biblioteca digital | fcen-uba | romeo, horacio eduardo. 1987

Modulación ejercida por el sistema nerviosoautónomo simpático sobre la función del eje

hipófiso-tiroideoRomeo, Horacio Eduardo

1987

Tesis Doctoral

Facultad de Ciencias Exactas y NaturalesUniversidad de Buenos Aires

www.digital.bl.fcen.uba.ar

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Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales de la Biblioteca Central Dr. LuisFederico Leloir. Su utilización debe ser acompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de lafuente.

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Fuente / source: Biblioteca Digital de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires

UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES

TEMA DE T E S I S

AUTOR

HORACI o EDUARDO ROMEO

LUGAR DE TRABAJO

CENTRO DE ESTUDIOS FARMACOLOGICOS Y DE PRINCIPIOS NATURALES. CON1 CET

T E S I S PRESENTADA PARA OPTAR AL T ~ T U L O DE

DOCTOR EN CIENCIAS BIOL~GICAS

AGRADECIMIENTOS

M i agradecimiento y especial reconocimiento a l Prof. Dr. Daniel P.

Cardinal i quien me in ic ió y orientó en el campo de l a Inwstigación Cien- t í f i ca , brindándome sus conocimientos, su apoyo y su afecto.

Al Dr. Axel O. Bachmann quien me introdujo en la zoología y por sus permanentes consejos.

A mis compañeros de Laboratorio: Irene Vacas, Ruth Rosenstein, césar

G. Solveyra, Inés K. Sarmiento, Elba Perejra, Eduardo Chuluyan, Adriana del

Castello y Graciela Etchegoyen, por los momentos compartidos y las amenas polémicas, casi d iar ias.

A los d is t in tos profesionales que colaboraron para que esta Tesis pudiera real izarse: Dres. R. Boado y A. Zaninovich (Radioimunoensayo de T4

y TS$ Dras. M. Barontini e 1. Armando (Determinación de Cateco1aminas)y Dra. C. Díaz (Técnicas Histológicas) .

A l Centro -de Estudios Farmacológi cos y de Principios Naturales donde

se real izó es te trabajo y particularmente a Daniel González encargado del

Bioterio por su esmero en e1 trabajo.

A Producciones García Ferré por su apoyo durante mis estudios univer- s i t a r i os y en todos los momentos d i f í c i l es .

A l Consejo Nacional de Investigaciones Científ icas y Técnicas por l a s becas que me otorgaron.

A m i madre y a l a Srta. Mirta Carnero por el mecanografiado de esta

Tesis.

A todos aquéllos que de alguna manera contribuyeron para que es ta

Tesis pudiera concretarse.

A mis Padres por su ejemplo cot id iano.

A mis hermanas por su comprensión.

A mis abuelas presentes y mis abuelos ausentes

por todo aquel lo que no se expresa con palabras.

A mis amigos de siempre por su lucha sostenida en pos de un fu turo mejor.

ABREVIATURAS

ARN

COMT DA

Dc unil DM 1

DOPA

E EDTA EGTA

E S GCI GCM

GCS

GCSx uni 1 GCSx bi l.

MAO MMI

NCE

NCEx unil NCI

LCR PCA SAM SNC TCC

Aci do ri bonucl ei co

Catecol -O-meti 1 transferasa Do pami na

Descentralización cervical superior unilateral Desmetil imipramina 3,4 dihidroxifenilalamina

Adranalina

Acido etilendiamino tetraacético Acido etilenglicol tetraacético

Error Es tandard Ganglio Cervical Inferior Ganglio Cervical Medio Gangl io Cervical Superior

Gangliectomia cervical superior unilateral Gangl iectomia cervical superior bi 1 ateral

Hormona de crecimiento Tri t io Monoamino oxidasa Metil mercapto imidazol Mililitro Milimolar Nervio carotídeo externo del GCS . Sección unilateral del nervio carotídeo externo del GCS Nervio carotl'deo interno del GCS Noradrenal i na

Nervio Pteri goideo Palatino Nanómetro

Líquido ce'falo -raquídeo Acido perclóri co 5-adenosil-L-Metionina Sistema Nervioso Central Tronco carotídeo común

L-3,5,3' triyodotironina Tiroxina o tetrayodotironina

Tr i S

TSH

/Mg

.r' F"

Tr is (hidroximeti1)-amino metano Ti r o t r o f i na

m i crogramo

m i crometro m i crol i t r o

microunidad

INDICE

I - INTRODUCCION

1. FENOMENOS NEUROENDOCRINOS.

1.1- Conceptos General es .

1.2- Mecanismos de Interacción Neuroendócrina

2. SISTEMA SIMPATICO CERVICAL.

2.1- Si S tema Nervioso Autónomo.

2.2- El Gangl io Cervical Superior (GCS) : Anatomía.

2.3- Fis io logía del GCS: Neurona Noradrenérgica.

2.4- Degeneración Anterógrada ó Wal le r iana.

3. EJE HIPOTALAMO-HIPOFISO-TIROIDEO. 3.1- Concepto de Eje: Breve Reseña Histór ica.

3.2- Eje Hipofiso-Tiroideo.

3.3- El Control Hipotalámico de l a Hipóf is is .

3.4- Efecto de l a Temperatura sobre l a Función Tiroidea.

4. VINCULO ENTRE EL GCS Y EL EJE HIPOFISO TIROIDEO.

4.1- Catecolaminas y Glándula T i roides.

4.2- Efecto de l a Degeneración Walleriana sobre e l e j e

Hipofiso-Tiroideo.

5. OBJETIVOS DE ESTA TESIS.

1 1 - MATERIALES Y METODOS,

1. ANIMALES Y TEJIDOS.

2. PROCEDIMIENTOS QUIRURGICOS.

2.1- Gangl iectomía Cervical Superior (GCSx) . 2.2- Descen t r a l i zaci ón Gangl ionar (Dc) . 2.3- Sección del Nervio Carotídeo Externo (NCEx).

2.4- Tiroidectomía.

2.5- Hipofisectomía.

2.6- Punción Yugular.

3. DETERMI NACI ON DE HORMONAS.

3.1- Determinación de los Niveles Séricos de TSH.

3.2- Determinación de los Niveles Séricos de Hormona

Ti roidea (Tq) . 4. CAPTAcIoN NEuRoNAL DE 13~1 HE.

5. DETERMINACION DE CATECOLAMINAS.

6. TECNICAS HISTOLOGICAS.

6.1- Empleo de Col chicina.

6.2- Fijación e Inclusión en Parafina.

6.3- Coloración y Montaje.

6.4- Valoración de los Resul tados.

7. ANALISIS ESTADISTICO.

11 1- RESULTADOS

1. EFECTOS DE GCSx b i l . SOBRE EL EJE HIPOFISO TIROIDEO.

1.1- Variación de TSH Sérica en l os Animales GCSx en t re

1-28 días Post Cirugía.

1.2- Variación de l a T4 Sérica en los Animales GCSx en t re

1-28 d ías Post Cirugía.

1.3- Cambios Ponderales en Animales GCSx b i l . a los 28

d ías Transcurrida 1 a Cirugía.

1.4- Cambios de l a TSH Sérica Inducidos por Tiroidectomía

B i la tera l en Ratas GCSx bi l .

2. CAMBIOS EN EL EJE HIPOFISO TIROIDEO DURANTE LA DEGENERA-

CION ANTEROGRADA DE LOS TERMINALES POST GCSx.

2.1- Modificación del Ritmo Diario de TSH.

2.2- Modificación del Ritmo Diario de T4. 2.3- Ritmo Diario de Catecolaminas In t ra t i ro ideas . 2.4- Respuesta de TSH a l TRH en Ratas durante l a Degenera-

ción anterógrada post GCSx bi 1 ,

2.5- Receptores Andrenérgicos invol ucrados en l a Inhibición

de TSH durante 1 a Degeneraci Ón Anterógrada .

2.6- Receptores Adrenérgi cos Invol ucrados en l a inhibición

de l a Liberación de T4 durante l a Degeneración Anteró-

grada,

3. EFECTOS DE GCSx b i l . EN LA ARAPfACíON DE LAS RATAS A AM-

BIENTES FRIOS.

4. ESTUDIOS SOBRE LOS CAMBIOS TARDIOS TIROIDEOS POST GCSx

unil . 4.1- Hipertrof ia Compensadora en Ratas.

4.2- Hipert rof ia Compensadora en Ratas Sometidas a GCSx

uni l del Lóbulo Remanente.

4.3- Cambios Hormonal es durante 1 a Hipertrof ia Compensa-

dora en Animales GCSx un i l . y con Operación Simulada.

4.4- Hipertrof ia Compensadora en Ratas Hipofisoprivas.

4.5- Hormonas Plasmáticas en l a Hipertrof ia Compensadora

de Ratas Hipofisopri vas.

4.6- Efectos de GCSx un i l . sobre l a Hipertrof ia Compensado-

r a en Animales Hipofisectomizados. 7 5

4.7- Cambios Hormonales durante l a Hipertrof ia Compensadora

de Animal es H i pof i sopri vos. 80

5. EFECTO DE LA GCSx SOBRE LA PROLIFERACION CELULAR DURANTE EL

DESARROLLO DE LA HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS HEMITI-

ROIDECTOMIZADAS.

6. ORIGEN DE LA INERVACION SIMPATICA TIROIDEA.

6.1- Efecto de l a Dc y l a GCSx unil . sobre el contenido de

Catecolaminas In t ra t i ro ideas.

6.2- Efecto de l a Dc y l a GCSx uni l . sobre el contenido de

Catecolaminas en l a Glándula Pineal . 6.3- Captación Neurona1 de PH] NE en Tiroides luego de

. GCSx un i l . o Dc.

6.4- Efecto de NCEx uni l . del GCS sobre l a Captación [3~ ]

NE en Tiroi des y Pineal . 6.5- Efecto de l a NCEx un i l . y l a GCSx uni l . en Animales

Hipof i sopri vos.

I V - DISCUSION

V- CONSIDERACIONES FINALES

VI- BIBLIOGRAFIA '

"Para l a ciencia l a vida no es un princi- pio n i un f in , es una continuación y su o b j e t i vo es contr ibuir a mejorar los problemas que se susciten".

David Sers

1.1- CONCEPTOS GENERALES

Los orcanismos pluricelulares están formados por d is t in tas poblaciones celulares que constituyen tej idos y Órganos responsables de ejecuta? las d i -

versas funciones metabólicas indispensables para la vida. Una adecuada c o o ~

dinación de dichas funciones permitie.ndo que el organismo se comporte como un todo, requiere de mecanismos que fac i l i ten una eficaz co~unicación entre las células. Este fenómeno de comunicación intercelular está mediado por sustancias químicas portadoras de información, capaces de t rans fer i r sus mensa jes seaún alguna de 1 as moda1 i dades enumeradas a continuación :

- Comunicación Endócrina: cuando el canal a través del cual se transladan l as moléculas mensajeras es l a sanare, l a l in fa u otro líquido corporal a

excepción del 1 íqui do in ters t i ci al . - Comunicación Parácrina: Cuyo canal es el 1 íquido in ters t ic ia l ; l as molécu-

las mensajeras no inqresan a l a circulación qeneral y l a comunicación se establece entre células adyacentes.

- Comunicación Neural : E l canal de comunicación se encuentra 1 imitado a for-

maciones anatómicas especial es denominadas sinapsis.

- Comunicación Intercelular: Se l leva a cabo en las llamadas "uniones estre- chas" o "cap Junctions" que son aposiciones de membranas celulares atrave- zadas por poros de 2 nm. de diámetro.

Durante bastante tiempo se consideró que l a comunicación endócrina y l a neural eran entidades separadas, cuya diferencia radicaba en el nivel de re- lación que establece cada una de el las (más di recto en 1 a neural , menos di - recto en l a endócrina), además de expresarse por mensajeros específicos y di - ferentes entre sí.

La comunicación neural se establece en s i t i o s anatómicos part iculares: l as sinapsis. Las moléculas mensajeras (neurotransmisores) , 1 iberadas en l a biofase sináptica, se unen con receptores post-sinápticos sobre l a superfi - c ie de l a célula efectora, provocando cambios químicos .ue generan cambios

de potencial e léct r ica en l a membrana. Recentores presinápticas, por su parte, madul an 1 a canti dad de neurotransmi sor 1 i berado .

La comunicacion endócrina se def in ió como "menos d i rec ta o a d is tanc ia" , mediada por mensajeros .químicos específ icos d i ferentes de los neurotransmisores que, vert idos en e l tor rente sanguíneo, se ponen en contacto con cé lu las

efectoras provistas de receptores capaces de reconocer excl usi vamente a di - chas sustancias, a l a s que s e denominan hormonas. De e s t e modo l os recepto-

res secuestran .m01 éculas hormonal es incorporándolas a l a propia cél ula. Pero es ta aparente di ferencia en t re ambos sistemas de comunicación i n -

t e r ce lu la r no es t a l , esfumándose l a antigua delimitación antes propuesta.

Por ejemplo, recientemente s e ha demostrado que muchas moléculas mensajeras s imi lares son empleadas por ambos sistemas, t a l como ocurre con l a s hormonas

secretadas tanto por cé lu las endócrinas como neural es en el hipotálamo (1).

Un mismo mensajero químico puede actuar como neurotransmisor en cé lu las de

comunicación neural y como hormona para l a comunicación endócrina e j : l a NE

(2) o l a s hormonas . gast ro in test ina les gastr ina y colescistoquinina (3 ) . Las complejas relaciones en t re l os d is t in tos grupos ce lu lares de los i s l o t e s de Langerhans pancreáticos ( 4 ) (5) (6), son un buen ejemplo donde sustancias secretadas, tanto por neuronas como por cé lu las endócrinas, actúan como in te r -

. mediarias en l a comunicación parácrina . Asimi srno en ambos sistemas : endócri - no y neural , 1 as señales const i tu idas por neurotransmisores y hormonas actúan sobre cé lu las efectoras provistas de receptores específ icos e inducen una se-

r i e de eventos in t race lu lares que desencadenan una modificación en el estado

funcional de l a s mismas (7-9). Estas consideraciones hacen que, hoy en día, s e hable de un sistema integrado de información o neuroendócrino, compren- diendo tanto a l a s señales hormonales como a l a s neurales.

Tal vez l a d i ferencia que se puede establecer en t re e l proceso de in for - mación neural y e l hormonal e s t é centrado en l a manera como el mensaje adquig r e "privacidad", término que alude a l a forma de establecer l a relación con l os te j idos efectores. El sistema nervioso adquiere suMprivacidad" a t ravés de l a es t ruc tura anatómica y bioquímica par t icu lar de l a s inapsis. Es en es-

t a s conexiones puntiformes, donde los neurotransm'l'sores portadores del mensa-

je s e l iberan en cantidades pequeñas y discontinuas, actuando sólo en su inme - dia ta vecindad (10) (11). La comunicación endócrina, por su parte, adquiere privacidad gracias a receptores especí f icos en l a s poblaciones ce lu lares e f e c

toras,sobre l a s cuales actúa 1 a hormona mensajera (12) (13) (14).

En l a s inaps is (12) l a s zonas de contacto están determinadas por una

expansión de l a región presináptica conocida como botón terminal o axonal ,

en cuya est ruc tura interna s e encuentran alo jadas vesículas s inápt icas,que acumulan l a s substancias neurotransmisoras. Al l l ega r un impulso nervioso

hasta e l terminal, luego de su t r áns i t o por e l axón, var ias vesículas des-

cargan su contenido en e l espacio in terce l u lar o hendidura s inápt ica,que l o

separa de l a es t ruc tura post-sinápt ica efectora. El neurotransmisor ent ra a s í en contacto con receptores especí f icos en 1 a membrana post-s inápt ica de

l a célu la conti-ua, a l terando su act iv idad. Aunque ex is te gran variedad

de neurotransmisores, , de d i fe rente naturaleza química, sólo pueden evocar en l a cé lu la posts inápt ica 2 t i pos de respuesta:

a ) Despolarización con o sin inducción del potencial de acción

b) Hiperpolarización por aumento del potencial de membrana, con los consiguientes cambios en l a exci tabi l idad neural .

Las sustancias que s e desempeñan como neurotransmisores pueden s e r or- denadas en 3 ~ r a n d e s urupos químicos:

- Aminas biógenas: como NE, DA, serotonina,etc.

- Aminoácidos : gl utamatg, u1 i c i na, GABA, e t c .

- Péptidos: Gastr ina, angiotensina 11, sustancia P , e tc .

Mientras que l a s aminas biógenas se s in te t i zan en l a s terminales nervio - sas -a p a r t i r de aminoácidos percursores (15) (en e l capí tu lo s iqu iente s e de - t a l l a n l a s s í n t e s i s de NE) - 1.0s péptidos son s in te t izados en e l cuerpo neu- ra l desde donde, incluidos dentro de vesículas, son transportados a l terminal s ináp t i co ( t ranspor te axoplásmico) . En muchos casos ex i s te un procesa- miento del péptido durante e l t ransporte (16).

Las acciones post s inápt icas de los neurotransmisores, pueden reunirse en dos.categor7as: ionotrópicas o metabolotrópicas. La acción ionotrópica

resu l ta l a más c lás ica , implicando l a apertura o c i e r re de canales iónicos . en l a membrana post s inápt ica , asociados con al-Un receptor. E l efecto post- s ináp t i co s e debe inicialmente a cambios en l a di fusión pasiva de d i s t i n tos

iones a$ t r a v . 6 ~ de sus respect ivos poros. El t i p o de ión y l a dirección de su movimiento (hacia o fuera de l a cé lu l a ) , generan un potencial e l éc t r i co que puede s e r exc i ta to r io o inh ib i to r io . Citaremos dos ejemplos de respues - t a ' exc i t a to r i a o inhTbitor ia.

La acetil colina es un neurotransmisor ionotrópico t íp ico,que ejerce una

acción exci t a t o r i a en e l sistema nervioso centra l y el per i fé r ico cuando

actúa sobre un receptor n icot ín ico const i tu t ivo del poro de sodio (17). Un

neurotransmisor inh ib i to r io ionotrópico, t a l vez el inhibidor por excelencia en e l sistema nervioso cen t ra l , es e1 GABA que actúa con un receptor vincula - do a l poro de cloro (18 (19).

Sin embargo l a mayor par te de los neurotransmisores, inc lusive l a ace-

t i l c o l i n a sobre los receptores de t ipo muscarínico, actúan por e l mecanismo de neurotransmiSiÓn metabolotrópica. En e s t e caso en lugar de una modifica-

ción di rec ta de 1 a permeabi 1 i dad membrana?, e l receptor metabol otrópi co a l

s e r activado,pone en acción a segundos mensajeros in t race lu lares. Estos men - sa jeros desencadenan una cascada de reacciones bioquími cas que 1 1 evan f ina l - mente a l a fos for i lac ión de proteínas de membrana, relacionadas con l a r e o s

lación de l a permeabilidad a d i s t i n tos iones. Se han ident i f icado una gran variedad de segundos mensajeros : AMPc, c;: GWPc, fosfol íp idos,etc. (8) (9)

(21-22).

Otra di ferencia ent re los dos t ipos de transmisión radica en l a veloci- dad de l a conducción del mensaje. La transmisión ionotrópica es veloz,produ -

ciéndose en t re los 0,2 y 0,5 mseg., mientras flue todos los eventos desencade -

nados por l a act ivación de segundos mensajeros hacen a l a transmisión meta- bolotrópica más lenta .

1.2- - MECANISMOS DE INTERACCION NEUROENDOCRINA

Toda interacción, tanto de un neurotransmisor como de una hormona, con sus respectivos receptores consiste si empre en un proceso de t ransferencia de información. Como hemos v is to ,e l mensaje puede v ia ja r por d i s t i n tos ca-

nales o vías de comunicación, pero l a t ransferencia de és te puede c las i f i ca r - s e en dos t ipos :

a ) Transducción: nos referimos con e s t e término a l fenómeno de información

primaria que involucra l a descodificación del mensaje y su recodif icación poster ior .

b ) Flodulación: Es l a acción e jerc ida sobre una respuesta primaria s in modifi - car e l sent ido de l a misma, pero produciendo una a l teración en l a ampl i -

tud, forma o intensidad de dicha respuesta. La modulación incluye múl t i- ples fac tores que, si bien no pueden inducir l a respuesta primaria, pue-

den a l t e r a r varios aspectos de l a misma. Tres t ipos de transducción t i e - nen l u ~ a r en una determinada estructura neuroendócrina (23) (24):

Figura N o 1: ESQUEMA DE TRANSDUCCION NEUROENDOCRINA

sanguíneo

secreción hormonal

neurona aferen te "transductor

neuroendócrino"

Las celwlas neuroendócrinas son las transductoras. La señal de entrada

l lega a través de conexiones sinápticas desde neuronas aferentes. Esta infor - mación provoca cambios en l a celula trasductora que responde liberando hormo - nas a l a circulación general.

Figura No 2: ESQUEFIA DE TRANSDUCCION ENDOCRINO-NEURAL

señales hormonales interactuando con receptores

vaso sanguíneo

U

neurona postsi náptica " transduc tor endocrino-neurat "

Las neuronas endocrinoneurales son los transductores. La entrada o se- ñal hormonal l lega por l a c i rculación sanguínea o bien desde e l l íquido cefa- lorraquideo (LCR). Esta información provoca cambios en l a neurona transducto - ra que s e expresan como a l terac iones en su act iv idad e léc t r i ca normal. La s e - ñal ahora generada e s transmit ida a l a neurona posts inápt ica.

Figura N03: ESQUEMA DE TRANSDUCCION ENDOCRINO-ENDOCRINA

-- -.-.- .- ... 'e-

señales hormonales interactuando con su receptor

neo

\

" transductor

Las cé lu las endócrinas son transductores endócrino-endócrinos. La señal hormonal l l ega a l a célu la v í a circulación sanguínea, siendo reconocida por receptores especí f icos. La cél u las endócrina transductora transforma l a se- ñal de entrada en una seña1 de sa l ida también hormonal que se 1 ibera a l a c i rculación.

- Transducción neuroendócrina : (Fig . 1) el mensaje neural es descodi f i cado al l l ega r a una cé lu la endócrina donde se recodif ica en un mensaje hormo-

nal que s e 1 ibera a l espacio ext race lu lar .

- Transducción endocrinoneural : ( f i c . 2 ) es precisamente e l proceso inver- so a l an te r io r , hay cambios en l a l iberación del neurotransmisor, como

consecuencia de una acción hormonal.

