tuberculosis bovina - revisión bibliográfica 2013
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TUBERCULOSIS BOVINA:DESCRIPCIÓN Y MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
Mauricio Andino Molina, Mario Alejandro Moncada | 2013Escuela de Microbiología, UNAH
Revisada por Dra. Reina Laura Rivera, MSc; Dra. Rebeca Rivera, MSc
TABLA DE CONTENIDO
No. página
Tuberculosis bovina 2 Agente etiológico 2
Características epidemiológicas 3 Internacionales 4 Nacionales 6
Diagnóstico de la tuberculosis bovina 6 Cultivo bacteriológico y diagnóstico microbiológico 7 Pruebas inmunológicas (serológicas) 8
o γ Interferón 8o MAPIA 10o PPD/TST 11o Pruebas rápidas (PR-BTB) 12o Prueba de plataforma dual (DPP) 13o ELISA 13o SeraLyte-Mbv 14o Multiplex chemiluminescence immunoassay (MCI-BTB) 14o Biología molecular 15o PCR 15o Spoligotyping 16o IMS-Spoligotyping 17o Fingerprinting 17
Conclusiones 18Recomendaciones 19Anexos 21Bibliografía 23
TUBERCULOSIS BOVINA
La tuberculosis bovina es una enfermedad producida por bacterias del Complejo
Mycobacterium, principalmente por Mycobacterium bovis y Mycobacterium tuberculosis. (1–5)
En la presente revisión presentamos una colección variada de datos referentes a Mycobacterium
bovis como agente etiológico de la tuberculosis en el ganado, su asociación patológica con los
reservorios naturales y salvajes y los métodos de diagnostico utilizados en la actualidad y los que se
encuentran en desarrollo para su uso e implementación.
AGENTE ETIOLÓGICO
Mycobacterium bovis fue aislado inicialmente por Theobald Smith en el año de 1896, sus
observaciones iniciales dieron por sentado que se trataba de una bacteria del complejo
Mycobacterium debido a sus características morfológicas e histopatológicas. Mycobacterium bovis
presenta diferencias bioquímicas y características virulentas de importancia en conejos y otros
animales salvajes que distan de las presentadas por Mycobacterium tuberculosis. Años mas tarde
en trabajos subsecuentes por otros autores esta bacteria fue emplazada como una subespecie de
Mycobacterium tuberculosis y es hasta 1970 que en el proyecto presentado por Karlson et al. Se
propone el nombre de Mycobacterium bovis. (3)
Mycobacterium bovis se presenta en forma de bacilos, inmóviles y no formadores de
esporas, con un alto contenido de lípidos de alto peso molecular en su pared. Mycobacterium bovis
crece más lentamente que Mycobacterium tuberculosis, es micro-aerofílico y tiene una
temperatura óptima de crecimiento de 37ºC. En un medio sólido adecuado basado en piruvato, la
morfología colonial es disgónica y no cromógena, las colonias son lisas y de color crema. (6) Esta
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bacteria presenta también una mayor patogenicidad en conejos, comparándole con su homologa
Mycobacterium tuberculosis. (3)
Las características de morfología colonial en el cultivo en el medio Middlebrook1 son:
Colonias puntiformes, obtenidas tras incubación a 37 °C en 1 a 2 semanas, luego estas crecen lentamente hasta alcanzar 2-3 mm de diámetro.
No pigmentadas. Aparentemente húmedas pero ligeramente granuladas. Friables.
Mycobacterium bovis es naturalmente resistente a pirazinamida y puede establecer
infecciones zoonóticas con multi-resistencia a drogas terapéuticas. (6, 7)
CARACTERÍSTICAS EPIDEMIOLÓGICAS
En los últimos años se han realizado diversos estudios que describen los avances en cuanto
a diagnóstico y prevención. En América se cuenta con laboratorios de referencia y logística
aceptables, que aunque realizan la identificación bacteriológica y molecular, sus esfuerzos no son lo
suficientemente contundentes, en parte por la ausencia de documentación técnica y científica que se
encuentre disponible, como es el caso en la mayoría de los países de Latinoamérica, y por otro lado
el manejo que disponen las agencias internacionales de control y sanidad animal que contemplan el
sacrificio del ganado una vez haya sido establecido un diagnóstico primario por tuberculosis. (1)
Epidemiológicamente se han descrito dos tipos de hospederos: los de manutención y los
incidentales. Los primeros se encuentran constituidos por animales que son infectados, luego estos
enferman y durante este proceso son capaces de transmitir la enfermedad a poblaciones
