UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORFACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

ESCUELA DE MEDICINA

CTEDRA DE PARASITOLOGADR.: LUIS VALDIVIESO

MTODOS DIRECTOS E INDIRECTOS

INTEGRANTES LPEZ SALAZAR IVONNEMELENDREZ VINICIOPEREZ KAREN JAQUELINE PILCOMARIA JOSE PINANGOCURSO: TERCEROP62014

MTODOS DIRECTOS E INDIRECTOSSolicitud de exmenes (situacin clnica) depender: - Tipo de poblacin servida - Personal tcnico disponible - Metodologa disponible - Costos - Relevancia clnica de los resultadosBase indispensable de conocimiento para solicitud de exmenes: - Ciclo de vida de los parsitos locales - Habitat en el hospedero, usual y ectpica - Manifestaciones clnicas ms especficas o probables - Maneras de transmisin Ejemplos de muestra a enviar al laboratorio para demostrar parsitos en general: Heces - Sangre Orina - Secreciones Esputo - Excreciones Pus - Otros lquidos LCR - Parsito in toto

Tomado de la Web:http://whqlibdoc.who.int/publications/9243544101_(part1).pdf

MTODOS DIRECTODiseados para observar o detectar el parsito o alguno de sus elementos identificables Examen Macroscpico o Caracteres Organolpticos:Cantidad: Diaria entre 100-200 gr/da, la sptima parte del total de alimentos ingeridos. olor: Normalmente pardo oscuro o claro, dependiendo principalmente de la estercobilina, en los nios amarrillo claro debido a su rgimen lcteo. Entre las enfermedades que alteran el color se encuentran las heces (acolicas) o de color arcilla en Hepatitis y TBC intestinal y las heces hemorrgicas de un aspecto negruzco y viscosos (Melenas).Olor: Es producido por la presencia de sustancias aromticas (Indol, Escatol) derivadas de la desaminacin y descarboxilacin del triptofano. Consistencia: Normalmente las heces son blandas, contienen entre un 60% a un 85% de agua; patolgicamente son lquidas o duras, dependiendo de alguna enfermedad o de la dieta. pH: Normalmente es neutro (6.9-7.2), depende del rgimen alimenticio. cido en dieta rica en carbohidratos, alcalino en dieta rica en protenas.Moco: Se encuentra generalmente en pequeas cantidades. Por lo general indica inflamacin o irritacin del intestino.

Examen Microscpico:Es el denominado examen directo y consiste en observar al microscopio la materia fecal con solucin salina para observar trofozoitos (formas mviles) y con lugol para colorear estructura sin ternas (ncleos).En el examen directo se puede observar lo siguiente :Leucocitos: Se encuentran asociados a moco en enfermedades intestinales. Cuando son ms de 20 por campo y predominan los PMNN indican diarrea invasiva. La coloracin con azul de metileno ayuda en la diferenciacin de polimorfos nucleares y mononucleares. Eritrocitos: Se observan cuando hay hemorragias del colon, hemorroides y fisuras sangrantes, tambin estn presentes en diarreas invasivas .Restos alimenticios de origen vegetal: Los almidones son frecuentes, son fciles de identificar en las preparaciones con lugol debido a que toman un color azul cuando estn sin digerir y rojos o morados cuando estn parcialmente digeridos. Las clulas y fibras vegetales forman retculos en forma de panal o espirales y aunque muchas veces no tienen importancia pueden aparecer en sndromes de malabsorcin o asociarse a diarreas. Restos alimenticios de origen animal: Son principalmente grasas y fibras musculares, las fibras musculares son rectangulares con estras transversales y las gotas de grasa tiene diferente tamao y pueden ser transparente o amarrillas. Microbita bacteriana: Siempre esta presente de manera normal.

