18/09/2012

1

Data Tópico/Objetivo

Set

embr

o 18 Gastrulação20 Discussão periódicos25 Eixo DV27 Discussão periódicos

Out

ubro

2 Neurulação; Definição do campo neural

4 Discussão periódicos

9 Desenvolvimento do Membro

11Não haverá aula

1518 Discussão periódicos23 Genes Hox25 Discussão periódicos30 Prova escrita

Nota: (apresentação x 1 +participação em discussão x1 + prova escrita x 2)/4A= 8-10B=6-8C=5-6

http://tinyurl.com/ireneyan

Evaluating a paper

A thorough understanding and evaluation of a paper involves answering several questions:

a. What questions does the paper address?

b. What are the main conclusions of the paper?

c. What evidence supports those conclusions?

d. Do the data actually support the conclusions?

e. What is the quality of the evidence?

f. Why are the conclusions important ?

http://www.biochem.arizona.edu/classes/bioc568/papers.htm

Type of research Question asked:

Descriptive What is there? What do we see?

ComparativeHow does it compare to other organisms? Are our findings general?

Analytical How does it work? What is the mechanism?

1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?

2. O que estas células PODEM ser?

3. QUANDO elas decidem o que vão ser?

4. COMO ocorre esta decisão?

5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?

18/09/2012

2

Descrição Expressão Cirurgia Descrição

•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR

Cirurgia

•Cultura•Transplantação•Ablação

Expressão

•SUPERexpressão

•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação

1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?

2. O que estas células PODEM ser?

3. QUANDO elas decidem o que vão ser?

4. COMO ocorre esta decisão?

5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?

Como seguir uma célula entre várias?

Gilbert 8th Edition

A injeção de corante flourescente permite acompanhar o destino celular

Gilbert 8th Edition

A injeção de corante flourescente permite acompanhar o destino celular

18/09/2012

3

Injeção de corante fluorescente(Dale e Slack, 1987;Lane e Sheets, 2000)

Mapa do destino = Fate MapInjeção de Corante Fluorescente

Hibridação in situ

RT-PCR= Reverse-TranscriptasePCRConversão de RNA em cDNA (DNA complementar)

Descrição

•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR

Cirurgia

•Cultura•Transplantação•Ablação

Expressão

•SUPERexpressão

•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação

18/09/2012

4

uper Expressão Gênica!!!!

•Microinjeção de RNA

•Eletroporação

•Infecção

•Transgênese

Microinjeção de RNA

Eletroporação Transgênicos por integração no prónucleo

Descrição

•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR

Cirurgia

•Cultura•Transplantação•Ablação

Expressão

•SUPERexpressão

•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação

RNA antisenso

RNA mensageiro

DNA

Inibição da Tradução

RNA antisenso inibe a tradução

18/09/2012

5

RNAi1. RNA dupla fita (dsRNA) reconhecido pelo complexo enzimático DICER

2. Clivagem do dsRNA em siRNA (silencing RNA)

3. siRNA utilizado como ‘molde’ pelo complexo RISC para reconhecimetdo do RNA-alvo a ser clivado

Knockout 1) Transfecção

Linhagemda massa celular interna

Massa Celular Interna

Blastocele

Trofoblasto

Zona Pelúcida

Ao final de várias mitoses, distinguem-se duas populações de células:•Massa Celular Interna•Trofoblasto

Embrião Propriamente Dito

Porção Embrionária da Placenta

Porção Embrionária da Placenta

Knockout : 2) RecombinaçãoO Knockout, ao contrário da transgênese, requer recombinação

Knockout : 3) Seleção

G418Neomicina

Knockout : 4) Barriga de aluguel

18/09/2012

6

Knockout : 5) Quimeras Transgênese: 6) Cruzamento

Descrição

•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR

Cirurgia

•Cultura•Transplantação•Ablação

Expressão

•SUPERexpressão

•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação

1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?

2. O que estas células PODEM ser?

3. QUANDO elas decidem o que vão ser?

4. COMO ocorre esta decisão?

5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?

•Transplantação: troca de microambiente/mudança de contextoO transplante de vesícula óptica para o ectoderma do tronco em anfíbios gera cristalino ectópicos.O ectoderma do tronco tem potencial de formar crist alino.

doador

aceptor

18/09/2012

7

Os genes A,B e C contribuem para o desenvolvimento de vísceras: Sua relação pode ser resumida como:

A → B -|C -| formação de vísceras

2) Expressão de A iráa) estimular formação de vísceras b) inibir formação de vísceras

3) Num animal mutante defeituoso para o gene B (não expressa), o embrião irá a) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

4) Num animal com ganho de função de B, o mutante iráa) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

5) Num animal com perda de função de C, o mutante iráa) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

Você quer fazer um camudongo knockout. O gene normal tem 2 exons e um intron, como demonstrado abaixo. Qual das construções abaixo seria o ideal para fazer o knockout?

