en kræftcelles egenskaber (udvalg):
DESCRIPTION
Er resistent over for " programmeret celledød ". Kan danne metastaser. En kræftcelles egenskaber (udvalg):. Normal celle. Kræftcelle. Deler sig ukontrolleret. Gen-forandringer. Tumordannelse – ophobning af forandringer i cellens gener. Spirende kræftceller. Fuldmodne kræftceller. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/1.jpg)
En kræftcelles egenskaber (udvalg):
Deler sig ukontrolleret
Normal celle Kræftcelle
Er resistent over for "programmeret celledød"
Kan danne metastaser
![Page 2: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/2.jpg)
Tumordannelse – ophobning af forandringer i cellens generTumordannelse – ophobning af forandringer i cellens generTumordannelse – ophobning af forandringer i cellens generTumordannelse – ophobning af forandringer i cellens gener
Gen-forandringerGen-forandringer
![Page 3: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/3.jpg)
Normale cellerSpirende kræftceller
Fuldmodne kræftceller
![Page 4: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/4.jpg)
To hovedtyper af cancerrelaterede generTo hovedtyper af cancerrelaterede generTo hovedtyper af cancerrelaterede generTo hovedtyper af cancerrelaterede gener
1. Tumorsuppressor-gener1. Tumorsuppressor-gener
Gener, der forhindrer en normal celle i at blive til en kræftcelleGener, der forhindrer en normal celle i at blive til en kræftcelle- skal - skal inaktiveresinaktiveres for at have en kræftfremkaldende effekt for at have en kræftfremkaldende effekt
1. Tumorsuppressor-gener1. Tumorsuppressor-gener
Gener, der forhindrer en normal celle i at blive til en kræftcelleGener, der forhindrer en normal celle i at blive til en kræftcelle- skal - skal inaktiveresinaktiveres for at have en kræftfremkaldende effekt for at have en kræftfremkaldende effekt
2. Proto-oncogener2. Proto-oncogener
Gener, der kan omdanne en normal celle til en kræftcelleGener, der kan omdanne en normal celle til en kræftcelle- skal - skal aktiveresaktiveres for at have en kræftfremkaldende effekt for at have en kræftfremkaldende effekt
2. Proto-oncogener2. Proto-oncogener
Gener, der kan omdanne en normal celle til en kræftcelleGener, der kan omdanne en normal celle til en kræftcelle- skal - skal aktiveresaktiveres for at have en kræftfremkaldende effekt for at have en kræftfremkaldende effekt
![Page 5: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/5.jpg)
Inaktivering af Inaktivering af tumorsuppressor-tumorsuppressor-genergenerInaktivering af Inaktivering af tumorsuppressor-tumorsuppressor-genergener
772211 33 44 55 665’5’ 3’3’MutationMutationMutationMutation
T182IT182IT182IT182I
MetyleringMetylering MetyleringMetylering 772211 33 44 55 665’5’ 3’3’
CHCH33CHCH33 CHCH33CHCH33 CHCH33CHCH33
DeletionDeletionDeletionDeletion 772211 33 665’5’ 3’3’
![Page 6: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/6.jpg)
Inaktivering af Inaktivering af tumorsuppressor-tumorsuppressor-genergenerInaktivering af Inaktivering af tumorsuppressor-tumorsuppressor-genergener
772211 33 44 55 665’5’ 3’3’MutationMutationMutationMutation
T182IT182IT182IT182I
![Page 7: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/7.jpg)
Mutation: Ændring i rækkefølgen af baser i DNA-kodenMutation: Ændring i rækkefølgen af baser i DNA-koden
-Arg-Lys-Met-Lys-Pro-Trp-Leu--Arg-Lys-Met-Lys-Pro-Trp-Leu-
-CGG-AAG-ATG-AAG-CCC-TGG-TTG--CGG-AAG-ATG-AAG-CCC-TGG-TTG-
Normal:Normal:** DNADNA
ProteinProtein
Efter mutation:Efter mutation:
-Arg-Lys-Met-Lys-His-Trp-Leu--Arg-Lys-Met-Lys-His-Trp-Leu-
-CGG-AAG-ATG-AAG-CAC-TGG-TTG--CGG-AAG-ATG-AAG-CAC-TGG-TTG-** DNADNA
ProteinProtein
![Page 8: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/8.jpg)
Påvisning af mutationer
Mutant Normal
A C G T A C G T
Ile Asn254 254
ACTA
C/TT/AACCA
[
2 - Identifikation ved sekvensanalyse1 – Påvisning ved PCR/DGGE
1 3 4 5 62 7 98
![Page 9: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/9.jpg)
DNA meltingDNA melting
Gradual heatingGradual heatingAbrupt heatingAbrupt heating
![Page 10: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/10.jpg)
--
++
Incr
easi
ng d
enat
uran
t co
nc.
