la transferencia de un grupo glutamilo desde el glutatión a aminoácidos libres. Aunque se encuentra en la mayoría de los órganos corporales con la excepción del músculo, la actividad plasmática se atribuye fundamentalmente a la isoenzima hepática. Puede estar implicada en el transporte de péptidos a través de las membranas celulares como péptidos gamma-glutamilo. Las gammaglutamil-transferasa tiene una mala especificidad para las enfermedades hepáticas e incluso en un paciente con ictericia ayuda poco a la información obtenida de la medida de la AST y FAL. Sin embargo, su medida puede ser útil en dos circunstancias particulares. Primero, cuando el origen de una FAL sérica elevada es dudoso, una elevación concomitante en la gamma-glutamiltransferasa sugiere que la FAL es de origen hepático. En segundo lugar se refiere al área controvertida de la relación de la gamma-glutamiltransferasa con el consumo crónico de alcohol. La gamma-glutamiltransferasa puede elevarse en pacientes con alcoholismo crónico debido a la inducción enzimática por el alcohol y al daño hepático. La gamma-glutamiltransferasa se eleva más en alcohólicos con enfermedad hepática y existe una tendencia a que los niveles se mantengan altos después de la abstinencia. Contrariamente, en pacientes alcohólicos sin enfermedad hepática, aproximadamente la mitad tienen una gamma-glutamiltransferasa elevada y generalmente vuelve a lo normal después de 8 semanas de abstinencia. El aumento de la gamma-glutamiltransferasa no se relaciona ni con la cantidad de alcohol consumido ni con la duración de su consumo. De esto se deduce la escasa eficiencia de la gamma-glutamiltransferasa como rastreo en poblaciones



con consumo excesivo de alcohol. Se observan resultados falsos positivos en los que toman fármacos inductores de la enzima y resultados falsos negativos en los que no tienen enfermedad hepática. Sin embargo, el hallazgo de una gamma-glutamiltransferasa muy elevada, más de 5 veces el límite superior de referencia, es una buena razón para indagar acerca de un posible abuso de alcohol. La gamma-glitamiltransferasa sigue manteniéndose como la mejor de las pruebas de detección precoz de laboratorio y, dependiendo de la población estudiada, la sensibilidad es el orden de un 50% y la especificidad de un 85%. La gamma-glutamiltransferasa puede detectarse en suero en 3 formas enzimáticas principales, aunque estas determinaciones no suelen realizarse rutinariamente. La forma de elevado peso molecular aparece en suero normal así como en la obstrucción biliar y más frecuentemente en la infiltración maligna del hígado. Una forma de peso molecular intermedio consta de dos fracciones, la más importante se detecta en enfermedades hepáticas y la otra se encuentra en la obstrucción biliar. La tercera forma es un componente de bajo peso molecular de importancia desconocida. En nuestra experiencia, la determinación de estas fracciones carece de la suficiente sensibilidad y especificidad como para que se introduzcan en las pruebas de rutina de los laboratorios. MARCADORES CARDIACOS Dentro de los marcadores cardiacos tenemos a las enzimas que principalmente se encuentran en el musculo cardíaco y por lo cual apuntan hacia dicho órgano como son: DESHIDROGENASA LACTICA (LDH) Se encuentra en todos los tejidos; la diferencia entre uno y otro tejido es la proporción de LDH (isoenzimas). Los glóbulos rojos y blancos contienen grandes cantidades de esta enzima, así como la piel, músculo cardiaco, riñón e hígado.Reacción que cataliza: CH3COCOOH + NAD|-H2 CH3CHOHCOOH + NAD La LDH es un tetrámero compuesto por 2 cadenas de polipéptidos diferentes que se han llamado H y M. La combinación de estas dos cadenas da lugar a diferentes isoenzimas identificadas por electroforesis en gel de agar o acetato de celulosa:



• LD 1 (H4) • LD2 (H3M1) • LD3 (H2M2) • LD4 (HM3) • LD5 (M4) Una isoenzima contiene 4 de estas unidades cada una con un PM vecino de 35 000. LD1 y LD2 se encuentran en concentraciones elevadas en el músculo cardiaco, los glóbulos rojos y la corteza renal. LD5 se encuentra en concentraciones máximas en músculo esquelético, hígado, íleon y piel. Una sexta isoenzima la LDH, que se encuentra en el testículo humano después de la pubertad, posee otro tipo de subunidad monomérica; su estrecha afinidad con el grupo LDH del suero se traduce por la capacidad de la subunidad monomérica H y M de combinarse con las de la variedad testicular de LDH, formándose una nueva serie de tetrámeros , con propiedades distintas respecto a la electroforesis y otras características.

