fraccionamiento subcelular-laboratorio
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Esta practica llevada a cabo en el laboratorio, permite entender detalladamente el fraccionamiento subcelular. En los resultados obtenidos se puede visualizar los diferentes componentes celulares (citoplasma, mitocondrias, citosol, etc)TRANSCRIPT
PRACTICA # 1
FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR
¿QUÉ ES EL FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR?
Es la extracción de un homogeneizado de los órganos o tejidos.
Este homogeneizado esta formado por las células rotas de los órganos o tejidos.
El homogeneizado debe ser conservado en una solución que le brinde el medio adecuado para la conservación de los organelos.
METODO:
CENTRIFUGACION DIFERENCIAL:Consiste en someter el homogeneizado a
diferentes velocidades en la centrifuga para lograr separaciones, basadas en la diferencia de densidades y tamaño y peso de los organelos.
Este tipo de centrifugación debe hacerse a una temperatura de 4°C.
MATERIALES:
Hígado de pollo KCl 0.154 M Tijera Jeringa Algodón Placa Petri Vaso de precipitados
Tubos de ensayo Gradilla Licuadora Centrifuga Balanza Embudo
EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS Y ORGANELOS.
1° colocamos el hígado en la placa Petri.
2° inyectar KCl 0.154M hasta que expulse los residuos de sangre hasta quedar de un color claro.
3° en la misma placa, triturar con una tijera.
4° agregarle la misma cantidad de KCl 0.154M y llevarlo a la licuadora para homogeneizar.
5° filtrar el homogeneizado y luego colocarlo en los tubos de ensayo y posteriormente contrapesar para colocarlo en la centrifuga.
6° centrifugar a 1000g durante 10’.
7° retirar de la centrifuga y extraer el sobrenadante en otro tubo de ensayo y conservar el sedimento, donde se encuentran las células y núcleos.
8° colocar el sobrenadante nuevamente en la centrifuga a 10000g durante 30’.
9° retirar nuevamente el centrifugado y extraer el sobrenadante, que en este caso es la Fracción Mitocondrial, donde se encuentran las mitocondrias y lisosomas.
DISCUSIÓN:
El producto obtenido no tuvo un alto porcentaje de rendimiento, debido a que el hígado utilizado no era lo suficientemente fresco, y debido a esto los organelos y células pueden haber muerto y por la temperatura del medio donde nos encontrábamos.
CONCLUSION:
Finalmente se pudo extraer lo suficiente como para identificar en el sedimento las celular y núcleos, en la primera centrifugada, y las mitocondrias y lisosomas, en la segunda centrifugada.