lab 2 biochimie clinică
TRANSCRIPT
Lab 2 Lab 2 BBiochimie iochimie clinicclinicăă
Explorarea metabolismului Explorarea metabolismului lipidiclipidic
Clase de lipide sericeClase de lipide serice
Colesterol Colesterol – EsterificatEsterificat– NeesterificatNeesterificat
TriglicerideTrigliceride FosfolipideFosfolipide Acizi graşi liberiAcizi graşi liberi
Lipidele sericeLipidele serice Grup heterogen de compuşi chimiciGrup heterogen de compuşi chimici Sunt insolubile in apă şi solubile în solvenţi Sunt insolubile in apă şi solubile în solvenţi
organiciorganici RolRol
– Energetic (TG, AGL)Energetic (TG, AGL)– Funcţional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL, Funcţional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL,
leucotriene)leucotriene)– Structural (fosfolipide)Structural (fosfolipide)
~~ 15-20% din greutatea unui adult normal 15-20% din greutatea unui adult normal conformatconformat
Combinaţii ale AG cu alcooli sau amineCombinaţii ale AG cu alcooli sau amine
Determinarea lipidelorDeterminarea lipidelor
Se poate faceSe poate face– Dozarea lipidelor totale sau a fracţiunilor Dozarea lipidelor totale sau a fracţiunilor
de LPde LP– Separarea LPSepararea LP
Lipide totaleLipide totale
Test cu valoarea orientativăTest cu valoarea orientativă VN: 400-800mg/dlVN: 400-800mg/dl VC: VC: dislipidemii primare,DZ,
mixedem, sdr. nefrotic, alcoolism cronic, pancreatită acută
VS:hipertireoză, stări carențiale, infecții acute, anemii grave
Metodă de determinare: fotometrică
Colesterol totalColesterol total
Parametru important in etiologia Parametru important in etiologia aterosclerozeiaterosclerozei
2/3 este esterificat2/3 este esterificat VN:VN:
– La adulti:La adulti: risc scăzut 140 – 200mg/dl (3,6 – 5,1mmol/l)risc scăzut 140 – 200mg/dl (3,6 – 5,1mmol/l) limită de risc: 200 – 240 mg/dl (5,18 – 6,20 mmol/l)limită de risc: 200 – 240 mg/dl (5,18 – 6,20 mmol/l) risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)
– La copii:La copii: risc scăzut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l)risc scăzut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l) limita de risc: 170 – 200 mg/dl (4,40 – 5,16mmol/l)limita de risc: 170 – 200 mg/dl (4,40 – 5,16mmol/l) risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)
Colesterol totalColesterol total
VC: VC: obstrucții biliare, ciroză portală, hepatite acute, sdr. nefrotic, pancreatită cronică, DZ, hipotireoză, hipercolesterolemie familială, dislipidemii
VS:hepatopatii grave, uremii, stări septice, hipertireoză, boala Tangier(deficienta familiala a alfalipoproteinelor-HDL), anemii, macroglobulinemie Waldenström, analfalipoproteinemie, stării carențiale
Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică
Colesterol liber (neesterificat)
VN: VN: <<75mg/dl75mg/dl
VC: VC: obstrucții biliare, ciroză portală, colangite, pancreatită acută, hipercolesterolemie familială
VS: ca și colesterolul total
Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică
Colesterol esterificat
VN: 60-100mg/dlVN: 60-100mg/dl
VC: VC: ca și colesterolul total
VS: ciroză hepatică, stări septice
Metodă de determinare: fotometrică cuplată cu calcul matematic
Dozarea colesterolului totalDozarea colesterolului total Metoda enzimatică colorimetrică
– determinarea cantitativă specifică a colesterolului total
