LABORATORIO NOVOFecha de elaboracin: Febrero de 2015Pgina:

Manual de Procedimientos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

NDICEINTRODUCCIN1. PRESENTACIN

1

2.INTRODUCCIN

2

3.OBJETIVO GENERAL

3

4.OBJETIVOS ESPECFICOS

4

5. NORMAS OFICIALES MEXICANAS

5

6.PROCEDIMIENTOS

28

BIOMETRA HEMTICA

28

GRUPO SANGUNEO

31

PLAQUETAS

34

RETICULOCITOS

35

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

37

CIDO RICO

40

ALT (GPT)

43

AMILASA

45

ASO LTEX

47

AST (GOT)

50

BILIRRUBINAS

52

COLESTEROL-HDL

55

COLESTEROL

58

COOMBS DIRECTO

60

COOMBS INDIRECTO

63

COPROPARASITOSCOPICO

66

CREATININA

71

DEPURACIN DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS

74

ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA

78

EXMEN GENERAL DE ORINA

87

FACTOR REUMATOIDE

97

FOSFATASA ALCALINA

100

GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA

102

HIV

106

LIPASA

109

PROTENA C REACTIVA

111

PROTENAS TOTALES Y ALBUMINA

114

PRUEBA DE EMBARAZO EN SANGRE

116

PRUEBAS CRUZADAS

119

TIPO DE COAGULACIN

122

TIEMPO DE PROTROMBINA (T.P.)

124

TIEMPO DE PROTROMBINA

126

TIEMPO DE SANGRADO

129

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTP)

131

TRIGLICRIDOS

134

UREA

136

VDRL

138

PRESENTACIN

Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un instrumento que funcione como gua para la correcta ejecucin de todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio, y de esta manera contribuir al orden y estandarizacin del mismo.

INTRODUCCIN

Los laboratorios clnicos representan un apoyo primordial para el rea mdica, ya que a travs de los anlisis realizados en ellos se pueden diagnosticar diferentes patologas y establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente. Es por eso, que conscientes de la gran importancia y con la finalidad de alcanzar un trabajo de calidad, es indispensable contar con un manual que presente de manera formal y sistemtica los procedimientos del Laboratorio.

El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su contenido sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas actividades diarias.

Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en el laboratorio.OBJETIVO GENERAL

Proporcionar al Laboratorio Novo, un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos tcnicos que se realizan en Laboratorio Novo.OBJETIVOS ESPECFICOS

Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo.

Ordenar todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio MediLab, en un solo documento. Contribuir a la aplicacin de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento tcnico.

Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las actividades de laboratorio.

NORMAS OFICIALES MEXICANAS Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011, Para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos.

Norma Oficial Mexicana NOM-005-STPS-1998, Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias quimicas peligrosas. 2.2 Norma Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema general de unidades de medida. 2.3 Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010, Para la prevencion y control de la infeccion por Virus de la Inmunodeficiencia Humana. 2.4 Norma Oficial Mexicana NOM-012-STPS-1999, Condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan, usen, manejen, almacenen o transporten fuentes de radiaciones ionizantes. 2.5 Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccion ambiental-Salud ambiental-Residuos peligrosos biologico-infecciosos-Clasificacion y especificaciones de manejo. 2.6 Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998, Del expediente clinico. 2.7 Norma Oficial Mexicana NOM-197-SSA1-2000, Que establece los requisitos minimos de infraestructura y equipamiento de hospitales y consultorios de atencion medica especializada.

PROCEDIMIENTOSBiometra Hemtica

1.- Objetivo

La biometra hemtica es uno de los estudios que con ms frecuencia se solicita en el laboratorio, asimismo, es el primer examen al que se enfrenta el clnico en la valoracin diagnstica de un paciente. Aunque se considera como un solo examen de laboratorio, en realidad valora 3 lneas celulares, cada una con funciones diferentes entre s pero que comparten u n origen comn en la mdula sea: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.

Los usos de la biometra hemtica son mltiples, pero lo ms frecuentes son para el seguimiento de pacientes con quimioterapia o radioterapia, y el diagnstico de pacientes con sndrome anmico, sndrome febril o sndrome purprico.

