concentración y tiempo máximo de exposición de juveniles

9Recibido 16 julio 2018 bull Corregido 21 noviembre 2018 bull Aceptado 18 enero 2019DOI httpdxdoiorg1015359revmar11-11Rev Mar Cost Vol 11 (1) 9-25 enero-junio 2019ISSN 1659-455X bull e-ISSN 1659-407X

Licencia Creative CommonsAtribucioacuten-No-Comercial

Compartir Igual 40 Costa Rica

Concentracioacuten y tiempo maacuteximo de exposicioacuten de juveniles de pargo manchado Lutjanus guttatus al

eugenol Syzygium aromaticum

Concentration and maximum exposure time of Lutjanus guttatus juveniles to Syzygium aromaticum eugenol

Jonathan Chacoacuten-Guzmaacuten1 2 Milagro Carvajal-Oses1 2 Silvia Pauletto3 y Aacutengel Herrera-Ulloa1

RESUMENSe definieron las dosis maacutes eficientes de aceite de eugenol Syzygium aromaticum para la sedacioacuten quiruacutergica en juveniles de pargo manchado (Lutjanus guttatus) y se determinoacute el tiempo miacutenimo de exposicioacuten de no retorno como una fuente de informacioacuten para contar con un rango de tiempo seguro en la manipulacioacuten del pez durante labores de rutina En el Laboratorio de Acuicultura y Biotecnologiacutea Marina del Parque Marino del Paciacutefico en el Golfo de Nicoya se seleccionaron 76 juveniles de pargo manchado producidos en enero del 2016 con un peso promedio 2161plusmn 20 g Los juveniles fueron expuestos a concentraciones de eugenol 25 100 175 y 250 mgL en tanques de 30 L se vigiloacute los estados de induccioacuten a la anestesia y su recuperacioacuten Definida la dosis maacutes eficiente se procedioacute con ella a determinar el tiempo maacuteximo de exposicioacuten para este estudio se definieron cuatro tiempos de induccioacuten en 4 8 12 y 16 min y se establecieron 10 min como umbral de recuperacioacuten Se determinoacute que el eugenol es eficaz para la anestesia de juveniles de pargo con temperaturas entre 240 y 248degC La concentracioacuten de 25 mgL fue suficiente para la induccioacuten parcial de los peces apropiado para realizar actividades rutinarias menos complejas en el manejo de pargos mientras que la concentracioacuten maacutes eficiente fue de 100 mgL en tiempos de exposicioacuten no mayor a 8 minutos luego de la anestesia total

Palabras clave Lutjanus guttatus anesteacutesico eugenol dosis eficiente tiempo de no retorno

ABSTRACTThe most efficient doses of eugenol oil from Syzygium aromaticum for surgical sedation in Lutjanus guttatus juveniles were defined and the minimum exposure time of no return was determined as a source of information to have a safe time range when handling fish during

1 Programa Parque Marino del Paciacutefico Escuela de Ciencias Bioloacutegicas Universidad Nacional Puntarenas Costa Rica jonathanchaconguzmanunacr milagrocarvajalosesunacr y angelherreraulloaunacr

2 Programa de Acuicultura y Biotecnologiacutea Marina Parque Marino del Paciacutefico Puntarenas Costa Rica3 Universidad de Padua Padua Italia silvia_paulettohotmailit

Jonathan Chacoacuten-Guzmaacuten Milagro Carvajal-Oses Silvia Pauletto y Aacutengel Herrera-Ulloa

10 Rev Mar Cost Vol 11 (1) 9-25 enero-junio 2019ISSN 1659-455X bull e-ISSN 1659-407X

routine work A total of 76 juveniles produced in January 2016 with an average weight of 2161 plusmn 20 g were selected at the Aquaculture and Marine Biotechnology Laboratory of the Marino del Paciacutefico Park (Gulf of Nicoya) Juveniles were exposed to 25 100 175 and 250 mgL eugenol concentrations in 30 L tanks and their induction of anesthesia and recovery were monitored Once the most efficient dose was defined the maximum exposure time was determined Four times of induction were defined for this study 4 8 12 and 16 min and the recovery threshold was established at 10 min Eugenol was determined to be an effective anesthetic for rose snapper juveniles with temperatures ranging between 240 and 248degC The 25 mgL concentration was sufficient for partial induction of fish and appropriate to perform less complex routine activities in the handling of snappers while the most efficient concentration was 100 mgL with exposure times no greater than 8 minutes after total anesthesia

Keywords Lutjanus guttatus anesthetic eugenol oil efficient dose time of no return

INTRODUCCIOacuteN

El pargo manchado Lutjanus guttatus (Steindachner 1869) ha sido desde los antildeos noventa una especie de mucho intereacutes para la piscicultura marina en Ameacuterica Latina tropical ya que se distribuye en el oceacuteano Paciacutefico desde Meacutexico hasta Peruacute y por presentar una demanda atractiva en los Estados Unidos (Fischer et al 1995 Herrera-Ulloa et al 2009) En Costa Rica su reproduccioacuten natural y espontaacutenea permitioacute la masificacioacuten en la produccioacuten de juveniles en cautiverio en el antildeo 2005 lo que permitioacute el cultivo con fines comerciales en granjas marinas desde el antildeo 2006 (Herrera-Ulloa et al 2009 Chacoacuten-Guzmaacuten 2010)