Esteri colesterol + H2O –colesterolesteraza → colesterol liber+ acizi grași
Colesterol liber total+ O2 –colesteroloxidaza → 3-colestenona + H2O2
2 H2O2+ fenol + 4-aminoantipirina (AAP)-peroxidaza → chinonimina(roșu)
Incubare 5 minute la 37°C (stabil 1 h) Se citește la λ=546 nm Es și Ep
Dozarea colesterolului totalDozarea colesterolului total
EpEp Colesterol total = x CsColesterol total = x Cs
EsEs
UM= mmol/l sau mg/dlUM= mmol/l sau mg/dl
Transformarea mg/dl in mmol/lTransformarea mg/dl in mmol/l
Mmol/l = mg/dl x 10/M colesteroluluiMmol/l = mg/dl x 10/M colesterolului
M colesterol = 386M colesterol = 386
Fosfolipide Fosfolipide
VN: 160-280mg/dlVN: 160-280mg/dl
VC:VC:ciroză biliară, obstrucții biliare, sdr.nefrotic, DZ, hipercolesterolemie familială
Metodă de determinare: fotometrică/enzimatică
Trigliceridele Trigliceridele Valori normale:Valori normale:
– risc scăzut – sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)risc scăzut – sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)– risc mediu – 150 – 200 mg/dl (1,70 – 2,25 risc mediu – 150 – 200 mg/dl (1,70 – 2,25
mmol/l)mmol/l)– risc crescut – 200 – 500mg/dl (2,25 – 5,6mmol/l)risc crescut – 200 – 500mg/dl (2,25 – 5,6mmol/l)– risc foarte crescut – peste 500 mg/dl (peste 5,6 risc foarte crescut – peste 500 mg/dl (peste 5,6
mmol/l)mmol/l) VC: HLP tip I,V; VC: HLP tip I,V; dislipidemii, pancreatită,
sdr. nefrotic, microvasculite, DZ decompensat, hipotireoză/mixedem
VS: stări carențiale, hipertireoză, lipodistrofii, anemii grave
Metodă de determinare: enzimatică /fotometrică
Acizi graşi liberi (AGL,FFA)Acizi graşi liberi (AGL,FFA) substrat energetic eliberat din țesuturile de
depozit excesul transportat în plasmă de albumină VN: <20mg/dl VC: vasculite, IMA, infarct pulmonar acut,
pancreatită acută, pneumonii, colangite, colecistită, peritonită peritonită
VS:VS:stări carențiale Metodă de determinare: enzimatică
/fotometrică/ electroforetică
Lipoproteinele Lipoproteinele
agregate macromoleculare complexe, solubile în apă autosamblarea necovalentă a diverselor
categorii de lipide cu proteine specifice(apoproteine-ApoP)
Rol: – 1.transportă moleculele de lipide de la locul de
absorbție (intestinul subțire) sau sinteză (ficatul) la locurile de utilizare și stocare (țesuturile periferice)
– 2. reglatori ai metabolismului lipidic
Separarea lipoporteinelorSepararea lipoporteinelor
Metoda de referință – Ultracentrifugarea
probe centrifugate până la 18 ore la 10°C, 40 000 rpm chilomicronii, VLDL, LDL plutesc la suprafața tubului HDL, proteinele plasmatice sedimentează la baza
tubului permite separarea componentelor și estimarea
consecutivă a fiecărei frațiuni de colesterol
!!! Nu se utilizează de rutină în laboratoare – Timpul îndelungat de prelucrare – Costuri ridicate
Separarea LP prin ELFOSepararea LP prin ELFO În funcție de sarcina lor
electrică, în câmp electric lipoproteinele vor migra, producându-se o separare clară (în ordinea scăderii mobilității) acestora în 4 fracțiuni: – α-LP: HDL– pre-beta-LP: VLDL– beta-lipoproteine: LDL– chilomicroni: START
Valori normale– Alfa: 20-30%– pre-Beta: 5-17%– Beta: 50-70%– Chilomicroni: 0-1%
α1-lipoproteinele (LP cu densitate mare, HDL)
transportorul "colesterolului bun", antiaterogen Metodă:
– procentaj relativ din lipidogramă în gel de agaroză– determinare indirectă enzimaticăa colesterolului din HDL
