tema 10-1. leucocitos. métodos generales y complementarios de estudio
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Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 10.1Tema 10.1
Tema 10.1Tema 10.1
LOS LEUCOCITOS. MÉTODOS DE ESTUDIO
GENERALES Y COMPLEMENTARIOS
BioquBioquíímica Clmica Clíínica i Hematologianica i Hematologia
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Tema 10.1Tema 10.1
Hematopoyesis
Principios generales para el examen morfológico de médula ósea y la realización del mielograma
Semiología de los leucocitos de sangre periférica.
Normalidad
Anomalías más frecuentes
Métodos diagnósticos en hematología
LOS LEUCOCITOS. MÉTODOS DE ESTUDIO GENERALES Y COMPLEMENTARIOS
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Tema 10.1Tema 10.1
Hematopoyesis
La hematopoyesis es el mecanismo fisiológico responsable de la formación continuada de los distintos elementos formes sanguíneos, que los mantiene dentro de la normalidad en la sangre periférica
En el adulto la hematopoyesis se lleva a cabo en la médula ósea, localizada en el interior de los huesos planos (cráneo, esternón, sacro, pelvis, etc)
En el hombre existe una célula madre pluripotente con capacidad de proliferación, diferenciación y autorrenovación: CFU-GEMM
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Tema 10.1Tema 10.1
MEDULA ÓSEA SANGRE PERIFERICA
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Tema 10.1Tema 10.1
Principios generales para el examen morfológico de médula ósea y la realización
del mielograma
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE GRANULOPOYÉTICA NORMAL EN MÉDULA ÓSEA
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE MONOCÍTICA NORMAL EN MÉDULA ÓSEA
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE LINFOIDE
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Tema 10.1Tema 10.1
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Tema 10.1Tema 10.1DISTRIBUCIÓN DE LOS ANTÍGENOS DE SUPERFICIE EN LAS CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS EN SU DIFERENCIACIÓN
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Tema 10.1Tema 10.1MÉDULA ÓSEA
Relación gránulo / eritroide : 3 / 1
15%
EosinófilosBasófilosLinfocitosPlasmáticasMonocitosHistiocitos /macrófagos
Otros
25%
ProeritroblastosEritroblastos basófilosEritroblastos policromatófiloEritroblasto ortocromático
Eritroblástica
60 %
MieloblastosPromielocitosMielocitosMetamielocitosBandasPolinucleares
GranulocíticaNeutrófila
ProporciónTipo de célulaSerie
MIELOGRAMA
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Tema 10.1Tema 10.1
Semiología de los leucocitos de sangre
periférica.
Normalidad
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Tema 10.1Tema 10.1
LEUCOCITOS
Recuento del número total de leucocitos por unidad de volumen
FÓRMULA LEUCOCÍTICA no patológica
Expresión de las cinco poblaciones normales en percentagei valor absoluto.
Se realiza por análisis morfológico o por autoanalizador
FÓRMULA LEUCOCÍTICA patológica
Extensión de sangre periférica para valorar morfología
SERIE BLANCASERIE BLANCA
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Tema 10.1Tema 10.1
INFORME AUTOMATIZADO DE UN HEMOGRAMAINFORME AUTOMATIZADO DE UN HEMOGRAMA
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Tema 10.1Tema 10.1
EOSINOFILOS
NEUTROFILOS
LINFOCITOS
MONOS
Hemograma. Representación gráfica de las poblaciones
Poblaciones leucocitarias
Volumen
Tamaño del núcleo
Forma del núcleo
Regularidad del citoplasma
El espesor de las imágenes expresa la cantidad de células Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 10.1Tema 10.1
NEUTRÓFILOS
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Tema 10.1Tema 10.1SERIE GRANULOPOYÉTICA: NEUTRÓFILOS.
PRODUCCIÓN Y MADURACIÓN
MÉDULA ÓSEAProceso de proliferación y maduración (acelerado
en caso de infección)Almacenamiento
SANGRE
Vida media 6 horas
TEJIDOS
Emigran a pulmón, tubo digestivo y bazo
Vida media alrededor de 2 díasBioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 10.1Tema 10.1
EOSINÓFILO
BASBASÓÓFILOFILO
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Tema 10.1Tema 10.1SERIE GRANULOPOYÉTICA:EOSINÓFILOS Y BASÓFILOS.
