ESTUDIANTES

 Argueta Flores, Sara ElizabethAguila Gòmez, Ana BeatrizAguilar Saravia, Irving VladimirAlbayeros Alvarez, Jorge AlejandroAlbayeros Romero, Wendy MayariAlfaro Arias, Samuel AntonioAlvarado Contreras, Nuria TatianaAlvarado Quiñonez, BillyAlvarado Rivas, Fátima GabrielaAlvarenga Fuentes, Silvia KatherineAlvarez Aguilar, Abdiel JahaziasAlvarez Aguilar, Susana NohemyAlvarez Perez, Angel DavidAmaya Garcia, Ricardo FranciscoAmaya Parada, Monica RocíoAparicio Castillo, Angélica MaríaAparicio Morales, Jaren LudinArgueta Argueta, Esmilson NoéArgueta Martínez, Laura AlejandraArgueta Martinez, Juan CarlosArias Sorto, Fharid MiguelArriaga Martínez, Laura EsperanzaArtola Campos,Glenda MarisolAscencio Chica, Karen AndreaAscencio Rodriguez, Reina IsabelAviles Quintanilla, Jesus AlbertoBado Villalobos, Norember JoséBarahona Flores, Ana MaríaBautista Fuentes, Luis EnriqueBenitez Moreira, Miguel GustavoBenitez Rosa, Daniela ElizabethBenítez Torres, Gabriel AlejandroBermúdez Zelaya, Gerson OmarBerrios Reyes, Ranulfo AlejandroBlanco Díaz, Diana CarolinaBlanco Flores, Jennifer Yajaira

Bonilla Cabrera, Yonatan AlexanderBonilla Maldonado, Gabriel OsmariBustillo Treminio, Juan JoseCáceres Mancia, Ivonne RoxanaCampos Hernandez, Jennifer ArmidaCarias Paniagua, Herber EduardoCastillo Gonzalez, Cesar DavidCastro Hernández, Gerber AlexanderCatzim Cantun, Ilai NestorCerrato Martinez, Eva MariaChavarria Sánchez, Clara NoemíChávez Araújo, Minerva KarinaChavez Castillo, David AntonioChávez Palacios, Oscar ArmandoChávez Segovia, Abner IsaíChicas Chavez, Josefa MarbellyCiciliano Turcios, Salvador EduardoCórdova Rodríguez, Diego AlejandroCruz Viera, Blanca FlorDe la O Bolaines, Jacobo AdilioDe Leon Contreras, Josselin IlianaDiaz Escobar, Fernando AlexanderDíaz Orellana, Héctor AntonioEscobar Sagastizado, Eliseo Ezequiel

INTRODUCCIÓN

La sangre es un tejido conectivo líquido, cuyas funciones son vitales en el mantenimiento de la homeostasis. Debido a ello todos los seres dotados de un Sistema Vascular deben ser capaces de reducir a un mínimo la pérdida de sangre posterior a una lesión vascular.

En   el   experimento   realizado   estudiamos   los   diversos  mecanismos   que   previenen   la pérdida de sangre, los cuales se conocen con el término Hemostasia.

Estudiaremos   además   algunos   de   los   procedimientos   por   los   cuales   se   puede   lograr impedir, acelerar o retardar la coagulación de la sangre.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1. Interpretar que mecanismos hemostáticos detienen el sangrado en la prueba de tiempo de sangramiento.

2. Explicar la importancia de la superficie de contacto por la activación del XII factor de coagulación.

3. Identificar   qué   factores   intervienen   en   las   vías   intrínsecas   y   extrínsecas   de   la coagulación.

4. Interpretar la importancia de los iones Ca++ en la coagulación de la sangre.

5. Explicar la acción del oxalato de amonio y potasio y de la heparina en la sangre.

6. Explicar la retracción del coagulo en la sangre.

7. Explicar los efectos de la desfibrinación de la sangre.

MATERIAL DEL LABORATORIO:

Papel filtro

Tubos de ensayo

Algodón y alcohol

Curitas redondas

Lancetas

Jeringa descartable de 10cc

Guantes descartables

Gradilla para tubos de ensayo

Varilla de vidrio

Lupa

REACTIVOS:

Cloruro de calcio

Tromboplastina tisular

EDTA (En sustitución del oxalato de amonio y potasio)

Heparina

EQUIPO:

Baño de María (No utilizado en la práctica)

Procedimiento.

