reporte de practica análisis microbiológico de agua residual
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DEPARTAMENTO DE QUIMÍCA Y BIOQUÍMICA
CARRERA
Ing. Química
MATERIA:
Tratamiento de Aguas Residuales
NOMBRE DE PROFESOR (A) :
I.Q. Suales Aguirre Ramón Roberto
INSTITUTO TECNOLOGICO DE TEPIC
PRACTICA No. 3
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS RESIDUALES
Covarrubias C. Miguel, Hernández N. Azucena, Izaguirre C. Ignacio,
Ramírez M. Kenya, Reyes A. Alam, Ruiz Romaín,
RESUMEN:
En ésta práctica se realizó un análisis de bacterias mesofílicas aerobias y de coliformes
en muestra de agua del río mololoa, obteniéndose altos resultados como era de
esperarse.
Mesofílicos aerobios. Se utilizó la técnica por vaciado en placa, comenzando por la
homogenización de la muestra por agitación, se realizó la siembra directa en diluciones
seriadas hasta 10-5, el método consistió en contar las colonias que se desarrollaron en el
agar estándar , después de 48 h de incubación a 35 ±2 °C, suponiendo que cada colonia
proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio, los resultados se reportaron
como UFC/ml de muestra ( Unidades Formadoras de Colonias).
Coliformes Totales y Fecales. Se utilizó la técnica de tubos de fermentación
múltiple (dilución en tubo) del número más probable (NMP), el cual proporciona una
estimación estadística de la densidad microbiana presente con base a que la probabilidad
de obtener tubos con crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de
muestra inoculado. El método se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la
lactosa incubadas a 35 ±1 °C (coliformes totales) ó 44.5 °C (coliformes fecales) durante
24 a 48 h, resultando en la producción de ácidos y gas, el cuál se manifiesta en las
campanas de fermentación.
I.- INTRODUCCION:
Debido a que las aguas residuales son
de composición variada provenientes de
descargas de usos municipales,
industriales, comerciales, de servicios,
agrícolas, pecuarios, domésticos,
incluyendo fraccionamientos y en general
de cualquier uso, así como la mezcla de
ellas, contienen diferentes tipos de
microorganismos contaminantes y las
diferentes concentraciones, dependiendo
de su fuente. La variada población de
microorganismos en esta agua, proviene
del suelo y de origen intestinal, incluyen
aerobios y anaerobios estrictos y
facultativos así como también
numerosos virus como: Poliovirus y virus
de la hepatitis. Igualmente pueden
contener formas parasitarias variables
como quistes de Protozoarios y
huevecillos de Helmintos (Metazoarios).
Los recuentos de Mesófilos Aeróbicos en
placa son útiles para determinar la
potabilidad de un agua, así como también
la eficiencia de las operaciones para
eliminar microorganismos, como la
sedimentación, filtración y cloración.
La determinación del conteo de bacterias
mesófilas aerobias en una muestra de
agua se realiza, normalmente, por
siembra en una placa, de un volumen
determinado de agua, por incubación a
una temperatura concreta y en un tiempo
determinado, y por recuento posterior de
las colonias desarrolladas y con la
aceptación implícita de que cada colonia
es originada por una bacteria de la
muestra inicial, por lo tanto, el número de
colonias equivaldrá al número de
bacterias en el volumen sembrado.
El método de la NPM es un método
robusto por lo que puede aplicarse en
cualquier tipo de agua, aún aquellos que
contienen gran cantidad de materia
orgánica. Para la determinación del NMP
de Coliformes Totales y Fecales en este
tipo de aguas, es necesario proceder a
preparar diluciones decimales de la
muestra, debido a que se espera que la
concentración de coliformes sea superior
en éstas que en un agua potable.
El número de diluciones varía mucho,
dependiendo del origen de la muestra a
tratar. Para realizar la estimación
microbiana se utiliza un mínimo de tres
diluciones y un intervalo de 3 a 10
réplicas (“n” tubos de medio para el
crecimiento) por disolución; el número de
disoluciones y réplicas utilizadas estará
en función de la precisión requerida.
Actualmente, existen tablas estándar
como las publicadas por FDA o NACE
para estimar el número de
microorganismos más probables.
