Download - 7-PARAFİN VE FROZEN KESİT ALINMASI
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
1/29
PARAFRN VE FROZEN
KEST ALINMASI
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
2/29
MKROTOM NEDR?
Parafinlenmi ya dadondurulmudokudan
mikroskopta
incelenecek ekildekesit alnmasn
salayan alettir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
3/29
MKROTOM ETLER
ROTARY MKROTOM
KIZAKLI MKROTOM
KRYOSTAT
ULTRAMKROTOM
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
4/29
ROTARY MKROTOM
Parafirine gmldokular iin kullanlr.
Blok hareketli baksabittir
Bu mikrotomun avantaj
2-3 mmlik ince kesitleralabilmesi ve tm doku
tiplerinde
uygulanabilmesidir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
5/29
KIZAKLI MKROTOM
Daha ok selloidne
gml dokularda ve
byk parafirin
bloklarn kesilmesindetercih edilir.
Bak hareketli bloksabittir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
6/29
KRYOSTAT
Acil cerrahi biyopsilerdeve zel boyamatekniklerinde kullanlr.Souk alan ierisineyerletirilmi bir eitrotary mikrotomyapsndadr.
nce ve seri kesitalnabilmesi veotomatik sterilizastoniermesi avantajlardr.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
7/29
ULTRAMKROTOM
Elektronmikroskobisi iin
kesit alnrken
kullanlr.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
8/29
MKROTOM BIAKLARI
DSPOSABLE BIAKLAR
Gnmzde en yaygnkullanlan bak eididir.
Paslanmaz elikten imaledilirler ve bak azplatin ve krom ile kaplolanlar parafine gmldokularda kullanlrken,bak az teflon ile kaplolanlar kriyostatdakullanlr.
CAM VE ELMAS BIAKLAR
Plastik bloklar cam veyaelmas baklarla kesilir.
Cam baklar 1 mikronakadar kesit alabilir.
Elektron mikroskopisi iinalnacak ince kesitler deen iyi elmas baklarlaelde edilir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
9/29
PARAFRN KEST ALMADAKULLANILACAK MATERYALLER
Su banyosu
Lamel kurutma frn yada scak tabak
Sivri forceps
Samur ya da deveden
yaplm fra
Bisturi
Lam raf
Temiz lamlar
Tutma inesi
Buz tablas
Kimyasallara direnli
kalem
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
10/29
SU BANYOSU
Su banyosu kesit alnandokulardaki baloncuklarnuzaklatrlmas iinkullanlr.
Suyun scakl parafirininerime scaklndan 10derece dk olmaldr.
Yzey gerimini azaltmakiin birka damla alkolveya deterjan da suyaeklenebilir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
11/29
LAMEL KURUTMA FIRINI
Lamel kurutma frnnniindeki scaklkparafirinin erime
noktasna eit olmaldr.
Eer daha yksekscaklkta olursa
hcreler distorsiyonaurar,piknotik nukleusya da nkleer
bombeleme oluur.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
12/29
Kurutma zaman dokununtipine , kurutulacak lamsaysna ve byklne
baldr.
Santral sinir sisitemi ileilgili dokular kurutulurken
dikkatli olunmaldr.
Bu kesitlerdeblnmeleri ve krmalar
engellemek iin dahadk scaklk ta kurutmauygulanmaldr.(nerilen :37 derecede 24 saatlikkurutmadr.)
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
13/29
FIRA FORCEPS NE
Bu materyaller kesitler
su banyosunda
yzerken oluankatlantlar vekrklklar engellemekiin ve kesitin bak
altna girerken manipuleedilmesinde kullanlr.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
14/29
LAMLAR
Genel rutin kullanmda76x25 mm lik lamlarkullanlmaktadr.
Her ne kadar kalnlkolarak lamlardeikenlik gsterebilse
de kolay krlmamasasndan 1-1.2 mm likkalnlk tercih edilir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
15/29
KEST YAPITIRICILARI (ADHEZVLER)
Temiz lamlar kullanldnda ve kesitler yeterliderecede kurutulduunda boyama esnasnda lamdankesitin ayrlmas gibi problemle karlalmaz.