En el infarto agudo de miocardio la elevación de la LDH puede ser hasta 10 veces límite superior normal, éste se inicia aproximadamente 12-24 hrs tras el inicio del dolor pectoral, y alcanza un máximo a las 48-72 hrs. La LDH se encuentra en la mayoría de los tejidos, lo que reduce la utilidad de su medida para el diagnóstico de IM. La medida de las isoenzimas de LDH puede aumentar la especificidad de las determinaciones de LDH.

Límites de valores normales: Con el método colorimétrico midiendo la reacción antes señalada son normales de 200 a 600 u/ml. La reacción se vigila a través de la disminución de la absorbancia a 340 nm por transformación de HAD.H2 en NAD. En el método colorimétrico los valores dependen de la técnica empleada. Cuando se mide la desaparición de piruvato, a través de la disminución de formación de hidrazona coloreada con 2,4-dinitrofenilhidracina, los límites normales son de 100-350 U/ml.En niños de menos de 1 semana de edad pueden alcanzar 1800U/ml. Significado Clínico: Por la ubicuidad de la LDH en tejidos y glóbulos rojos , es dudoso su valor clínico, y en caso que los resultados sean altos indica que el paciente presenta una enfermedad activa, como podría deducirse de una sedimentación acelerada. Las mediciones simultánes de TGO, LDH y bilirrubina han sido útiles



para distinguir un infarto pulmonar de uno al miocardio; en los 1ros TGO es normal , pero se elevan LDH y Bilirrubina; en los 2dos TGO y LDH son elevados pero Bilirrubina se mantiene normal. La medición de los niveles de LDH y de Fosfatasa alcalina en orina permite ciertos diagnosticos diferenciales del riñón. ® LDH elevado en orina Pielonefritis crónica, glomerulonefritis aguda,nefritis luposa, glomeruloesclerosis diabética. ® LDH elevado en orina y Fosfatasa alcalina Normal Carcinoma de la vejiga, pielonefritis crónica, hipertensión maligna y glomerulonefritis esclerosante. ® LDH y Fosfatasa alcalina elevadas en orina Cáncer de riñón y próstata, adenomas y carcinomas suprarrenales.

Medición de la LDH en Suero: • Incubar 0.1 ml de una dilución de suero1 a 6 con 1.0 ml de substrato de

piruvato amortiguado, en un frasco que contiene 1.0 mg de NADH muy puro, durante 30' a 37° C.

• Añadir 1.0 ml de 2,4-dinitrofenilhidracina, y dejar 20 ' a T ambiente. • Añadir 10 ml de Na OH 0.40 N. • A los 5' leer en la longitud de onda.

Creatinfosfoquinasa (CPK) . La creatina kinasa (CK) es una enzima intramuscular constituida por una subunidad M (músculo) y otra subunidad B (cerebro)que sé combinan dando lugar a isoenzimas: 1. CK-MM (MUSCULAR) 2. CK-BB (CEREBRAL) 3. CK-MB (MIOCARDICA) Dentro del conjunto de actividades enzimáticas que pueden valorarse en la enfermedad muscular, el indicador más sensible es la CK. Esta es una enzima que requiere de Mg, debido a esto no debe utilizarse como anticoagulante citrato porque sobrepone la quelación de Mg y se inhibe la actividad de la enzima. En un paciente con IM hay aumento de CK de 6-8 hrs, máximo en 15 y vuelve a la normalidad en 3-5 días. Con el daño muscular aumenta la actividad de CK total y una proporción es del tipo CK-MB (menos del 6%). CK muy elevada con una fracción mayor del 6% de CK-MB indica daño al miocardio.