METODO DIRECTO EN FROTE DE HECESPRINCIPIO: Este mtodo es una simplificacin del mtodo estndar de Beaver en 2 mg de heces en el que se utiliza una clula foto-elctrica adaptada y calibrada que mide con precisin 2 mg de heces en una preparacin en solucin salina. La simplificacin deriva del Conocimiento que las preparaciones directas que se utilizan en la rutina para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg especialmente las preparadas por tcnicos con experiencia. MUESTRA REQUERIDA: Heces frescas, recolectadas en frasco (vidrio, plstico o cartn) limpio, de boca ancha, sin contaminacin de agua, orina, tierra etc. PREPARACIN DE REACTIVOS: Solucin salina fisiolgica Cloruro de sodio 0.85 g. Agua destilada 100 mLMezclar hasta disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco rotulado. Para uso diario mantener en frasco gotero rotulado. MATERIALES: Porta-objetos de 3 X 1 pulgada (7,5 x 2.5 cm) 3 X 2 pulgadas {7.5 x 5cm) Cubre-objetos de 22 X 22 mm, #1 #2 Aplicadores de madera Solucin salina fisiolgica (0.85%) Marcador Contador manual Frasco con solucin desinfectante para descartar material PROCEDIMIENTO: Identificar el porta-objetos con la muestra de heces a examinar Colocar 1 - 2 gotas de solucin salina en cada extremo del porta-objetos Con un aplicador, tomar una porcin de heces y emulsificaren cada una de las gotas de solucin salina Cubrir cada preparacin con un cubre-objetos Contar en forma individual los huevos segn la especie: de Ascarislumbricoides ,Trichuristrichuria y/o Uncinariasspp presentes en cada preparacin. Informar por especie de parsito: No. de huevos/frote de heces o bien No. de huevos/ 2 mg de heces Descartar material usado en el frasco con desinfectante. Causas de error: Preparacin muy gruesa o muy fina Observacin no sistemtica de la preparacin Falta de prctica en ejecutar conteos Huevos no distribuidos al azar en la preparacin, o aglomerados por la presencia de mucho moco Heces lquidas REFERENCIAS: Beaver, PC.The standarization of fecal smears for estimating egg production and worm burden.Journal of Parasitology 1950, 36:451-456.

TCNICAS DE CONCENTRACINLa concentracin de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la deteccin de los parsitos intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo.Los procedimientos de concentracin permiten la deteccin de protozoos y/o helmintos emplendose dos mtodos: de sedimentacin y flotacin, o una combinacin de ambos, para separar los protozoos y los huevos de helmintos de las heces, utilizando las diferencias en el peso especfico.Se deben emplear cuando la cantidad de muestra fuera pequea, en un control de tratamiento o cuando se deba transportar poca cantidad de muestra a un lugar distante.

Concentracin por SedimentacinLos parsitos se concentran por accin de la gravedad, suspendiendo las heces en agua corriente, agua destilada o solucin salina y dejando que sedimenten naturalmente o por centrifugacin. Estos mtodos son principalmente tiles para la concentracin de quistes, ooquistes y huevos.Ventajas: es fcil de realizar, no requiere observacin microscpica inmediata y se puede aplicar a la concentracin de la mayora de los parsitos intestinales.Desventajas: la observacin microscpica puede dificultarse por concentracin de elementos no parasitarios.

Sedimentacin espontnea: Mtodo de sedimentacin sencilla1- Homogeneizar unos 10 gramos de heces en 10 veces su volumen de agua corriente.2- Verter la materia fecal en copas de vidrio o vasos de precipitado de 250 a 500 ml3- Dejar que sedimente durante 1 hora.4- Eliminar por sifn los dos tercios superiores, o verterlos con cuidado, para eliminar los detritus.5- Agregar agua hasta llenar casi el recipiente y resuspender las heces con varilla.6- Repetir la operacin 1 o 2 veces ms hasta que el sobrenadante quede relativamente lmpido.7- Eliminar el lquido y con una pipeta obtener una pequea porcin del sedimento para8- Observacin microscpica.Es un mtodo lento y de poca concentracin para los protozoos intestinales. Los huevos de helmintos sedimentan en el fondo del recipiente en un estado viable y sin deformacin.

Mtodo de Lumbreras modificadoSe utiliza para la bsqueda de huevos de Fasciola heptica en heces o bilis. No se puede utilizar un mtodo de centrifugacin porque los huevos se rompen ni de flotacin porque son muy pesados.1- Colocar 2 ml de la muestra (heces o bilis) en una copa de Lumbreras o tubo de centrfuga.2- Agregar 5 ml de solucin detergente al 10% para emulsionar las grasas.3- Agregar 0,5 ml de alumbre frrico al 1% para favorecer el gradiente de densidad.4- Homogeneizar suavemente.5- Dejar en reposo 30 minutos.6- Sacar con pipeta pasteur una gota del fondo de la copa.7- Observar con microscopio.