En varios paiacuteses se han desarro-llado investigaciones dirigidas a co-nocer y controlar diferentes aspectos de su ciclo de vida en cautiverio (Ab-do-de la Parra et al 2015) En Costa Rica la produccioacuten en granjas marinas

alcanzoacute las 528 toneladas meacutetricas en el antildeo 2016 (Barrantes-Elizondo et al 2016) Este incremento ha hecho nece-sario que se optimicen los protocolos en todas las etapas del proceso pro-ductivo especialmente aquellos que representen un riesgo para la salud de los peces En el manejo de juveniles ha sido esencial aplicar medidas de mani-pulacioacuten eficientes que eviten lesiones estreacutes enfermedades y mortalidad En este contexto los anesteacutesicos son una forma indispensable de tratamiento sin embargo el desconocimiento de las dosis adecuadas tiempos de expo-sicioacuten y efectos en la salud de los peces podriacutean generar peacuterdidas econoacutemicas

En la produccioacuten de peces se ha acostumbrado utilizar teacutecnicas de anestesia para los trabajos rutinarios como captura muestreos induc-cioacuten hormonal y transporte siendo los maacutes empleados benzocaiacutena qui-naldina metanosulfonato de tricaiacutena (MS222copy) e isoeugenol (Aqui-Scopy)

(Garciacutea-Goacutemez et al 2002) No obs-

Concentracioacuten y tiempo maacuteximo de exposicioacuten de juveniles de pargo manchado Lutjanus guttatus al eugenol Syzygium aromaticum

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tante se han considerado de alto costo y con cierto grado de toxicidad asocia-da (Coyle et al 2004 Roubach et al 2005 Veliacutesek et al 2006)

El aceite de eugenol [2-me-thoxy-4-2-(2-propenyl)-phenol] se obtiene de segmentos de hojas tallos flores y brotes de varias especies de aacuterboles (Eugenia caryophyllata y Eu-genia aromatica) (Soto amp Burhanud-din 1995) Se ha convertido en uno de los productos de mayor uso para anestesiar en la industria pisciacutecola ya que es econoacutemico ambientalmente amigable y seguro para los acuicul-tores y los peces (Iversen et al 2003 Cunha amp Rosa 2006 Roo et al 2014 Caacuterdenas et al 2016) Se utiliza por medio de bantildeos de inmersioacuten en los peces donde es absorbido por piel y branquias (Javahery et al 2012) Seguacuten la US Food and Drug Admi-nistration este aceite es considerado como seguro para el humano cuando su concentracioacuten no supera los 1 500 mgkg (Anderson et al 1997) Rou-bach et al (2005) considera que como las dosis utilizadas en acuicultura no superan las concentraciones toacutexicas para el ser humano debe considerarse seguro para ser utilizado en acuicultura Javahery et al (2012) lo recomienda para usos comerciales y de acuicul-tura ya que no causan efectos nega-tivos a los cuerpos de agua ni al ser humano y puede ser faacutecilmente mani-pulable por personas sin alto grado de preparacioacuten teacutecnica

En peces marinos Garciacutea-Goacute-mez et al (2002) probaron la eficacia del eugenol como anesteacutesico y ob-tuvieron resultados positivos a dosis de 40 ppm en organismos de seriola (Seriola dumerili) lubina (Dicentrar-chus labrax) dorada (Sparus aurata) dentoacuten (Dentex dentex) y sargo picudo (Diplodus puntazzo) en dichos expe-rimentos se logroacute la anestesia total de los peces en 3-6 minutos y su recupe-racioacuten en 2-5 minutos y no se obser-voacute en ellos ninguacuten efecto negativo En el pargo (Lutjanus synagris) Souza et al (2015) aplicaron el eugenol en larvas juveniles y adultos Los resul-tados mostraron que cuanto mayor fue la concentracioacuten de eugenol utilizado menor fue el tiempo necesario para lle-gar a cada etapa de anestesia En esta especie el tiempo total para la induc-cioacuten de la anestesia fue menos de tres minutos y la mejor concentracioacuten de 50 mgL para todos los estados bioloacutegicos de los peces analizados El tiempo de recuperacioacuten a esta concentracioacuten fue de 1207plusmn363 seg 7895plusmn1652 seg 10333plusmn2209 seg para larvas juve-niles y adultos respectivamente

Otro aspecto necesario de conocer es su toxicidad En el cultivo de peces se debe saber la concentracioacuten ideal para su uso apropiado ya que concen-traciones erroacuteneas conducen a efectos indeseados en el organismo de los pe-ces como es en el caso del cortisol un corticosteroide para la regulacioacuten me-taboacutelica que en presencia de eugenol



podriacutea aumentar su concentracioacuten y con eacutel componentes hematoloacutegicos como lactato glucosa y potasio (Grush et al 2004 Javahery et al 2012) lo que podriacutea generar mortalidad (Roubach et al 2001) Autores como Hoskones amp Pirhonen (2004) afirman que los peces sometidos repetidamente al eugenol pueden tener un efecto negativo en su crecimiento y ser afectados en su fi-siologiacutea (Park et al2008) Barata et al (2016) hallaron que el uso de eugenol en la perca regia (Argyrosomus regius) puede generar grados de estreacutes que se podriacutean ver reflejados de manera nega-tiva en la calidad de la carne

