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独特的层析选择性,适用于各种工艺 蛋白层析产品选择指南 www.pall.com/lab

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独特的层析选择性,适用于各种工艺

蛋白层析产品选择指南

www.pall.com/lab

您关注什么?

您的工作是不是需要深

入郊外,收集并分析水、

空气或者其他环境样品?

您或许在高等院校或者公司

任职,从事学术研究或者质量

控制。从大学到工业生产再到合作研

究组织,实验室的要求总是独特而多样的。

从室外到实验室,无论您关注什么,颇尔生命科学伴随您成功的

每一步,以创新性的技术助您从新的角度探索生命。

我们拥有广泛的产品线、丰富的实践知识和雄厚的技术实力,可

以为您提供过滤、分离和纯化等一系列产品和完整的解决方案,

让您充分发挥实验设备的潜能。我们的方案平台可确保我们不断

稳定地推出新品,简化并改进您的处理流程。我们的全球技术支

持团队也可以在产品选型和应用优化方面助您一臂之力。从郊外

作业到实验室分析,颇尔始终专注于您的需求。

实验室技术支持

电子邮箱

网址

若您正在使用本目录任意一款产品,我们在过滤、分离和纯化

或者领域的资深专家团队可以为您提供经验丰富的技术支持,

让您获得更理想的结果。

颇尔中国生命科学

上海:(021)6169 5656北京:(010)8722 5588广州:(020)8410 2211

该图标表示当前页介绍的是最

新产品。新产品编号旁边带有

标志。

颇尔公司(Pall Corporation)于1946年由颇尔博士(Dr. David B Pall)创建于美国纽约,1957年在纽约股票市场上市(代码:PLL),是目前世界上最大的专注

于过滤、分离、纯化技术及产品研制的跨国公司。

颇尔产品遍及工业及生命科学的各个领域,具有从上游研发到下游大规模生产最完善的产品线,同时拥有全球权威的除菌过滤验证能力。颇尔公

司以其专业、创新的优秀品质成为全球过滤领域的领导者。

颇尔公司于1993年进入中国市场,并成立全资子公司——颇尔过滤器(北京)有限公司,2008年在上海张江药谷中心成立了颇尔全球第六大生命科

学技术研发中心,为中国的生物研发和制药市场提供全球领先水平的技术支持服务。并连续多年被美国财富杂志《Forture》评为全美500强之一。

关于颇尔公司

从室外到实验室 PALL 改变传统过滤观点

颇尔技术助您开启生命探索新视角

产品目录

PALL层析产品选择指南 ………………………………………………………………… 01-06

如何选择AcroPrepTM 预装层析柱 …………………………………………………………… 07

蛋白和DNA纯化-在线参考文献库 ………………………………………………………… 08

AcroSrepTM 1ml 离子交换预装柱 ………………………………………………………… 09-10

AcroSepTM 1ml 亲和层析预装柱 ………………………………………………………… 11-12

AcroSepTM 1ml 混合模式预装柱 ………………………………………………………… 13-14

PRC 层析预装柱 ………………………………………………………………………… 15-16

HA Ultrogel 羟基磷灰石填料 ………………………………………………………………… 17

Blue Trisacryl M填料 ………………………………………………………………………… 18

Heparin HyperD® M填料 …………………………………………………………………… 19

IMAC HyperCelTM 金属螯合填料 …………………………………………………………… 20

Lysine HyperD® 亲和填料 …………………………………………………………………… 21

Protein A Ceramic HyperD® F 填料 ………………………………………………………… 22

Ceramic HyperD 离心交换填料 ………………………………………………………… 23-24

Q 和S HyperCel 离子交换填料 ………………………………………………………… 25-26

HEA和PPA HyperCel 混合模式填料 ………………………………………………………… 27

MEP HyperCelTM 混合模式填料 ……………………………………………………………… 28

Ultrogel® AcA 凝胶过滤层析填料 ……………………………………………………… 29-30

SDR HyperD® 去除表面活性剂填料 ………………………………………………………… 31

实验室规模的LRC层析柱 …………………………………………………………………… 32

除了上图中所列出的填料,颇尔公司还提供Ceramic HyperD,Spherodex®,Spherosil®,Trisacryl®以及Trisacryl Plus等多种形式的填料。请联系您当地的颇尔代表以获取更多信息。

离子交换层析

填料 产品编号

产品编号

产品编号

产品编号

产品编号

产品编号

平均粒径(um) 工作/清洗pH 应用

膜层析 典型动态结合载量 可选形式 应用

Q HyperCelS HyperCel

Mustang Q膜

Mustang S膜

Q Ceramic HyperD 20S Ceramic HyperD 20

Q Ceramic HyperD FS Ceramic HyperD FDEAE Ceramic HyperD FCM Ceramic HyperD F

MSTG25S6

MSTG25Q6 一次性使用的囊式可重复使用的XT囊式

一次性使用的囊式

2004020048

20066200622006720050

2019620195

高产率的分离 重组蛋白单克隆抗体(MAbs) 血制品生物仿制药 疫苗

精细纯化阶段的杂质去除(DNA,HCP,病毒,内毒素)

重组蛋白 质粒纯化蛋白,疫苗 MAbs捕获阶段 免疫球蛋白纯化

多肽质粒纯化重组蛋白的高分辨分离

特异性捕获(昆虫病毒)单抗物料多聚体去除的精细纯化

质粒、病毒、大分子量蛋白质的捕获和寡核苷酸纯化保护层析柱,为后续层析步骤增加选择性

75

混合模式层析

羟基磷灰石层析

分子筛层析

填料

填料

填料

填料

12035

20033

24775

产品编号

20078

25896

20029

20059

20093

24892-02223019-02323022-02423015-025

20250

20260

一次性囊式滤器 从缓冲液,水,盐和工艺流体中去除内毒素

重组抗体片段的捕获从多聚体中分离单抗单体

直接捕获多种不同类型、亚型和种属的多抗与单抗

MSTG25E3

从生物流体中去除溶剂和去污剂

酶和重组蛋白

低盐浓缩物中蛋白的直接捕获

免疫球蛋白分离

免疫球蛋白

脱盐

蛋白质,酶

生长激素

生长激素

纤溶酶原 糖蛋白

生长因子 干扰素凝结因子

凝结因子

脂蛋白

脂蛋白

分离,纯化分子量确定

金属螯合亲和层析(IMAC)

猪肝素

L-赖氨酸

亚胺-乙酰乙酸(IDA)

重组蛋白A

蓝色染料

蓝色染料

配基

平均粒径(μm)分离范围/排阻极限(Da)

平均粒径(μm)

应用工作/清洗pH

工作/清洗pH

工作/清洗pH

工作/清洗pH

平均粒径(μm)

平均粒径(μm)

典型 DBC 应用

应用

应用

应用

可用形式

我们提供的包装有:1ml 预装柱,5ml,25ml,100ml,1L等更大包装。

糖蛋白,疫苗

亲和及金属螯合层析

蛋白层析选择指南

1

蛋白层析产品

蛋白层析产品

PALL层析产品为您提供新的独特的选择性

金属螯合亲和层析

金属螯合亲和层析使用蛋白或者其他分子与金属离子有亲和结合

性。这种亲和吸附力来自于金属离子与蛋白氨基酸特定暴露侧链

之间的配位键。存在于多种蛋白中的组氨酸与过渡金属Cu–、

Zn2+、Ni2+或者Fe3+等形成配位复合物。

IMAC HyperCel填料使IDA(亚氨乙酸)作为螯合配位体,固定

化在HyperCel填料上。HyperCel是一种稳定耐用的填料,广泛用

于实验研究与工业规模的蛋白分离。

*洗脱可能需要多个步骤,比如使用咪唑、pH、盐、EDTA或者EGTA和变

性剂一起以达到目的蛋白的较高回收率。

亲和层析分离是基于待选择配体与固定相分子特异性亲和的原

理。通常,固定相分子与配体的结合是可逆的,在亲和结合后通

过改变缓冲液、盐浓度或者pH值来达到分离目的。

颇尔可以提供亲和层析瓶装填料、和预装柱。颇尔瓶装填料既可

用于少量和大量样品,也可用于单次高通量纯化。我们的填料包

装规格可以根据客户需要定制。

Protein A Ceramic HyperD® F填料是一种高载量亲和填料,专

为规模化纯化免疫球蛋白G而设计。该填料集操作简便、高载量

和可放大生产于一身。该产品使用我们的专利刚性陶瓷球制备。

重组蛋白A使用特殊配方的水凝胶螯合在多孔陶瓷球内。

Blue Trisacryl® M填料是一种亲和层析填料,用于纯化各种酶

和蛋白,比如激酶、白蛋白、干扰素和一些凝血因子。这种填料

的基质是Trisacryl GF2000,一种多孔非离子填料,而Cibacrons

Blue通过共价结合固定化在其上。Cibacrons 蓝色染料通过六个碳

原子的共价链牢固的结合在基质上。该反应与EEDQ偶联剂共同

作用。这种类型的偶联可以防止任何染料泄露到正常的工作环境

中。

肝素HyperD M 填料是一种高载量的亲和填料,用于纯化可以结

合肝素的生物分子,比如凝血因子、生长因子、脂蛋白等。肝素

HyperD M填料使用一种高载量的聚合水凝胶固定化在大孔刚性球

内。这种设计将水凝胶的软性、高载量的特点与刚性陶瓷球的稳

定性特点结合在一起,使其具有卓越的性能。

Lysine HyperD填料是一种高载量亲和填料,用于纯化可以结合

赖氨酸的生物分子,比如人或动物血浆中的血纤维蛋白溶酶原。

该填料使用一种高载量的聚合水凝胶固定化在大孔刚性球内。这

种设计将水凝胶的柔性、高载量的特点与刚性陶瓷球的稳定性特

点结合在一起,使其具有卓越的性能。

亲和层析

亲和纯化类型

使用IMAC HyperCel填料进行分离的前期选择指南

混合样品

梯度洗脱

连续梯度洗脱

改变上样缓冲液

pH 6.0-8.0

使用0-0.1M

咪唑洗脱*

使用脲或者

变性剂洗脱

使用EDTA或者

0-50mM EGTA洗脱

使用1M磷酸盐

pH3.5+0.14MNaCl洗脱

使用咪唑+0-0.5MNaCl 洗脱

与预先与Cu (II), Ni (II), Zn (II), Co (II), Ag (I), Fe (II), Ga (II) and Zr (III),螯合好的IMAC HyperCel 填料结合

变换上样缓冲液中NaCl 浓度范围0 - 0.5M

变性条件下上样-8M脲或者6M盐酸胍

配体 产品

去除白蛋白 蓝色染料 Blue Trisacryl M 层析填料

纯化IgG 蛋白

A MEPProtein A Ceramic HyperD层析填料, MEP HyperCel™ 层析填料

纯化脂蛋白 肝素 Heparin HyperD M层析填料

纯化糖蛋白 赖氨酸羟基磷酸石

Lysine HyperD层析填料 HA Ultrogel® 层析填料

或者

或者 或者 或者 或者

或者

2

流速选择?