Estas tablas están limitadas a tres
diluciones y a 3, 5 y 10 réplicas por
disolución; sin embargo, también existen
programas de computadoras( MPN
calculatorTM, “Chem SW”) para obtener la
estimación microbiana empleando más
de tres disoluciones y un número mayor
de réplicas.
En la sección II Desarrollo : Se describe
los pasos y métodos empleados durante
la elaboración de práctica de laboratorio.
En la sección III Resultados: Se
describen los resultados obtenidos así
como fotografías de estos.
En la sección IV Conclusiones: Se
describen las observaciones sobre los
resultados obtenidos.
En la sección V Bibliografía: Se citan los
libros o textos de los cuales se tomaron
referencias para la realización de
práctica.
II.- DESARROLLO:
Preparación de material y área de
trabajo:
1.- En cada tubo de ensayo se pone 9 ml
de agua destilada, dentro de un frasco
con tapa se agregan 90 ml para
esterilizar y realizar las diluciones
correspondientes.
2.-Se prepara el material para esterilizar,
envolviéndolo en papel destraza.
3.-Se procedió a preparar el caldo y
medio de cultivo, ya listos se colocan en
una olla para esterilizar.
4.-Esperar que la olla de esterilización
llegue a una presión de 15 lb que es igual
a 250ºC manteniéndolo durante 15 min.
5.- Transcurrido ese tiempo se procede a
apagar los mecheros dejando que la
válvula de presión deje escapar poco a
poco el vapor dentro de la olla.
6.- Se procede a limpiar el área de
trabajo para que no contamine nuestro
material .
7.- Se espera a que el material ya
esterilizado se enfríe .
Recuento de bacterias mesofílicas
aerobios:
1.-De la muestra directa inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
2.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
3.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
4.-Etiquetar
5.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
6.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas.
Preparación de diluciones:
(10-1)
1.-De la botella de dilución inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
2.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
3.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
4.-Etiquetar
5.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
6.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas
(10-2)
1.-De la botella de dilución se toman 1ml
y se agrega un tubo de ensayo se agita
hasta homogenización.
2.-Del tubo de ensayo inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
3.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
4.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
5.-Etiquetar
6.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
7.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas.
(10-3)
1.-Del tubo de ensayo de (10-2) se toman
1ml y se agrega un nuevo tubo de
ensayo se agita hasta homogenización.
2.-Del tubo de ensayo inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
3.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
4.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
5.-Etiquetar
6.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
7.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas.
(10-4)
1.-Del tubo de ensayo de (10-3) se toman
1ml y se agrega un nuevo tubo de
ensayo se agita hasta homogenización.
2.-Del tubo de ensayo inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
3.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
4.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
5.-Etiquetar
6.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
7.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas.
(10-5)
1.-Del tubo de ensayo de (10-4) se toman
1ml y se agrega un nuevo tubo de
ensayo se agita hasta homogenización.
2.-Del tubo de ensayo inocular por
duplicado 1ml de agua en las cajas Petri.
3.-Adicionar 20 ml de agar estándar
fundido y enfriado a 44ºC
4.-Incorporar el inoculo al medio y
homogeneizar.
5.-Etiquetar
6.-Dejar solidificar e incubar a 37ºC
durante 24 horas.
7.-Contar colonias desarrolladas y
reportar en cada caso la media de las 2
placas inoculadas.
Número más probable de Organismos
Coliformes (NMP):
A)Prueba Presuntiva:
1.-Inocular 5 tubos con 10 ml de muestra
y con 20ml de fermentación con Caldo
Lauril Sulfato de Sodio (CLSS) a 150%
concentración.
2.-Incubar a 37ºC durante 48 horas.
3.-Observar cuidadosamente en cada
uno de los tubos la presencia de gas en
cualquier cantidad dentro de la campana
de fermentación..
4.-El tubo positivo mostrará además
denso desarrollo bacteriano.
La Ausencia de gas en los tubos hace
negativo la prueba.
1.-Inocular con 1ml de muestra y 10 ml
de fermentación con Caldo Lauril Sulfato
de Sodio (CLSS) concentración simple.
2.-Incubar a 37ºC durante 48 horas.
3.-Observar cuidadosamente en cada
uno de los tubos la presencia de gas en
cualquier cantidad dentro de la campana
de fermentación..
4.-El tubo positivo mostrará además
denso desarrollo bacteriano.
La Ausencia de gas en los tubos hace
negativo la prueba.
