0

LAPORAN PRAKTIKUM

IDENTIFIKASI PEMISAHAN PIGMEN DALAM DAUN

Oleh:

Golongan D/Kelompok 4b

1. Wildhan Armand S.P (161510501109)

2. Eva Syazana Nadiah Shofawati (161510501130)

3. Destia Restu Cahyani (161510501131)

LABORATORIUM FISIOLOGI TUMBUHAN

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS JEMBER

2017

i

1

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Berbagai jenis tumbuhan di muka bumi memiliki karkteristik warna yang

berbeda. Warna tersebut dapat menjadi salah satu tanda atau ciri untuk

membedakannya dengan jenis tumbuhan lain. Warna-warna yang terdapat pada

tumbuhan umumnya adalah hijau, kuning, dan merah. Perbedaan warna pada

tumbuhan dapat terlihat jelas pada bagian daun dan buah. Daun dan buah dapat

memiliki warna-warna yang berbeda karena mengandung pigmen yang dapat

menimbulkan warna pada bagian tersebut. Pigmen pada tumbuhan terdapat pada

plastida dan vakuola.

Perbedaan warna pada tumbuhan terjadi akibat proses absorbsi cahaya

matahari dengan panjang gelombang tertentu. Pigmen sebagai zat organik dapat

cahaya karena elektron valensi yang terkandung di dalamnya dapat disksitasi

menuju tingkat energi yang lebih tinggi, sehingga pigmen mengubahnya menjadi

warna yang nampak pada permukaan tumbuhan (Widiastuti, dkk., 2015). Terdapat

beberapa jenis pigmen pada tumbuhan, antara lain klorofil, karoteinoida, dan

antosianin.

Pigmen klorofil merupakan zat yang menyebabkan warna hijau pada daun.

Klorofil sangat berperan penting dalam proses penyerapan energi cahaya dalam

proses fotosintesis karena klorofil bersifat fluorescen (dapat menerima dan

memantulkan cahaya). Klorofil menyerap cahaya berwarna merah, biru, dan ungu

kemudian memantulkannya menjadi cahaya hijau kekunginagan. Klorofil banyak

terdapat pada kloroplas dalam plastida. Klorofil dapat dibedakan menjadi

beberapa jenis yaitu klorofil a, b, c, dan d. Klorofil yang dominan terdapat pada

tumbuhan adalah klorofil a dan klorofil b, sedangkan klorofil c dan d, dimiliki

oleh beberapa jenis bakteria dan alga. Klorofil a dan klorofil b memilki rumus

kimia yang berbeda, sehingga wana yang ditampakkan pada tanaman juga

berbeda. Pada klorofil a dengan rumus molekul C55H72O5N4Mg cenderung

menimbulkan warna hijau kebiruan, di sisi lain Klorofil b dengan rumus kimia

C55H72O6N4Mg menyebabkan warna hijau kekuningan pada tumbuhan.

2

Pigmen karoteinoid merupakan zat organik provitamin A yang bayak

terkandung dalam sayuran dan buah-buahan dan berguna sebagai antioksidan.

Kelompok karotenoid terbagi atas karoten dan xantofil. Karoten menampakkan

warna oranye atau jingga pada tumbuhan, seperti pada wortel yang kaya akan

beta-karoten. Karoten merupakan golongan terpana, yaitu senyawa hidrokarbon

dengan rumus kimia C40H56(OH), yang dihasilkan pada vakuola tumbuhan.

Terdapat beberapa jenis karoten, antara lain alfa-karoten, beta-karoten, gama-

karoten, delta-karoten, dan epsilon-karoten. Xantofil adalah bio-zat yang dapat

menampakkan warna kuning pada tumbuhan saat kadar klorofil dalam daun

berkurang atau hilang. Xantofil merupakan karoten yang teroksigenasi dan dapat

dengan mudah kembali menjadi karoten.