CARACTERÍSTICAS
Proceso de maduración similar al de los neutrófilosVida media en sangre 16 horasLos gránulos contienen peroxidasa, catalasa y flavoproteina
(peroxisomas): oxidación de lípidosMenor actividad antibacteriana que los neutrófilosPapel en la defensa contra helmintos
Los gránulos contienen glisosaminoglicanosReacciones de hipersensibilidad cutánea, bronquial, etc.
EOSINÓFILO
BASÓFILO
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Tema 10.1Tema 10.1
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE GRANULOPOYÉTICA:MONOCITOS.
CARACTERÍSTICAS
MONOCITO
Funciones quimiotáctica y de fagocitosisSecreción de citoquinas (IL-1, TNF, interferón) y
factores de crecimientoMediadores en procesos de inflamación y defensa
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE LINFOIDE
Linfocito
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Tema 10.1Tema 10.1SERIE LINFOIDE
Mediano o grandeOcasionales
Menos densaMenor
Pequeño o medianoPresentes
Linfocito T colaborador (T4)Linfocito T supresor (T8)
DensaRelativamente acentuada
Características morfológicas:-Tamaño-Gránulos citoplasmáticos-Granulación azurófila
Gran tamaño y ubicación paranuclear:
Menor tamaño y localización múltiple:
-Cromatina-Basofilia citoplasmática
Síntesis de anticuerposInmunidad celularFunción colaboradora (T4)Función supresora (T8)Natural Killer (NK)
Función primordial
10-20%65-75%Porcentaje en sangre periférica
Corta (habitualmente)Larga (habitualmente)Longevidad
Médula óseaTimoAdquisición competenciaInmunológica
Célula madre pluripotentehematopoyética linfoide
Célula madre pluripotentehematopoyética linfoide
OrigenLINFOCITOS BLINFOCITOS T/ NKCARACTERÍSTICAS
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Tema 10.1Tema 10.1
SERIE LINFOIDELinfocito grande granulado
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Tema 10.1Tema 10.1
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOSVALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS
3- 100,1 - 1,014-20Monocitos
20 – 401,5 - 4,07-18Linfocitos
0,0 – 0,50,01 - 0,0512-14Basófilos
1 – 50,05 - 0,510-14Eosinófilos
45– 701,7 - 7,010-14Neutrófilos
4 - 10Leucocitos
Valor relativo( % )
Valor absoluto( x 109 L)
Diámetro ( μm )
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Tema 10.1Tema 10.1RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
VALORES DE REFERENCIA EN NIÑOS
Valor absoluto ( x 109 L)
0,4 – 0,80,5 - 0,80,3 – 0,8Monocitos
1,5 – 7,02,5 – 8,03,0 – 9,0Linfocitos
0 – 0,010 – 0,01-Basófilos
0,2 – 0,40,2 – 0,40,2 – 0,4Eosinófilos
2,0 – 8,02,0 - 7,51,5 – 8,0Neutrófilos
4,5 - 126 - 126 – 16Leucocitos
6 a 14años
2 a 6años
Primeraño
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Tema 10.1Tema 10.1
de médula ósea y la realización del mielograma
Semiología de los leucocitos de sangre periférica.
Anomalías más frecuentes
Cualitativas
Cuantitativas
Leucopenias
Leucocitosis
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Tema 10.1Tema 10.1ALTERACIONES CUALITATIVAS
NEUTRÓFILOS
ANOMALÍA DE PELGER-HUËT
Segmentación ausente o disminuida
Clumping
Constitucional o adquirida
ANOMALIAS DEL NÚCLEO
CLUMPING
Anormal condensación de la cromatina
Disposición en extensos grumos
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Tema 10.1Tema 10.1
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Tema 10.1Tema 10.1
NÚCLEO EN ANILLO
Hiposegmentación nuclear
Se observa un gran agujero central
HIPERSEGMENTACIÓN
Polinucleares con más de 5 segmentos
También puede afectar a los eosinófilos
ALTERACIONES CUALITATIVASNEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL NÚCLEO
APÉNDICES NUCLEARES EN PALILLO DE TAMBOR
Nódulos cromatínicos en forma de gota pendiente
Corresponden a cromosomas sexuales femeninos inactivados
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Tema 10.1Tema 10.1
NNÚÚCLEO EN ANILLOCLEO EN ANILLO
HIPERSEGMENTACIHIPERSEGMENTACIÓÓNN
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Tema 10.1Tema 10.1
HIPERGRANULACIÓN/ GRANULACIÓN TÓXICA
Granulación primaria con apetencia
tintorial alterada, se tiñe de manera
pronunciada
ALTERACIONES CUALITATIVAS NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMADESGRANULACIÓN
LEUCOCITARIASigno dismórficoCitoplasma agranular y azuladoPuede ser artefacto
- PH inadecuado-discrasias plasmocelulares-frotis engrasados
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Tema 10.1Tema 10.1
DESGRANULACIDESGRANULACIÓÓN NEUTROFN NEUTROFÍÍLICALICA
( a veces pueden confundirse con ( a veces pueden confundirse con monocitos)monocitos)
HIPERGRANULACIHIPERGRANULACIÓÓN NEUTROFN NEUTROFÍÍLICALICA
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Tema 10.1Tema 10.1
ANOMALÍA DE CHEDIAK-HIGASHI
Carácter hereditario
