รัชนีกร กัลล์ประวิทธ์ 2557
DESCRIPTION
Protein Synthesis : Translation and Posttranslational Modifications. รัชนีกร กัลล์ประวิทธ์ 2557. Protein synthesis. Translation คล้ายคลึงกันทั้งใน prokaryote และ eukaryote สารตั้งต้น คือ กรดอะมิโน 20 ชนิด ชนิดของโปรตีนที่สังเคราะห์ ถูกกำหนดโดย mRNA - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
รั�ชนี�กรั ก�ลลปรัะวิ ทธ์2557
Protein synthesis
Translation
คล�ายคล�งก�นีท��งในี prokaryote และ eukaryote
สารัตั้��งตั้�นี ค�อ กรัดอะมิ โนี 20 ชนี ด
ชนี ดของโปรัตั้�นีท�!ส�งเครัาะห์ ถู%กก&าห์นีดโดย mRNA
การัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีเรั !มิจากจ(ดเรั !มิตั้�นีทางด�านี NH2-terminal ไปส �นีส(ดท�! COOH-terminal
ในีมินี(ษยสามิารัถูพบการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีได�ท��งในี cytosol, RER และ mitochondria
2
ป-จจ�ยท�!ใช�ในีการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี L-amino acid
t-RNA
Genetic code
Aminoacyl-tRNA synthetase
ribosome
3
Amino acid4
Transfer RNA (tRNA)
มิ�ปรัะมิาณ 50 ชนี ด โดยกรัดอะมิ โนีบางชนี ดมิ� tRNA ท�!เป/นีค%0มิากกวิ0า 1 ชนี ด
Clover leaf ห์รั�อ L-shape
tRNA จะมิ�เบส 3 ตั้�วิท�! complementary ก�บ codon บนี mRNA เรั�ยกเบส 3 ตั้�วินี��วิ0า anticodon
Wobble position
5
Transfer RNA (tRNA)6
Wobble position
Wobble position (base) ค�อ เบสท�!อย%0ตั้&าแห์นี0ง 3’ ของ codon และเบสตั้&าแห์นี0ง 5’ ของ anticodon ซึ่�!งโดยท�!วิไป การัจ�บค%0ก�นีของเบสค%0นี��อาจไมิ0เป/นีไปตั้ามิกฎท�!วิไปของการัจ�บค%0
การัมิ� wobble base ท&าให์� tRNA 1 ชนี ด จ�บก�บ codon ของ mRNA ได�มิากกวิ0า 1 codon
5’ base of anticodon
3’ base of codon
CAUGI
GU
A or GC or U
U or C or A
7
Genetic code
U C A G
UUC
UUU P
he
UCU
UCCUCAUCG
Ser
UAUUACUAAUAG
TyrST
OP
UGUUGCUGAUGG
CysST
OPUUAUUG
Leu
CUU
CUCCUACUG
Leu
AUUAUCAUA
GUUGUA
GUG
GUC
lleMet
Val
CCUCCCCCACCGACUACCACAACGGCU
GCCGCAGCG
Pro
Thr
Ala
CAUCAC
CAACAGAAUAACAAAAAGGAUGACGAA
GAG
Asn
His
Gln
Lys
Asp
Glu
CGUCGCCGACGG
GGU
GGC
GGA
GGG
AGUAGCAGAAGG
Arg
Ser
Arg
Gly
AUG
Second position
Th
ird
po s
i tio
n
Fir
st p
osit
ion
UCAGUCAGUCAGUCAG
U
C
A
G
Trp
8
Genetic code
รัห์�สพ�นีธ์(กรัรัมิ
แตั้0ละรัห์�สปรัะกอบด�วิย nucleotide 3 ตั้�วิ เรั�ยงตั้0อก�นี เรั�ยกวิ0า triplet code ห์รั�อ codon
ส !งมิ�ช�วิ ตั้ท(กชนี ด ท��ง prokaryote และ eukaryote ใช� genetic code เด�ยวิก�นี (ยกเวิ�นีในี mitochondria ของมินี(ษยมิ�รัห์�สบางรัห์�สตั้0างออกไป ) จ�งอาจเรั�ยกวิ0า universal genetic code
Genetic code บนี mRNA จะมิ�แตั้0ละ codon เรั�ยงตั้0อก�นีไป โดยไมิ0มิ�การัเวิ�นีวิรัรัค (commaless) และไมิ0ซึ่�อนีก�นี (non-overlapping)
9
Genetic code