Antosianin merupakan pigmen dari golongan flanoid yang terpadat pada

vakuola. Pigmen antosianin menimbulkan warna merah, merah muda, ungu, dan

biru pada bunga dan buah. Intensitas dan warna pada antosianin dipengaruhi oleh

pH. Pada kondisi asam warna yang tampak adalah oranye, merah, hingga ungu.

Apabila pH mendekati 7 akan tampak tidak berwana karena bersifat semu basa.

Pada suatu tanaman terdapat kemungkian berbagai pigmen aktif di dalamnya.

Masing-masing tanaman memiliki pigmen dominan yang berbeda-beda, bahkan

pada famili yang sama dapat terjadi kemungkinan perbedaan warna daun atau

buahnya. Oleh karena itu, perlu diadakan praktikum “Indentifikasi Pemisahan

Pigmen dalam Daun” dengan menggunakan teknik kromatografi, sebuah teknik

pemisahan pigmen.

1.2 Tujuan

Mengetahui berbagai macam pigmen warna pada daun serta mempelajari

sifat-sifatnya.

3

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

Tanaman memiliki warna tersendiri, terdapat tanaman yang berwarna hijau,

kuning, oranye, merah, jingga, dan masih banyak lagi. Warna yang ada pada

tanaman tersebut disebut dengan pigmen, pigmen terdapat pada plastisida dan

vakuola, terdapat berbagai macam pigmen yang ada pada tumbuhan diantaranya

adalah klorofil, karotenoida, dan Antosianin. Klorofil terdapat pada kloroplas,

klorofil ini merupakan pigmen hijau, karotenoida terdapat dalam kromoplas dan

memiliki pigmen yang berwarna kuning-merah, antosianin terdapat dalam vakuola

yang memiliki pigmen warna merah, merah muda, ungu, dan biru (Mulyani,

2006). Spirogyra atau pada ganggang hijau terdapat pigmen klorofil, xantofil, dan

karoten. Spirogyra memiliki tubuh yang berbentuk filament tidak bercabang.

Spirogyra ini mampu berfotosintesis karena memiliki sel eukarotik dan dalam

tubuhnya berdominan klorofil, salah satu struktur sel eukariotik adalah

sitoplasma, dalam sitoplasma terdapat plastida yang di dalamnya mengandung

kloroplas (Patel dan Vediya,, 2013).

Menurut pendapat Setyanti dkk., (2013), klorofil merupakan zat hijau daun

yang digunakan dalam proses fotosintesis, jumlah klorofil dapat mempengaruhi

laju fotosintesis. Klorofil dapat dibentuk atau dapat dipengaruhi oleh beberapa

faktor, seperti faktor nutrisi pada tanaman itu sendiri, dan juga klorofil dapat

dipengaruhi oleh nitrogen, apabila tanaman tercukupi akan nitrogen maka

tanaman akan menjadi hijau segar, namun apabila tanaman kelebihan nitrogen

akan berwarna hijau pekat, dan sebaliknya apabila tanaman kekurangan nitrogen

akan mengakibatkan tanaman tersebut berwarna kuning. Dalam rumus kimia

klorofil memiliki berbagai bentuk yang sama, setiap klorofil diisi oleh struktur

cincin yang kompleks dan memiliki ekor hidrokarbon yang panjang. Struktur

molekul klorofil mirip dengan heme (zat darah), kecuali intinya bukan Mg tetapi

Fe. Menurut Iriyani dan Nugrahani., (2014) tanaman terutama pada komoditas

sayuran dedaunan yang memiliki klorofil banyak atau klorofil yang tinggi dapat

menandakan kandungan zat gizi pada sayuran itu sendiri. Klorofil memiliki

4

kemampuan untuk antioksidan bagi tubuh manusia sehingga, klorofil memiliki

manfaat baik bagi tubuh manusia sebagai suplemen makanan.

Klorofil memiliki sifat yang dapat menerima sinar matahari dan dapat

mengembalikannya dalam gelombang yang berbeda atau yang biasa disebut

fluoresensi, klorofil terdapat dua macam yaitu klorofil a yang apabila

difluoresensi yang semula warna daun hijau tua akan berubah menjadi warna

merah muda. Klorofil yang kedua adalah klorofil b yang warna awalnya hijau

cerah apabila difluoresensi akan berubah warna menjadi merah kecoklatan.