PARTE I

1. A dos miembros del grupo se les realizara la prueba de: tiempo de sangramiento.

Se frota y se limpia con algodón y alcohol la yema del dedo anular.

Se punciona con la lanceta, dejando que la sangre fluya sin hacer presión.

Tocar con papel filtro, cada 30 segundos, las gotas de sangre que vayan saliendo, procurando no presionar la herida.

Anotar el tiempo transcurrido hasta que deje de salir la sangre.

SUJETO 1 3 gotas ,dejo de sangrar a minuto 1.30

SUJETO 2 2 gotas, 1 minuto

¿Qué mecanismos hemostáticos han detenido el sangrado de esta pequeña herida?

El espasmo vascular

De manera  inmediata  a   la  producción de  la   rotura del  vaso,  se  produce una potente contracción de las fibras musculares del mismo. El resultado es una vasoconstricción que disminuye   el   calibre   del   vaso,   e   incluso   si   es   pequeño   puede   llegar   a   cerrarse, disminuyendo la pérdida de sangre.

La contracción es el resultado de:

1) Un espasmo miógeno local.2) Factores   autacoides   locales   procedentes  de   los   tejidos   traumatizados   y  de   las 

plaquetas sanguíneas.3) Reflejos nerviosos, los cuales inician a partir de impulsos nerviosos de dolor u otros 

impulsos sensoriales que se originan en los vasos con traumatismos o en tejidos cercanos.

Cuanto más gravemente  se  ha  traumatizado un  vaso,  mayor es  el  grado de espasmo vascular. El espasmo puede durar muchos minutos o incluso horas.

Formación del tapón plaquetario

Este mecanismo es extremadamente importante para cerrar las roturas diminutas en los vasos sanguíneos muy pequeños que ocurren centenares de veces diariamente. En el lugar de cualquier 

desgarro del vaso, la pared vascular dañada activa sucesivamente un mayor número de plaquetas que atraen hacia ellas cada vez más plaquetas adicionales, formando así un tapón plaquetario.

Cuando un vaso  sanguíneo  se   lesiona,   las  plaquetas   se  adhieren al  área  dañada y   se distribuyen a lo largo de la superficie para detener la hemorragia (este proceso se conoce como adhesión). Al mismo tiempo, pequeños sacos ubicados al interior de las plaquetas y llamados  gránulos   liberan señales  químicas   (este proceso  es   llamado secreción).  Estas sustancias   químicas   atraen   a   otras   plaquetas   al   sitio   de   la   lesión   y   provocan   su aglutinamiento para formar lo que se conoce como tapón plaquetario (a este proceso se le llama agregación).

Algunas veces el tapón plaquetario es suficiente para detener la hemorragia. Sin embargo, si la herida fuera grande, otras proteínas llamadas factores de coagulación se reclutan en el sitio de la lesión. Estos factores de coagulación trabajan en conjunto sobre la superficie de las plaquetas para formar y solidificar el coágulo de sangre.

¿Se han completado en estos tiempos todos los mecanismos hemostáticos?

NO, debido a que la herida era pequeña, con la formación del tampón plaquetario fue lo suficiente para detener la pérdida de sangre. Mientras que si   la  lesión hubiera sido lo suficientemente grande se tendría que haberse activado el proceso de coagulación. 

.

CUADRO DE RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Tubo 1: Sangre con tromboplastina En   este   tubo   la   sangre   coaguló   de manera   casi   instantánea   debido   al factor   de   coagulación   III   o tromboplastina tisular  que contribuye a acelerar el proceso de coagulación.

Tubo 2: 10 x 75 mm En la sangre contenida en este tubo no había ninguna sustancia agregada por lo  que  el   tiempo  de   coagulación   fue aproximadamente de 5 minutos.

Tubo 3: 30 x 95 mm Como   en   este   tubo   no   se   agregó ninguna sustancia  y  había una mayor superficie   de   contacto   el   tiempo   de coagulación fue de unos 3 minutos.

