به نام خداوند بخشنده مهربان

, بررسی آزمایش انجام صحیح روشکیفیت ارزیابی و خطا ایجاد عوامل

االیزا های کیت

ایمونواسی یا سنجش ایمنی

اندازه گیری یا شناسایی مواد خاص بیولوژیک یا به عبارتی آنتی ژن یا هاپتن

های خاص با استفاده از آنتی بادی اختصاصی ضد آنها.

انواع واکنشهای سنجش ایمنی

، نشاندار: آنتی ژن یا آنتی بادی به کمک موادی مثل رادیواکتیو ، لومینسانس ,RIA, EIAفلورسانس یا آنزیم نشاندار میشوند. مثال:

Immunofluorescence

غیر نشاندار:کمپلکس بزرگ و قابل مشاهده ای از آنتی ژن و آنتی بادی ایجادمیشود. مانند واکنشهای رسوبی، آگلوتیناسیون، توربیدومتری

استفاده از تست های آزمایشگاهی در تشخیص عامل بیماری اهمیت بهسزایی داشته و اتخاب مناسب کیت ها با توجه به حساسیت و ویژگی مهم

است

حساسیت بالینی: در صد احتمالی که یک روش آزمایش نتایج بیماران را مثبتجواب دهد.

ویژگی بالینی: در صد احتمالی که یک روش آزمایشگاهی نتایج افراد سالم رامنفی جواب دهد.

بررسی کيفيت کيت ها

TPSensitivity = -------------

TP+FN TN

Specificity = --------------* 100

TN+FP

TP Predictive value of positive= -----------* 100

TP+FP

TNPredictive value of Negative= ------------* 100 TN+FN

*100

معیارهای آنالیتیکال

حساسیت(sensitivityکمترین میزان آنالیت قابل اندازه گیری : )

(ویژگیspecificity توانایی آزمایش در اندازه گیری یا شناسایی آنالیت مورد:)نظر در مجموعه ای از مواد یا آنالیت های ناهمگون

(دقتprecision.قدرت تکرار پذیری نتایج به دست آمده از یک نمونه :)intra-assay-دقت درون سنجی))

(inter-assay-دقت میان سنجی)

(صحتaccuracy میزان نزدیک بودن میانگین آنالیت اندازه گیری شده به:)مقدار واقعی آن آنالیت.

انواع تستهای ایمونولوژیک مورد استفاده برای تشخیص بیماری های عفونی

کمی

نیمه کمی

کیفی

تفسیر نتایج کیت های کیفی

Cut off

Mean Ratio )MR Value(

Analytical sensitivity= lower detection limit

HBs Ag 0.5 ng/ml for (ad) and (ay)

بروشور

مطالعه دقیق بروشور اولین و مهمترین گام در انجام تست االیزامیباشد.

آب مقطر

استفاده از آب مقطر تازه چک کردنpHمحلول شستشو

دما

دما یک عامل مهم در واکنش دهی و تکرار پذیری االیزاست

لزوم رساندن کیت به دمای اتاق

10 برابر تغییر در فعالیت آنزیم2 درجه تغییر در دما معادل

کریستالیزه شدن برخیstop solutionها

دمای سطح میز کار

قرار دادن پلیت ها در مرکز انکوباتور

خارج کردن پلیت از کیسه مخصوص،پس از رسیدن به دمای اتاق

دمای انکوباسیون

زمان انکوباسیون

در برخی کیتهاTMB درDMSO حل شده ، و دمای ذوبDMSO، 18 درجه

درجه برسد و قبل 25-20سانتیگراد است.پس محلول کروموژن باید به دمای

از استفاده خوب مخلوط شود.

برچسب

لزوم استفاده از برچسب •-ممانعت از تبخیر1 -ممانعت از ورود گرد و غبار به چاهک2

برچسب روی پلیت را در هر مرحله از انکوباسیون تعویض نمایید•

هرگز پلیت را با فویل نپوشانید.•

شستشو

حجم محلول مورد استفاده

طریقه رقیق سازی

چک کردن دستگاه شستشو قبل از شروع کار

.اهمیت مرحله شستشو بخصوص در تست های بیماریهای عفونی بیشتر است

Tapping

هنگامیکه پس از شستشو پلیت را روی دستمال میکوبید از عدم وجود هر لکه

رنگی روی دستمال مطمئن شوید.

تاریخ انقضاء

تاریخ انقضای کیت باز شده الزاما با تاریخ انقضای درج شده بر کیت منطبقنیست.

.زمان باز کردن کیسه پلیت را روی همان کیسه قید کنید

(drift)رانش

رانش عبارت است از اختالف در غلظت به دست آمده از یک نمونه واحد در.موقعیت های مختلف یک پلیت در یک نوبت کاری

.مهمترین علت رانش زیاد بودن تعداد آزمایش در یک نوبت کاری است

.هنگام افزودن محلول به اولین چاهک زمان را اندازه گیری کنید

نقص در سیستم شستشو

عدم آمادگی معرف های کیت از نظر درجه حرارت ،قبل از استفاده

کنترل و استاندارد

حتما ابتدا کنترل منفی را در چاهک بریزید

اگر اشکالی در نتایج کنترل یا منحنی استاندارد بود،حتما اقدام اصالحی را انجام داده و یادداشت نمایید.

از توجه شما متشكرم