- Transducción endócrino-endócrina : ( fig. 3) consti tuye l a c lás ica transduc- ción estudiada por l a endocrinología donde l a interacción s e produce en t re l a s d i s t i n t a s glándulas endócrinas. Así como ejemplo pert inente a es ta te sis, l a información contenida en l a t i r o t ro f i na es conducida por l a sangre a l a glándula t i ro ides donde.se descodl f icayrecodi f ica como hormona t i , ro i - dea .

La modulación comprende aran número de efectos de l a s d i s t i n tas hormonas o neurotransmisores en el Sistema Nervioso o en e l propio sistema endó-

cr ino. Estos efectos, s i n generar l a acción primaria, pueden a fec ta r l a ex- c i tab i l i dad y e l tenor de l a respuesta en l a s d i s t i n tas vías neurosecreto- r i a s , exist iendo bastante información de a l teración en l a act ividad neural por acción hormonal (25) (26) (27). La idea centra l sobre l a que se desarro

l l a r á es ta tes is : es e l estudio de l a acción modulatoria neural sobre l a a c t i vidad funcional del e j e hipóf iso-t i roideo. Las Fig. (4-7) muestran l a s d is - t i n t a s formas de modulación conocidas en el sistema neuroendócrino; como ve-

remos nuestros resultados se encuadran principalmente en l a modulación neurg hormonal ( f i a . 6)

Figura No 4: MODULACION INTERNEURONAL

te rmina l neurona

moduladora

neurotransmisor

El -modulador de origen neural (neuromodulador) interacciona con recepto-

res pre y/o postsinápticos; modificando la 1 i beración del neurotransmisor y10

la respuesta de la célula efectora al propio neurotransmisor.

Figura No 5 : MODULACION HUMORAL

neurona aferente

E l modulador de origen humoral ( circulación sanguínea, secreciones de células gl ia les , e t c ) interacciona con receptores pre y/o postsinápticos; modificando l a l iberación del neurotransmisor y/o l a respuesta de l a célula

efectora al propio neurotransmisor.

Figura No 6: MODULACION NEURO HORMONAL

E l modul ador de origen neural (neuromodulador) interacciona con receptores postsinápticos en l a célu la efectora endócrina, modificando l a l i be ra - ción hormonal inducida por l a correpondiente hormona t ró f i ca .

Este t ipo de modulación estudiaremos en nuestra Tesis.

Figura No 7: MODULACION HETERO HORMONAL.

E l modulador de origen humoral (H2 ) interacciona con receptores en l a

cé1 ula efectora endócrina; modificando l a 1 i beración hormonal de dicha cél u- l a (O) inducida por l a correspondiente hormona t ró f i ca (H1).

2- SISTEMA SIMPATICO CERVICAL

2.1- SISTEMA NERVIOSO AUTONOMO

El sistema nervioso autónomo se puede de f i n i r como aquél cuya f ib ras nerviosas motoras eferentes proporcionan inervación a l músculo 1 i so , l a s vís- ceras, l o s vasos sanguíneos y a l a s . glándulas endócrinas. Un anál i s i s anató-

mico de l a vía nerviosa eferente indica que se t r a t a de una cadena bineuronal . La primera neurona o preganglionar se encuentra local izada en núcleos especx f icos del ' cerebro o en l a columna intermedio l a te ra l de l a médula espinal ,

, mientras que l a segunda o postganglionar se a lo ja en ganglios fuera de l a s es - t ruc turas nerviosas cent ra les . La dist inc ión en t re sistema nervioso simpáti - co y parasimpático depende de 1 a 1 oca1 i zación; organización y % neuvotransmisg res de l a s vías carac te r ís t i cas de cada uno de e l l os (28).

Así, para el sistema simpático l as neuronas pregangl ionares se encuen-

t ran ubicadas en los niveles torácico y lumbar a l t o de l a columna intermedio l a t e r a l d e l a médula espinal , de a l l í que también s e l o denomine sistema tÓ-

racolumbar, y envía sus axones a ganglios de ubicación para y prevertebral . El

neurotransmisor ca rac te r ís t i co de l a neurona simpática es norepinefrina

( N E ) . Por su parte, l a s neuronas pregangl ionares del sistema parasimpático s e alo jan en c i e r t os núcleos de los pares craneales y en l a médula espinal a l a a l tu ra de l a región sacra, por l o que se l a denomina sistema cráneo-sacro.

Los gangl ios parasimpáticos s e encuentran alejados de l a col umna vertebral e

incluidos en l a cápsula de l os órganos efectores, siendo el neurotransmisor ca rac te r ís t i co de l a neurona postganglionar l a ace t i l co l ina .

La act iv idad autonómica es controlada o regulada por .var ias est ructuras que s e s i túan a d i s t i n tos niveles, en e l sistema nervioso cent ra l . Este con -

t r o l s e i n i c i a en l o s hemisferios cerebrales donde c i e r t a s partes de l a cor tez& cereb,ral , especialmente l a corteza f ronta l , algunos gangl ios basa1 es , l a amígdala y sistema límbico regulan l a función au$onómica (29) enviando proyecciones nerviosas a regiones ubicadas más abajo, particularmente a l hipotá- lamo y centros del t a l l o cerebral . El hipotálamo es el centro integrador fun-

damental de l a act iv idad autonómica,desde el que parten vías descendentes mul - t i s i náp t i cas ,11 egando a grupos celu lares del t a l l o cerebral y l a médula espi - nal , que dan origen a l a s conexiones preganglionares de l o s sistemas simpá-

t ico y parasimpático. Tal como s e destacó tiempo a t r á s (30) (31) (32), e l sis,: ?ma nervioso

autónomo es importante en e l control y modulación del medio in terno, contribu - yendo a mantener l a homeostasis del organismo.

2.2- EL GANGLIO CERVICAL SUPERIOR (GCS) : ANATOMIA

E l ganglio cervical super ior (GCS) es e l primer ganglio de l a cadena s i% pát ica paravertebral. El t e r r i t o r i o comprendido en su área de inervación es

amplio, abarcando est ructuras del cue l lo , cara e i n te r i o r del cráneo (33). De

e s t e modo est ructuras relacionadas d i rec ta o indirectamente con el sistema en - dócrino como: l a glándula pineal , a r t e r i a s p ia les e int racerebrales , e l plexo

coroi deo, e l i r i s , 1 os cuerpos carotídeos, 1 as glándulas sa l i va1 es , 1 a t i roi - des y l a parat i ro ides, reciben información adrenérgica provista por axones que s e proyectan desde el GCS (Fia. 8).

Debido a su ubicación, tamaño re la t i vo y f ác i l acceso, ha s ido amplia-

mente u t i l i zado para e l estudio de fenómenos e1ectrof is io lógicos y bioquími- cos de l a neurotransrilisión (34) considerándoselo, desde tiempo a t r á s , como "un cerebro en miniatura" (35) .

En l a ra ta e l GCS, con un peso d e 1 ma. , es tá formado por- unos 40.000

cuerpos neurona1 es postoangl ionares y 400 cél u1 as SIF ( "srnall , in tensely f l uorescent") de t i po doparninérgico (36). Todas sus cél u1 as derivan embrioló-

gicamente de l a cresta neural (37). Anatómicamente es posible del imi tar l a s cé lu las postgana1 ionares en dos grupos bastante def inidos por su ubicación y

vías par t icu lares de proyección axonal . Por un 1 ado tenemos los cuerpos neu-

ra l es alojados en l a porción caudal del panolio, cuyos axones s e proyectan,

principalmente a t ravés del nervio carot ideo externo (NCE), vía nerviosa que nace en l a porción media ros t ra l de l a es t ruc tura ganglionar. Existen tam-

bién cuerpos neuronales asentados en l a porción ros t ra l , cuyos axones eferen- t e s v ia jan, vía del nervio caroti'deo .'-¡titerno (MCI) . del GCS (38) (39) ( F i g . 9). El número de neuronas proyectándose por cada una de es tas vías

nerviosas es s im i la r ; s e ha descr ipto (40) que aproximadamente unos 250 cuer i

pos ganglionares alojados en l a porción ros t ra l del GCS y cuyos axones se proyectan por e l NCI son responsables de l a inervación pineal . Esta descrip-

ción anatómica serv i rá , como veremos, en l a discusión de. control para algunos experimentos.

Aparte de los dos ~ r a n d e s nervios NCE. y NC1,existen en el GCS dos efe-

rencias menores. Un 15% de l as neuronas ubicadas caudalmente envían sus axo-

Figura N o 8: PROYECCIONES D E L GCS.

Glándula pineal '

Vasos pineales Plexo caroideo Parénquima cerebral

Glándula t iroides

Fibras adrenérgicas provenientes del GCS proveen inervación simpática a l a s est ruc turas representadas en el esquema y a o t ras (gl . sa l ival es , membra - na n i c t i t an te , hipotálamo medio basa1 , e tc ) no i lus t radas.

Para mayores de ta l les ver c i t a (33).

Figura No 9: ESQUEMA DEL GCS DE LA RATA

Aferencias y eferencias del GCS:

Tronco cervical común (TCC); nervio carotídeo externo ( N C E ) ; nervio carotfdeo interno (NCI) ; nervio pterigóideo-palatino ( N P ) .

MCI

nes por una pequeña vía descendente que corre parale la a l tronco cerv ical co-

mún (TCC), puente de conexión en t re e l GCS y el Gano1 i o cerv ical medio (GCH) . Hasta e l presente s e ignora e l dest ino f ina1 de es ta v ía , también iden t i f i ca -

da en e l gato (41) (42). La o t ra de l a s eferencias menores es tá const i tu ida

por e1 pequeño nervio pter ipóideo pa la t ino, que nace en l a porción ros t ra l del ~ a n g 1 io, cerca del NCI .

Histológicamente s e han descr ipto en e1 gangl i o simpático cuatro t i pos ce lu la res (43) (44) (45) que contribuyen, en d i ferente forma, a los requeri- m i entos metaból i cos del mismo (46) :

a ) Vainas conectivas que representan a l 30% del peso seco. b ) Cél u1 as pangl ionares , principalmente adrenéraicas, con d i s t i n t a s pobl acio-

nes de,pépti dos caexi;s ti endo.en 1 a s terminal es (47). c ) Células g l i a l es .

d) Células cromafines o SIF dopaminérgicas . Las SIF s e encuentran a su vez subdivididas en dos poblaciones. SIF 1

son cé lu las a is ladas sobre l a s que hacen s inaps is axones amielínicos y que a

su vez conectan, por exuansiones membranales, con o t ras cé lu las membranales

(48) (49) . La SIF 11 s e agrupan densamente a l rededor de l os capi 1 ares fenes- t rados, l o que l e s permite e s t a r en estrecho contacto con l a c i rculación san_

guinea y l a s sustancias por e1 l a t ransportadas. (Fi g. 10). Existen compl icadas interacciones ent re 1 as d i s t i n t a s cél u las , desechán-

dose a s í l a antioua idea del oanglio só lo como una estación de relevo para 1 os impulsos nerviosos provenientes de f i b ras prenanql ionares, Tanto neuro-

transmisores (50) (51) como var ias hormonas (50-56), pueden a fec ta r l a función ganpl ionar nrovocando efectos inhi bi t o r i os o exci t a to r i os sobre 1 a neurotrans -

. . m i si ón.

2.3.- FISIOLOGIA DEL GCS: NEURONA NORADRENERGICA

En l a integración y/o modulación de l a transmisión nerviosa ganolio- nar están involucrados t r e s sistemas; por o t ra par te , debido a l a s complejas

in ter re lac iones en t re los d i s t i n tos t ipos ce lu la res , s e considera e l ganglio cerv ical super ior como un centro neuroendócrino per i fé r i co (57).

E1 primero de estos sistemas abarca los mecanismos in t ras inápt icos media - dos por receptores pre y post sinápt icos, donde l a s neuronas col inéry icas pre-

ganglionares provenientes l a r a i t de l a médula penetran en e l gan-

Figura No 10: DISTINTOS TIPOS CELULARES CONTENIDOS EN EL GCS.

'OS

Dis t in tas sustancias l levadas hasta el gangl i o por l a c i rculación sangul

nea ejercen sus efectos sobre l a s d i ferentes poblaciones ce lu la res , a l terando su funcionamiento.

gl i o, haciendo s i napsi S con 1 as neuronas pos taanal i onares adrenérai cas . Es-

t as últimas proyectan sus axones por l a s d i s t i n tas eferencias del qanglio, suministrando inervación simpática a los te j idos efectores. E l segundo meca-

nismo comprende l a s relaciones in te rs in ip t i cas donde part ic ipan l a s cé lu las

SIF. Por último, tenemos el mecanismo que involucra e1 e fecto modulatorio

e jerc ido por sustancias hormonales que, pudiendo e s t a r presentes en el gan- ~ l i o o aportadas por l a sangre a t ravés de los capi lares fenestrados, modi- f ican 1 a transmisión neural actuando sobre mecani smos pre y post s ináp t i cos .

En es ta t e s i s nos limitaremos a t r a t a r los aspectos eferentes del pr i -

mer mecanismo y en par t icu lar los eventos postsinápticosque acompañan a l a destrucción de l a neurona ganglionar. La ablación del ganglio (GCSx)provoca una s e r i e de al teraciones funcionales en las est ruc turas comprendidas en su área de inf luencia (57).

En una primera instancia nos referiremos brevemente a l a s etapas bio- químicas involucradas en l a neurotransmisión de l a s f ib ras postganfll ionares.

Las enzimas responsables de l a b ios ín tes is de NE son s in te t izadas en e l cuer-

po de l a neurona nanglionar simpática y transportadas a l o largo del axón ha-

c i a los botones terminales d i s ta les , por un proceso conocido como transporte

axoplásmi co (58). Durante e l t ransporte los mi crotúbul os actuarán como v ías ,

permitiendo l a minración y distr ibucjón de los d is t in tos componentes celulares . El t ransporte axoplásmico es bloqueado (59) por drogas como l a col c h i c l

na o l a v inblast ina, que in te r f ie ren en l a integridad funcional de l os rnicrotú-

bulos. Particularmente, e l a lca lo ide colchicina s e une irreversiblemente a l a tubul ina (proteína const i tuyente de l os microtÚbu1os), evitando su pol ime- r ización (60) (61).

E l aminoácido precursor de l a NE es l a t i r os ina , captada desde el to-

r rente sanguíneo Dor. los terminales catecolaminérgicos y en e l primer paso de \

l a v í a b ios in té t i ca , es hidroxilada por l a t i ros ina hidroxi lasa transformándo - l a en dih idroxi feni l alanina (DOPA). La enzima requiere para su act ivación 02 y Fe++, además del cofactor tetrahidropter id ina (62) y resu l ta s e r e l paso 1 i m i tan te en 1 a s í n t e s i s de catecolaminas (63), su je to a re t roa l imentaci Ó n ne- gat iva e jerc ida por e l producto f i n a l , ME y algunos de sus metabol i t os . En

un segundo paso l a WPA es descarboxilada por l a enzima descarboxilasa de ami - noácidos aromáticos L , que requiere como cofactor Fosfato de Pir idoxal , for-

mándose l a Dopamina que es captada en los gránulos o vesículas de almacena- miento de unos 50 nm de diámetro. Cada terminal contiene ev+re 500 y 2000

de es tas vesículas, donde l a Dopamina e s converti da en NE por acción de 1 a Do-

pamina j3 hidroxi lasa, enzima que requiere ácido ascórbico y Cu++ como cofac- to res (Fig. 11). Tras su s í n t e s i s l a NE se mantiene unida y almacenada en ve s ícu las donde forma un complejo estab le con el ATP y una proteína especí f ica ,

l a cromo~ranina. Cuando un impulso nervioso se difunde por e l axón, arribando finalmente

a l terminal, provoca l a 1 i beración de l as aminas almacenadas. La despolariza - ción del terminal produce un incremento en l a permeabilidad a l os iones, par- t icularmente e l ca++, cuyo aumento in t race lu la r es el responsable de l a i n i - ciación de l os acontecimientos conducentes a 1 a 1 i beración de l a s catecolami-

nas hacia l a brecha s inápt ica (64-66). La 1 i beración de l as catecolaminas, desde los terminales,es un proceso exoci tót ico bloqueable por agentes antimi - tót icos, l o que indica l a part ic ipación de los microtúbulos (67). Además del

mecanismo de s í n t e s i s , o t ro aspecto importante l o const i tuye l a recapta - ción neuronal. Este es un proceso de t ransporte act ivo hacia el i n t e r i o r ce-

1 u la r de l a NE 1 iberada al 1 íquido extracel u lar , que real izan los terminales presinápticos (69)(70). La recaptación puede s e r bloqueada por fármacos sele- t i vos , como l a cocaína (71) o l os ant idepresivos t r i c i c l i c o s .

Finalmente los procesos de inact ivación de l a NE pueden darse por dos d a s : a ) La degradación enzimática mediante l a desaminacih oxidat iva por l a monoa -

minooxidasa (NAO) (72) (73).

b) Metif ación de NE por l a catecol -o-meti 1 t ransferasa (COMT) (74) (Fig. 11).

La primera vía degradativa ocu r reen las mitocandrias. La COMT s e encuentra en l a fracción c i toplasmática soluble no necesariamente asociada a l os nervios

noradrenérgicos.

Las catecol aminas provocan una aran variedad de respuestas f i s io lóg icas .

y metabólicas sobre los diversos te j idos efec+ores, acción mediada por recep-

tores principalmente post-sinápticos, La determinacion de l os d i s t i n tos receptores (75), surgió de estudios farmacológicos donde s e observaban 1 os efec -

t o s potenciadores en l a respuesta producidos por l a s d i ferentes catecol ami nas ensayadas.

Se def in ió como receptor& aquél sobre e l cual l a potencia de l a respues -

t a y l a af in idad venfa determinada por e l s iau iente orden decreciente: NE ) E 3 ISO. Para l o s receptores (t> l a potencia de l o s efectos resul taba i n - versa 150)) E ) NE. El empleo de distintas drogas agonistas y antagonistas de acción se lec t i va sobre l os adrenorreceptores, pos ib i l i t ó una nueva swbcla-

FIGURA N o 11: BIOSINTESIS Y METABOLISMO DE LA NE. - - -- -- -

- !

BIoSINTE-SIS DE NOREPlNEFRlNA

AROMATICO - H H TI ROS1 NA H H L-AMINOACI

HI DROXILASA DECARBOXILASA @ iiii;O0H (piridoxal

HO fosfatO del

L-TI ROS1 NA DOPA

DOPAMlNA f3-OXIDASA O'? 7

+ H0-@-i-a-~~2 ascorbato 1 HO

DOPAMlNA . .-

L- NOREPINEFRINA

METABOLISMO DE NOREPINEFRINA

OH H OH HO@ b - b - ~ ~ . MAO

HO HO

AC. 3.4 DI HlDROXlMANDELlCO

MAO - C H ~ O J - ~ J - ~ - H \

NORMETANEFRINA \, HO AC. 3-METOXI-A-HIDROXIMANDELICO

\

'\

s i f icac ión de los mismos (76-78). Los' receptores d se encuentran pr incipal-

mente d is t r ibu idos en l a musculatura l i s a y median efectosexc i ta tor ios . Los

receptores 6(2 se l os describió inicialmente como presinápticos que mediaban

respuestas inh ib i to r ias , pero también se los ha encontrado postsinápticamen-

t e en varios te j idos ( 79 ) . Existe también una subclasi f icación de receptores

p en: P 1 y P 2 (80) (81).

2.4- DEGENERACION ANTEROGRADA O WALLERIANA

La sección de u n nervio provoca fenómenos react ivos en l a neurona a

ambos lados del s i t i o lesionado o zona de trauma, Las a l terac iones produci-

das en e l segmento d i s ta l del axón y sus envolturas, fueron descr iptas en

1875 por A . Waller (82), de a l l í que en su honor se denomine a l fenómeno como

degeneración wal ler iana. El sesmento d i s t a l , t r a s un lapso de pocas horas du

rante l a s que su exci tabi l idad es ta aumentada, pierde sus propiedades f i s i o l q

g icas y comienza a re t raerse. La degeneración se i n i c i a en e s t e momento aun-

que, sin embargo, e l proceso decenerativo completo t ranscurre en un lapso de

1-2 meses. Durante ese tiempo e l axón y sus vainas miel Tnicas se fragmentan

y son fagoci tadas por macrófanos mesenquimáticos o cél ulas g1 i a l e s . Datos ob -

tenidos de experimentos en membrana .n ic t i tante , glándulas sa l ival es , múscu-

los periorbi t a l e s (83-86) y más reciéntemente en t i r o i des , (87) indican que

8 horas-después de l a qangliectomía del GCS comienza a reg is t rarse,en esas

estructuras,una caída en e l contenido de NE, haciéndose mínimo t ranscurr idas

18 horas de l a operación (Fig. 12). Esta disminución proaresiva del conteni-

do de N E , s e acompaña de una hiperact ividad adrenérgica posts inápt ica; pues

durante l a degeneración s e produce l a descarga supraliminal de l os neurotrans -

misores contenidos en l a s varicosidades s inápt icas. La NE l iberada supralimi - nalmente actúa sobre los receptores postsinápticos de l a s cé lu las e fectoras,

siendo capaz de imi tar l a act ivación normal del nervio (84).

De e s t e modo e l fenómeno de deneneración Walleriana, en su etapa i n i c i a l ,

s e convierte en un modelo.adecuado para in ten ta r d i luc idar cual e s e l s i gn i f i - cado f i s io lóg ico regulator io de l a inervación simpática sobre l o s d i s t i n tos

órganos bajo su in f l uencia.

En es ta Tesis u t i l izaremos l a degeneración wal le r iana - para estud iar de

qué modo inf luye l a inervación simpática sobre el e j e h ipóf iso- t i ro ideo en d i s - t i n t a s s i tuaciones experimentales.

Figura No 12: ACTIVIDAD POSTSINAPTICA DURANTE LAS FASES INICIALES DE LA DEGE-

NERACION MALLERIANA E-N LA NEURONA SIE1PATICA.

Tras l a les ión (sección de un axon o de un cuerpo neural ) se observa una caída en l a act iv idad neuronal y ninouna variación en e l contenido i n t ra t i su - l a r de catecolaminas ( l ) , s i tuación que s e prolonga por unas 8 hs. Luego hay un incremento de l a act iv idad neurona1 que se acompaña de una caída en e1 con -

tenido de catecolaminas i n t ra t i su la res (2) , precisamente e s t e e s el período donde s e produce l a descaroa supral iminal de neurotransmisores.