รัห์�สพ�นีธ์(กรัรัมิมิ�ท��งห์มิด 64 รัห์�ส (43 = 64) โดย 61 รัห์�สจะเป/นีรัห์�สส&าห์รั�บกรัดอะมิ โนี 20 ชนี ด ท�!เห์ล�อ 3 รัห์�ส เป/นีรัห์�สส&าห์รั�บห์ย(ดการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี กรัดอะมิ โนีส0วินีให์ญ่0จะมิ�รัห์�สพ�นีธ์(กรัรัมิมิากกวิ0า 1 รัห์�ส เรั�ยก degenerate มิ�กรัดอะมิ โนี 2 ชนี ด (methionine และ tryptophan) ท�!มิ�รัห์�สพ�นีธ์(กรัรัมิ
รัห์�สเด�ยวิ
AUG เป/นีรัห์�สพ�นีธ์(กรัรัมิส&าห์รั�บ methionine และเป/นีรัห์�สเรั !มิตั้�นีการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี เรั�ยกวิ0า initiation codon
UAA, UAG และ UGA เป/นีรัห์�สท�!ห์ย(ดการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี เรั�ยกวิ0า nonsense (stop) codon
1
0
Gene mutation & protein synthesis
Regulatory element mutation : ท&าให์�การัเก ด transcription เปล�!ยนีแปลง (เพ !มิข��นี/ลดลง ) ส0งผลให์�ปรั มิาณของโปรัตั้�นีเปล�!ยนีไป
Structural gene mutation : ท&าให์�เก ดการัเปล�!ยนีแปลงตั้0าง ๆ ด�งนี�� Missense mutation Nonsense mutation Chain termination (sense) mutation Splicing mutation Silent mutation Frameshift mutation
1
1
Structural gene mutation
Missense mutation : โปรัตั้�นีมิ�กรัดอะมิ โนีเปล�!ยนีไปCAU (His) CAG (Gln)
Nonsense mutation : โปรัตั้�นีส��นีลง (truncated polypeptide chain)
CGA (Arg) UGA (stop)
Sense mutation : โปรัตั้�นียาวิข��นีUAA (stop) UAC (Tyr)
1
2
Structural gene mutation
Silent mutation
AAA (Lys) AAG (Lys)
Frameshift mutation
C C A C A G U G G A G U C G A C A U U
C C A C A G U G G A A G U C G A C A U
Normal 5'
Mutant 5'
(base insertion )
Pro
GlnPro Trp Ser Arg His
Gln Trp Lys Ser Thr
3′
3′
1
3
Aminoacyl-tRNA synthetase
ท&าห์นี�าท�!จ�บค%0กรัดอะมิ โนีก�บ tRNA ท�!เป/นีค%0ก�นี (cognate tRNA) เรั�ยกข��นีตั้อนีนี��วิ0า activation of amino acid
amino acid + ATP + tRNA aminoacyl-tRNA + AMP + PPi
PPi 2Pi
ขบวินีการันี��อาศั�ย Mg2+ เป/นี cofactor และตั้�องการั ATP (2 ATP)
เอนีไซึ่มินี��มิ� 20 ชนี ด แตั้0ละชนี ดจ&าเพาะก�บกรัดอะมิ โนีแตั้0ละตั้�วิ
1
4
Aminoacyl-tRNA synthetase
การัจ�บก�นีของกรัดอะมิ โนีก�บ tRNA เก ดจาก α-COOH group ของ กรัดอะมิ โนีก�บ 3’-OH group ของ tRNA จ�บก�นี เก ดเป/นี high energy ester bond ซึ่�!งพล�งงานีของพ�นีธ์ะนี��จะใช�ในีการัส�งเครัาะห์ peptide bond ตั้0อไป
เอนีไซึ่มินี��ย�งสามิารัถู proofreading ตั้รัวิจสอบ aa-tRNA ท�!เก ดข��นี โดยถู�า aa-tRNA มิ�โครังสรั�างท�!ผ ด เอนีไซึ่มิจะสลาย aa-tRNA กล�บเป/นีกรัดอะมิ โนีและ tRNA
1
5
Ribosome
ตั้&าแห์นี0งท�!เก ดการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี
ปรัะกอบด�วิย 2 subunits (small & large subunit)
large subunit ปรัะกอบด�วิย P site : เป/นีบรั เวิณท�!เก ดสาย polypeptide A site : เป/นีบรั เวิณท�! aa-tRNA มิาเกาะ
Prokaryotic ribosome : 70S (50S & 30S)
Eukaryotic ribosome : 80S (60S & 40S)
1
6
Process of translation
Initiation
Elongation
