lab 2 biochimie clinică

Download Lab 2 Biochimie Clinică

Post on 04-Jan-2016

15 views

Category:

Documents

0 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

  • Lab 2 Biochimie clinicExplorarea metabolismului lipidic

  • Clase de lipide sericeColesterol EsterificatNeesterificatTriglicerideFosfolipideAcizi grai liberi

  • Lipidele sericeGrup heterogen de compui chimiciSunt insolubile in ap i solubile n solveni organiciRolEnergetic (TG, AGL)Funcional (acizi biliari, hormoni steroizi, PGL, leucotriene)Structural (fosfolipide)~ 15-20% din greutatea unui adult normal conformatCombinaii ale AG cu alcooli sau amine

  • Determinarea lipidelor

    Se poate faceDozarea lipidelor totale sau a fraciunilor de LPSepararea LP

  • Lipide totaleTest cu valoarea orientativVN: 400-800mg/dlVC: dislipidemii primare,DZ, mixedem, sdr. nefrotic, alcoolism cronic, pancreatit acutVS:hipertireoz, stri careniale, infecii acute, anemii graveMetod de determinare: fotometric

  • Colesterol totalParametru important in etiologia aterosclerozei2/3 este esterificatVN:La adulti:risc sczut 140 200mg/dl (3,6 5,1mmol/l)limit de risc: 200 240 mg/dl (5,18 6,20 mmol/l)risc crescut: peste 240 mg/dl (peste 6,2 mmol/l)La copii:risc sczut: < 170 mg/dl (< 4,40 mmol/l)limita de risc: 170 200 mg/dl (4,40 5,16mmol/l)risc crescut: peste 200 mg/dl (5,18 mmol/l)

  • Colesterol totalVC: obstrucii biliare, ciroz portal, hepatite acute, sdr. nefrotic, pancreatit cronic, DZ, hipotireoz, hipercolesterolemie familial, dislipidemiiVS:hepatopatii grave, uremii, stri septice, hipertireoz, boala Tangier(deficienta familiala a alfalipoproteinelor-HDL), anemii, macroglobulinemie Waldenstrm, analfalipoproteinemie, strii carenialeMetod de determinare: fotometric/enzimatic

  • Colesterol liber (neesterificat)VN:
  • Colesterol esterificatVN: 60-100mg/dl

    VC: ca i colesterolul total

    VS: ciroz hepatic, stri septice

    Metod de determinare: fotometric cuplat cu calcul matematic

  • Dozarea colesterolului totalMetoda enzimatic colorimetricdeterminarea cantitativ specific a colesterolului totalEsteri colesterol + H2O colesterolesteraza colesterol liber+ acizi graiColesterol liber total+ O2 colesteroloxidaza 3-colestenona + H2O22 H2O2+ fenol + 4-aminoantipirina (AAP)-peroxidaza chinonimina(rou)Incubare 5 minute la 37C (stabil 1 h)Se citete la =546 nm Es i Ep

  • Dozarea colesterolului total EpColesterol total = x Cs EsUM= mmol/l sau mg/dlTransformarea mg/dl in mmol/lMmol/l = mg/dl x 10/M colesteroluluiM colesterol = 386

  • Fosfolipide VN: 160-280mg/dl

    VC:ciroz biliar, obstrucii biliare, sdr.nefrotic, DZ, hipercolesterolemie familial

    Metod de determinare: fotometric/enzimatic

  • Trigliceridele Valori normale:risc sczut sub 150 mg/dl (1,70 mmol/l)risc mediu 150 200 mg/dl (1,70 2,25 mmol/l)risc crescut 200 500mg/dl (2,25 5,6mmol/l)risc foarte crescut peste 500 mg/dl (peste 5,6 mmol/l)VC: HLP tip I,V; dislipidemii, pancreatit, sdr. nefrotic, microvasculite, DZ decompensat, hipotireoz/mixedemVS: stri careniale, hipertireoz, lipodistrofii, anemii graveMetod de determinare: enzimatic /fotometric

  • Acizi grai liberi (AGL,FFA)substrat energetic eliberat din esuturile de depozitexcesul transportat n plasm de albuminVN:
  • Lipoproteinele agregate macromoleculare complexe, solubile n apautosamblarea necovalent a diverselor categorii de lipide cu proteine specifice(apoproteine-ApoP)Rol: 1.transport moleculele de lipide de la locul de absorbie (intestinul subire) sau sintez (ficatul) la locurile de utilizare i stocare (esuturile periferice)2. reglatori ai metabolismului lipidic