Tubo 4: Sangre con oxalato (Sustituido por EDTA)

En este tubo no hubo una coagulación rápida pero debido a que el  EDTA es un reactivador del calcio la coagulación se dio al cabo de varios minutos.

Tubo 5: Sangre con heparina La heparina es un anticoagulante por lo   que   en   este   tubo   no   se   observó dicho fenómeno.

Tubo 6: Sangre desfibrinada Al   agitar   continuamente   la   sangre durante   un   periodo   de   tiempo   de   6 minutos,   se   destruyeron   los   hilos   de fibrina que contribuyen al proceso de coagulación   por   lo   que   la   sangre después   de   este   proceso   ya   no coaguló.

Tubo 1: Retracción del coágulo Pocos minutos después de formarse el coágulo este empieza a contraer, y al cabo de  una hora  en  baño de  maría este exprime el líquido que hay en su interior,   el   cual   es   llamado  suero, debido   a   que   elimina   todo   el fibrinógeno y la mayor parte de otros factores de coagulación.

PARTE II

A otro miembro del grupo se le extraerán 8ml de sangre, debiendo anotar la hora en que la sangre empiece a penetrar en la jeringa para que a partir de ella se mida el tiempo Para las pruebas siguientes. 

Hora: 11:32am

Colocar inmediatamente 1ml de sangre en tubos identificados de la siguiente manera:

Tubo #1: de 10 x 75 mm con una gota de tromboplastina tisular.

Tubo #2: de 10 x 75 mm sin ninguna sustancia agregada

Tubo #3: de 30 x 95 mm sin ninguna sustancia agregada 

Tubo #4: de 10 x 75 mm con oxalato de amonio y potasio

Tubo #5: de 10 x 75 mm con una gota de heparina 

Los restantes 3ml de sangre en el tubo # 6 de 13 x 60 mm 

Inmediatamente proceda de la siguiente forma con cada uno de los tubos:

El tubo #1

Deberá inclinarlo levemente cada 30 segundos y anote el tiempo que transcurra desde que la sangre penetro la jeringa  hasta que observe coagulación. Anote este tiempo en el cuadro de resultados que aparece al final y observe las características morfológicas del coagulo

Enseguida coloque la sangre en baño de María a 37 °C durante una hora, para que al cabo de ella pueda observar la retracción del coagulo notando las diferencias en su morfología.

Los tubos # 2, 3, 4,5

Deberán   mantenerlos   en   reposo   durante   3   minutos,   dándoles   con   su   mano   una temperatura   de   aproximadamente   37   °C.   Luego   inclinarlos   cada   30   segundos   en   un máximo de 10 minutos y anotar el tiempo cuando en alguno de ellos observe coagulación.

Recuerde   que   el   tiempo   cuenta   desde   que   la   sangre   penetro   a   la   jeringa.Deberá discutir las diferencias obtenidas en los resultados.

El tubo #6

Usando una varilla de vidrio agitar suavemente la sangre con movimientos de rotación durante seis minutos, al final de los cuales trate de observar cuidadosamente la presencia de los hilos de fibrina depositados en  la varilla (Ayúdese con buena iluminación y una lupa)

Deje la sangre en reposo hasta completar 15 minutos y anote si observa coagulación o no.

No se observa 

Explique este fenómeno en base a la desfibrinación de la sangre

Es   un   fenómeno   en   el   cual   desaparece   la   fibrina   de   la   sangre,   lo   que     la   vuelve incoagulable.  Es  por ello que en el   tubo #6   no se observa    la  formación del  coagulo sanguíneo.

Después de transcurridos 15 minutos desde que  la sangre penetro a  la  jeringa,  en  los tubos 4 y 5 agregar 2 gotas de cloruro de calcio 0.5 M. Incline los tubos suavemente para mezclar, déjelos en reposo durante 30 minutos y luego inclínelos cada minuto y anote el tiempo en que observe la coagulación en alguno de ellos. Discuta los resultados en base a la acción del calcio en la coagulación de la sangre. 

