LUZ ADRIANA LOAIZA SALAZARDOCENTE.BACTERIOLOGÍA APLICADAII SEMESTRE DE 2010.

Bacterias Gram Positivas CATALASA negativas a diferencia de los

géneros Micrococcus y Staphylococcus. Coloración de Gram: Cocos Gram

Positivos en pares o cadenas. Anaerobios facultativos. Fermentan la glucosa; produciendo ácido

Láctico sin CO2.

OXIDASA: Negativo. Composición de la pared celular:

Péptidoglicano; en el cual hay distintos tipos de CH, ácidos teicoicos, lipoproteínas y antígenos de membrana.

Amplia distribución en la naturaleza: humanos, animales, agua y suelo.

Temperatura óptima de crecimiento entre 25-45°C.

El sistema de Lancefield es un sistema de clasificación serológica de los estreptococos usado internacionalmente hoy día y desarrollado por la microbióloga estadounidense Rebecca Craighill Lancefield. Basado en la naturaleza antigénica de los hidratos de carbono de su pared celular. Como en los Streptococcus humanos: Grupos A,B,C,F, y G; o son ácidos lipoprotéicos de la pared Celular: Streptococcus del grupo D y Enterococcus.

Grupo A - Streptococcus pyogenes Grupo B - Streptococcus agalactiae Grupo C - Streptococcus equisimilis, Streptococcus equi, Streptococcus

zooepidemicus, Streptococcus dysgalactiae Grupo D - Enterococcus, Streptococcus bovis Grupo E - Streptococcus milleri  Grupo F - Streptococcus anginosus Grupo G - Streptococcus canis, Streptococcus dysgalactiae

S. Viridans no tienen ninguno de los antígenos de la pared celular.

1874: Billbroth, lo describe en casos de erisipela.

1879: Pasteur, lo aísla de la sangre de una mujer con sepsis puerperal.

1884: Primera vez que se nombra como especie pyogenes, Rosenbach.

Las infecciones por S. pyógenes son las más frecuentes. Niños entre los 4 y 7 años.

Período de Incubación: 1 – 3 días. Entradas: lesiones Cutáneas o mucosas.

Transmisión por gotas de saliva. (aire). La mayor parte de la infecciones afectan

el tracto respiratorio superior. Faringitis, amigdalitis, abscesos

periamigdalares, otitis media, sinusitis. Infecciones cutáneas: Pioderma,

escarlatina, erisipela, impétigo. Complicaciones: Fascitis Necrotizante,

fiebre reumática, bacteriemia, glomerulonefritis.

Escarlatina o fiebre

escarlata

Impétigo

Erisipela

Fascitis Necrotizante

1. HISOPADO FARINGEO: Se le indica al paciente, que abra bien la boca y que diga: “ah”. Se deprime en forma delicada la lengua con un baja lengua y se guía un hisopo hacia la porción posterior de la faringe, se pasa el hisopo con un movimiento de barrido suave por la mucosa que se encuentra por detrás de la úvula y entre los pilares amigdalinos.

Se debe tomar la muestra del exudado purulento. Luego de la recolección, el hisopo debe Colocarse en un tubo estéril; o en otro Recipiente adecuado para su transporte.

RECOMENDACIONES: Realizar un adecuado cepillado; no utilizar enjuague bucal.

Trate de no Rozar el hisopo contra la lengua; o el paladar; para no contaminar la muestra con FN.

MUESTRAS ÓTICAS: La toma de la muestra se realiza en función de la sospecha diagnóstica. Al utilizar torundas, se recomienda usar dos por separado, una para una tinción de Gram y otra para cultivo.

Otitis externa. Utilizando una torunda se toma la muestra del canal del oído externo; en caso de tomarse a partir de forúnculos se debe realizar por aspiración; y si es necesario también podrían tomarse muestras por desbridamiento quirúrgico.