Klorofil a memiliki rumus kimia C55H72O5N4Mg, sedangkan klorofil b memiliki

rumus kimia C55H72O6N4Mg. Fluoresensi dipengaruhi oleh suhu, apabila suhu

mencapai 35o akan mengakibatkan perubahan yang sangat signifikan dalam

fluoresensi. Efeiensi kuantum fluoresensi makin berkurang apabila suhu terlalu

tinggi (Martinazzo et al, 2012).

Menurut Omayma et al., (2013), pigmen yang kedua adalah karotenoida,

karotenoida merupakan salah satu pigmen yang membentuk dan menentukan

suatu kualitas parameter sebuah buah maupun sayuran. Karotenoida merupakan

pigmen yang dapat menyerap satu cahaya yang berwarna biru dan dapat

memantulkan warna gelombang berpanjang yang besar( (merah hingga kuning

kehijauan). Karotenoida sendiri terdiri dari karoten dan xantofil, karoten

merupakan pigmen yang menyebabkan warna jingga pada tanaman, terutama pada

bagian daun dan buahnya. Karoten sendiri memiliki fungsi sebagai provitamin A

yaitu zat yang dikandung di dalamnya, provitamin A merupakan nama zat yang

sebelum diubah menjadi vitamin A.

Anthosianin merupakan pigmen yang terdapat dalam sel vakuola, antosianin

ini merupakan pigmen yang dapat larut dalam air. Pigmen ini dapat memberikan

warna pada buah, bunga, dan daun pada tanaman. Antosianin salah satu pigmen

yang memiliki sifat asam, sehingga apabila antosianin berada dalam keadaan

dengan pH yang rendah akan lebih stabil. Antosianin yang berada dalam keadaan

asam akan berubah warna yang semula merah menjadi ungu, sedangkan apabila ia

dalam keadaan basa atau berada pada pH yang tinggi antosianin akan berubah

warna menjadi ungu tua (Simanjutak dkk, 2014).

5

BAB 3. METODE PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum Pemisahan Pigmen dalam Daun dan Penetapan Kandungan

Klorofil dilaksanakan pada Senin, 02 Oktober 2017 di Laboratorium Fisiologi

Tumbuhan Universitas Jember.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

1. Mortar dan stamper

2. Neraca analitis

3. Kuvet

4. Corong pemisah dan statif

5. Gelas ukur

6. Labu ukur

3.2.2 Bahan

1. Daun puring hijau, kuning dan merah

2. CaCO3

3. Aseton

4. Aquadest

5. Petroleum eter

3.3 Pelaksanaan Praktikum

1. Menimbang 1/10 g daun tanaman yang telah ditentukan.

2. Menumbuk/menghaluskan daun dengan mortar dan stamper, serta

menambahkan 1 g CaCO3.

3. Menambahkan 10 ml aseton. Menyaring larutan aseton yang berwarna hijau

gelap dengan kertas filter untuk menghilangkan sisa-sisa saringan.

6

4. Menunggu hingga terjadi perubahan warna pada kertas saring, mengamati

gradasi warna yang terjadi pada kertas saring.

3.4 Variabel Pengamatan

Variabel pengamatan dalam praktikum Pengukuran Kandungan Pigmen

Daun dan Penetapan Kandungan Klorofil, yaitu:

1. Gradasi warna pada kertas saring.

2. Kandungan pigmen pada setiap daun.

3.5 Analisis Data

Data yang diperoleh dari praktikum ini dianalisa menggunakan analisa

deskriptif.

7

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

Tabel pengamatan identifikasi pemisahan pigmen pada daun puring.

