DIAGNOSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

MEDIANTE EL LABORATORIO

Mic. Cristina Montalvo Directora Livexlab

cmontalvo@livex.com.ec

QUIENES ÉRAMOS…..

QUIENES SOMOS…..

DESIGNACION 2010

� LIVEXLAB obtiene una designación como Organismo de la Evaluación de la Conformidad para realizar los ensayos de AIE y BRUCELOSIS otorgado por el

� CONCAL (Consejo Nacional de la Calidad) luego de una Evaluación de la

� OAE (Organismo de Acreditación Ecuatoriano)

ANEMIA INFECCIOSA EQUINA(Coggins)

� BRUCELOSIS(Rosa de bengala)(Elisa competitivo)

TECNICAS DE DIAGNOSTICO PARA AIE

Pruebas serologicas1. Prueba de inmunodifusión en gel de

agar (AGID) (prueba prescrita para el comercio internacional) Coggins

2. ENZIMA INMUNO ENSAYO (ELISA)

Prueba de inmunodifusión en gel de agar (AGID) COGGINS� Los anticuerpos precipitantes se producen

como resultado de la infección por la AIE y se pueden detectar mediante la prueba AGID.

� Las técnicas AGID disponibles en el mercado utilizan como antígeno la proteína p 26 del core del virus altamente purificada para evitar cualquier reacción con antígenos proteicos no relevantes y evitar reacciones inespecíficas.

� VIRUS DE LA ANEMIA INFECCIOSSA EQUINA� FAMILIA RETROVIRIDAE� SUBFAMILIA LENTIVIRIDAE

REACCION OBTENIDA EN COGGINS

� Las reacciones específicas se indican por las líneas deprecipitación entre el antígenode la AIE y el suero problema en

Un gel de agar a base de unaSolucion de agar noble en unBuffer borato Ph 8.6

ANTIGENO

CONTROL POSITIVO MUESTRA

� y se confirman por ser idénticas a la reacción que se da entre el antígeno y el suero controlpositivo.

� La lectura se debe realizar de 48 a 72 hrs.

REACCION OBTENIDA EN COGGINS

CLASES DE REACCIONES REPORTADAS EN LA PRUEBA

DE COGGINS (AGID)

NEGATIVO

Cuando las líneas de precipitación del control positivo o suero de referencia continuan hacia el pocillo de la

muestra sin evidenciar ningún tipo de curvatura

CONTROL POSITIVO

MUESTRAS

POSITIVA

� Las líneas del control positivo o suero de referencia se unen con la línea de la prueba formando una línea continua.

POSITIVO

POSITIVO

NEGATIVO

DEBIL POSITIVA� Las líneas de referencia del control

positivo se dobla ligeramente hacia el pocillo de la muestra, pero no forman una línea continua. Estas reacciones requieren de una observación cuidadosa y fácilmente pueden ser pasadas por alto.

DEBIL POSITIVO

CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS

� Los potros que se alimentan de yeguas infectadas pueden ser

persistentes hasta los 6 meses de edad debido a anticuerpos del calostro.

� Durante el período de incubación de EIA.Si la muestra es obtenidade dos a tres semanas

más tarde, la reacción debería ser más fuerte.

CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS

� Portadores inaparentes que no tienen ningún signo clínico de EIA pueden tener reacciones débiles en la prueba durante períodos largos. En estos casos, muestreando de nuevo raras veces causa un cambio en la reacción.

CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS

a) PRUEBA DE EZIMA INUMO ENSAYO (ELISA)

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE ELISA� La prueba detecta anticuerpos específicos contra la proteína p 26 del

virus de la AIE en suero de caballo .

� Este antígeno esta adherido a los pocillos de prueba.

� Los anticuerpos se unen al antígeno y añadiendo un conjugado marcado con una enzima son fácilmente revelados mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

A mayor cantidad de Ac más color en la prueba (Positiva)

ELISA PARA AIE

� Un resultado positivo obtenido mediante ELISA debe comprobarse de nuevo utilizando la prueba AGID para confirmar el diagnóstico, debido a que se han detectado algunos resultados positivos falsos mediante ELISA.

ELISA PARA AIE

COMPARACION ENTRE ELISA Y COGGINS

� Sensibilidad, es la proporción de verdaderos positivos identificados por la prueba del total de enfermos. La sensibilidad es, por lo tanto, la capacidad del test para detectar la enfermedad.

� Especificidad, es la proporción de verdaderos negativos identificados por la prueba del total de sanos. En otras palabras, se puede definir la especificidad como la capacidad para detectar a los sanos.

DATOS DE LA CASA COMERCIAL VMRD

Especie Muestra Prueba Sensibilidad Especificidad

Equina Suero Elisa 100 % 100%

Equina Suero Coggins 99 % 100%

PRUEBA DE COGGINS(Octubre 2010-Enero 2011)

TOTAL % RESULTADO

1963 100

77 3.92 POSITIVAS

1886 96.07 NEGATIVAS

LAS 77 MUESTRAS POSITIVAS POR COGGINS O INMUNODIFUSIÓN EN GEL AGAR (IDGA) FUERON VERIFICADAS CON OTRA MARCA COMERCIAL (IDEXX) Y ADICIONALMENTE POR ELISA.

261 100 % TOTAL 261 100 % TOTAL79 30.27 %Positivos 76 29.11 %Positivos

182 69.73 % Negativos 185 70.88 %Negativos

3 1.15 % Positivos sin Coggins Positivo (NEGATIVOS)

2 66.7 % Positivos

EN ESTE CUADRO COMPARATIVO LA PRUEBA DE ELISA NOS INDICA QUE ES UNA PRUEBA MAS SENSIBLE QUE COGGINS AYUDANDONOS A DETECTAR AQUELLOS CASOS QUE SE ENCUENTRAN EN FASES INICIALES, NUESTRA RECOMENDACIÓN INICIAL FUE UTILIZAR EL ELISA COMO UNA PRUEBA DE SCRENNING O TAMIZAJE, Y AQUELLAS QUE RESULTEN POSITIVAS AL ELISA, CONFIRMARLAS CON COGGINS.

EN NUESTRO LABORATORIO LA USAMOS COMO PRUEBA DE RESPALDO INTERNO PARA LOS CASOS DE RESULTADOS POSITIVOS POR LA PRUEBA COGGINS O IDGA.(ya que no se puede dar el caso de Un Coggins Positivo con un Elisa Negativo)

ADICIONALMENTE LAS PRUEBAS POSITIVAS A VMRD FUERON CORRIDAS CON IDEXX OBTENIENDO RESULTADOS EQUIPARABLES.

REQUISITOS PARA ENVIO DE MUESTRAS

•Muestreos de más de 10 animales deben ser custodiados a cargo de Agrocalidad.

•Llenar la solicitud del exámen y su hoja de filiación con:Nombre equino con letra claraEdad Identificación individual (chip)Sexo Raza o Tipo PeloNombre y apellido del propietarioPredioProvincia, Cantón y ParroquiaFirma del Propietario y del Médico veterinario Responsable

•Deben tener conocimiento que todos los resultados tanto Negativos como positivos son reportados a Agrocalidad

MUESTRAS

• Suero Equino en tubo vacutainner® de tapa Roja• NO se aceptan tubos con anticoagulante (tapa lila)• Los resultados se entregarán con lectura 72 horas (3 días laborables)

cmontalvo@livex.com.ecCayambe, Pichincha – Ecuador

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