Termination
1
7
Initiation
การั identify จ(ดเรั !มิตั้�นีของ coding sequence บนี mRNA (ซึ่�!งก7ค�อ codon AUG ตั้�วิแรักจากด�านี 5’)
ป-จจ�ยท�!ใช�ในีข��นีตั้อนี initiation mRNA Met-tRNA (ในี prokaryote ใช� formyl methionyl-tRNA) ribosome initiation factors (IF) GTP ATP
1
8
Process of initiation (eukaryotes)
eIF2a จ�บก�บ GTP และ Met-tRNAi ได�เป/นี ternary complex
Ribosome แยกเป/นี 2 subunit โดย 40S subunit รัวิมิก�บ eIF3, ternary complex และ eIF4c ได�เป/นี eIF2a.Met-tRNAi.GTP, eIF3.40S, eIF4c complex
complex นี��จะจ�บ mRNA ทางด�านี 5’ ได�เป/นี preinitiation complex ซึ่�!งตั้�องอาศั�ย ATP และ IF ในีการัอ0านีรัห์�สจากด�านี 5’ ไปด�านี 3’ จนีถู�ง codon AUG ช(ดแรัก
1
9
Process of initiation (eukaryotes)
anticodon ของ tRNA เก ด base pairing ก�บ AUG ของ mRNA ท&าให์� GTP ถู%กเปล�!ยนีเป/นี GDP
IF ตั้0าง ๆ และ GDP ถู%กปล0อยออกมิา และ 60S subunit ของ ribosome เข�ามิารัวิมิ เก ดเป/นี initiation complex
2
0
2
1
Process of initiation (prokaryotes) มิ�ล&าด�บของพ วิรั�นีนี วิคล�โอไทดท�!เรั�ยกวิ0า Shine-Dalgarno
sequence อย%0ปรัะมิาณ 10 นี วิคล�โอไทด ทางด�านี upstream ของ AUG
IF ตั้0าง ๆ นี�อยกวิ0า ในี eukaryote
AUG3' mRNA5'
Prok. Shine-Dalgarno sequence ( 10 nt. upstream ของ AUG )initiation complex อย%0ท�! P site ของ ribosome
2
2
Elongation
เก ดข��นีห์ล�งการัเก ด initiation complex
ribosome จะตั้0อสาย peptide ให์�ยาวิข��นีโดยการัอ0านี codon บนี mRNA ไปเรั�!อย ๆ จนีถู�ง termination codon
ป-จจ�ยท�!ใช� ค�อ initiation complex aminoacyl-tRNA ท�!รัวิมิก�บ eEF1α และ GTP เป/นี complex elongation factors (EF) GTP
2
3
Process of elongation
eEF-1α ท�!จ�บก�บ GTP จะพา aa-tRNA ไปรัวิมิก�บ initiation complex ท�! A site
เก ด base pairing รัะห์วิ0าง base ของ codon บนี mRNA ก�บ anticodon บนี aa-tRNA ท&าให์� eEF-1α ก�บ GTP เปล�!ยนีเป/นี GDP. eEF-1α ตั้0อมิา GDP ห์ล(ดออกจาก ribosome ปล0อย aa-tRNA ไวิ�ท�! A site ของ ribosome
peptidyl transferase ในี ribosome สลาย ester bond รัะห์วิ0างกรัดอะมิ โนีก�บ tRNA ท�! P site แล�วินี&า α-COOH group มิาตั้0อก�บ α-NH2 group ของกรัดอะมิ โนีอ�กตั้�วิท�! A site
2
4
Process of elongation
เก ด translocation ย�าย peptidyl-tRNA จาก A site มิาท�! P site โดยอาศั�ย eEF-2 (translocase) และ GTP
deacylated tRNA จะเคล�!อนีท�!จาก P site ไป E site
เมิ�!อ A site วิ0าง aa-tRNA ตั้�วิให์มิ0จะเข�ามิาจ�บ และเก ดขบวินีการัตั้0าง ๆ ด�งท�!กล0าวิมิาให์มิ0
2
5
Process of elongation2
6
Termination
เก ดเมิ�!อ ribosome ส�งเครัาะห์ peptide จนีมิาถู�ง termination codon (UAA, UAG ห์รั�อ UGA)
eRF และ GTP จะจ�บท�! A site ปล0อย deacylated tRNA จาก E site ปล0อย peptide ท�!ส�งเครัาะห์ได�ออกจาก ribosome
2
7
Process of termination2
8
Energy requirement for protein synthesis