Se ha encontrado que la toxicidad del eugenol puede estar relacionada con el dantildeo que ocasiona al sistema respira-torio (Din 2006 Gueacutenette et al 2007) en peces limneacuteticos se ha descrito una CL50 entre 14 y 60 mgL (Mariacuten-Meacuten-dez et al 2012) en peces marinos se han realizado ensayos en juveniles de cobia (Rachycentron canadum) donde se determinoacute una concentracioacuten letal de 60 mgL (Gullian amp Villanueva 2009) por lo que seguacuten Mariacuten-Meacutendez et al (2012) el uso del eugenol en peces re-quiere investigaciones que validen su utilizacioacuten en la acuicultura

El aceite de eugenol ha sido empleado con eacutexito en la reproduccioacuten y produccioacuten de juveniles de L guttatus en Costa Rica (Chacoacuten-Guzmaacuten 2010) sin embargo no se han realizado investigaciones formales para la definicioacuten del procedimiento idoacuteneo

Este trabajo tuvo como objeti-vo definir la dosis maacutes eficiente para la sedacioacuten quiruacutergica de juveniles de pargo manchado y con esta determi-nar el tiempo miacutenimo de exposicioacuten de no retorno que permita al acuicultor contar con un rango de tiempo seguro para realizar las actividades rutinarias de manipulacioacuten de los peces

MATERIALES Y MEacuteTODOS

La investigacioacuten se realizoacute du-rante los meses de septiembre y octu-bre del antildeo 2017 en el Laboratorio de Acuicultura y Biotecnologiacutea Marina del Parque Marino del Paciacutefico (PMP) Puntarenas Costa Rica

Se seleccionaron 76 peces juve-niles sanos de pargo manchado L gut-tatus producidos en el laboratorio con un peso promedio de 2161plusmn 20 g Pre-viamente a la investigacioacuten los peces permanecieron aclimatados en tanques circulares de 10 m3 de fibra de vidrio con recirculacioacuten de agua marina y ali-mentados ad libitum con alimento fresco (sardina atuacuten camaroacuten y calamar) Los juveniles se dejaron de alimentar 24 ho-ras antes de la exposicioacuten al anesteacutesico

Se utilizoacute aceite de eugenol al 100 de pureza El aceite se diluyoacute con etanol (999) en una relacioacuten 19 Para desestimar cualquier efecto del etanol (999) utilizado como di-luyente del aceite de eugenol se expu-sieron por diez minutos seis juveniles



de pargo a la concentracioacuten maacutes alta de etanol que se utilizariacutea en los trata-mientos (414 ml20L) Las condicio-nes experimentales fueron las mismas descritas para la exposicioacuten al anesteacutesi-co No se observoacute ninguacuten efecto o cam-bio visible en el comportamiento de los juveniles con la exposicioacuten al etanol

La exposicioacuten de los peces al aceite de eugenol para la induccioacuten y al agua para su recuperacioacuten se realizoacute en tanques de fibra de vidrio circulares transparentes de 30 L En la recupera-cioacuten para cada pez se procedioacute a cam-biar completamente el agua para evitar residuos del producto dejados por el pez anterior

Para definir la concentracioacuten maacutes eficiente para la sedacioacuten total de juveniles de pargo manchado se esta-blecieron cuatro tratamientos con 25 100 175 y 250 mgL de aceite de eu-genol (las cuales fueron diluidas en el etanol antes de ser agregadas a los tan-ques) Estas cantidades fueron elegidas

de acuerdo a la experiencia de trece antildeos adquirida en el PMP en la aplica-cioacuten de anestesia a juveniles de pargo manchado Posteriormente se realizoacute su respectiva dilucioacuten con etanol La solucioacuten fue aplicada en el agua dos minutos antes de la inmersioacuten del pri-mer pez En cada una de las dosis eva-luadas se anestesiaron seis peces por tanque consecutivamente Las etapas de anestesia y recuperacioacuten (Cuadro 1) se determinaron de acuerdo a ensayos previos (Walsh amp Pease 2002 Woody et al 2002 Cunha amp Rosa 2006) y con base en la experiencia praacutectica en su aplicacioacuten en juveniles de esta especie en el PMP

Cuadro 1 Estados de induccioacuten a la anestesia y recuperacioacuten aplicados a juveniles (peso promedio= 2161plusmn2g) de L guttatusTable 1 States of induction of anesthesia and recovery applied to L guttatus juveniles (mean weight = 2161 plusmn 2g)

Estados InduccioacutenI Peacuterdida total del eje de nado (sedacioacuten parcial)II Peacuterdida total de movimiento corporal con movimiento continuo de opeacuterculo III Peacuterdida de movimiento corporal y del opeacuterculo (sedacioacuten quiruacutergica)

