interações antígeno-anticorpo
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Interações Antígeno-Anticorpo. Ana Cláudia Carvalho Gouveia. Interações Ag - Ac. Ligações não covalentes Reversíveis. Características das interações Ag-Ac. Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo). Características das interações Ag-Ac. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
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Interações Antígeno-Anticorpo
Ana Cláudia Carvalho Gouveia
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Interações Ag - Ac
Ligações não covalentes Reversíveis
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Características das interações Ag-Ac
Afinidade
Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).
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Características das interações Ag-Ac
Avidez
- Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
Especificidade
- Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.
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Características das interações Ag-Ac
Reação cruzada
- Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes
- Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.
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Métodos
Reagentes não marcados(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag)
Reação de aglutinação Reação de precipitação
Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
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Reação de aglutinação
Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos
Passiva látex
(Ag insolúvel)
Qualitativos
Semi-quantitativos
Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções
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Tipagem sanguínea
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Inibição da Aglutinação
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- Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac.
Precipitado visível
Reação de precipitação
- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir.
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Precipitação em solução
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Precipitação em gel
Imunodifusão Radial
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Precipitação em gel
Imunodifusão Dupla
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Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, isótopos- Tipos:
RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
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Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com
radioisótopos para quantificar os ensaios.
• Vantagens:– Alta sensibilidade– Permite medidas rápidas e precisas
• Desvantagens:– Custo– Vida média dos reagentes– Risco operacional (radiação)
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ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.
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Imunofluorescência- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoraschamadas fluorocromos.
- Visualização em microscópio de fluorescência
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Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA
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Imunofluorescência Direta
Aplicações:
- Detecção direta de
microrganismos
(secreções, urina, cortes de
tecidos);
- Identificação de subpopulações
de linfócitos;
- Fenotipagem de células
tumoraisEx.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral
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Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi
Aplicações:
- Detecção de anticorpos específicos
contra
diversos microrganismos;
- Diagnóstico de doenças auto-
imunes;
Detecção de Ac anti-nuclear
Imunofluorescência Indireta
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Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo;
- Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; - As células são então analizadas no citômetro de fluxo.
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- As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser;
Citometria de fluxo
- A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.
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- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.
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Aplicações:
-Caracterização de populações celulares;
- Contagem de microrganismos;
- Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células;
- Análise de proliferação celular.
CD4
CD8
CD19
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![Page 27: Interações Antígeno-Anticorpo](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062423/56814dd9550346895dbb42ef/html5/thumbnails/27.jpg)
Western Blot
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Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV(Ac anti-HIV)
Diagnóstico de gravidez( detecção de beta HCG)
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Técnicas de Biologia Molecular
![Page 30: Interações Antígeno-Anticorpo](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062423/56814dd9550346895dbb42ef/html5/thumbnails/30.jpg)
Reação da Polimerase em Cadeia
Amostra + Reagentes
![Page 31: Interações Antígeno-Anticorpo](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062423/56814dd9550346895dbb42ef/html5/thumbnails/31.jpg)
RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)
![Page 32: Interações Antígeno-Anticorpo](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062423/56814dd9550346895dbb42ef/html5/thumbnails/32.jpg)
Termociclador
![Page 33: Interações Antígeno-Anticorpo](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062423/56814dd9550346895dbb42ef/html5/thumbnails/33.jpg)
Detecção da Amplificação
Produto (PCR ou RT-PCR)
Eletroforese em gel de
poliacrilamida
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1. Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência?
2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida.
3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno?
4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida.
5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.
Relatório