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LABORATORIO NOVOFecha de elaboracin: Febrero de 2015Pgina:
Manual de Procedimientos
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
NDICEINTRODUCCIN1. PRESENTACIN
1
2.INTRODUCCIN
2
3.OBJETIVO GENERAL
3
4.OBJETIVOS ESPECFICOS
4
5. NORMAS OFICIALES MEXICANAS
5
6.PROCEDIMIENTOS
28
BIOMETRA HEMTICA
28
GRUPO SANGUNEO
31
PLAQUETAS
34
RETICULOCITOS
35
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR
37
CIDO RICO
40
ALT (GPT)
43
AMILASA
45
ASO LTEX
47
AST (GOT)
50
BILIRRUBINAS
52
COLESTEROL-HDL
55
COLESTEROL
58
COOMBS DIRECTO
60
COOMBS INDIRECTO
63
COPROPARASITOSCOPICO
66
CREATININA
71
DEPURACIN DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS
74
ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA
78
EXMEN GENERAL DE ORINA
87
FACTOR REUMATOIDE
97
FOSFATASA ALCALINA
100
GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA
102
HIV
106
LIPASA
109
PROTENA C REACTIVA
111
PROTENAS TOTALES Y ALBUMINA
114
PRUEBA DE EMBARAZO EN SANGRE
116
PRUEBAS CRUZADAS
119
TIPO DE COAGULACIN
122
TIEMPO DE PROTROMBINA (T.P.)
124
TIEMPO DE PROTROMBINA
126
TIEMPO DE SANGRADO
129
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTP)
131
TRIGLICRIDOS
134
UREA
136
VDRL
138
PRESENTACIN
Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un instrumento que funcione como gua para la correcta ejecucin de todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio, y de esta manera contribuir al orden y estandarizacin del mismo.
INTRODUCCIN
Los laboratorios clnicos representan un apoyo primordial para el rea mdica, ya que a travs de los anlisis realizados en ellos se pueden diagnosticar diferentes patologas y establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente. Es por eso, que conscientes de la gran importancia y con la finalidad de alcanzar un trabajo de calidad, es indispensable contar con un manual que presente de manera formal y sistemtica los procedimientos del Laboratorio.
El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su contenido sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas actividades diarias.
Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en el laboratorio.OBJETIVO GENERAL
Proporcionar al Laboratorio Novo, un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos tcnicos que se realizan en Laboratorio Novo.OBJETIVOS ESPECFICOS
Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo.
Ordenar todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio MediLab, en un solo documento. Contribuir a la aplicacin de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento tcnico.
Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las actividades de laboratorio.
NORMAS OFICIALES MEXICANAS Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011, Para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos.
Norma Oficial Mexicana NOM-005-STPS-1998, Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias quimicas peligrosas. 2.2 Norma Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema general de unidades de medida. 2.3 Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010, Para la prevencion y control de la infeccion por Virus de la Inmunodeficiencia Humana. 2.4 Norma Oficial Mexicana NOM-012-STPS-1999, Condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan, usen, manejen, almacenen o transporten fuentes de radiaciones ionizantes. 2.5 Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccion ambiental-Salud ambiental-Residuos peligrosos biologico-infecciosos-Clasificacion y especificaciones de manejo. 2.6 Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998, Del expediente clinico. 2.7 Norma Oficial Mexicana NOM-197-SSA1-2000, Que establece los requisitos minimos de infraestructura y equipamiento de hospitales y consultorios de atencion medica especializada.
PROCEDIMIENTOSBiometra Hemtica
1.- Objetivo
La biometra hemtica es uno de los estudios que con ms frecuencia se solicita en el laboratorio, asimismo, es el primer examen al que se enfrenta el clnico en la valoracin diagnstica de un paciente. Aunque se considera como un solo examen de laboratorio, en realidad valora 3 lneas celulares, cada una con funciones diferentes entre s pero que comparten u n origen comn en la mdula sea: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Los usos de la biometra hemtica son mltiples, pero lo ms frecuentes son para el seguimiento de pacientes con quimioterapia o radioterapia, y el diagnstico de pacientes con sndrome anmico, sndrome febril o sndrome purprico.