缓冲液的选择?

pH值选择?

洗脱时盐浓度和离子种类的选择?

离子交换层析分离纯化是基于表面静电荷相互作用原理。分子分

为阴离子(带负电荷)或者阳离子(带有正电荷)。一些分子

(比如蛋白)可能同时具有阴离子与阳离子基团。一个阳离子固

定相(阳离子交换树脂)会结合阴离子化合物。反之,一个阴离

子固定相(阴离子交换树脂)会结合阳离子。离子交换填料还可

以进一步被分为强离子交换填料和弱离子交换填料。强离子交换

填料的带电(离子化)pH范围更广,而弱离子交换填料的离子化

pH范围则较窄。四种最常用的离子交换填料如下:

下进行。在预平衡、上样和清洗时使用高流速可以获得更高的通

量,而在结合与洗脱时使用低流速可以提高分辨率。Mustang膜

的开放式结构无需等待液体向膜孔的扩散,因此可以采用较高流

速进行实验。

离子交换层析填料通常需要在低离子强度的缓冲液中上样。在此

条件下,带电荷的分子将吸附在具有相反电荷的固定相上。而与

固定相带相同电荷的分子则不会与固定相结合,随着流动相流

出。在清洗时,加入额外的低离子强度清洗可以将未结合的蛋白

冲洗干净,然后使用不同盐浓度的缓冲液梯度洗脱结合的蛋白。

随着溶液中离子强度增加,盐离子竞争结合到离子交换填料上

去,置换下结合的分子,使其洗脱出来。,建议阳离子交换填料

使用带负电荷缓冲液,阴离子交换填料使用带正电荷缓冲液。

虽然pH值对强离子交换填料的电荷没有影响,但会对溶液中大分

子的电荷造成影响。离子交换层析操作时的pH值选择以最大化目

的分子在杂质背景中的分辨率为原则。在某些情况下,pH值的选

择依据最大化目标分子的结合能力,最小化杂质的结合能力为原

则(主动模式)。目标分子的洗脱伴随着盐浓度的增加。在其他

情况下,pH值的选择以最大化杂质结合能力,最小化目标分子结

合能力为原则(被动模式)。目标分子随着流动相流出,而杂质

则结合在固定相上,从而达到分离的目的。通过精心选择离子交

换填料和改变pH值,可以在一步交换中将得率和纯度都优化到最

大。但是,没有可能通过一步交换就能得到100%的纯度,这也

是为什么要利用目标分子与背景杂质之间的各种化学特性的不

同,通过连续的多个步骤将其分离。

结合以后,选择合适的洗脱液盐浓度,目标分子便不会与共同结

合在基质上的杂质分子一起被洗脱下来。在0-1.0M浓度范围内使

用梯度洗脱的方式,洗脱液中的盐离子必须置换固定相上的其他

带电荷基团的分子。常用的阳离子的置换效率是:Ca2+ > Mg2+ >

Na+ > K+ > NH4+。

颇尔提供离子交换填料、预装柱和离子交换膜。在很多领域,层

析填料都是层析法的首选,但是在一些情况下,填料类方法也有

其局限性(比如纯化病毒或者大分子)。而层析膜的耐用、可放

大和经济的特点已得到广泛证明,并且由于其比填料具有更快的

流速而在此类应用中表现更好。

Mustang 膜层析可以在至少10个 柱体积/分钟的流速下工作。缓冲

液选择、pH、载量和洗脱条件等的初始优化都可以在此流速

离子交换层析

离子交换

类型

强阴离子

弱阴离子

强阳离子

弱阴离子 羧甲基

二乙基氨基

乙基

磺酸基

季胺基

针头式过滤器

针头式滤器

滤板

预装柱

预装柱

AcroPrep Advance 滤板,Mustang Q膜AcroSep 1ml Ceramic HyperD 预装柱

1ml

1ml

1ml

常用缩写 官能基团 颇尔产品 页码

3

蛋白层析产品

蛋白层析产品

Gel-in-a-Shell技术:增强扩散

常用阴离子置换效率是:PO4 3- > SO4 2- > COO- > Cl-。这些排序

正好与Hofmiester序列相符,但是最强的洗脱盐并不总是最好

的。在理想的条件下,应该测试多种盐,寻找最优化的洗脱条

件,这往往需要不断的试验和失败才能找到适用的洗脱盐。大多

数人会简单的以NaCl或者KCl开始,因为它们在实验室最简单易

得。但是,也可使用CaCl2或者MgCl2。对一些蛋白来说,这些盐

也许最终被证实是更好的选择。无论洗脱用盐如何选择,其洗脱

效果都要从纯度、稳定性和目标分子活性这几个方面进行评估。

结合在水凝胶内的蛋白带有额外的高浓度离子交换功能基团:

150 - 400 μeq/mL。水凝胶上等电点之间距离是~20 Å。因此,凝

胶内的一个蛋白分子是同时与大量的离子交换位点相接触。无论

它移动到凝胶三维结构的什么位置,其接触到的位点数量都是相

似的。因此,蛋白分子不受束缚并且可以自由迁移。蛋白在水凝

胶内可以快速扩散,分布均匀,促进了对溶液中其他物质的结

合。在结合的条件下,被取代的水凝胶与蛋白之间的强静电吸引

力驱动蛋白进入凝胶内部。以下的表格展示了各种Ceramic

hyperD 填料的动态载量。

我们提供散装陶瓷HyperD填料,比如瓶装填料和预装填的颇尔

AcroSep™层析柱。

HyperD系列离子交换填料具有较高的动态载量(50-110 mg BSA/mL)。

载量测定使用1mL填充柱,以5mg/mL流速将BSA(阴离子)或者溶菌酶

(阳离子)缓冲液进样直到超过柱的载量。然后计算达到这个超出柱子

结合量(穿透)的所需的上样的蛋白量,并以mg/ml(胶体积)表示。我们

提供阴离子型和阳离子型的50μm(HyperD F填料)和具有更高分辨率的

20μm(HyperD 20填料)填料。

传统的大孔离子交换基于经典的孔隙扩散原理。孔隙扩散的特点

是随着流速的增加,载量迅速降低。与之相比的是,颇尔陶瓷

HyperD®填料的独特结构提供了一种更加迅速的传质机理,称为

增强扩散机理。快速传质可以克服对流速的依赖。因为产品是结

合在凝胶填充的孔隙内各处(不是仅仅结合在孔隙内表面),总

的载量得到了增强。

利用增强扩散机理,颇尔“gel-in-a-shell”技术可以将目的蛋白结合在凝胶填

充孔隙内的各处,增强了总的结合载量。

离子交换层析(续)

颇尔离子交换填料在高流速下表现出出色的动态载量

流速 (mL/min)填料

4

使用Mustang®膜进行离子交换层析

Mustang Q阴离子交换膜

当需要纯化大分子或者所需流速较快时,推荐使用膜层析的方

法。膜层析非常经济实惠,因为与传统填料层析相比,它可以处

理的液体流速更快,循环时间更短并且处理通量更高。颇尔

Mustang膜具有更大的膜孔、高动态载量,这使其即使对类似于

质粒和病毒等大分子来说,高流速也不会对纯化效果造成影响。

颇尔可为您提供离子交换层析膜设备:

Mustang S阳离子交换膜

高容量Mustang S膜是一种聚醚砜(PES)磺酸基团改性阳离子

交换膜。Mustang S膜的对流孔结构结合正电荷蛋白和病毒的高

动态载量,实现了高效率和高流速。与传统的微球或者填料技

术相比,膜的处理时间更短,效率更高。针头式过滤器和多孔

板形式能直接放大到更大规模的应用。

有关Acrodisc系列Mustang Q和S膜分辨率和动态载量数据,请

参见第130-132页。

Mustang Q膜是一种聚醚砜(PES)季胺改性阴离子交换膜。

Mustang Q膜的对流孔结构结合对质粒DNA(3.6 mg/Acrodisc )、

负电荷蛋白(10mg)和病毒(1012病毒粒子)的高动态载量,实现

了高效率和高流速。与传统的微球或者填料技术相比,膜的处理

时间更短,效率更高。Mustang的通量比传统层析柱高100倍,并

且没有相关的载量损失。针头式过滤器和多孔板形式能直接放大

到更大规模的应用。

真正的可放大性—对于实验室规模的应用,Mustang膜

Acrodisc®针头滤器可用于单个样品处理,AcroPrep™高通量滤

板用于更多样品处理。Mustang Q和Mustang S可以规模放大到

有更高载量的囊式结构。

特定应用的膜化学—Mustang Q膜是一种强阴离子交换膜,能

有效结合质粒DNA、负电荷蛋白和病毒粒子。Mustang S膜是

一种强阳离子交换膜,能有效结合正电荷蛋白和病毒粒子。

高载量和高流速—Mustang膜能耐受较高流速,并且在不影响

回收率的条件下达到较快的纯化速度。

疏水电荷诱导层析加入(HCIC)

