seminario botrytis cinerea

Botrytis cinerea

Ing. Agr.: Vázquez Chacón José Yvanosky

Prof.: MsC Ing. Agr. Marlyn EscalanteMateria: Protección de Cultivos I

UNET 2014-A

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DEL TÁCHIRAVICERRECTORADO ACADÉMICO DECANATO DE POSTGRADO MAESTRÍA EN AGRONOMÍA PRODUCCIÓN VEGETAL

Nombre Actual: (1)

Botrytis cinerea Pers., Ann. Bot. (Usteri) 1: 32 (1794)

Posición en la clasificación:Sclerotiniaceae, Helotiales, Leotiomycetidae, Leotiomycetes, Ascomycota, Fungi

Nombre Valido: (2)

Botrytis cinerea Pers. 1794

Fungi

Filo: AscomycotaClase: LeotiomycetesOrden: HelotialesFamilia: SclerotiniaceaeGénero: Botrytis

(1): www.indexfungorum.org / (2): http://www.catalogueoflife.org/

CLASIFICACIÓN

Primer reporte en Venezuela de Botrytis cinerea causando quema foliar en Lisianto (Eustoma

grandiflorum)Domínguez, I.; Cedeño, L.; Briceño, A.; Pino, H.; Quintero, K.; Rodríguez, L. Revista Forestal

Venezolana (Venezuela). 2008. v. 52(2) p.173-176.

• El Lisianto (Eustoma grandiflorum) especies ornamentales de gran potencial comercial en Venezuela, especialmente en los Andes.

• Presencia de enfermedad que puede convertirse en importante limitante para la explotación exitosa de ésta planta ornamental.

• Junio 2006, cultivo en invernadero en el sector El Morro y La Pedregosa del Estado Mérida, presento manchas y quema foliar, pudrición en botones florales, flores, tallos y cuello en un 90% del cultivo a 2 meses dds.

• Condiciones de alta humedad y baja temperatura.

• Objetivo: Identificar el agente causal de la enfermedad y evaluar la patogenicidad del microorganismo en plantas sanas de Lisianto.

Dominguez, Ilka et al. Primer reporte en Venezuela de Botrytis cinerea causando quema foliar en Lisianto (Eustoma grandiflorum). Rev. Forest.Venez [online]. 2008, vol.52, n.2, pp. 173-176. ISSN 0556-6606.

INTRODUCCIÓN

MATERIALES Y MÉTODOS1.- Aislamiento e identificación del patógeno

•Aislamiento a partir de plantas sintomáticas de Lisianthus.

•Se aislaron cortes de las lesiones y se sembraron asépticamente en placas de agua agar 2% (Incubación por 15 días a 22ºC)

•Para la identificación se sembraron colonias en placas de PDA y APCA para promover la formación de estructuras reproductivas y producir el inoculo para las pruebas de patogenicidad.

•La identidad del patógeno se determinó comparando las características morfométricas de las estructuras reproductivas con las reportadas en la literatura especializada.

2.- Pruebas de Patogenicidad

•El inoculo se produjo en placas de APCA y fue aplicado con una asperjadora manual.

•Selección de 18 plantas de lisianto de 90 días de edad., inoculando 12 plantas y 6 plantas testigo asperjadas sólo con ADE.

•Las plantas fueron cubiertas con bolsas plásticas transparentes e incubadas en condiciones de laboratorio por 15d a 22ºC.

•Posteriormente las plantas fueron transferidas al invernadero con temperatura promedio de 30 ºC.

•Las bolsas se retiraron a los 7d después de la inoculación (ddi) y a partir de esa fecha las plantas se examinaron diariamente para registrar la evolución de la enfermedad.


RESULTADOS Y DISCUSIÓN

1.- Aislamiento del Patógeno

•Los aislamientos sub-cultivados en PDA y APCA desarrollaron colonias fúngicas idénticas, que a los 16d tenían abundante micelio de aspecto uniforme, denso y de color blanco grisáceo, producción de conidios ovoides, elipsoidales y hialinos en conidióforos erectos, septados, dispuestos en grupos, con escasa o ninguna ramificación.

•Sobre la base de la morfometría de conidios y conidioforos, el hongo se identificó como B. cinerea anamorfo de Botryotinia fuckeliana, causante de la enfermedad “Moho Gris” en una amplia diversidad de plantas ornamentales y hortalizas.

