Download - PH Pada Enzim
PENGARUH pH PADA AKTIVITAS ENZIM
PRAKTIKUM NO 1
PENGARUH pH PADA AKTIVITAS ENZIM
Tiap kelompok mengerjakan satu pH
Percobaan yang dilakukan sama hanya pH nya yang berbeda
Ada 5 kelompok pH:pH 4pH 5 pH 6,5pH 8pH 10
. Isi erlenmeyer
15 ml larutan penyangga pH tertentu
6 ml larutan NaCl 0.9%
3 ml larutan substrat
campur
Dilakukan pada suhu kamar
1
. Isi tabung reaksi 1 s/d 5 masing-masing 10 ml HCl 0,05 N
2
4 . Masukkan 1 ml larutan enzim pada erlenmeyer dan catat waktunya
. Masukkan 1 ml dari erlenmeyer ke tabung 2 dst tiap 5 menit
5
1 2 3 4 5
0’ 5’ 10’ 15’ 20’
3 . 1 ml
6 .1 ml larutan KI-KIO3 campur 10’-15’ 520 nm
CARA KERJA
TAHAP PRAKTIKUM
Langkah 1Isi erlenmeyer
• 15 ml larutan penyangga pH 6.5• 6 ml larutan NaCl 0.9%• 3 ml larutan substrat
Campur Letakkan pada suhu kamar
Langkah 2Isi tabung reaksi 1 s/d 5 masing-
masing 10 ml HCl 0,05 N
Langkah 3 : masukkan 1 ml dari erlenmeyer ke tabung 0’ (nol menit)
Langkah 4: Masukkan 1 ml larutan enzim pada erlenmeyer , campur cepat dan catat waktunya
Langkah 5: Masukkan 1 ml dari erlenmeyer ke tabung 2 dst tiap 5 menit (tepat waktunya)
Langkah 6 : masukkan 1 ml larutan KI-KIO3 ke masing-masing tabung campur tunggu 10’-15’ baca pada spektrofotometer 520 nm
PERHITUNGAN
Baca absorbance substrat yang ada pada panjang gelombang 520 nm
Kadar substrat sisa = Abs t/ abs to X 100%
Kadar substrat yang telah dicerna ( S )=
100% - kadar substrat sisaBuat grafik hubungan S dengan t
(waktu)
Δ S
o
ot
Hitung besar ΔS
Buat grafik hubungan ΔS dengan t
ΔS sebagai ordinat dan t (waktu) sebagai abscis
Bandingkan grafik yang didapat pada pH yang berbeda-beda
pH optimum suatu enzim adalah pH yang memberikan aktivitas enzim paling tinggi pH I
Pada pH optimum harga ΔS /t selalu lebih besar dibanding pada pH lainnya
ΔS = P
ΔS
o
o t
pH I
pH II
pH III
pH IV
pH OPTIMUM UMUMNYA BERKISAR ANTARA pH 5 – 9 (BERBENTUK GENTA)
PERKECUALIAN: MISALNYA PEPSIN pH OPTIMUMNYA 1-2
Akr
ivita
s E
(%
)
100
pH < pH opt pH>
Hubungan antara aktivitas enzim dengan pH berbentuk genta karena:
Denaturasi protein pada pH terlalu tinggi atau terlalu rendah
Pengaruh pH pada muatan enzim ataupun substrat, misalnya E- dan SH+ ESHBila pH > maka SH+ S + H+
S tak dapat berikatan dengan E-
Bila pH < maka E- bereaksi dengan H+ EH
EH tak dapat berikatan dengan SH+
pH mempengaruhi konformasi (susunan atom dalam ruang)
Substrat : amilum (dengan iodium berwarna biru)
Enzim : - amilase Amilase adalah suatu
endopolisakaridase, jadi tidak dapat memotong glukosa yang terletak diujung, selain itu juga tak dapat memotong ikatan α-(14) pada glukosa yang terletak sebelum titik cabang
Kinetika enzim amilase
Amilum terdiri dari amilosa dan amilopektin
AMILOSA : Rangkaian glukosa rantai lurus dengan ikatan -1,4-glukosidik
Produk : Maltosa • sedikit glukosa
AMILUM
AMILOPEKTIN
1 4
16
Cara kerja enzim amilase
Amilopektin : Rangkaian glukosa rantai lurus dengan ikatan -1,4-glukosidik dengan sedikit rantai cabang dengan ikatan -1,6-glukosidik
Produk:oligosakarida dengan berat
molekul kecil: • maltosa • maltotriosa• Isomaltosa• α – limit dekstrin (atom C 4-10)
glukosa (sedikit)
Amilopektin
Dekstrin dengan BM medium(Violet, purple, red iodine
colour)
Limit dextrins
Oligosakarida dengan BM rendah