活性剂去除层析

羟磷灰石层析

疏水电荷诱导层析的作用原理是基于一种双模式配体依赖pH变化

而离子化的行为。吸附作用基于温和的疏水作用并且无需添加其

他盐。解吸作用是基于电荷排斥原理,通过改变pH值来实现。

MEP HyperCel™填料是一种高载量、高选择性的填料,专为单抗

和多抗的捕获和纯化而设计。疏水电荷诱导层析的作用原理是基

于一种双模式配体依赖pH变化而离子化的行为。MEP HyperCel

填料结合了一种抗体选择性配体,4-巯基-乙基-吡啶(4-MEP)。吸

附作用基于温和的疏水作用并且无需添加其他盐。解吸作用是基

于电荷排斥原理,通过改变pH值来实现。

HEA和PPA HyperCel填料属于新型的工业规模层析填料,专为生

物制药行业蛋白捕获和杂质去除而设计。依据“混合模式”的原

理,疏水电荷诱导层析结合了蛋白和配体的疏水作用和静电相互

作用。HEA和PPA HyperCel填料具有传统离子交换层析或者HIC

难以达到的独特选择性,对过程开发非常有利。例如,混合模式

作用原理可用于等电点相同或非常相近的蛋白,使用离子层析等

方法无法分离等情况。

质粒在制备过程中可能会被病毒污染,需要配合使用纳滤膜(通

过尺寸排阻去除非脂包膜病毒)和非离子溶剂与活性剂(可以有

效去除脂包膜病毒)来去除病毒和使其失活。因此有必要在后续

过程中去除溶剂和活性剂。可以通过各种方法来达到此目的,包

括填料分离、尺寸排阻、亲和层析或者使用植物油联合C18反相

层析分批萃取。

SDR HyperD®填料是一种独特的填料,专为清除溶剂中的活性剂

而设计。SDR HyperD填料由二氧化硅球组成,球孔内填充三维

交联疏水聚合物。粒子尺寸分布(40 - 100 μm),二氧化硅球的

小孔径和官能团的疏水特性使得SDR HyperD填料成为专为去除

溶剂中的活性剂的优秀工具。

羟磷灰石层析被认为是一种“伪亲和”层析或者“混合模式”离子交换

层析。它已被证明是一种有效的纯化方法,适用于各种处理过

程,为传统的离子交换或者疏水作用机理提供互补的生物分子选

择性。HA Ultrogel®易于放大,从实验室规模到多种容量的柱层

析都有应用。

颇尔供应的HA Ultrogel填料是一种羟磷灰石琼脂凝胶复合填料,

用于研发规模和生产规模分离生物分子。HA Ultrogel是一种三维

交联的聚合填料,将羟磷灰石微晶包埋在琼脂凝胶球中。

混合层析机制

5

蛋白层析产品

蛋白层析产品

尺寸排阻层析(也被称为凝胶过滤)分离分子的原理是基于分

子大小的不同。这种层析技术同时适用于填料或膜。在膜上小

分子通过而大分子(超过一定尺寸大小)则被截留。在填料

上,大分子通过/流过填料并率先被捕集,而小分子则需要更长

的时间流过,因为这些小粒子受阻于填料中的微孔。因此,对

于填料来说,收集到的组份分子量呈减小趋势。通常,尺寸排

阻层析的应用包括浓缩、分级分离、脱盐和缓冲液交换。

尺寸排阻是操作最简单的层析方法之一,因为样品的洗脱是同

一溶液。当应用于分析时,尺寸排阻法能分辨分子量差别在两

倍以上的分子(比如蛋白)。该选用多孔的过滤介质来在目的

分子量范围内提高分辨率。

颇尔Ultrogel® AcA填料是一种使用生物分子尺寸排阻法的聚合填

料。它们由聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶基质所组成,与经典尺寸

排阻填料相比具有更好的力学性能和层析性能,更适合于中等

或者大规模的应用。该产品的特点是具有较窄的颗粒和孔径尺

寸分布。Ultrogel AcA提供四种不同类型,可以在分子量范围

1,000-1,200,000内对分子进行分级分离。该填料主要用于分级

分离、纯化和分子量测定(参见62-63页)。

规格

尺寸排阻层析的应用

脱盐的应用

应用 颇尔产品

颗粒大小

核酸浓缩

蛋白缓冲液更换

蛋白分级分离

AcroPrep™ Advance超滤膜滤板

Ultrogel AcA 填料

Minimate™ TFF系统

AcroPrep™ Advance超滤膜滤板

单体

交联剂

排阻限

工作pH范围

线性分级分离范围

塔板数(plates/m)

Ultrogel AcA 202填料

尺寸排阻层析,凝胶过滤层析

Mustang 膜Acrodisc 针头滤器处理单个样品。散装层析填料有各种包装规格,适用于不同尺寸的层析柱。

6

如何选择AcroSep™预装层析柱

适合多种纯化类型的层析柱

优势

在当今的蛋白纯化技术中,层析可能是最重要的一种分离手段。

预装柱和其他形式的包含填料的设备对研究人员越来越有价值,

因为它们更节省时间并确保可靠高效的结果。现在,使用填料的

技术已经发展出多种类型,而离子交换填料就是其中最常用的一

种。使用离子交换法,可以精确地分级分离蛋白。即使电荷只有

很小的差别,通过方法优化,蛋白也能被分离出来。亲和层析涉

及到分子间的特异性作用。配体共价结合到固定相上,而感兴趣

的生物分子则会吸附在柱子上的配体上,从而得到高纯度分离。

颇尔一直致力于扩展我们的实验室专用层析填料产品线以将散装

填料和预装柱都包括在内。颇尔层析产品成熟可靠,质量出色且

易于使用,成为蛋白纯化应用的首选。

AcroSep预装柱具有颜色标示,能帮助终端用户方便地区别不同

类型的填料。这些标示圈的六角形设计使其不易从操作台面上滚

落。

AcroSep层析柱配有进出鲁尔接口,可以轻松地与针头、泵或者

层析系统配合使用。

AcroSep离子交换层析柱采用颇尔专利的陶瓷HyperD填料和

“gel-in-a-shell”技术,实现大容量、高分辨率的快速蛋白纯化。用

户在获得高流速(1 - 4 mL/min)的同时不会损失载量和分辨率,

极大提高每天处理样品的数量。这些层析柱可以用于:

去除活性剂的SDR HyperD, AcroSep层析柱能去在高动态载量,

快速而有效地去除很多种变性剂(活性剂)。这种层析柱展示出

很高的蛋白回收率(排阻限10kDa)和对疏水小分子的高吸收能

力。SDR填料在酸、极性有机溶剂和氧化剂溶液中都很稳定。这

些层析柱的用途包括:

AcroSep亲和纯化层析柱在纯化各种生物分子时具有高动态载

量。增强的耦合机理消除了人们对配体泄露到纯化样品中的顾

虑。这些层析柱适用于:

AcroSep混和型层析柱填充颇尔专利的HyperCel填料,具有多孔

性、高化学稳定性和低非特异性相互作用的特点。目标分子一般

在生理pH值下结合,从而摆脱了传统疏水性相互作用层析对高盐

度的依赖。这些层析柱适用于:

筛选用于蛋白纯化的多种离子交换填料

在实验放大之前使用小量样品优化纯化条件

去除蛋白组样品中的各种变性剂、活性剂(阴离子、阳离子和

非离子化)

去除用于增加膜蛋白溶解的表面活性剂

多种样品类型的IgG亲和纯化

组氨酸标记的蛋白纯化

血浆和血清样品白蛋白分离

抗体捕获和纯化

直接疏水捕获和纯化

相似等电点蛋白分离

AcroSep选型指南和颜色标示

纯化类型 填料 颜色1ml AcroSep 预装柱

弱阳离子交换

强阳离子交换

强阴离子交换

弱阴离子交换

亲和纯化

亲和纯化

亲和纯化

混合模式

混合模式

混合模式

混合模式

绿色

天蓝

红色

橙色

珍珠白

钴蓝色

深蓝色

紫色

黑色

黄色

透明色

第103-104页

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第105-106页

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7

蛋白层析产品

蛋白层析产品

蛋白和DNA纯化-在线参考文献库

颇尔网站为您提供大量关于产品、技术和应用方面的信息。这个

在线文献库的突出特色是收集了数百份技术文章、产品海报、视

频、应用说明等,为您提供最佳的解决方案。如果需要了解以下

标题的内容,请访问www.pall.com/lab网站,点击左侧边栏上的

“Literature Library”链接。

一种抗体纯化的新方法

使用颇尔层析填料去除大量杂蛋白。

AcroSep™ HEA和PPA混合模式填料一步实现多方面的分离

使用HyperD®肝素填料进行亲和层析

使用HyperD®赖氨酸填料进行亲和分离

使用HyperD®F Protein A填料进行亲和分离

使用AcroWell™96孔滤板和自动化运行ELISA和DOT-Blot分析

配备读板器的工作站

使用离心设备进行缓冲液更换、脱盐和浓缩

颇尔蛋白质样品制备和分析用膜材质的特点

颇尔蛋白质样品制备和分析用膜材质的化学兼容性指南

使用带预滤器的Acrodisc®针头式滤器去除冷凝蛋白质,澄清血

清和血浆样品

通过多孔过滤澄清样品溶液的介绍

层析柱规模放大至工艺应用

使用AcroPrep™96孔和384孔滤板进行样品脱盐和缓冲液更换

(< 1 mL)

使用Ultrogel® AcA 202 填料脱盐

使用SDR HyperD填料去除蛋白样品在质谱分析前的样品中的

表面活性剂

使用颇尔样品制备工具盒高效去除或是富集和人血浆样品

高效的多孔蛋白质纯化策略

层析柱装柱效率评估

使用Nanosep®离心设备从聚丙烯酰胺凝胶上快速高效洗脱蛋

白质

高通量基因组和蛋白质组样品制备

一种基因治疗产品快速纯化工具——膜层析

Nanosep离心超滤设备和PCR:过去和未来

新型混合层析填料在1ml AcroSep预装柱中的使用

使用IMAC HyperCel™填料富集磷酸多肽

使用Ceramic HyperD离子交换层析填料分离蛋白质

使用HA Ultrogel填料分离蛋白

使用Mustang®离子交换膜分离蛋白

使用Ultrogel AcA尺寸排阻层析填料分离蛋白

使用Blue Trisacryl M层析填料纯化蛋白

使用Ceramic HyperD离子交换层析填料纯化蛋白

使用HA Ultrogel填料纯化蛋白

使用SDR HyperD层析填料去表面活性剂的操作流程

使用IMAC HyperCel填料纯化多组氨酸标记重组蛋白

AcroPrep 96孔滤板或Nanosep离心设备

使用AcroSep1mL预装柱 离子交换层析快速分离蛋白

在AcroPrep多孔板上筛选层析填料

使用超滤设备纯化和克隆DNA

原核培养基质粒DNA的简易纯化

Ultrogel AcA 202填料在Nanosep离心设备中的应用:一种快

速高效的蛋白脱盐工具

使用肝素HyperD M亲和填料批量纯化血浆中的蛋白

使用离子交换膜层析从有机溶剂中回收蛋白

使用IMAC HyperCel层析填料进行金属离子亲和层析

使用MEP HyperCel填料通过疏水电荷诱导层析(HCIC)纯

化抗体

使用 除菌的 Acrodisc针头过滤器进行样品的(1-100 mL)除菌操作

蛋白和DNA稀释液的过滤

使用VacuCap®负压过滤器过滤试剂(>50 mL)

使用 Minimate™膜包替代Stirred Cell系统获得更大产率

切向流过滤在实验室和大工艺过程中的应用介绍

支原体污染:组织培养中的关键影响因素

层析技术在生物纯化的综述

Minimate TFF膜包和液相层析系统在实验室规模纯化和工艺放大

处理中的联合使用

VacuCap正压过滤器用于真空过滤灭菌

什么是超滤膜?