2.- Material, Reactivos e instrumental

Para toma de muestra:

Un tubo con anticoagulante EDTA para vacutainer color lila

Una aguja desechable vacutainer

Para procesar la prueba:

Un mezclador

Equipo Wiener Lab Counter 19

Cubetas para contador

3.- Procedimiento

Se toma la muestra

Se coloca la muestra en la mezcladora para evitar coagulacin

En el equipo Wiener Lab Counter 19 se capturan los siguientes datos del paciente:

Nombre

Edad

Sexo

Se toma la muestra de la mezcladora y se coloca en la aguja del equipo Wiener Lab Counter 19

Se esperan resultados y se imprimen4.- Valores de Referencia

4.1 Eritrocitos en hombre: 5,000,000 6,000,000 por mm cbico

Mujer: 4,000,000 5,500,000 por mm cbico

4.2 Hemoglobina en hombre: De 14 18.0 g%

Mujer: De 12 16 g%

4.3 Hematocrito en hombre: De 34 46 %

Mujer: De 32 40 %

4.4 Leucocitos en hombres y mujeres: 5,000 10,000 por mm cbico

4.4.1 Linfocitos: 20 50%

4.4.2 Monocitos: 0 10%

4.4.3 Basfilos: 0 2%

4.4.4 Eosinfilos: 0 5%

4.4.5 Neutrfilos: 35 70%

4.4.6 Segmentados: 90 100%

4.4.7 En banda: 0 10%

4.4.8 Metamielocitos: 0%

4.4.9 Mielocitos: 0%

4.4.10 Promielocitos: 0%

4.4.11 Mieloblastos: 0%

4.5 Plaquetas: Van de 150,000 450,000 por mm cbico

4.6 Reticulocitos: 0.5 1.5%

5.- Bibliografa

Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA. La sangre y sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill. Mxico, D.F. 1 Edicin 2005 captulo 3 pginas 15 19.

Grupo Sanguneo

1.- Objetivo

Determinacin de los diferentes grupos sanguneos ya sea en placa o en tubo.

2.- Fundamento

En la membrana del eritrocito estn presentes diferentes antgenos que determinan el grupo sanguneo de un individuo siguiendo las leyes de Mendel.

3.- Material y Reactivos

Solucin salina fisiolgica 0.9%

Sangre tomada en tubo con anticoagulante E.D.T.A.

Tubos de ensayo

Antisueros: Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D Suero de Coombs

Albmina bovina al 22%

Centrfuga

4. - Procedimiento

Una vez obtenida la sangre preparar una suspensin de glbulos rojos a 5% con solucin salina

Se van a tomar 4 tubos a los que se les marcar de la siguiente manera: A, B, AB Y D.

Aadir una gota de suspensin de glbulos rojos a cada tubo

Aadir una gota de cada suero segn corresponda una gota de anti A, una gota de suero de anti B, una de anti D y una gota de suero anti AB al tubo AB.

Mezclar y meter todos los tubos a la centrfuga por uno o dos minutos

Observar si hay o no aglutinacin

Si hay aglutinacin en el tubo A, debe haber en el tubo AB, y no hay en B, y si en D entonces la sangre es A(+)

Si por el contrario hay aglutinacin en B y en AB, y tambin en D pero no hay en A, el grupo sanguneo es B(+)

Si hay aglutinacin en A, en B, en AB, y en D se trata de un grupo sanguneo AB(+)

Y si no hay aglutinacin ni en A, en B, ni en AB, pero si en D, entonces estamos hablando del grupo O(+)

4.1 Prueba Du

Cuando nos da negativo el Rh, hacemos un prueba complementaria llamada Du y consiste en la bsqueda de anticuerpos incompletos.

Para ello se agrega una gota de albmina bovina al 22% al tubo que resultara D o Rh(-) y se mete a bao mara por espacio de 15 minutos una vez transcurrido ese tiempo sacar el tubo del bao mara y se centrifuga observando si hay o no aglutinacin en caso negativo lavar 4 veces con solucin salina y al final se aade una gota de suero de Coombs y se centrifuga observando si hay o no aglutinacin y se reporta como Du(-) en el caso de que no haya aglutinacin, pero si la hubiera entonces se reporta como Du(+).

5.- Bibliografa

Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 2 CAP 23 PAGS. 845 857.

Plaquetas

1.- Objetivo

Determinar la cuenta de plaquetas de una muestra mediante el frotis de sangre.

2.- Introduccin

Las plaquetas son clulas especiales que no tienen ncleo y derivan de los megacariocitos y no se dividen sintetizan DNA. Cuando hay la ruptura de un vaso sanguneo se activa el sistema de coagulacin por la presencia de colgeno y adems se activa la adhesin plaquetaria.

3.- Procedimiento

Una vez teido por el mtodo de Wright entonces se va a contar las plaquetas que haya en 10 campos y se va a multiplicar el resultado por 2000 y esto nos dar el resultado aproximado de plaquetas por mm cbico en el paciente.

4.- Valores de referencia

Tanto en hombres como en mujeres el resultado esperado es de 150,000 a 450,000 plaquetas por mm cbico de sangre.