Sedimentacin por centrifugacin: Mtodo de Charles Barthelemy modificado por Bacigalupo y Rivero1-Mezclar 10 gramos de heces con 50 ml de solucin fisiolgica, o agua de la canilla.2-Tamizar a travs de un colador metlico.3-Filtrar sobre gasa en un embudo.4-Recoger 10 ml del filtrado en un tubo de centrfuga.5-Centrifugar 5 minutos a 1500 rpm. Descartar el sobrenadante.6-Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.7-Resuspender el sedimento con solucin fisiolgica o agua de la canilla ms 2 ml de ter sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente para extraer las grasas.8-Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Descartar el tapn graso de un golpe seco, conservando el sedimento.9-Examinar con microscopio el sedimento.

Mtodo de formol- ter o de Ritchie1- Filtrar 10 ml de suspensin de heces por un embudo con una capa de gasa.2- Recoger 10 ml del filtrado sobre un tubo de centrfuga.3- Centrifugar 5 minutos a 2000 -2500 rpm. Descartar el sobrenadante.4- Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.5- Resuspender el sedimento con formol 10%. Dejar 5 a 10 minutos en reposo.6- Agregar 3 ml de ter sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente 30 segundos para extraer las grasas.7- Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Se forman cuatro capas: 1) capa de ter, 2) tapn de restos fecales, 3) capa de formol, 4) sedimento. Descartar las 3 capas primeras, conservando el sedimento.8- Examinar con microscopio el sedimento.

TCNICAS DE FLOTACINEl mtodo de flotacin emplea un medio lquido ms pesado que los parsitos permitiendo que los mismos suban a la superficie y puedan ser recuperados de la pelcula superficial.Ventajas: el preparado es ms lmpido, facilitando la observacin microscpica.Desventajas: debe hacerse la observacin microscpica en menor tiempo debido a que la pelcula superficial puede destruirse y los parsitos caer al fondo del tubo, a su vez, los parsitos de mayor peso que la solucin empleada no flotarn.Existen varios mtodos de flotacin, el ms utilizado es el mtodo de Faust

Flotacin de FaustOBJETIVOBuscar en las muestras biolgicas la presencia de los distintos parsitos para tener un conocimiento ms amplio sobre ellos.FUNDAMENTO:Se conoce como tcnica de Faust, ya que fue l quien la diseo en 1938. Es una de las ms populares, se utiliza prcticamente en todos los laboratorios del sector salud y privados.VentajayDesventajasEsta tcnica es mejor para quiste y protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El xito depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quiste y dificultar su identificacin, por lo tanto estas preparaciones debe ser examinan lo antes posibleMATERIALPorta objetos.Cubreobjetos.Gasas.Tubos de ensayo. EmbudoSolucin acuosa de sulfato de Zn.Vaso de precipitadoAbate lenguasMuestras biolgicasHecesPROCEDIMIENTO:1) Mezclar bien una porcin de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2) Filtrar la suspensin a travs de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudndose con un embudo pequeo.

3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.

4) Decantar el lquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.

5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el lquido sobrenadante est listo.

6) Decantar nuevamente el lquido sobrenadante remplazndolo por igual cantidad de solucin de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solucin bien la solucin con el sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.

7) Tomar de 3-4 gotas de las partculas que flotan en la superficie del lquido. Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto

8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

Mtodo indicado para el diagnstico de huevos livianos de helmintos (Necator americano, Tricocefalos, scaris lumbricoides).CONCLUSIONESLa finalidad de la prctica es la bsqueda de parsitos hasta el momento no hemos encontrado. Con la prctica continua llegaremos a encontrarlos. En las practicas anteriores y en esta ltima solo hemos hallado grasa, fibra .y restos vegetales e incluso cremos encontrar una amiba pero no era as solo se trataba de una fibra. MTODO DE KATO KATS (VARIACIN KATZ), en 41.7 mg de heces PRINCIPIO: Aclarar con glicerina un frote grueso de heces no diluidas. El mtodo, originalmente introducido por japoneses para hacer encuestas epidemiolgicas de Schistosomiasis, ha sido mejorado y modificado varias veces. La variacin KATZ entrega una cantidad conocida de heces, que depende del tamao del templete utilizado, con la condicin quesean heces formadas. El tamao del templete varia; para asegurar resultados comparables, el templete debe estandarizarse en el pas a una sola medida. El que se describe aqu entrega 41.7 mg de heces. Huevos de Taeniaspp o de Hymenolepisnana se informan sin contar. La Organizacin Mundial de la Salud considera este mtodo como el de eleccin y el ms adecuado en encuestas, monitoreo y evaluacin de programas de control de nemtodos transmitidos por el suelo.VENTAJAS: Las heces no se diluyen, se utiliza materiales baratos y accesibles, puede transportarse una vez preparado en el campo, puede guardarse varios meses para verificar resultados, puede estandarizarse para encuestas en diferentes regiones geogrficas por diferentes investigadores. DESVENTAJAS: Tiene varias limitantes: slo puede utilizar heces frescas; no es adecuada para heces diarreicas, lquidas o mucoides; no se aplica para la deteccin de protozoos ni larvas de nemtodos; huevos frgiles como los de Uncinariaspp y a menudo de Hymenolepis Nana se vuelven irreconocibles en pocas horas; no es indicado para heces que contengan mucha fibra o grasa. PREPARACIN DE SOLUCIN DE GLICERINA Y AGUA: Glicerina pura 100 mLAgua destilada 100 mLVerde de malaquita al 3% 1 mL(Solucin acuosa) Mezclar bien en frasco de boca ancha con tapadera e introducir los cuadrados de celofn para sumergir en esta solucin 24 horas o ms antes de usar. (El verde de malaquita no es indispensable en caso que no se cuente con l). Un templete de 9 mm X 1 mm entrega 50 mg de heces. El factor de multiplicacin para determinar huevos por gramo ser de 20. Un templete de 6 mm de dimetro X 1.5 mm de grosor entrega 41.7 mg de heces. El factor de multiplicacin ser de 24.Martin LK, Beaver PC. Evaluation of Kato thick-smear technique for quantitative diagnosis of helminthinfections.American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 1978, 17: 382-391

RECOBRAR Y CONTAR PARSITOS ADULTOS EXPULSADOS DESPUS DE TRATAMIENTO PRINCIPIO: Recobrar los gusanos adultos, hembras y machos presentes en una infeccin intestinal para determinar la intensidad de la infeccin, o para comprobar la efectividad de un antihelmntico. Se requiere la colaboracin fiel del (los) participante(s) durante todo el tiempo que dure la recoleccin y contar con un antihelmntico efectivo. PROCEDIMIENTO: Informar al personal (de hospital si es clnico; al voluntario si es de encuestas) para que colecte heces de 24 horas durante 4-5 das despus de iniciado el tratamiento. La forma de hacerlo depender de los recursos e ingenio de cada investigador. Lavar diariamente y por separado las heces de 24 horas recogidas en bolsas plsticas con el nombre de cada individuo, utilizando pazcones o un tamiz y bandejas esmeriladas o de acero inoxidable y recobrar los parsitos de este lavado. Ayudarse con pinceles finos para recoger los parsitos ms pequeos. En caso de Ascarislumbricoides; Medirlos, secarlos y pesarlos (opcional); fijarlos con formalina caliente al 5%, en frascos apropiados. En caso de Trichuristrichiura y Uncinariasspp:Contarlos y separarlos por sexo si se desea y fijarlos. Beaver et al comentan que gusanos pequeos se estiran en cido actico glacial, se lavan y se fijan, guardndolos en alcohol etlico al 70% con 5% de glicerol. Otro fijador que da buenos resultados para todo tipo de gusanos es una mezcla a partes iguales de formalina al 10% y alcohol etlico de 95%, al que se agrega 5% de cido actico (5 partes de cido actico y 95 partes de formalina-alcohol). En situacin de campo, los datos iniciales del estimado de la intensidad de la infeccin por cuenta de huevos ms la cuenta de adultos proveer datos epidemiolgicos ms correctos que documenten la relacin entre la cuenta de huevos y el nmero de gusanos adultos. Esta carga parasitaria variar segn las diferentes regiones del pas, las distintas condiciones epidemiolgicas y condiciones de la poblacin.

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN (CIDO-RESISTENTE) MODIFICADA: Esta tcnica es til en la identificacin de ooquistes de coccidios como Cryptosporidium, Isospora, y Cyclospora, que son difciles de detectar con colorantes rutinarios. Esta tincin de Ziehl-Neelsen Modificada no requiere el calentamiento de los reactivos al teir.