AcroPrep™ 96孔过滤板可减少Luminex xMAP技术用于血清学

检测的假阳性结果

使用带预过滤的Acrodisc®针头过滤器过滤血浆或血清样品,去

除冷冻沉淀物

使用Nanosep®离心管澄清样品(< 1 mL)

比较用渗滤和切向流过滤进行纯化的结果

用透析、凝胶过滤和渗滤进行脱盐和缓冲液置换

渗滤:一种用于生物样品脱盐和缓冲液置换的有效方法

8

特性

应用

规格

以“gel-in-a-shell”技术为特色,专利的

Ceramic HyperD F离子交换层析填料能

快速大量地纯化蛋白。

快速、高效。处理速度快,分辨率

高,容量大,总产量高。

分辨率高,提高蛋白纯度,更好的分

为结构、功能和其它分析提供有效可

靠的中小规模蛋白纯化。

简便筛选多种离子交换介质。

对从少量样品开始实验,再逐步放大

结构材料

说明

颗粒大小

工作pH清洗pH离子交换能力1

CM CeramicHyperD F

S CeramicHyperD F

Q CeramicHyperD F

DEAE CeramicHyperD F

层析柱外壳、盖子、塞子和接口:聚丙烯

层析柱:聚乙烯

(1)把1.66mL填料装到内径为5mm,高度为100mm的层析柱中,在流速为:

200 cm/h, 10%的穿透率条件下测定的动态结合能力(DBC)。

(2)50mM醋酸钠缓冲液,含100 mM氯化钠,5 mg/mL的人体IgG,pH为8.6。(3)50mM Tris-HCl 缓冲液(pH8.6),含5 mg/mL BSA。(4)50mM醋酸钠缓冲液(pH4.5),含5 mg/mL溶菌酶。

层析柱结构

柱体积:1.04 mL柱高:1.48 cm (0.58 in.)柱直径:0.94 cm (0.37 in.)尺寸

直径:1.6 cm (0.6 in.)长度(不带塞子):4.8 cm (1.9 in.)接口

入口:凹形带螺纹螺旋锁

出口:凸形旋转式螺旋毂

推荐流速

1-4 mL/min背压

最大:3巴(300 kPa, 43.5 psi)存储

2-30 ºC (36-86 ºF)2-8 ºC (36-46 ºF) (第一次启用后)

(平均值) (平均值) (平均值) (平均值)

AcroSepTM 离子交换层析柱

快速大量地纯化蛋白

9

蛋白层析产品

蛋白层析产品

订购信息

产品编号 说明 色码 容积 包装

性能

图 1

离子交换

AcroSepTM 的动态载量比其它竞争产品更高

图 3当流速增加到4mL/min时,AcroSep预装柱仍能维持高分辨率

图 2AcroSepTM 层析柱比其它层析柱的分辨率更高

数据表明当流速增加,Pall AcroSep层析柱的动态吸附能力

(DBC)比其它竞争产品要高出9倍。每个平均值通过对8个或8个以上的AcroSep层析柱的3次重复测定或对2个有竞争

性的层析柱的3次重复测定获得。蛋白浓度为5mg/ml,Q和

DEAE用 BSA, S用溶菌酶, CM用 IgG。流速为 3.56 mL/min,在10%的穿透率条件下测定。

Rs = [(VR2 - VR1) / 2(WH2 -WH1)] / 2.354, Rs =分辨率,

VR1=蛋白1的滞留量,VR2=蛋白2的滞留量,WH1=蛋白1一半峰

值时的峰宽。WH2=蛋白2一半峰值时的峰宽。

如图1所示,即使流速增加,Pall AcroSep离子交换层析柱的动态载

量仍然很高。图2表明在流速为1mL/min时,AcroSep层析柱比其它

层析柱的分辨率更高。图3表明,当流速增加时,AcroSep层析柱

仍能保持高分辨率。

Rs = [(VR2 - VR1) / 2(WH2 -WH1)] / 2.354, Rs =分辨率,

VR1=蛋白1的滞留量,VR2=蛋白2的滞留量,WH1=蛋白1一半峰

值时的峰宽。WH2=蛋白2一半峰值时的峰宽。

个/包装绿色

蓝色

红色

橙色

四种混合

个/包装

个/包装

个/包装

个/包装含有:

10

可用于纯化各种蛋白和抗体

特性

应用

在变性和非变性的纯化条件下,都只

需一步纯化。

IMAC HyperCel填料使用的是螯合在

HyperCel上的IDA(亚氨乙酸)配位

体,该填料稳定耐用,适用于不同规

模的蛋白分离纯化。

灵活。没有预螯合的IMAC HyperCe填料能够选择各种特定的金属离子,

从而提高目标分子纯度和产量。

Trisacryl多孔基质能很好地扩散样

品,提高交换能力。

Cibacron蓝色染料配位体为酶和白蛋

白的纯化提供选择。

独特的配体耦合机制阻止染料的泄

漏,从而提高了稳定性。

纯化组氨酸标记的蛋白。

纯化金属结合蛋白或其它能够结合金

属离子的蛋白。

最大限度地从血浆和血清样品中排除

白蛋白。

为从多种样品类型中亲和纯化IgG而设计。

Fc融合蛋白和类抗体蛋白纯化。

从血浆和血清中去除IgG。

只需一个步骤,样品回收率就能达90%以上。

固定化的重组ProteinA在陶瓷性小球内

充满亲水性凝胶,使得非特异性吸附

低,从而提高选择性,并且ProteinA泄漏少。

Protein A Ceramic HyperD F填料

IMAC HyperCel填料Blue Trisacryl填料

IMAC HyperCel填料

Blue Trisacryl M填料

Protein A Ceramic HyperD F填料

规格

结构材料

介质 色码

珍珠色

钴蓝

深蓝

颗粒大小 清洗pH 结合量

层析柱外壳、盖子、塞子和接口:聚丙烯

层析柱:聚乙烯

(1)在4.6 ID x 100 mm的层析柱中,用pH 7.4的PBS中的10 mg/mL人体

免疫球蛋白(IgG)在100cm/hr的流速下,10%的穿透率条件下测定,

用pH 2.5的0.1 M柠檬酸钠洗脱。

(2)动态结合能力:用含5mg/mL的人血清蛋白的PBS溶液测定。层析

柱尺寸:1.6cm内径×3cm柱高;滞留时间(Tr)=7.26 min.

层析柱结构

柱体积:1.04 mL柱高:1.48 cm (0.58 in.)柱直径:0.94 cm (0.37 in.)尺寸

直径:1.6 cm (0.6 in.)长度(不带塞子):4.8 cm (1.9 in.)接口

入口:凹形带螺纹螺旋锁

出口:凸形旋转式螺旋毂

推荐流速

Protein A Ceramic HyperD F:0.2-1 mL/minIMAC金属螯合步骤:3-6 mL/minIMAC蛋白捕获步骤:0.5-1 mL/minBlue Trisacryl M:0.2-1.0 mL/min背压

最大:3巴(300 kPa, 43.5 psi)存储

2-8 ºC

AcroSepTM 亲和层析柱

11

蛋白层析产品

蛋白层析产品

性能

Protein A Ceramic HyperD 填料

图 1在一步纯化步骤中获得高纯度IgG

图 3与其它有竞争性的层析柱相比,AcroSep预装柱的IgG回收率更高

图2表明了从人体血浆中层析分离IgG。通过非还原性SDS聚丙烯酰

胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析不同的馏分。仅在亲和纯化这一个

步骤中,IgG的纯度就高达98%以上。

(流速:上样时0.2mL/min,其它步骤1mL/min.)

用ELISA量化从人体血浆中的IgG的回收率。图3中的数据表明,与

其它有竞争性的层析柱相比,AcroSep Protein A Ceramic HyperD F层析柱的IgG的回收率更高。此数据为多次测量的平均值(流速:

上样时0.2mL/min,其它步骤为1ml/min)。

M:分子量标记

R:参照人体IgG L:天然血浆样本

FT:穿透

W:洗涤

E:洗脱

人体血浆中的

纯IgG

上样 穿透 洗涤 洗脱

馏分

订购信息

IMAC HyperCel填料

Blue Trisacryl M填料

图 4非变性条件下,一步纯化得到高纯度蛋白

图 5变性条件下,一步纯化得到高纯度蛋白

图 6从人体血浆中纯化白蛋白

M:蛋白质分子量标记

L:上样的样品

FT:非结合的蛋白/穿透

W:洗涤

E:洗脱

M:蛋白质分子量标记

L:上样的样品

FT:非结合的蛋白/穿透

W:洗涤

E:洗脱

黄色标记部分表示是在非

变性条件下,一步亲和纯

化组氨酸标记蛋白

黄色标记部分表示是在变

性条件下,一步亲和纯化

组氨酸标记蛋白

全部蛋白(0.3 mL血浆)全部结合在

柱上。(20 mM pH 7.2的PBS)。所

有结合的蛋白用所含3M NaCl的PBS梯度洗脱。

白蛋白

产品编号 说明 色码 柱体积 包装

珍珠色

钴蓝

深蓝

个/包装

个/包装

个/包装

12

化学性质灵活,分离性更好,纯化选择更多

特性

应用

稳定的填料和配位体允许多达200次的

纯化操作。

能结合多样物种的抗体,且同型抗体

结合能力强。

与传统的用Protein A纯化抗体相比,能

在更高的pH环境下洗脱Protein A.。

由于配位体结构和填料密度,MEP

HyperCel填料在低盐或者低离子强度

下也有很好的结合能力。

抗体捕获和纯化。

Fc融合蛋白和类抗体蛋白纯化。

简易筛选多种混合模式介质。

直接疏水捕获和纯化。

配合离子交换或其它层析方法的上游

或者下游使用,提高纯度。

简易筛选多种混合模式介质。

MEP HyperCel填料

MEP HyperCel填料

HEA和PPA HyperCel填料

在下游应用前有效去除离子型和非离

子型变性剂。

为目标蛋白(> 60 kD)有效去除变性

剂。

SDR HyperD填料

HyperCel化学稳定性好,非特异性相

互作用少。

基于疏水作用进行吸附,基于静电排

斥进行洗脱。

不像传统的疏水作用层析(HIC),结合

无须使用高盐,通常在生理pH条件下

进行。

HEA和PPA HyperCel填料能有效区分

拥有相同或相似等电点的蛋白。

HEA和PPA HyperCel填料

复合结构:填充了疏水聚合物的硅珠

能确保有效地捕获和截留变性剂。

能有效去除各种离子型和非离子型变

性剂。

在酸性、极性有机和氧化性溶液中性

能稳定。

SDR HyperD填料

规格

结构材料

层析柱外壳、盖子、塞子和接口:聚丙烯

层析柱:聚乙烯

紫色

黑色

黄色

自然色

介质 色码 颗粒大小 清洗pH 结合量

(1)动态结合能力:用含5 mg/mL的IgG的PBS溶液测定。流速为60 cm/hr;层析柱尺寸:1.1 cm内径x 7 cm柱体;滞留时间(Tr)= 5.68 min。(2)动态结合能力:用含5mg/mL的BSA的PBS溶液,在10%的穿透率

条件下测定;流速为50cm/hr;层析柱尺寸:1.6 cm内径x 3.75 cm柱体;

(Tr)=4.51 min。

层析柱结构

柱体积:1.04 mL柱高:1.48 cm (0.58 in.)柱直径:0.94 cm (0.37 in.)

尺寸

直径:1.6 cm (0.6 in.)长度(不带塞子):4.8 cm (1.9 in.)

接口

入口:凹形带螺纹螺旋锁

出口:凸形旋转式螺旋毂

推荐流速

MEP, HEA, PPA: 0.2-4.0 mL/minSDR: 1.0-4.0 mL/min

背压

最大:3bar(300 kPa, 43.5 psi)

存储

2-8 ºC

AcroSepTM 混合模式层析柱

(MEP、HEA、PPA、SDR )

13

蛋白层析产品

蛋白层析产品

性能

MEP HyperCel填料

图 1用MEP HyperCel填料从腹水中获得高纯度的单克隆IgG

图 2pH和离子强度对MEP HyperCel填料的吸附能力的影响

图 3用AcroSep HEA预装柱清晰分离标准蛋白混合物

层析柱用50 mM Tris-HCl的缓冲液结合,50 mM pH 4的醋酸盐洗脱,流速为70 cm/h。曲线中,箭头a指的是用水洗涤,箭头b指的是用辛酸钠洗涤。箭头c指的

是开始使用洗脱缓冲液。SDS-PAGE分析(还原条件下):1=粗样;2=纯化后

的样本;H=重链;L=轻链。

实验条件:用MEP HyperCel填料,在10%的穿透率条件下,根据不同的pH(A)和离子强度(B)测定IgG含量。层析柱: 1.1 cm (0.4 in.) ID X 9 cm (3.5 in.);样

本= IgG (2 mg/mL); 流速= 90 cm/hr; Tr = 7.8 min。

数据表明了pH和离子强度对IgG吸附能力的影响(图2)。由此可见,MEP在不

同PH值和不同的盐离子浓度都有较好的选择性。

为了降低粘度,把用同样体积的平衡缓冲液稀释后的样本装入层析

柱中,以从腹水中分离IgG为例(图1)。层析柱用50 mM,pH 8.0的Tris缓冲液平衡。上样后,再用该缓冲液洗涤。第一个峰是穿透过层

析柱的蛋白,接下来两个峰是通过水和辛酸盐洗涤后的杂蛋白。最

后一个峰是洗脱后的抗体,如SDS-PAGE数据中的第2泳道所示。

HEA和PPA HyperCel填料

以下的色谱图(图3和4)是对溶菌酶、α-胰凝乳蛋白酶原A、α-胰凝乳蛋白酶原B和牛血清白蛋白(BSA)这四种蛋白的分辨率的图

解。吸附主要通过疏水作用进行,洗脱通过由pH变化和降低电导

率引起的静电排斥进行。

流速:上样速度:0.2mL/min,进行其它步骤时为0.5mL/min。结合缓冲液:

是含150mM盐化物pH10.0的碳酸盐缓冲液。洗脱时用的是pH适宜的磷酸盐

和柠檬酸盐混合缓冲液。

峰a-溶菌酶

峰b-α-胰凝乳蛋白酶原 A

峰c-α -胰凝乳蛋白酶原 B

峰d-BSA

10%的穿透率

条件下测定的DBC

订购信息

图 4用AcroSep PPA预装柱清晰分离标准蛋白混合物

峰a-溶菌酶 峰b-α-胰凝乳蛋白酶原A峰c-α-胰凝乳蛋白酶原B 峰d-BSA

双重模式机理阐释

上样时的流速为0.2mL/min,在接下来的过程中,流速提高到0.5mL/min。结

合缓冲液为pH7.2的PBS。洗脱时用的是各自不同pH和电导率(如图所示)

的柠檬酸盐缓冲液。

HEA和PPA填料中的配位体在低盐条件下能通过疏水作用提高蛋白

吸附能力。虽然两种填料的pKa相同(8.0),但仍然能选择性的结

合蛋白。PPA填料使用PBS时不会完全吸附溶菌酶,但是通过提高

pH,HEA HyperCel能完全吸附溶菌酶。

如图11所示,当HEA HyperCel填料的电导率降低时,溶菌酶会被洗

脱,但是当电导率和pH同时降低时,α-胰凝乳蛋白酶原A会被洗

脱。图12表明只需要降低pH,就能进一步洗脱蛋白。

结论

MEP HyperCel填料能在不同盐浓度的样本中吸附IgG。清洗时先用

水,再用辛酸钠,经过这两个简单的操作步骤后,能从腹水中获得

纯度极高的单克隆IgG。为了保持完整性,与传统方法相比,抗体

可以在更高的pH环境下洗脱。

HEA和PPA HyperCel填料的吸附机制根据的是疏水作用,该作用同

时受pH和离子强度影响。PPA HyperCel的疏水性比HEA HyperCel强。根据层析柱的情况,两种填料都能吸附特定蛋白。

如图4所示,PPA HyperCel填料吸附了很小一部分(< 10%)的碱

性溶菌酶蛋白(pH=11.0)。当电导率和pH同时降低时,溶菌酶会被

洗脱。由于该填料具有强疏水性,所以能很好地保留蛋白。与HEA HyperCel填料相比,PPA HyperCel填料要在更低的pH环境下洗脱α-胰凝乳蛋白酶原A。

产品编号 说明 色码 容积 包装

紫色

黑色

黄色

透明色

个/包装

个/包装

个/包装

个/包装

14

填料 平均粒径(μm) 动态载量(mg/mL)1离子化基团(μEq/mL)

配基密度(μmol/mL)混合模式

离子交换 化学基团

配基

季铵

4 -巯基 -乙基 -吡啶

己胺(脂肪)

苯丙胺(芳香)

磺酸

季铵

羧甲基

1 在10%流穿使用时确定 2 5mg/mLBSA,50 mM Tris-HCl,pH 8.5,停留时间2min 3 5mg/mL人IgG,50 mM醋酸钠,pH 4.5,停留时间2min 4 5mg/mLBSA,50 mM Tris-HCl缓冲液,pH 8.6,流速200cm/h 5 5mg/mL人IgG,50 mM醋酸钠缓冲液,100mM NaCl,pH 4.7,流速200cm/h 6 5mg/mL人IgG,PBS,流速60cm/h 7 5mg/mLBSA,PBS,流速100cm/h

功能

离子交换:Q和S HyperCel;Q和CM CeramicHyperD F填料

保存方法

Ceramic HyperD F填料:20%乙醇/150 mM NaCI工作压力 1

Ceramic HyperD F填料:<1.5 barg (22 psig)HyperCel填料:<0.5 barg (7 psig)

填料规格

体积

1mL(5mm ID×50mm)

5mL(8mm ID×100mm)

层析柱规格

外径

1 mL预装柱:10 x 100 mm 5 mL预装柱:11.5 x 140 mm 结构材质

柱体与柱头:模塑聚丙烯

17μm 筛板:PP/PE(聚丙烯/聚乙烯)

连接 2

内置10-32装置

1 600cm/ h的压力相当于0.1 M NaCl中2mL/min流速。2可以通过1/16in.管道和10-32装置直接连接到

HPLC/MPLC/AKTA系统。有关用M6或1/4-28接头连接到系统所需要的配件及转接器,请查询

相关的系统手册。

最大操作压

1 mL预装柱:20barg (290 psig)5 mL预装柱:30barg (435 psig)

便捷 - 1mL和5mL即用型预装柱

使用方便 - 可直接连接到常用的实验室

层析系统,如 ÄKTA系统(请见说明

书)

高效 - 高装填效率(≥2,500塔板数/米)

连续性–在稳定和可重复的条件下筛选

颇尔离子交换和复合模式层析填料,

并保证多次循环使用后仍保持良好的

性能

在短期停留时间内具有高动态结合载量

无论捕获还是纯化的中间步骤都可适用

快速再平衡,节省缓冲液消耗及操作时间

可以直接放大到中试或生产规模

高流速条件下仍具有良好的动态结合载量

在10-15mS/cm电导率下CM Ceramic HyperD填料对IgG有很高的

结合能力,从而可以进行直接捕获

离子交换层析填料

Q和S HyperCel 填料由强韧的纤维素基架构成,有着极好的流动

性能并产生低反压。它们的优势在于:

Ceramic HyperD和HyperCel填料具有不同选择性。PRC层析柱可

以在正确预装和使用的前提下帮助确定它们的最佳选择性和最高分辨

率。

Q和CM Ceramic HyperD 填料内含刚性陶瓷珠,有良好的水凝胶聚合

能力。典型特征包括:

天然和重组蛋白

质粒

疫苗

单克隆和多克隆抗体

血浆衍生物

生物制药

应用

PRC 层析预装柱适用于离子交换和混合模式层析预装柱

15

蛋白层析产品

蛋白层析产品

层析柱:Pall PRC预装柱5×50 Q Ceramic HyperD F,5mm ID×50mm,

体积:1mL,线性流速:150cm/h。

平衡冲洗:50mM Tris-HCl,pH 8.6。上样:100μL(平衡缓冲液中含5mg/mL细胞色素C,20mg/mL BSA和20mg/mL的人转铁蛋白)。

洗脱:50mM Tris-HCl,pH 8.6 + 0.5 M NaCl,在60分钟内进行0-100%

的线性梯度洗脱。

层析柱:Pall S HyperCel PRC 1mL预装柱(5mmI.D.×50mm)和5mL

(8mmI.D.×100mm) 预装柱。

上样:1mL预装柱:100μL卵清蛋白(10mg/mL),β-乳球蛋白(10mg/mL),

细胞色素C(2.5mg/mL)和溶菌酶(5mg/mL)。5mL预装柱:500μL蛋白样

品。

平衡:50 mM醋酸钠,pH 4.5。

洗脱:50 mM醋酸钠,pH 4.5 + 0.5 M NaCl,从0到100%线性梯度洗脱。

在Pall PRC Q Ceramic HyperD F预装柱上分离细胞色素C,BSA和人转铁蛋白

图 2

细胞色素C 人转铁蛋白

BSA

在1mL PRC S HyperCel预装柱上分离模式蛋白(卵清蛋白,β-乳球蛋白,细胞色素C和溶菌酶),并放大至5mL柱子,持续

停留2分钟。

图 1

预装柱

预装柱

卵清蛋白

卵清蛋白

细胞色素C

细胞色素C

溶菌酶

溶菌酶

β-乳球蛋白

β-乳球蛋白

层析柱:

平衡和冲洗:

上样: μL

洗脱:

混合型层析填料,用于抗体捕获和“无盐”疏水作用

应用

图 3

溶菌酶

a-胰凝乳蛋白酶

卵清蛋白

BSA

订购信息

产品型号 描述 体积

MEP,HEA和PPA HyperCel填料利用刚性合成配基的独特选择性进

行蛋白捕获或从杂质中分离蛋白。它们提供了一个不同于传统方法

的独特的分离机制,所有配基通过疏水作用表现出优异性能。这种

“类HIC”作用,在没有添加易溶性盐离子的情况下尤为典型。

若要了解更多信息,请参阅颇尔公司MEP HyperCel填料献(USD2629)以及HEA和PPA HyperCer填料文献(USD2443)

MEP HyperCel填料:抗体捕获;替代传统的疏水层析

MEP、HEA、PPA HyperCel填料:替代疏水层析,无盐/低盐

16

HA Ultrogel 羟基磷灰石填料

纯化蛋白、多肽、核酸

规格

性能

分离核糖核酸酶和植物凝集素的混合物

从猪胰腺酶的提取物中分离胰岛素和糜蛋白酶

订购信息

HA Ultrogel 羟基磷灰填料

货号 描述

HA Ultrogel 羟基磷灰石

HA Ultrogel 羟基磷灰石

HA Ultrogel 羟基磷灰石

HA Ultrogel 羟基磷灰石

HA Ultrogel 羟基磷灰石

包装

颗粒大小 工作pH值

存储温度羟基磷灰石含量

注意:pH不能<4

开包装后琼脂糖

排阻极限

细胞色素C的载量

BSA的载量

高结合量&高流速

其刚性的结构保证了在pH、离子强

度和温度变化中的稳定性

容易用NaOH清洗

能从实验室研发放大到工业生产

金属亲和填料,纯化与金属有亲和

性的蛋白或其他分子

能与标准的层析系统、重力流柱、

Nanosep 离心管和AcroPrep 多孔板

完美配合使用

IDA作为配位体稳定的交联在填料

上,能广泛用于实验室研发和工业

使用

使用前请螯合金属离子

应用

碱性蛋白的纯化(细胞色素C,溶菌

酶等)

分离人血清蛋白和植物蛋白,如凝

集素,多糖蛋白,转移酶,激酶

分离磷酸蛋白和DNA依赖的酶

去除DNA和内毒素

纯化His标签蛋白

纯化磷蛋白和磷多肽

纯化抗体

分离复杂的蛋白混合物

细胞色素C载量的测定条件:

2.5mg/ml细胞色素 C蛋白液 ,pH值

6.8,PBS溶液,维持50%的穿透,流速

为30cm/h。

BSA的载量测定:

0.5 mg/ml BSA,10 mM PBS, pH 6.8,维持50%的穿透,流速为12.5 cm/h。

柱子: 1.6X 6.5cm;样 品 : 1 m g含 核 糖 核 酸 酶 ( M W 14,700)和PHA-ELs(MW128,000)的蛋

白混合液, 5mM 磷酸钾, pH 6.8;洗脱液:5mM-500mM 磷酸钾,pH 6.8;流速:14.4 cm/h

柱子: 1.6X 5cm;样品:30mg的蛋白溶于1ml,5mM的磷酸

缓冲液中,pH6.8含核糖核酸 ,梯度:

5-200mM 磷酸钠, pH 6.8;流速:10cm/h;温度:10 OC虚线显示:胰岛素实线显示:糜蛋白酶活性Spec.Ac: U/mg的活性;tr:胰腺酶,ch: 糜蛋白酶。胰岛素和糜

蛋白酶的活性峰分别在50mM 和100mM磷酸盐洗脱时。

17

蛋白层析产品

蛋白层析产品

Blue Trisacryl M填料分离纯化各种酶和蛋白

规格

性能

订购信息

应用

颗粒大小 工作pH

工作压力

存储温度

排阻极限

人白蛋白的结合量

用Blue Trisacryl M填料分析人血浆蛋白

Blue Trisacryl M 填料

牛白蛋白结合量

染料和填料的稳定连接阻止了染料

的泄漏

Trisacryl填料的特性和增强的与配

体的结合机制,使其化学稳定性更

加优越

高流速,耐压3bar(300 kPa,45psi)

基架是大孔的非离子型填料。

Cibacrons Blue F3GA 染料通过6个C原子臂稳定的交联在基架上。

去除白蛋白,提高单向(1D)和双

向(2D)电泳的分辨率

纯化各种酶和蛋白:激酶,干扰素

和一些凝集因子

染料和蛋白间的作用包括:NAD类

似物的专业结合或是静电或疏水作

用或是电荷的交换

货号 描述 包装

相关产品

AcroSepTM 1ml 预装柱

*测定的条件:

5 mg/ml,PBS

柱子:1.6cm I.D. x 10cm;缓冲液:0.05 M Tris-HCl, pH 8.8; 洗脱方式0-3M NaCl连续梯度;流速:100cm/h;分离时

间:100min: 温度:20 OC

18

Heparin HyperD M填料

快速、高载量的纯化与肝素结合的生物分子

规格

性能

应用

分离纯化:

订货信息

颗粒大小

动态载量VS线性速度

Heparin HyperD M填料

压力VS线性流速

压力

储存温度人ATIII(10%的穿透)的动态载量

配体

交联肝素配体/ml

工作pH

猪肝素

(平均)

压力

线性流速 线性流速

人A

T III

动态载量

集合了软性胶、高流速、高载量的

优势的刚性填料

基于肝素和填料的稳定结合,降低

了泄漏的可能

填料密度高,便于快速填装

能填装入各种柱的规格

酶(脂蛋白酶,凝集因子酶,过氧

化物酶)

生长因子(纤维原细胞生长因子,

Schwann 细胞生长因子)

细胞外基质蛋白(纤连蛋白, 玻连蛋

白)

核酸结合蛋白,激素受体和脂蛋白

货号 描述 包装

*测定条件:

人 72.5ATIII μL/ml,20mM TrisHCl,0.3M NaCl,pH 7.4;流速 600cm/h,10cm柱床

高度

柱尺寸:0.46 cm I.D.x 10cm;样品:

72.5 μL/ml HU ATIII; 平衡缓冲液:20 mM Tris-HCl, 0.3M NaCl, pH 7.4

柱尺寸:0.46 cm I.D. x 10 cm;缓冲液:20mM Tris-HCl,0.3M NaCl,pH 7.4

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蛋白层析产品

蛋白层析产品

IMAC HyperCelTM 金属螯合填料

规格

性能

订购信息

颗粒大小

非变性条件下一步纯化得到高纯度蛋白

IMAC HyperCel 亲和填料

在变性条件下,一步纯化得到高纯度蛋白

典型工作压力

每ml填料

金属离子载量

离子载量

再生

耐压

工作pH

存储温度

用IMAC纯化带标签的生物分子

货号 描述 包装

相关产品

AcroSepTM 1ml预装柱

金属亲和填料,纯化与金属有亲和

性的蛋白或其他分子。

能与标准的层析系统、重力流柱、

Nanosep 离心管和AcroPrep 多孔板

完美配合使用。

使用三位点螯合剂IDA(亚氨基二乙

酸)作为螯合配体。这种配体被固

定于HyperCel基质填料上,该吸附

剂稳定、具有刚性,且众所周知可

以广泛的被应用于研发和工业规模

的蛋白质分离领域。

使用前请螯合金属离子。

M:蛋白MarkerL:上样

FT:穿透

W:清洗

E:洗脱

红色标出的是在天然条件下一步纯

化His-标签蛋白

M:蛋白MarkerL:上样

FT:穿透

W:清洗

E:洗脱

黄色标出的是变性的条件下一步纯

化His-标签蛋白

应用

纯化His标签蛋白

纯化磷酸蛋白和磷酸肽

纯化抗体

分离复杂的蛋白混合物

20

Lysine HyperD® 亲和填料

高流速/高载量的纯化与赖氨酸结合的蛋白(生物分子)