5.- Bibliografa

LYNCHM.J./S.S.RAPAHEL/L.D.MELLOR/P.D.SPAREM/M.J.H.INWOOD MTODOS DE LABORATORIO EDIT INTERAMERICANA, MXICO,D.F. 2da EDICIN 1997 VOL 2 CAP 22 PG 818.

Reticulocitos

1.- Objetivo

Determinar el porcentaje de Reticulocitos en un frotis de sangre perifrica.

2.- Fundamento

Los Reticulocitos son glbulos rojos jvenes que se caracterizan por la presencia de una red, o malla formada por filamentos, restos de las fases nucleadas, lo que indica su produccin reciente por la mdula sea. No se observan en un estudio de rutina como la biometra, porque se necesita una tincin especial con azul de cresilo o de metileno para que sean evidentes. La cifra normal se expresa como porcentaje y se haya entre 0.5 y 1.5%. La elevacin de la cifra de Reticulocitos indica un aumento de la produccin de eritrocitos por la mdula sea. La elevacin ms importante se produce en el caso de las anemias hemolticas, porque la destruccin de los eritrocitos y la hipoxia tisular por la anemia estimulan una serie de factores, como eritropoyetina, interleucinas, etc., que obligan a la mdula sea a aumentar la produccin.

3.- Material y reactivos

Sangre tomada previamente en tubo color lila con E.D.T.A. como anticoagulante.

Colorante azul de metileno nuevo.

Tubo de ensayo de 5 ml de capacidad

Pipetas Pasteur

Tapn para tubo de ensayo

Bao Mara a 37C

Mezclador

Microscopio

Portaobjetos

Aceite de inmersin

4.- Procedimiento

Se colocan 3 gotas de sangre en el tubo

Se aade tres gotas de colorante Azul de Metileno Nuevo

Se tapa el tubo y se mezcla bien

Se incuba a 37C por 15 minutos

Se preparan frotis y se deja secar al aire

Contar al microscopio cuantos Reticulocitos hay en 1000 eritrocitos5.- Resultados

El valor de referencia es de 0.5 1.5%

6.- Bibliografa

Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA La sangre y sus enfermedades. Editorial Mc Graw Hill. Mxico D.F. 1 Edicin 2005 PG 12.Velocidad de sedimentacin globular

1.- Objetivo

Determinar la velocidad de sedimentacin en una muestra de sangre anticoagulada.

2.- Fundamento

La velocidad de sedimentacin globular es una prueba empleada universalmente como ndice de la presencia de enfermedades activas de muchas clases. La prueba depende del hecho de que la sangre a la que se ha aadido un anticoagulante los glbulos rojos sedimenta hasta que forma una columna compacta en la parte inferior del tubo o recipiente. La velocidad de este proceso depende de varios factores, siendo los principales:

a. Formacin de Rouleaux

b. Concentracin de fibringeno es plasma

c. Concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma

3.- Material, Reactivos, Instrumental

Sangre anticoagulada en tubo de color lila con E.D.T.A.

Tubo de Wintrobe

Gradilla para tubos de Wintrobe

Pipetas Pasteur

Mezclador

4.- Mtodo

Toma de muestra:

Se extraen 2 mililitros de sangre que se colocan en un tubo de ensayo con E.D.T.A. como anticoagulante (tubo de color lila) Mezclar suavemente invirtiendo el tubo varias veces.

El paciente deber estar en ayunas, tranquilo con el fin de obtener mejores resultados.

Si se toma durante el transcurso del da, debern tenerse en cuenta las variaciones fisiolgicas tales como la actividad muscular, estados emocionales y variaciones del clima que tienden a aumentar el valor real de la V.S.G.

Tcnica para determinar la V.S.G.

a. Mediante una pipeta de Pasteur, llenar un tubo de Wintrobe hasta la marca cero con sangre anticoagulada, evitando la formacin de burbujas.

b. Colocar el tubo en la gradilla de sedimentacin en una posicin exactamente vertical

c. Al final de la hora, se lee la V.S.G. mediante la longitud de la columna del plasma sobre las clulas en los nmeros de la izquierda.

A veces se acostumbra hacer las lecturas cada 5 minutos durante una hora para sacar curvas graficando tiempo contra sedimentacin en milmetros.

5.- Valores de referencia

LmitesPromedio

Hombres0-7 mm/Hr4 mm/Hr

Mujeres0-15 mm/Hr10 mm/Hr

Nios1-15 mm/Hr5-10 mm/Hr

6.- Bibliografa

Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 1 cap. 12 pg. 738-740.

cido rico

1.- Objetivo

Determinar el cido en sangre de un paciente.