CONCENTRACIN DE HUEVOS, LARVAS Y QUISTES EN HECESHa llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la deteccin de los parsitos intestinales, que se puede realizar como complemento del examen directo

MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN WILLISGENERALIDADES: En 1921 Willis, basndose en mtodos de flotacin simple anteriores describi el mtodo que lleva su nombre, el cual dada su sencillez, se puede utilizar en trabajos de campo, ya que para realizarlo nicamente se requiere microscopio y laminillas. Este mtodo se basa en un principio de flotacin simple, utilizando una solucin de cloruro de sodio de una densidad entre 1.200 y 1.250, en la cual los quistes, huevos y larvas flotan perfectamente.MATERIAL Y EQUIPO: Vasos de precipitado de 50 mlTubos de ensaye de 13 X 100 mm GradillaAbatelenguas de madera Portaobjetos de 26 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm MicroscopioSolucin de salmuera o solucin saturada de cloruro de sodioLugolMTODO1.- Se colocan en el vaso de precipitado de 2 a 3 gr de materia fecal, se aade una pequea cantidad de solucin saturada de cloruro de sodio, se homogeniza.2.- Se vierte en un tubo de ensaye hasta el borde, se coloca el cubreobjetos de tal manera que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar durante 15 minutos.3.- Transcurridos los 15 minutos se toma el cubreobjetos y se coloca sobre un portaobjetos al cual se le ha puesto previamente una gota de lugol.4.- Se observa al microscopio con objetivos de 10X y 40 X.5.- Anotar resultados de observacin y hacer dibujos.

MTODO DEL PAPEL DE FILTRO EN TUBO O DEHARADA-MORIGENERALIDADES: Los huevos Uncinariasspp observados en muestras fecales pueden ser difciles o imposibles de diagnosticar, mientras que las larvas que surgen de ellos se identifican fcilmente. Un problema prctico frecuente es la diferenciacin de las infecciones por Necator americanode las producidas por Ancylostomaduodenalis. Para cultivar larvas a partir de huevos, Harada y Mori (1955) describieron un mtodo sencillo y limpio en tubos de ensaye.MATERIAL Y EQUIPO:Agua DestiladaTubos de ensaye de punta cnica de 15 mlGradillaAbatelenguas o aplicadores de maderaTiras de papel filtro de 13 X 120 mmPortaobjetos de 26 X 76 mmCubreobjetos de 22 X 22 mmPipetas Pasteur con bulboSol. De lugol o cido actico al 20%MicroscopioMETODO:1.- Se extiende una fina pelcula de heces ( de 1 a 2 mm) en un lado del tercio medio de una tira de papel filtro.2.- Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando la tira hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la pared del tubo.3.- Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28C) en la oscuridad durante un periodo de 1-5 das aadiendo agua segn se vaya necesitando para mantener el nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro.El flujo capilar del agua que sube a travs del papel y la pelcula fecal mantiene hmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del papel, donde se evaporan o acumulan en un depsito oscuro. Al alcanzar la fase infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la corriente del flujo del agua, y al alcanzar el nivel de sta se sumergen hacia el fondo, donde pueden verse con una lupa y tomarse con una pipeta para su examen microscpico. La tira de papel filtro puede transferirse a un tubo limpio lleno de agua para recoger las larvas que hayan podido quedar en la pelcula fecal. Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar hacia abajo. Antes de retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a bao Mara (50-60C) o aadiendo una cantidad de cido Actico al 20%.

Cpsula de Beal. Este examen es un complemento del coproparasitoscopico. Se usa para demostrar la presencia de parsitos intestinales que tiene por hbitat el duodeno y que pueden encontrarse en muestras biliares, obtenidas ya sea por sonda duodenal, por el mtodo de la cuerda encapsulada (Enterotest) o por la cpsula de Beal.

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN Se basa en el uso de una cpsula de gelatina que tiene en su interior un hilo de algodn absorbente, para la obtencin de parsitos que se encuentran en el duodeno. Es una tcnica til en la bsqueda de Giardia lamblia, Isospora belli, Strongyloides stercoralis, Ancylostoma o Necator y Fasciola heptica, cuyos adultos se localizan en las vas biliares.

TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. El mtodo de la cuerda encapsulada o Enterotest requiere que el paciente est en ayunas. 2. Fijar el extremo de la cuerda con una cinta adhesiva en la mejilla del paciente y se le hace deglutir. 3. La cpsula, se va desenrollando a medida que desciende por el estmago y duodeno. 4. Retirar la cuerda despus de 4 5 horas, observndose el extremo que lleg al duodeno de color amarillo 5. Se exprime el extremo en una lmina excavada o lmina portaobjeto. 6. Observar con 10X y 40X. 7. Al resto del contenido duodenal obtenido con sonda se le agrega una solucin de hidrxido de sodio al 2 %. 8. Trasvasar a un tubo de 13 x 100, se mezcla tapando el tubo y, por agitacin se liberan las formas parasitarias del mucus duodenal. 9. Dejar reposar de 30 a 45 minutos, eliminar el sobrenadante y observar el sedimento directamente o con tincin de lugol.

Mtodo en fresco del exudado vaginal Es un mtodo sencillo en que se utiliza la secrecin vaginal para la observacin del protozoario; Trichomonas vaginalis. METODOLOGA DE LA DETERMINACIN El mtodo se basa en la toma de la secrecin vaginal con solucin salina fisiolgica la cual conserva condiciones semejantes a las del organismo para la observacin de los trofozoitos de Trichomonas vaginalis.

TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. Preparar los materiales para la toma de muestra. 2. Acomodar a la paciente en posicin ginecolgica. 3. Introducir el hisopo (estril) en la cavidad vaginal de la paciente 4. Depositar el hisopo en un tubo que contenga 1 ml se solucin salina al 0.9%. 5. Mezclarlo y tomar una gota de esa suspensin 6. Depositarla en un portaobjeto 7. Colocar el cubre objeto sobre la muestra 8. Observar al microscopio con objetivo de 40 X 9. Reportar.

Frotis sanguneos para la identificacin de parsitos. Es un mtodo antiguo para la observacin de hemoparsitos por medio de tinciones, los parsitos a observar son Plasmodium, y Trypanosoma,

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN El uso del frotis sanguneo se fundamenta en la aplicacin de colorantes hematolgicos, que sirven para hacer evidente el parsito y tambin se basa en el conocimiento de la morfologa del mismo.

TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. Limpiar perfectamente la zona a puncionar. 2. Tomar firmemente la lanceta entre el dedo ndice y pulgar 3. Puncionar la zona y colocar una pequea gota de sangre cerca de un extremo de un portaobjeto limpio 4. Sostener otro portaobjeto que sirva de dispersor, darle una inclinacin de 30 grados, esperar que la gota se deslize sobre el borde. fig. No. 3. 5. De manera rpida correr el portaobjeto dispersor hacia la adelante para que la sangre se extienda y forme un frotis delgado. 6. Dejar secar al aire 7. Teir segn las indicaciones del colorante. 8. Observar con objetivo de inmersin.

Gota gruesa. La gota gruesa es una tcnica de concentracin para la bsqueda de Plasmodium que se encuentra en bajas proporciones

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN Se fundamenta en la defibrinizacin de la sangre y laquear los glbulos rojos, ya que pierden toda la hemoglobina lo que hace que los eritrocitos que estn acumulados se vean como fantasma y de esa manera no permiten la observacin de los parsitos.

TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. Se procede al mismo tiempo a hacer el frotis y la gota gruesa, en el mismo portaobjetos, en un extremo la gota gruesa y en el resto el frotis. En este procedimiento solo de describir la tcnica de gota gruesa. .2. Colocar una gota en uno de los extremos del portaobjetos, con el ngulo de otro portaobjetos extender la gota de manera circular esto es con el fin de desfibrinar la sangre. 3. Dejar secar y enseguida agregar una gota de agua corriente, para laquear la sangre. 4. Cuando la gota se observa como una pelcula blanquecina se deja secar nuevamente. 5. Fijar con metanol absoluto, dejar secar. 6. Teir con colorante de Giemsa, Wraight o May Grunwald. 7. Observar con objetivo de inmersin y reportar.

Tincin de Kinyoun. Esta tcnica se desarrolla para el diagnstico de criptosporidiosis, aunque tambin se usa para otros coccidios, se trata de una modificacin de la tincin de Ziehl-Neelsen.

METODOLOGA DE LA DETERMINACIN Se basa en el comportamiento cido-resistente de la cubierta de algunos parsitos como Isospora y Cryptosporidium parvum, los cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del colorante de contraste usado.

TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. Realizar un frotis de la muestra. 2. Dejar secar perfectamente. 3. Cubrir las gotas con unas gotas de alcohol metlico y dejar que seque. 4. Cubrir la preparacin con el colorante de fucsina durante 5 mins. 5. Lavar con alcohol cido y enjuagar con agua corriente 6. Agregar verde de malaquita o azul de metileno dejar actuar durante 1 min., lavar con agua corriente y dejar secar. 7. Observar con objetivo de inmersin. Interpretacin de la prueba: los parsitos cido alcohol resistentes se tien de color rojo.