Por último en t re l a s 18-24 hs. postcirugía ( 3 ) , l a act ividad neural ha cesado y el contenido de catecolaminas desciende a sus valores mínimos; l a

degeneración se ha completado y e l fenómeno es ahora i r revers ib le . Estos tiempos son var iables, dependiendo del te j ido ; en c ie r tos casos l a act ividad de degeneración puede extenderse por 36-48 hs.

3.1- CONCEPTO DE EJE: BREVE RESEKA HISTORICA

Los p r i ~ e r o s ind ic ios acerca del control h ipo f i s ia r io sobre l a plándula

t i r o i des surgen en e l s i g l o pasado de l a s observaciones real izadas durante l a autopsia de cre t inos (88), individuos en los que s e describe un aumento con- s iderabl e del volumen hi pofi sa r i o ; simi l a res observaciones (89) t ienen 1 ugar

sobre l a h i pó f i s i s de conejos previamente t iroidectomizados. Pero son

principalmente los t raba jos de Smith en t re 1916-1922 (90) (91), l o s que s ien- t an l a s bases del concepto de e j e h ipóf iso- t i ro ideo a l demostrar que l a hipo- f isectomía en l os renacuajos, provocaba a t ro f i a t i ro idea e inhibición de l a metamorfosis. La inyección de extractos h ipof isar ios no só lo era capaz de rg v e r t i r l a a t r o f i a , s ino que incluso inducía h iper t ro f ia t i r o i dea ,

En 1923 Dott experimentando con perros, su?one l a ex is tenc ia de una re- lac ión en t re l a s t i r o i des y l a h ipó f i s i s . Hacia 1930 se establece que una sustancia h ipof isar ia denominada " t i r o t r ó f i ca " estimula l a t i r o i des (92) y a-

ños desnués s e sost iene aue l a s hormonas t i ro ideas ejercen un mecanismo de re-

troal imentación negativa sobre dicha sustancfa, inhibiendo su secreción (93) (94). Una ampliación de1 concepto de e j e hasta entonces sest~n. i t lo , surge en 1935 con l a postulación de l a h ipótesis neurovascular (95), incorporando a l h i potál amo como un centro neurosecretor. E l descubrimiento de los fac tores 1 1 beradores e inhibidores de l a secreción h ipo f i sa r ia , real izado en l os ú1 timos

20 años,ha permitido comprender varios aspectos de l a regulación del e j e h ips tal amo-hipófiso-ti roideo (96) (97).

3.2- EJE HIPOFISO-TIROIDEO

La secreción y trofismo t i ro ideo son controlados por l a TSH, hormona sin-

te t i zada por l a s cé lu las t i r o t r o fas (98) que s e local izan predominantemente en l a región anteromedial de l a adenohipóf isis (99).

La TSH es una gl icoproteína de 28.000 daltons de peso molecular, c o n s t i t u ~ -

da por dos subunidades (100) 4 y p , cada una por s í misma carente de ac t i v i - dad biológica (101) (102). Es l a subunidad F (110 aminoácidos, 15.600 PM) l a que caracter iza a l a TSH, confir iéndole especi f ic idad biológica e inrnunológica; mientras l a subunidado( resu l ta estructuralmente s imi lar a l a s respect ivas ca-

denas d constituyentes de las gonadotrofinas (103); La simil i tud de las sub-

unidades permite real izar experimentos de hi bridación entre cadenas pvoteicas

pertenecientes a d is t in tas hormonas (104), demostrando que l a actividad especí - f i ca para cualquiera de e l l as está determinada por l a subunidad P correipon-

diente. La TSH estimula diferentes actividades t i roideas regulando prakticornente

todos los metabol i tos producidos por l a glándula. Este resulta un ejemplo

t íp ico de 1 a transducción endócri no-endócri na reseñado anteriormente (Fi g 3 ) . Así la TSH estimula e l metabol ismo del yodo aumentando l a permeabi 1 idad de las

membranas en l as células fo? iculares (105), aumenta la organi ficación intrace-

1 ular del yodo (106), induce l a formación de pseudopodos seguida de ingestión y proteól i s i s del coloide (107), etc. La interacción de l a TSH con sus recep-

tores fol iculares estimula la acción de l a adenilatociclasa, de es te modo, e1 AMPc ser ía el mediador de casi todos sus efectos (108). A modo de ~unclusión

, podemos afirmar que la acción de la TSH t iene por objeto aumentar l a s ín tes is

y secreción de T3 y T4 (109) (11Q), as í como también mantener el trofismo ce lg l a r en l a glándula t i ro ides.

Las hormonas t i roideas, que son ami noácidos yodados, provocan una di smi nu- ción en la secreción de TSH ejerciendo de este modo, un control inhibitorio

predominantemente a nivel dela.adenohipófisis, estableciéndose un balance entre ambas secreciones hormonales. Pequeños aumentos en l a circulación de hormonas

t i roideas reducen los niveles de TSH,y una disminución en los niveles séricos

de T4, incl uso por su inducción con agentes farmacológicos ant i t i roideos, pro-

voca una eorrespondiente elevación en la concentraci0n sérica de TSH (111-115). En l a rata, l a acción de las hormonas t i roideas inyectadas en dosis farmc

cológicas agudas, se evidencia por l a disminución de l a secreción de TSH sin

afectar su síntes is . Por el contrario, la administracidn continuada provoca una disminución en la s ín tes is de TSH (116-120).

Los efectos inhibitorios para la TSH son mediados por receptores con gran afinidad para T3 (10 veces superior que para T4) presentes en los nGcleos de l as células adenohipofisarias (121) (122). Se sabe que una parte sustancial

de l a T3 circulante (cuya concentración sér ica es 50 veces menor a la correspondiente de T4), no proviene de la propia secreción glandular sino de l a des- . halogenación que t iene lugar en los tejidos periféricos. La T3 t iene una ac t i - vidad 8 veces superior a l a T4,10 que ha llevado a sostener que l a primera es

l a verdadera hormona, mientras la T4 sólo constituye una prohormona. Pero l a

proporción de conversión de T4 en T3 varía en los d i s t i n tos te j idos ; para l a

h ipó f i s i s l a conversión es muy a f t a (123), explicándose de es ta manera cómo l a

regulación de TSH es posible con l a administración de T4 y no de T3. Las hormonas t i ro ideas podrían e je rcer inhibición en l a secreción de TSH

también a nivel hipotalámicq aunque es te aspecto regulator io aún no es tá d i lu -

cidado. a l no e x i s t i r evidencias c laras a favor de u n efecto central . Cier-

tos experimentos sugieren es te contro l , pues implantes de T4 en e1 hipotálamo

de animales normales y con t ransplante de su h ipóf is is bajo l a cápsula renal ,

provocan una disminución marcada en 1 a concentración aér i ca . de hormonas t i ro i - deas. (124-126).

Otras sustancias hormonales presentes en l a c i rculación, pueden a fec ta r

l a secreción hipof isar ia de TSH. Tal e l caso de l a s hormonas cort icoides, es-

teroides producidos por l a glándula adrenal , con múlt iples efectos descrip-

tos sobre el e j e hipotálamo-hipófiso-tiroideo (127). La administración farma-

cológica de cort icoides inhiben tanto l a secreción basa1 como l a estimulada

por TRH de l a TSH h ipof isar ia (128-133). En l a s ra tas l a inyección de dexame-

tasona puede incrementar o inh ib i r l a secreción de TSH, efectos dependientes

de l a dosis administrada y el tiempo t ranscurr ido (134)(135). Hoy s e sost iene

que tanto e l hipotálamo como l a h ipóf is is contienen poblaciones de receptores

para glucocort icoides (136)(137) con l o cual cabría l a posibi l idad de una regu-

lación he'tero hormonal de l a secreción de TSH. Las hormonas sexuales por su

parte ejercen acciones reconocibles sobre el mismo e je . Las a l t a s concentra-

ciones de TSH normales en l as ra tas macho (138-141), pueden restablecerse en

l os animales castrados con l a administración de testosterona; mientras l a ova-

rectomía no a fecta los niveles basales n i estimulados por TRH de l a TSH en l as

hembras .(142). Por o t ra parte 1 a administración de estrógenos en l a s hembras,

puede provocar aumento, disminución o efectos bi fásicos en l a secreción de

TSH (143-145). Los estudios hasta ahora efectuados confirman un rol modulato-

r i o de 1a.testosterona sobre l a TSH;de manera d i ferente los efectos de los an-

drógenos en l os seres humanos inhiben l a secreción de t i ro t ro f ina (146). Sin embargo es tas modul aciones (cor t icostero ides, es tero ides, esteroides

sexuales) deben considerarse como de t ipo hetero hormonal, ya que l a señal p r i

maria e s t á dada por l a concentración de hormonas t i ro ideas. (Fig. 7 ) .

3.3 - EL CONTROL HIPOTALAMICO DE LA HIPOFISIS.

El hi potál amo como órgano neuroendócri no que control a di versos aspectos

de l a función h ipo f i s ia r ia , comienza a adqui r i r s igni f icado desde l a postula-

ción de l a h ipótesis ~neurovascular (94) (95). Esta idea se basa en l a pecu-

1 iar idad anatómica c i rcu la to r ia que comunica l a región basa1 del hipotálamo

con l a h ipóf is is constituyendo l a c i rculación porta1,de manera que l a sangre que

l lega hasta l a p i t u i t a r i a proviene de l os plexos capi lares de l a eminencia mg dia ; les iones del t a l l o h ipof isar io provocan disminución en l a secreción hormg

nal , pero no a l te ran los mecanismos de retroalimentación. Esto hizo suponer

l a existencia de c ie r tos factores hipotal ámicos que, vert idos en l a c i rculación

portal , controlaban l a d i s t i n t a s secreciones hipofi sa r ias .

Fue precisamente el t r ipépt ido (147) (148) TRH el primero de dichos f a c t g

res a.islados y s in te t izados (149-151) ; ejerce una acción est imulator ia sobre

l a secreción de TSH por l as célu las t i r o t ro fas . Experimentos recientes con

ant isueros anti-TRH avalan su función est imulator ia, ya que su empleo provoca

una marcada disminución en l a secreción de TSH (149-156). El TRH es 1 iberado

a l a c i rculación portahipof isar ia por célu las neurosecretorias ubicadas en

una región hipotal ámi ca par t i cu la r denominada área t i ro t ró f ica (157-161). A pesar de encontrarse en muy a l t a s concentraciones en el hipotálamo,ha s ido i -

denti f icado también en o t ras áreas del sistema nervioso como l a glándula pineal

(162), l a re t ina (163) y l a médula espina1 (164); l a d ist r ibución f i logenét ica

del t r ipép t ido , ya sea como neurohormona o neurotransmi sor , es bastante di f u n - dida en el reino animal encontrándoselo hasta en hidrozoos (165) y precediendo

a l a propia aparición del e j e hipóf iso-t i roideo.

Las cé lu las t i r o t r ó f i c a s h ipof isar ias contienen receptores de a l t a a f i n i -

dad para TRH (166-174), pero los mecanismos por los cuales inducen l a secreción

de TSH son todavía inc ier tos, postulándose var ias posi b i l idades (175-177). Las

evidencias i n i c i a l es indicaban que l a l iberación de TRH era activada por el s i s - tema noradrenérgico cent ra l . Así l a inyección NE o sus agonistas en el LCR,

incrementa l a 'secreción de TSH (178) (179) mientras que los antagonistas adre-

noceptoces la inhiben (180) (182), ejerciéndose estos efectos sobre el TRH y

no como acción di rec ta sobre 1 os t i rot rofos . Recientemente, s i n embargo (183),

s e ha demostrado que l a act ivación de los o(l adrenoceptores tienen una i n -

f l uencia inhibi t o r i a en l a secreción de TSH; mientras l a estimulación a( 2

provoca incrementos en l a secreción de l a hormona. Los receptores& 2 son estimulados con más fac i l idad por l a inyección in t ravent r icu lar de los agonistas.

La importancia de estos hallazgos radica en que los receptores d.2 mediarían una influencia tónica del sistema nervioso central sobre la secreción de TSH.

La serotonina es un modulador inhibitorio del TRH, pues su inyección in-

traventricular provoca la disminución del tripéptido en el hipotál amo,y de la

TSH tanto intrahipofisaria (184) como sérica (185). La acción de la serotonL

na se revierte con bloqueantes espec,íficos (186), recuperándose los niveles ba - sales de las hormonas. Los opioides (187) inhiben la secreción de TRH; en

cuanto al GABA inhibe la secreción de TSH posiblemente vía TRH y su antagonis ta bicuculina revierte tal efecto (188), aunque por sí solo es incapaz de

modificar los niveles basales de TSH. Efectos estimulatorios sobre la TSH

presenta la histamina cuando es inyectada por vía intravenosa (189), así tam- bién como sobre la incubación de tejidos hipofisarios (190),y estimula al

TRH (191) en incubaciones hipotal ámicas. Varias sustancias presentes en el hipotálamo ejercen funciones inhibito -

rias de la secreción de TSH hipofisaria, interactuando en forma antagónica con el TRH. Así la dopamina secretada directamente a los capilares portales por las terminaciones nerviosas provenientes del sistema tuberoinfundi bu1 ar dopa- .

minérgico (192), reduce la respuesta del tirotrofo al TRH (193) (220), dismi - nuyendo al mismo tiempo la TSH sérica (201). Sin embarcjo la hormona hipofiso - tropa inhi bidora más importante resulta ser el tetradecapéptido somatastatina. Su aplicación tanto "in vitro" (202-204) como "in vivo" (235-208) inhibe la

secreción de TSH; su rol inhibitorio quedó evidenciado con ia aplicación de

suero antisomatostatina que induce una elevación de la secreción de TSH,tanto basa1 como TRH-estimulada (209-212). La gastrina y la colescistoquinina, pée

tidos descriptos primitivamente en el sistema digestivo, pero encontrados en al tas concentraciones en el hipotál amo (213-215), son reguladores f i si01 Ógicos

inhibitorios de la secreción de TSH en las ratas (216-218).

A manera de conclusión podemos afirmar.que la secreción de TSH se encuen - tra regulada por dos hormonas hipofisotropas: el TRH y la somatastatina, con

funciones opuestas,y varias de las sustancias descriptas modul an la actividad

de éstas últimas (Fig. 13). Finalmente, existe un control de retroalimentación entre la hipófisis y

el hipotálamo,donde las propias hormonas inhi ben la secreción de sus factores liberadores (219). Esto es posible pues el flujo sanguíneo en el sistema por - ta hipofisario es bidireccional . La retroal imentación se denomina corta, com - parándola con el mecanismo de retroalimentación largo formado por el sistema

Figura N o 13: ESQUEMA DEL EJE HIPOTALAIIO-HIPOFISO-TIROIDEO.

m '\ AGUDO / FR10

SOMATOSTATINA TRH

En la representación esquemática se muestran como intervienen los dife-

rentes estímulos, cuyos efectos i n h i b i t o r i o s o estimulatorios t i e n e n acción sobre la función endócrina del eje.

hipóf isis-glándula per i fér ica.

Las evidencias del control de retroalimentación corto son ind i rec tas y

provienen principalmente de experimentos real izados en animales tiroildectomi-

zados, con o s i n administración endógena de TSH, donde se observa una marcada

disminución del TRH hipof isar io (220) (221).

3.4- EFECTOS DE LA TEMPERATURA SOBRE LA FUNCION TIROIDEA.

La temperatura const i tuye uno de l os estímulos f is io lóg icos importantes,

con acción d i rec ta sobre l a función t i ro idea . Ya en 1922 (222) se observó que

l a inyección de suero extraído de conejos expuestos a bajas temperaturas provg

caba un incremento en l a tasa metabólica de animales tiroidectomizados. La

exposición a l f r í o induce un aumento de l a secreción de TSH en l a ra ta (223-

225), pero dicho incremento requiere de l a integridad del t a l l o h ipof isar io

(226-228). La regulación de l a respuesta t i ro idea al f r í o s e encuentra loca-

l izada a nivel hi potalámico y depende de l a 1 i beración de TRH. La inmunización

contra TRH bloquea l a l iberación de TSM inducida por e l f r í o (229-231) provocan-

do hipotermia en l a s ra tas (232). En el mismo sentido actúan los bloqueantes

noradrenér j i cos (233-234) que modulan 1 a secreción de TRH.

Hoy se sost iene u n esquema f is io lóg ico que incluye a l as neuronas termosen-

s i b l e s del hipotálamo an te r io r , como etapa i n i c i a l de l a vía (235). Ante el

estímulo de1 f r í o , és tas cé1 ulas incrementarían su act ividad e léc t r i ca provocan

do un aumento en l a secreción de NE (236) que inducir ía, a t ravés de receptores

& 2 l a 1 i beración de TRH el que, por su parte, actuaría sobre el e j e h ipóf iso-

t i ro ideo. Estas ideas parecen e s t a r avaladas por experimentos donde se apl ican

d i s t i n t a s temperaturas en áreas local izadas del hipotálamo. El enfriamiento

(237) provoca una act ivación t i ro idea , mientras que e l calentamiento de l a s

mismas áreas hipotalámicas, en animales aún sometidos a bajas temperaturas ex-

ternas (238), i n h i ben ta l act iv idad. El rol del TRH como agente hipertérmi,.

co (239-240), fue demostrado en animales en hibernación (241), sobre l os cua-

les , l a inyección del t r ipépt ido en áreas cerebrales, provoca u n marcado amen_

t o de l a temperatura corporal.

Pese a toda l a información re ferente a l a manera como l a función t i ro idea

se act iva ante e l s t r e s s de l a s bajas temperaturas, poco es l o que s e sabe re-

ferente a l papel desempeñado por la inervación simpática cerv ica l . Uno de

nuestros objet ivos consiste precisamente en di 1 ucidar e l papel de ta l inerva-

ción en e l mecanismo de adaptación a l a s bajas temperaturas.

4- VINCULO ENTRE EL G , C, ,S, Y EL EJE HIPOFISOTIROIDEO

CATECOLAMINAS Y GLANDULA TIROIDES

Histológicamente l a glándula t i ro ides s e encuentra const i tu ida por dos

t ipos ce lu lares que corresponden a sistemas endócrinos d i ferentes: l as "cél u- -

l a s fo1 icu lares" que en forma de monocapa, rodean a l a matr iz coloidal y s in-

te t i zan hormonas tiroideas, por una parte,y por o t ra l as "cél ulas parafol icu la -

res" o "célu las C M , ubicadas en t re los fo l ículos,que son responsables de l a

secreción de cal c i tonina. Diferentes t i pos de terminal es nerviosas i nervan e l

complejo t i ro ideo-parat i ro ideo en t re l as que sólo nos referiremos y descri bi-

remos l a s adrenérgicas, pues a e l l a s es tá d i r ig ida nuestra t e s i s .

Las técnicas hi stoquímicas de f luorescencia (242-245) han revelado que

l a s terminales simpáticas penetran a t ravés del parénquima t i ro ideo, inervan-a

, do tanto l os vasos como l os fol ículos. Las f ib ras adrenérgicas son postgan-

g l ionares y desaparecen luego de l a remocióndel GCS (246).Por medio de autorra-

d iograf ías s e ha demostrado una estrecha conexión ent re l a s terminales adre-

nérgicas y l a s propias cé lu las fo l icu lares (247-248). La densidad de l a s t e r - minales d i f i e r e según l a s especies (249) y parece disminuir en función de l a

edad de los individuos (250). Las observaciones morfológicas hacen suponer

que l a inervación adrenérgica part ic ipa de algún modo en l a regulación de l a

función t i ro idea . Pruebas farmacol ógicas apoyan ta l suposición, aunque con

reservas.

Los efectos de l a NE sobre l a secreción hormonal t i ro idea han sido obje-

t o de var ios estudios, s i n embargo no ex is te consenso acerca de l a inf luencia

de e s t e neurotransmi sor sobre 1 a función glandular. Inyecciones agudas de NE

y ,E en perros (251) y ovejas (252) afectan el f l u j o sanguíneo t i ro ideo s in

cambios aparentes en l a secreción hormonal. En conejos l a infusión conttnua

de E produce una vasoconstricción acompañada de un descenso en l a captación -

del yodo (253); observaciones con el mismo modelo de administración en ra tas

arro jaron resul tados simil ares (254). Efectos tanto i n h i bi t o r i os como estimu-

l a to r i os en seres humanos se han reaistrado por una inyección aguda de E ,

mientras que su administración continua l leva a una depresión en l a captación

de yodo (255).

Los experimentos con explantos glandulares o en cultivos cel ularec, indi -

can que l a NE puede est imular (256-263), inh ib i r (254) (264-265), o bien no

tener efecto sobre d i s t i n tos aspectos de l a función t i ro idea (266) (267).

Una explicación para es ta diversidad de resultados y efectos aparente-

mente contradictor ios de l a misma sustancia, puede a t r i bu i r se a l a s metodolo-

g ías empleadas, as í como a l a s especies animales. En l a mayoría de los expe-

rimentos publicados, l o que s e evaluó fue l a respuesta farmacológica. Cada - a

nimal u t i l i zado como modelo experimental, posee d i ferentes grados de inerva-

ción simpática l a cual varía con l a edad y es de esperar que reaccione d i f e ren

cialmente a nivel es supramáximos de catecolami nas (249) (250).

En oposición a l a larga y detal lada s e r i e de experimentos farmacolÓgicos

efectuados empleando catecolaminas " in v i t ro " o " in vivo", poca atención s e

ha prestado a l a posibi l idad de una manipulación quirúrgica de l a vl'a neurona1

aferente a l a glándula. Precisamente es to const i tuye un buen enfoque f i s i o l c

gico del tema, pues es posible modificar l a información nerviosa que l lega a

l a glándula en d i s t i n tas s i tuaciones y estud iar como s e comporta l a función

t i ro idea .

