DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CARRION

Tec.Lab: Placido Santos Falcón

COMPONENTES EPIDEMIOLOGICOS DE LA ENFERMEDAD DE CARRION

HISTORIA

PERSONAJEs EMBLEMATICOs

DANIEL ALCIDES CARRION 1885

DR. A. BARTON 1909

CARACTERISTICAS MICROBIOLOGICAS Bartonellabacilliformis

•Bacilo Gram(-) pleomórfico•0.2-0.5 por 1-2um•Aeróbico, no fermentativo•Móvil,unipolar 2-16 flagelos•Intracelular de células endoteliales y

eritrocitos.•Coloración grosella o violeta con

Giemsa.

•Aislamiento en medios sólidos a partir de muestras clínicas.

•Requiere medios enriquecidos.

•Crecimiento lento

•Temperatura óptima 28ºC

•No reactiva a pruebas bioquímicas

CARACTERISTICAS MICROBIOLOGICAS Bartonellabacilliformis

A. Reacomodo Bacteriano-período asintomático (4-5días)

B.C. Inf. Cél endoteliales vasos capilares (Strong)-Siembra bact. al torrente sanguíneo-colonización eritrocitos maduros(desencadenantes sist. inmunológico, grado de invasividad)

D. Depresión sit. inmune(sobre infecciones) -Hiperplasia del reticulocito endotelial, linfadenomegalia y hepatoesplenomegalia. Liberación factor antigénico, hiperproliferación de células endoteliales ----formación de verrugas

PATOGENESIS Y FISIOPATOLOGIA

PRUEBAS DE DIAGNOSTI CO

ENFERMEDAD DE CARRION

DIAGNOSTICO DIRECTO MEDIANTE COLORACION GIEMSA

COLORACION GIEMSAFUNDAMENTO:

•Acción combinada de azul de metileno y eosina(efecto Romanowsky) naturaleza ácida o básica de estructuras celulares determina afinidad por los componentes del colorante policromático de Giemsa.

Ácidos nucleicos—coloración púrpura(azul de metileno)Hemoglobina-coloración rosada con eosina (ácida)

Otras estructuras se tiñen por combinación de ambos (neutrófilos)

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Resultados de lecturas repetibles y reproducibles

Coloración grosella(rojo cereza

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonellabacilliformis

EN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Microorganismos intracelulares

Posibilidades de error en gota gruesa

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE Bartonella bacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Ubicación dentro del eritrocito(central, bordes)

Dimensiones y morfología similar para cada forma bacteriana Cocos ligeramente ovalados individuales, pares o cadenas cortas Bacilos finos de bordes aguzados alargados, frecuentemente en V, individuales o grupos Cocobacilos cortos y gruesos

Morfología variable de acuerdo a la fase de la enfermedad

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON

GIEMSA

Número de microorganismos por eritrócito: Formas cocoides de 1 a 15 Bacilares de 1 a 8

Diferenciación con otras estructuras intraeritrocitarias

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS

CON GIEMSA

Diferenciación con otras estructuras intraeritrocitariasAplicación de criterios de identificación

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACION DE FORMAS DE

BartonellabacilliformisEN EXTENDIDOS SANGUINEOS COLOREADOS CON GIEMSA

Ausencia de refringencia, formas bacterianas no presentan brillo metálico

LECTURA DE LAMINAS COLOREADAS

Enfocar campos microscópicos de aprox.100 eritrocitos y contar el número de eritrocitos infectados.

Elevado% de eritrocitos infectados-lectura de 50campos microscópicos.

Escaso % de eritrocitos infectados lectura de 200 a + campos microscópicos

Negativo, no se observan eritrocitos infectados en 200 campos observados

REPORTE DE RESULTADOS

Los resultados positivos deben expresar:

Porcentaje de eritrocitos infectados.

La forma del microorganismo observado (bacilos, cocobacilos o cocos)Ejemplo: 85% forma bacilar, 1% forma cocoide.Ayuda diagnóstica importante

Otros: presencia de punteado basófilo, granulaciones tóxicas, alteraciones eritrocíticas.

CAUSAS DE ERROR EN EL DIAGNOSTICO DIRECTO

Extendido sanguíneo excesivamente grueso o muy fino

Inadecuada conservación de extendidos sanguíneos( luz, temperatura ,humedad ,polvo o insectos)

Tiempo de tinción insuficiente o muy prolongado.

Empleo de solución colorante excesivamente ácida o alcalina.

