7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

1/29

PARAFRN VE FROZEN

KEST ALINMASI

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

2/29

MKROTOM NEDR?

Parafinlenmi ya dadondurulmudokudan

mikroskopta

incelenecek ekildekesit alnmasn

salayan alettir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

3/29

MKROTOM ETLER

ROTARY MKROTOM

KIZAKLI MKROTOM

KRYOSTAT

ULTRAMKROTOM

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

4/29

ROTARY MKROTOM

Parafirine gmldokular iin kullanlr.

Blok hareketli baksabittir

Bu mikrotomun avantaj

2-3 mmlik ince kesitleralabilmesi ve tm doku

tiplerinde

uygulanabilmesidir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

5/29

KIZAKLI MKROTOM

Daha ok selloidne

gml dokularda ve

byk parafirin

bloklarn kesilmesindetercih edilir.

Bak hareketli bloksabittir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

6/29

KRYOSTAT

Acil cerrahi biyopsilerdeve zel boyamatekniklerinde kullanlr.Souk alan ierisineyerletirilmi bir eitrotary mikrotomyapsndadr.

nce ve seri kesitalnabilmesi veotomatik sterilizastoniermesi avantajlardr.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

7/29

ULTRAMKROTOM

Elektronmikroskobisi iin

kesit alnrken

kullanlr.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

8/29

MKROTOM BIAKLARI

DSPOSABLE BIAKLAR

Gnmzde en yaygnkullanlan bak eididir.

Paslanmaz elikten imaledilirler ve bak azplatin ve krom ile kaplolanlar parafine gmldokularda kullanlrken,bak az teflon ile kaplolanlar kriyostatdakullanlr.

CAM VE ELMAS BIAKLAR

Plastik bloklar cam veyaelmas baklarla kesilir.

Cam baklar 1 mikronakadar kesit alabilir.

Elektron mikroskopisi iinalnacak ince kesitler deen iyi elmas baklarlaelde edilir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

9/29

PARAFRN KEST ALMADAKULLANILACAK MATERYALLER

Su banyosu

Lamel kurutma frn yada scak tabak

Sivri forceps

Samur ya da deveden

yaplm fra

Bisturi

Lam raf

Temiz lamlar

Tutma inesi

Buz tablas

Kimyasallara direnli

kalem

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

10/29

SU BANYOSU

Su banyosu kesit alnandokulardaki baloncuklarnuzaklatrlmas iinkullanlr.

Suyun scakl parafirininerime scaklndan 10derece dk olmaldr.

Yzey gerimini azaltmakiin birka damla alkolveya deterjan da suyaeklenebilir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

11/29

LAMEL KURUTMA FIRINI

Lamel kurutma frnnniindeki scaklkparafirinin erime

noktasna eit olmaldr.

Eer daha yksekscaklkta olursa

hcreler distorsiyonaurar,piknotik nukleusya da nkleer

bombeleme oluur.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

12/29

Kurutma zaman dokununtipine , kurutulacak lamsaysna ve byklne

baldr.

Santral sinir sisitemi ileilgili dokular kurutulurken

dikkatli olunmaldr.

Bu kesitlerdeblnmeleri ve krmalar

engellemek iin dahadk scaklk ta kurutmauygulanmaldr.(nerilen :37 derecede 24 saatlikkurutmadr.)

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

13/29

FIRA FORCEPS NE

Bu materyaller kesitler

su banyosunda

yzerken oluankatlantlar vekrklklar engellemekiin ve kesitin bak

altna girerken manipuleedilmesinde kullanlr.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

14/29

LAMLAR

Genel rutin kullanmda76x25 mm lik lamlarkullanlmaktadr.

Her ne kadar kalnlkolarak lamlardeikenlik gsterebilse

de kolay krlmamasasndan 1-1.2 mm likkalnlk tercih edilir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

15/29

KEST YAPITIRICILARI (ADHEZVLER)

Temiz lamlar kullanldnda ve kesitler yeterliderecede kurutulduunda boyama esnasnda lamdankesitin ayrlmas gibi problemle karlalmaz.