Aminoacylation of tRNA
ATP AMP + Ppi
Binding of Met-tRNAi to P site
Aminoacyl-tRNA binding to A site
Translocation
Termination
2
9
Polyribosome (polysome)
mRNA สายเด�!ยวิแตั้0มิ� ribosome เกาะอย%0ห์ลายกล(0มิ
เก ดจากเมิ�!อ ribosome เรั !มิส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีไปแล�วิ ribosome ตั้�วิให์มิ0จะเรั !มิส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีอ�กโมิเลก(ลได�โดยไมิ0ตั้�องรัอให์� ribosome ตั้�วิแรักส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีจนีจบสายก0อนี
การัมิ� polyribosome ท&าให์�เซึ่ลลส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีได�เรั7วิข��นี
3
0
Polyribosome 3
1
Inhibitors of protein synthesis affect on prokaryotes : streptomycin,
tetracycline, chloramphenicol & erythromycin
affect on eukayotes : cycloheximide & diphtheria toxin
affect both prokaryotes & eukaryotes : puromycin
3
2
Inhibitors of protein synthesis
Inhibitors Mechanism of actionstreptomycin binds to 30 s ribosomal subunit,
preventing formation of the initiation complex
tetracycline binds to 30 s ribosomal subunit, inhibits binding of aa-t RNA to A site
chloramphenicol
inhibits peptidyl transferase activity of 50s ribosomal subunit
erythromycin binds to 50 s ribosomal subunit, prevents translocation
cycloheximide inhibits peptidyl transferase in eukaryotes
diphtheria toxin inhibit translocation of peptidyl-tRNA from A to P site
puromycin prematurely terminates synthesis
3
3
Protein folding
การัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นี ท&าให์�เก ด 1° structure ของโปรัตั้�นี
ส&าห์รั�บการัเก ด 2° และ 3° structure โปรัตั้�นีบางชนี ดสามิารัถูเก ดได�เอง (self-assembly) แตั้0โปรัตั้�นีบางชนี ดตั้�องอาศั�ยโปรัตั้�นีชนี ดอ�!นีเป/นีตั้�วิช0วิย เช0นี
molecular chaperone (heat shock protein ) ป8องก�นีการัเก ดโครังสรั�างท�!ไมิ0ตั้�องการั และท&าให์�โปรัตั้�นีเสถู�ยรั
prolyl isomerase เปล�!ยนี cis-trans isomer ของ proline ในีโปรัตั้�นี
3
4
Protein folding
mutation บางชนี ด ท&าให์�การัเก ด protein folding ผ ดปกตั้ ไป และท&าให์�โปรัตั้�นีด�งกล0าวิไมิ0สามิารัถูถู%กส0งออกจาก ER ได�
ตั้�วิอย0างเช0นี mutation ของ α1-antiprotease (ท&าห์นี�าท�!เป/นี elastase inhibitor)
abnormal folding of α1-antiprotease
retention of α1-antiprotease within hepatocyte
elastase activity ในีปอดส%งข��นี
lung destruction
3
5
Protein translocation (protein targeting)
การัเคล�!อนีย�ายโปรัตั้�นีจากบรั เวิณท�!ส�งเครัาะห์ไปย�งบรั เวิณท�!โปรัตั้�นีท&างานี แบ0งได�เป/นี 2 กล(0มิ
1. Post-translational translocation
2. Cotranslational translocation
3
6
Post-translational translocation การัเคล�!อนีย�ายโปรัตั้�นีท�!เก ดห์ล�งจากการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีเสรั7จ