RecuperacioacutenIV Recuperacioacuten del movimiento continuo del opeacuterculo V Recuperacioacuten de la actividad corporalVI Recuperacioacuten de la liacutenea de nado

Cuando se alcanzoacute la fase de in-duccioacuten uacuteltima se procedioacute a esperar dos minutos manteniendo los peces se-dados dentro del agua (tiempo de traba-jo TT establecido como promedio para desempentildear tareas rutinarias o de ma-nejo con los juveniles completamente sedados) Cumplidos los dos minutos



los juveniles fueron trasferidos a los tanques con agua limpia para evaluar su retorno al estado natural

Se evaluoacute el efecto del eugenol en cada pez para facilitar la observa-cioacuten de los estados de anestesia y re-cuperacioacuten

Para definir el tiempo maacuteximo de no retorno se utilizoacute la dosis del tratamiento con mejores resultados en la primera etapa Para este estudio se definieron cuatro tiempos de induccioacuten 4 8 12 y 16 minutos Estos fueron ele-gidos por pruebas previas en las cuales se determinoacute que en cada uno ocurriacutean cambios visibles en el comportamiento del pez Ademaacutes se partioacute de datos ob-tenidos de otros autores (Summerfelt amp Smith 1990) que reportaron seda-ciones a partir de 4 minutos Se esta-blecieron 10 minutos como umbral de recuperacioacuten al considerar que en la praacutectica el tiempo debe ser menor a este valor para la eficiencia del manejo de la produccioacuten El tiempo fue medi-do con un cronoacutemetro digital

Se determinaron los estados de induccioacuten y recuperacioacuten (Cuadro 2)

por medio de ensayos previos y con base al meacutetodo para definir la dosis idoacute-nea en la primera etapa de este estudio

Cuadro 2 Estado de induccioacuten a la anestesia recuperacioacuten y de no retorno aplicados a los juveniles (peso promedio= 2161plusmn2g) de L guttatus con el tratamiento de mayor eficiencia Table 2 State of induction of anesthesia recovery and no return applied to L guttatus juveniles (mean weight = 2161 plusmn 2g) with the most efficient treatmentInduccioacuten I Peacuterdida de movimiento corporal y del opeacuterculo Recuperacioacuten II Recuperacioacuten del movimiento continuo del opeacuterculo

III Recuperacioacuten del movimiento corporal IV Recuperacioacuten total del eje de nado V Inactividad Total (no retorno)

Para cada tratamiento se deter-minoacute la salinidad (gL) con un refrac-toacutemetro de luz Red Sea RS7945 el oxiacutegeno disuelto (mgL) y la tempera-tura (degC) con un Oxigenoacutemetro HAN-NA HI9146 y el pH con un pHmetro HANNA pHEP4

Por medio del programa InfoStat (Di Rienzo et al 2008) se analizaron los datos obtenidos de las mediciones ambientales se determinaron diferen-cias significativas entre los tiempos de induccioacuten recuperacioacuten y total asiacute como en los periodos que inciden o no al no retorno Los resultados se contabilizaron en segundos Para to-dos los anaacutelisis estadiacutesticos se verificoacute la normalidad utilizando el test de Sha-piro-Wilk y posteriormente se analizoacute la homocedasticidad de la varianza al utilizar el test de Levene Verificados estos dos criterios se empleoacute el anaacutelisis de varianza y la prueba de Tukey

Los tratamientos realizados a los peces en la presente investigacioacuten se



desarrollaron con base en las normas eacuteticas establecidas por las pautas de uso de peces en investigacioacuten (UFR Committee 2013)

RESULTADOS

El tratamiento de 25 mgL fue insuficiente para que todos los peces alcanzaran el estado III anestesiaacuten-

dolos parcialmente (2 organismos alcanzaron la sedacioacuten completa y 4 solo hasta el tiempo II) A pesar de que el tiempo de induccioacuten fue menor en 250 mgL su tiempo de recupera-cioacuten fue mayor respecto a las demaacutes concentraciones El tratamiento de 100 mgL fue el que presentoacute un me-nor tiempo en completar el proceso (Cuadro 3 y Fig 1)

Cuadro 3 Tiempo de induccioacuten recuperacioacuten y total promedio del procedimiento de anestesia con diferentes dosis de aceite de eugenol en juveniles (peso promedio= 2161plusmn2g) de L guttatus Table 3 Time of induction recovery and total average of the anesthesia procedure with different doses of eugenol oil in L guttatus juveniles (mean weight=2161plusmn2g)

Tratamientos T1 T2 T3 T4Dosis mgL 25 100 175 250Peso promedio (g) 2197plusmn090 2161plusmn075 2160plusmn125 2201plusmn112Temperatura (degC) 240 240 238 239Oxiacutegeno (ppm) 67 68 66 64pH 80 78 81 81