2.- Material, Reactivos e instrumental
Para toma de muestra:
Un tubo con anticoagulante EDTA para vacutainer color lila
Una aguja desechable vacutainer
Para procesar la prueba:
Un mezclador
Equipo Wiener Lab Counter 19
Cubetas para contador
3.- Procedimiento
Se toma la muestra
Se coloca la muestra en la mezcladora para evitar coagulacin
En el equipo Wiener Lab Counter 19 se capturan los siguientes datos del paciente:
Nombre
Edad
Sexo
Se toma la muestra de la mezcladora y se coloca en la aguja del equipo Wiener Lab Counter 19
Se esperan resultados y se imprimen4.- Valores de Referencia
4.1 Eritrocitos en hombre: 5,000,000 6,000,000 por mm cbico
Mujer: 4,000,000 5,500,000 por mm cbico
4.2 Hemoglobina en hombre: De 14 18.0 g%
Mujer: De 12 16 g%
4.3 Hematocrito en hombre: De 34 46 %
Mujer: De 32 40 %
4.4 Leucocitos en hombres y mujeres: 5,000 10,000 por mm cbico
4.4.1 Linfocitos: 20 50%
4.4.2 Monocitos: 0 10%
4.4.3 Basfilos: 0 2%
4.4.4 Eosinfilos: 0 5%
4.4.5 Neutrfilos: 35 70%
4.4.6 Segmentados: 90 100%
4.4.7 En banda: 0 10%
4.4.8 Metamielocitos: 0%
4.4.9 Mielocitos: 0%
4.4.10 Promielocitos: 0%
4.4.11 Mieloblastos: 0%
4.5 Plaquetas: Van de 150,000 450,000 por mm cbico
4.6 Reticulocitos: 0.5 1.5%
5.- Bibliografa
Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA. La sangre y sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill. Mxico, D.F. 1 Edicin 2005 captulo 3 pginas 15 19.
Grupo Sanguneo
1.- Objetivo
Determinacin de los diferentes grupos sanguneos ya sea en placa o en tubo.
2.- Fundamento
En la membrana del eritrocito estn presentes diferentes antgenos que determinan el grupo sanguneo de un individuo siguiendo las leyes de Mendel.
3.- Material y Reactivos
Solucin salina fisiolgica 0.9%
Sangre tomada en tubo con anticoagulante E.D.T.A.
Tubos de ensayo
Antisueros: Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D Suero de Coombs
Albmina bovina al 22%
Centrfuga
4. - Procedimiento
Una vez obtenida la sangre preparar una suspensin de glbulos rojos a 5% con solucin salina
Se van a tomar 4 tubos a los que se les marcar de la siguiente manera: A, B, AB Y D.
Aadir una gota de suspensin de glbulos rojos a cada tubo
Aadir una gota de cada suero segn corresponda una gota de anti A, una gota de suero de anti B, una de anti D y una gota de suero anti AB al tubo AB.
Mezclar y meter todos los tubos a la centrfuga por uno o dos minutos
Observar si hay o no aglutinacin
Si hay aglutinacin en el tubo A, debe haber en el tubo AB, y no hay en B, y si en D entonces la sangre es A(+)
Si por el contrario hay aglutinacin en B y en AB, y tambin en D pero no hay en A, el grupo sanguneo es B(+)
Si hay aglutinacin en A, en B, en AB, y en D se trata de un grupo sanguneo AB(+)
Y si no hay aglutinacin ni en A, en B, ni en AB, pero si en D, entonces estamos hablando del grupo O(+)
4.1 Prueba Du
Cuando nos da negativo el Rh, hacemos un prueba complementaria llamada Du y consiste en la bsqueda de anticuerpos incompletos.
Para ello se agrega una gota de albmina bovina al 22% al tubo que resultara D o Rh(-) y se mete a bao mara por espacio de 15 minutos una vez transcurrido ese tiempo sacar el tubo del bao mara y se centrifuga observando si hay o no aglutinacin en caso negativo lavar 4 veces con solucin salina y al final se aade una gota de suero de Coombs y se centrifuga observando si hay o no aglutinacin y se reporta como Du(-) en el caso de que no haya aglutinacin, pero si la hubiera entonces se reporta como Du(+).
5.- Bibliografa
Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 2 CAP 23 PAGS. 845 857.
Plaquetas
1.- Objetivo
Determinar la cuenta de plaquetas de una muestra mediante el frotis de sangre.
2.- Introduccin
Las plaquetas son clulas especiales que no tienen ncleo y derivan de los megacariocitos y no se dividen sintetizan DNA. Cuando hay la ruptura de un vaso sanguneo se activa el sistema de coagulacin por la presencia de colgeno y adems se activa la adhesin plaquetaria.
3.- Procedimiento
Una vez teido por el mtodo de Wright entonces se va a contar las plaquetas que haya en 10 campos y se va a multiplicar el resultado por 2000 y esto nos dar el resultado aproximado de plaquetas por mm cbico en el paciente.
4.- Valores de referencia
Tanto en hombres como en mujeres el resultado esperado es de 150,000 a 450,000 plaquetas por mm cbico de sangre.