Incr
easi
ng d
enat
uran
t co
nc.
Ele
ctro
phor
esis
Ele
ctro
phor
esis
Wild-type DNAWild-type DNA Mutant DNAMutant DNA
**
**
****
**
**
Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)
![Page 11: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/11.jpg)
PCRPCR
DGGEDGGE
Mutant DNAMutant DNA
Wild-type DNAWild-type DNA
**
**
**** HomoduplicesHomoduplices
HomoduplicesHomoduplices
HeteroduplicesHeteroduplices
Heteroduplex analysisHeteroduplex analysis
**
HeteroduplicesHeteroduplices
**
![Page 12: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/13.jpg)
ACCCGTCAGATGCGATGTGGGCAGTCTACGCTAC
CH3 CH3
CH3CH3
DNACH3 CH3
CH3CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
![Page 14: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/14.jpg)
Maintenance methylation (after DNA replication):
ACCCGTCAGATGCGATGTGGGCAGTCTACGCTAC
CH3 CH3
ACCCGTCAGATGCGATGTGGGCAGTCTACGCTAC
CH3 CH3
CH3CH3
DNMT1
![Page 15: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/15.jpg)
Promoter Exon 1 Exon 2
Transcription
CpG island
DNA methylation => transcriptional silencing
X
![Page 16: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/16.jpg)
Bisulfite modification of DNA Bisulfite modification of DNA
5’-CCGACCG-3’5’-CCGACCG-3’
CH3 CH3 CH3 CH3
Methylated DNAMethylated DNA
5’-CCGACCG-3’5’-CCGACCG-3’
Sodium bisulfiteSodium bisulfite
5’-UCGAUCG-3’5’-UCGAUCG-3’
CH3 CH3 CH3 CH3
5’-UUGAUUG-3’5’-UUGAUUG-3’
5’-TCGATCG-3’5’-TCGATCG-3’
PCRPCR
5’-TTGATTG-3’5’-TTGATTG-3’
Unmethylated DNAUnmethylated DNA
![Page 17: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/17.jpg)
Detection of aberrant APC methylation by melting curve analysisDetection of aberrant APC methylation by melting curve analysis
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
Methylated APCMethylated APCUnmethylated APCUnmethylated APC
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
#8#8
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
#7#7
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
#10#10
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
80 82 84 86 88 90
Temperature (°C)
-dF/
dT
#9#9
![Page 18: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/18.jpg)
Ac
Ac Ac
Ac
Ac Ac
Ac
Ac Ac
Ac
Ac Ac
Ac
Ac Ac
A c
Ac Ac
M B DM B D
M B D
M B DM B D
M B D
HD
HD
HDHDHD
HDHDHDHDHDHD
HDHDHD
MBD Methyl-CpG-binding domain protein
HDHD Histone deacetylase
Core histones
![Page 19: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/19.jpg)
Ac
M B DM B DM B D
M B D
M B D
M B D
HDHD
HD
HDAcHDHDHDHD
M B D
Ac
Ac
AcAcAc
Ac
Ac
AcAcAcAcAc
Ac
AcAc
Ac
Ac
Ac
Ac
AcAc
![Page 20: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/20.jpg)
Ac
M B DM B DM B D
M B D
M B D
M B D
HDHD
HD
HDAcHDHDHDHD
M B D
Reactivation of gene transcription
Inhibitors of histone deacetylases(Trichostatin A)
AcAc Ac
Inhibitors of DNA methylation(5-aza-2’-deoxycytidine)
![Page 21: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/21.jpg)
TSA + 5
-aza
-Cdr
TSA5-
aza-
Cdr
HO2
ER
GAPDH (control)
MDR1
CacNa1g
Reactivation of gene transcription in breast cancer cells (MDA-MB-231)by inhibition of DNA methylation and/or histone deacetylation