Fakat baz durumlarda kesit lamdan ayrlabilir.
Bunlar;
Boyama esnasnda kuvvetli alkolik bir solsyonamaruz kalma
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
16/29
DOKU YAPITIRICILARI
Poly-l-lizin
3 aminopropyltriethoxylane(APES)
Elektriksel olarak ykl lamlar
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
17/29
KEST ALMA
Mikrotomun banyerine yerletirin.
Gmlm dokuyumikrotonun rnek
yerletirme ksmna
yerletirin
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
18/29
En byk kalnlk ile
kesmeyebalayn(15-25mikrometre) vekesmek istediinizkesite doruilerleyin.
Optimal sonu iinkesim kalnln 3-5mikrometreyeayarlayn
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
19/29
Kestiiniz kesitingerilmesi iin mikrotom
ba zerinden itinalbir ekilde ince frayardm ile alnan
parafin kesitleri parlaktaraflar alta gelecekekilde(parlak taraf suyatemas edecek) nce oda
ssndaki distile suyakoyun ve yzdrn.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
20/29
Her blok kesilmesinden
sonra dier bloagemeden su banyosu
temizlenmelidir.Bylece dier kesitlerdenceki bloklara ait doku
kalntlar bulunmaz
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
21/29
nce bir kurutma kadile fazla suyunu emin ve
uygun kaplar iinde
tozsuz,temiz birortamda ,tercihan 37
derecelik etvde
kurumaya terkedin.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
22/29
Lam zerine kesit tutuculuunu arttrmakiin albmin,jelatin,poly-l-lizin, 3 amino
propyltriethxysilan(APES) kullanlabilir.
Doku kesit yzeyinde kalsiyum odamevcutsa doku kesilmeden nce blok
dekalsifiye edici ajanlarn iine konulmaldr.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
23/29
YUMUAK DKEY KESTLERNKESLMES
Yumuak dikey kesitler kesilirkenzorlanlyorsa blok yz lk su veya nefes ile
stlr. Bu uygulama blou geniletir ve dahakaln kesitlerin elde edilmesine neden olur.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
24/29
SERT DOKULARIN KESLMES
Sert dokular kesmedeki zorluun temel nedeni bykolaslkla kt fiksasyon ya da doku hazrlamadr.
Blok yzeyini 30 dk boyunca musluk suyunun altnatutmakla ya da blou uzun sre slatmakla sorunzmlenir.
Bak eiminin redksiyonu da faydal olabilir.
Bu uygulamalardan hibiri ie yaramazsa dokuyayumuatc ajanlar uygulanabilir.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
25/29
FROZEN KEST ALINMASI
ntraoperatiftanamacyla dokunun eitliyntemlerledondurulmasyla hzlkesitlerinin eldeedilmesidir.
Sonrasnda souk asetonveya %95 alkole batrlm
lam zerine alnr ve hzlaH-E,metilen blue veyapolikrom boyalar ileboyanr.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
26/29
FROZEN KEST
Dokularn fiksatife konulmadan , vucuttan karlrkarlmaz dondurulup kesilmesi ilemidir.
15-20 dakika sren bir ilemdir Cryostat isimli aletle yaplr (-40 derece) Likit nitrojen ( -190 derece soutur ve kas biyopsilerinde),
isopentan soutmal likit nitrojen ve aerosol spreylerle deyaplmtr.
Amalar; Malign tmrlerde operasyonun eklini belirlemek Floresan inceleme
Kas enzim reaksiyonlar Ya boyalar
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
27/29
KRYOSTAT
Bu amala kullanlanmikrotom eiti isekriyostattr.
Kriyostat iinde zel bir
mikrotom ieren
soutucudur.
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
28/29
FROZEN KESTLERN KULLANIMALANLARI
Tansal ve research enzim histokimyasnda
mmunfloresan metodlarda
mmunhistokimyasal metodlarda
Enzimatik olmayan immun histokimyada
Gm boyama tekniklerinde zellike; nropatolojide
-
7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI
29/29
TEEKKRLER