blutbank und immunhämatologie i serologische grundlagen, methoden und besonderheiten guido heymann
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Blutbank und Immunhämatologie I
Serologische Grundlagen, Methoden und Besonderheiten
Guido Heymann
Der ganze Aufwand wofür ?
• Geltende deutsche Richtlinien, TFG
• Um gefährliche Antikörper zu erkennen
• Um Probleme vorab zu erkennen:– immer positive X-Probe– großer Aufwand, passende Konserven zu
finden
Was sind Blutgruppen?
• Antigene auf der Oberfläche von Blutzellen– aber auch Organe, Thrombos, Leukos…
• Polymorphismus, Verteilung, Immunogenität
• Vererblichkeit (genetische Anlage)
Wer ist verantwortlich?
Was können die tun?
Wie tun sie es?
Komplementaktivierung durchAntikörper
Komplementaktivierende Antikörper:
IgMIgG3IgG1
Häufigkeiten
Frequenz Quotient
85% 0,11
8% 0,092
80% 0,008
29% 0,0234
99,8% 0,00003
98% 0,0003
66% 0,0017
68% 0,0064
77% 0,00023
55% 0,00036
74% 0,000078
89% 0,000066
Eigene Daten: 1.6. – 30.10.06
AKS 5204 AKS+ 248 4,8 %
Anti-DAnti-D 19 0,365 % 7,661 % 0,11
Anti-K 7 0,135 % 2,823 % 0,092
Anti-c 2 0,038 % 0,806 % 0,008
Anti-E 21 0,406 % 8,468 % 0,0234
Anti-e 0 0,0003
Anti-Fy(a) 5 0,096 % 2,016 % 0,0017
Anti-C 6 0,115 % 2,419 % 0,0064
Anti-Jk(a) 3 0,058 % 1,21 % 0,00023
Anti-S 1 0,019 % 0,403 % 0,00036
Anti-Jk(b) 1 0,019 % 0,403 % 0,000078
Rationelles Vorgehen I
Probe
Bg bekannt? Bg bestimmen
AKSAKS aktuell?
weiter, wie Anforderung
AKS negativ?
ja
ja
ja
nein
nein
nein
S1- S2- S3- EA+
1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- EA ist diagnosebedingt positiv (C3d, Lupus)
- EA ist durch Medikamente positiv (z.B. Gelatine)
2.) Pat. hat Autoantikörper
- Auto-Ak sind nur enzymsensitiv (Ansatz mit Enzym)
- schwache Kälteautoantikörper (Röhrchentest bei 4°)
3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper
- z.B. Jk, (M, Fy) u.a. (Vortransfusion?, Eluat)
- medikamentabh. Ak (Gabe zuvor mit Abstand)
S1+/- S2+/- S3+/- EA-
1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper
- Einzelantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel)
2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper
- Auto-Ak mit Pseudospezifität (Rhesus)
- Kälteantikörper (I, HI) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)
- Suchzelle Coombs+?! oder verkeimt
S1+ S2+ S3+ EA-
1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper
- Hochfrequenzantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel)
2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper
- Auto-Ak (EA teilweise nur im Enzym +, mDCT)
- Kälteantikörper (I, HI, H) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle und A1(B)-Zellen)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)
- Suchzellen verkeimt oder vermischt?!
S1+ S2+ S3+ EA+
1.) Pat. hat Auto-Antikörper- Wärmeautoantikörper (Diff. und mDCT/Eluat)
- Kälteautoantikörper (Diff. Röhrchen streng bei 37° und 4°)
- Ak-Mischungen (gr. Diff., Auto-Absorbtion o. WARM, Absorbtion-Elution)
- medikamentabh. Ak (Medikation?, Serumdialysat)
2.) Pat. hat Allo-Antikörper mit Vortransfusion- Ak-Gemisch (s.o.)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen, Zentrifugenfehler, ausgeronnen?....