2.- Prueba de Patogenicidad

•A los 7ddi, el 30% de las plantas infectadas artificialmente, mostraban síntomas de la enfermedad, presentando una necrosis foliar de aspecto húmedo en hojas y flores y momificación en botones florales y a los 35ddi, el 100% de las plantas infectadas tenían síntomas similares a los apreciados en hojas, tallos, cuello, flores y botones florales de las plantas infectadas naturalmente.

•Al principio los tejidos infectados presentaban apariencia acuosa y consistencia blanda, pero conforme la infección avanzaba, las áreas afectadas adquirieron una coloración entre bronce y café oscuro y consistencia esponjosa. Se desarrollaron masas de micelio de color gris sobre los tejidos atacados.

•Las plantas testigos se mantuvieron sanas hasta el final de la prueba.


CONCLUSIONES• B. cinerea se reporta como el causante de la quema foliar que en el

año 2006 destruyó lisiantos cultivados bajo invernadero en las localidades de Plan del Morro y La Pedregosa del estado Mérida.

• El hongo B. cinerea es un fitopatógeno ampliamente reconocido y estudiado que infecta una amplia variedad de plantas y que tiene la habilidad de hacer uso de diferentes mecanismos de infección. Puede atacar durante todos los estados de desarrollo del cultivo hospedante e infectar cualquiera de sus partes.

• A causa de la considerable incidencia del patógeno y las repercusiones económicas que tiene en cultivos de destacada importancia económica, resulta imprescindible la ejecución de estudios sobre la biología de B. cinerea, interacciones en las que participa y los posibles métodos de control.


Evaluación rápida de extractos vegetales y aceites esenciales de actividad antifúngica contra Botrytis

cinereaWilson, C. L., Solar, J. M., El Ghaouth, A., and Wisniewski, M. E. Plant Disease (Impact Factor: 2.74).

02/1997; 81(2):204-210.

INTRODUCCIÓN• Ensayos han determinado la presencia de

residuos de pesticidas en alimentos. Así mismo, los fungicidas reportan mayor riesgo carcinógeno que los insecticidas y herbicidas juntos.

• Resistencia de los patógenos a los fungicidas ha demostrado su ineficiencia, creando la necesidad de nuevos modos alternativos de acción.

• Se requieren fungicidas naturales y sintéticos seguros para los seres humanos y el medio ambiente

• Los extractos de plantas y aceites esenciales muestran actividad antifúngica contra una amplia gama de hongos.

• Método de placas de microtitulación han demostrado ser útiles para detección rápida de compuestos bioactivos.

• Objetivo: Evaluar un ensayo de placa de microtitulación con 345 extractos de plantas y 49 aceites esenciales como alternativas a los fungicidas sintéticos para el control de Botrytis cinerea.

Wilson, C. L., Solar, J. M., El Ghaouth, A., and Wisniewski, M. E. 1997. Rapid evaluation of plant extracts and essential oils for antifungal activity against Botrytis cinerea. Plant Dis. 81:204-210.

MATERIALES Y MÉTODOS1.- Método de Extracción de la Planta: •Recolección de material vegetal fresco y refrigeración (mínimo de 12 horas a -20 ° C). Posterior descongelación 20 min. •La congelación y descongelación fractura las células vegetales y los fluidos celulares de las plantas se recogen en la bolsa fuera del tejido. •Extracción y filtración (filtro 0,22 m) de líquido. •Preparación de la muestra (10%) 50 ml del extracto estéril + 450 ml de una suspensión de esporas B. cinerea (1x105 conidios por ml) en caldo de extracto de malta estéril.2.- Preparación de las placas de multi-well•50 ml de la mezcla de extracto de la planta y la suspensión de esporas se pipetearon en cada recipiente multi-well en las filas de microtitulación de placas múltiples de 96 orificios. •Se deja una fila en blanco (control) •Cada bandeja se sella con cera dental para prevenir contaminación cruzada.•Lecturas de densidad óptica por absorbancia de las placas con el lector SLT Labinstrument. Los datos se almacenan en el software desarrollado. •Incubación por 24h (24 ºC) se mide la densidad del crecimiento fúngico. •Instrumento conectado a sistema informático para determinar la densidad óptica por absorbancia (filtro de 492-mm), permite analizar las diferencias de lecturas.