Trabajos real izados en el laborator io (87) (268) (269) donde se elaboró

es ta Tesis, inauguran una 1 ínea de invest igación consistente en anal i za r los

efectos de l a ablación de a m b o s ' ~ ~ ~ , GCSx bi1,Jy estudiar cómo l a degeneración

neural y l a poster ior denervación, influyen sobre l a función t i ro idea. Los

primeros experimentos revelaron l a existencia de un incremento de l a respues-

t a bociógena a l a administración de TSH exógena o MMI en ra tas GCSx bil. estu-

diadas algunas semanas después (268). Dicho aumento pondera1 del peso t i r o i - deo s e acompañaba de u n incremento de l a incorporación de [3~]. Uridina a l

RNA t i ro ideo, en lóbulos de animales GCSx bi l . . La efect iva denervación glan-

dular queda demostrada con l a caída marcada de l a s catecolaminas i n t ra - t i r o i -

deas y e1 incremento en e l número de adrenoceptores cPC (268) (87). En una s e

gunda s e r i e de experimentos, donde s e apl icó e l modelo de GCSx un i la tera l , l o que permitía mantener e l lóbulo ínervado con t ra la te ra l , como cont ro l , que-

dó demostrada l a mayor respuesta bocióaena inducida por MMI y TSH exógenos en *

e l lóbulo desnervado (270). Dicho lóbulo desarrol la a l mism tiempo u n c r e c l

miento espontáneo que s e ver i f ica 4 semanas después de l a gangliectomía u n i l a

t e r a l .

La desnervación provoca cambios funcionales notables,registrándose una

disminución en e l contenido t i ro ideo de hormonas, en el metabolismo del 1 y

de las catecol ami nas. E l aná l i s i s de l os resultados sugiere l a h ipótes is de qlfe l a inervación

simpática modula en forma inh ib i to r ia l a respuesta t i ro idea a l a TSH ci rculan - t e (268). Parte de es ta Tesis somete a ver i f icación experimental t a l hipóte-

sis a p a r t i r de nuevas observaciones.

4.2- EFECTOS DE LA DEGENERACION WALLERIANA SOBRE EL EJE HIPOFISOTIROIDEO.

Los cambios ponderales y metaból icos t i ro ideos inducidos por l a GCSx bil,

crónica son a l parecer producto de una sens ib i l idad par t i cu la r de l a glándula

a los n iveles c i rcu lantes de TSH. Los niveles de dicha hormona 7 días después

de l a operación, no d i f ie ren de los basales obtenidos en l o s animales contro l .

Pero l a GCSx bil. (271) provoca también cambios crónicos a nivel hipotalámico;

s e reg i s t r a una disminución en l a captación de pq NE que s e acompaña por una

disminución del 40 a l 60% en e l contenido de catecolaminas de l a eminencia mg . dia y un incremento del 35% eñ e l número de receptores d adrenérgicos hipo-

lámicos, resultados que nos hablan de u n importante papel desempeñado por

l a inervación simpática per i fé r i ca sobre e l hipotálamo.

En el estudio de l os efectos modulatorios de l a inervación sobre el e j e

h ipóf iso- t i ro ideo s e u t i l izó e l fenómeno de degeneración wal 1 er iana expl icado

anteriormente. La or ig inal idad del modelo experimental res ide en l a posi bi 1 i - dad de provocar un act ivación neural máxima durante l a descarga supraliminal

de neurotrcx_nsmisores, s i n manipulación del animal en e s t e momento. Estos me-

diadores actúan directamente sobre sus receptores postsinápt icos en ambos ex-

tremos del e j e endócrino.

Durante e l período de descarga: supraliminal calculado en t re l a s 8 y l b horas t r a s l a GCSx, s e observó una marcada depresión en l a captación de yodo

y en los n iveles sé r i cos de T4 y TSH (87) . La T4 sér i ca sesmantiene deprimi-

da durante e s t e período, siendo l a glándula re f rac ta r i a aún a l a inyección de

TSH exógena, l o que indica l a independencia de l os efectos depresivos en l a t i - ro ides, con respecto a l os cent ra les traducidos en una disminución de TSH.

De e s t e modo podemos proponer que l a inf luencia de l a inervación adrenérgica

cerv ical sobré el e j e endócrino s e e je rcer ía a dos niveles:

a ) Centralmente, afectando 1 a secreción de TSH durante 1 a degeneración wal 1 e-

r iana y provocando cambios pre y post s inápt icos intra-hipotalámicos cróni-

cos, t ranscurr idos varios díasde l a GCSx.

b) ~er i f é r i camen te , al terando l a sensib i l idad de l a t i ro ides a l a TSH circu- lan te , l o que inducir ía cambios ponderales y nietabólicos. Durante l a degg neración anterógrada se deprime l a secreción hormonal t i ro idea , efecto que

s e muestra independiente de l a TSH c i rcu lante .

Uno de l os temas de es te t rabajo de t e s i s cons is t ió en evaluar l a evo11 ción temporal de ambos mecani smos .

5- OBJETIVOS DE ESTA TESIS

La s e r i e de t rabajos const i tut ivos de l a presente Tesis tuvo como obje- . -

t i vo :

1) Analizar l a evolución a l o largo del tiempo de l a GCSx sobre l a secreción

de TSH y T4 en ra tas .

2 ) Examinar e l ritmo d ia r io de secreción hormonal y de catecolaminas intraglan - dulares , estudiando cuáles eran los efectos modul a tor ios e jerc idos por l a

vía neural simpática sobre éstos.

3 ) Ident i f icar y caracter izar e l t i po de receptor postsináptico invol ucrado

en los cambios secretor ios de TSH y T4, durante l a degeneración anterógrada

aguda.

4 ) Evaluar l a importancia de l a proyección simpática cerv ical en l a respuesta

adaptat iva a l f r í o en l as ra tas .

5 ) Analizar los efectos de l a desnervación simpática crónica en el proceso de

h iper t ro f ia compensadora t i ro idea 1 uego de l a hemisección glandular. Evaluar

los cambios pondera1 es y hormonal es, caracterizando además 1 a natural ezahi per

t r ó f i ca y/o hiperplásica del fenómeno compensatorio.

6 ) Establecer s i e l fenómeno compensatorio es dependiente de 1 a presencia de l a

h ipóf is is y q u é inf luencia e jerce l a i.nervaciÓn simpática sobre su desa-

r ro l l o par t icu lar .

7) Iden t i f i ca r y caracter izar l a vía aferente del sistema simpático cervical

responsable de l a inervación de l a glándula t i ro ides .

M A T E R I A L E S Y M E T O D O S

1- ANIMALES Y TEJIDOS

Se u t i l i za ron ra tas (Ratus norvergicus) adu l tas de cepas blistar, con pesos

en t re 200-270 y-. manteniéndolas en régimen de iluminación d i a r i a de 14 horas

( luz de 0600-2000 hs), en ambiente cl imatizado (22 5 2 CO), alimentadas con a l - i

mento balanceado "Purina" y agua "ad 1 ibitum". En los experimentos de adapta-

ción a l f r í o , dos horas después de la c i rug ía , l os animales fueron t rans fe r i -

dos a una cámara f r í a (4 f 1 C O ) , donde contaban con comida y l íquido. Un g r l po de animales fue -?readaptado durante un mes a l a s condiciones de l a cámara

f r í a antes de l a operación, y una vez rea l izada, devueltos a l l í .

Para los experimentos de captación " in v i t ro " , l as glándulas t i r o i des y pi -

neales s e resecaron inmediatamente después del sac r i f i c i o , manteniéndolas en

h ie lo hasta 30 minutos como tiempo máxiino previos a su u t i l i zac ión .

, 2- PROCEDIMIENTOS QUIRURGICOS

Las operaciones mencionadas a continuación se real izaron bajo anestes ia con

é t e r e t í l i c o . Para desinfección previa y poster ior a l a c i rugía se u t i l i z ó a l - cohol 70C0, empl eandose agrafes (Ni t che l l 100) en l as suturas. Aquel l a s i n t e r -

venciones de microcirugía como Dc o NCEx s e l levaron a cabo bajo microscopio

estereoscópico . Wi.Sd y s e u t i 1 izó material de microcirugía Aesculap.

2.1- GANGL IECTOMIA CERVICAL SUPERIOR (GCSX)

La GCSx u operación simulada s e rea l i zó a d is t in tos tiempos previos a l sa-

c r i f i c i o o a l a punción para muestre0 sanguíneo, según l a técnica (272) que s e

expl i ca :

Se expusieron l a s glándulas sa l i va les mediante una inc is ión ventral en e l

cue l lo y s e l a s separa lateralmente con e l objeto de exponer 1 os músculos s u p k

hiodeos. Se divuisiona dichos músculos hasta una profundidad cercana a l a a r t g

r i a carót ida pr imit iva. El GCS s e encuentra alojado a l a a l t u ra de l a bifurca-

ción carot ídea en t re l a s ramas interna y l a externa; una vez ident i f icado s e lo

reseca cuidadosamente con e l propósito de no provocar hemorragias. En l os ani - males con operación simulada s e procedió de l a misma manera s610 hasta l a visua - lizaci6n del ganglio s i n ex t i rpa r lo . Para l a GCSx un i la tera l só lo s e reseca un

gangl i o y s e inspecciona visualmente e l cont ra la tera l . El c r i t e r i o seguido

paraconfirman l a GCSx consiste en l a detección de l a s s igu ientes secuencias te!

poral es de fenómenos :

a ) Ptosis palpebral hasta l a s 10 horas de transcurr ida l a operación.

b) retración palpebral y exoftalmo: moderado ent re l as 10 y 24 horas posterio-

res a l a c i rug ía ,

c ) Ptosis i r revers ib le después de l a s 24 horas.

Estas son l a s fases de l a reacción de degeneración walleriana temprana a

nivel de l os músculos per iorb i tar ios (ver Fig. 12). .

2.2- DESCENTRALIZACION GANGLIONAR (Dc)

Se procedió a exponer l o s GCS como se describe a r r iba identi f icándose el

tronco cervical común (vía que une al GCS con el GCM). La Dc s e produce al s e 2

cionar quirúrgicamente dicho tronco, pues de ese modo s e interrumpen l as seña-

l es aferen tes al gangl i o, que l legan p o r 1 as f ib ras pregangl i onares de l a médula

espina1 y de o t ras conexiones con el sistema simpático. Se eliminaron de ese

modo 1 as posibles aferencias preoangl ionares provenientes de metámeras in fe r io - res y/o superiores. Los anima-les con Dc exhiben una ptosis palpebral d e f i n i t i - va desde el momento que se recuperan de l a anestes ia , no observándose reacción

de degeneración .

2.3- SECCION DEL NERVIO CAROTIDEO EXTERNO (NCEX)

El ganglio se expuso según l a técnica ya descr ipta y bajo microscopio e s t g

reoscópico. Visualizado e l ganglio se exploró alrededor de su parte media has

t a i den t i f i ca r el NCE que corre paralelo a l a a r t e r i a carót ida externa. Se l o

seccionó cuidadosamente, evitando dañar tanto l a a r t e r i a como a l res to del gan - gl io .

2.4- TIROIDECTOMIA

La ablación un i la tera l o b i la te ra l de los . lóbulos t i ro ideos se l levó a cabo

practicando una incis ión ventral a l a a l tu ra del cuel lo. Se separaron hacia ambos lados l a s glándulas sa l ivares exponiéndose a s í el músculo esternohioideo.

Se pract icó una divulsión en l a parte media del músculo hasta l l egar a l a trá- quea y l a s glándulas t i r o i des . Antes de resecar cada lóbulo, r seccionó el

istmo t i ro ideo y luego, con una pinza curva, se tomó el lóbulo por su parte

dorso api ca l . Suavemente se t i r ó del mismo practicando, con el b i s tu r í , pe-

queños cor tes bordeando l a tráquea pero cuidando de no les ionar la ; el 1Ó-

bulo s e desprende acompañado por algunas f ib ras musculares. Antes de rese-

ca r e l lóbulo debe iden t i f i ca rse e l nervio recurrente para e v i t a r que resul-

t e dañado durante l a manipulación.

2.5- HIPOFISECTOMIA

Esta intervención s e pract ica de acuerdo a l a técnica t ransaur icu lar (273)

con modificaciones.

En los animales anestesiados se introduce una aguja, con el bisel hacia a- r r iba ,a trave's del canal óseo aur icu lar perforando el tímpano y luego el hueso

de l a cápsula préot ica. El b isel queda a s í alojado en e l i n te r i o r de l a cáp-

sula p i t u i t a r i a y se l o g i ra 180: con una jer inga se succiona hasta ext raer l a

h ipó f i s i s , reconociéndosela por su tonalidad rosada. En ensayos previos, du-

rante e l perfeccionamiento de l a técnica, se ver i f i có que l a longitud expuesta

de l a aguja no debía exceder los 11 mm. colocándose a esa distancia u n tope

p lás t ico . El bisel de l a aguja debe s e r l o suficientemente duro y a f i lado pa-

ra perforar los huesos craneales de una ra ta adul ta. Las más adecuadas resul-

tan s e r aquél las cuyo diámetro interno se encuentra ent re 1 y 1,5 mm.; durante

l a extracción deben succionarse aproximadamente 2 ml. de sangre.

' Los animales hipofisectomizados fueron t ratados con Cloranfenicol (40 mg/

Kg. ), colocados en jaulas de a 2 ó 3 individuos contando con 2 bote1 l a s de a-

gua, una de e l l a s conteniendo solución sa l ina al 0,9%. La ver i f icación de l a

operación s e hace t r a s l a autopsia y el índice de sobrevida es del 50%.

Para l a operación simulada s e procede de igual forma, sólo que e l b isel de

l a aguja quedará ubicado hacia abajo para ev i t a r les iones del sistema porta

h ipof isar io durante su introducción hasta l a cámara pi tu i t a r i a , no practicán -

dose succión al guna.

2.6- PUNCION YUGULAR.

Esta técnica se empleó para l a obtención repet i t i va de muestras sanguíneas. Las animales se anestesiaron con é t e r y luego se l e s pract icó una inc is ión en

l a p ie l , jus to por encima de l a vena yugular, Una vez re t ra ída l a piel y ubica -

da l a yugular, con una aguja hipodérmica se l a punciona cuidadosamente para e x

t r a e r - 1 ml. de s a n g r e q u e s e l l e v ó a l a heladera durante 2 horas. Posteriormen-

t e cada muestra se centr i fugó por 20 minutos a 5,000 g. y el suero obtenido se

congeló a -20C0hasta l a medición por RIA.

3- DETERMI NACION DE HORMONAS

3.1- DETER!lINACION DE LOS NIVELES SERICOS DE TSH

Las muestras de sangre se obtuvieron en e l momento mismo del sac r i f i c i o o

por punción yugular a d i s t i n tos tiempos, para l a confección de los ritmos. Las

muestras de suero se guardaron en heladera a -20C0 hasta e l momento de1 ensayo.

Los niveles de concentración sér ica de TSH se determinaron por e l método

de radioinmunoanálisis ( R I A ) . En e s t e ensayo s e empleó un doble anticuerpo y

, react ivos provistos por e l Rat P i tu i ta ry Distr ibut ion Program (NIADDK). Los r e - sultados se expresaron en f l de TSH-RPl/ml. de suero (1 mg. THS-RP1 = 0,20 IU)

siendo l a sensib i l idad del método 11pU/ml. . La variación in t ra e interensayo

fue de 9% y 18% respectivamente.

3.2- DETERMINACION DE LOS NIVELES SERICOS DE HORFIONA TIROIDEA (T4)

La concentración sér ica de T4 s e determinó por RIA según l a metodología

descr ipta por Chopra (274). Los react ivos se obtuvieron de Radioassay System

Laboratory, Carl son, Cal i f . Estados Unidos y l os resul tados se expresaron como

p g Tq/dl. de suero, siendo l a sensib i l idad del método de 0,4)ig Tq/ dl . suero.

La variación i n t ra e i n t e r ensayo fue del 6% y 15% respectivamente.

CAPTACION NEURONAL DE'

Los experimentos de captación del [3~] NE se real izaron " in v i t ro " siguien - do l a técnica de Kopiu y col (58). Previamente a l a u t i l i zac ión del compuesto

radiact ivo, s e comprobó su pureza por cromatografía de adsorción en columna de

alúmina y por intercambio iónico en columna Dowex-x4. Más del 95% de l a radiac - t iv idad cromatog'rafió con l a amina standard pura.

Trozos con un volumen aproximado de 1 m3 de t i r o i des o glafidulas pineales

enteras, se incubaron individualmente durante 30 minutos a 37 COen 0,6 ml. de

.Buffer Krebs Ringer bicarbonato, pH 7,4 que contenía además 0,01% de ácido as-

córbico y 0,2 mM de EDTA. La incubación se rea l izó en una estu fa oscura y bajo

atmósfera húmeda compuesta por 95% O2 y 5% COZ. El compuesto rad iac t i vo mar - cador [3~] NE (act iv idad especí f ica 11,8 Ci/m m01 ; New England Nuclear, Boston,

MA), s e agregó en concentraciones de 0,Syhen cada medio individual de cu l t ivo

a l iniciarse l a incubación. Pajavalorar l a captación inespecí f ica, algunos

te j idos fueron preincubados durante 5 minutos con 1O)M de desmetil Imipramina

(DMI) antes del agregado del compuesto t r i t i ado .

Esta droga, en l as concentraciones empleadas, actúa como un inhibidor de

l a captación neurona1 de NE. Finalizada l a incubación l o s medios fueron ra-pi-

damente aspirados y los te j idos lavados 3 veces con 1 m1 por vez de buffer f r í o .

Luego los te j idos fueron digeridos con hidróxido dehiamina y l a . radiact ividad

s e determinó por espectrometría de centel l eo 1 íqui do, u t i 1 izándose to l ueno fós - foro como solución centel ladora. Los resultados se expresan como Femtomoles de

[ 3~ ] - NE acurnulada/mg de te j i do en 30 minutos de incubación.

Composición del medio de incubación:

124 mM NaC7; 5 mM KC1; 1,25 mM MgS04;. 1,45 mM CaC12; 25,3 mM KP04H2;

8 mM glucosa. Se l e agregó además 0,01% de ácido ascórbico y 0,2 mM de EDTA.

La solución de KRB era preparada f resca e l día del experimento y antes de su u t i l i zac ión s e l a gaseaba durante 20 minutos con l a mezcla de carbógeno.

5- DETERMI NACION DE CATECOLAMI NAS

El contenido de N E , E y DA en e1 te j ido t i ro ideo y pineal s e determinó por

un método radioenzimático modificado (275) del procedimiento or ig inal descrip-

t o por Da Prada y ~Ürcher (276).

Estos ensayos se basan en l a transformación de l as catecolaminas a sus de-

r i vados O-meti lados por medio de l a COMT,enzima parcialmente puri f icada del h í - gado de ra ta , que t rans f ie re e l grupo meti lo radiact ivo de l a SAM a l núcleo ca-

tecól i co.

Tras e l s a c r i f i c i o del animal los te j idos fueron rápidamente resecados pe-

sados y homogeneizados en PCA 0,3 N. Los homogenatos s e centrifugaron en f r í o y e l sobrenadante se congeló guardándoselo a -20Cohasta e l ensayo. Cada a1-Í~- t a del sobrenadante (100)41) s e incubó a 37"'durante 60 minutos con 100 pl de una mezcla que contiene: buf fer Tris-HCI-EGTA, PH 9,3; C12Mg, benzilhydroxilami

na (inhibidor de l a OOPA decarboxilasa) ; pargi l ina ( inhib idor ' o 1 a MAD) ;pH] SAN

y COMT ( 1 5 p 1 ) .

La incubación se det iene con 150 pl. de buffer borato 1M pH 8. Los der i -

vados O-metilados t r i t i ados : normetanefrina, metanefrina y rnetoxitiramina se

extra jeron con una mezcla de tolueno: alcohol isoamíl ico (3:2 v/v) . Se reex-

t ra jeron con H C 1 0 , l N y t r a s l a centrifugación se descartó l a fase orgánica,

mientras que l a acuosa se sembró en placas de s í l i c a gel con indicador f l uo rez

cente. Las placas se corr ieron en un sistema de solventes cloroformo: etanol :

e t i l amina(120:29:8 v/v). Tras su ident i f icación con 1 uz u1 t rav io le ta cada ban -

da fue raspada y sus residuos depositados en los correspondientes v ia les . La

[3H] metanefrina y L3q normetanefrina se oxidan con peryodato de sodio a I3H]- vaini l l inaycompuesto extraído con tolueno qmnifluor para su valoración en es-

pectrómetro de centel leo l íquido. La L3H] rnetoxitiramina se eluye con 0,5 N

deClH y se cuenta con una mezcla de Tritón x 100-tolueno-omnifluor.

Finalmente los resul tadosse~expresaron en picogramos de catecolaminas/rno.

de te j ido .

6- TECN 1 CAS H ISTOLOGI CAS

6.1- EMPLEO DE COLCHICINA.

Los animales, operados 72 horas antes, fueron inyectados con colchicina

(2,2 mg/Kg) usando como vehículo solución sal ina 0,9% por vía i nt raper i toneal

y sacr i f icados 3 horas después.

La colchicina (Sigma) es un alcalo ide ampliamente u t i l i zado como instrumen - t o experimental por sus propiedades antirni tót icas. Esta droga t iene l a capa-

cidad de asociarse irreversiblemente a l a proteína microtubul a r in ter f i r iendo

en l a función de los husos mitót icos y causando a s í , l a despolimerización y de - saparición de los microtúbulos. De e s t e modo l as cé lu las en div is ión son

afectadas deteniéndose e l proceso m i t ó t i coy generalmente en metafase, por fa1 - t a de formación de los husos (61).

