Prof. Ulisses Cesar de Araujo

Dados analíticos não confiáveis podem conduzir a decisões desastrosas e a prejuízos financeiros irreparáveis.

Para garantir que um novo método analítico gere informações confiáveis e interpretáveis sobre a amostra. Ele deve sofrer uma avaliação denominada validação.

INTRODUÇÃO

DEFINIÇÕES DE VALIDAÇÃO “A validação deve garantir, através de estudos

experimentais, que o método atenda às exigências das aplicações analíticas, assegurando a confiabilidade dos resultados” (ANVISA).

“Confirmação por testes e apresentação de evidências objetivas de que determinados requisitos são preenchidos para um dado uso intencional” (ISO/IEC 17025).

“Avaliação sistemática de um procedimento analítico para demonstrar que está sob as condições nas quais deve ser aplicado”(WHO).

Validação no laboratórioValidar um método novo que tenha sido desenvolvido localmente

Verificar se um método adotado de outras fontes está bem aplicado

Aplicações

Etapas preliminares do desenvolvimento de uma metodologia

Publicação de artigos para revistas científicas

São avaliadas todas as características de desempenho da validação da metodologia, porém sem verificar a reprodutibilidade.

Etapas da Validação

Validação Completa

Envolve todas as características de desempenho.

Estudo interlaboratorial - utilizado para verificar como a metodologia se comporta com uma determinada matriz em vários laboratórios, estabelecendo:

-reprodutibilidade da metodologia e-incerteza expandida associada à metodologia como um todo.

Só assim a metodologia pode ser aceita como uma metodologia oficial para uma determinada aplicação

Protocolos internacionalmente aceitos têm sido estabelecidos para a validação completa, mais precisamente o Protocolo Harmonizado Internacional e o procedimento ISO(“International Standard Organization”)

Estes protocolos requerem um número mínimo de laboratórios e materiais testes para serem incluídos no estudo interlaboratorial para validação completa do método analítico.

No Brasil os estudos de comparações

interlaboratoriais são coordenados pelo Instituto de Pesquisas Tecnológicas (IPT), através do Programa Brasileiro de Metrologia em Química.

PARÂMETROS ANALÍTICOS PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS Os parâmetros analíticos normalmente

encontrados para validação de métodos de separação são:

seletividade; linearidade e faixa de aplicação; precisão; exatidão; limite de detecção; limite de quantificação e robustez.

SELETIVIDADE A seletividade de um método instrumental de separação é

a capacidade de avaliar, de forma inequívoca, as substâncias em exame na presença de componentes que podem interferir com a sua determinação em uma amostra complexa.

A seletividade avalia o grau de interferência de espécies como outro ingrediente ativo, excipientes, impurezas de produtos de degradação, bem como outros compostos de propriedades similares que possam estar, porventura, presentes.

A seletividade garante que o pico de resposta seja exclusivamente do composto de interesse.

Se a seletividade não for assegurada, a linearidade, a exatidão e a precisão estarão seriamente comprometidas.

Exemplos em Espectrofotometria e Cromatografia Líquida

Avaliação da Seletividade

Analisar o branco (matriz sem o analito) e comparar com a matriz adicionada do padrão do analito, verificando se tem interferente (na cromatografia, compostos com mesmo TR; no caso da Espectrometria de Massas, compara-se o espectro do pico de interesse com o padrão).

Quando não tem uma matriz isenta do analito, utiliza-se o método de adição-padrão. Caso as duas curvas analíticas, sem matriz e com matriz forem paralelas, não há interferência de matriz, então o método é seletivo.

Linearidade

A linearidade corresponde à capacidade do método em fornecer resultados diretamente proporcionais à concentração da substância em exame, dentro de uma determinada faixa de aplicação.

A partir da equação da reta é possível determinar a concentração:

Y=a.x + bAbs= a.C + bQuando b=0, Abs= a.Ca=inclinação da reta b=valor de y quando x=0

Linearidade

Precisão e Exatidão

Figura de alvos

Limite de detecção e Limite de quantificação Figuras

Robustez

Quando o método é aplicado em outros laboratórios e são obtidos resultados dentro da faixa de concentração esperada.