APUNTES:

Tubo nº4: sangre con oxalato

Después de agregar el cloruro de calcio a los 6 min aprox. Se observó   la formación de micro coágulos.

Tubo nº5: con heparina

Aun después de haber añadido el cloruro de calcio al tubo no se observó coagulación, ya que la heparina es un anticoagulante de la sangre y ayuda a mantenerla liquida.

DISCUSIÓN

1. PRUEBA DEL TIEMPO DE SANGRAMIENTO.

Análisis de resultados experimentales.

Para la realización de esta prueba se necesitó de la ayuda de dos sujetos, a los cuales se les pinchó   el dedo anular con una lanceta, con el objetivo de poder comprobar el tiempo de   sangramiento.   Al   pinchárseles   el   dedo,   comenzaron   a   experimentar   una   serie   de reflejos, debido a que el traumatismo de la pared, hace que el musculo liso de esta se contraiga, como consecuencia de el corte de un vaso sanguíneo. El tiempo de sangrado oscilo entre los 2 y 3 minutos.

Mecanismos hemostáticos que investiga la prueba.

Espasmo vascular.

Inmediatamente después de que haya cortado o roto un vaso sanguíneo, el estímulo del traumatismo de la pared hace que el musculo liso de la pared se contraiga: esto reduce instantáneamente el flujo de sangre del vaso roto. 

La contracción es el resultado de:

4) Un espasmo miógeno local.5) Factores   autacoides   locales   procedentes  de   los   tejidos   traumatizados   y  de   las 

plaquetas sanguíneas.6) Reflejos nerviosos, los cuales inician a partir de impulsos nerviosos de dolor u otros 

impulsos sensoriales que se originan en los vasos con traumatismos o en tejidos cercanos.

Cuanto más gravemente  se  ha  traumatizado un  vaso,  mayor es  el  grado de espasmo vascular. El espasmo puede durar muchos minutos o incluso horas.

Formación de tapón plaquetario.

Este mecanismo es extremadamente importante para cerrar las roturas diminutas en los vasos  sanguíneos  muy pequeños  que ocurren centenares  de veces  diariamente.  En el lugar de cualquier desgarro del vaso, la pared vascular dañada activa sucesivamente un mayor número de plaquetas que atraen hacia ellas cada vez más plaquetas adicionales, formando así un tapón plaquetario.

2. CONDICIONES QUE MODIFICAN LA COAGULACIÓN SANGUÍNEA

Tromboplastina tisular:

La  Tromboplastina  es una proteína que se forma en el  plasma  por la combinación del factor tisular con los fosfolípidos de las membranas de las plaquetas y que participa en la coagulación de la sangre por medio de la conversión de protrombina en trombina.

Superficie de contacto:

Las   superficies   de   contacto   (plaquetas,   células   endoteliales,   fibroblastos,   monocitos) juegan   un   papel   esencial   en   la   coagulación   sanguínea. Las células desempeñan dos papeles básicos en la hemostasia. El primero es proporcionar los factores esenciales para la hemostasia normal que no están presentes en el plasma normal,   y  el   segundo  es  proveer  una   superficie  para  el  ensamblaje  de   los   complejos enzima/cofactor y su interacción con los sustratos para formar el coágulo de fibrina.

Oxalato de Amonio y Potasio:

Los oxalatos de amonio y de potasio se utilizan bajo forma de la mezcla de 3 partes del primero y dos partes del segundo (mezcla de Heller) y Paul de Wintrobe. La sal de amonio aumenta el volumen de los glóbulos rojos y la de potasio lo disminuye. Con la proporción utilizadas, los eritrocitos no se alteran, actúan por fijación de calcio.

Heparina:

Es anticoagulante excelente y natural. Es el mejor anticoagulante (seco) cuando se busca reducir al mínimo la hemolisis (por ejemplo, para mediciones de electrolitos y estudios de la fragilidad de glóbulos rojos). Produce una coloración azul difusa.

La heparina es un carbohidrato ácido complejo; puede obtenerse bajo forma de sus sales de sodio, calcio o amonio. Se utiliza para las gasometrías (análisis de gases en sangre).

No altera el tamaño de los eritrocitos (hematocrito).