Fakat baz durumlarda kesit lamdan ayrlabilir.

Bunlar;

Boyama esnasnda kuvvetli alkolik bir solsyonamaruz kalma

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

16/29

DOKU YAPITIRICILARI

Poly-l-lizin

3 aminopropyltriethoxylane(APES)

Elektriksel olarak ykl lamlar

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

17/29

KEST ALMA

Mikrotomun banyerine yerletirin.

Gmlm dokuyumikrotonun rnek

yerletirme ksmna

yerletirin

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

18/29

En byk kalnlk ile

kesmeyebalayn(15-25mikrometre) vekesmek istediinizkesite doruilerleyin.

Optimal sonu iinkesim kalnln 3-5mikrometreyeayarlayn

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

19/29

Kestiiniz kesitingerilmesi iin mikrotom

ba zerinden itinalbir ekilde ince frayardm ile alnan

parafin kesitleri parlaktaraflar alta gelecekekilde(parlak taraf suyatemas edecek) nce oda

ssndaki distile suyakoyun ve yzdrn.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

20/29

Her blok kesilmesinden

sonra dier bloagemeden su banyosu

temizlenmelidir.Bylece dier kesitlerdenceki bloklara ait doku

kalntlar bulunmaz

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

21/29

nce bir kurutma kadile fazla suyunu emin ve

uygun kaplar iinde

tozsuz,temiz birortamda ,tercihan 37

derecelik etvde

kurumaya terkedin.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

22/29

Lam zerine kesit tutuculuunu arttrmakiin albmin,jelatin,poly-l-lizin, 3 amino

propyltriethxysilan(APES) kullanlabilir.

Doku kesit yzeyinde kalsiyum odamevcutsa doku kesilmeden nce blok

dekalsifiye edici ajanlarn iine konulmaldr.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

23/29

YUMUAK DKEY KESTLERNKESLMES

Yumuak dikey kesitler kesilirkenzorlanlyorsa blok yz lk su veya nefes ile

stlr. Bu uygulama blou geniletir ve dahakaln kesitlerin elde edilmesine neden olur.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

24/29

SERT DOKULARIN KESLMES

Sert dokular kesmedeki zorluun temel nedeni bykolaslkla kt fiksasyon ya da doku hazrlamadr.

Blok yzeyini 30 dk boyunca musluk suyunun altnatutmakla ya da blou uzun sre slatmakla sorunzmlenir.

Bak eiminin redksiyonu da faydal olabilir.

Bu uygulamalardan hibiri ie yaramazsa dokuyayumuatc ajanlar uygulanabilir.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

25/29

FROZEN KEST ALINMASI

ntraoperatiftanamacyla dokunun eitliyntemlerledondurulmasyla hzlkesitlerinin eldeedilmesidir.

Sonrasnda souk asetonveya %95 alkole batrlm

lam zerine alnr ve hzlaH-E,metilen blue veyapolikrom boyalar ileboyanr.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

26/29

FROZEN KEST

Dokularn fiksatife konulmadan , vucuttan karlrkarlmaz dondurulup kesilmesi ilemidir.

15-20 dakika sren bir ilemdir Cryostat isimli aletle yaplr (-40 derece) Likit nitrojen ( -190 derece soutur ve kas biyopsilerinde),

isopentan soutmal likit nitrojen ve aerosol spreylerle deyaplmtr.

Amalar; Malign tmrlerde operasyonun eklini belirlemek Floresan inceleme

Kas enzim reaksiyonlar Ya boyalar

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

27/29

KRYOSTAT

Bu amala kullanlanmikrotom eiti isekriyostattr.

Kriyostat iinde zel bir

mikrotom ieren

soutucudur.

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

28/29

FROZEN KESTLERN KULLANIMALANLARI

Tansal ve research enzim histokimyasnda

mmunfloresan metodlarda

mmunhistokimyasal metodlarda

Enzimatik olmayan immun histokimyada

Gm boyama tekniklerinde zellike; nropatolojide

7/30/2019 7-PARAFN VE FROZEN KEST ALINMASI

29/29

TEEKKRLER