Tiempo de induccioacuten en segundos

I 78plusmn015 41plusmn007a 38plusmn017a 27plusmn007a

II 175plusmn029 64plusmn013a 67plusmn017a 56plusmn014a

III 201plusmn011 77plusmn020a 80plusmn017a 72plusmn017a

Tiempo de trabajo (seg) TT 120 120 120 120

Tiempo de recuperacioacuten en segundos

IV 18plusmn004 52plusmn015a 108plusmn028ab 136plusmn072b

V 53plusmn038 121plusmn022a 211plusmn044b 254plusmn044b

VI 146plusmn026 197plusmn017a 296plusmn037b 345plusmn030c

TOTAL (Seg) 347 274 376 417TOTAL (+TT

Seg) 467 394 496 537

En dosis de 25 mgL solo cuatro peces llegaron al estadio II y V y solo dos peces llegaron al estadio III y IV At a 25 mg L dose only four fish reached stage II and V and two reached stage III and IV Los tiempos totales son acumulativos (se suma el tiempo de induccioacuten total III maacutes el total de recuperacioacuten VI) Total intervals are cumulative (total induction time III plus total recovery VI) abc indican diferencias significativas (Ple005) entre las filas abc indicate significant differences (Ple005) between rowsEl tratamiento de 25 mgL no se tomoacute en cuenta para el anaacutelisis debido a que no todos los peces alcanzaron la sedacioacutenThe 25 mgL treatment was not taken into account in the analysis because not all fish reached sedation



Fig 1 Tiempos de anestesia y recuperacioacuten en juveniles (peso promedio= 2161plusmn2g) de L guttatus expuestos a cuatro dosis de aceite de eugenol Fig 1 Anesthesia and recovery times in L guttatus juveniles (mean weight=2161plusmn2g) exposed to four doses of eugenol oil

No se encontraron diferencias significativas (P ge 005) entre el tiem-po de induccioacuten en los peces de los tratamientos 250 100 y 175 mgL Sin embargo siacute existieron (P le 005) en los tiempos de recuperacioacuten ya que los peces en 100 mgL se recuperaron con mayor rapidez Ademaacutes en 100 mgL igualmente existieron diferencias (P le 005) respecto a la eficiencia del pro-ceso por lo cual esta representoacute la mejor opcioacuten para anestesiar juveniles de pargo manchado procediendo a la siguiente etapa del estudio

En la evaluacioacuten de la exposi-cioacuten de los juveniles en cuatro tiem-pos con la dosis de 100 mgL se pudo

determinar que siacute hay retorno con 8 minutos de sedacioacuten quiruacutergica y 75 segundos de induccioacuten a esta A partir de los 12 minutos se presentoacute una mor-talidad del 50 y a los 16 minutos el 100 (Cuadro 4)

Entre los 4 y 8 minutos de ex-posicioacuten al aceite de eugenol no se presentaron diferencias significativas (P ge 005) por lo que se puede asumir que el tiempo maacuteximo de exposicioacuten a una dosis de 100 gL para actividades rutinarias de manejo con juveniles de pargo manchado no debe sobrepasar los 8 minutos a partir de la sedacioacuten

Las variables fiacutesicas quiacutemicas no presentaron diferencias significativas



Cuadro 4 Estado de induccioacuten a la anestesia recuperacioacuten y no retorno aplicados a los juveniles (peso promedio= 2161plusmn2g) de L guttatus con una dosis de 100 mgLTable 4 State of induction of anesthesia recovery and no return applied to L guttatus juveniles (mean weight = 2161 plusmn 2g) with a dose of 100 mg L Tratamientos T1 T2 T3 T4Dosis (mgL) 100 100 100 100Tiempo de anestesia total (min) 4 8 12 16 Temperatura (degC) 249 248 244 251Oxiacutegeno (ppm) 66 67 66 67pH 74 76 78 74Tiempo de induccioacuten (Seg) I 58plusmn27a 75plusmn16a 67plusmn08 74plusmn25

Tiempo de recuperacioacuten (Seg)

II 61plusmn25a 117plusmn38a 278plusmn97 0III 130plusmn21a 201plusmn64b 389plusmn25 0IV 211plusmn26a 290plusmn120a 480plusmn9 0V R R NR NR

Sobrevivencia () 100 100 50 0

Tiempo de induccioacuten maacutes tiempo de recuperacioacuten maacutes tiempo de anestesia total

TOTAL (Seg) 509 845 1 267 NA

Letras distintas en los superiacutendices indican diferencias significativas (P le 005) entre las filas Solo se tomoacute T1 y T2 debido a que en los otros tratamientos existioacute mortalidad Different superscript letters indicate significant differences (P le 005) between the rows Only T1 and T2 were taken because there was mortality in the other treatments R = Recuperacioacuten NR = No Recuperacioacuten R = Recovery NR = No Recovery NA = No aplica por no obtener un tiempo de recuperacioacuten NA = Not applicable because recovery time is not available

entre los tratamientos (P ge 005) y se mantuvieron entre los valores normales de la eacutepoca para la zona