ส �นี
เก ดท�! free ribosome
พบในีการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีเพ�!อใช�ในี nucleus, cytosol, mitochondria และ peroxisome
3
7
Cotranslational translocation
การัเคล�!อนีย�ายโปรัตั้�นีท�!เก ดขณะท�!การัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีย�งไมิ0ส �นีส(ด
พบในีการัส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีท�!เป/นีส0วินีปรัะกอบของ membrane และ secretory protein เช0นี โปรัตั้�นีในี ER, Golgi body, lysosome
โปรัตั้�นีในีกล(0มินี��จะมิ� signal sequence ท�!ด�านี N-terminus
ข��นีตั้อนีการัเก ด cotranslational translocation Signal sequence จะจ�บก�บ signal recognition particle (SRP) SRP จะพาโปรัตั้�นีและ ribosome ไปจ�บก�บ SRP receptor (docking
protein) ท�! ER และโปรัตั้�นีจะถู%กส0งเข�าไปในี lumen ของ ER เมิ�!อส�งเครัาะห์โปรัตั้�นีเสรั7จ singal sequence จะถู%กตั้�ดออก โปรัตั้�นีในี lumen ถู%กส0งไป Golgi body และเก ด exocytosis
3
8
Cotranslational translocation
3
9
Secretion
เป/นีขบวินีการัส0งโปรัตั้�นีท�!ส�งเครัาะห์ออกไปใช�นีอกเซึ่ลล แบ0งได�เป/นี 2 ปรัะเภท
Constitutive secretion ตั้�วิอย0างเช0นี การัส0ง plasma protein
ออกนีอกเซึ่ลล
Regulated excretion โปรัตั้�นีท�!ส�งเครัาะห์จะถู%กเก7บไวิ�ในี
secretory vesicle เมิ�!อเซึ่ลลถู%กกรัะตั้(�นี โปรัตั้�นีจะถู%กปล0อย
ออกมิาโดยวิ ธ์� exocytosis
4
0
Intracellular protein degradation
โดยท�!วิไปโปรัตั้�นีแตั้0ละชนี ดจะมิ� half-life ตั้0างก�นี เช0นี ในีเซึ่ลลตั้�บ เอนีไซึ่มิท�!ควิบค(มิ metabolism จะสลายเรั7วิกวิ0าโปรัตั้�นีอ�!นี
โปรัตั้�นีท�!มิ� PEST sequence (proline-glutamate-serine-threonine) มิากจะมิ� half-life ส��นี
4
1
Intracellular protein degradation
การัสลายโปรัตั้�นีในีเซึ่ลล
ATP dependent proteolysis เก ดข��นีในี proteasomes โดยอาศั�ยโปรัตั้�นี ubiquitin
Lysosome degradation Other proteolytic systems
- Apoptosis ห์รั�อท�!เรั�ยกวิ0า programmed cell death อาศั�ยเอนีไซึ่มิ caspases
- Calcium-dependent thiol proteases ท�!เรั�ยกวิ0า calpains
4
2
Ubiquitin-ATP dependent pathway ท&าห์นี�าท�!สลายโปรัตั้�นีท�!ผ ดปกตั้ ห์รั�อห์มิดอาย(การัใช�งานี เช0นี
regulatory protein และ protein ท�!เก�!ยวิข�องก�บการัแบ0งตั้�วิของเซึ่ลล
ubiquitin จะจ�บก�บ NH3+ group ของ lysine ของโปรัตั้�นี
ตั้�องการัสลาย โดยอาศั�ย E1, E2 และ E3
จากนี��นี protease complex จะสลายโปรัตั้�นีและปล0อย ubiquitin ออกไปใช�ได�ให์มิ0
4
3
Ubiquitin-ATP dependent protein degradation
4
4
Lysosome degradation
เป/นีการัสลายโปรัตั้�นีโดย protease ของ lysosome ท�!เรั�ยกวิ0าcathepsins ซึ่�!งแบ0งออกตั้ามิห์นี�าท�!ได�ด�งนี��
Exocytosis เป/นีการัส0งเอนีไซึ่มิออกไปสลายโปรัตั้�นีนีอกเซึ่ลล
Autophagic เป/นีการัสลาย organelle ภายในีเซึ่ลล
Phagocytosis เป/นีการัสลายโปรัตั้�นีท�!เข�ามิาในีเซึ่ลล