5.- Bibliografa
LYNCHM.J./S.S.RAPAHEL/L.D.MELLOR/P.D.SPAREM/M.J.H.INWOOD MTODOS DE LABORATORIO EDIT INTERAMERICANA, MXICO,D.F. 2da EDICIN 1997 VOL 2 CAP 22 PG 818.
Reticulocitos
1.- Objetivo
Determinar el porcentaje de Reticulocitos en un frotis de sangre perifrica.
2.- Fundamento
Los Reticulocitos son glbulos rojos jvenes que se caracterizan por la presencia de una red, o malla formada por filamentos, restos de las fases nucleadas, lo que indica su produccin reciente por la mdula sea. No se observan en un estudio de rutina como la biometra, porque se necesita una tincin especial con azul de cresilo o de metileno para que sean evidentes. La cifra normal se expresa como porcentaje y se haya entre 0.5 y 1.5%. La elevacin de la cifra de Reticulocitos indica un aumento de la produccin de eritrocitos por la mdula sea. La elevacin ms importante se produce en el caso de las anemias hemolticas, porque la destruccin de los eritrocitos y la hipoxia tisular por la anemia estimulan una serie de factores, como eritropoyetina, interleucinas, etc., que obligan a la mdula sea a aumentar la produccin.
3.- Material y reactivos
Sangre tomada previamente en tubo color lila con E.D.T.A. como anticoagulante.
Colorante azul de metileno nuevo.
Tubo de ensayo de 5 ml de capacidad
Pipetas Pasteur
Tapn para tubo de ensayo
Bao Mara a 37C
Mezclador
Microscopio
Portaobjetos
Aceite de inmersin
4.- Procedimiento
Se colocan 3 gotas de sangre en el tubo
Se aade tres gotas de colorante Azul de Metileno Nuevo
Se tapa el tubo y se mezcla bien
Se incuba a 37C por 15 minutos
Se preparan frotis y se deja secar al aire
Contar al microscopio cuantos Reticulocitos hay en 1000 eritrocitos5.- Resultados
El valor de referencia es de 0.5 1.5%
6.- Bibliografa
Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA La sangre y sus enfermedades. Editorial Mc Graw Hill. Mxico D.F. 1 Edicin 2005 PG 12.Velocidad de sedimentacin globular
1.- Objetivo
Determinar la velocidad de sedimentacin en una muestra de sangre anticoagulada.
2.- Fundamento
La velocidad de sedimentacin globular es una prueba empleada universalmente como ndice de la presencia de enfermedades activas de muchas clases. La prueba depende del hecho de que la sangre a la que se ha aadido un anticoagulante los glbulos rojos sedimenta hasta que forma una columna compacta en la parte inferior del tubo o recipiente. La velocidad de este proceso depende de varios factores, siendo los principales:
a. Formacin de Rouleaux
b. Concentracin de fibringeno es plasma
c. Concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma
3.- Material, Reactivos, Instrumental
Sangre anticoagulada en tubo de color lila con E.D.T.A.
Tubo de Wintrobe
Gradilla para tubos de Wintrobe
Pipetas Pasteur
Mezclador
4.- Mtodo
Toma de muestra:
Se extraen 2 mililitros de sangre que se colocan en un tubo de ensayo con E.D.T.A. como anticoagulante (tubo de color lila) Mezclar suavemente invirtiendo el tubo varias veces.
El paciente deber estar en ayunas, tranquilo con el fin de obtener mejores resultados.
Si se toma durante el transcurso del da, debern tenerse en cuenta las variaciones fisiolgicas tales como la actividad muscular, estados emocionales y variaciones del clima que tienden a aumentar el valor real de la V.S.G.
Tcnica para determinar la V.S.G.
a. Mediante una pipeta de Pasteur, llenar un tubo de Wintrobe hasta la marca cero con sangre anticoagulada, evitando la formacin de burbujas.
b. Colocar el tubo en la gradilla de sedimentacin en una posicin exactamente vertical
c. Al final de la hora, se lee la V.S.G. mediante la longitud de la columna del plasma sobre las clulas en los nmeros de la izquierda.
A veces se acostumbra hacer las lecturas cada 5 minutos durante una hora para sacar curvas graficando tiempo contra sedimentacin en milmetros.
5.- Valores de referencia
LmitesPromedio
Hombres0-7 mm/Hr4 mm/Hr
Mujeres0-15 mm/Hr10 mm/Hr
Nios1-15 mm/Hr5-10 mm/Hr
6.- Bibliografa
Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 1 cap. 12 pg. 738-740.
cido rico
1.- Objetivo
Determinar el cido en sangre de un paciente.