  • Separarea lipoporteinelorMetoda de referin Ultracentrifugareaprobe centrifugate pn la 18 ore la 10C, 40 000 rpmchilomicronii, VLDL, LDL plutesc la suprafaa tubuluiHDL, proteinele plasmatice sedimenteaz la baza tubuluipermite separarea componentelor i estimarea consecutiv a fiecrei fraiuni de colesterol!!! Nu se utilizeaz de rutin n laboratoare Timpul ndelungat de prelucrare Costuri ridicate

  • Separarea LP prin ELFOn funcie de sarcina lor electric, n cmp electric lipoproteinele vor migra, producndu-se o separare clar (n ordinea scderii mobilitii) acestora n 4 fraciuni: -LP: HDLpre-beta-LP: VLDLbeta-lipoproteine: LDLchilomicroni: STARTValori normaleAlfa: 20-30%pre-Beta: 5-17%Beta: 50-70%Chilomicroni: 0-1%

  • 1-lipoproteinele (LP cu densitate mare, HDL)transportorul "colesterolului bun", antiaterogenMetod: procentaj relativ din lipidogram n gel de agarozdeterminare indirect enzimatica colesterolului din HDL (dup blocarea selectiv a LP cu ApoB100)Valori normale brbai: 20-25% sau >35 mg/dLfemei: 25-30%sau >45 mg/dLValori patologice/sczute: primar: boala Tangier (epurare accelerat a LP cu ApoAII)secundar: fumtori, sedentari/obezi, femei postmenopauz, alcoolici

  • -lipoproteinele (cu densitate mic, LDL)Principalul transportor de colesterol esterificat din organism, cea mai aterogen dintre LPMetod: procentaj relativ din lipidogram determinare direct (specific/imunologic)determinare din calcul (formula Friedewald) cu ApoB100Valori normale: brbai: 60-70%sau
  • Dozarea LDLEcuaia FriedewaldLDL=CT-HDL-(TG/5) Ecuaia corect doar atunci cnd:nivelul TG
  • Apoproteina AI (ApoAI)component proteic majoritar a HDLfactor de prognostic pozitiv n ateroscleroz, mai important dect HDLMetoda: nefelometricValori normale: brbai: 100-200 mg/dLfemei: 110-225 mg/dL

  • Apoproteina B (ApoB)component proteic unic a LDLfactor de prognostic negativ n ateroscleroz, chiar mai important dect LDLMetoda: nefelometricValori normale: brbai: 65-135 mg/dLfemei: 60-115 mg/dL

  • Lipoproteina X (LP-X)lipoprotein patologic, discoidal, coninnd lipide biliare, bogat n fosfolipide, colesterol liber i diferite apoproteineMetod:electroforetic (migreaz catodic n gel de agaroz)imunologicValori:normal absent n serul persoanelor sntoaseprezent exclusiv n serul bolnavilor cu colestaz

  • Lipoproteina(a)[LP(a)]factor de risc independent pentru boala aterocleroticstructur identic cu LDL+Apo(a)similitudine structuralcu plasminogenulfactor de risc lipidic i tromboticMetod: electroforetic/nefelometricValori normale:
  • Tulburrile metabolismului lipidicDislipidemiille - stri nsoite de modificri cantitative/calitative ale lipoproteinelorHiperlipidemiilestri patologice caracterizate prin cretere concentraiei TG i/sau colesterolului peste limitele acceptate ca normale pentru vrsta, sexul i starea de sntate a persoaneiHipercolesterolemia izolat:LDLHipertrigliceridemia: VLDL, mai rar ChilomicroniHiperlipidemia combinat: LDL,VLDL, mult mai rar IDL

  • Clasificarea fenotipic a hiperlipoproteinemiilor

    TipulChilomicroniVLDLIDLLDLI+++N-NIIa-N-++IIb-++-++III++/-++NIV-++-NV++++-

  • Clasificarea HLP prin pastrarea serului la 4C/12h

  • Diagnosticul DLPI-a etap: Colesterol total + TGII-a etap: analiza Colesteroluluidinlipoproteineleserice: LDL i HDLIII-a etap: Lipidograma (determinarea proporiei fraciunilor lipoproteice)Diagnosticul diferenial al dislipidemiilor mixte (tipurile IIb, III i V)Identificarea prezenei n cantitate crescutLp(a)