mise en place d'un programme sanitaire gestion sanitaire des … · 2011-05-03 ·...
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Modè les animaux des maladies infectieuses humainesMise en place d'un programme sanitaire
Ateliers du tour de France AFSTAL Ateliers du tour de France AFSTAL -- 7 7 OctobreOctobre 2008 Paris2008 Paris
GestionGestion SanitaireSanitairedes des AnimaleriesAnimaleries
Marion BERARD & Franck BOURGADEInstitut Pasteur
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Différents statuts microbiologiques
■ Conventionnels
■ S.P.F.: Specific Pathogen Free (= E.O.P.S.)
■ A façon (e.g. sans opportunistes, gnotobiotiques...)
■ Axéniques : sans organisme vivant détectable
pourquoi / comment les protéger, les contrôler?
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■ Contrôles Sanitaires: pourquoi et comment?
interférences, référentiels et bonnes pratiques
■ Que contrôle-t-on?
gestion sanitaire, exemple de mesures et leurs effets
■ Plan d'action en cas de résultats positifs?
■ Conclusion
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POURQUOI MAITRISER / CONTRÔLER
LE STATUT SANITAIRE
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Raisons pour ne pas contrôler?
■ Ca coûte cher!
■ C'est long et compliqué à mettre en place!
■ Comment interpréter les résultats des contrôles?...
■ C'est contraignant!
■ A quoi, à qui cela sert?!
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Pourquoi maîtriser les statuts?
■ Causes majeures d'interférences:
- contaminations sanitaires. perte de lignées (morbidité / mortalité). interférences (http://www.gv-solas.de/auss/hyg/hyg-p6.html). risque zoonotique (ex. LCMV, Hantaan...)
- contaminations génétiques
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Pourquoi réaliser des contrôles?
■ La détection des infections est difficile
- infections "classiques" / symptomatiques = rares
contrôles = . recherche des agents infectieux. contrôle qualitéde la gestion sanitaire
■ Augmentation des risques de contamination- échanges de lignées entre institutions - échanges de matériel biologique d'origine animale!
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Infections et manifestations cliniques
Infection inapparente
Maladie
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• Pour rechercher et identifier différents microorganismes:- porté par un animal,- dans une unité microbiologique.
• Pour contrôler ce statut sanitaire au cours du temps
• Pour contrôler des souris importées
• Pour contrôler l'efficacité d'une décontamination
Dans quels cas réaliser des contrôles?
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•• Faciliter lFaciliter l’’ avancement davancement d’’ une thune théématique de matique de recherche tout en protrecherche tout en protéégeant le statut sanitaire de la geant le statut sanitaire de la structure ostructure oùù seront hseront héébergbergéées les lignes les lignéées importes importééeses
Le compromis est difficile à trouver, et dépend de nombreux paramètres ± maitrisables: conception des locaux, barrière, contrôle des flux, procédures de travail, hygiène, qualitésanitaires des animaux, ...
Choisir un statut sanitaire "acceptable"
+ savoir maintenir le statut sanitaire choisi!
Contrôle maximum des échanges
Echanges delignées "sales"
RecommandationsF.E.L.A.S.AI.L.A.R
Toxicologie
RechercheFondamentale
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COMMENT CONTRÔLERLE STATUT SANITAIRE1- les référentiels
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Référentiels?
■ Pas d'obligations
■ En Europe: recommandations FELASA
■ Hors Europe: harmonisation?
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F.E.L.A.S.A.(Federation of European Laboratory Animal Science Associations)
■ Statuts. organisation professionnelle européenne, indépendante
. groupe d'associations (e.g. AFSTAL): intérêts communs
. www.felasa.eu
■ Activités et objectifs. sciences des animaux de laboratoire
. utilisation raisonnée et bientraitance des animaux
. moyens:groupes de travail & publications, colloques
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Recommandations de la F.E.L.A.S.A.
■ Formation des personnels
■ Ethique
■ Suivi génétique
■ Suivi sanitaire. colonies expérimentales et d’élevage
. rongeurs, lapins, chats, chiens, cochons, PNH...