![Page 22: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/22.jpg)
Methotrexate (MTX)
A reduced folate analogue
Used in the treatment of various malignancies
Acquired resistance is a major problem in cancer treatment
Cellular uptake occurs mainly via the reduced folate carrier (RFC)
Methotrexate (MTX)
A reduced folate analogue
Used in the treatment of various malignancies
Acquired resistance is a major problem in cancer treatment
Cellular uptake occurs mainly via the reduced folate carrier (RFC)
![Page 23: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/23.jpg)
MTX
Lysosome
MTX
MTX
FPGS
MTX(glu)nMTX(glu)n
MTX
GGH
MTX
FH2 FH4
DHFRPurine synthesis (ATP, GTP)
UMPTMP
DNA Nucleus
MTX
RFC
MTX
MTX
MTX
FPGS
MTX(glu)nMTX(glu)n
MTX
GGH
MTX
2 4
DHFR(ATP, GTP)
MTX
![Page 24: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/24.jpg)
0
20
40
60
80
100
0.001 0.01 0.1 1 10 100MTX concentration (µM)
Ce
ll n
um
be
r (%
of
con
tro
l)
MDA-MB-231
MCF-7
0
20
40
60
80
100
0.001 0.01 0.1 1 10 100MTX concentration (µM)
Ce
ll n
um
be
r (%
of
con
tro
l)
MDA-MB-231
MCF-7
MDA-MB-231 breast cancer cells are inherently MTX resistantMDA-MB-231 breast cancer cells are inherently MTX resistant
0
20
40
60
80
100
0.001 0.01 0.1 1 10 100MTX concentration (µM)
Ce
ll n
um
be
r (%
of
con
tro
l)
vector
RFC.3
RFC.5
RFC-EGFP.1
RFC-EGFP.2
0
20
40
60
80
100
0.001 0.01 0.1 1 10 100MTX concentration (µM)
Ce
ll n
um
be
r (%
of
con
tro
l)
vector
RFC.3
RFC.5
RFC-EGFP.1
RFC-EGFP.2
Transfection of MDA-MB-231 cells with RFCTransfection of MDA-MB-231 cells with RFC
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:39990
![Page 25: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/25.jpg)
RFC promoter methylation in MDA-MB-231 cellsRFC promoter methylation in MDA-MB-231 cells
UU
MM
Methylation-specific PCRMethylation-specific PCR
MCF-7
MCF-7
MDA-MB-231
MDA-MB-231
Sss I
Sss I
PBLPBL
H 2O
H 2O
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:39990
![Page 26: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/26.jpg)
RFC
0.2 µ
M 5
-Aza
-CdR
0.1 µ
M 5
-Aza-C
dR
TSA + 0
.5 µ
M 5
-Aza-C
dR
TSA + 0
.2 µ
M 5
-Aza
-CdR
TSA0.5
µM
5-A
za-C
dR
G AP DH
M DA-MB-231M CF-7
M
500 bp600 bp
300 bp
200 bp
H O2
Reactivation of RFC expression by 5-aza-2’-deoxycytidine
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:39990
![Page 27: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/27.jpg)
00
2020
4040
6060
8080
100100
0.010.01 0.10.1 11 1010 100100
MTX concentration (µM)MTX concentration (µM)
Cel
l nu
mb
er (
% o
f co
ntr
ol)
Cel
l nu
mb
er (
% o
f co
ntr
ol) ControlControl
DPMDPM
5-aza-CdR5-aza-CdR
5-aza-CdR + DPM5-aza-CdR + DPM
5-Aza-2’-deoxycytidine + dipyridamole increases MTX sensitivity in MDA-MB-231 cells
5-Aza-2’-deoxycytidine + dipyridamole increases MTX sensitivity in MDA-MB-231 cells
Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:39990Worm et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:39990
![Page 28: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/28.jpg)
En kræftcelles egenskaber (udvalg):
Deler sig ukontrolleret