Pingmen/

sampel Klorofil Karotenoida Arthesianin

Daun

Puring

Hijau ✓ ✓

Daun

Puring

kuning ✓ ✓

Daun

Puring

Merah ✓

✓

Berdasarkan data hasil pengamatan di atas dapat ketahui bahwa daun

puring hijau tidak memilki semua pigmen hanya pigmen klorifil (hijau) dan

Karotenoida (Kuning) tidak mempunyai pigmen Arthesianin, daun puring kuning

memilki warna pigmen daun yang sama dengan puring hijau yaitu Klorofil

(Hijau) dan Karotenoida (Kuning) dan sedangkan daun puring merah memiliki

pigmen Klorofil dan Arthesianin untuk mengetahui apa saja pigmen yang ada

pada daun puring dilakukan dengan beberapa cara salah satunya dengan

memotong kecil-kecil daun puring kemudian menumbuk daun puring dan diberi

aseton setelah beberapa saat ditaruh di kertas saring.

4.2 Pembahasan

Pigmen pada daun yang kita ketahui ada tiga yaitu klorofil (hijau)

,karotenoida (Kuning), Artesianin (Merah) warna yang ada pada daun disebabka

oleh kandungan pigmen yang ada pada daun, klorofil atau zat hijau daun

8

merupakankan dungan pada tanaman yang menyebabkan

tanaman berwana hijau, klorofil akan menyerap energi matahari untuk

berlangsunnya prosos fotosintesis dan juga berperan dalam metabolism

pertumbuhan dan respirasi, Anthosianin merupakan pigmen yang memberikan

warna biru, ungu, violet, magenta, merahdan orange meskipun mempunyai warna

pigmen yang gelap pigmen ini tidak bersifat toksik sedangkan Karotenoid dibagi

menjadi karoten danx antofil, Karotin yang menyebabkan warna orange dan

xantofil berwarna kuning karotoroid berfungsi untuk melindungi tumbuhan

terhadap solarisasi dengan cara menyerap kelebihan energi, Karotenoid

mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat tinggi dimana akan memilki

dampak pada meningkatnya system imun atau kekebalan .dimana pada saat uji

coba pada daun puring hijau kandungan klorofil yang ada sangat banyak bias

dilihat dari kertas saring yang kita gunakan warna hijau lebih jelas daripada warna

yang lain dibandingkan dengan pigmen yang ada pada puring kuning dan

merah,puring kuning hamper sama deng an puring hijau mengandung dua pigmen

yaitu Klorofil dan Karotenoida.yang dilihat pada kertas saring pigmen warna hijau

lebih berat daripada warna yang lain dan puring merah mengandung pigmen

Klorofil dan Artesianin, puring merah tidak mempunyai pigmen karotenoida

dilihat pada ketas saring.

9

BAB 5. PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasakan pengamatan yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa

daun puring hijau, daun puring kuning, dan daun puring merah memilkikan

dungan pigmen Kloril (Hijau), Karotenoida (Kuning), dan Arthesianin (Merah).

Daun puring hijau, kuning, merah tidak memilki semua pigmen yang ada hanya

beberapa pigmen dalam daun seperti daun puring hijau hanya memilki pigmen

Klorofil (Hijau) dan Karotenoida (Kuning).

5.2 Saran

1. Pada praktiakum untuk mengidentifikasi pigmen yang ada pada daun puring

dapat menggunakan beberapa metode yang lebih komplek agar di dapatkan

hasil yang lebih maklsimal.

2. Untuk mengetahui pigmen yang ada pada daun puring dengan beberapa

bahan agar hasil yang didapatkan lebih baik.

10

DAFTAR PUSTAKA

Iriyani, D, dan Pangesti, N. 2014. Kandungan Klorofil, Karotenoid, dan Vitamin

C Beberapa Jenis Sayuran Daun pada Pertanian Periurban di Kota

Surabaya. Matematika, Sains, dan Teknologi. 15(2): 84-90.

Martinazzo, E. G., Aline, R., and Marcos, A. B. 2012. The Chlorophyll a

Fluorences as an Indicator of The leaves of Prunus Persica. Brazilian

Society of Plant Physiology. 24(4): 237-246.