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Mission sanitaire de la F.E.L.A.S.A.
■ Objectif: garantir un "standard microbiologique":
. en harmonisant les procédures de surveillance,
. en formant du personnel compétent,
. par des mises à jour régulières (ex. Helicobacter).
■ Rationnel
. scientifique: éviter les interférences
favoriser la reproductibilitéexpérimentale
. éthique: limiter les variabilités interindividus (réduction).
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Recommandationssanitaires
■ Adapter exigences & méthodes aux contraintes locales:
Recommandations ≠ Obligations
ex. prévention / contrôle, coût / bénéfice
ex. facteurs de risque différents(élevage vs expérimental)
ex. interférences dépendantes du modèle
(sujet de recherche)
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Paramètres influençant les interférences
■ Domaine de recherche
ex. génétique / immunologie
■ Statut sanitaire global des animaux
ex. P. pneumotropica/ animaux S.P.F.
■ Type de lignée, statut immunitaire
ex. Helicobacter / IL10-KO vs B6
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Recommandations ≠ liste d'exclusion
■ Les interférences ne sont pas toutes connues
■ Un nouveaumodèle = une prédisposition particulière
exemple historique: le statut S.O.P.F.
éémergence de nouveaux interfmergence de nouveaux interféérents (ex. rents (ex. MNVMNV , RRV), RRV)
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Historique du statut S.O.P.F.
■ S.O.P.F.= S.P.F. - opportunistes
■ Lignées concernées:immuno-déficientes / vagues (GM)
■ Interférences:infections locales à systémiques
■ Agents exclus:. origine: Homme, environnement. bactéries (S. aureus, P. aeruginosa, P.mirabilis, K. pneumoniae)
+ tout microorganisme associé à une lésion
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Recommandations ≠ liste d'exclusion
■ Les interférences ne sont pas toutes connues
■ Un nouveaumodèle = une prédisposition particulière
exemple historique: le statut S.O.P.F.exemple historique: le statut S.O.P.F.
émergence de nouveaux interférents (ex. MNV, RRV)
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Norovirus murin (MNV)
■ Karstet al., 2003 (ARN+, non enveloppé)
■ Interférences / pathogénicité
. non pathogène chez les souris immunocompétentes
→ infection transitoire + séroconversion chez les 129
. persistant chez les Rag0/0
. létal chez les STAT0/0
"émergent": profite de nouveaux modèles(//Helicobacter)
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Limites des recommandations F.E.L.A.S.A.
■ Variation des contraintes en fonction des modèles: OUI
MAIS
■ Animalerie = groupesd’exigences différentes
souvent nécessaire d'adopter le statut SPF sens strict
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COMMENT CONTRÔLERLE STATUT SANITAIRE2- la pratique
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Echantillonnage: test direct de la population= cas d'une population homogène
population > 100 individus,technique 100% spécifique & sensible; N = % animaux non infectés; p = 0.05; échantillonnage au hasard
taille de l'échantillon =log N
log 0,05
2981
1030
550
290
Taille de l'échantillon
Prévalence
de l'infection (%)
statut immunitaire, sensibilité de la lignée!
exemple d'une unité d'élevage
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exemple d'une unité expérimentale
cages sales ± contact avec animaux
choix des sentinelles (non consanguines, nude, colonies fermées)
temps de contact (sérologie, cycle parasitaire...)
enregistrement des cages testées
litiére sale
Donner aux sentinelles (en rose sur le plan) le bac + la grille + le biberon (+ éventuellement le couvercle filtrant si cage à capot filtrant) d’une cage grisée et un échantillon de la litière des cages de la même ligne/colonne. La cage des sentinelles reste toujours au même endroit sur le portoir.
Pièce :
Sent.