6.2- FIJACION E INCLUSION EN PARAFINA (277)

a ) Los lóbulos t i roideos de los animal es sacr i f icados fueron inmediatamente re - secados y f i jados en l i qu ido de Bouin (mezcla picro-formol-acética) durante 24 hs.

b) Deshidratación: e l material es pasado por una s e r i e de alcoholes de grada-

ción crec iente , durante 20 minutos en cada uno, f inal izando con alcohol 100%

durante 30 minutos.

c ) Pasar a benzol o x i l o l , dos cambios, hasta que l a pieza quede t ransparente.

d ) Paraf inar l a pieza: s e procede a sumergir l a s piezas en parafina de 55C0de

punto de fusión, l a cual s e mantiene l íquida en una estu fa s in superar los

57C. Después de 2 horas s e renueva l a parafina hac ihdose un segundo baño

en parafina 1 impia de l a misma duración.

e ) Tal l a r e l taco, orientándolo y obtener los cor tes del grosor deseado (5pm) .

f ) Los cor tes seriados se recogen en agua ca l iente y se procede a montarlos so bre porta objetos previamente a l buminizados.

g) Llevar e l material a es tu fa de 37Co

6.3- COLORACION Y MONTAJE

a ) Desparafinización: el material a t e ñ i r se desparaf iniza pasando los cortes

por dos baños de x i lo l o benzol durante 10 minutos cada vez.

b) hidratación: Los cortes son sumergidos en una s e r i e de alcoholes con gra-

duación decreciente, f i na l izando en agua dest i lada.

c ) Coloración por hemalumbre ácido de Meyer ( laca albumínica de Meyer): Los

cor tes s e tiñeron con es ta sustancia durante 10 minutos; luego se lavaron

con agua (10L15 minutos) hasta que el preparado adquiera color v io le ta os-

curo.

d ) Coloración con eosina: Se apl ica. a cada cor te solución acuosa de eosina

1% durante 1 minuto, luego se di ferencia con alcohol 70,"proceso seguido bajo microscopio.

e ) Deshidratación: una vez coloreados los cor tes se9deshidratan con alcohol es

de gradación creciente.

f) Aclaración: procedimiento que t iene por objeto impregnar a l cor te con un di - sol vente del bálsamo de Canadá, usándose entonces carbolxi lol que además l e

conf iere un índice de refracción semejante al del v idr io.

g) Montaje: sobre e1 porta objeto con e1 cor te h isto lógico, se coloca una gota

de báfsamo del Canadá d isue l to en x i lo l y se cubre rápidamente con un cubre

objeto.

6.4- VALORACION DE LOS RESULTADOS

Se estudiaron los cor tes ser iados (5 a 7 pm) desechándose un número regu-

l a r de l o s mismos. De es ta manera se obtienen muestras representat ivas de to-

das l a s regiones t i ro ideas ; en cada muestra s e contó e l número de mitosis ob-

servadas eval uándose según los s igui entes índices :

no de metafases IndiCe mitót ico

1000 cél u1 as fo l i cul ares

número de mitosis : Los resultados s e expresan Indice f o l i cu la r =

100 fo l ícul os en porcentajes

7- ANALIS IS ESTADISTICO

Para los a n á l i s i s es tad ís t i cos en el caso de dos muestras se emplearon

los t e s t de Student poblacional y de muestras apareadas. Para comparaciones

múlt iples s e u t i l i zó anál i s i s de l a varianza (ANOVA) seguido por ' test de

Scheffé, Dunnet o Tukey según l a s f6rmulas recomendadas (278) .

1- EFECTOS DE LA GCSX BIL SOBRE EL EJE HIPOFISOTIROIDEO

1.1- VARIACION DE LA TSH SERICA EN ANIMALES GCSX ENTRE 1-28 DIAS POST CIRUGIA.

Los experimentos c i tados a continuación tuvieron por ob je to explorar algu-

nos aspectos del vínculo, de naturaleza modulatoria, en t re e l GCS y el e j e h i -

pof isot i ro ideo. Determinamos los cambios observados en dicho e j e en función

de1 tiempo t ranscurr ido luego de GCSx b i l . . Tal como se ha detal lado en l a s

secciones precedentes de l a Introducción, t raba jos previos demuestran una mar-

cada depresión de l a TSH coincidentes con e l período de descarga supraliminal

de neurotransmisores, durante l a deaeneración anterógrada luego de l a GCSx.

Ese período e s t á comprendido en t re l a s 8 y 24 horas t r as l a c i rugía y l a a c t i -

vidad de degeneración (degeneración wal ler iana) , no d i f i e r e de l a detectada en

o t ros Órganos como: glándulas submaxilar y parót ida (83), membrana n i c t i t an te

(84) y músculos re t rac to res del párpado.

La Fig. 14 muestra l a inhibición en l a secreción TSH observada en t re 1 y

4 días luego de l a c i rug ía , momento a p a r t i r del cual l a concentración de TSH

sér i ca evoluciona en forma s im i la rpara ambos grupos experimentales. Este resul - tado indica que e l in terva lo de tiempo donde s e manifiestan los fenómenos endó -

cr inos, acciones posts inápt icas de l a degeneración neural. s e ext iende por un período de hasta 4 d ías luego de l a operación.

1.2- VARIACION DE LA T4 SERICA EN ANIMALES GCSx b i l . ENTRE 1 y 28 DIAS POST

CIRUGIA

Los niveles c i rcu lantes de T4 muestran también una marcada disminución'en-

t r e e l primero y cuarto día t r a s l a operación (Fig. 15). Sin embargo 2 sema-

nas después l o s animales GCSx b i l . presentan un incremento s ign i f i ca t i vo de T4

con respecto, tanto a sus contro les como a los n iveles previos dentro del mismo grupo. Este aumento no s e acompaña por una elevación correspondiente de

TSH; a p a r t i r de 15 d ías l a s concentraciones sér i cas de T4 son semejantes en

ambos grupos. Nuevamente s e observan que l o s fenómenos posts inápt icos, conse-

cuencia de l a degeneración wal ler iana, se extienden hasta 4 días postcirugía.

En e l día 28 s e observan l a s concentraciones más a l t a s de T4 para los 2 grupos

de animales ; desconociéndose l a razón de e s t e ha1 lazgo. Ouizás modificaciones

inadvert idas en l a d ie ta o ritmos de periodicidad de mayor extensión (2 a 4 s g

Figura No 14: CAMBIOS EN LA CONCENTRACION SERICA DE TSH DESPUES DE LA GCSx b i l .

Días post - c i r ug ía

- - - - - -

Dos grupos de 10 animales cada uno, fueron sometidos a GCSx b i l . u (Gx) opera-

c ión s imulada. A d i s t i n t o s i n t e r v a l o s de tiempo se obtuv ieron muestras de

sangre por punción yugu la r según se desc r i be en Mater ia les y Métodos. Cada t

. punto rep resen ta e l promedio - ES de e n t r e 8 y 10 determinaciones. Los a s t e -

r i s c o s ind ican d i f e r e n c i a s s i g n i f i c a t i v a s e n t r e GCSx y operac ión simulada.

*p (0,02 por test de Student .

Figura No 15: CAf-IBIOS EN LA CONCENTRACION SERICA DE Tq DESPUES DE GCSx b i 1 .

~ í a s post - c i r ug ía

I

5 -

Dos grupos de 10 animales cada uno fueron sometidos a GCSx b i l . ( G X ) ~ ODera-

c i ó n simulada; a d i s t i n t o s i n t e r v a l o s de tiempo por punción yugu lar se obtu-

v ie ron muestras sanguíneas, según se descr ibe en Mater ia les y Métodos. Cada

punto representa e l promedio + ES de e n t r e 8 y 10 determinaciones. Los aste-

r i s c o s i nd i can d i f e r e n c i a s s i g n i f i c a t i v a s e n t r e GCSx y operación simulada

*p < 0,02 por t e s t de Student.

C

o-a op: sim *--e Gx

O' 1 I I I

5 10 15 20 30

manas) en l a secreción o "clearance" metaból ico de T4, puedan exp l icar e s t e Y1 -

timo resul tado.

1.3- CAMBIOS PONDERALES EN ANIMALES GCSx bi 1 . A LOS 28 DIAS TRANSCURRIDA LA CIRUGIA.

A l f i n a l i z a r e l experimento resumido en 1.1 y 1.2., l os animales fueron sacr i f i cados, sus t i r o i des resecadas, pesadas y re fer idas a1 peso corporal

cuyos resul tados s e han volcado en l a Tabla 1. No hubo d i ferenc ias s ign i f i ca -

t i v a s en t re los grupos experimentales, n i ent re és tos y un grupo control de a-

nimales in tac tos sacr i f i cados a l mismo tiempo.

1.4- CAMBIOS DE LA TSH SERICA INDUCIDOS PORTIROIDECTOMIABILATERAL EN RATAS

GCSx bi l .

La disminución o ausencia en c i rculación de hormonas t i ro ideas , pone en marcha e l mecanismo de retroal imentación a nivel h ipof isar io que se traduce en un aumento de secreción de TSH. Por lo tanto , fue de i n te rés ana l izar l a s mo- d i f icaciones producidas por l a GCSx b i l . sobre l a TSH c i rcu lante , en ra tas ca-

r e n t e ~ de hormonas t i ro ideas . E1 experimento resumido en l a Fig. 16 s e diseñó para es tud iar l a inf luen -

tia de los terminales per i fé r icos sobre la secreción de TSH post Tiroidectomía quirúrgica. En l o s animales t i ropr ivos se produce e l aumento esperado de

TSH, que resu l ta en los GCSx b i l . signif icat ivamente menor (p(0,Ol t e s t de Student) en l a s primeras 24 horas t r a s l a c i rugía , durante e l período de l a d e

generación wal ler iana. A p a r t i r de l a 48 hs. un a n á l i s i s de l a varianza (ANOVA) f ac to r i a l , demostró que 1 as concentraciones s6r i cas de TSH son mayores en los GCSx b i l . que en los contro les únicamente de l a GCSx 48 - 360 h s . post- t i roidectomia.

i- V) 41 al

3 E S -r aJ S c n m g a rn L a J W n u > aJ .r L U - P

m Q L U U O 'r -r + " C m r -r > m s

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FIGURA No 16: EFECTOS DE LA GCSx SOBRE LOS NIVELES DE TSH SERICA EN ANIMA- LES TIROIDECTOMIZADOS BILATERALMENTE.

oL-/ I // I ' O 8 16 24 48 IZO ' - e60 168

HORAS POST-CIRUGIA

Los animales fueron operados simulta/neamente pract icándoseles GCSx bi l , u operación simulada y ambos grupos t i roidectomía t o t a l . En cada in terva lo de tiempo mostrado s e tomaron muestras de sangre por e l método de punción yugular. Cada punto representa el promedio f ES de 10 determinaciones. Los as te r i scos indican d i ferenc ias s ign i f i ca t i vas en t re GCSx y operación s i - mulada *p < 0,01 por t e s t de Student . Un ANOVA de datas apareadas revela d i ferenc ias en función del tiempo t ranscurr ido t r a s l a c i rugía que comien- zan a l a s 16 horas en l a s r a t a s t iroidectomizadas únicamente y a l a s 24 horas en l a s t iroidectomizadas y GCSx b i l , (p 0,05). Los valores de TSH en- t r e l a s 48-360 horas fueron mayores en l os animales GCSx que en aquel los con operación simulada, por ANOVA fac to r ia l (p < 0,05).

2- CAMBIOS EN E L E J E H IPOFISO TIROIDEO DURANTE L A DEGENERACION -

ANTEROGRADA DE LOS TERMINALES POST GCSx,

2.1- MODIFICACION DEL RITMO DIARIO DE TSH:

Es conocida l a existencia de un ritmo diar io de l a actividad secretoria del e je hipófiso-tiroideo (280-284). El propósito de esta ser ie de experimen-

tos fue anal izar 1 a influencia de la inervación simpática cervical sobre dicho

ritmo. Con ese f i n dos grupos de ratas fueron sometidas a GCSx bil . u opera- ción simulada. Se tomaron muestras de sangre a intervalos de 4 horas, por p u n ción yugular, en animales intervenidos quirÚrgi:amenti- 3 días antes, con el ob - jeto de cubrir el período de degeneración anterógrada. En la Fig. 1 7 se re-

presenta e l ritmo diar io de TSH circulante; los animales control (operación s i - mulada) tienen un máximo en l a concentración hormonal entre las 1100 y 1500 h s . La degeneración de los terminal es neurales post GCSx bi l . no sólo provoca una

disminución signi f icat iva en l a concentración de TSH sérica (p(0,Ol por t e s t de Student) sino también una alteración en su ritmo con un retraso de 3 horas en el pico máximo secretorio, con respecto a los controles.

2.2- MODIFICACION DEL RITMO DIARIO DE T4

La determinación de Tq sérica cada 4 horas, en l as mismas condiciones anter iores, se encuentra resumida en la Fig . 18. Nuestros resul tados demuestran

l a existencia en los animales controles (operación simulada) de 2 máximos se cretor ios de T4: uno matinal 3 horas después del correspondiente de TSH y otro nocturno, no precedido por TSH, apareciendo 3 horas después de inic iarse el período de oscuridad. La T4 t iene su secreción deprimida en los animales GCSx b i l . con respecto a los controles (p<0,01 por t e s t de Student), produciéndose

además un desplazamiento del máximo diurno hacia horas de la tarde y una desar parición del correspondiente máximo nocturno.

Nuestros resultados sugieren que, si bien l a secreción del e je hipófiso t iroideo t iene ritmos propios originados en l a conexión hipotálamo hipofisaria, 1 a inervación simpática cervical ejercería un importante papel en la expresión

y sincronización de los mismos.

FIGURA No 17: RITMO DIARIO DE TSH. ALTERACION POR GCSx. b i l .

0800 1200 1600 2000 2400 0400

Horas del día

Los animales fueron GCSx b i l . 3 días antes y el muestre0 sanguíneo se real izó, en los tiempos f i jados, por punción yugular según se describe en Ma ter ia les y Métodos. Cada punto representa un promedio ?: ES de 6-8 determi: naciones. Los asteriscos indican diferencias signi f icat ivas entre los GCSx b i l . Y sus controles con operación simulada empleando el t e s t de Student (*p ¿ 0,05 **p 4 0,Ol).

En término medio los niveles de TSH en los GCSx son significativamen- te menores que en los controles ( p <0,01 por t es t de Student). Obsérvese e l desplazamiento del máximo diurno en los GCSx b i l .

FIGURA No 18: RITMO DIARIO DE T4. ALTERACION POR GCSx b i l .

__ _ --

a.

0-0 op SIM @---e GCSX

Horas del día

Los animales fueron GCSx b i l . 3 días antes y el muestre0 sanguíneo se real izó, en los horarios f i jados, por punción yugular según se describe en Materiales y Métodos. Cada punto representa el promedio f ES de 6-8 determinaciones. Los aster iscos indican diferencias signif icativas entre los GCSx b i l . y sus controles con operación simulada,empleándose e l t e s t de Student (*p < 0,05 **p <0,01).

En término medio los niveles de T4 en los GCSx bil . son signi f icat ivamente menores que en los respectivos controles (p<0,01 por test de Studen t ) .

Obsérvese e l desplazamiento del máximo diurno y l a desaparición del má- ximo nocturno en los GCSx bi l .

2.3- RITMO DIARIO DE CATECOLAMINAS INTRATIROIDEAS.

Está bien comprobado que l a GCSx b i l . l leva a l a desaparición to ta l de

l a s catecolaminas t i ro ideas 24 horas después de l a operación. No hay,sin em-

bargo, ninguna descripción re ferente a l ritmo d ia r io en el contenido de cate-

colaminas en l a glándula t i ro ides . Nos propusimos entonces ve r i f i ca r su existencia midiendo el contenido de NE, E y .DA en animales, sacr i f icados cada 3

horas, durante un período completo de 24 horas. La Figura 29 muestra l a s variaciones d ia r i as en el contenido de NE i n t r a -

t i r o i dea , donde aparece un valor mínimo a l a s 1100 hs, 5 horas después de i n i -

c ia rse l a fase luminosa y un máximo a l a s 2300 hs, en plena fase de oscuridad.

Los datos se comprobaron por a n á l i s i s de l a varianza (ANOVA), según t e s t de Tukey, encontrándose d i ferenc ias s ign i f ica t ivas (p (: 0,05).

La E, ver Fig. 20, a l igual que NE exhibe un pico 'máximo d ia r io durante , l a noche, aunque en e s t e caso s e reg is t ra a l a 0200 hs, con un incremento en

el contenido a p a r t i r de l a 2300 hs (ANOVA, t e s t de Tukey, p< 0,05). Contrariamente,la DA, F i g . 21, no muestra ninguna forma de secreción rít-

mica, pues no s e observan di ferencias estadísticamente s ign i f i ca t i vas en su contenido in t ra t i ro ideo , en l os d. ist intos tiempos del experimento.

2.4- RESPUESTA DE TSH AL TRH EN RATAS DURANTE LA DEGENERACION ANTEROGRADA POST

GCSx 'bi 1 .

Este experimento fue real izado a f i n de determinar l a sensib i l idad hipofi - sa r i a a l TRH, durante e l período de l iberación supraliminar de neurotransmisores, como consecuencia de l a degeneración walleriana post CGSx b i l .

Dos grupos de ra tas : con GCSx b i l . u operación simulada efectuada 14 horas antes fueron inyectados, por vía intravenosa, con TRH obteniéndose una muestra sanguínea basa1 y o t ra 10 minutos después de l a inyección (ver Fig. 22). Los niveles basales fueron signif icat ivamente menores en l a s ra tas GCSx bi l .

(p 4 0,02 por t e s t de Student), pero l a respuesta hipof isar ia resu l tó s imi lar en ambos grupos sugeriendo que 1 os efectos pos ts inápt i ccs de l a degeneración

wal leriana se manifiestan pr inc i~a lmente n nivel h ip ta lámico.

FIGURA N o 19: RITMO DIARIO DE NE EN GLANDULA TIROIDES.

HORAS DEL DIA

Variaciones en el contenido intrat i roideo de NE a lo largo del día.

Los animales fueron sacrif icados en horarios establecidos, sus t i ro ides rá- pidamente resecadas y procesadas como se describe en Materiales y Métodos.

Cada punto representa e l promedio 2 ES de 10 determinaciones en cada inter- valo de tiempo. Los aster iscos indican diferencias signi f icat ivas median-

t e ANOVA empleándose el test de Tukey *p < 0,05. El contenido in t ra t i ro i -

deo de NE exhibe u n máximo a las 2300 hs. y un mínimo a l a s 1100 hs.

FIGURA N o 20: RITMO DIARIO DE E EN GLANDULA TIROIDES.

HORAS DEL DIA

Variaciones en e l contenido intrat i roideo de E a lo largo del día.

Los animales fueron sacrif icados en horarios establecidos, sus t i ro ides rá - pidamente resecadas y procesadas como se describe en Materiales y Métodos. Cada punto representa el promedio 2 ES de 10 determinaciones en cada i n -

tervalo de tiempo. Los asteriscos indican diferencias signi f icat ivas median -

t e ANOVA empleándose el t e s t de Tu key *p ( 0,05.

El contenido intrat i roideo de E se incrementa a par t i r de l as 2100 hs

y alcanza el valer máximo a las 2300 hs.

FIGURA No 21: RITMO DIARIO DE DA EN GLANDULA TIROIDES.

HORAS DEL DIA

. .

E l contenido intrat i roideo de DA no muestra variaciones signi f icat ivas a lo largo del día.

Los animales fueron sacrif icados en horarios establecidos, sus t i ro ides rápidamente resecadas y procesadas ta l como se describe en Materiales y Métg dos. Cada punto representa el valor promedio + ES de 10 determinaciones.

FIGURA N o 2 2 : RESPUESTA HIPOFISARIA AL TRH DURANTE LA DEGENERACION ANTEROGRADA

POST GCSx bi 1 .

O 10 1 min ' O I o $1

Los animales fueron sometidos al GCSx b i l . u operación simulada 14 horas antes de l a inyección intravenosa de TRH. E l nniestreo basa1 (previo a l a in yección) indica diferencias signi f icat ivas entre ambos grupos ( t e s t de

studentAp ( 0,02). Cada punto representa e l promedio + ES de 10 determinaciones. Obsérvese que 10 minutos después de l a inyección las diferencias in i - c i a l es desaparecen. e- - e GCSx bi 1 . 0-0 operación simulada .

2.5- RECEPTORES ADRENERGICOS INVOLUCRADOS EN LA INHIBICION DE TSH DURANTE LA DEGENERACION ANTEROGRADA,

Para i den t i f i ca r e l t i po de receptor adrenérgico involucrado en l a s res-

puestas inhi bi t o r i a s del e j e h ipóf iso t i ro ideo durante l a degeneración wal le -

r iana, se emplearon d i s t i n t a s drogas antagonistas. Como an tagon i s tadad reno

receptor s e u t i l i z ó fenoxibenzamina, mientras como antagonista adrenorre-

ceptor s e empleó propranolol. Estas drogas, individualmente o en combinación,

fueron #administradas por vía int raper i toneal 30 minutos antes del sac r i f i c i o ,

en animales que habían s ido operados 14 horas antes por GCSx b i l . u operación

simulada.

En l a Fig. 23 s e observan como e l antagonista o( , l a fenoxibenzamina, re-

v i e r t e l a inhibición (33% con respecto a los cont ro les) de l a secreción de TSH

producida por l a degeneración anterógrada, restableciéndose e l valor hormonal

a n iveles normales. El propranolo1,antagonista p . resu l ta inefect ivo para re-

v e r t i r - t a l inhibición y tampoco afecta,cuando s e administra conjuntamente con

l a fenoxibenzamina, e l e fec to de es ta Última ( p < 0,05 ANOVA, Test de Tukey).

Estos resul tados permiten postular que l a inhibición en l a secreción de

TSH durante l a degeneración wal ler iana de l os terminales simpáticos cervica-

les ,es tá mediada por u n receptor adrenérgico del t i po o( (posi blemente dL ) .

2.6- RECEPTORES ADRENERGICOS INVOLUCRADOS EN LA INHIBICION DE LA LIBERACION DE

Tq DURANTE L A DEGENERACION ANTEROGRADA. iL

En l a glándula t i r o i des , l a degeneración post GCSx b i l . provoca una pro-

nunciada depresión en l a secreción de Tq de aproximadamente 302.

E l antagonista o(, l a fenoxibenzamina, rev ie r te es ta inhibición cont rar ia - mente a l antagonista (3, e l propranolol, que l a potencia aún más; experimento

resumido en l a Fig. 24. El máximo de inhibición en l a l iberación hormonal ti-

roidea durante l a degeneración anterógrada aparece con e l empleo asociado de

ambos bloqueantes. Debe tenerse en cuenta, como s e puede ver en l a Fig. 23,

que l a apl icación conjunta de ambas drogas mantiene los n iveles de TSH en sus valores normal es en és tos animales.

Estos datos sugieren que en 1 a glándula t i r o i des , 10s r e c e p t ~ r e s o( adre- nérgicos juegan un rol inhi bi tor io,mientras que 1 os (3 adrenérgicos t ienen una

función estimulatoria débil . También es probable l a existencia de o t ro rnedia-

dor no adrenérgi co, que se 1 ibera durante 1 a degeneración waíl eriana , e jercien - do un efecto inhibi tor io potente.

FIGURA No 23: EFECTO DE LA GCS x b i l . SOBRE LA TSH SERICA. EMPLEO DE^ y ADRENOCEPTORES ANTAGONISTAS .