Causas de elevación de CK: • Diferentes tipos de operaciones • Administración intramuscular de drogas • Tos violenta • Ejercicio (cuando se hace a p atmosféricas elevadas) • Consumo de cantidades elevadas de alcohol • Convulsiones • Infarto cerebral o hemorragia • Necrosis o regeneración del músculo Recomendaciones : Conservar los sueros para análisis de CK a 4°C o congelarlos y analizarlos a los pocos días. Evitar muestras hemolizadas. Protegerlas de la luz azul. La CK-MB está confinada principalmente al corazón (representa 6-20% de la actividad total) pero existen cantidades medibles en el músculo esquelético. TROPONINAS

Muchos estudios se han centrado en la utilización de la determinación de troponina T (TnT) y troponina I(TnI)para el diagnostico de IM. La troponina es un complejo de tres proteinas que regulan la interaccion de la miosina con la actina en el proceso contráctil:1)troponina T (39 Kda),responsablemente de la union del complejo a la tropomiosina,2)troponina1(26.5Kda) un inhibidorde la actomiosina ATPasa.que bloquea la contracción en ausencia de calcio y 3) troponina C (18 Kda),que une calcio en el inicio de la contracción La troponina C tiene solo una forma y se encuentra en los musculos,mientras que la Ty la I tiene cada una isoforma de musculos esqueletico y cardiaco.

Aunque la mayoria de la TnT se encuentran asociadas con la tropomiosina como una proteina miofibrilar, tambien se encuentra en un conjunto citosolico. Esta distribución se refleja en una liberación bisafacica de la TnTdel músculo cardiaco dañado;esto se explica por una liberación inicial como consecuencias del daño de membrana durante la isquemia grave (iniciándose a las 3 horas) y continua una lenta disociación y degradación de miofilamentos , lo que conduce a una liberación continua durante 3-5 dias. Devido asu liberación relativamente rapida , tras la mioglobina y antes de la CK-MB,se le a dado un papel de marcador precoz de IM, y debido a su liberación prolongada tambien se utiliza pa ra suministrar undiagnostico tardio de IM. Los datos actuales sugieren que es probable que realice con la CK-MB como marcador de IM con una eficiencia diagnostica de un 98% en el diagnostico de IM para la TnT ( con un punto de corte de 0.2ug/Ly un tiempo de 12-24Horas) comparado con la CK-MB(masa) con



una eficiencia del 99% (a las 8 horas ). El aumento de la TnT en el IM es mucho mayor que el de lo normal . El rango de referencia es de 0 a 0.1 ng/ml. Como se a indicado, el incremento es prolongado , lo que permite la detección de IM incluso a los 10 dias del inicio de los síntomas. Se ha indicado que debido a la naturaleza de su liberación desde la celula miociticas,puede ser util en la detección de microinfartos y , de forma similar a la mioglobina ,puede utilizarce para valorar el éxito de la reperfucion . Tras el inicio de los síntomas , en las 4 primeras horas , aumenta de forma muy notable la concentración de TnT ; a continuación , sigue una caida que se corresponde con la reperfucion y luego aumenta otra vez aproximadamente durante 4 dias mas , correspondiendo a la liberación de troponina ligada a los miocito necroticos. Tambien se ha estidiado su utilización en la angina inestable, que es una isquemia miocardia grave y transitoria, ocacionada por una estenocis coronaria rapida y progresiva y que se puede conducir a un IM completo . La TnT se utiliza en este marco pa ra determinar los pacientes que probablemente progresan a IM . sin embargo , al igual que la CK-MB, la TnT puede carecer de especificidadcuando coexiste daño del músculo esqueletico , debido a que los anticuerpos frente a la TnT cardiaca tambien presentan reacciones cruzadas con la TnT del músculo esqueletico , y es del orden de un 0.5 a un 2% . por otra parte , en TnT cardiaca no aumenta o lo hace muy ligeramente . De forma similar a la TnT , la TnI se libera durante un periodo de tiempo mayor qque la CK-MBy , por lo tanto, puede utilizarce de forma análoga . estudios recientes muestra que pueden tener incluso mayor especifidad de la TnT cardiaca ya que se ha indicado que es normal , por ejemplo,la CK total llega a 74000UL y la CK-MB es de 280 ug /L, como ocurre en la rabdomilicis ,por lo demas , sus características son similares a las de la TnT . la CK total , la CK-MB y la mioglobina aumenta mucho en la sangre de los maratonianos tras la carrera , a pesar de no haber ninguna lesion miocardia ; por el contrario , la concentración de TnI no aumenta , esta prueba puede resultar muy util para el diagnostico de un IM en deportistas tras realizar un esfuerzo fisico intenso. La miosina , otra proteina miofibrilar, interacciona reversiblemente con la actina durante la contracción muscular , esta constituida por una cadena pesada con dos cadenas ligeras en cada extremo ,existen dos tipos de cadenas , cadenas ligeras :las cadenas ligeras de tipo 1, que tienen un peso molecular de 29 Kda y las cadenas ligeras de tipo 2 que tienen un peso molecular relativo de 24 Kda y las cadenas ligeras de tipo 1 no son detectables en sangre de personas sanas . al igual que la troponina , las cadenas ligeras de miosina se liberan de forma continua entre las 3 y las 6 horas siguientes al infarto .La concentración máxima se alcanza entre los dias 2 y 4, en general la concentración de la cadenas pesadas puede aumentar ligeramente tras un esfuerzo fisico intenso. Después de un IM las cadenas pesadas tardan en parecer en la sangre periferica , entre 1 y 4 dias tras el inicio de los síntomas . El máximo de concentración se alcanza tras unos 6 dias . La vuelta a la normalidad no se observa hasta 3-4 semanas después. Uno de los aspectos positivos de las cadenas de miosina es la relativa insecibilidad de la reperfucion de la zona infartada en caso de recanalizacion de la



