p73基因在急性白血病的表达及临床意义

学生：李茜汝

导师：苏丽萍 教授

山西省肿瘤医院血液科 2010.4

11 研究背景

研究目的研究目的222

3

实验结果及讨论444

结 论5

研究方法

研究背景白血病（ leukemia）是一类造血干细胞的

恶性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因尚不明了，但肿瘤的发生均与肿瘤相关基因的异常表达密切相关，异常表达的肿瘤相关基因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常蛋白的生长作用方式及细胞生长、分化紊乱，而导致肿瘤发生。如何提高白血病诊断及治疗水平，提高患者生存质量，一直是医生十分关注的问题。

研究背景

抑癌基因p53

代谢过程

细胞增殖

DNA转录

细胞生长

一些肿瘤中，则有其它的因素改变阻

断 p53的功能以促进肿瘤的发生——p73基因

P53抑癌机制

研究背景 p73基因是 1997年 Kaghad等在筛选介导胰岛素信号传

递因子 (IRS21)时偶然发现的，定位于人类 1 号染色体1p36.33。测序发现其序列与 p53基因有高度同源性。

1p36是多种人类肿瘤基因缺失热点区域，且认为该区存在多个抑癌基因。由于其特殊定位及其与 p53基因结构和功能的高度同源性， p73基因被认为可能是抑癌基因。

但有学者提出 p73基因在肝癌、结肠癌、膀胱癌组织中表达明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相关。而且p73基因在不同肿瘤中表达水平差异很大，显示了抑癌基

因和癌基因的双重特性双重特性。

研究背景 -p73的作用机制

p73基因由于高甲基化而表达缺失。可能是高甲基化改变了基因构型，影响 DNA特异序列与转录因子结合，使基因不能转录。

低水平或失表达

过度表达癌基因

作用抑癌基因作用

cancercancer

c2Abl 酪氨酸激酶可使 P73 蛋白的半衰期延长或蛋白磷酸化导致 P73 蛋白过表达。发挥对细胞生长的抑制和凋亡作用。

p73基因的缺失： p73基因存在杂合性缺失（ LOH）。

研究背景 - 相关肿瘤研究

软组织肉瘤

血液系统恶性肿瘤

乳腺癌

宫颈癌膀胱癌

肺癌

前列腺癌

在恶性肿瘤中， p73基因在不同类型细胞的肿瘤中有不同的生物学行为，

在恶性肿瘤中， p73基因在不同类型细胞的肿瘤中有不同的生物学行为，

研究目的

检测成人急性白血病（ AL）患者 p73基因 mRNA的表达情况 , 从而探讨 p73基因与白血病发病、复发及预后的关系，为成人 AL的临床治疗提供更有意义的指导作用。

研究方法及实验技术

选取 2008年 6 月 -2009年 3 月期间在山西医科大学第二医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难治急性白血病患者 100例，经临床及骨髓涂片细胞形态学、细胞化学检查，按张之南主编《血液病诊断及疗效标准》确诊。

包括初发未治 64例，复发或难治 36例，按 FAB分型，急性髓细胞白血病 (AML)80例 (M2 ,12例；M3 ,35例； M4 ,18例； M5 ,9例； M6 ,6例 )，急性淋巴细胞白血病 (ALL)20例。其中男 60例，女 40例，中位年龄 40岁 (9～ 65岁 ) 。对照组为20例非白血病 (NL)且骨髓象正常者。

研究方法及实验技术AML疗效标准

研究方法及实验技术

琼脂糖凝胶电泳

计算 p73 mRNA 在 AL细胞及不同细胞类型中表达的阳性率及强度，结合临床分型、治疗效果及预后进行统计学分析

确诊 AL患者 100例及正常对照者20例骨髓标本2ml

随机引物逆转录合成cDNA；AMV逆转录酶系合成

TRizol一步法提取总 RNA

RT反转录

研究方法及实验技术

采用 SPSS13.0统计软件对结果进行统计学分析。

对 p73 mRNA在 AL细胞及不同细胞类型中表达的阳性病例组与正常对照组阈值进行 t检验，不同类型 AL阳性率比较进行 X2检验，阳性表达强度进行单因素方差分析。

P<0.05时说明差异具有统计学意义。

实验结果及讨论

M 1 2 3 4 5 6 M M 1 2 3 4 5 6 M

注：M （ marker）； 1（阴性对照）； 2~6 （ AL 中 p73 mRNA的表

达）； p73扩增产物长度为 390bp

图 3 RT-PCR检测 p73 mRNA表达

注：M （ marker）； 1（阴性对照）； 2~6 （ AL 中 p73 mRNA的表

达）； p73扩增产物长度为 390bp

图 3 RT-PCR检测 p73 mRNA表达

实验结果及讨论

表 2 不同类型 AL及对照组细胞中 p73 mRNA的表达

组别 总例数 阳性例数 p73表达阳性率 (%) p73/β-actin

AL 100 49 49.0 0.63±0.65

ALL 20 4 20.0 0.42±0.12

AML 80 45 56.3 1.22±0.93

M2 12 6 50.0 0.46±0.22

M3 35 18 51.4 0.73±0.46

M4 18 10 55.6 0.53±0.44

M5 9 7 77.8 1.44±1.13

M6 6 4 66.7 0.62±0.48

NL 20 4 20.0 0.43±0.26

一般预后 56 22 39.3 1.19±0.52

不良预后 28 20 71.4 1.82±0.48

实验结果及讨论

实验结果及讨论

AML 细胞 p73 mRNA 表达阳性率 56.3%

ALL 细胞 p73 mRNA 表达阳性率 20.0%

两组差异显著两组差异显著 ,, 有统计学意义有统计学意义

1. p73基因的失表达在 ALL中是高频率发生事件，在其形成中起着抑癌基因作用。

在 AML中， p73基因表现为过度表达，起着癌基因样作用。

实验结果及讨论

2.分别比较 ALL及 AML患者一般预后组与不良预后组 p73 mRNA表达率及强度的差异，均具有统计学意义 (P<0.05) 。

这说明了 p73基因是 AL中一个新的生物学预后因子这也证实了尽管 ALL组与 AML组患者初

诊时及治疗后 p73基因的表达情况不同，但都与其预后有密切关系

结 论

p73基因在不同类型白血病发病及预后中起的作用不同： p73基因在 ALL患者初诊时有较高的阴性表达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着抑癌基因样作用；与之相反，在 AML患者中p73基因高水平表达，且其表达水平随病情的缓解而降低，表现为癌基因样作用。

结 论

p73基因的表达在急性白血病的发病中均起着重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。通过动态检测 AL患者 p73基因的表达情况，从而尽早决定是否需要使用更有效的治疗手段 ( 如骨髓移植 BMT)或针对 p73基因进行基因治疗，有希望提高急性白血病的治愈率。

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参考文献