UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORMEDICINA VETRINARIA Y ZOOTECNIAVIROLOGA

NOMBRE: Jessica Reza CURSO: Tercero A

INMUNODIFUSION EN GEL DE AGARINTRODUCCINCuando un anticuerpo es puesto en contacto con el antgeno correspondiente, se forman complejos antgeno-anticuerpo que se insolubilizan en su mayor parte, dando lugar a una reaccin de precipitacin.Empleando soportes adecuados es posible que los antgenos y anticuerpos migren con diferentes velocidades, de modo que al encontrarse interaccionen y precipiten.Los geles utilizados como soporte tienen como base pectina, alginatos, poliacrilamida e incluso pueden utilizarse tiras de acetato de celulosa gelatinizado. Los precipitados que se originan se visualizan como bandas, que permanecern estables mientras un mayor flujo de molculas de alguno de los reactivos empleados no provoque su redisolucin.Se utiliza normalmente el mtodo de Oucherlony o de doble difusin. Consiste en enfrentar en pequeas perforaciones efectuadas en el agar, las soluciones de antgeno y anticuerpo.Al difundir y ponerse en contacto, producirn una banda de precipitacin slo si se encuentran en concentraciones ptimas.Si sta concentracin es la que corresponde a la zona de equivalencia de la banda de precipitacin estar situada aproximadamente en la distancia media que separa los reservorios.Cuando hay exceso de antgeno o anticuerpo, la banda estar ms prxima al pocillo del anticuerpo o del antgeno, respectivamente.

Este sistema permite identificar las bandas de precipitacin mediante el empleo simultneo de antgenos y anticuerpos conocidos.Se pueden observar tres tipos de reacciones:a. Reaccin de identidad:los dos sistemas difunden en una nica banda de precipitacin.b. Reaccin de no identidad:cada sistema reacciona independientemente, originando bandas de precipitacin que se cruzan.c. Reaccin de identidad parcial:Se produce cuando uno de los antgenos tiene menos de un componente y es capaz de dar una reaccin cruzada con un anticuerpo elaborado contra un antgeno ms simple.En este caso las bandas de ambos sistemas se unen y funden parcialmente en una banda, apareciendo una prolongacin o espoln.Esto indica que en este antgeno hay componentes antignicos no compartidos.Este mtodo, que debido a su sencillez, se puede realizar en cualquier laboratorio, ha sido utilizado prcticamente en todas las virosis como mtodo de diagnstico serolgico.Debido a su limitante, la baja sensibilidad, ha sido desplazada por otras tcnicas.En virologa veterinaria se lo utiliza en la actualidad para identificar reactores para las siguientes infecciones:Fiebre aftosa, Leucosis Bovina Enzotica, Lengua Azul, Anemia Infecciosa Equina, Enfermedad de Gumboro, Bronquitis Infecciosa.

TECNICA DE INMUNODIFUSION EN AGAR PARA LEUCOSIS BOVINA ENZOOTICAMaterialesa. Agar: Buffer Tris 0,05 M PH 8, CINa 8,5%, Agar Noble 0,85%.b. Antgeno y antisuero control.c. Sueros problema.d. Otros: PortaobjetosPipetasCmara hmeda.Mtodo.a) Preparacin del agar:Disolver a Bao Mara hasta que se vea transparente. Colocar 3,5ml. sobre un portaobjeto limpio y desengrasado. Dejar enfriar en un ambiente libre de polvo o tapado hasta que solidifique bien. Una vez solidificado conservar tapado y a 4C hasta su uso. Perforar usando el sacabocado convencional que indique el kit, de 7 bocas (una central y 6 perifricas). Extraer el agar de los pocillos con bomba de vaco.b) Siembra:Colocar el suero positivo de referencia en 3 de los pocillos perifricos en forma alternada. Colocar luego los sueros problema en los orificios restantes. Llenar los pocillos hasta la superficie, sin dejar menisco (aproximadamente 25 ul.).Colocar el antgeno en el pocillo central de la misma manera.Incubar a temperatura ambiente (20 - 25), en cmara hmeda durante 48 horas.c) Interpretacin de resultadosUsar una fuente de iluminacin que provea y que incida en forma oblicua al plano inferior de la placa. Negativo (reaccin de no identidad): La lnea control contina hasta el pocillo del suero problema. Positivo (reaccin de identidad): La lnea control se une en forma continua con la lnea producida por el suero problema. Inespecfico: La lnea del suero problema se cruza con la lnea control. Positivo o dbil: La lnea control se curva ligeramente pero no alcanza a formar una lnea completa entre el suero problema y el antgeno.ANEXOS

BIBLIOGRAFIAMorilla, A., Bautista, C., 1986. Manual de Inmunologa pag. 51 - 62.Alonso et al. 1992. Manual dediagnstico de la boratorio de las enfermedades vesiculares.O.I.E. 1991. Manual of recommended diagnostic techniques and requirements for biological products.