FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICAMEGR

CINETICA ENZIMATICAEstudia la Vel de las Rxs catalizada por ELa vel de una Rx catalizada por E puede medirse con relativa facilidad ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar la EProporcionan informacin directa acerca del mecanismo de Rx cataltica y de la especificidad.Permite dilucidar Mecanismos de reaccinSe pueden conocer:Afinidades de unin a S e inhibidoresMxima velocidad catalticaMecanismo catalticoPapel de una E en la vaVelocidad a cantidad de E: condiciones de Medicin de las E para BQ y Anlisis clnicos

Factores que afectan la actividad enzimticacc. del SA mayor cc. del S, a una cc fija de la E se obtiene la Vel. mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la cc del S no tiene efecto en la Vel. de la Rxcc de la E.-Siempre y cuando haya S disponible, un aumento en la cc de la E aumenta la Vel. enzimtica hacia cierto lmite.Temperatura.-Un incremento de 10C duplica la Vel. de Rx, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la E pierde su actividad.pH.-El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las E del estmago cuyo pH ptimo es cido.Presencia de cofactores.-Muchas E dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las E que tienen cofactores, la cc. del cofactor debe ser igual o mayor que la cc de la E para obtener una actividad cataltica mxima.

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTENVo = V max [S] Km + [S]

Cintica enzimtica en funcin de la concentracin de sustrato

Catalasa H2O2 25.0Hexoquinasa ATP 0.4 D-Glucosa 0.05 D-Fructosa 1.5Anhidrasa carbnicoa HCO3- 9.0Quimotripsina Gliciltirosinilglicina108.0N-Benzoiltirosinamida 2.5-Galactosidasa D-Lactosa 4.0Treonina deshidrogenasaL-Treonina 5.0

Km de algunas enzimasENZIMA SUSTRATO Km (mM)La KM es un parmetro de Actividad EnzimticaLa KM es inversamente proporcional con la actividad de la enzima.

Valor de KM grande, baja actividad

Valor de KM pequeo, alta actividad

ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa2 RutasEnzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =HexocinasaDesplazamiento Simple, los 2 S se unen a la EA + B + E EAB C + DDoble desplazamiento o ping-pongA + B + E AE BE + C DDeterminacin Cuantitativa de la Cintica EnzimticaLa reaccin globalProcedimeinto analtico para determinar el S que desaparece o el P que apareceS el E requiere Cofactores (ines o coenzimas)La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o se la KM del S.El pH ptimoUn intervalo de temperatura en la que la E es estable y muestra actividad elevada.Efecto del pHLos enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo. 14

Actividad enzimtica y variacin del pH1 3 7 11 14 pHVoPepsina1.5Tripsina7.7Catalasa7.6Arginasa9.7Fumarasa7.8Ribonucleasa7.8Enzima pH ptimo437 85 Temperatura oC)Vo 10 50 100 CoenzimaVo 10 30 50 70 100 Tiempo (min)Vo

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18Efecto el pHLa mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular

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Los factores que afectan la actividad enzimticaEl pH (desnaturalizacin) (Ej: pepsina)La concentracin del sustratoSustancias qumicas (inhibidores)Efecto de la Temperatura

Efecto de la Temperatura

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Efecto del tiempo23

COFACTORLas E requieren de cofactores o coenzimas generalmente no hasta que esta molcula se une: Apoenzima: E a la cual no se ha unido el cofactor(inactiva) Holoenzima: E a la cual se une el cofactor (activa)

ECUACIN DE HILL