2.- Fundamento

El cido rico es en los mamferos el metablico final del catabolismo de las bases pricas y su elevacin est asociada a la gota, es decir, los reumatismos hiperuricmicos. En los pacientes con tal difusin, aparecen cristales de cido rico en las articulaciones y en los tendones lo que originan las manifestaciones reumticas caractersticas. Niveles altos de cido rico estn tambin asociados a patologa renal por retencin de productos nitrogenados asocindose en estos casos a valores tambin altos de urea y de creatinina.

El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno y en presencia de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosceo.

uricasa

cido rico + 2H2O + O2Alantona + CO2+ 2H2O2POD

2H2O2+ 4-AF + DCPS quinona + 4H2O

3.- Material, reactivos e instrumental

Sangre tomada al paciente en tubo color rojo

Tubos de ensayo

Pipetas automticas

Puntas para pipetas

Bao Mara

Termmetro

Cronmetro

Gradilla

Reactivo para cido rico Serapack Bayer

Centrfuga

Estndar de cido rico

Sueros control

4.- Procedimiento

Centrifugar la muestra de sangre ya coagulada

Separar el suero en un tubo limpio y seco

Poner el RA 50 en cido rico

En un tubo poner 20 ul de muestra en otro tubo 20 ul de estndar

En otro tubo se ponen 20 ul de suero control

Aadir a cada tubo 1 ml de reactivo

Poner un blanco de reactivo

Incubar todos los tubos a 37C por 5 minutos

Sacar los tubos

Leer el RA 50

Dejar que el aparato imprima el resultado

Reportar el resultado en el informe correspondiente

5.- Valores de referencia

Mujeres: 2.5 5.7 mg/dl

Hombres: 3.5 6.0 mg/dl

6.- Bibliografa

Manual de tcnica de reactivos Spinreact. Mxico 2002

ALT (GPT)

1.- Objetivo

Determinar la ALT en un paciente determinado.

2.- Fundamento

La determinacin cintica de la alanina aminotransferasa (ALT) se basa en las recomendaciones de la IFCC;

L-alanina + alfa-cetoglutarato ALT Piruvato + L-glutamato

Piruvato + NADH + H+ LDH L-Lactato + NAD+

ALT= Alanina Aminotransferasa

LDH= Lactato Deshidrogenasa

3.- Material, reactivos e instrumental

Sangre del paciente en tubo rojo

Centrfuga

Gradilla

Tubos de ensayo

Termmetro

Cronmetro

Bao Mara

Analizador RA 50

Sueros control

Pipetas Automticas

Puntas para pipetas

Reactivo para ALT

4.- Procedimiento

Centrifugar la sangre

Separar el suero en un tubo limpio y seco

Seleccionar la funcin ALT en el RA 50

Medir 1 ml de solucin de trabajo y ponerlo en un tubo

Aadir 100 ul del suero

Verter la mezcla en una cubeta

Leer en el RA 50

Reportar el resultado en el formato correspondiente

5.- Valores de referencia

A 37C el intervalo es de 0 49 U/L

6.- Bibliografa

Manual de tcnicas de Serapak Bayer, Mxico

Amilasa

1.- Objetivo

Determinar la amilasa en el suero de un paciente.

2.- Fundamento

Durante aos los niveles de alfa-amilasa en suero y plasma nos han evidenciado la necesidad de la determinacin para el diagnstico de pancreatitis aguda.

Este mtodo de determinacin de alfa-amilasa utiliza un substrato cromognico, 2-cloro-4-nitrofenol ligado a la maltotriosa.

CNPG3 a amilasa CNP + CNPG2 + G3 + G

Como se indica, la a amilasa hidroliza el substrato 2-cloro-4-nitrofenol-a-D-maltrotiosido, (CNPG3) dando lugar a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP), 2-cloro-4-nitrofenol-a-D-maltrotiosido, (CNPG2), maltotriosa G3 y glucosa G.

La cantidad de CNP formado puede ser detectado espectrofotomtricamente a 450 nm dando un medida directa de la actividad de la a-amilasa de la muestra. La reaccin no est inhibida por factores endgenos.

3.- Material, reactivos e instrumental

Sangre del paciente en tubo rojo

Centrfuga

Tubos de ensayo

Analizador RA 50

Termmetro

Gradilla

Suero control

Pipetas

Puntas para pipetas

4.- Procedimiento

Reactivo1.0 ml

Suero o Plasma20 ul

Orina Muestra10 ul

Meter la muestra al analizador RA 50

Esperar a que arroje el resultado

Reportar el resultado en el formato correspondiente

5.- Valores de referencia

Suero, Plasma55 mg/dl

35 55 mg/dl

65 mg/dl

45 65 mg/dl