(după blocarea selectivă a LP cu ApoB100) Valori normale
– bărbați: 20-25% sau >35 mg/dL– femei: 25-30%sau >45 mg/dL
Valori patologice/scăzute: – primar: boala Tangier (epurare accelerată a LP cu
ApoAII)– secundar: fumători, sedentari/obezi, femei
postmenopauză, alcoolici
β-lipoproteinele (cu densitate mică, LDL)
Principalul transportor de colesterol esterificat din organism, cea mai aterogenă dintre LP
Metodă: – procentaj relativ din lipidogramă – determinare directă (specifică/imunologică)– determinare din calcul (formula Friedewald) cu ApoB100
Valori normale: – bărbați: 60-70%sau <155mg/dL– femei: 50-70% sau <155 mg/dL
Valori patologice/crescute (dislipidemiile cu hipercolesterolemie): hipercolesterolemia familială sau cea poligenică, hipotiroidie, afecțiuni hepato-biliare, tratamente hormonale (anticonceptive, corticosteroizi
Dozarea LDLDozarea LDL
Ecuația FriedewaldLDL=CT-HDL-(TG/5)
Ecuația corectă doar atunci când:– nivelul TG <400mg/dl (4,5 mmol/l)– nu sunt prezenți chilomicroni– proba nu conține beta-VLDL– necesită probe recoltate după o perioadă de
post !!! Estimarea LDL în afara acestori
limitări duce la subestimări semificative ale acestuia.
Apoproteina AI (ApoAI)
componentă proteică majoritară a HDL factor de prognostic pozitiv în
ateroscleroză, mai important decât HDL
Metoda: nefelometrică Valori normale:
– bărbați: 100-200 mg/dL– femei: 110-225 mg/dL
Apoproteina B (ApoB)
componentă proteică unică a LDL factor de prognostic negativ în
ateroscleroză, chiar mai important decât LDL
Metoda: nefelometrică Valori normale:
– bărbați: 65-135 mg/dL– femei: 60-115 mg/dL
Lipoproteina X (LP-X)
lipoproteină patologică, discoidală, conținând lipide biliare, bogată în fosfolipide, colesterol liber și diferite apoproteine
Metodă:– electroforetică (migrează catodic în gel de agaroză)– imunologică
Valori:– normal absentă în serul persoanelor sănătoase– prezentă exclusiv în serul bolnavilor cu colestază
Lipoproteina(a)[LP(a)]
factor de risc independent pentru boala ateroclerotică
structură identică cu LDL+Apo(a) similitudine structuralăcu
plasminogenul factor de risc lipidic și trombotic Metodă: electroforetică/nefelometrică Valori normale: <30 mg/dL
Tulburările metabolismului Tulburările metabolismului lipidiclipidic
Dislipidemiille - stări însoțite de modificări cantitative/calitative ale lipoproteinelor
Hiperlipidemiile– stări patologice caracterizate prin creștere
concentrației TG și/sau colesterolului peste limitele acceptate ca normale pentru vârsta, sexul și starea de sănătate a persoanei
Hipercolesterolemia izolată:↑LDL Hipertrigliceridemia: ↑VLDL, mai rar
↑Chilomicroni Hiperlipidemia combinată: ↑LDL,↑VLDL,
mult mai rar ↑IDL
Clasificarea fenotipică a Clasificarea fenotipică a hiperlipoproteinemiilorhiperlipoproteinemiilor
Tipul Chilomicroni VLDL IDL LDL
I+++ N - N
IIa - N - ++
IIb - ++ - ++
III + +/- ++ N
IV - ++ - N
V ++ ++ - ↓
Clasificarea HLP prin pastrarea Clasificarea HLP prin pastrarea serului la 4serului la 4°°C/12hC/12h
Diagnosticul DLPDiagnosticul DLP
I-a etapă: Colesterol total + TG II-a etapă:
– analiza Colesteroluluidinlipoproteineleserice: LDL şi HDL
III-a etapă: – Lipidograma (determinarea proporţiei fracţiunilor
lipoproteice)– Diagnosticul diferenţial al dislipidemiilor mixte
(tipurile IIb, III şi V)– Identificarea prezenţei în cantitate
crescutăLp(a)