Gránulos anormales gigantes azul oscuros
Diámetro de 1 a 3µm
En todos los tipos leucocitarios
Patologia de los microtúbulos
Puede presentarse en Leucemias agudas mieloides (LAM)
ALTERACIONES CUALITATIVAS NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA
CUERPOS DE DÖHLE
Inclusiones basófilos y pironinófilas
Forma ovalada o rectangular
y de 1 a 3µm diámetro
Agregados de reticuloendoplasmico
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Tema 10.1Tema 10.1
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Tema 10.1Tema 10.1
BASTONES DE AUER
Inclusiones formadas por fusión de diversos gránulos primarios
Azurófilas
En forma de bastoncillos
ALTERACIONES CUALITATIVAS NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA
ASTILLAS
Inclusiones alargadas con extremos puntiformes
Azurófilas
Dispuestas en cúmulos, manojos o gavillas
Típico de la LAM Promielocítica
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Tema 10.1Tema 10.1
ASTILLASASTILLAS
(imagen para no olvidar)(imagen para no olvidar)
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Tema 10.1Tema 10.1
Cromatina en grumos: Leucemia Linfática Crónica (LLC)
Núcleos irregulares, hendiduras: células de Sézary, centrocitos
Núcleos bilobulados: linfocitosis B policlonal
Segmentación radial: linfocitos estimulados o artefacto ( anticoagulantes)
Linfocitos estimulados: incluso con nucleolo
ALTERACIONES CUALITATIVASLINFOCITOS
ANOMALIAS DEL NÚCLEO
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Tema 10.1Tema 10.1
Vacuolas: células linfoblásticasComplejo ribosómico lamelar: tricoleucocitosInclusiones globulosas: naturaleza proteica
(inmunocitomas)
Amplitud citoplasmática: con basofilia y acoplamiento a los hematies: linfocitos activados(mononucleosis)
Proyecciones citoplasmáticas: linfocitos vellosos
ALTERACIONES CUALITATIVAS LINFOCITOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA
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Tema 10.1Tema 10.1
LINFOCITOS ESTIMULADOS / ACTIVADOSLINFOCITOS ESTIMULADOS / ACTIVADOS
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Tema 10.1Tema 10.1
Métodos diagnósticos en hematologíaCITOQUÍMICOS
INMUNCITOQUÍMICOS
CITOMETRÍA DE FLUJO
CITOGENÉTICA
BIOLOGÍA MOLEULAR
FISH
MICROARRAY
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Tema 10.1Tema 10.1CITOQUÍMICOS
proceso químico aplicado a preparaciones de células en porta
intenta detectar componentes de las células: enzimas, principios inmediatos, o sustancias orgánicas
producto final presenta coloración visible al microscopio óptico
permite diferenciar distintos progenitores: mieloides, linfoides, monocitoides
TÉCNICAS: MIELOPEROXIDASAS: distinguen población mieloide granulocítica
ESTERASAS: distinguen población monocítica
OTRAS: lisozima, fosfatasa ácida (línea linfoide T), βglucoronidasa, etc
método menos utilizado que en el pasado
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Tema 10.1Tema 10.1
INMUNOCITOQUÍMICOS O INMUNOHISTOQUÍMICOS
Se utilizan células frescas o muestras congeladaspreviamente fijadas
Se basan en la detección de antígenos celularesmediante anticuerpos monoclonales
Revelados mediante reacción enzimática que producen coloración
Muy laboriosas y requieren personal experimentado para su realización e interpretación
Complementaria a otras técnicas
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Tema 10.1Tema 10.1
MIELOPEROXIDASA
Serie mieloide granulocítica
ESTERASA: alfa- naftil acetato esterasa
Serie monocítica
Anticuerpo CD61 que marca línea megacariocítica: plaquetas
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Tema 10.1Tema 10.1CITOMETRÍA DE FLUJO
Análisis celular multiparamétrico que precisa de sofisticados sistemas informáticos
Se basa en hacer pasar una suspensión de células alineadas y de una en una por delante de un haz de laser focalizado
El impacto produce una serie de señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y son recogidos por detectores, que convierten las señales en impulsos electrónicos y se digitalizan para permitir la medida simultánea de varios parámetros de la misma célula
Se combinan propiedades físicas con fluorescenciasBioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 10.1Tema 10.1
Se reconocen impulsos eléctricos por unidad de tiempo:- número de partículas- volumen de las mismas
El haz directo realiza el recuento celular por unidad de tiempo- número de partículas por dispersión- volumen de las mismas por difracción
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Tema 10.1Tema 10.1Representación de dos parámetros físicos:
CUANTO MÁS GRANDE Y MÁS COMPLEJA ES LA CÉLULA, MÁS A LA DERECHA Y ARRIBA SE COLOCARÁ
violeta, células pequeñas y poco complejas correspondiente a los linfocitos.