规格

订购信息

应用

颗粒大小

Lysine HyperD 亲和填料

耐受压力

储存温度配基

工作 pH

货号 描述 包装

开启后

集合了软性胶/高流速和高载量优势

的刚性填料

高流速.刚性胶在压力的增加的情况

下不会皱缩和变形

快速填装.填料的高密度允许了快速

填装

能填装于各种柱规格

纯化与凝血作用相关的蛋白质如血

浆酶原和血浆酶原激活蛋白

纯化来自人血浆的细胞色素C氧化

酶和纤维蛋白原

(平均)

L-赖氨酸

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蛋白层析产品

蛋白层析产品

高载量结合人、鼠的IgGs

非特异性结合的高选择性

与传统的琼脂糖填料相比,装柱更

简单和快速

独特的交联技术极大的降低了

Protein A 的泄漏

卓越的稳定性

刚性的陶瓷骨架珠能耐受再生中的

高流速和高压力

纯化人、鼠的单克隆抗体

从腹水、细胞培养液、转基因奶和

各种动物血清中纯化IgG

纯化 IgG 亚单位(Protein A 不会干扰

IgG3)

从酶水解后的Fc片段和Fab片段混

合物中分离出Fc片段

免疫复合物的分离

纯化酶交联物

Protein A Ceramic HyperD® F 填料

高载量亲和纯化 IgG

规格

性能

应用

订购信息

颗粒大小 耐受压力

存储温度

配体

在含有细胞培养液的血清中用-Protein A Ceramic HyperD F 填料纯化IgG

Protein A Ceramic HyperD F 亲和层析填料

相关信息

用SDS-PAGE分析组织液的穿透和洗脱峰

螯合的Protein A

工作pH

重组 Protein A

3-5mg/ml 填料

AcroSep™ 亲和预装柱

动态载量(10%穿透率)*

货号 描述 包装

(平均)

*测定条件:10mg/ml 人IgG, PBS, pH 7.4;洗脱:0.1M柠檬酸钠,pH2.5, 100cm/h, 柱子 4.6 ID X 100mm

柱尺寸:3 mm ID x 100 mm. 上样和清

洗: 1M glycine/2 M NaCl, pH 8.9. 洗脱:100mM 醋酸缓冲液,pH 4.6.线性

流速 300 cm/h.样品:50ml 细胞培养上

清液。

组织液的分析(泳道 1),穿透(泳道 2),洗脱的IgG1(泳道 3)

22

应用

规格

性能

Ceramic HyperD 填料的规格

级别

颗粒大小 (μm)

离子基团含量 (μeq/mL)工作pH

耐压能力 级别 级别

存储温度

没有皱缩

开启后

动态载量 (mg/mL)*填料

Ceramic HyperD 离子交换填料装在 1mL玻璃柱中,在不同的流速下的动态载量

(线性流速)

由于pH值和 离子强度变化而引起的体积变化

BSA动态载量 (mg/mL) 在200cm/h流速下10%的穿透率

高结合载量“Gel-in-a-shell”设计使其

具有高的动态载量同时极大的提高

了生产能力。

高流速蛋白在亲水凝胶中快速扩

散,迅速捕获蛋白。

填料中丰富的离子交换位点能高效

捕获蛋白分子。

即使在pH,离子强度或流速改变的过

程中填料也不易皱缩变形。

刚性的耐压缩性的填料方便填装

易于用NaOH清洗

适合从实验室研发到工业放大

从各种物料中直接捕获生物分子

纯化多肽, IgG,和白蛋白

大批量的纯化

从腹水或细胞培养液中纯化单克隆

抗体

质粒的纯化

中度纯化

快速高分辨率的纯化(20 μm 级别)

Ceramic HyperD 20的颗粒大小更适

合做精细纯化或是当需要高分辨率

做快速纯化时

Ceramic HyperD® 离子交换填料

(Q, S, DEAE, 和 CM)根据电荷作用纯化生物分子

*样品:5 mg/mL牛血清白蛋白(BSA),50 mM Tris-HCL缓冲液,pH 8.6。**样品:5 mg/mL溶菌酶,50 mM醋酸钠,pH 4.5。***样品:5 mg/mL人免疫球蛋白,50 mM醋酸钠,100 mM NaCl,pH 4.7。

*在10%的介质饱和度条件下,采用穿透曲线分析方法来检测动态载量:在一个体积为1 mL的层析柱中装有离子交换填料作为固体相,将25 mM Tris-HCl(pH 8.5)(用做阴离子交换)或

10 mM脂肪酸甲酯磺酸钠(MES)-NaOH(pH 5.5)(用做阳离子交换)缓冲溶液加到层析柱中,平衡,流速分别为1、5或10 mL/min。在做阴离子交换时,将5 mg/mL BSA样品溶液上样,在280nm检测吸收峰。继续上样,当洗脱液中的蛋白质浓度为100%时,检测的吸收峰达到了最大值,并且显示出平台状曲线。然后以10%最大吸收峰值来计算离子交换填料的动态载量,校正系统中任何层析柱的“死体积(即孔隙体积)”并用mg BSA/mL介质体积来表示。在做阳离子交换时类似于阴离子交换的介质使用5 mg/mL溶菌酶来检测。

23

蛋白层析产品

蛋白层析产品

性能

订购信息

货号

相关产品

AcroSep™1ml预装柱

描述 包装 货号 描述 包装

线性速度对 HyperD 离子交换填料的影响

Ceramic HyperD离子交换填料

图 A,阴离子交换填料 图 B,阳离子交换填料

线性流速 线性流速

动态载量(

mg

BSA/

ml)

动态载量(

mg 溶菌酶

/ml)

将1 mL Ceramic HyperD离子交换填料填装到玻璃柱(直径

6.6mm x柱床高度2.8cm)中,用25 mM Tris-HCl(pH8.5)(阴离子)缓冲溶液,或用10mM脂肪酸甲酯磺酸钠

(MES)-NaOH(pH5.8)(阳离子)缓冲溶液以1 mL/min流速进行实验,平衡层析柱直到得到稳定的pH和电导率。然

后将5mg/mL BSA和溶菌酶溶液分别以1mL/min的流速上

样,在波长280nm检测吸收峰。

继续上样直到检测到吸收峰出现最大吸收曲线,通常在

15CV出现。然后以10%的最大吸收峰值来计算其动态载

量,补偿系统的“死体积(即孔隙体积)”并用mg/mL介质来

表示。在5和10 mL/min的高流速条件下重复实验。

24

规格

性能

应用

颗粒大小

离子基团

动态载量*

工作压力**

Q and S HyperCel 填料的动态载量 vs. 停留时间

推荐清洗条件***

工作pH

高动态载量提高了工艺的生产力。

省填料,省缓冲液

优良的流体传质特性极易填充或拆

只需很少的再次平衡体系,节约了

缓冲液

独特的选择性和盐响应度使其适用

于捕获或是中间纯化步骤

从各种物料中直接捕获生物分子

纯化多肽, lgG,和白蛋白

大规模纯化

从腹水和细胞培养液中纯化单克隆

抗体

纯化疫苗

精细纯化

Q 和S HyperCel™ 离子交换填料高载量的离子交换填料

停留时间

*Q HyperCel测定条件:5mg/mL BSA,50 mM Tris-HCI,pH 8.5,停留时间两

分钟。

S HyperCel测定条件:5mg/mL hlgG,

50 mM氯化钠,pH 4.5,停留时间两分

钟。

在使用Q HyperCel填料洗脱BSA时,以及在使用S HyperCel填料洗脱hlgG时,动

态载量(DBC)的测定条件为:使用Q HyperCel填料,50 mM Tris-HCl缓冲液,

pH 8.5;使用S HyperCel填料,50 mM醋酸钠缓冲液,pH 4.5。层析柱:为LRC层

析柱,1 cm内径(ID) x 10 cm长。

高结合能力有利于使用中等尺寸的层析柱来分离样品,从而降低了对缓冲液体积的

要求,因此可以精简设备并节约填料成本。Q和S HyperCel填料的动态载量主要受

结合pH和介质材料的电导率影响。最大的吸附结合能力通常在介质材料的电导率

低于5 mS/cm时获得。

**使用上述缓冲液,在Pall LRC层析柱

(1.5 cm内径 x 20 cm高)中进行测定

(洗脱液流速为1,000 cm/h)。

***在一小时内,连续加注5倍柱体积

(CV)的 0.5 - 1 M NaOH。

25

蛋白层析产品

蛋白层析产品

性能

订购信息

比较用S HyperCel™填料与高交联的S琼脂糖和S聚合填料纯化蛋白混合物

Q HyperCel 填料

S HyperCel 填料

S刚性的琼脂糖填料

S 聚合填料

样品:卵清蛋白,细胞色素C,溶菌酶

货号 描述 包装 货号

S HyperCel 填料

描述 包装

填料

填料

填料

填料

填料

填料

填料

填料

上述色谱图显示在S HyperCel填料与两种商业性阳离子交换

填料之间存在着选择性差异。

由于具有中等的离子电荷密度,Q和S HyperCel填料能够为离

子交换层析提供有效的配体,同时也降低了用于洗脱目的蛋

白的盐浓度。洗脱所需盐浓度越低,下游后续处理步骤就越

少,例如缓冲液交换、稀释或洗滤等。

26

(平均)

结合了传统疏水和离子交换层析模

式的新的混合机制

在低离子强度下直接通过疏水层析

模式捕获蛋白

能分离离子交换模式所不能分离的

等电点相似或接近的蛋白

能在“接近生理的环境下”使用。

不需要调整物料的pH,不需要或者

是加少量的盐

下游可以直接配合离子交换层析或

其它层析方法

分离蛋白混合物

从血浆混合物中分离多克隆IgG

用于精细纯化

HEA 和 PPA HyperCel™ 混合模式(疏水-离子交换)填料

拥有与传统的离子填料和疏水填料不能比拟的独特的选择性

规格

性能

订购信息

应用

相关产品

AcroSep 1ml 混合模式预装柱

PRC 1ml和5ml 混合模式预装柱

颗粒大小

HEA 和PPA HyperCel, MEP HyperCel,与传统疏水层析和阴离子交换填料的对比

HEA HyperCel混合模式填料

洗脱 pH

工作 pH

耐压

储存

线性或梯度洗脱

*用含有 5 mg/mL BSA 的PBS溶液测定; 流速: 100 cm/h.