arteria obstruida , por eso , las cadenas ligeras de miosina pueden ser muy utiles para la determinación de la magnitud del infarto.

La Troponina I es la proteina inhibitoria del complejo regulador Troponina - tropomiosina que confiere sensibilidad al Calcio al músculo estriado, es por eso la regulación de la interacción de actina y miosina en el músculo estriado.Se prefiere el uso de Troponina I en el diagnóstico de infarto agudo al miocardio.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA.

El ensayo de Troponina I de LIFE SIGN® MI emplea una tecnología de

inmunoensayo cromatográfico de fase sólida para detectar cualitativamente la presencia de Troponina I cardiaca en muestras de sangre humana. La inmunocromatografía se inicia con la adicción de muestra en el área indicada para la muestra.

La troponina I cardiaca de la muestra, se une al anticuerpo de tinción conjugado y migra a través del area de prueba, la cuaál tiene anticuerpos inmovilizados y se deslioga del complejo de tinción al migrar fuera de la región de prueba. Algunos de estos complejos son capturados después en el área de control.

Una banda horizontal visible rosa- purpura aparecerá en la prueba y en el area de control si la concentración de Troponina I cardiaca en la muestra está por encima del valor límite establecido, indicando un resultado positivo.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA. 1.- Agregar 130 µL de muestra de sangre completa, suero o plasma. 2.- Leer despues de 15 min. Observando la aparicion o no de la linea horizontal de color rosa purpura en el área de prueba.



B I B L I O G R A F I A

Carl A. Burtis Edward R. Ashwood, David E Bruns. TIETZ FUNDAMENTAL OF CLINICAL CHEMESTRY, 6ª. Ed. (2012). Gonzalez Hernández A. PRINCIPIOS DE BIOQUÍMICA CLÍNICA Y PATOLOGÍA MOLECULAR Ed El Sevier (2012) Alba Lucía Salamanca BIOQUÍMICA CLÍNICA. Aproximación Al Análisis Básico-Clínico De Las Enfermedades Editorial: Universidad Del Rosario. (2011) Jacobo Diaz Portillo. BIOQUIMICA CLINICA 3ª. Ed Ed. Ergon, ( 2010 ) M.A. Castaño López, J, Díaz Portillo, F.BIOQUÍMICA CLÍNICA: DE LA PATOLOGÍA AL LABORTORIO. Ed. Ergon. (2008) Susan King Strasinger. LIQUIDOS CORPORALES Y ANALISIS DE ORINA. Editorial El Manual Moderno (2007). Perán Mesa, Salvador (Servicio de Publicaciones de la Universidad de Málaga. UMA INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA (2007) 1ª. Ed Richard A. Harvey, Pamela C. Champe “ BIOQUÍMICA 3a. Ed. (2006) ed. McGrawHill

tema ii enzimas los valores de actividad enzimatica. la unidad internacional es la cantidad de...

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