Presencia de precipitado, o utilización de colorante sin filtrar

Alteración de células sanguíneas por acción del anticoagulante.

Coloración de extendidos sanguíneos sin previa fijación.

Frotices sanguíneos almacenados por períodos prolongados

EXAMEN DIRECTOVENTAJAS Y DESVENTAJAS

No se requieren equipos sofisticados

Bajo costo

Requerimiento mínimo de insumos y reactivos.

Ejecución rápida

Procedimiento sencillo

Resultados inmediatos

Sensibilidad baja (frotis negativo no descarta la enfermedad)Fase aguda 36%, fase crónica ≤10%Especificidad 96%

Requiere personal capacitado.

Posibilidades de errores en la lectura Falsos positivos Falsos negativos

DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO POR CULTIVO OBTENCION DE MUESTRA

¿CUANDO SOLICITAR UN CULTIVO?

•Pacientes procedentes de zonas endémicas con signos y síntomas compatibles.

•Un examen directo negativo no descarta la Enfermedad.

•Diagnóstico diferencial.

•Paciente preferentemente sin tratamiento de antibióticos.

•Control de tratamiento antimicrobiano.

CULTIVO Bartonella bacilliformis

VENTAJAS

-Permite aislamientoagente etiológico.

-Mayor sensibilidad.

-Posibilita identificación posterior por PCR.

DESVENTAJAS

-Requiere personal entrenado.

-Equipamiento.

-Costo elevado.

-Resultados en 30 a 45 días.

OBTENCION DE OTRAS MUESTRAS CULTIVO

Material estéril rotulado para toma de muestra.

Desinfección minuciosa.

Biopsias de lesiones verrucosas o tejidos

LCR

Médula ósea

Otros fluidos orgánicos

MEDIO DE CULTIVO Bartonellabacilliformis

Pesar cantidades exactas.

Control de esterilidad sangre desfibrinada de carnero.

Control del pH de agua destilada y medio licuado.

Autoclavado.

Dispensar en cabina de bioseguridad.

Enriquecido con sangre sales y aminoácidos.

Medio bifásico favorece crecimiento bacteriano. Utilización de placas para sub cultivos

MEDIO DE CULTIVO Bartonella bacilliformis

•Medio bifásico

•Fase sólida: Agar Columbia 10% sangre carnero desfibrinada, ext. Levadura 0.25%

•Fase líquida: RPMI1640conL-glutamina y bicarbonato de Na

•Aplicación de procedimientos de control de calidad interno: esterilidad y viabilidad 28ºC, numeración lotes, etiquetado.

•Almacenamiento 4-8ºC.

MEDIO DE CULTIVO

Bartonellabacilliformis

•Muestra de sangre total en tubos vacutainer con anticoagulante.

•Aplicación de medidas de bioseguridad.

•Identificación de muestras.

•Homogenizar con el anticoagulante.

•Mantener de 4-8ºC

•Procesar dentro de los 7-14 días.

MEDIO DE CULTIVO

Bartonellabacilliformis

•Atemperar medios de cultivo bifásicos.

•Rotulación.

•Inoculación de 1cc de sangre total.

•Homogenizar.

•Incubar 28-30ºC.

•Revisión minuciosa cultivos en 72 hrs.

•Desarrollo contaminantes, repetir cultivo.

•Medidas bioseguridad.

CARACTERIZACION BACTERIOLOGICA Bartonella bacilliformis

Desarrollo bacteriano a partir de 5-7 días, hasta 15 días.

Colonias no hemolíticas, pequeñas, translúcidas, brillantes.

Fase líquida no presenta turbidez

Sub-cultivos en placas de agar sangre

Desarrollo 3-4 días

Colonias con las mismas características culturales.

Sub-cultivos ciegos, aumentan sensibilidad.

Cultivos negativos, observación tiempo máximo 30 días

CARACTERIZACION BACTERIOLOGICA Bartonella bacilliformis

Homogenizar colonias en SSF estéril.

Coloración de Gram modificada.

Lectura con objetivo de inmersión.

Bacilos finos gram negativos claramente visibles en cultivos jóvenes.

Pruebas moleculares confirmación ( PCR )

Crio preservación cepas confirmadas

RESULTADOS

AVANCES EN EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE Bartonella bacilliformisIMPLEMENTACION DE LA VIGILANCIA DE LA SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

MEDIANTE TRES METODOS DE LABORATORIO

20% cepasResistentes aCiprofloxacina2%cepasResistentes a Cloranfenicol