Actúa formando un complejo con la antitrombina III del plasma; que inhibe la actividad de la trombina (trombosis) sobre el fibrinógeno u otras etapas de la activación de los factores de la coagulación. 

No  es   satisfactoria  para   recuentos   leucocitarios  o  plaquetarios  debido  a  que produce agregación celular.

Cloruro de Calcio:

Los   iones   de   calcio   son   necesarios   para   desarrollar   actividad   tromboplastínica,   en concentraciones entre 5 y 20 mg por 100 ml. El tiempo de coagulación sólo se alarga de manera manifiesta cuando la concentración cálcica es menor de 2,5 mg por 100 ml; tales valores   nunca   se   observan   en   clínica.  La liberación de factores de crecimiento del coagulo es desencadenada por la activación de las plaquetas, esta puede ser iniciada por una gran variedad de sustancias o estímulos como la trombina, el cloruro de calcio, el colágeno, etc.

Agitación de la sangre (desfibrinación):

Desaparición de la fibrina de la sangre, que se vuelve incoagulable. Puede ser provocada in vitro   por   batido.   Puede   sobrevenir   en   el   curso   de   ciertas   enfermedades,   bien   por destrucción  (fibrinólisis  o  proteólisis),   o   bien   por   consumo   excesivo   (síndrome   de coagulación intravascular diseminada, del cual el síndrome de desfibrinación es, a veces, sinónimo).

3. USANDO UN ESQUEMA DEL PROCESO DE COAGULACIÓN, SEÑALE EN ÉN LO ANALIZADO EN LOS RESULTADOS EXPERIMENTALES.

En la prueba número uno del tiempo de sangramiento  se observa los pasos 1 y 2 del esquema, luego  los vasos se sellan debido a que los iones calcio activan a las plaquetas para que se adhieran a la lesión vascular formando una red de fibrina llamado coagulo.

4. RETRACCIÓN DEL COAGULO

Como se da dicho proceso

Cuando la cascada de coagulación se completa se forma el coagulo,  la fibrina de este, actúa sobre el factor XII.

La   capacidad  del   coagulo  para   contraerse  depende  de   la   acción  de   la   trombina  y   la existencia de un número adecuado de plaquetas.

La retracción ocurre por la interacción entre los pseudópos de las plaquetas y las hebras de fibrina. Esto ocurre dentro de los 60 minutos y el coágulo ocupa el 50% del volumen total de sangre. La retracción del coágulo resulta en una masa estabilizada de plaquetas y de  fibrina  que  cierra  firmemente  el   vaso   injuriado  para  prevenir   futuras  pérdidas  de sangre.La   retracción   comienza   a   la   hora   con   un   máximo   a   las   24   horas.La retracción del coágulo depende de la función plaquetaria, de una proteína contráctil proveniente de la membrana plaquetaria (trombostenina), del magnesio, ATP y piruvato quinasa.La concentración y la habilidad funcional del fibrinógeno y el nivel del hematocrito deben estar dentro de los  límites normales para arribar  a una conclusión válida acerca de  la función   plaquetaria.La   trombocitopenia   y   la   trombastenia   se   caracterizan   por   un   coágulo   friable.La trombastenia de Glanzmann es una condición hemorrágica hereditaria donde el conteo de plaquetas es normal, pero el tiempo de sangría se encuentra prolongado, existe una marcada disminución de la retracción del coágulo, y agregación y adhesión de plaquetas anormales. La retracción del coágulo defectuosa puede reflejar una falla en la activación de la actina en la membrana plaquetaria. En la trombastenia de Glanzmann existe una disminución de la cantidad de glicoproteína IIa-IIIb de la membrana plaquetaria.

Elementos necesarios para que se de

1. Plaquetas 2. Proteínas contráctiles: actina y miosina 3. Protombina 4. Iones calcio  

Importancia fisiológica del mismo

El   proceso   de   retracción   del   coágulo   conduce   a   la   consolidación   de   un   coágulo hemostático o trombo.

Cuando se retrae el coagulo, los bordes cortados  de los vasos sanguíneos se unen 

El coagulo disminuye su tamaño a más de la mitad. El fibrogeno sin suero se expulsa.