Otitis media. La muestra mas representativa es la obtenida por timpanocentesis. El contenido del oído medio se debe extraer por aspiración, evitando la contaminación con la microbiota habitual del canal del oído externo. En el caso de que exista perforación timpánica espontánea puede utilizarse el exudado o pus que fluye al canal externo del oído medio. Esta muestra se tomará mediante hisopo.

PROTEÍNA M: principal factor de virulencia, responsable de la multiplicación celular en el huésped.

PARED CELULAR: Péptidoglicano y polisacáridos, toxicidad tisular.

ESTREPTOLISINAS O y S: destruyen las membranas de los eritrocitos (Titulo ASTO).

EXOTOXINAS PIROGÉNICAS: A, B, C, responsables de la fiebre, exantema y enantema, sepsis y Síndrome de Shock Tóxico.

ENZIMAS: hialuronidasa, Dnasas, estreptoquinasas. Favorecen la proliferación tisular de la infección.

Características Macroscópicas: Colonias blancas o grises, de 0.6 a 2.0 mm de diámetro rodeadas de una zona completa de HEMOLISIS (β- hemolítico),

de 2 a 3 veces el diámetro de la colonia; superficie lisa o mate, algunas cepas pueden ser mucoides debido a la presencia de gran cantidad de material

capsular.

S. pyogenes en Agar Sangre de Carnero.

Características Microscópicas: Coloración de Gram: Cocos Gram

positivos, agrupados en pares o cadenas, tamaño de 0,5 μm - 2 μm.

Características Bioquímicas: Prueba de la Bacitracina: Disco de

0.04U, Agar Sangre, no hay crecimiento alrededor del Antibiótico. SENSIBLE.

Cualquier zona de inhibición del crecimiento determina una prueba positiva.

PYR, Pirrolidonil-arilamidasa: Hidrólisis de la enzima PYR (pirridonil ß-naftilamida) debido a que poseen la enzima L-piroglutamil aminopeptidasa. POSITIVA.

Prueba del Trimetroprim Sulfametoxazol: Agar Sangre; Sensidisco de TXS; 1,25 μg (1) y 23,75 μg (2). Se observa crecimiento alrededor del antibiótico. RESISTENTE.

Crecimiento en Bilis Esculina y NaCl 6.5 %: No hidroliza la Esculina en Esculetina; no hay ennegrecimiento del Medio; no tolera altas concentraciones salinas. El Caldo con NaCl al 6.5% no se torna turbio.

Prueba del Hipurato de Sodio: no hay aparición de una coloración azul-púrpura, en el caldo con Hipurato de Na; lo que indicaría una reacción positiva que revela la presencia de glicina, producto final de la hidrólisis del hipurato.

Prueba de CAMP: No hay producción de sinergia hemolítica con el S. aureus B- lisina positivo; se evidencia porque no aparece la “punta de flecha” hemolítica. Sin factor de Monofosfato de adenina cíclica.

Antibiograma: penicilinas (bencilpenicilinas, oxacilina, meticilina, penicilina G, ampicilina). Macrólidos: eritromicina, claritromicina.

CONCLUSIONES: Requieren de bajas concentraciones de Oxígeno para su crecimiento, metabolismo fermentativo, productor de lactato, pero no de gas. Microorganismo capsulado.

1933; clasificación Lancefield; Grupo B. 1935: Lancefield lo recupera en cultivo vaginal

de puerperas asintomáticas. 1938; Fry describe 3 casos fatales de sepsis

puerperal 1960: se empieza a considerar de mayor

incidencia en la patología. 1970: Patógeno bien definido en Maternidades. 1980: A la fecha se considera como el principal

agente de infección bacteriana neonatal.

Los estreptococos del grupo B son todos encapsulados.

Forma parte de la flora normal del TG. Coloniza la vagina y el recto de las mujeres

(10-35%) y en embarazadas hasta un 60%. Colonización suele ser asintomática. Su presencia en el aparato genital femenino

contribuye a la aparición de enfermedad en el recién nacido. Inicio Temprano – Inicio Tardío.

SEPSIS NEONATAL: neumonía, meningitis- corioamnionitis, endometritis, IVU, bacteriemia

Infecciones, endocarditis.