Autolysis of cell เป/นีการัสลายตั้�วิเองของเซึ่ลล
4
5
Lysosome degradation4
6
Posttranslational processing
โปรัตั้�นีบางชนี ดห์ล�งจากส�งเครัาะห์เสรั7จแล�วิ จะมิ�การัเปล�!ยนีแปลงภายในีโมิเลก(ลของมิ�นีก0อนี จ�งจะท&างานีได�ตั้ามิปกตั้
ขบวินีการัเปล�!ยนีแปลงนี�� ได�แก0 proteolytic cleavage : การัเปล�!ยนี zymogen ห์รั�อ
prohormone ให์�เป/นี active form covalent modification : γ-carboxylation, hydroxylation,
N-methylation, phosphorylation, acylation และ prenylation
4
7
Proteolytic cleavage
การัเปล�!ยนี zymogen เป/นี enzyme ท�!ออกฤทธ์ ;ได�trypsinogen trypsin
factor XII factor XIIa
การัเปล�!ยนี prohormone เป/นี hormone
proinsulin insulin
pro-opiomelanocortin ACTH + MSH +
(POMC) β-endorphin
4
8
γ-carboxylation
เก ดท�! glutamate บางตั้�วิของโปรัตั้�นีท�!เก�!ยวิข�องก�บการัแข7งตั้�วิของเล�อด
ปฏิ ก รั ยานี��ตั้�องอาศั�ย vitamin K
4
9
Hydroxylation
การัเตั้ มิ –OH ท�! side chain ของกรัดอะมิ โนีบางตั้�วิ
ตั้�วิอย0างเช0นี hydroxylation ของ proline และ lysine ในี collagen โดยเอนีไซึ่มิ proline hydroxylase และ lysyl hydroxylase ได�เป/นี hydroxyproline และ hydroxylysine ตั้ามิล&าด�บ
ขบวินีการันี��จ&าเป/นีตั้0อการัเก ด H-bond รัะห์วิ0างสาย collagen
ปฏิ ก รั ยานี��ตั้�องอาศั�ย vitamin C
5
0
Phosphorylation
การัเตั้ มิห์มิ%0 phosphate จาก ATP โดยใช�เอนีไซึ่มิ protein kinase
ATP + protein phosphoprotein + ADP
ขบวินีการันี��เป/นีวิ ธ์�ท�!เซึ่ลลใช�ควิบค(มิ activity ของเอนีไซึ่มิและโปรัตั้�นี
กรัดอะมิ โนีท�!ถู%กเตั้ มิห์มิ%0 phosphate ได� ค�อ serine, threonine และ tyrosine
5
1
Glycosylation
เป/นีการัเตั้ มินี&�าตั้าลท�! side chain ของกรัดอะมิ โนี โดยเอนีไซึ่มิ glucosyltransferase
เก ดข��นีในี ER และ Golgi body แบ0งเป/นี 2 ชนี ด
N-linked glycosylation O-linked glycosylation
การัเตั้ มินี&�าตั้าลท&าให์�โปรัตั้�นีจ�บก�บ receptor ท�!จ&าเพาะได� ( cell recognition)
ท&าให์�โปรัตั้�นีมิ� solubility ส%งข��นี ป8องก�นีไมิ0ให์�โปรัตั้�นีถู%กสลายได�ง0าย
5
2
Glycosylation
เอนีไซึ่มิท�!ใช�ในี lysosome จะมิ� mannose-6-phosphate จ�บท�!ส0วินีปลาย
ท&าให์�เอนีไซึ่มิจ�บก�บ receptor และเข�า lysosome ได�
ถู�าไมิ0มิ� mannose-6-phosphate
เอนีไซึ่มิจะถู%กส0งออกนีอกเซึ่ลล lysosome จ�งไมิ0มิ�เอนีไซึ่มิ
เก ดการัค�!งของสารัในี lysosome (inclusion body) เรั�ยก I-cell disease (mucolipidosis II) ซึ่�!งเป/นี lysosomal storage disease
ชนี ดห์นี�!ง
5
3
N-linked glycosylation
เป/นีการัเตั้ มิ dolichol phosphate บนี amide group ของ asparagine
เก ดท�! membrane ของ ER
มิ�ผลตั้0อการัเก ด protein folding
ถู%กย�บย��งด�วิย bacitracin และ tunicamycin
5
4
N-linked glycosylation
High mannose complex hybrid
5
5
H antigen A antigen B antigen
O-linked glycosylation