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)
- Vorbehandlung mit sensiblen Medikamenten (Gelatine, HAES, ATG…)
aber: S1- S2- S3- EA-
1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
2.) Ansatz wurde fehlerhaft durchgeführt- Serum verdünnt oder Plasma bei best. Ak
- zu wenig Serum oder zu viel Suchzellsuspension
- Verwechslung
3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper, aber:- Antigen in Suchzellen nicht vorhanden
- Suchzellen sind fehlerhaft oder zu alt
- HTR mit kompletter Bindung der Ak, aber Coombs-
- medikamentenabh. Ak ohne aktuelle Gabe
- Ak nur im Enzym nachweisbar (IgM)
BegriffsklärungAntigen/Zelle 1 2 3 4 5 6
D + + + - - -
C + - + - - -
c + + - + + +
Fya - + + - + -
Fyb + - + + + -Anti-D allein 3 3 3 0 0 0
Anti-D mit unterliegendemAnti-C 3 3 3 0 0 0
Anti-Fy(a) allein 0 3 3 0 3 0Anti-Fy(a) allein mit Homozygoteneffekt 0 3 0 0 0 0Anti-Fy(a) im Enzym 0 0 0 0 0 0
Antithetische AntigeneAntigen antithet. Ag Homozygoteneffekt Enzym
D - - +
C c (+) +
c C (+) +
E e (+) +
e E (+) +
K k - ~
k K - ~
Kp(a) Kp(b) - ~
Jk(a) Jk(b) ++ ~
Jk(b) Jk(a) ++ ~
Fy(a) Fy(b) + ---
Fy(b) Fy(a) + ---
Le(a) - - ~
Le(b) - - ~
M N ++ ---
N M + ---
S s + -
s S + -
P1 - - ~
Beispiel
L/C
33002204
03
0
EN
00000000
00
0
XX XXX X ? XX
Anti-Fy(a), mgl. Anti-N
Weiteres Vorgehen:- 4°C Ansatz im Röhrchen-weitere N+ Zellen aus anderen Panels-Antigenbestimmung
typisches Vorgehen
1. Ansatz von auffälligem Serum mit Diff-Panel auf L/C Karte
2. Ergebnis genau abgestuft ablesen (+/-, 1,2,3,4, MF) und übertragen
3. Antigenausschluß nach folgendem Verfahren:->
Antigenausschluß
1. Sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis von zwei homozygoten Zellen
2. Antigene des Patienten lassen zumindest keinen Alloantikörper zu
3. Mäßig sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis mit einer homozygoten Zelle
4. fraglicher Ausschluß bei negativem Ergebnis mit heterozygoten Zellen
Reaktionsformen
• Enzymsensitivität: z.B. Fy und MN(S)
• Reaktionssmuster: komplette Agglutination, „schlierige“ 1-2fache Reaktion, Mischfeldreaktion
• Nur homozygote Zellen reagieren
Ein Wort zum Titer
• Wie wird Titer bestimmt?– homozygote, „stärkste“ Zelle– gleiche Reaktionsbedingungen
• Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein niedrigtitriger Ak kann relevant seinniedrigtitriger Ak kann relevant sein……
• Wann ist Titer notwendig (meine Meinung)
– in der Schwangerschaft– zur Ak-Differenzierung (HTLA)– Verlauf nach Transfusionsreaktion– nach Transplantation / KMT
Z.B.: HTLA
High titre – low avidity
-„schlierige“, mischfeldige und ungleichstarke Reaktionen-alle Zellen pos.-Titer meist > 1:64
-aber: völlig irrelevant-stören X-Probe
Ak, immer relevant
• A und B, H bei Bombay
• Duffy (Fy), Kell, Kidd (Jk), Rhesus
• S, s, U
• P, PP1Pk
• Vel, Diego
Ak, manchmal relevant
• Lan, Landsteiner-Wiener (Lw)
• Cartwright (Yt), Cromer, Dombrock
• Colton, Gerbich, Scianna
• Junior (Jr), Indian
• At(a)
Ak, relevant, wenn reaktiv bei 37°C
• A1
• H
• M, N, P1
• Lewis a (Le(a))
• Lutheran (Lu)
• Sid (Sd(a))
• KAK (Transfusion?)
Ak, immer irrelevant
• Lewis b (Le(b))
• HLA (Bg(a-c))
• HTLA: Chido, Rodgers, Knops, McCoy, Cost
• JMH(?)
• WAK (für Transfusion)