PBZ

PROPRANOLOL

(6.25mg/kg)

Los animales fueron GCSx b i l . 14 horas antes de su sacr i f ic io . La in-

yección de l as d is t in tas drogas (en 0 ,2 m1 . de solución sal ina a l 0,9% como

vehículo) se real izó 30 minutos antes de l a decapitación y obtención de l as

muestras sanguíneas para el RIA. Las barras representan el promedio ES

de 8 determinaciones. Los asteriscos indican diferencias signi f icat ivas me-

diante ANOVA, empleando el t e s t de Tukey *p (0,05. ~ G C S X bil . O opera-

ción simulada.

FIGURA No 24: EFECTO DE L A GCSx b i l . SOBRE L A T4 SERICA. EMPLEO DE & Y /3 ADRENOCEPTORES ANTAGONISTAS.

Los animales fueron GCSx b i l . ; 14 horas antes de su sac r i f i c i o . La i n -

yección de l a s d i s t i n t a s drogas (en 0,2 m1 . de sol ución sa l ina a l 0,9% como vehículo) s e real izó 3 0 minutos antes de l a decapitación y obtención de

l a s muestras sanguíneas para e1 R I A . Las barras representan el promedio 2 ES de 8 determinaciones. Los as te r i scos indican di ferencias s ign i f i ca t i vas

mediante ANOVA, empleando el t e s t de Tukey *p ( 0 ~ 0 5 . ~ G C S X bi l . U opg ración simulada.

EFECTOS DE GCSx BI L, ADAPTACION DE LAS RATAS A AMBIENTES

FRIOS :

Con e l objeto de ana l izar e l valor f i s io lóg ico de l a act iv idad de GCSx so bre e l e j e h ipóf iso- t i ro ideo; decidimos examinar l a adaptación a l f r í o de gru-

pos de r a t a s durante l a degeneración wal.leriana post GCSx b i l . . La exposición

aguda a dicho s t r e s s desencadena l a secreción de TSH en l os roedores y e l con-

s igu iente aumento de l a s hormonas t i ro ideas en e l plasma.

Un ambiente adecuado para los ensayos s e consiguió en una cámara f r í a

(temperatura de 4 f 1 ° C ) , donde l o s animales contaban con abundante comida y agua "ad l ibitum".

Durante 1 a degeneración anterógrada simpática , se produce 1 a muerte dentro

de l a s primeras 48 horas, de casi todos los animales sometidos a l f r í o p e s t 9) en comparación con los contro les de operación simulada, datos expuestos en l a

Tabla 11. En un segundo experimento s e procedió a preadaptar a los animales,

durante un mes,a l a s condiciones de l a cámara f r í a antes de . se r operados. Los

resul tados de l a tab la 111 exhiben igualmente l a mortalidad de los animales

GCSx b i l . , s imi lar a l a producida en e l experimento anter ior .

Estos datos parecen ind icar que e l funcionamiento normal del sistema sim-

pát ico cervical., resu l ta un requ is i to indispensable para l a adaptación de l a s

r a t a s a un ambiente f r í o r

- 0 0 s F r a

O V) -r g q w U l - c t - m O w E U w u .r L S W - v C , m m s i n

t - w w O l- 4 m V )

m c S V) -6- '3 O C P U t 3 , u u s w

m w V ) m - v L C , D , w V ) s m + m w u - r > S m U - r U w C,

L V ) m n m u

4- ESTUDIOS SOBRE LOS CAMBIOS TARDIOS TIROIDEOS POST GCSx UNIL,

En es ta sección s e estudiaron los cambios, tanto ponderales como bioquí-

micos t i roideos, cuando ya ha f ina l izado e l período de deoeneración anterógra-

da y s e ha completado l a desnervación. Se u t i l i z ó e l modelo experimental de

l a h iper t ro f ia compensadora inducida por ablación quirúrgica un i la tera l de un lóbulo t i ro ideo,para ana l izar l a inf luencia e jerc ida por l a inervación simpá-

t i c a , en una s i tuac ión con niveles de TSH c i rcu lantes elevados.

4.1- HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS.

La ablación un i la tera l o parcial de un órgano endócrino (o no endocrino),

induce e l fenómeno de h iper t ro f ia compensadora del te j i do remanente. Este f e

nómeno se anal izó en l a t i r o i des en e l experimento resumido de l a Fig. 25.

Tras l a hemitiroidectomía, e l lóbulo remanente aumenta de peso en forma 1 ineal

hasta e l 7mo d ía , para luego es tab i l i za r se hasta e l d ía 15 (tiempo máximo de

duración del experimento). Este incremento en e l peso de lóbulo 'hi pert rof i ado

fue de 452, con respecto a l peso promedio de lóbulos individuales tomados de

animales contro l . Es dec i r no s e observó, en nuestras condiciones experimenta - l e s , una compensación completa t r a s l a henisección t i ro idea .

4.2- HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS SOblETIDAS A GCSx un i l . DEL LOBULO

REMANENTE.

La Fig. 26 exhibe l os resul tados de una s e r i e de experimentos donde se

pract icó una GCSx un i l . i p s i l a t e r a l del lóbulo remanente, t r a s l a hemitiroidec - temía.

La destrucción de l a s f i b ras simpáticas responsables de l a inervación t i roidea , produce una ampl iación del fenómeno h i pert róf i co. En l o s 1 óbulos des-

nervados e l incremento de peso alcanza un 79% con respecto a l os contro les,

superando en casi un 50% a l peso de los lóbulos h iper t ró f icos en animales con

inervación in tac ta (p<0,01).

FIGURA N o ,25: HIPERTROFIA COE4PENSADORA EN RATAS TRAS HEMITIROIDECTOMIA.

CURVA DE TIEMPO.

D l A S TRANSCURRlOOS T R A S HEMlTlROlDECTOMlA

Los animales fueron hemitiroidectornizados, sacr i f icados a d i s t i n tos

tiempos y sus lóbulos t i ro ideos remanentes pesados (e l valor en peso es tá r e - fe r ido a 100 g de peso de r a t a ) . La barra rayada en l a zona media, represen

+ - t a e l promedio - ES de 10 lóbulos t i ro ideos extraídos de animales controles

+ con operación simulada. Cada punto representa el valor promedio - ES de un número var iable ' (va lor en t re los paréntesis) de muestras para cada caso.

La curva demuestra que e l peso re fer ido del lóbulo remanente se incre-

menta hasta alcanzar una meseta a los 7 días y se mantiene hasta el día 15,

tiempo máximo de duración del experimento. Los as te r i scos indican diferen-

cias signif icativas entre los controles y los hipertraficos empl eando el test de Student *p < 0,05.

FIGURA No 26: HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS SOMETIDAS A GCSx u n i l . IPSILA -

TERAL AL LOBULO REMANENTE TRAS HEMITIROIDECTOMIA. CURVA DE TIEM - PO.

Los animales fueron hemi tiroidectomizados y se pract icó GCSx unil . al lóbulo remanente. Tras e1 sac r i f i c i o , a d is t in tos tiempos, los lóbulos remanentes fueron pesados y refer idos a l peso corporal de cada animal.

t Cada barra representa e l promedio - ES de 7 determinaciones en e l caso

de hemitiroidectomia únicamente y un número variable (valor en t re l o s parente s i s ) para l o s hemi tiroidectomizados y GCSx u n i l .

La h iper t ro f ia ampliada se desarrol la a p a r t i r del 7Odía t r a s l a c i rugía . Los aster iscos indican di ferencias s ign i f i ca t i vas en t re l o s lóbulos hiper -

t ró f icos y aquél los con h iper t ro f ia ampliada por GCSx unil . , empleando e l t e s t

de Student *p < 0,05 **p < 0,Ol.

4.3- CAMBIOS HORMONALES DURANTE LA HIPERTROFIA CO!.IPENSADORA EN ANIbIALES GCSX

un i l . Y CON OPERACION SIMULADA.

Una pregunta que surge en e s t e punto del t raba jo e s si l o s cambios ponde ra l es observados durante l a h ipet ro f ia compensadora y l a h iper t ro f ia ampliada

por l a GCSx unil . s e acompañaban de cambios correspondientes en l a función g lan

dular .

Las tab las IV y V muestran los resultados del experimento diseñado para

responder a dichos interrogantes.

Los animales fueron intervenidos quirúrgicamente 15 d ías antes de su s a c r l

f i c i o y l a s muestras de sangre para los RIA s e recogieron por decapitación.

Corroborando 1 a observación ponderal (compensación incompleta, en ra tas hemi-

t i ro idectomizadas), l os n iveles de Tq en animales con u n só lo lóbulo (h iper t ró - f i co ) fueron 33% menores a los obtenidos de animales contro les in tac tos respeL

t ivos. Se observó a s í mismo, un incremento del 80% en l a concentración de TSH

con respecto a s imi lar parámetro hormonal regist rado en l os animales in tac tos

( p < 0,05 Test de Student). En cambio l a h iper t ro f ia compensadora ampl iada

por GCSx unil . , s e acompaña de una real compensación funcional con valores hor

monales ind is t ingu ib les de los contro les.

4.4- HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS HIPOFISOPRIVAS.

La s igu iente s e r i e de experimentos fue programada con objeto de examinar

l a producción o no de h iper t ro f ia compensadora en ausencia de TSH h ipof isar ia .

Para e l l o uti l izamos animales hipofisectomizados por l a técnica t ransaur icu lar ,

deta l lada en Materiales y Métodos.

En l a Fig. 27 de puede aprec iar que l a hipofisectom-Ía provoca una marca-

da regresión ponderal , como revela e l estudio es tad í s t i co por ANOVA fac to r ia l

( p < 0,05). S ie te d ías después de l a hemitiroidectomía nose a fec ta l a involu-

ción inducida por l a hipofisectomía, pero a los 15 d ías s e manif iesta en l os - a

nimales hipof isoprivos un crecimiento del lóbulo remanente de 30% de su peso (p (0,Ol por Test de Student). Los animales sometidos a hipofisectomía simu - lada mostraron e l incremento esperado para 7 y 15 d ías post hemitiroidectomía,

ind is t ingu ib le del que se observa en l a Fig, 25. La ausencía de una interaccián estadíst icamente s i gn i f i ca ' i va por ANOVA

S 7 \O S r -

- m m L O V ) 3 F- ClJ L 3 S

S r n O 3 $0 -r 0 - 7 U

m V ) V ) S aJ O -r S - E O L " h 3 U m m a J r - m w 3 aJ Q S a J *r 'r u S 3 a m o E S L

m aJ V ) W E a \S C , V ) S S m .r L 7

C , C > a J u) V) 'r aJ aJ u 3 u m E m m w w - m

FIGURA No 27: HIPERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS HIPOFISOPRIVAS. CURVA DE TIEM -

PO.

(7 dias despues de Tx )

l

j (15 días despues de Tx

CONTROL CONTROL

Unilateral Tx

op. simulada

Los animales fueron sometidos a hipofisectomía, por e1 método t ransag r i cu la r , 2 días antes de pract icárse les l a hemi t i roidectomia. Las barras

representan el valor promedio 2 ES de u n número de determinaciones que f igu - ran en t re l os paréntesis. Los aster iscos muestran l a s d i ferencias s ign i f i ca - t i vas en t re los hemi tiroidectornizados y sus respectivos control es según t e s t de Student **p (0,01. Estos datos analizados por ANOVA fac to r ia l indi - can efectos s ign i f i ca t i vos de l a hemitiroidectomia (p( 0,Ol) y l a h ipo f i sec tomía (p ( 0,01) 7 días después de l a c i rugía.

Una interacción en t re l a hemi t iroidectomia e hipofisectomia sÓl o es apa - rente a p a r t i r del 7' día de l a c i rugía ( p < 0,05).

fac to r ia l , en t re l a hipofisectomía y l a hemi t i roidectomía, cuando l os datos s e

obtienen a l os 15 d ías de t ranscurr ida l a c i rug ía , sugieren que ocurre simi-

l a r ; crecimiento h iper t ró f ico independiente de l a presencia o no de l a h ipóf i -

sis.

4.5- HORMONAS PLASMATICAS EN LA HIPERTROFIA COMPENSADORA DE RATAS HIPOFISOPRIVAS

Los niveles de T4 y TSH, Tablas VI y VII, caen a valores en e l 1 ími t e de

detección por e l método de RIA (0,4 ,Pg/dl para T4 y 11)-4U/ml para TSH), como

consecuencia de l a hipofisectomía. En r a tas con es ta operación simulada, s e

observaron cambios semejantes a los detectados en l os animales descr iptos en e l

apartado 4.3.; es dec i r una caída del 30% en T4 y un aumento del 80% de TSH s é -

r i ca en 1 a s ra tas hemi t i roidectomi zadas.

4.6- EFECTOS DE LA GCSx un i l . SOBRE LA HIPERTROFIA COMPENSADORA EN ANIMALES

HIPOFISECTOMIZADOS.

Como s e ha v i s to en e l punto 4.2., l a desnervación simpática del lóbulo

h iper t ró f ico , amplif ica su crecimiento. Quisimos entonces examinar si t a l am-

pl i f i cac ión era- también detectabl e en l a s ra tas hipofisectomizadas.

La GCSx u n i l . i p s i l a te ra l a l lóbulo remanente t r a s hemi t i roidectomía, en

animales hipof isoprivos, indujo una marcada a t r o f i a de dicho lóbulo, haciendo

desaparecer e'l fenómeno h iper t ró f ico , Fig.- 38 (ANOVA Test de ~ c h e f f é p ( 0,Ol). Esta a t r o f i a tambien s e observa en animal es hipofisectomizados con ambos lóbu-

l o s t i ro ideos in tac tos , sobre uno de los cuales s e l e pract ica l a GCSx unil . . El lóbulo desnervado disminuye su peso un 15% con respecto a l lóbulo que mantie - ne su inervación: Tabla VI11 ( t e s t de Student apareado p h 0 , Q l ) .

Estas observaciones nos hacen suponer que, en condiciones de hipof isecto-

mía, l a inervación simpática cervical posee algún fac to r t r ó f i co para el mante - nimiento glandular.

FIGURA No 28: HIPERTROFIA COMPENSADORA TIROIDEA EN RATAS NORMALES E HIPOFISO - PRIVAS. EFECTOS DE LA GCSx uni l . CRONICA IPSILATERAL AL LOBULO

REMANENTE.

Hpx simulada

m Tx m Tx-Gx

op.sim

Los animales fueron h ipof isectomizados, por vi'a t r a n s a u r i c u l a r , 2 d í a s a n t e s de l a hemi t i ro idectomía y l a GCSx un i l . i p s i l a t e r a l a l l óbu lo remanen

te. E l s a c r i f i c i o s e r e a l i z ó 15 d í a s después de l a ú l t ima c i r u g í a ; l o s 1ó- bu los t i r o i d e o s resecados, pesados y r e f e r i d o s a l peso corpora l animal. Las b a r r a s representan e l v a l o r promedio ? ES del número de determinac iones que f i g u r a e n t r e l o s ~ a r ~ n t e s i s . Los a s t e r i s c o s ind ican d i f e r e n c i a s s i g n i -

f i c a t i v a s por ANOVA empleando el test de ~ c h e f f é *p <0,05 **p ( 0,Ol. 0bs6rvese l a a t r o f i a inducida por l a GCSx uni l a l lóbu lo remanente en

los animales hipsfisoprivos.

.r .r O O L L .r S r -

+' C,

4.7- CAMBIOS HORMONALES DURANTE LA HIPERTROFIA COMPENSADORA D E ANIMALES

HIPOFISOPRIVOS.

La hipofisectomía provoca l a caída, tanto de TSH (por ext irpación de l a

glándula) como de T4, a niveles en e l l ím i te de detección del RIA, datos mos-

t rados en l a s tab las IX y X . Ninguno de los procedimientos quirúrgicos fue

capaz de modificar es ta s i tuac ión.

V) w s O -7

U (d L aJ n O

V) tu C, S

S r - + VI .r- w V) (d F

VI aI r-- al VI L

\rCI U .r- C> U (d L P

V) O C, S w .r E .r u a, U O L n vi O w S .r C> V) .r u V) O r-

0) L C, S aJ V) (d >

S r - +' (d U

S r -

'4- -7

S u1 .Y

V)

V) (d -r- U S w L a,

'4- .r u

2 S

O s

a, 3 u aJ V) a> t' 1 0 Z

n m .? V) a, +' S

'a, L rd P.

V) o

r-

a, L -@ S a,

O L a, E

1 3 S V

V)

a, s O .Y

U

5- EFECTO DE LA GCSXSOBRE LA PROLIFERACION CELULAR DURANTE EL DESA-

RROLLO DE LA H 1 PERTROFIA COMPENSADORA EN RATAS HEMITI RO IDECTOMI -

ZADAS

Ante l os cambios ponderales y funcionales de los lóbulos t i ro ideos iner - vados o desnervados, durante e l desarrol lo de l a h iper t ro f ia compensadora, nos

propusimos anal izar l a s modificaciones en e l índice mitótico que podrían acom-

pañar a e s t e proceso. Animales sobre los cuales de pract icaron, 48 hs. antes,

l as d i s t i n t a s manipulaciones quirúrgicas, fueron inyectados con colchicina

(2,2 mg/Kg) y sacr i f icados 3 hs. después. Esta droga, un agente ant imi tót ico, permite valorar 1 a tasa de div is ión ce lu lar (deteniéndola principalmente en

metafase) y por l o tanto es u n buen índice de l a hiperplasia fo l i cu la r .

Los lóbulos se resecaron, f i j a ron y procesaron, siguiendo el procedimiento ' histo lógico reseñado en Materiales y Métodos. Los cambios en el índice mitót i -

co se resumen en l a Tabla XI; l a act ividad mitót ica se incrementa casi 20 ve-

ces durante l a h iper t ro f ia compensadora. La desnervación simpática, que am-

pl í a ponderalmente l a h iper t ro f ia (ver 111. 4.2), provoca un incremento cel u- l a r signif icat ivamente mayor que en e l caso an te r io r del lóbulo inervado

(p (0,Ol) y unas 40 veces superior con respecto a los controles.

La fo to 1 muestra una v is ta panorámica de un cor te h isto lógico de l a g lán

dula t i r o i des , donde se observan los fo l ícu los . En l a Foto 2 se exhiben célu-

l a s fo l i cu la res en div is ión mitót ica, detenida por l a acción de l a colchicina.

Los estudios histológicos de animales operados 15 días antes y por tanto

con h iper t ro f ia desarrol lada plenamente, no mostraron di ferencias en t re los

lóbulos que conservaban su invervación simpática o habían sido desnervados.

Fol ículos t i ro ideos : aumento 400x.

FOTO No 2

C6lulas fol iculares en división mi tó t ica detenida en metafase: 2000x.

6-ORIGEN DE LA INERVACION S I M P A T I C A T I R O I D E A

Como s e ha mencionado en l a Introducción (1.2.2) hay detal lados estudios

sobre l a anatomía e h is to logía del GCS que constan en l a b ib l iogra f ía (35)(39)

(40) . Por e l cont rar io , es poca l a información referente a los grupos neurona

l e s involucrados en l a inervación de l a s es t ruc turas comprendidas en e l t e r r i

t o r i o de l a s proyecciones simpáticas cerv icales. Una excepción en e s t e aspec-

to lo const i tuye l a glándula pineal (40) , pero nada hay descr ipto para l a t i -

ro ides. Basándonos en estos antecedentes nos propusimos, como último experi-

mento de es ta Tesis, l oca l i za r l a vía de proyección y l a ubicación de los cuerpos neuronales invol ucrados en l a inervación t i ro idea .

6.1- EFECTO DE LA Dc Y LA GCSx unil . SOBRE EL CONTENIDO DE CATECOLAMINAS

INTRATIROIDEAS.

Los efectos de l a GCSx uni l y l a Dc sobre e l contenido t i ro ideo de N E y

E s e muestran en l a s tab las XII y XII respectivamente. Ambos procedimientos

quirúrgicos provocan una marcada caída en e l contenido de catecolaminas i n -

t r a t i r o i deas , disminución que equivale del 84 a l 94% con respecto a l lóbulo

cont ra la tera l inervadú, cuyos valores de NE y E son normales (268) ( p 4 0,01

para NE y ,p 4 0,001 para E ) . El hecho de que 1 a Dc tenga 1 as mismas consecuen -

c i as que una desnervaci ón ( GCSx) sugiere que los cuerpos neurona1 es responsa-

b les de l a inervación t i ro idea , no t ienen as iento anatómico en e l GCS.

6:2- EFECTO DE LA Dc Y LA GCSx un i l . SOBRE E L CONTENIDO DE CATECOLAMINAS EN LA

GLANDULA PI NEAL .

La Tabla XIV resume los resultados obtenidos cuando s e determina e1 contenido en l a glándula pineal de ra tas con l a mismas operaciones c i tadas en 6.1.

La GCSx un i l . , pero no l a D c . , provoca una disminución s ign i f i ca t i va del conte-

nido de neurotransmisores ( p 4 0,Ol). Los valores de NE pineal en ra tas Dc. fueron normales, dentro del orden de los observados en é s t e y ot ros laborato- r i o s (282), para ra tas de l a misma cepa Wistar.

Tabla XII: Conten ido de co teco laminas i n t r a t i r o i d e a s en an ima les con GCSx u n i l . 7 d í a s

a n t e s .

G l Zndul a T f r o i d e s

Lóbulo I p s i l a t e r a l Lóbulo Contra1 a t e r a l

pg. NE/mg. t e j i d o

pg. E/mg. t e j i d o

Los n i v e l e s d e NE y E se de te rm ina ron po r el método r a d i o e n z i m á t i c o , como s e d e s c r i b e en M a t e r i a l e s y Métodos. Los v a l o r e s p r e s e n t a d o s e n l a t a b l a muest ran l o s

+ promedios - ES de 8 an ima les en cada grupo.

Los a s t e r i s c o s i n d i c a n diferencias s i g n i f i c a t i v a s e n t r e e l l ó b u l o i p s i l a t e r a l

(desnervado) y el l ó b u l o c o n t r a l a t e r a l ( i n e r v a d o ) como l o demuest ra el tes t de S t u d e n t pa ra m u e s t r a s a p a r e a d a s *p (0 ,01 **p( 0,Ol.

O S r -

el- +

Tabla XIV: Contenido de catecolaminas intrapineales en animales GCSx unil . o DC unil 7 días antes.