MTODOS INDIRECTOS1. Este mtodo implica la deteccin indirecta del parsito, ya sea por la respuesta humoral que desencadena el paciente o por la captura de los antgenos que el parsito libera.2. Mtodos indirectos Debido a que el diagnstico de varias parasitosis incluso las intestinales puede resultar desalentador mediante pruebas habituales en heces fecales, se recomienda realizar pruebas indirectas especialmente para aquellos parsitos cuya identificacin en heces es difcil o para aquellos que pueden tener localizacin tisular ya sea en la pared intestinal u otros sitios de difcil acceso incluso por biopsia.3. Los mtodos indirectos hacen evidente la respuesta inmune especialmente humoral del hospedero ante antgenos parasitarios. La mayor parte permite identificar anticuerpos, pero tambin existen pruebas para encontrar clulas sensibilizadas, complejos antgeno anticuerpo llamados complejos inmunes y clulas efectoras de la respuesta inmune como reacciones del complemento y citocinas.TCNICAS DE AGLUTINACIN Aglutinacin directa:Suspensiones de parsitos enteros son enfrentadas a sueros de pacientes. Los Ac (Y) presentes aglutinan los parsitos, formando acmulos consistentes.Aglutinacin de partculas (ltex, betonita, carbn,etc.):Suspensiones de partculas inertes, con su superficie cubiertas de Ag parasitarios, son enfrentadas a sueros de pacientes. Los Ac presentes aglutinan estas partculas, formando acmulos consistentes ELISAMtodos moleculares el diagnstico de enfermedades parasitarias ha logrado un avance significativo gracias a la aplicacin de mtodos de diagnstico molecular basados en la hibridacin del cido nucleco. Estos estudios son factibles ya que todos los organismos contienen secuencias de cido nucleco que pueden ser usados en estudios de hibridacin que ayudan a determinar cepas, especies y gnero. Pueden detectarse simultneamente varios parsitos dependiendo de la especificidad del cido nucleco utilizado.

http://para1.wordpress.com/2008/06/21/harada-mori/http://para1.wordpress.com/2008/06/21/metodo-de-concentracion-por-flotacion-willis/https://portal.uah.es/portal/page/portal/epd2_profesores/prof121450/publicaciones/Presentaci%F3n1a.pdfhttp://www.bvs.hn/Honduras/pdf/Manual%20Parasitologia%202007.pdf PCR La PCR es una tcnica que permite llevar a cabo la sntesis in vitro de fragmentos de ADN. Est basada en una reaccin enzimtica catalizada por una ADN polimerasa, que produce mltiples copias (amplificacin) de un mismo fragmento de ADN. Para la reaccin se requiere: El ADN que va a copiarse, que servir como molde a la ADN polimerasa para hacer las copias. Polimerasa termoestable, habitualmente se utiliza la polimerasa de la bacteria Thermus aquaticus conocida como Taq polimerasa. Cebadores o primers especficos, que se unirn a los extremos del fragmento de ADN que quiere amplificarse. En este caso, se unirn a un fragmento de ADN del genoma del parsito. Se utiliza la especificidad de los cebadores para amplificar una regin del genoma del parsito cuando se encuentra presente en una muestra. Desoxirribonucletidos trifosfato, o dNTPs (dATP, dTTP, dCTP,dGTP), que son los sustratos para la sntesis de ADN, y un medio de reaccin adecuado, que contenga iones magnesio y otras sales necesarias para que se produzca la reaccin enzimtica, y que se consigue utilizando un tampn de reaccin apropiado para la enzima

Una biopsia Es un procedimiento diagnstico que consiste en la extraccin de una muestra total o parcial de tejido para ser examinada al microscopio.

WEBGRAFIA http://www.saberdeciencias.com/index.php/apuntes-de-parasitologia/156-caracteristicas-de-los-parasitos-mecanismos-de-accion-patogena-evasion-de-la-respuesta-inmunehttp://www.higiene.edu.uy/parasito/teo09/metest.pdfhttp://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdfhttp://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdfhttp://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/mi/13.htmhttp://www.slideshare.net/jmhr23/diagnstico-parasitolgicometodo-directoindirecto-y-molecular-i-parcial