เป/นีการัเตั้ มินี&�าตั้าลเข�าก�บ –OH group ของ serine ห์รั�อ threonine
เป/นี post-translational process โดยเก ดข��นีห์ล�งจากท�!โปรัตั้�นีไปถู�ง Golgi body
ตั้�วิอย0างเช0นี ABO blood group antigen
5
6
Prenylation
เป/นีการัเตั้ มิ lipid ให์�แก0โปรัตั้�นี ท&าให์�โปรัตั้�นีสามิารัถูจ�บก�บ membrane ได� โดยการัเตั้ มิ farnesyl group (C-15) ห์รั�อ geranylgeranyl group (C-20) บนี cysteine ทางด�านี C-terminal ของ Ras protein
5
7
Collagen synthesis58
Collagen
โปรัตั้�นีท�!มิ�ปรั มิาณมิากท�!ส(ดในีส�ตั้วิเล��ยงล%กด�วิยนีมิ
โครังสรั�างห์ล�กของเนี��อเย�!อเก�!ยวิพ�นีห์ลายชนี ด เช0นี ผ วิห์นี�ง ,กรัะด%ก
ชนี ดของ collagen Type I : 90% ของ collagen ในีรั0างกาย Type II : พบมิากในีกรัะด%กอ0อนี Type III : พบมิากในีห์ลอดเล�อด Type IV : ส0วินีปรัะกอบส&าค�ญ่ของ basement membrane
5
9
Collagen synthesis
ย�นี collagen ในีมินี(ษย มิ�มิากกวิ0า 30 ย�นี
การัเรั�ยกช�!อย�นี COL1A2 : ย�นีท�! code 2-chain ท�!เป/นีส0วินีปรัะกอบของ type I
collagen COL2A1 : ย�นีท�! code 1-chain ท�!เป/นีส0วินีปรัะกอบของ type II
collagen
การัเรั�ยกช�!อสาย collagen 1(I) : 1-chain ท�!เป/นีส0วินีปรัะกอบของ type I collagen 1(III) : 1-chain ท�!เป/นีส0วินีปรัะกอบของ type III collagen
6
0
Collagen synthesis
Collagen fibril ปรัะกอบด�วิย monomer ค�อ tropocollagen ห์ลายโมิเลก(ลท�!เช�!อมิก�นีโดยการัเก ด cross-link
Tropocollagen แตั้0ละโมิเลก(ลปรัะกอบด�วิย -chain 3 สาย พ�นีก�นีเป/นี triple helix
ชนี ดของ -chain ในี collagen type ตั้0างๆ Type I : 1(I)-chain 2 สาย และ 2(I)-chain 1 สาย Type II : 1(II)-chain 3 สาย (homotrimer) Type III : 1(III)-chain 3 สาย (homotrimer)
6
1
Biosynthesis of collagen
Nuclear event Transcription : ได� primary transcript (hnRNA) RNA processing : ได�แก0การัเก ด 5’ capping, 3’
polyadenylation และ splicing ได�เป/นี mRNA
Translation เก ดบนี membrand-bound ribosome ได� prepro -chain ท�!มิ�
signal sequence อย%0ทางด�านี N-terminus เพ�!อใช�ในีการัเก ด cotranslational translocation
6
2
Biosynthesis of collagen
Posttranslational modification Signal sequence จะถู%กตั้�ดออกจาก prepro -chain กลายเป/นี
pro -chain
Hydroxylation of prolyl and lysyl residues : เก ดเป/นี hydroxy -proline (ส&าค�ญ่ตั้0อ thermal stability) และ hydroxylysine (ส&าค�ญ่ตั้0อ tissue tensile strength) ข��นีตั้อนีนี��ใช� vitamin C (ascorbate) เป/นี coenzyme
O-linked glycosylation : เป/นีการัเตั้ มิ galactose ห์รั�อ glucose ในี hydroxy lysine
N-linked glycosylation : เป/นีการัเตั้ มิ mannose-rich CHO ท�! C-terminal ของ pro -chain
6
3
Collagen synthesis
hydroxylation
glycosylation
6
4
Collagen synthesis6
5
Biosynthesis of collagen
Posttranslational modification Procollagen triple helix formation : เก ดการัรัวิมิก�นีของ pro -