A. GCSx unil Pg NE/mg tejido

Pg E/mg tejido

B. Dc unil

Pg NE/mg tejido Pg E/mg tejido

Glándula Pineal

Los ni ve1 es de catecolaminas intrapi neales se midieron por el método radioenzimk +

tito, Las valores mostrados en la tabla representan a1 promedio - ES de 8 animales en cada grupo. El contenido de eatecolamtfie$ intrapfneales resu1 t a s5gniPicati vamente menor en los animales GCSx unil que en los Dc unil según lo revela e1 test de Student *p< 0,001.

6.3- CAPTACION NEURONAL DE [ 3 ~ 7 - NE EN TIROIDES LUEGO DE GCSx unil.,d Dc.

Para evaluar l a integridad de l a inervación simpático t i ro idea luego de

l o s d i s t i n tos procedimientos quirúrgicos, se estudió l a captación neuronal

de [ 3 ~ ] NE " in v i t ro' en t i r o i des de ra tas GCSx o Dc.unilatera1mente. La cap

tación es u n método que permite tener una idea acerca de la densidad o concen-

t ración re la t i va de terminales neurales y una confirmación adicional de l a des M

nervaci ón antes observada con cual quiera de ambas c i rugías pract icadas. Como

control para medir l a captación inespeci f ica uti l izamos l a droga DMI en concen M

t raciones de 10)tM, fármaco inhibidor de l a captación neuronal de NE.

Obsérvese en 1 a tab la XV que, tanto 1 a GCSx unil . como l a Dc. , 1 levan a

l a desaparición de l a captación especí f ica de ptl] NE; por l o tanto el lóbulo

t i ro ideo queda eficazmente desnervado con cualquiera de l a operaciones c i tadas.

La desaparición de l a captación resu l ta t o ta l (obsérvese captación inespeci f i -

ca con e l empleo de DMI), siendo l a cqmparación con e l lóbulo inervado contra-

l a t e r a l , altamente s ign i f i ca t i va (p < 0,01 por t e s t de Student apareado) .

6.4- EFECTO DE NCEx u n i l . del GCS SOBRE LA CAPTACION r 3 ~ 1 N E EN TIROIDES Y I J - .

PINEAL.

Con e l objeto de evaluar s i l a s f ib ras simpáticas que inervan l a t i ro ides

arr iban a l a glandula vía NCE que es una de l a 2 eferencias pr incipales del

GCS, s e seccionó unilateralmente dicho nervio y se estudió l a captación de[3~]

NE en pineal y t i ro ides .

La NCEx uni l . s e traduce en una desaparición to ta l de l a captación espe-

c í f i c a de [ 3 ~ ] NE. (no hay di ferencias s ign i f i ca t i vas con el tratamiento por

DMI) en e l lóbulo i ps i l a te ra l a l a operación (ver Fig. 29). La captación no se ve afectada en el lóbulo t i ro ideo contra1 a tera l (d i ferencia s ign i f i ca t i va

con respecto al' desnervado por NCEx, p < 0,01 por Test de Student apareado) , a s í como tampoco en l a glándula pineal (ver Fig. 30).

Tabla X V : Captación de PH] NE " in v i t ro " de glándulas t i r o i des sometidas a GCSx unil

o con Dc un i l . 7 días antes.

Glándula t i r o i des

Grupos Experimentales Lóbulo i psi l a t e ra l Lóbulo cont ra la tera l DMI (10 BM)

GCSx u n i 1

Dc un i l .

Las captación s e determinó incubando fragmentos con 0.5 ) M L 3 ~ ) NE como s e de2 cr ibe en Materiales y Métodos. Los datos presentados en l a tab la muestran e l prome-

+ dio - ES de 6 animales por grupo y s e expresan como frnoles de NE/mg de t e j i do luego de 30 minutos de incubación. Los fragmentos con DMI se preincubaron con l a droga du-

rante 5 minutos antes del agregado del radioact ivo. Los as te r i scos indican di feren- c ias s ign i f i ca t i vas en t re los lóbulos desnervados, por cualquiera de ambas c i rug ías ,

y sus con t ra la te ra les con una inervación in tac ta empleando el Test de Student para muestras apareadas *p < 0,001.

FIGURA N o 29: EFECTO DE LA NCEx u n i l . DEL GCS SOBRE LA CAPTACION DE [ 3 ~ ] NE

EN TIROIDES.

operación sección de DMI simulada nervio

carotideo í 10 pM) ex terno

La captación se determinó incubando fragmentos t i ro ideos con 0.5 j r M de PHI NE t a l como s e descr ibe en Materiales y Métodos. Las barras represen - ta i e l valor promedio ! ES de 10 animales por grupo. Los fragmentos t i r o i -

deos con DMI s e preincubaron con dicha droga durante 5 minutos antes del

agregado del radiact ivo. El as te r i sco indica d i ferencias s ign i f i ca t i vas en- t re lóbulo desnervado y e l cont ra la tera l inervado, t a l como l o demuestra

e l t e s t de Student para muestras apareadas *p (0,01. Obsérvese que l a caí-

da en l a captación, t r a s l a sección del NCE, es to ta l pues su valor es igual a l inespecf f ico determinado por l a DMI.

FIGURA No 30: EFECTO DE LA NCEx DEL GCS SOBRE LA CAPTACION DEL [ 3 ~ ) NE EN LA GLANDULA PINEAL.

operación sección de simulada nervio DMI

carotideo [1OMM] ex terno

La captación se determinó incubando pineales enteras con 0.5 p M [3H') NE.

Las pineales con DMI se preincubaron con dicha droga durante 5 minutos antes

del agregado del radiact ivo. Las barras representan el valor promedio ? ES

de 8 pineales en cada grupo. Los aster iscos indican di ferencias s ign i f ica-

t i vas en t re l os grupos, con y sin lesión del NCE y l a s pineales t ra tadas con

DMI; por t e s t de Student *p < 0,Ol. La sección del NCE no produce a l t e rac io - nes en l a glándula pineal.

6.5- EFECTO DE LA NCEx uni l . Y LA GCSx unil.EN ANIMALES HIPOFISOPRIVOS.

En 111 4.6 y en tabla VI11 demostramos l a marcada a t ro f i a equivalente a l

15% de caída en el peso t i ro ideo, que l a GCSx un i l . i ps i l a te ra l producía en

l os animales hipofisectomizados. Similares resultados se ver i f ican con NCEx

uni l . en l a Tabla XVI, donde l a caída del peso en e l lóbulo t i ro ideo es del

25%, mientra; que l a GCSx. un i l . induce una disminución del 200. Estas d i -

ferencias de porcentajes no son s ign i f i ca t i vas en t re s í , pero l o san respecto

a l os lóbulos cont ra la tera les inervados . Este experimento avala l a suposición de que e l NCE es l a vía por l a cual

se proyectan l o s axones del GCS que inervan a l a glándula t i ro ides .

aJ C13 Or- V) V) C, O V ) * O a J S - -I QI m + u a r a

S 3,- fa -r S O m U m E U -l- 3 O '7 V ) L V ) U U V aJ 'r O .r aJ - 1 U t '

D - I S C U S I O N

Antes de adentrarnos en la discusión es t r i c ta de los resultados presenta

dos y algunas de sus posibles impl icancias, creemos que resul ta conveniente

una breve recapitulación del estado de 1 os conocimientos sobre el tema, previo

al comienzo de este trabajo de Tesis. Enumeraremos algunas de l as observacio - nes más importantes realizadas en este laboratorio, descriptas en la Introduc ción (1.4.1 y 1.4.21, las que sirvieron de base para los presentes experi-

mentos.

1) Durante l a degeneración anterógrada de los terminales simpáticos originados en el GCS se produce la descarga de la NE contenida en e l los , con los consiguientes efectos postsinápticos atribuidos a este neurotransmisor (8-16 hs. después de GCSx. bi l .) . Uicho período coincide con una depresión

en l a secreción hormonal del e je hipófiso-tiroideo (87).

2) Esta disminución de los niveles plasmáticos de T4 es independiente del te- nor circulante de TSH ya que, inyecciones exógenas de esta hormona, son

incapaces de rever t i r t a l inhibición de l a secreción t i ro idea (87).

3) La interrupción crónica de la vía neural simpática provoca un aumento de

la respuesta bociógena inducida por TSH exógena o MMI, a s í como un crecimiento espontáneo de la glándula t i ro ides cuatro semanas después de GCSx bi l . (268). Los cambios pondera1 es se acompañan de una mayor incorpora- ción de [3~]~r id ina al ARN de los lóbulos desnervados.

4 ) La GCSx b i i . crónica provoca un aumento en el número de receptores d. adre - nérgicos tanto en t i ro ides como en el hipotálamo medio basa1 (268) (271).

E l propósito de esta Tesis ha sido extender ta les conocimientos con nue -

vos aportes. De ese modo hemos pretendido alcanzar los objetivos propuestos

en la Introducción. A continuación enumeraremos los resultados más importan - t es obtenidos, los cuales serán discutidos en el mismo orden de su presenta- ción.

1) Hemos caracterizado en deta l le y en el mismo animal los diferentes estadíos funcionales del e je hipófiso-tiroideo luego de la GCSx b i l . . En l a ra ta, hay un efecto bifásico de l a secreción de TSH y T4 a d is t in tos tiempos de transcurrida la cirugía. Primero se detecta una depresión en los niveles sér icos de ambas hormonas (hasta el 4" d ía) y luego una recuperación en los niveles séricos hasta alcanzar valores que no dif ieren de los norma-

l es.

2) La GCSx b i l . a l t e r a e l ritmo circadiano de secreción hormonal en el e j e

h ipóf iso- t i ro ideo. Se describen por primera vez ritmos d ia r ios para l a s

catecolaminas in t ra t i ro ideas .

3) Se iden t i f i có e l locus de acción de l a GCSx b i l . (h ipof isar io o suprahipg

f i s a r i o para inh ib i r l a TSH) y e l t i po de receptor involucrado en los cam

bios secretor ios de TSH y Tq durante l a degeneración wal le r iana. El recee

t o r resu l ta de t ipo o( (muy posiblemente 41 ) . 4) La integridad de l a proyección simpática cervical es esencial para una

respuesta adaptat iva trascendente,como es l a adaptación a l f r í o en l a ra ta .

5) La desnervación crónica induce cambios ponderales y hormonales en e l mode -

l o de l a h iper t ro f ia compensadora t i ro idea , caracterizándose l a naturale -

za h iper t ró f ica y/o hiperplásica del fenómeno compensatorio.

6 ) Se describieron l a h iper t ro f ia compensadora t i ro idea y los cambios ponde-

r a l e s producto de l a GCSx unil . i p s i l a te ra l en animales hipo'fisoprivos.

7 ) Se iden t i f i có l a vía eferente y l a local ización anatómica de l a s neuronas

responsables de l a inervación simpática t i ro idea-parat i ro idea.

Tal como planteamos en e l punto 1 de l os objet ivos logrados, l a primera

s e r i e de experimentos s e diseñó con el objeto de anal izar en el mismo animal

l a evolución, a l o largo del tiempo,de l a secreción de TSH y T4 1 uego de l a

GCSx b i l . y de' ese modo, es tud iar 1 a inf luencia neural sobre el e j e hipófiso-

t i ro ideo. Pudimos determinar dos s i tuaciones d i s t i n tas que transcurren tam - bien en tiempos d i s t i n tos t r as l a c i rugía: a ) e l período donde se manifies -

tan l os fenómenos de l a degeneración anterógrada; b) los cambios poster iores

cuando l a desnervación s e ha completado. La primera s i tuación t ranscurre en - t r e e l lo y 4" día t r a s l a c i rugía , donde se observa una marcada inhibición

en l a secreción de TSH y T4; 1 uego 1'0s valores de es tas hormonas s e recupe - ran alcanzando el nivel de l os animales controles (ver Fig. 14 y 15).

E l in terva lo donde se observan fenómenos endóeri nos, efectos de acc ig

nes posts i nápticas durante l a degeneración neurona1 , s e extienden más a l 1 á

en e l tiempo,excediendo l a e s t r i c t a descarga supraliminal de neurotransmiso-

res , cuya culminación ocurre 24-36 hs. después de l a c i rugía. La extensión

en e l tiempo, para estos fenómenos agudos, nos s i r v i ó de fundamento para va-

r i os de l o s experimentos discut idos más adelante. La posi bi l idad teór ica i n i - c i a l de que l a GCSx b i l . no actuara en forma d i rec ta inhibiendo l a secreción

de TSH sino que, por algún mecanismo periférico (por ejemplo hepático y/o re - nal ) , al terara el "cl earance" metaból i co de 1 a hormona, quedó descartada en u n experimento previo a esta Tesis (87) en el cual la inyección de TSH exógg no eleva los niveles plasmáticos de &ta hormona en forma semejante para los

animal es control es y aquél 1 os con GCSx bi 1 . . Contrariamente a lo observado en u n trabajo previo (270) no encontramos

cambios signi f icat ivos en el peso t iroideo de los animales GCSx bi l . sacr i- ficados 28 días después de la operación,tiempo descripto para l a aparición de bocio espontáneo. Probablemente la discrepancia se deba a factores de l a

dieta 1 a cual haya contenido escaso yodo o bien compuestos bociógenos. Ensa- yos preliminares mostraron que l a administración de IK en el agua de bebida durante 15 días en animales sometidos previamente a GCSx unil . , neutralizó l as diferencias ponderales entre ambos lóbulos tiroideos.

Para investigar l a influencia de la inervación simpática sobre estruc-

turas estrictamente centrales del e je hipotálamo-hipofisario, recurrimos al modelo de tiroidectomía to ta l . Tal operación nos permi tEa descartar el meca - nismo de retroal imentación negativa sobre los t i ro t rofos p i tu i tar ios. o l as

neuronas hi potal ámicas ejercido por l as hormonas t iroideas (111-120). Nueva mente, durante la degeneración anterógrada ,se produce una signi f icat iva d i s- minución de l a secreción de TSH inducidajen es te caso por l a tiroidectomia

(ver Fig. 16). Dicha inhibición desaparece a las 24 hs. de la GCSx bil . momento en e l que l a TSH comienza a aumentar su concentración sérica alcanzan-

do valores superiores a los correspondientes de los animales únicamente t i-

roprivos,pero con su inervación cervical completa.

Este t ipo de respuesta bifásica, disminución primero y luego aumento en l a secreción hormonal de l a TSH, con respecto a los controles en el modelo de la tiroidectomía tota l que se produce a d is t in tos tiempos t ras la GCSx b i l .

fue observado también para GH (283). De este modo, no sólo la inervación nora - drenérgica central s i no también l a inervación simpática periférica, desempe-

ñan un rol inhibi tor io sobre l a secreción de GH-y TSH.

Consideramos entonces apl icar el modelo de l a degeneración anterógrada para estudiar otros aspectos funcionales del e je hipófiso t iroideo. Actividg des con ritmo circadiano tienen lugar dentro del área comprendida por l a iner - vación simpática cervical. A manera de ejemplo, citaremos que la GCSx bil . deprime el ritmo diar io pineal, estimado por l a secreción de melatonina (284)

y también resul ta en la desaparición del ritmo circadiano de presión intraocg

ia r en l o s conejos (285). Varios t rabajos (279-282) demuestran, en l a ra ta ,

l a existencia de un ritmo d ia r i o para TSH cuyo máximo aparece en t re l a s 1100

y 1500 hs. No hay, por e l contrar io, consenso acerca de una act iv idad secre - tor ia rí tmica para T4. Al gunas determinaciones muestran l a :apa+i.Ci,Óri, de un valor máximo, unas dos horas después,tras e l correspondiente pico de TSH

(286); mientras que o t ros autores no han logrado detectar10 (282). Cuando anal izamos e s t e ritmo d ia r io de secreción de TSH y Tq en ra tas

GCSx b i l . detectamos, en nuestros animales control (GCSx simulada), un r i t- mo de TSH con e l máximo descr ipto a l a s 1100 h s . Al mismo tiempqobserva-

mos l a presencia de .dos máximos para T4: e l primero 3 horas después del co - rrespondiente de TSH y e l segundo a medianoche, independiente de t i r o t ro f i na .

La GCSx b i l . 3 días antes de l a s determinaciones no solo provoca l a descrip- t a inhibición secretor ia del e je , sino además afecta marcadamente 1 a a c t i v i -

dad rf tmica del mismo. Así e l máximo de TSH sér i ca de los animales GCSx bi l . t i ene un c ~ r r i m ~ e n t o de 2-3 hs. con respecto a l os controles (Fig. 1 7 ) . Aún más dramática resu l ta l a a l terac ión para Tq donde e l máximo diurno también

s e desplaza, mientras que e l nocturno desaparece totalmente (Fia. 18). Se - gún es tos resultados interpretamos que, si bien l a s hormonas del e j e t ienen

un ritmo propio de secreción, l a inervación provista por e l GCS desempeña

un ro l modulatorio sobre su expresión. Sugerimos que la inervación manten-

dr ía en fase correcta l a act iv idad ri'tmica y a l mismo tiempo regular ía l a

amplitud de 1 a respuesta hormonal. Conviene aquí , retrotraernos a l a in t ro-

ducción y recordar l a def in ic ión de modulación, de válida apl icación en es- t e caso: l a respuesta primaria (act ividad rí tmica secretor ia del e j e hipof i- so t i ro ideo) se ve afectada por una acción en e s t e caso neural (neurotransmiso r l iberado durante l a degeneración anterógrada) que provoca cambios en

l a forma y amplitud, pero no a l t e r a e l sent ido de l a respuesta primaria. Analizamos también e l ritmo circadiano en e l contenido de catecolami-

nas i n t ra t i r o i deas que no ha s ido descripto en especie alguna, La NE en l os animales contro les, exhibe un máximo d ia r io durante l a s horas de 1 a noche, registrándose un mínimo en su concentración i n t r a t i roidea a

l a s 1100 hs. (Fig. 19). Por su par te l a E se comporta igual que l a N E , moz trando su máximo en l a f ase nocturna (Fig. 20), mientras para l o s n iveles de DA fue imposible detectar modificaciones rí'tmicas durante e l período de 24

hs . exami nado,

Resulta in teresante comparar l os ritmos de NE y E i n t ra t i ro ideos con

l a s variaciones d ia r i as en l os niveles sér icos de TSH y Tq; el máximo noctur - no de T4,no antecedido por elevación de TSH, coic id ió aproximadamente con l a

máxima concentración de NE en l a glándula t i r o i des . Ciertas observaciones

(263) apoyan un posible rol est imulator io " in v i t ro " de l a NE sobre l a Tq en

ausencia de TSH o bajas concentraciones de l a hormona, sirviendo a s í de f a c

t i ble expl icación a nuestros resultados. Estos también podrfan in te rp re ta r - s e como una relación causal en t re e l aumento de NE y el incremento de Tq. De-

be tenerse en cuenta, s i n embargo, que l os niveles absolutos de un transmi-

sor en un t e j i do dado, pueden o no vincularse a l a 1 i beración aumentada de

dicho transmisor (por e j .. . un contenido elevado de NE puede resu l t a r de

inhibición de l a MAO o l a COMT y no de una mayor s ín tes i s y/o l iberac ión) .

Contrastando con e l posible rol est imulatorio de l a NE en bajas concentra-

ciones de TSH e l aumento pcr descarga supral iminal, durante l a degeneración

anterógrada, produceuna depresión de1 efecto de TSH sobre l a secreción de Tq.

Existen evidencias morfológicas y bioquímicas que avalan l a existencia

de proyecciones del GCS a l hipotálamo (medio basal) (271) y a l a adenohipóf i

sis (288). Nos pareció de in te rés determinar l a sensib i l idad h ipof isar ia a l

TRH durante l a degeneración walleriana post GCSx b i l , para e s t e estudio in-

yectamos TRH (Fig. 20) por vía intravenosa a dos grupos de ra tas : uno control

y o t ro con GCSx b i l . 14-16 horas antes del ensayo. Las muestras sanguíneas

basales confirmaron l a s d i ferencias esperadas; 10 minutos después de l a in-

yección de TRH ambos grupos de animales mostraron una respuesta h ipof isar ia

normal de TSH. Concluimos que e l e fecto i n h i b i t ~ r i o ~ d u r a n t e l a degeneración

anterógrada,se e je rce primariamente a nivel hipotalámico y no h ipof isar io .

La naturaleza de es ta inhibición e s aún inc ie r ta ; podría deberse a una acción

modulatoria de l os terminales per i fér icos en e l hipotálamo sobre l a secre-

ción de TRH o . a l ternativamente a un efecto vascular con disminución del a-

porte de TRH a l a adenohipóf isis. Sin embargo l a captación de 8 6 ~ b , método

ut i l i zado para valorar e l f l u j o sanguíneo, no resu l ta modificada n i en l a

h ipó f i s i s n i en e l hipotálamo t r a s l a GCSx b i l . , descartándose a s í un posible

fenómeno vascular (2682. ~ s t u d i o s que incluyan l a determinación de niveles hipo-

talámicos y porta les de TRH, t r a s GCSx b i l . aguda, podrían corroborar o re-

chazar es ta h ipótesis.

El s igu iente paso en nuestro t rabajo, apoyado en l a información acumu - lada hasta ese rnomento,consistió en la caracterización farmacológica del receptor adrenérgico invol ucrado en l a inhibición del e j e hipbf i so- t i ro ideo

durante la degeneración wal leriana post GCSx bil . Corno mencionamos en la In troducción (1.3.3), existen evidencias consistentes indicativas que la NE del sistema noradrenérgji co central (originado en áreas mesencefál i cas como el

locus coeruleus) afecta la secreción de TSH; en este sentido el aval proviene

de experimentos farmacol ógicos donde, inyecciones intraventriculares de NE o sus agonistas cXzincrementan la secreción de TSH (178) (179) mientras agonis tas di inyectados peri fe'ri camente bloquean la secreción de ti rotrofi na (180- 182). Según se ha demostrado (183) existe una acción estimulatoria de la

NE sobre TSH y GH mediada por un adrenoceptor. *d2 . De este modo el sistema

noradrenérgico central ejercería una influencia facil i tatoria o un rol tónico estimulatorio en la secreción de ambas hormonas hipofisarias. Se describe también en el mismo estudio,que la activación de los di adrenoreceptores tig ne una influencia inhibitoria sobre la secreción de TSH y GH; estos recepto-

res o(, , en condiciones de reposo, no estan tónicamente activados.(l83) En nuestros experimentos la inyección de7 antagonista o( (predominante

mente di) fenoxibenzamina previa al sacrificio de ratas con GCSx bil., efec - tuada 14-16 hs. antes del ensayo, revierte totalmente la inhibición de TSH. No ocurre lo mismo con el antagonista (3 propranolol que resulta inefectivo para tal propósito. Por último,la inyección conjunta de ambas drogas no afecta la inhibición de TSH mediada por el receptor di. Estos datos indi-

can que la acción de la NE liberada de los terminales simpáticos periféricos en la eminencia media, es mediada por receptores d i y constituyen, en con-

junto, otra evidencia del importante papel modulatorio de la proyección cervical sobre el área hipotálamo-hipofisaria. En relación a la acción intra- tiroidea de tales terminales simpáticos deben destacarse los cambios producidos sobre los niveles séricos de T4 tras la inyección de los antagonistas

y/o p . Estos cambios no acompañan a las concentraciones séricas de TSH, demostrando la independencia glandular durante el período de la degene- ración anterógrada cervical. La inyección de fenoxi benzamina reestabl ece los

niveles de Tq así como los de TSH; sin embargo, la administración de propra- no101 potencia la depresión de T4 sin modificar la tirotrofina. La máxima

inhibición en la hormona tiroidea se obtiene con la administración conjunta

de 4 y 4 antagonistas (Fig. 22),mientras que en estas condiciones la TSH recupera sus valores normales.