Frotis Rectal; Líquido amniótico; secreciones de material purulento; Frotis Vaginal.

El bebé se infecta al ingerir el líquido amniótico contaminado con S. agalactiae.

Ácido N- acetilneuramínico: Cápsula, inhibe la cascada de la coagulación.

C5a peptidasa: Interfiere en el proceso de quimiotaxis de los neutrófilos. Adhesina.

B- hemolisina – citolisina: Infecciones pulmonares. Formadoras de poros celulares.

Ácido lipoteicoico: citotóxico para células encéfalicas embrionarias.

Representación Gráfica del Génoma de S. agalactiae.

Características Macroscópicas: Colonias blancas o grises, de 1.0 mm –

3.0mm de diámetro; el margen de hemólisis alrededor de la colonia es más pequeño que para el grupo A y

algo mas tenue; además el 11% de las cepas pueden ser no hemolíticas. Lisas,

con bordes enteros.

S. agalactiae no hemolítica S. agalactiae hemolítica.

Características Microscópicas: Coloración de Gram: Cocos Gram

positivos, agrupados en pares o cadenas, tamaño de 0,6 μm – 2.3 μm.

Características Bioquímicas: Prueba de la Bacitracina: Disco de

0.04U, Agar Sangre, hay crecimiento alrededor del Antibiótico. RESISTENTE.

PYR, Pirrolidonil-arilamidasa: NO hay hidrólisis de la enzima PYR (pirridonil ß-naftilamida) debido a que no poseen la enzima L-piroglutamil aminopeptidasa. NEGATIVA.

S. agalactiae S. pyogenes

Prueba del Trimetroprim Sulfametoxazol: Agar Sangre; Sensidisco de TXS; 1,25 μg (1) y 23,75 μg (2). Se observa crecimiento alrededor del antibiótico. RESISTENTE.

Crecimiento en Bilis Esculina y NaCl 6.5 %: No hidroliza la Esculina en Esculetina; no hay ennegrecimiento del Medio; no tolera altas concentraciones salinas. El Caldo con NaCl al 6.5% no se torna turbio.

Prueba del Hipurato de Sodio: hay aparición de una coloración azul-púrpura, en el caldo con Hipurato de Na; lo que indica una reacción positiva que revela la presencia de glicina, producto final de la hidrólisis del hipurato.Prueba de CAMP: hay producción de sinergia hemolítica con el S. aureus B- lisina positivo; se evidencia porque aparece la “punta de flecha” hemolítica. Con factor de Monofosfato de adenina cíclica.

Antibiograma: penicilinas (bencilpenicilinas, oxacilina, meticilina, ampicilina). Macrólidos: eritromicina, claritromicina. Cefotaxime, Ceftriazone, Meropenem.

CONCLUSIONES: Requieren de bajas concentraciones de Oxígeno para su crecimiento, La identificación definitiva de EGB requiere la demostración del antígeno específico de grupo, por ejemplo mediante la aglutinación con partículas de látex. Microorganismo capsulado.

El Streptococus pneumoniae fue identificado como causa de neumonía entre los años 1880-1890.

En 1926 se le asigno el nombre de diplococus pneumoniae basándose en al tinción de Gram.

Recién en 1974 se le dio el nombre de Streptococus pneumoniae debido a que produce Neumonía. Desde ahí en adelante también se han identificado 90 serotipos lo cual se da ya que cada uno se estos serotipos posee una capa de polisacárido especifico.

Neumococo es un patógeno casi exclusivamente humano causante de un gran número de infecciones como neumonía, endocarditis y de procesos invasivos severos como meningitis, septicemia entre otras. particularmente en ancianos, niños y personas inmunodeprimidas. El hábitat natural de neumococo es la faringe.

POLISACARIDO CAPSULAR: adherencia, y replicación tisular. Evasión fagocítica

PROTEINA A DE SUPERFICIE: Favorece la reacción inflamatoria y la extensión de la infección. Previene la activación del Complemento.