Mulyani, S. 2006. Anatomi Tumbuhan. Yogyakarta: Kanisius.

Omayma A. E, and Abdel Nasser B. S. 2013. Carotenoids. Pharmacognosy and

Phytochemistry. 2(1): 225-234.

Patel, S. S, dan Sanjay, D. V. 2013. Separation of photosynthetic pigments in

Spirogyra specis by means of thin layer Chromatography from Sola lake,

Ahmedabad, Gujarat. Pharmacy and Life Science. 4(7): 2819-2822.

Setyanti, Y. H., S. Anwar., W. Slamet. 2013. Karakteristik Fotosintetik dan

Serapan Fosfor Hijauan Alfafa (Medicago sativa) pada Tinggi Pemotongan

dan Pemupukan Nitrogen yang Berbeda. Animal Agriculture. 2(1): 86-96.

Simanjutak, L., Chairina Sinaga., dan Fatimah. 2014. Ekstraksi Pigmen

Antosianin dari Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus). Teknik

Kimia USU. 3(2): 25-29.

Widiastuti, N., Suryana, R., & Supriyanto, A. 2015. Karakteristik Sifat Optik

Lapisan Tipis Material PCBM Hibrid Klorofil Spirulina sp. Dengan Metode

Spin Coating. Berkala Fisika Indonesia, 1(7): 1-4.

11

LAMPIRAN

Data Mentah (Lembar Flowchart dan ACC)

12

‘

13

14

15

16

17

Dokumentasi Foto

Gambar 1. Memotong daun puring merah, kuning, dan hijau menjadi bebrapa

bagian kecil.

Gambar 2. Menimbang 10 gram daun puring.

Gambar 3. Menumbuk daun puring dan menambahkan 1 gram CaCO3 hingga

halus.

18

Gambar 4. Menambahakan 10 ml aceton untuk memisahkan pigmen dalam daun.

Gambar 5. Mengekstrak daun menggunakan kertas saring.

Gambar 6. Perbedaan gradasi warna pada kertas saring menentukan pigmen

dominan pada daun.

19

Literatur

Setyanti, Y. H., S. Anwar., W. Slamet. 2013. Karakteristik Fotosintetik dan

Serapan Fosfor Hijauan Alfafa (Medicago sativa) pada Tinggi Pemotongan

dan Pemupukan Nitrogen yang Berbeda. Animal Agriculture. 2(1): 86-96.

20

Iriyani, D, dan Pangesti, N. 2014. Kandungan Klorofil, Karotenoid, dan Vitamin

C Beberapa Jenis Sayuran Daun pada Pertanian Periurban di Kota

Surabaya. Matematika, Sains, dan Teknologi. 15(2): 84-90.

21

Martinazzo, E. G., Aline, R., and Marcos, A. B. 2012. The Chlorophyll a

Fluorences as an Indicator of The leaves of Prunus Persica. Brazilian

Society of Plant Physiology. 24(4): 237-246.

22

Omayma A. E, and Abdel Nasser B. S. 2013. Carotenoids. Pharmacognosy

and Phytochemistry. 2(1): 225-234.

23

24

Simanjutak, L., Chairina Sinaga., dan Fatimah. 2014. Ekstraksi Pigmen

Antosianin dari Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus). Teknik

Kimia USU. 3(2): 25-29.

25

Patel, S. S, dan Sanjay, D. V. 2013. Separation of photosynthetic pigments in

Spirogyra specis by means of thin layer Chromatography from Sola lake,

Ahmedabad, Gujarat. Pharmacy and Life Science. 4(7): 2819-2822.

26

Mulyani, S. 2006. Anatomi Tumbuhan. Yogyakarta: Kanisius.

27

Widiastuti, N., Suryana, R., & Supriyanto, A. 2015. Karakteristik Sifat Optik

Lapisan Tipis Material PCBM Hibrid Klorofil Spirulina sp. Dengan Metode

Spin Coating. Berkala Fisika Indonesia, 1(7): 1-4.