8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

1/38

  RINSI DASAR

KROMATOGRAFI

Rifki febriansah, M.Sc., Apt.

Farmasi UM

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

2/38

PENDAHULUAN

• Analisis komponen penyusun bahan pangan penting,tidak hanya mencakup makronutrien

• Analisis konvensional lama, tenaga besar, sering tidakakurat, tidak dapat mendeteksi pada kadar rendah seperti

ppm• !eknik kromatogra"i terus berkembang dengan akurasi

tinggi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

3/38

#E$A%AH

• Pertama kali digunakan untuk memisahkan &at 'arna

(chroma) pada tanaman• Ditemukan oleh *ichael !s'eet

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

4/38

DEFINISI

• !eknik pemisahan yang dilakukan dengan

memanipulasi si"at "isik dari &at+&at penyusun

suatu campuran

• !idak ada dua &at yang mempunyai si"at "isik

yang sama sehingga pemisahan untuk &atyang serupa masih mungkin untuk dilakukan

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

5/38

SIFAT FISIK YANG

DIMANIPULASI- .ecenderungan &at untuk larut dalam suatu cairan

(partisi/kelarutan)

0- .ecenderungan &at untuk teradsorpsi pada butir &atpadat yang halus dengan permukaan luas(adsorben) (adsorpsi)

1- .ecenderungan &at untuk menguap (volatilitas)

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

6/38

2ontoh Partisi

Carrot juice

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

7/38

2ontoh adsorpsi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

8/38

2ontoh pemisahan berdasarkan volatilitas

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

9/38

2ontoh pemisahan adsorpsi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

10/38

FASE STASIONER DAN MOBILE

• 3ase dalam kromatogra"i

• 3ase stasioner "ase diam- Dapat berupa adsorben,

cairan tipis yang dilapiskan pada penyangga padat,

gel, penukar ion seperti resin

• 3ase mobile merupakan "ase bergerak- *erupakan

cairan pengelusi, gas

• Proses partisi solut dalam solven pengelusi disebut

proses elusi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

11/38

$EN4#+$EN4# .%5*A!56%A34FASE

MOBIL

FASE

STASIONER 

TEKNIK

KROMATOGRAFI

PRINSIP

Gas Cair,adsorben

GC/GLC Partisi,adsorpsi,

volatilitasCair Padat TLC, kertas,

kolom penukarion, kolom filtrasi,

affinitas

adsorpsi, partisi, pertukaran

ion, permeasigel, afinitas

Cair Cair HPLC (KCKT Partisi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

12/38

.%5*A!56%A34 6A#GAS LIQUID CHROMATOGRAPHY GASCHROMATOGRAPHY

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

13/38

PE%ALA!AN

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

14/38

57EN .%5*A!56%A34 6A#

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

15/38

Diagram kromatogra"i gas

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

16/38

KOLOM GC

•! "ENIS  .olom isian

  .olom pipa terbuka

•SUHU KOLOM DIATUR

•

Is#$%a&i'•G%a(ien&

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

17/38

.5L5* .AP4LE%

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

18/38

.5L5* 4#4AN

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

19/38

DETEKTOR

• *endeteksi komponen+komponen yang ada dalam

sampel

• Digambarkan dalam bentuk kromatogram

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

20/38

2ontoh .romatogram

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

21/38

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

22/38

IDENTIFIKASI

• Dengan membandingkan dengan senya'a standar 

• .ondisi kromatogra"i harus sama dengan sampel

• Diidenti"ikasi berdasarkan 'aktu retensi

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

23/38

.%5*A!56%A34

2A4%AN .4NE%$A

!4N664(HPL2)

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

24/38

PERALATAN

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

25/38

• .romatogra"i partisi cairan+cairan

• 3ase stasioner cairan yang dilapiskan pada &at padatpenyangga

• 3ase mobil pelarut/cairan

26

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

26/38

26

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

27/38

.5L5* HPL2

28

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

28/38

.romatogram 8enis gula28

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

29/38

IDENTIFIKASI (an

KUANTIFIKASI• 4denti"ikasi dengan membandingkan 'aktu retensi sampel

dengan standar 

• .ondisi HPL2 sampel harus sama dengan standar • .uanti"ikasi seperti 62

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

30/38

KROMATOGRAFI

LAPIS TIPIS

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

31/38

• 2ara pemisahan dengan adsorbsi pada lapisan tipis

adsorben• *erupakan kromatogra"i adsorpsi dan partisi

• 3ase stasioner adsorben

• 3ase mobil pelarut

• 9iasanya untuk analisis kualitati" 

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

32/38

PLAT TLC )!*+!* 'm,

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

33/38

#potting

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

34/38

-ISUALISASI DENGAN CHARING

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

35/38

./ IDENTIFIKASI

• *embandingkan dengan standar berdasarkan %" atauposisi spot

0/ KUANTIFIKASI• Dengan mengukur kepekatan 'arna spot

• Alat yang digunakan !L2 #canner/ densitometer 

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

36/38

Perhitungan %" 

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

37/38

Densitogram dari !L2 #canner 

8/19/2019 Kromatografi_19!2!2016_Rifki Febriansah, M.sc., Apt

38/38

TERIMA KASIH