ÀCIDO LIPOTEICOICO: citotoxicidad. Enzimas: Neumolisina, autolisina ,

Neuraminidasa.

Características Macroscópicas:

Colonias blancas o grises, de 2.0 mm – 3.0mm, con elevación central;

mucoides, bordes enteros. Presentan una zona de Alfa- hemólisis. (lisis

parcial de los eritrocitos biliverdina. )

S. pneumoniae.

Características Microscópicas:

Coloración de Gram: Diplococos Gram positivos, tamaño de 1,2 μm - 1,8 μm.

Características Bioquímicas: Prueba de la Optoquina: Se basa en la sensibilidad de S.pneumoniae a

una concentración menor o igual 5ug/ml de hidroxicuprina (optoquina). Halo mayor a 15 mm. SENSIBLE

Características Bioquímicas:Prueba de la solubilidad en bilis: Se utiliza esta prueba para diferenciar entre S. pneumoniae, soluble, en bilis y otras especies de estreptococos alfa hemolíticos, “insolubles” en bilis.

Las sales biliares utilizadas son el desoxicolato de sodio o el taurocolato de sodio. Las sales biliares hacen descender la tensión superficial en la interfase medio-membrana, provocan una descomposición de la membrana celular y aceleran el proceso autolítico natural del neumococo activando las enzimas por combinación de las sales biliares con el neumococo. TUBO: DESOXICOLATO AL 10%, PLACA: DESOXICOLATO AL 2%

Crecimiento en Bilis Esculina y NaCl 6.5 %: No hidroliza la Esculina en Esculetina; no hay ennegrecimiento del Medio; no tolera altas concentraciones salinas. El Caldo con NaCl al 6.5% no se torna turbio.

Es un género de bacterias del ácido láctico del división Firmicutes. Los miembros de este género eran clasificados como Streptococcus Grupo D hasta 1984 cuando los análisis de ADN genómicos indicaron que un género separado era más apropiado

Habitan en el agua; en el tracto gastrointestinal de Humanos y Animales.

Las especies más representativas son E. faecalis E. faecalis y E. faecium. y E. faecium.

Puede causar infecciones comprometidas en humanos, especialmente en ambientes hospitalarios.

La existencia de enterococos se potencia porque ha tenido la habilidad de adquirir resistencia a virtualmente todos los antibióticos en uso.

Enterococcus causa importantes infecciones clínicas, incluyendo infección urinaria, bacteremia, endocarditis, diverticulitis y meningitis.

Son indicadores de contaminación fecal, por lo que su presencia en los alimentos indica falta de higiene.

SUSTANCIA DE AGREGACIÓN (AS): Potenciación de la conjugación de

plásmidos. Adhesión a los tejidos del hospedero. Promoción de la internalización y la

supervivencia en los fagocitos.

HEMOLISINA Y GELATINASA.

Características Macroscópicas:

Colonias blancas o grises, de 0,5 mm – 1.0mm, con elevación central; lisas

de bordes enteros. Alfa hemolíticas o no hemolíticas.

Características Microscópicas: Coloración de Gram: Cocos Gram

positivos, agrupados en pares o cadenas, tamaño de 0,5 μm - 2 μm.

Crecimiento en Bilis Esculina y NaCl 6.5 %: Hidroliza la Esculina en Esculetina; hay ennegrecimiento del Medio; tolera altas concentraciones salinas. El Caldo con NaCl al 6.5% no torna turbio.

PRUEBA DE LEUCINA AMINOPEPTIDASA (LAP) Y PIRROLIDONIL ARILAMIDASA (PYR)

POSITIVAS LAS 2 PARA ENTEROCOCCUS.

Imagen Api 20 strep; semiautomatizado; E. faecalis.

KONEMAN; Diagnóstico microbiológico. 6ta edición. Ed. Panamericana. Pág: 641-685.

BROCK: Biología de los Microorganismos. 10ª Edición.

www.hinari.com www.fisterra.com. www.scholargoogle.com