Année :
S1
Echantillonnage: test indirect via sentinelles= cas d'une population hétérogène
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Echantillonnages / Comparaison
Test directTest direct•• nombreux animaux nombreux animaux àà tester tester
mais sondage immmais sondage imméédiatdiat
•• retestsretestsrrééalisaliséés facilement / s facilement / rapidementrapidement
•• sensibilitsensibilitéé diffdiff éérentes des rentes des lignlignéées testes testééeses
Sentinelles• peu d'animaux à tester mais méthode peu réactive
• retests doivent être anticipés
• sentinelles choisies pour favoriser la détection
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■ Matériel biologique / environnement
■ Méthodes
- indirecte: AP test (Antibody Production test)
- directe: culture, PCR
Autres types d'échantillons à tester
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■ On ne trouve que ce que l'on recherche!
■ Premier contrôle / contrôles de routine
■ Le choix des contrôles de routine suit une analyse:
. de risques / des flux
. des conséquences d'une contamination
Choix des agents à tester
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■ Fréquence précocité de détection
■ Le choix dépend aussi:
- des moyens financiers (coût / bénéfice)- du statut initial / facteurs de risque& conséquences
ex: élevage S.P.F. (distribution d'animaux)tests fréquents / fréquence adaptée à la prévalence des agents
ex: zone expérimentaletests moins fréquents dans les zones conventionnelles
Choix de la fréquence des tests
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31 %MNV
2 %Parvovirus
1.6 %MHV
0.6 %EDIM
0.013 %LCMV
0.035 %MTLV
0.039 %MCMV
0.023 %MAV 1&2
0.006 %HANTAAN
0.041 %ECTRO
PrévalenceAgent
à testerfréquemment
contaminationsmoins fréquentes
Fréquence des tests / prévalence des agents
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Exemple de mise en place de programme1er contrôle référentiel:
complet, externalisé
Mesurer la prévalence des différents agents
Définir l'unité microbiologique (animalerie, pièce, portoirs...)
Définir les fréquences pour des tests complet / réduit
Définir le panel d'agents àcontrôler en fonction des résultats de prévalence
ex. 1996 panel réduit obtenu / à tester fréquemment:Minute virus of mice (MVM)Mouse hepatitis virus (MHV) Rotavirus (EDIM)Mouse adenovirus (Mad)Sendai virusTheiler's encephalomyelitis virus (GD VII)
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Evolution des agents à tester/
Mouse hepatitis virus (MHV) Theiler's encephalomyelitis virus (GD VII)Minute virus of mice (MVM)
Sendai virusRotavirus (EDIM)Mouse adenovirus (Mad)
Sérologie Murine
0/560/561/56
0/560/560/56
Total
--/----/---+/--
--/----/----/--
1er test
A / B
retest
--/----/---+/--
--/----/----/--
A / B
Total
0/560/561/56
0/560/560/56
MPV
Mouse parvovirus (MPV) ++/--NT 2/56
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Etablir un programme = un compromis Prévalence
de l'infection
30%
Temps
Jan FevJanOctJuilAvr
Test* TestTest TestTest
40%
100%
*: exemple d'un test réalisé sur une population homogène sur 10 animaux
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CONTROLES SANITAIRES:CONTROLE QUALITE DE LA
GESTION SANITAIRE DE L'ANIMALERIE
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statut sanitairede l'unité microbiologique
Facteurs de risque = Fluxanimaux (+ sauvages)personnelaliment, litière, équipement...fluidesmatériel (+ biologique)
Prévention des risquesquarantaine / contrôleprocédures de travailarchitecturetype d'hébergementstérilisation / filtration
CONTRÔLE
Analyse des risques / Mesures préventives
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! procédures25082
11.3m229
32.2m2
50.1 m222F
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MC
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LAVERIE SA
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SAS
SAS
SAS
LABO STOCK
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RG
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EN
T
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RG
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EN
T
COULOIR SALE
COULOIR SALECOULOIR SALE
Conception des locaux et procédures (1). barrières + marche en avant / couloirs propre & sale
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machine à laver autoclave SAS formol
Conception des locaux et procédures (2). entrée / sortie du matériel: barrière physique
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SAS d’entrée