1.-Inocular con 0.1ml de muestra y 10 ml
de fermentación con Caldo Lauril Sulfato
de Sodio (CLSS) concentración simple.
2.-Incubar a 37ºC durante 48 horas.
3.-Observar cuidadosamente en cada
uno de los tubos la presencia de gas en
cualquier cantidad dentro de la campana
de fermentación..
4.-El tubo positivo mostrará además
denso desarrollo bacteriano.
La Ausencia de gas en los tubos hace
negativo la prueba.
B) Prueba Confirmativa:
1.-Transferir a un tubo 10ml de caldo
verde brillante bilis 2%.
2.-Incubar a 37ºC durante 48 horas.
3.-La formación de gas en cualquier
cantidad dentro de la campana , hace
positiva la prueba.
4.-Determinar el NMP de organismos
coliformes en la muestra.
Interpretación:
Si se observa turbidez y producción de
gas: La prueba se considera POSITIVA,
debiendo anotar el número de tubos
positivos para posteriormente hacer el
cálculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa
producción de gas, aun cuando se
observe turbidez: Se consideran
NEGATIVOS, estableciéndose el Código
0,0,0 para efecto del cálculo del NMP
Si todos los tubos dan negativos ó todos
dan positivos, con base en los grados de
dilución analizados, considerar la
necesidad de repetir el análisis a partir de
grados de dilución menores (mayores
volúmenes de muestra) ó mayores
(menores volúmenes de muestra),
respectivamente.
III.- RESULTADOS:
Después de la incubación se procedió a
realizar el conteo de colonias:
Para el recuento de mosofílicos
Aerobios:
Muestra Colonias Recuento estándar en placa por ml
Directa 370 370
Directa 392 392
x 10-1 Extendidas
x 10-1 Extendidas
x 10-2 176 17,600
x 10-2 Extendida
x 10-3 121 121,000
x 10-3 No presencia
x 10-4 27 270,000
x 10-4 174 1,740,000
x 10-5 14 1,400,000
x 10-5 169 16,900,000
Coliformes:
20 ml de Caldo Lauril Sulfato de Sodio:
1 ml Caldo Lauril Sulfato de Sodio:
0.1 ml Caldo Lauril Sulfato de Sodio:
Caldo Verde Brillande Bilis al 2%
En duda ya que hubo una mala
interpretación en la lectura de la práctica
olvidando poner en el tubo la campana
Durham, por lo que no se pudo retener el
gas dentro de ella y en consecuencia no
se pudo apreciar la aparición o ausencia
de coliformes.
De acuerdo a los tubos positivos en las
pruebas confirmativas para Coliformes
Totales y Fecales, se establecieron los
códigos correspondientes para calcular
por referencia en las tablas estadísticas
(Tablas) el NMP de Coliformes Totales y
Fecales en 100 mL de agua.
5 tubos positivos 10 ml
1 tubo positivo 1 ml
0 tubo positivo 0.1 ml
N.M.P. de Coliformes 31.0
IV.- CONCLUSIONES:
Se realizaron análisis microbiológicos a
nuestra muestra de agua del Río
Mololoa, dichos análisis fueron
mesofílicos aerobios y coliformes totales
En el crecimiento de colonias se debe a
bacterias existentes en la caja Petri, así
como el gas dentro de los tubos de
ensayo.
Se detectó un alto crecimiento
bacteriano de nuestra muestra debido a
que esta agua contiene distintas
composiciones de materia orgánica e
inorgánica habilitando así que bacterias
se reproduzcan.
A pesar de que los microorganismos no
pueden ser vistos a ojo humano se
pueden distinguir por las características
que presentan en los cultivos creados y
así tener una idea más clara de que o
cuales microorganismos pudieran ser
detectados en nuestras muestras.
V.- BIBLIOGRAFIA:
Secretaria de Comercio y Fomento
industrial. 1987. NNX-AA-42-1987.
Calidad del agua determinación del
número más probable (NMP) de
coliformes totales, coliformes fecales
(termotolerantes) y Escherichia Coli
presuntiva.
NOM-092-SSA1-1994. Método para la
cuenta de organismos mesofílicos
aerobios. Diario Oficial de la Federación.
Gobierno constitucional de los Estados
Unidos Mexicanos. México D.F.
Toro Daniel Ricardo. Manual para la introducción al laboratorio de microbiología 1a Edición.