DISCUSIOacuteN

A pesar de que el eugenol des-de hace siglos se considera seguro por ser empleado como analgeacutesico y local en humanos y como aditivo alimentario en peces podriacutea tener

efectos no deseados si se aplica una concentracioacuten incorrecta o a una ex-posicioacuten prolongada (Grush et al 2004 Javahery et al 2012 Zahl et al 2012 Caacuterdenas et al 2016) En salmoacutenidos por ejemplo se ha en-contrado que bajas concentraciones de este compuesto pueden ser toacutexi-cas (Hussein et al 2000) por ello las dosis no pueden ser consideradas estaacutendar para todas las especies Se



deben realizar obligatoriamente es-tudios para definir las concentraciones idoacuteneas de cada especie y cuaacutel es el tiempo maacuteximo de exposicioacuten a estas sin causarles la muerte (Cho ampHeath 2000 Barata et al 2016)

A pesar de que su aplicacioacuten es comuacuten Prashar et al (2006) advierten que el aceite de eugenol puede oca-sionar quemaduras en la piel cuando se aplica directamente y en altas do-sis sobre los tejidos blandos por ello Gonzaacutelez-Escobar (2002) recomienda en acuicultura su dilucioacuten en etanol o como uacuteltimo recurso su agitacioacuten vigo-rosa en el agua para disminuir el tama-ntildeo de las gotas que puedan depositarse en las branquias y causar severos da-ntildeos En este estudio se determinoacute que las concentraciones de etanol emplea-das no ejercieron ninguacuten efecto visible en el comportamiento de los juveniles de pargo manchado Bajo un procedi-miento similar Mylonas et al (2005) expusieron un grupo de 10 peces de lu-bina (Dicentrarchus labrax) y dorada (Sparus aurata) a concentraciones de etanol y no encontraron efectos negati-vos significativos sobre esas especies Sin embargo al seguir el precepto de que todas las especies no son iguales para otras se recomienda hacer la prue-ba de exposicioacuten previa al etanol para asegurar que este no influiraacute en los re-sultados de anestesia

El eugenol demostroacute utilizando dosis de 25 mgL ser efectivo para lo-grar sedacioacuten parcial (solo dos peces

alcanzaron la sedacioacuten total Cuadro 3) y quiruacutergica a partir de los 100 mgL de juveniles de L guttatus Re-sultados similares fueron encontra-dos por Millaacuten-Ocampo et al (2012) quienes obtuvieron una ligera aneste-sia con la aplicacioacuten de una concentra-cioacuten de 20 mgL de eugenol en peces escalares (Pterophyllum scalare) do-sis que les permitiriacutea realizar proce-dimientos menos complejos Otros autores como Mylonas et al (2005) han reportado anestesias parciales con dosis de 30 mgL en lubina (Dicentrar-chus labrax)

Se ha observado que la induccioacuten de anestesia con dosis bajas y tiempo de exposicioacuten prolongado puede resul-tar tambieacuten en tiempos de recupera-cioacuten prolongados (Sladky et al 2001 Cooke et al 2004) e incluso la muer-te pues Barata et al (2016) quienes analizaron el efecto del eugenol sobre perca regia (Argyrosomus regius) ha-llaron que las mayores mortalidades se identificaron en las concentraciones maacutes bajas del anesteacutesico a las 2 horas Sin embargo otros autores (Taylor amp Roberts 1999 Prince amp Powell 2000 Woody et al 2002 Webber et al 2009) han encontrado entre sus resultados que concentraciones maacutes altas en ex-posiciones maacutes cortas generan tiempos de recuperacioacuten menores

Este fenoacutemeno ha sido explica-do por Mylonas et al (2005) quienes obtuvieron tiempos de recuperacioacuten maacutes cortos en dosis maacutes altas de eu-



genol aplicadas en la lubina europea (Dicentrarchus labrax) y la dorada (Sparus aurata) Asumen que dosis maacutes altas inducen maacutes raacutepido el estado de anestesia por lo que el tiempo de exposicioacuten al aceite de eugenol es me-nor que en los peces expuestos a dosis maacutes bajas El aceite de eugenol es alta-mente lipofiacutelico penetra raacutepidamente el epitelio branquial llega a la sangre y de ahiacute es absorbido por los tejidos del cuerpo como la grasa y cerebro (Ja-vahery et al 2012) por lo que cuan-to menor sea el tiempo de exposicioacuten en el bantildeo de anestesia seraacute menor la cantidad de anesteacutesico absorbido por el cuerpo y cuanto maacutes raacutepido se tras-lade el pez al agua limpia maacutes raacutepida seraacute la eliminacioacuten de la sangre y por ende su recuperacioacuten Resulta impor-tante recalcar que el grado de sedacioacuten con eugenol puede variar de acuerdo a la temperatura del agua con que se esteacute desarrollando la investigacioacuten (Cup et al 2014) Otros factores que pueden influenciar en menor grado son el pH la salinidad o dureza del agua (Perry amp Gilmour 2006)