TK= gene da timidina quinase (necessário para o processo de seleção)

neoR= gene de resistência a neomicina (necessário para o processo de seleção)

Os genes A,B e C contribuem para o desenvolvimento de vísceras: Sua relação pode ser resumida como:

A → B -|C -| formação de vísceras

2) Expressão de A iráa)estimular formação de vísceras b) inibir formação de vísceras

3) Num animal mutante defeituoso para o gene B (não expressa), o embrião irá a) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

4) Num animal com ganho de função de B, o mutante iráa) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

5) Num animal com perda de função de C, o mutante iráa) carecer de vísceras

b) desenvolver excesso de vísceras

Você quer fazer um camudongo knockout. O gene normal tem 2 exons e um intron, como demonstrado abaixo. Qual das construções abaixo seria o ideal para fazer o knockout?

TK= gene da timidina quinase (necessário para o processo de seleção)

neoR= gene de resistência a neomicina (necessário para o processo de seleção)

It is not birth, marriage or death, but gastrulation, which is truly the most important time in your life

Lewis Wolpert (1986)

O evento mais importante da sua vidanão é o seu nascimento, seu casamento, sequer a sua

morte. É a Gastrulação.(e o aprendizado sobre este)

18/09/2012

8

•Definição dos Folhetos Embrionários:

Ectoderma,Mesoderma,Endoderma

•Requer um rearranjo celular extenso :

MOVIMENTOS MORFOGENÉTICOS

•Requer sinalização inter e intracelular

GRADIENTES MORFOGENÉTICOS

GASTRULAÇÃO

HoloblásticoRadial(ANFÍBIOS)

HoloblásticoRotacional(MAMÍFEROS)

MeroblásticoDiscoidal(RÉPTEIS, PEIXES,AVES)

CLIVAGEM EM VERTEBRADOS

*

dorsalventral

http://www.youtube.com/watch?v=c5E1Z4KuDCU&feature=fvwrel

18/09/2012

9

1. Formação de células-garrafa2. Invaginação do lábio do blastóporoDORSAL3. Invaginação do lábio do blastóporo ventral4. Deslocamento da Blastocele5. Formação to Tampão Vitelínico e do Arquêntero

O lábio do blastóporo é formado por células-garrafa

Mudança de FORMA CELULAR

O Arquêntero é formado pela fenda entre as células que involuem e as células vitelínicas

Fig 10.7

EctodermaMesodermaEndoderma

18/09/2012

10

Formação do EPI e HIPOblasto

Stern et al.

Início da linha primitiva a partir da Zona Marginal Posterior

Gastrulação:Formação do Ectoderma, Mesodermae Endoderma a partir do Epiblasto e Hipoblasto

A mesoderma se dá por DELAMINAÇÃO de células do Epiblasto no nó de Hensen e na linha primitiva

As células que ingressam pela linha primitiva têm dois destinos:Espaço entre Epi e HipoblastoDeslocam e substituem o Hipoblasto secundário, formando o endoderma definitivo

18/09/2012

11

As células do Epiblasto que migram

Para o espaço “do meio”: MesodermaPara a camada hipoblástica: Endoderma

As células do Hipoblasto são deslocadas lateralmente para formarem a VESÌCULA VITELÌNICA

http://www.youtube.com/watch?v=x-p_ZkhqZ0M&feature=related

As células do futuro mesoderma preenchem o espaço entre o EPI e HIPOblasto EXCETO na Membrana BucofaríngeaMembrana Cloacal

** *

* *

Anterior

Posterior

Yang, X., D. Dormann, A. E. Münsterberg and C. J. Weijer. 2002. Dev. Cell 3: 425–437.

Região mais anterior da linha Região mais posterior da linha

18/09/2012

12

As células da região mais anterior da linha primitiva formam o endoderma anterior e o mesoderma pré-cordal

As células da região mediana da linha primitiva formam a notocorda, e estruturas mesodérmicas laterais

As células da região mediana da linha primitiva formam a notocorda, e estruturas mesodérmicas laterais

As células do EPIBLASTO que migraram formam o• Mesodermana blastocele•Endodermaquando se inserem no Hipoblasto

As que permanecem na superfície formam a Ectoderma

www.stemcells.nih.gov

O blastocisto de mamífero contêm MASSA CELULAR INTERNA que formará o embrião propriamente dito

e o TROFOECTODERMA, que formará os anexos embrionários

18/09/2012

13

http://www.youtube.com/watch?v=9XV9c-97Wc4created by Annie Poon in collaboration with Mary Madabhushi

Movimentos Morfogenéticos : a força motriz da gastrulação O QUE DEFINE AS CÉLULAS DO ORGANIZADOR?

18/09/2012

14

O que direciona a migração celular? Como que termina a gastrulação?

Café... Café...

Cabou!!

http://tinyurl.com/ireneyan