Conception des locaux et procédures (3). entrée du personnel: SAS en barrière + procédure
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Evolution et protection du statut microbiologique
Axéniques
Isolateur
Absence deµorganismes
Gnotoxéniques
Flore connueListe définie de
µorganismes
E.O.P.S / S.P.F.(hétéroxéniques)
Zone protégée
Flore inconnue Absence d’agents
pathogènes
Conventionnels(holoxéniques)
Zone Conventionnelle
Flore inconnuePrésence possible
d’agents pathogènes
Diversitéde la flore
Confinement
TENDANCE
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Différents types de confinement (1)ex. animaux S.P.F.: cages ouvertes sous barrière
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Différents types de confinement (2)ex. animaux S.O.P.F.: I.V.C. sous barrière + hottes
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Différents types de confinement (3)ex. animaux axéniques / à flore contrôlée: isolateurs (P>0)
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Ateliers du tour de France AFSTAL Ateliers du tour de France AFSTAL -- 7 7 OctobreOctobre 2008 Paris2008 Paris 43Ateliers du tour de France AFSTAL Ateliers du tour de France AFSTAL -- 7 7 OctobreOctobre 2008 Paris2008 Paris
Efficacité de différentes mesures sanitairesProcédures Redérivation
12.74.163.6
--+++++GD VII
3.87.321.62833.9
--+++++MHV
1.91.86.243.6
--+++++Mad
0.93.65.2514.3
-+-++++Aspiculuris tetraptera
16.51335.7
----+++Syphacia obvelata
2.11010.7
----+++Myobia musculi
2007200220012000199919981997± , %
12.74.163.6
--+++++GD VII
3.87.321.62833.9
--+++++MHV
1.91.86.243.6
--+++++Mad
0.93.65.2514.3
-+-++++Aspiculuris tetraptera
16.51335.7
----+++Syphacia obvelata
2.11010.7
----+++Myobia musculi
2007200220012000199919981997± , %
Traitement Importation
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Importation / Plan d'actions
Si modèle d’intérêt
Animalerie adaptéeIsolateur P-
Procédure stricte
" EOPS/suspect "
QuarantaineIsolateur P++ sentinelles+ contrôle
"EOPS"
non-EOPS
Animalerie de destination
+ contrôles sanitaire
Animalerie de destination
EOPS
Objectif longue durée: colonie permanente
Objectif courte durée:tester un modèle
DECONTAMINATION• Transfert d’embryons• Fécondationin vitro
suspect
Demande d'importation + infos sanitaires
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ZONE DEQUARANTAINE
Manipulation - PSM
Hébergement - isolateurs P+
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QUELLE DEMARCHE ADOPTEREN CAS DE RESULTAT POSITIF?
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1- Déterminer si:(définir avant le test / à froid)
- l’agent détecté interfère avec les modèles
- les expériences en cours peuvent être arrêtées
- possibilité d'éliminer / remplacer les colonies infectées
Démarche face à un résultat positif (1)
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■ Dépend des contraintes(production / recherche)
ex: a = recyclage immédiat. fort impact / interférence avec les projets, agent zoonotique
ex: b = recyclage planifié. Ø impact pour l'unité microbiologique mais risque pour autres
ex: c = pas de recyclage. animaleries particulières (pas d'impact, isolateur,...)
Classification des agents
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2- Confirmer le résultat
■ Causes de faux-positifs(technique invalide, sérum "collant" / de vieux animaux)
■ Re-test pour confirmer / infirmer(autre échantillon / méthode / laboratoire diagnostic)
Démarche face à un résultat positif (2)
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3- Etablir un périmètre de sécurité
■ Pour empêcher la diffusion de l'agent infectieux(identification des flux / maîtriser, et contrôler la diffusion)
Démarche face à un résultat positif (3)
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4- Définir la procédure de recyclage éventuelle
■ Faire un inventaire pour chaque zone(projets, contraintes des chercheurs)
■ Plan d'action pour rétablir un statut sanitaire contrôlé
. nettoyage-désinfection de la pièce
. décontamination des animaux
Démarche face à un résultat positif (4)
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5- Eliminer l'agent contaminant:
■ Techniques non chirurgicales
. "burn-out"(ex: MHV / lignées immunocompétentes)
. adoption néonatale (ex:Helicobacter)
. "test-and-cull" = élimination des positifs (ex. opportunistes)
. antiparasitaire (ex: pipérazine & ivermectine / oxyures)
. antiprotozoaire et antibactérien (efficacité variable/perturbe flore)
. vaccination ???