rojo, basófilos que debido a la composición química de sus gránulos se comportan con patrones de dispersión similares a los linfocitos
verde, población de células grandes y mediana complejidad correspondiente a los monocitos.
amarillo, células complejas y grandes correspondiente a los neutrófilos
azul, las células más complejas de todas, correspondiente a los eosinófilos.
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Tema 10.1Tema 10.1
Representación de un parámetro físico y una fluorescencia.
rojo linfocitos T colaboradores CD4+,
violeta resto de linfocitos.
Representación de dos fluorescencias
rojo linfocitos T colaboradores CD4+
violeta resto de linfocitos y linfocitos T supresores CD8++.
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Tema 10.1Tema 10.1CITOGENÉTICA
Imprescindible en el manejo de pacientes con enfermedades hematológicasDetectando cambios cromosómicos que implican a genes responsables de la
transformación neoplásica de las células hematológicasLas mutaciones originadas en precursores hematopoyéticos son observadas
en las células como:translocaciones (intercambio de material genético entre dos o más
cromosomas)deleciones (pérdidas de material cromosómico)duplicaciones (ganancias de material cromosómico)inversiones (reestructuración del material cromosómico)
El mayor impacto ha sido la demostración de que las anomalías cromosómicas son un indicador pronóstico independiente de otras variables (edad, recuento de leucocitos, fenotipo)
Ciertos cariotipos están asociados a buen pronóstico, mientras que otros indican malos resultados, lo que ha llevado a la administración de terapias alternativas
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Tema 10.1Tema 10.1BIOLOGIA MOLECULAR
Estudia las bases ultraestructurales o submicroscópicas subyacentes a los procesos biológicos
Estudio a la escala molecular de los ácidos nucleicos DNA y RNAEs un área dentro de los campos de diagnóstico, pronóstico y tratamiento médicoMaterial de partida:
RNA, DNA de doble cadena y de cadena simple Técnicas:
Southern blotPCRPCR en tiempo realMicroarrays
Marcador molecular en un 40%-70% de las enfermedades hematológicasUtilidad:
Diagnóstico y Pronóstico Enfermedad mínima residual (EMR)/ monitorización del tratamientoFarmacogenética
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Tema 10.1Tema 10.1FISH
Técnica FISH (Hibridación in situ con fluorescencia) supuso unsalto cualitativo en la caracterización de las distintas anomalías cromosómicas
Basada en la propiedad del ADN de cadena simple de hibridar específicamente con secuencias complementarias
Permite el empleo de sondas específicas para un cromosoma o un gen dado, aumentando la sensibilidad, eficacia y fiabilidad del análisis citogenético
Sirve de nexo de unión entre la genética molecular y los métodos citogenéticos clásicos
En los últimos años se han desarrollado otras: cariotipo multicolor, hibridación genómica comparada..., con la intención de resolver las carencias de las sondas convencionales y aportaruna mayor información
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Tema 10.1Tema 10.1MICROARRAYS
Son dispositivos de pequeño tamaño (miniatura) que contienen material biológico genético . Sobre un soporte no poroso (vidrio o silicio) se crean micromatrices de sondas genéticas inmovilizadas, posteriormente son hibridadas con ácidos nucleicos libres y finalmente se realiza la lectura mediante scanner de alta precisión (microscopia confocal)
. Se estudian genes que se expresan de forma constante para asegurarse que las muestras son comparables. Se valora la intensidad, presencia o ausencia, incremento o descenso y cuantificación de la variación de señal respecto al control.
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Tema 10.1Tema 10.1
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 10.1Tema 10.1