MATERIALES Y MÉTODOS


MATERIALES Y MÉTODOS3.- Funcionamiento del lector de las placas de microtitulación multi-well:•Software desarrollado en Basic para analizar las lecturas. •Al ejecutar el programa se comprueba material instalado en el lector y muestra la información en la terminal de computadora. •El programa solicita al usuario para nombres de archivo e indica cuándo las placas deben ser cambiadas. •El software resta la diferencia de densidad óptica entre las placas. •Ambos métodos analizan 10 tratamientos con ocho réplicas y el promedio de los datos para cada tratamiento. •Una vez escaneada, los datos se colocan en una archivo de datos•Lecturas de densidad fueron hechas después de 24 h, y observaciones directas de germinación de las esporas se hicieron con un microscopio (40x) de luz invertida después de 12 y 48 h.•Se realizaron comparaciones de densidad óptica y crecimiento de esporas en la muestra a las 12 y 48 h.



4.- Evaluación de los aceites esenciales de plantas:•Sobre discos de papel de filtro (8 mm) se pipetearon los aceites esenciales, los cuales fueron colocados dentro de los multi-well, sellados con cera dental. •Inoculación de los multi-well con esporas de B. cinerea.•Las esporas fueron germinadas a 24°C y se observaron después de 24 y 40 h.•Los resultados fueron registran como la germinación de esporas (+) o no germinación de las esporas (-).

5.- Análisis de Componentes de Aceites Esenciales: •Los componentes químicos de los aceites esenciales se determinaron con un Cromatógrafo de Gas HP Series II.


RESULTADOS

Extractos de plantas. •Los extractos de plantas que muestran la mayor actividad antifúngica son los de especies de Allium y Capsicum.

Aceites esenciales. •Palmarosa (Cymbopogon martini), tomillo rojo (Thymus zygis), clavos de olor (Eugenia Caryophyllata) y canela (Cinnamomum zeylanicum) reportaron aceites esenciales con mayor poder de inhibición de la germinación de esporas de B. cinérea, notable actividad antifúngica.

Componentes del aceite esencial. •Los componentes más frecuentes en los aceites esenciales que muestran alta actividad antifúngica fueron: D-limoneno, cineol; -mirceno; -pineno, -pineno; y alcanfor.


DISCUSIÓN• La mayoría de las plantas que muestran actividad antifúngica entre los 345

extractos de plantas probados eran especies de Allium o Capsicum. • Diversos aceites esenciales han sido evaluados reportando excelente

actividad fungitóxica, sin embargo, no se han desarrollado productos para tratamientos postcosecha, ya que la industria encuentra más fácil patentar y proteger compuestos sintéticos, que comercializar productos naturales.

• Diversos fungicidas derivados de plantas naturales proporcionan una amplia variedad de compuestos como alternativa a los fungicidas sintéticos, tanto como fumigantes y pesticidas como de contacto.


Supresión del Tizón de Botrytis en Begonia por Trichoderma hamatum 382 en una mezcla de turba

y compost modificado para macetasHorst, L. E., Locke, J., Krause, C. R., McMahon, R. W., Madden, L. V., and Hoitink, H. A. J.

2005. Suppression of Botrytis blight of begonia by Trichoderma hamatum 382 in peat and compost-amended potting mixes. Plant Dis. 89:1195-1200.

INTRODUCCIÓN • El tizón causado por Botrytis cinerea L. enfermedad de

importancia económica en cultivos de invernadero como las begonias, tanto de flor como de hoja.

• Enfermedad distribuida ampliamente en viveros en condiciones de alta humedad y poca luz.

• Botrytis cinerea ha desarrollado resistencia a varios fungicidas, dependiendo de practicas culturales y control de humedad.

• Se trabaja en Biocontrol con hongos de la rizosfera como Trichoderma spp., propiciando un efecto sistémico de control de patógenos, a través de la Inducción de Resistencia Sistémica (IRS).

• Aislamientos de Trichoderma hamatum T382, son habitantes naturales de corteza, humus, compost e ingredientes usados en macetas para ornamentales.

• Objetivo: (1) Inoculación de T382 en mezcla de turba y mezcla de compost para reducir severidad del tizón en begonia. (2) Determinar la eficacia del T832 en el control del tizón en las mezcla de turba y compost. (3) Determinar el efecto sistémico inducido por T382 en la naturaleza.