Normal celle Kræftcelle
Er resistent over for "programmeret celledød"
Kan danne metastaser
![Page 29: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/29.jpg)
En kræftcelles egenskaber (udvalg):
Deler sig ukontrolleret
Normal celle Kræftcelle
![Page 30: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/30.jpg)
Skematisk fremstilling af celledelingscycklus
![Page 31: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/31.jpg)
En celle i deling
![Page 32: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/32.jpg)
Checkpoint: Kontrolpunkt, hvor celledeling stopper, og DNA-skader repareres, inden delingen går videre
![Page 33: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/33.jpg)
Checkpoints kontrolleres af proteiner – oncogener og tumorsuppressorer
Nogle aktører i kontrol af cellecyklus (G1)
![Page 34: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/34.jpg)
Normalt DNA: Proteinet varetager sin funktion og holder cellens deling i skak
![Page 35: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/35.jpg)
Muteret DNA: Proteinet er defekt, og cellens deling løber løbsk
![Page 36: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/36.jpg)
Forskellige gen-forandringer kan have samme effekt
![Page 37: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/37.jpg)
Genetiske forandringer i Genetiske forandringer i p16-Rb-Cdk4p16-Rb-Cdk4-signalvejen i -signalvejen i modermærkekræftmodermærkekræft
123456789
101112131415161718192021222324
Rb Cdk4p16
![Page 38: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/38.jpg)
p53 – DNA’ets vogterp53 – DNA’ets vogter
p53
![Page 39: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/39.jpg)
Ved begrænset DNA-skade stopper p53 cellecyklus
![Page 40: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/40.jpg)
Ved begrænset DNA-skade stopper p53 cellecyklus
![Page 41: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/41.jpg)
Ved omfattende DNA-skade inducerer p53 celledød
![Page 42: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/42.jpg)
Ved omfattende DNA-skade inducerer p53 celledød
![Page 43: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/43.jpg)
MånederMåneder
Ingen mutationerIngen mutationer
00
,2,2
,4,4
,6,6
,8,8
11
00 2020 4040 6060 8080 100100 120120 140140 160160
Ove
rleve
lse
Ove
rleve
lse
Lymfekræft: Sammenhæng mellem Lymfekræft: Sammenhæng mellem overlevelse og mutationer i overlevelse og mutationer i p16 p16 og og p53p53
Lymfekræft: Sammenhæng mellem Lymfekræft: Sammenhæng mellem overlevelse og mutationer i overlevelse og mutationer i p16 p16 og og p53p53
Mutationer i entenp16p16 ellereller p53p53Mutationer i entenp16p16 ellereller p53p53
Mutationer i bådep16p16 ogog p53p53Mutationer i bådep16p16 ogog p53p53
![Page 44: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/44.jpg)
Nedarvning af modermærkekræftNedarvning af modermærkekræft
![Page 45: En kræftcelles egenskaber (udvalg):](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022051019/5681591b550346895dc6434e/html5/thumbnails/45.jpg)
Nedarvning af modermærkekræftNedarvning af modermærkekræft