chain และพ�นีก�นีเป/นีเกล�ยวิ ท ศัทางการัเก ดเรั !มิจาก C-terminus ไป N-terminus เรั�ยก triple helix molecule ท�!ได�นี��วิ0า procollagen
6
6
Telopeptide
Amino-terminal
propeptide
Carboxyl-terminal
propeptide
Biosynthesis of collagen6
7
Procollagen = triple helical domain + nonhelical part
Nonhelical part = amino-terminal propeptide + telopeptide
+ carboxyl-terminal propeptide
Biosynthesis of collagen
Posttranslational modification Modification beyond RER : procollagen ถู%กส0งไปย�ง Golgi
body และส0งออกจากเซึ่ลลในีรั%ปของ secretory vesicle
Extracellular events amino-terminal propeptide และ carboxyl terminal
propeptide จะถู%กตั้�ดออกโดย procollagen N-protease และ procollagen C-protease ตั้ามิล&าด�บ เรั�ยกโมิเลก(ลท�!ได�วิ0า tropocollagen ซึ่�!งมิ�ควิามิสามิารัถูในีการัละลายลดลง 100 เท0า
6
8
Biosynthesis of collagen
Extracellular events Tropocollagen จะจ�ดเรั�ยงตั้�วิขนีานีก�นีและเห์ล�!อมิก�นี 1 ในี 4 ของ
ควิามิยาวิของโมิเลก(ล
เก ด cross-link เช�!อมิรัะห์วิ0าง tropocollagen โดยเอนีไซึ่มิ lysyl oxidase
6
9
Mutation of collagen genes
Dominant negative effect : การัท�!มิ� tropocollagen ท�!เก ดจาก mutant collagen gene เข�ามิารัวิมิในีโมิเลก(ล collagen fibril ท&าให์� collagen fibril นี��นีเก ดควิามิผ ดปกตั้ ไปด�วิย
Procollagen suicide : abnormal pro -chain (จาก mutant allele) รัวิมิก�บ normal pro -chain เก ดเป/นี product ท�!ถู%กสลายไปท��งห์มิดก0อนีส0งออกนีอกเซึ่ลล
7
0
Diseases due to abnormal collagen Osteogenesis imperfecta (brittle bone disease)
Bone fragility Mutation ของ type I collagen ส0วินีให์ญ่0มิ�ควิามิผ ดปกตั้ ของ
gene COL1A1 ห์รั�อ COL1A2 Type I : mutation ท�!ข�ดขวิางการั splicing และการัสรั�าง
proprocollagen mRNA ท&าให์�รั0างกายส�งเครัาะห์ collagen ปกตั้ ลดลง
Type II, III และ IV : point mutation ของ glycine codon ซึ่�!งจะย�บย��งการัเก ด normal helix
7
1
Diseases due to abnormal collagen
7
2
Osteogenesis imperfecta
Diseases due to abnormal collagen Ehler-Danlos syndrome
Skin fragility, skin hyperextensibility และ joint hypermobility Type VI : ควิามิผ ดปกตั้ ของการัเก ด hydroxylation ของ lysine Type VII : ควิามิปกตั้ ในีการัตั้�ด amino-terminal propeptide ออก Type IX : ควิามิผ ดปกตั้ ในีการัเก ด cross-linked
7
3
Diseases due to abnormal collagen Lathyrism
Skin fragility, skeletal deformities และ severe blood vessel weakness
สารัพ ษจากเมิล7ดของ sweet pea มิ�ฤทธ์ ;ย�บย��งเอนีไซึ่มิ (lysyl oxidase) ท�!ควิบค(มิการัเก ด cross-linked แบบ irreversible
Scurvy Vitamin C deficiency Hydroxylation เก ดได�ไมิ0ด� จ�งมิ�ปรั มิาณ hydroxylysine และ
hydroxyproline ในี pro -chain ลดลง ท&าให์� collagen stability และ tensile strength นี�อยลง
7
4
THE END
ANY QUESTIONS?75