Horst, L. E., Locke, J., Krause, C. R., McMahon, R. W., Madden, L. V., and Hoitink, H. A. J. 2005. Suppression of Botrytis blight of begonia by Trichoderma hamatum 382 in peat and compost-amended potting mixes. Plant Dis. 89:1195-1200.


1.- Preparación de la mezcla para macetas:

•Mezcla de Turba: turba de fibra H2-3 con perlita hortícola gruesa relación 6:4, fertilización inicial con SFT y corrección de pH con dolomita y cal. •Mezcla de compost: mezcla de turba más estiércol compostado de vacuno, relación 6:3:1, más fertilizante y enmienda.

2.- Inoculación de Trichoderma hamatum T382: •Adición de polvo granular seco con preparación conidial de T382 a una tasa de 120 gr/m3.•Mezcla control sin inoculación. •Incubación a 25ºC por 7 días antes de la siembra. •Identificación de los tratamientos, muestreo a los 10 días de la incubación a 24ºC para identificar las colonias de T382, verificando a través de microscopia de luz.



3.- Bioensayo con tizón causado por Botrytis: •Estudio aleatorio con diseño en bloques al azar con dos factores: mezclas de sustrato y tratamientos. •Estacas enraizadas de Begonia hiemalis cv Bárbara, plantadas en macetas de 1500 cc, incubadas en invernadero a 17-25 ºC y 40-60% HR.•Ferti-irrigación semanal.•Tratamiento incluye una fumigación semanal con Clorotalonil. •A las 3 semanas del trasplante las plántulas se inocularon con conidias de Botrytis cinérea, a partir de inoculo aislado en laboratorio. •Determinación de severidad del patógeno a los 7 días, y evaluaciones cada 3 días por 56 dds. •Se evaluó presencia de síntomas en la planta en porcentaje. •Verificación del daño causado por Botrytis por medio de ensayos de siembra en DPA identificando el patógeno por microscopia.



4.- Valoración comercial de las plantas e incremento de peso: •Se evaluaron las plantas en base a numero de floración, tallos, numero de flores abiertas y porcentaje de la superficie de la planta con síntomas de tizón. •Determinación de peso seco de la parte aérea de la planta, incluyendo tallo, hojas y flores. 10 días a 70 ºC.

5.- Análisis de los datos: •Determinación del área bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) para cada tratamiento. •Análisis de varianza (ANOVA) •Un valor de p=0,05 se utilizó para todas las comparaciones.


RESULTADOS• En los tres experimentos, durante la primera semana después de la inoculación

con B. cinerea, se desarrollan los síntomas del tizón en el follaje begonias.• El análisis de ANOVA indica un efecto significativo de la interacción de la mezcla

y tratamientos por macetas (Control, fungicida, o T382).• En los tres experimentos, la gravedad del tizón por Botrytis en la mezcla de turba

fue mucho mayor que la observada en la mezcla de compost-modificada. • La enmienda de la mezcla de turba con compost disminuyó significativamente

(P=0,05) la severidad general del tizón, comparado con el tratamiento de control de mezcla de turba.

• La enmienda de compost también aumentó significativamente (P=0,05) el incremento de peso seco y la posibilidad de venta.


DISCUSIÓN• La inoculación del T382 en la mezcla de turba proporciona un control

del tizón, comparable con la aplicación en aerosol del fungicida a base del Clorotalonil.

• El control de Botrytis con T382 confirma informes anterior sobre control sistémico de esta enfermedad por Trichoderma.

• El efecto supresor de la mezcla de compost contra el tizón de Botrytis en comparación con la mezcla de turba es inusual porque el compost normalmente no inducen resistencia sistémica en plantas sin inoculación con un agente de control biológico capaz de inducir este efecto.

• Los factores que contribuyen a potenciar la colonización natural de compost después de la inoculación incluyen temperaturas de proceso durante el compostaje y curado, los factores ambientales, y los materiales de reciclaje usados en el compost.

• En conclusión, las oportunidades para la colonización natural de compost por parte de agentes de control biológico-ISR activa y en condiciones comerciales son limitadas. Por lo tanto, con el fin disponer de compost a escala comercial hoy en día para inducir resistencia sistémica en plantas en macetas, se tendría que inocular con agentes de biocontrol tal como T382.


Gracias por su atención…

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