En este trabajo no se presentaron diferencias significativas (P ge 005) entre los periodos de induccioacuten con las tres dosis que siacute lograron llevar a los juveniles a estados de anesteacutesico III lo que infiere que el aumento de la dosis por arriba de los 100 mgL no nece-sariamente aumentaraacute la velocidad de induccioacuten a la anestesia en juveniles de L guttatus pero si aumentaraacute el

tiempo de recuperacioacuten debido a que en este siacute se presentaron diferencias significativas (P le 005) entre las con-centraciones de 100 175 y 250 mgL con un tiempo maacutes prologado en 250 mgL Si relacionamos los resultados de este estudio con los encontrados por Mylonas et al (2005) nos lleva a sugerir que la diferencia entre ambos se da en que los tiempos de exposicioacuten a la induccioacuten en este estudio fueron praacutecticamente iguales por lo que en estas circunstancias de induccioacuten la concentracioacuten siacute influye en el tiempo de recuperacioacuten

Se han establecido varios ran-gos de tiempo considerados como eficientes para la anestesia en peces (induccioacuten y recuperacioacuten) por ejem-plo Park et al (2003) y Oliveira et al (2008) recomiendan una induccioacuten en un periodo menor o igual a tres minu-tos y una recuperacioacuten del nado normal en un periodo no mayor a 10 minutos en el bacalao japoneacutes (Hexagrammos otakii) y tilapia del nilo (Oreochromis niloticus) mientras que Roubach et al (2001) una induccioacuten entre uno y tres minutos y la recuperacioacuten menor a cinco minutos en la yaturana (Bry-con cephalus) Bajo estos paraacutemetros y a pesar que los juveniles de pargo permanecieron dos minutos en esta-do de anesteacutesico antes de trasladarlos a la fase de recuperacioacuten se puede concluir que la concentracioacuten de 100 mgL aplicada en este estudio es alta-mente eficiente al obtener un tiempo



total de induccioacuten de un minuto y die-cisiete segundos y recuperacioacuten de tres minutos y diecisiete segundos para un periodo total de cuatro minutos y trein-ta y cuatro segundos

Otros estudios han llegado a la induccioacuten quiruacutergica con dosis simi-lares en tiempos menores a los cinco minutos entre los que se pueden men-cionar la perca regia (Argyrosomus re-gius) a 80 mgL (Barata et al 2016) Salmon atlaacutentico y Salmo salar a 100 mgL (Iversen et al 2003) pez gato o americano (Ictalurus punctatus) a 100 mgL (Small 2003) anguila de ale-ta larga (Anguilla reinhardtii) a 100 mgL (Walsh amp Pease 2002) y pez co-nejo (Siganus lineatus) a 50-100 mgL (Soto amp Burhanuddin 1995) Aunque la mayoriacutea de estudios han demostrado que se puede llegar a la induccioacuten qui-ruacutergica en dosis menores por ejemplo Cunha amp Rosa (2006) reportaron con-centraciones de 20 a 60 mgL de acei-te de eugenol efectivas para anestesiar peces de arrecife tropical con periodos de induccioacuten menores a dos minutos y tiempos de recuperacioacuten de dos a cuatro minutos mientras que Garciacutea-Goacutemez et al (2002) lograron anestesiar en un periodo de 3 a 6 minutos y recuperar en 2-5 minutos ejemplares de especies como Seriola dumerili Dicentrarchus labrax Sparus aurata Dentex dentex y Diplodus puntazzo

El tiempo es un factor importante en todas las actividades operativas en la industria acuiacutecola en especial a gran

escala por ello con base en los resul-tados obtenidos en este estudio se con-sidera conveniente una induccioacuten que no supere los dos minutos y una recu-peracioacuten menor a los cuatro minutos asiacute como realizar el mismo estudio con dosis entre 25 y 100 mgL debi-do a la probabilidad de que exista una dosis con iguales o mejores resultados que la de 100 mgL que permita una menor dosis de anesteacutesico y por ende un menor costo econoacutemico La dismi-nucioacuten de la dosis evitaraacute el incurrir en gastos econoacutemicos innecesarios ya que los anesteacutesicos son costosos y excesivas dosis aumentaraacuten los costos operativos (Roubach et al 2005)

Se ha demostrado que pueden darse episodios de mortalidad en peces con el empleo de aceite de eugenol si el tiempo de exposicioacuten supera el margen de seguridad (Sladky et al 2001) En el cultivo de pargo manchado como en otros peces marinos (Mylonas et al 2005) muy pocas veces se anes-tesia individualmente por lo general esta praacutectica se realiza solamente con reproductores En el caso de larvas juveniles o adultos en engorde las inducciones a la anestesia se hacen grupales lo que implica que los uacutel-timos en ser analizados (p ej deter-minacioacuten del peso longitud revisioacuten de deformidades o biopsias) tendraacuten una mayor exposicioacuten al anesteacutesico ocasionaacutendose la muerte si se supera el umbral toxicoloacutegico de no retorno Razoacuten por la que en este trabajo se



consideroacute esencial definir el tiempo maacuteximo de exposicioacuten de los juve-niles de L guttatus en la dosis maacutes eficiente de induccioacuten y recuperacioacuten (100 mgL)