Berdasar tingatan reaksi serta warnanya dengan Iodium AMILUM ( Biru)
AMILODEKSTRIN (ungu)
ERITRODEKSTRIN (merah)
AKRODEKSTRIN (tak mengubah warna Iodium)
MALTOSA ( tak mengubah warna Iodium)
PROGRESS CURVE DIUKUR DENGAN SPEKTROFOTOMETER
Abs P
t (waktu)
αO
O
• LARUTAN PENYANGGA DLL
• [So]
• pH TERTENTU
• SUHU TERTENTU
• λ TERTENTU
LARUTAN ENZIM
DIIKUTI SECARA KONTINU
• Abs P (PRODUK) DAPAT
DIKONVERSI MENJADI P
• P = Δ S ( JUMLAH SUBSTRAT
YANG TELAH DIUBAH]
PROGRESS CURVE
Hubungan antara P dengan t
Hubungan antara Δ S dengan t
Hubungan antara abs P dengan t
vo = tangens α = R’R / OR P
t (waktu)
αO
O
R
R’
PROGRESS CURVE MULA-MULA BERBENTUK LURUS, LALU BERBELOK
Sebab: Jumlah substrat makin lama makin sedikit Adanya mekanisme hambatan oleh produk (product
inhibition)
A P
E -
O
O t (waktu)
α B
B’
C’
C”
C*
P
KECEPATAN SESAAT vsesaat di suatu titik
merupakan tangens sudut yang dibentuk oleh grafik di titik itu dengan sumbu X
vsesaat = - dS/dt
= dP/dtvsesaat di titik o disebut
vo atau kecepatan awal = tg α
MACAM-MACAM KECEPATAN
α
β
KECEPATAN RATA-RATA vrata-rata di titik B’ = B’B/OB
vrata-rata di titik C’ = C’C/OC
t (waktu)
α B
B’
C’
C
C*
P
o
o
P
KECEPATAN SESAAT PADA to
vo = tg α = C’’C/OC
PADA TITIK B’
vsesaat = C”C*/B’C*= tg α
PADA TITIK C’
vsesaat = tg β < tg α
vrata-rata
PADA B’ = B’B/OB = tg α
PADA C’ = C’C/OC < tg α t (waktu)
α
O
O
B
B’
βC’
C”
α
C
C*
JADI PADA AWAL PROGRESS CURVE WAKTU GRAFIK MASIH LURUS
KECEPATAN RATA-RATA PADA TIAP TITIK = KECEPATAN SESAAT = vo = tg α
vo ATAU KECEPATAN AWAL (INITIAL VELOCITY) ADALAH KECEPATAN SESAAT DI TITIK O
• PADA to KADAR SUBSTRAT = [So] MASIH 100%
vo DIUKUR DENGAN CARA MENGUKUR TANGENS SUDUT YANG DIBENTUK GRAFIK DGN SUMBU X DI TITIK O
vo MERUPAKAN TANGENS BAGIAN AWAL PROGRESS CURVE YANG MASIH LURUS
Faktor yg mempengaruhi aktivitas reaksi enzimatik pH Suhu Kadar substrat Kadar enzim Modifier : Inhibitor
Aktivator
Praktikum kinetika enzim amilase
Substrat : amilum ( dengan Iodium berwarna biru)
Enzim : α-amilase Apabila pencernaan sempurna hasil
utamanya adalah maltosa (tidak berwarna dengan Iodium, sehingga warna larutan adalah warna Iodium yaitu kuning)
Fungsi larutan HCl :
Melepas I2 dari KI-KIO3
5 KI + KIO3 + 6 HCl -> 3 I2 + 6 KCl +
3 H2O Menghentikan kerja enzim
Fungsi Larutan buffer
Memberikan pH untuk percobaan
Mempertahankan pH selama percobaan
Fungsi larutan Na Cl 0.9%
Sebagai aktivator enzim amilase ( Cl-)
SPEKTROFOTOMETER
SUMBER FILTER/ SLIT KUVET FOTOSEL GALVANO-
CAHAYA MONO- METER
CHROMATOR
λ TERTENTU
SUMBER CAHAYA : PUNYA BANYAK SPEKTRUM FILTER/MONOCHROMATOR
• UNTUK MENDAPATKAN BERKAS SINAR/ SPEKTRUM YANG DIINGINKAN
SLIT: MENINGKATKAN KEMURNIAN KROMATIK (λ = PANJANG GELOMBANG) KUVET : BERISI LARUTAN YANG DIPERIKSA
• SINAR YANG DITERUSKAN DARI KUVET AKAN MENUJU KE FOTOSEL
FOTOSEL • MENGUBAH ENERGI SINAR MENJADI ENERGI
LISTRIK GALVANOMETER :
• MENGUBAH ENERGI LISTRIK MENJADI ENERGI MEKANIK MENGGERAKKAN JARUM
TRANSMITTANCE : 0 -100% ABSORBANCE = OD (OPTICAL DENSITY = EXTINCTION = 2 - LOG T
TRANSMITTANCE : • SESUAI SINAR YANG DITERUSKAN
ABSORBANCE • SESUAI SINAR YANG DISERAP
Misalkan T = 100% maka Abs = 2 – L0G 100 = 0
T = 10% Abs = 2 – LOG 10 = 1
ABSORBANCE TERGANTUNG • SIFAT • KADAR
BAHAN/ LARUTAN YANG DIPERIKSA