Estos resultados indican; a ) adrenoceptores de tipo fi i median los efec tos inhibitorios intratiroideos de NE sobre la liberación de 'q.

b) Existe un efecto I?> est imulator io débil de

l a NE t i ro idea. c ) Existe o t ro mediador neurotransmisor, no

catecolaminérgico, inh ib i to r io en 1 as terminales simpáticas.

Histoquímicamente se ha revelado l a presencia de diversos péptidos en - 3 Y

l os terminales in t ra t i ro ideos . Un hecho relevante es l a coexistencia del neuropéptido Y con NE en 1 os terminales simpáticos per i fér icos, i ncl uidos 1 os .- . ..I - A-

t i ro ideos (47) (289). EJ neuropéptido Y reproduce de forma más prolongada l as acciones de NE en diversas uniones neuroefectoras autonómicas, convictién a - dolo en un buen candidato .como mediador de l os efectos inh ib i to r ios no adre- nér j icos aquí descr i ptos. Recientemente (290) se describe a l neuropéptido Y

. - ejerciendo un poderoso efecto inhibitorio,potenciando l a inhibición en l a s e - creción de hormonas t i ro ideas inducida por TSH, e jerc ida por l a NE. Tampo- co podemos descar tar l a posibi l idad de o t ras sustancias, aún no determinadas, con potente acción inh ib i to r ia y d i s t i n tas a l neuropéptido Y; estudios ul te- r i o res podrían resolver es ta cuestión en e l fu tu ro .

Si bien hasta el momento l a discusión de l os efectos agudos de l a GCSx a

b i l . sobre e l e j e h ipóf iso- t i ro ideo se ha centrado en l os aspectos de acción

d i rec ta de los terminales en degeneración sobre el hipotálamo y l a glándula t i r o i des , debe anal izarse l a posibi l idad de que, par te de l a s a l terac iones,

puedan deberse a cambios hormonales desencadenados en o t r a zona del territo- r i o simpático cerv ica l . En e s t e sent ido un candidato lógico es l a glándula pineal . A t ravés de l a secreción de melatonina es ta est ructura modifica l a act iv idad del e j e h ipóf iso t i ro ideo (291'293). Hay que tener en cuenta que, durante l a reacción de degeneración, s e incrementa l a l iberación de melatonina (294) y debe por l o tanto considerarse l a part ic ipación de t a l hormona.

Sin embargo l a inyección de propranolol previene totalmente l a secreción d e

melatonina durante l a degeneración wal ler iana (294), pero es inef icaz, como

hemos v is to , en modificar l a depresión del e j e hipóf íso-t i ro ideo. Esto ex-

cl uye indirectamente 1 a part ic ipación pi neal en el fenomeno; por e l contrar io

los receptores d i d e ubicación posiblemente hipotalSmica, operan para i n h i -

b i r l a l iberación de TSH.

Ante toda l a información recogida, nos interrogamos sobre cuál podía s e r l a implicancia f is io lóg ica d e l a inhibición funcional del eje hipóf iso-

t i ro ideo durante 1 a degeneración wall er iana. Para contestar 1 a pregunta recurrimos a evaluar l a respuesta. adaptat iva al f r í o , estímulo importante en l a

l i .

activación de l a secreción hormonal del e j e . Describimos en l a Introducción que l a exposición a1 f r í o provoca un incremento en l a secreción de TSH (223-

225) en diversas especies, incluida l a ra ta ; dicha elevación hormonal depende de l a integridad hipotálamo-hipofisaria pues, puede s e r anulada por les iones en áreas h i potal ámicas especí f icas (222-228). Cuando se examinó 1 a adapta-

ción de l as ra tas con GCSx bi 1 . 48 hs . antes a una temperatura ambiental de

4"C, l a sobrevida fué prácticamente nula, hubieran sido o no los animales prea -

daptados durante u n mes a t a l temperatura. Similares tasas de baja supervi-

vencia se obtienen en ra tas t i ropr ivas t ra tadas con dosis reemplazantes de T3 y mantenidas en ambientes f r i o s . Pero los mismos animales sobreviven en l a s mismas condiciones si s e l os inyecta con T4. Datos que concuerdan con e1 hecho de que, durante l a degeneración anterógrada post GCSx b i l . , s e inhi be

l a secreción de Tq, pero no 1 a de T3 (87). '

Esta f a l t a de adaptación al f r í o de l a s ra tas GCSx b i l . ¿Sería debida a l a inhibición de T4 o por un efectointegrado de l a inervación en degeneración

sobre e l centro hipotalámico que controla l a temperatura corporal?. No podemos responder e s t e interrogante. Queda c la ro s i n embargo, que el normal

funcionamiento del sistema simpático cervical resu l ta esencial para l a adap- tación de l os roedores a los cambios externos de temperatura, sugiriendo un papel homeostático importante de l a inervación sobre un mecanismo tan v i ta l para l a supervivencia del organismo.

Hasta e s t e punto del t rabajo hemos analizado los efectos agudos de l a GCSx b i l . , aquél los producidos durante e inmediatamente después de l a degene ración anterógrada. Ahora nos referiremos a l os cambios inducidos por l a desnervación crónica ( 7 a 15 d ías t r a s l a c i r ug ía ) , bastante después de f ina- l i z a r l a l iberación de l os neurotrasmisores de los terminales simpáticos en degeneración. Para el l o recurriremos al modelo experimental de l a h iper t ro f ia compensadora t i ro idea. La ablación quirúrgica de cualquier órgano endócrino par induce en e l remanente un crecimiento compensatorio, acompañado o no por una recuperación parcial y/o t o ta l de l a función. Transcurridos 7

a 15 días de l a s hemitiroidectomía se desarro l la un crecimiento pondera1 del lóbulo remanente (145% tomando como 10.0% e l valor del .lóbulo t i ro ideo

promedio) que no alcanza a compensar e l peso to ta l de l a glándula, n i tampo - co produce un restablecimiento de l a secreción hormonal normal. En e s t e caso e l crecimiento h iper t ró f ico no es estr ictamente compensador, menos aún en s u a s

pecto funcional, registrándose un aumento en los niveles de TSH, como conse-

cuencia de los niveles insuf ic ientes de T4, producidos por un parénquima es-

caso. Esto revela una exter ior ización del mecanismo de retroalimentación ne- gat iva en e l e j e h ipóf iso- t i ro ideo, t a l como se deta l ló en l a Introducción.

Quisimos averiguar cómo i n f l u ía l a inervación simpática sobre e l crecimiento

h iper t ró f ico ; l a desnervación (por GCSx uni 1 . ) i p s i l a te ra l del lóbulo remanente t r a s una hemiti roidectomía, no sólo a fecta a l crecimiento glandular s ino también provoca modificaciones importantes en l a act ividad secre to r ia . Encon

tramos ,en ellóbulo desnervado, una ampliación del crecimiento h iper t ró f ico pon deral de1 180% acompañada por una compensación funcional to ta l ya que, es tos

animales sometidos 15 días antes a ambas c i rugías ab la tor ias simultáneas, recuperan los niveles basales de TSH y Tq.

Una comprobación adicional a es ta obse.rvación fue proporcionada por los estudios histo lógicos emprendidos 48 hs, después de l a c i rugía para determinar. s i e l fenómeno era netamente h iper t ró f ico o se acompañaba de hiper -

plas ia ce lu lar . La valoración del índice mitót ico o una var iante, e l índice

fo l icul a r , resu l tó s ign i f i ca t i va . La hemi t i roidectomía desencadena en e l 1& bulo remanente una pro1 i feración de célu las fol iculares ( l a act iv idad mitót i - ca s e incrementa 20 veces) y l a desnervación mult ipl ica casi a l doble l a prol i - feración cel u1 a r (ver Tabla 'XI) . En tiempos más prolongados, 15 días después de l a s operaciones,cuando ya l a h iper t ro f ia se ha desarrol lado totalmente,no

encontramos di ferencias histo lógicas en t re l os te j idos inervados y desnervados.

Nuestros resultados se contraponen con los efectos producidos por des- nervaciones quími eas empleando 6-OH-dopami na (295). La inyección i n t r a t i ro i dea

un i la tera l del neurotóxico, provoca un aumento en l a act ividad mitót ica del

cont ra la tera l e inc luso previene e1 crecimiento compensatorio, si se l a ap l i - ca sobre e l lóbulo remanente t r a s hemi t iroidectomía. Las razones de es tas

discrepancias l a s atribuimos a acciones c i to tóx icas de l a 6-OH-dopamina, pues

existen cuestionamientos acerca de l a acción local de l a droga, donde sus e fec tos no se l imi tan s6lo a l a destrucción de los terminales adrenérgicos s ino

que, incluyen además destrucción t i su l a r (296). Resulta probable que l a inhibición en e l crecimiento h i pertróf ico, a s í como la inducción del crecimien

to revelado por aumento de l a act iv idad mitót ica en el lóbulo cont ra la tera l inyectado se deba, en real idad,a una hemitiroidectomía química y no a una ac-

ción que invol ucre directamentamente las f i b ras adrenérgi cas aferentes . ¿Resu1 t a e l e fec to simpático potenciador de l a h iper t ro f ia compensadora,

ejerc ido en ausencia de TSH?. Para contestar es ta pregunta empleamos ra tas

hi pÓf i sopri vas en 1 as que 1 as determinaciones hormonal es de TSH, indicaron

e s t a r en l ími te de detección para e l RIA. La hipofisectomía provoca una re-

gresión del peso glandular t i ro ideo y una depresión severa de T4 c i rcu lante ,

cuyos niveles caen en e l l ími te de detección del RIA para es ta hormona. Los

animales h i pofi sopri vos sometidos a hemiti roidectomía desarrol l aron, 15 días

más tarde, un aumento pondera1 del lóbulo remanente. Concuerda a s í con ob-

servaciones previas (298), donde se reg is t ra h iperplasia ce lu lar t i ro idea

(incremento del índice m i t ó t i co y aumcnto en l a incorporación t imidina)

dos d ías después de l a hipofisectomía y hemitiroidectomia, en ra tas . En

conjunto es tos resultados contribuyen a ava lar l a h ipótesis de que l a hiper-

t r o f i a o h iperplasia compensadora, por ablación uni lateral de glándulas en-

dócrinas: adrenal (299), ovario (300), a s í como de órganos no estr ictamente

endócrinos como e l riñón (301), es independiente de l a presencia o ausencia

de l a h ipó f i s i s . Se ha comprobado también hiperplasia compensadora t i ro idea

en ratones cepa snel l dwarf, caracterizados por ausencia de TSH y GH (302).

Por su parte, en contraposición con l o ocurrido en los animales normales,

l a GCSx un i l . del lóbulo remanente, en los hipof isoprivos, no sólo a fecta e l

crecimiento compensatorio s ino que provoca una marcada a t ro f i a glandular.

De e s t e modo l a inervación simpática parece necesaria para el mantenimiento

de c i e r t o trofismo glandular (no de su funcionamiento) en ausencia de hipó-

f i s i s . Verificamos efectos opuestos de l a GCSx un i l . crónica sobre e l c rec i -

miento h iper t ró f ico glandular dependientes dela TSH ci rculante. Cuando l a

función h ipof isar ia es normal, l a inervación simpática e jercer ía una in f l uen-

c i a inh ib i to r ia en el crecimiento inducido por TSH. Por o t ra parte en ausen-

c ia de TSH (hipof isectomía), la inervación resu l ta imprescindible para mante-

ner e l trofismo glandular y e i crecimiento compensatorio s i n provocar cambios

en los ya muy deprimidos niveles hormonales. La. Fig. 31 esquematiza los d is -

t i n t o s pasos seguidos en los experimentos mostrando, en cada caso, l os resul-

tados ponderales obtenidos.

S i bien ignoramos e l mecanismo por e l cual l a inervación desempeña un rol t ró f i co en ausencia de TSH debemos considerar, a l menos como pos ib i l i -

dad, l a part ic ipación de t ipo neural. Las neuronas del GCS podrían const i -

tuir l a Última estac i Ón de reelevo de un arco neural oriainado en el lóbulo

t i ro ideo cont ra la tera l que, invol ucraría l a médula espina1 y czntros cere-

FIGURA No 31: ESQUEMA DE LAS DISTINTAS INTERVENCIONES QUIRURGICAS.

G x ipsilateral

En este dibujo se esquematizan los distintos procedimientos quirúrgicos

seguidos con los resultados ponderales observados en cada caso.

Obsérvese la ampliación del fenómeno hipertrófico por desnervación sim-

pática cervical; y la atrofia que la misma operación provoca en los anima-

l es hi pof i sopri vos. ( G X = G C S ~ ) .

brales. La existencia de e s t e arco re f l e j o prodría s e r entonces responsable

del crecimiento hi pert róf i co en ausencia de 1 a pi t u i t a r i a . Al gunos t rabajos

neuroanatómicos c303-307), indican l a posible part ic ipación de centros cere-

brales en un control neural de l a h iper t ro f ia adrenal, ovárica y t e s t i c u l a r , pero no ex i s te informacisn con respecto a l a glándula t i ro ides . Anteriormen-

t e mencionamos l a coexistencia del neuropéptido Y y l a NE en los terminales simpáticos. Dicho neuropéptido u ot ras sustancias s in te t izadas por l a s neurg nas adrenérgicas, podrían s e r responsables de mantener e l trofismo glandular o bien modular l a expresión de un hipotét ico fac tor de crecimiento extrahipo- f i s a r i o , por ejemplo fac to r de crecimiento epidérmico (297), que se ha1 l a r í a presente en l a c i rculación.

Resumiendo, e l conjunto de nuestroi resultados para l o s experimentos crónicos, muestra un rol destacado de l a inervación simpática en l a regula-

ción t i ro idea , con presencia o ausencia de TSH ci rculante. Si bien es c ie r -

t o que l a GCSx bi l . t r ae aparejada mGl t i p l e s secuelas endócri nas, l os experi - mentos real izados parecen mostrar una naturaleza local del fenómeno,puesta de re l ieve en las carac te r ís t i cas i ps i l a te ra les de l a h iper t ro f ia ; es tos estudios sobre modulación neural del fenómeno hipert róf ico bien podrían. se rv i r de modelo o simplemente como un nuevo enfoque para e l estudio f is iopato ló- gico del bocio u o t ras disfunciones t i ro ideas.

E l último de los objet ivos que nos propusimos en esta Tesis cons is t ió en i den t i f i ca r y caracter izar , por métodos neuroquímicos,el as iento anatómi-

co de l os cuerpos neuronales y l a s vías de proyección postganglionares responsables de 1 a i nervación adrenérgi ca al t e r r i t o r i o t i roideo. Las GCSx u n i l . o su Dc (sección del TCC) , provocan una. brusca caída en el contenido i n t r a t i r o i - deo de NE (94%) en e l lóbulo afectado, con respecto al contra lateral in tac to . ~nálogamente, ambas operaciones hacen desaparecer l a captación neuronal de [ 3 ~ ] NE en 1 a t i ro ides . Los resultados neuroquímicos resul tan compati bles

con l a interpretación de que l os cuerpos neuronal es simpáticos, cuyos axones inervan adren$rgicamente l a t i ro ides , s e encontrarían alojados fuera del GCS (probablemente en e l GCM y/o GCI pero envían susaxones a t ravés del T C C ) .

La glándula pineal resu l ta afectada por l a GCSx uni l . mientras que l a Dc no

t iene ningún efecto , concordando a s í con l a demostración de dist r ibución neuronal par t i cu la r dentro del GCS (40). Como sost6n de nuestra interpretación,

estud ios h i s t o l ógicos sobre gatos y c~ne jos (308) (309), demuestran l a ex is-

tencia de f i b ras postganglionares en el TCC,parte de l as cuales se originan

en cuerpos neuronales ubicados en ese t rac to nervioso. Se ha ident i f icado

también en los conejos (310) un ganglio accesorio, alojado en e l TCC, que en-

vía sus axones al GCS. El t rabajo anatómico más exhaustivo hecho en l a r a t a

(311), apoyaría 1 a interpretación formulada, pues describe unos 300 cuerpos

neuronales alojados en el GCEI (85%) y en el GCI enviando sus axones, vía TCC,

hacia e l GCS. Estas f i b ras postganglionares penetran en el ganglio y s in

estab lecer s inaps is s e proyectan por e l NCE. Realizamos secciones quirúr-

gicas del NCE, l a les ión de es ta vía suprime l a captación de L3I-i] NE en e l

correspondiente lóbulo t i roideo i psi l a te ra l a l a operación (Fig. 29), s i n mo-

d i f i ca r l a captación de l a amina biógena en l a glándula pineal (Fig. 30). La

inclusión de es te dato a l os recabados anteriormente nos permitió concluir que: los cuerpos neuronales cuyas f ib ras postganglionares adrenérgicas iner-

van e l t e r r i t o r i o t i ro ideo s e encuentran alojados, muy probablemente, en el

GCM y GCI. Desde a l l í proyectan sus axones hacia e l GCS,abandonándolo s in

estab lecer s i napsi S , vía NCE. Los animal es hipofi soprivos proporcionaron

una confirmación adicional a l a h ipótes is del NCE como vía de proyección; l a

les ión de es te nervio (como antes l a GCSx unil') provoca una marcada involu-

ción del lóbulo t i ro ideo afectado, testimoniando a s í l a desnervación simpáti - ca del mismo.

Con l a nueva información que disponemos nos retrotraeremos nuevamente

a l a Introducción; l a Figura 8 i l u s t r a algunas áreas y est ruc turas comprendi-

das en el t e r r i t o r i o de inervación cervical (33). Podemos ahora, const i tuyen

do un aporte or ig ina l de nuestro t raba jo , ampliar e l esquema en Fig. 32 i n -

troduciéndole una vía de proyección precisa y caracter izadaala que se d i s t r i -

buye hacia e l complejo t i ro ides-parat i ro ides por e l NCE.

La ident i f icación y caracterización de es ta vía neural t i ene in teresan

t e s implicaciones que abren perspectivas a futuros estudios. Manipulación

y /o les iones local izadas sobre el NCE nos permitirán modificar l a información

neural que l lega a l a glándula t i ro ides s in a l t e r a r o t ras est ructuras, secue-

l a s insalvables producidas por l a GCSx. Del mismo modo manipulaciones del

NCI, l a o t ra vía de proyección mayor del GCS, serv i rán para e l aná l i s i s inver - so, modificación de l a inervación simpática sobre est ructuras cent ra les que

no afecten en forma neural d i rec ta a l a t i ro ides . Confiamos en que l a s desner-

vaciones quirúrgicas se lect ivas, efectuadas a d i s t i n tos tiempos, puedan cons-

t i tuir un modelo experimental de ut i l idad para nuevos aná l i s i s de l a part ic ipa - ción modulatoria del sistema simpático cervical en l a regulac4ón neuroendó-

c r i na.

FIGURA N o 32: PROYECCION DEL GCS A LA GLANDULA TIROIDES Y PARATIROIDES.

g Iándula pineal

vasos piates

plexo coroideo

parénqui ma cere brai

nervio carotideo interno

En este esquema se caracteriza l a vea de proyección simpática cervical

responsable de la inervación t i ro idea.

Los cuerpos neuronales se encuentran alojados en el GCN y el GCI y pro

yectan sus respectivos axones hacia el GCS. ~ l l í , s in establecer s inapsis,

l o abandonan vfa NCE. Compárese es te nuevo esquema propuesto con el de la

FIG. !lo 8.

V- CONSIDERACIONES FINALES

En e l epílogo de es ta Tesis podemos reafirmar 1 a val idez de l a idea

cent ra l a la cual pretendimos apor tar nuevas evidencias: La inervación sim-

pát ica cervical e je rce una inf luencia modulatoria sobre l a función del e j e

hipotálamo-hipdfiso-tiroideo.

Según 1 a c las i f icac ión seguida en l a Introducción, e l t i po correspon-

d iente a los fenómenos observados comprende l a categoría de modulación neuro-

hormonal. Durante el desarrol lo del t rabajo examinamos como l a manipulación

de l a inervación simpática inf luye marcadamente, tanto sobre el trofismo, co-

mo sobre l a función glandular en los d is t in tos modelos empleados para los

respectivos estudios.

Sin duda l a importancia del Sistema Simpático Cervical queda evidencia-

da en e l rol que desempeña sobre l a respuesta adaptat iva al f r í o , ya se t r a t e

de una acción centra l o per i fér ica sobre l a glándula t i ro ides o sobre ambos

niveles a l a vez; incógnita que intentaremos resolver en e l futuro.

Es precisamente l a ident i f icación de l a vía neural responsable de l a

inervación del t e r r i t o r i o t i ro ideo, un nuevo elemento interesante con que conta

mos para in ten ta r responder a l interrogante an te r io r . Por o t ra par te podremos,

como ya hemos .discutido, manipular las vías nerviosas cerv icales adecuadas

para obtener respuesta loca l , menos generalizada que l a s observadas hasta e l

momento.

Resulta posible que algunos de l os fenómenos descriptos en es ta Tesis,

estr ic tamente l a h iper t ro f ia compensadora, tenga alguna u t i l i dad teór ica o sir - van de referencia para enfocar problemas f is iopatológicos de l a glándula t i -

ro i des.

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