Los resultados mostraron que los juveniles de L guttatus toleran la dosis de 100 mgL hasta un maacutexi-mo de tiempo de anestesia quiruacutergica de ocho minutos a los 12 minutos se presenta una mortalidad del 50 de los peces y a los 16 minutos el 100 Estos resultados le permiten al acui-cultor cronometrar el tiempo total de trabajo sin riesgos de mortalidad en este caso equivalente a la suma del tiempo de induccioacuten de un minuto y quince segundos maacutes el tiempo de se-dacioacuten quiruacutergica de ocho minutos El tiempo de trabajo con el eugenol a una dosis de 100 mgL aplicado a juveniles de L guttatus no debe sobrepasar los 8 minutos tras alcanzar la sedacioacuten a una temperatura entre 240 y 248degC Seguacuten Portz et al (2006) las dosis de sedacioacuten para eugenol deben ser varia-das cuando hayan cambios de al me-nos 2oC en el agua

El eugenol es eficaz para la anestesia de juveniles (peso prome-dio=2161plusmn2g) de pargo manchado (L guttatus) en temperaturas entre 240 y 248degC La concentracioacuten de 25 mgL es suficiente para la induccioacuten anes-teacutesica parcial de los peces la cual es ideal para realizar actividades rutina-rias menos complejas mientras que la concentracioacuten maacutes eficiente en lograr la

sedacioacuten quiruacutergica fue de 100 mgL con una induccioacuten y recuperacioacuten maacutes raacutepida sin presentar problemas de mortalidad en un tiempo de exposicioacuten total no mayor a los 8 minutos despueacutes de la sedacioacuten

AGRADECIMIENTOS

A los estudiantes del programa de Diplomado en Acuicultura de la Escuela de Ciencias Bioloacutegicas de la Universidad Nacional por su contribu-cioacuten en el desarrollo de los bioensayos y a los evaluadores por su contribucioacuten a la mejora del presente trabajo

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routine work A total of 76 juveniles produced in January 2016 with an average weight of 2161 plusmn 20 g were selected at the Aquaculture and Marine Biotechnology Laboratory of the Marino del Paciacutefico Park (Gulf of Nicoya) Juveniles were exposed to 25 100 175 and 250 mgL eugenol concentrations in 30 L tanks and their induction of anesthesia and recovery were monitored Once the most efficient dose was defined the maximum exposure time was determined Four times of induction were defined for this study 4 8 12 and 16 min and the recovery threshold was established at 10 min Eugenol was determined to be an effective anesthetic for rose snapper juveniles with temperatures ranging between 240 and 248degC The 25 mgL concentration was sufficient for partial induction of fish and appropriate to perform less complex routine activities in the handling of snappers while the most efficient concentration was 100 mgL with exposure times no greater than 8 minutes after total anesthesia

Keywords Lutjanus guttatus anesthetic eugenol oil efficient dose time of no return

INTRODUCCIOacuteN

El pargo manchado Lutjanus guttatus (Steindachner 1869) ha sido desde los antildeos noventa una especie de mucho intereacutes para la piscicultura marina en Ameacuterica Latina tropical ya que se distribuye en el oceacuteano Paciacutefico desde Meacutexico hasta Peruacute y por presentar una demanda atractiva en los Estados Unidos (Fischer et al 1995 Herrera-Ulloa et al 2009) En Costa Rica su reproduccioacuten natural y espontaacutenea permitioacute la masificacioacuten en la produccioacuten de juveniles en cautiverio en el antildeo 2005 lo que permitioacute el cultivo con fines comerciales en granjas marinas desde el antildeo 2006 (Herrera-Ulloa et al 2009 Chacoacuten-Guzmaacuten 2010)

En varios paiacuteses se han desarro-llado investigaciones dirigidas a co-nocer y controlar diferentes aspectos de su ciclo de vida en cautiverio (Ab-do-de la Parra et al 2015) En Costa Rica la produccioacuten en granjas marinas

alcanzoacute las 528 toneladas meacutetricas en el antildeo 2016 (Barrantes-Elizondo et al 2016) Este incremento ha hecho nece-sario que se optimicen los protocolos en todas las etapas del proceso pro-ductivo especialmente aquellos que representen un riesgo para la salud de los peces En el manejo de juveniles ha sido esencial aplicar medidas de mani-pulacioacuten eficientes que eviten lesiones estreacutes enfermedades y mortalidad En este contexto los anesteacutesicos son una forma indispensable de tratamiento sin embargo el desconocimiento de las dosis adecuadas tiempos de expo-sicioacuten y efectos en la salud de los peces podriacutean generar peacuterdidas econoacutemicas

En la produccioacuten de peces se ha acostumbrado utilizar teacutecnicas de anestesia para los trabajos rutinarios como captura muestreos induc-cioacuten hormonal y transporte siendo los maacutes empleados benzocaiacutena qui-naldina metanosulfonato de tricaiacutena (MS222copy) e isoeugenol (Aqui-Scopy)

(Garciacutea-Goacutemez et al 2002) No obs-










































RESULTADOS















Seg) 467 394 496 537

















TOTAL (Seg) 509 845 1 267 NA



DISCUSIOacuteN






























AGRADECIMIENTOS


BIBLIOGRAFIacuteA









































































































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DISCUSIOacuteN






























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concentración y tiempo máximo de exposición de juveniles

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