2.- Fundamento
El cido rico es en los mamferos el metablico final del catabolismo de las bases pricas y su elevacin est asociada a la gota, es decir, los reumatismos hiperuricmicos. En los pacientes con tal difusin, aparecen cristales de cido rico en las articulaciones y en los tendones lo que originan las manifestaciones reumticas caractersticas. Niveles altos de cido rico estn tambin asociados a patologa renal por retencin de productos nitrogenados asocindose en estos casos a valores tambin altos de urea y de creatinina.
El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno y en presencia de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosceo.
uricasa
cido rico + 2H2O + O2Alantona + CO2+ 2H2O2POD
2H2O2+ 4-AF + DCPS quinona + 4H2O
3.- Material, reactivos e instrumental
Sangre tomada al paciente en tubo color rojo
Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Bao Mara
Termmetro
Cronmetro
Gradilla
Reactivo para cido rico Serapack Bayer
Centrfuga
Estndar de cido rico
Sueros control
4.- Procedimiento
Centrifugar la muestra de sangre ya coagulada
Separar el suero en un tubo limpio y seco
Poner el RA 50 en cido rico
En un tubo poner 20 ul de muestra en otro tubo 20 ul de estndar
En otro tubo se ponen 20 ul de suero control
Aadir a cada tubo 1 ml de reactivo
Poner un blanco de reactivo
Incubar todos los tubos a 37C por 5 minutos
Sacar los tubos
Leer el RA 50
Dejar que el aparato imprima el resultado
Reportar el resultado en el informe correspondiente
5.- Valores de referencia
Mujeres: 2.5 5.7 mg/dl
Hombres: 3.5 6.0 mg/dl
6.- Bibliografa
Manual de tcnica de reactivos Spinreact. Mxico 2002
ALT (GPT)
1.- Objetivo
Determinar la ALT en un paciente determinado.
2.- Fundamento
La determinacin cintica de la alanina aminotransferasa (ALT) se basa en las recomendaciones de la IFCC;
L-alanina + alfa-cetoglutarato ALT Piruvato + L-glutamato
Piruvato + NADH + H+ LDH L-Lactato + NAD+
ALT= Alanina Aminotransferasa
LDH= Lactato Deshidrogenasa
3.- Material, reactivos e instrumental
Sangre del paciente en tubo rojo
Centrfuga
Gradilla
Tubos de ensayo
Termmetro
Cronmetro
Bao Mara
Analizador RA 50
Sueros control
Pipetas Automticas
Puntas para pipetas
Reactivo para ALT
4.- Procedimiento
Centrifugar la sangre
Separar el suero en un tubo limpio y seco
Seleccionar la funcin ALT en el RA 50
Medir 1 ml de solucin de trabajo y ponerlo en un tubo
Aadir 100 ul del suero
Verter la mezcla en una cubeta
Leer en el RA 50
Reportar el resultado en el formato correspondiente
5.- Valores de referencia
A 37C el intervalo es de 0 49 U/L
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de Serapak Bayer, Mxico
Amilasa
1.- Objetivo
Determinar la amilasa en el suero de un paciente.
2.- Fundamento
Durante aos los niveles de alfa-amilasa en suero y plasma nos han evidenciado la necesidad de la determinacin para el diagnstico de pancreatitis aguda.
Este mtodo de determinacin de alfa-amilasa utiliza un substrato cromognico, 2-cloro-4-nitrofenol ligado a la maltotriosa.
CNPG3 a amilasa CNP + CNPG2 + G3 + G
Como se indica, la a amilasa hidroliza el substrato 2-cloro-4-nitrofenol-a-D-maltrotiosido, (CNPG3) dando lugar a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP), 2-cloro-4-nitrofenol-a-D-maltrotiosido, (CNPG2), maltotriosa G3 y glucosa G.
La cantidad de CNP formado puede ser detectado espectrofotomtricamente a 450 nm dando un medida directa de la actividad de la a-amilasa de la muestra. La reaccin no est inhibida por factores endgenos.
3.- Material, reactivos e instrumental
Sangre del paciente en tubo rojo
Centrfuga
Tubos de ensayo
Analizador RA 50
Termmetro
Gradilla
Suero control
Pipetas
Puntas para pipetas
4.- Procedimiento
Reactivo1.0 ml
Suero o Plasma20 ul
Orina Muestra10 ul
Meter la muestra al analizador RA 50
Esperar a que arroje el resultado
Reportar el resultado en el formato correspondiente
5.- Valores de referencia
Suero, Plasma55 mg/dl
35 55 mg/dl
65 mg/dl
45 65 mg/dl