■ Hystérectomie aseptique / Transfert d'embryons
Démarche face à un résultat positif (5)
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Modè les animaux des maladies infectieuses humainesMise en place d'un programme sanitaire
Ateliers du tour de France AFSTAL Ateliers du tour de France AFSTAL -- 7 7 OctobreOctobre 2008 Paris2008 Paris
5- Eliminer l'agent contaminant:
■ Techniques non chirurgicales
. "burn-out"(ex: MHV / lignées immunocompétentes)
. adoption néonatale (ex:Helicobacter)
. "stamping out" = élimination des positifs (ex. opportunistes)
. antiparasitaire (ex: pipérazine & ivermectine / oxyures)
. antiprotozoaire et antibactérien (efficacité variable/perturbe flore)
. vaccination ???
■ Hystérectomie aseptique / Transfert d'embryons
Démarche face à un résultat positif (5)
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Structure pour la décontamination
2 unités microbiologiques
« Zone sale» « Zone blanche»
♀ "donneuse" ♂ vasectomisé ♀ "receveuse"
Isolateurs (P + : protection animal)
TE sous hotte àφ laminaireGestation / Mise bas portoirs ventilés
Portoirs ventilés (P - : protection expérimentateur / environnement)
Prélèvements oviductes sous PSM
XX
♂ "donneur"
19
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ZONE SALE
Manipulation - PSM
Hébergement - portoirs ventilés P-
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Pseudogestantes SPF - isolateurs Réimplantation - Hotte à flux laminaire
Post-réimplantation - portoirs ventilés P+
ZONE PROPRE
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Le transfert d’embryons
XMâle vasectomisé Femelle « receveuse »
Isolateur statut sanitaire contrôléNMRI
J1 (pm)
ϖ 2 cellulesLavages M2
Réimplantation w
Contrôle Qualité:- sanitaire:receveuses- génétique:petits
X
AccouplementJ0
Wt
PMS
« donneuses » en âge d ’être superovulées
hCG
48 h
J0J-2
Wt
Relevé des bouchons vaginaux (Bv)
J1 (am)
Bv réceptrices
J2 (am)
« Flushage»
Seringue contenantdu milieu
Graisse
M2
Expulsiondes embryons
Seringue contenantdu milieu
Graisse
M2
Expulsiondes embryons
J2 (am)
J+21 (DOB)
20
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2 à 4 µL de sperme frais
huile HTF
capacitation
Prélèvement des oviductes + libération du cumulus
Cumulus d’ovocytesde cinq femelles
La fécondation in vitro
Lavage des œufs
Œufs dans HTF
1 nuit à l’étuve (37°C, 5% CO2)
4 à 5h étuve = fécondation
Femelle « receveuse »
Réimplantation
Prélèvement des épididymes + récupération des spermatozoïdes
J0
Embryons stade 2 cellules
J1
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La cryopréservation des lignées: anticiper / faciliter la gestion de crise
Utilité : sécuriser une lignéecontrôler la dérive génétique gérer l'espace d'animaleriefaciliter les échanges de lignées
Principe : conservation de cellules à très basse température (-196°C): embryons / sperme...
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Démarche face à un résultat positif (6)6- Analyse des causes
+ personnel d'animalerie & chercheurs(plan d'action préventif)
proc
édur
es
loca
ux
équi
pem
ents
pers
onne
l
anim
aux
hygi
ène
amélioration de l'hygiène dans les animaleries
mais, persistance des facteurs de risque
21
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statut sanitairede l'unité microbiologique
Facteurs de risque = Fluxanimaux (+ sauvages)personnelaliment, litière, équipement...fluidesmatériel (+ biologique)
Prévention des risquesquarantaine / contrôleprocédures de travailarchitecturetype d'hébergementstérilisation / filtration
CONTRÔLE
Analyse de causes / Plan d'actions
Merci de votre attention
Au revoir