基架

动态载量(10% 穿透)*

配体

结合 pH

高密度交联的纤维素

货号 描述 包装

PPA HyperCel混合模式填料

货号 描述 包装

己胺(脂肪)

苯丙胺(芳香)

上样

上样 结合 洗脱

胎牛血清蛋白(BSA)在PBS缓冲

液(pH 7.4)的吸附与洗脱。数据

显示BSA能够有效地与HE A和PPA HyperCel填料结合,但是,却很难

保持与MEP HyperCel填料的结合

(因为这种配体具有抗体选择

性)。由于没有感胶离子盐,在

PBS缓冲液中能够观察到BSA与苯

基和己基疏水填料两者的结合力较

低。在非理想条件下(pH 7.4和非

常高的盐浓度),阴离子交换填料

(DEAE)也不与BSA结合。

27

蛋白层析产品

蛋白层析产品

一步纯化便能得到高纯度蛋白。一

般产品纯度都可以到达70%-90%,或者更高

快速进行样品处理。在流穿率10%的情况下每mL填料的动态载量>30 mg IgG

IgG高结合能力,且不依赖压单位或

种族

在不需要调整pH值或者离子强度的

情况下,直接上样

即时在物料的浓度仅有50-100μg的时,也能高效的捕获。

从广泛的物料中直接捕获或纯化抗

体,比如 动物血清、腹水和细胞培

养液

独立的亚类或种类。弱结合力变种

(如鼠IgG)得以很好的保留

可以替代传统的疏水层析捕获疏水

分子

已经有多种应用的实例,比如应用

于源自甜乳清和纯乳的抗体分离;

分离各种动物和植物来源的抗体;

从特定的融合蛋白中分离抗体。

MEP HyperCel™ 混合模式填料用于捕获或纯化单克隆和多克隆抗体

(平均)

规格

性能

订购信息

应用

颗粒大小

用 MEP HyperCel 填料从细胞培养悬浮液中纯化单克隆抗体

工作 pH

耐受压力

储存温度

填料基架

人 IgG (10% 穿透)*的动态载量

配体

图 A: 不含血清的细胞培养液

MEP HyperCel混合模式填料

AcroSep™混合模式1ml预装柱

相关产品

图 B: 含5%血清的细胞培养液

配体密度

高密度交联的纤维素

*用含 5 mg/mL人IgG 的 PBS溶液, 流速

为 60 cm/h4巯基-乙基-吡啶

货号 描述 包装

样品A:300mL无蛋白的细胞培养悬浮液。样品B:300 mL含有5%胎牛血清的细胞

培养悬浮液;平衡:50 mM Tris-HCl,pH 8;洗脱:50 mM醋酸盐,pH 4;流量:

70cm/h。在曲线B中,(a)和(b)分别表示水和25mM辛酸钠洗脱液;SDS-PAGE:(1) =粗制样品,(2) =纯化lgG,(H) =重链,(L) =轻链。

28

高分辨率

半刚性的胶

适合于小、中、大规模的应用

测定分子量

蛋白和核苷酸的脱盐

四种不同的规格可以分离纯化分子量

从1,000 到350,000 道尔顿的蛋白

独特的填料特性特性:窄粒径分布和

窄孔径分布

通过凝胶过滤(分子排阻)的方法分

离纯化生物分子

Ultrogel® AcA 凝胶过滤层析填料

用于生物大分子的凝胶过滤层析

规格

性能

应用

颗粒大小 (μm)丙烯酰胺 (%)琼脂糖 (%)排阻极限 (Da)

脱盐能力

根据已知蛋白分子量的混合物,用Ultrogel AcA 54 填料制作分离选择曲线

用 Ultrogel AcA 202 填料大批量的脱盐

工作 pH存储温度

分离范围 (Da)塔板数

分辨率 (塔板数/米)

胶体积

UV监测

盐浓度监测

层析柱尺寸:1.6 cm x 40 cm。

缓冲液:0.05 M Tris-HCl,pH 7.4,其中含有0.17 M氯化钠。

样品组成包括: (a)蓝葡聚糖

2000,用于检测空隙率(Vo);(b )胎牛血清蛋白(分子量

68,000); (c)β-球蛋白(分子

量35,000);(d) 肌红蛋白(分

子量17,800);(e) 细胞色素c(分子量12,400)。样品体

积:0,6mL。流速:4.3 cm/h。插图表示上述这些蛋白质经过

层析柱所得到的洗脱图谱。

层析柱尺寸:5cm x 40cm;体

积:730mL;样品:胎牛血清

蛋白(5mg/mL),其中含有

NaCl(6.5mg/mL);流速:7 cm/h(即140mL/h)。样品体

积 : A = 3 6 m L( 5 %填 料 体

积);B=220mL(30%填料体

积);C = 32 mL(45%填料体

积)。在280 nm紫外波长处检

测。

29

蛋白层析产品

蛋白层析产品

性能

订购信息

用Ultrogel® AcA 202 填料通过重力柱脱盐

图 A,Ultrogel AcA 202 填料

图 C,与葡萄糖基架的填料对比填料

Ultrogel AcA凝胶过滤填料

图 B,与琼脂糖基架的填料的对比

货号 描述 包装 货号 描述 包装

这里比较了用Ultrogel AcA 202 通过重力柱脱盐和用传统的葡萄糖

基质的预装柱脱盐的实验结果。脱盐的结果见下面的附图。结果

显示Ultrogel AcA 202能很好的分离蛋白峰和盐峰。同时通过结果

对比,我们能看到与其他同样是10ml的柱子相比,使用Ultrogel AcA 202 能同时处理更多的样品。

峰数

峰数

峰数

280n

m紫外吸收

280n

m紫外吸收

280n

m紫外吸收

使用Ultrogel AcA 202填料和两种同类琼脂糖和右旋糖苷基质

装填重力柱(10 mL)。将1 mL蛋白质样品[5mg/mL人血清白

蛋白(HSA),1M NaCl]加样到层析柱中,然后用高纯度水洗脱

层析柱并收集1mL洗脱液。使用Horiba微量计,在280nm波

长处检测洗脱液的紫外吸收值和导电率。

30

SDR HyperD® 去除表面活性剂填料

独特的填料用来去除表面活性剂

规格

性能

订购信息

应用

颗粒大小

SDR HyperD去除表面活性剂填料:离心的方式 (< 0.2 mL 胶体积)

SDR HyperD 表面活性剂去除填料

活性剂的量

体积(重量/体积)

从蛋白样品中的去除效率

耐受压力

开启后不能冷冻。

耐受压力聚合物的性能

推荐的停留时间

对Triton X-100的结合能力

工作 pH

疏水的, 长脂肪族链

对多种表面活性剂有高的结合量

对蛋白有高的回收率

对小的疏水分子的高结合力

在酸、极性溶剂和氧化溶剂中保持

稳定

货号

相关产品

AcroSep™ 1ml SDR HyperD 去除表面活性剂1ml 预装柱

描述 包装

由孔腔填充有三维交联疏水性聚合

物的硅化珠组成。小的孔径,和广

泛的粒径分布(40-100μm)和化学

基团的疏水性使SDR HyperD 填料

成为去除有机溶剂的理想选择。

结合应用于病毒灭活工艺中,典型

的表面活性剂分子。(比如TnBP和Triton X-100)

去除生物液中的离子或两性离子有

机溶剂

0.2 mL 5 mg/mL BSA并含有去污剂(Wt./v)。使用Bio-Rad 染料结合实验来监视去

污剂的清除。NR表示“不推荐”,因为加载这种去污剂将超过层析柱容量。

使用快速离心柱模式,SDR结合去污剂的能力仍然非常高。在所有的情况下,超过

99%的去污剂从0.2mL的1%溶液中清除掉了。

用5mg/ml的Triton X-100 的PBS溶液,

pH 7.4,10%穿透,300cm/h

31

蛋白层析产品

蛋白层析产品

实验室规模的LRC层析柱

可装填高达900mL层析填料的玻璃层析柱,应用于生物分子的制备和工艺优化

LRC层析柱 带1个调节柱头 柱床高度(mm) 体积(mL)

柱床高度(mm) 体积(mL) (bar) (psl)

带2个调节柱头 测试的最大耐压值ID(mm)LRC层析柱参数

LRC10×000-120V01

LRC10×080-200V01

LRC10×330-450V01

LRC15×080-200V01

LRC15×330-450V01

LRC15×630-750V01

LRC25×080-200V01

LRC25×330-450V01

LRC25×630-750V01

LRC50×080-200V01

LRC50×330-450V01

型号

图 1

玻璃柱体 [1]

内部液流导杆 [4]密封制动调节器 [5]

内部液流导杆 [4]密封制动调节器 [5]

中央螺丝 [6]

调节柱杆 [6]

调节柱杆 [6]

调节柱杆 [6]

反向螺丝 [10]

反向螺丝 [10]

反向螺母 [7]

反向螺母 [7]

垫圈 [8]

垫圈 [8]

弹簧垫圈 [9]

弹簧垫圈 [9]

O形密封圈 [11]

O形密封圈 [11]

筛板[12]

筛板[12]

标准平头连接头[13]

可调节柱头(预安装)

底部固定柱头(预安装)

标准平头连接头[13]

Pall LRC层析柱结构图

数量描述 结构材质

层析柱包装所含配件

附件(套箍螺母)

烧结筛板的排出器用户指南USD 2482

和特氟隆

连接管道(1/16 in.或1/in. OD) FEPd

和钢材

中压耐受的玻璃层析柱,耐受压差

10-30bar

四种不同的内径:10,15, 25及50mm

一端的柱头可调节,有四种不同高度:

0-120mm,80-200mm,330-450 mm 和

630-750 mm,体积为1-900ml

优化设计的精密柱头结构,通过旋转端

头套环让端头不转动的情况下垂直下压

可轻松单手实现不停泵条件下的端头下

压装填操作(高背压动态下压装填)

上、下端头为烧结玻璃筛板导流层构

造,保证胶平面绝对平整和水平,提高

层析分辨率

旋钮锁定设计,保证即使在使用中压填

料的情况下柱端头也不会发生丝毫位移

10μm筛板精度,兼容低压-中压特性各

种类型填料的装填使用,真正全能

兼容多种层析系统的标准接头(及其转

换接头)有装柱器和单独的玻璃管作为

可选配件

特性

主要应用

小试到中试各类层析实验和生产

低压至中压各类层析填料的装填

32

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