Género Corynebacterium, Rhodococcus y Listeria

Instructoras: Dra. Mirian Arias Dra. María Mercedes Rueda

Laboratorio 435Mesa # 3

Autor: Jairo Henrriquez

Objetivos

El estudiante usando los medios de cultivo adecuados

aislara las cepas de Corynebacterium, Rhodococcus y

Listeria que se le presenten.

Realizara a cada cepa las pruebas bioquímicas

requeridas para la identificación.

Estudiara la morfología colonial y celular de cada cepa.

Utilizando las tablas de diferenciación, estudiara las

cepas en estudio.

Introduccion

Las especies del genero Corynebacterium son bacilos Gram positivos o variables al Gram, pleomorficos que se pueden agrupar en empalizada o letras chinas, con frecuencia tienen forma de mazo y pueden poseer gránulos metacromaticos de polifosfatos, ya sea en el extremo del bacilo o en toda la célula, dando apariencia de rosario.

La especie mas importante por su patogenicidad es C. diphtheriae, aunque hay muchas otras especies consideradas oportunistas.

Las especies del genero Rhodococcus son bacterias filamentosas que se fragmentan en cocos y pequeños bacilos, no esporulados, inmóviles, aerobios, pueden tener gránulos de polifosfatos, su pared celular contienen acido diaminopimelico, micolico y tuberculoestatico. Estas características les hacen ser similares a otras bacterias como Corynebacterium y Mycobacterium.

Listeria

El género Listeria, representa un grupo de estrechamente relacionados, bacilos Gram-positivos, anaerobios facultativos, no formadoras de esporas, en forma de bastoncillos 0,5 m de ancho y 1-1.5 mu m de longitud. Taxonómico, se divide en seis especies de los cuales sólo L. monocytogenes y L. ivanovii son patógenas

Pruebas bioquimicas

• Especies de Listeria son bacterias estrechamente relacionadas que comparten muchas características morfológicas y bioquímicas.

- Aparte de ser catalasa positiva. - Indol y oxidasa negativos -Hidrólisis esculina positiva - No hidrolizan la urea.

1. Cultivo de 24 – 48 horas en gelosa soya tripticasa inclinada de las diferentes

especies de Corynebacterium y Rhodococcus existentes en el cepario del

Departamento de Microbiología.

2. Medios de cultivo en placa:

- Gelosa chocolate telurito de potasio.

- Gelosa sangre

3. Medios de cultivo en tubo:

- Caldo simple 2ml

- Caldo nitrato con campana de Durham

- Urea de Christensen

- Gelatina nutritiva

- SIM

Materiales

- Agar esculina

- Caldo con indicador y campana de los siguientes carbohidratos: - Glucosa - Maltosa - Sacarosa - Manitol - Xilosa4. Frascos goteros con los siguientes reactivos: - Peroxido de hidrogeno al 3% - Acido sulfanilico - Alfa niftalamina5. Polvo de Zinc6. Aplicadores de madera

Método

A. Aislamiento y realización de pruebas requeridas para la identificación.

1. Sembrar cada cepa por frobisher:

- Gelosa chocolate telurito de potasio. - Gelosa sangre.

2. Sembrar en la forma habitual en cada uno de los siguientes medios de cultivo:

- Caldo simple

- Caldo nitrato - Urea de Christensen - Gelatina - SIM - Agar esculina - Caldo carbohidratado - Glucosa - Maltosa - Sacarosa - Manitol - Xilosa

Medios de cultivo

3. Incubar a 37 °C / 24 – 48 horas.

Métodos de siembra

B. Leer e interpretar los resultados anteriores.

Describir morfología colonial de cada cultivo en los medios A. 1

Describir morfología celular de una colonia aislada delos medio A. 1 (frotis por Gram) si en este se sospecha la presencia de gránulos metacromaticos, se puede hacer un frotis y colorearlo con azul de metileno de Loeffler.

Leer las pruebas bioquímicas del numeral A. 2 en la forma usual.

Con los resultados obtenidos, utilizar el cuadro de diferenciación para identificar las cepas en estudio.

Identificación de especies del genero Corynebacterium y otros

Características Cepas en estudio

  Cepa 1 Cepa 2 Cepa 3

Morfología celular      

Prueba de catalasa      

Β- hemolisis      

Reducción de nitratatos      

Ureasa      

Hidrolisis de gelatina      

Movilidad      

Hidrolisis esculina      

Glucosa      

Maltosa      

Fermentación de sacarosa      

Manitol      

Xilosa