1 VER TABLA 1 EN ANEXOS.
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susceptibles. Luego los segundos (conocidos también como “spillover hosts”) están constituidos por
aquellos animales que se infectan y posteriormente enferman pero que durante este proceso casi
nunca transmiten la enfermedad al resto de la población. Según estudios la mayoría de los animales
enfermos encajan perfectamente en la descripción de hospederos incidentales. Hasta la fecha no se
ha demostrado o descrito una mayor susceptibilidad debido a condiciones predisponentes sean
estas genéticas o fisiológicas. (4)
En cuanto a los factores de riesgo para la infección por Mycobacterium bovis se ha
encontrado que la tasa de contacto, la alimentación de las terneras y el ingreso de nuevos bovinos
no examinados son potencialmente los principales elementos a controlar para evitar la diseminación
de la enfermedad. También se encontró que la alimentación con leche cruda a las terneras, la carga
animal, el agrupamiento de vacas en rodeos únicos, rodeos mixtos, ingreso de vacas y toros
(esporádicamente) no se asociaron de forma directa con tuberculosis bovina, sin embargo el
desmadre de las terneras a una edad superior a los cuatro días puede potenciar el riesgo. (8)
Mycobacterium bovis puede transmitirse en forma de aerosol, por lo tanto es perjudicial y
altamente riesgoso el hacinamiento de los animales y la sobreexposición de trabajadores en los
recintos de cuidado, extracción lechera y lugares de matanza. También se ha encontrado que la
dosis mínima infectante de Mycobacterium bovis es muy baja. (6, 8, 9)
A NIVEL INTERNACIONAL
En muchos países de Europa, especialmente en el Reino Unido, la tuberculosis bovina ha
constituido un problema prioritario, no solo por las implicaciones patológicas en los animales, sino
más bien por las repercusiones a nivel sanitario y socioeconómico en los consumidores y
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productores de productos lácteos. En América los programas de control han estado orientados no
precisamente a la prevención sino al control de brotes y casos. Hacia el 2004 se estimaba que un
24% de la población bovina en América Latina no se encontraba bajo ningún tipo de control. (4, 10)
La estimación de la prevalencia de tuberculosis bovina en Latinoamérica es controversial,
debido a los factores y condiciones ya expuestos; algunos países se encuentran en la etapa de
erradicación. (11)
En cuanto a los reservorios que también son considerados como hospederos de
manutención, Europa muestra una amplia variabilidad siendo el ciervo uno de los mas
representativos. (12)
Así mismo son bien conocidas las características morfológicas y bioquímicas de las
bacterias responsables, su ciclo intracelular y otros datos relacionados. Las exigencias inherentes
para su cultivo vuelven complejo su estudio y precarizan el hallazgo de soluciones definitivas en
busca de: un tratamiento eficaz, un manejo menos radical, y de un diagnóstico rápido, simple y
confiable.
El uso de pruebas diagnosticas combinadas, aunadas a un manejo intensivo y detallista
proveen poderosas herramientas en la búsqueda del control y erradicación de la enfermedad. (13)
Las técnicas y criterios utilizados internacionalmente son tratados en las secciones
correspondientes.
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A NIVEL NACIONAL
En una encuesta realizada hacia el 2008 existían alrededor de 96,622 explotaciones que se
dedican a la ganadería bovina. Con un hato colectivo de 2.5 millones de cabezas. También se
informó que durante la época de verano la producción de leche es de 1.8 millones de litros/día con
base a un rendimiento de 3.8 litros/vaca/día. En el invierno la producción de leche es de 2.4 millones
de litros/día con un rendimiento de 4.4 litros/vaca/día. (14)
Los datos anteriores son de suma importancia sobre todo si los extrapolamos con los
hallazgos obtenidos en estudios epidemiológicos realizados en Estados Unidos, que muestran que
Mycobacterium bovis puede convertirse en un importante elemento zoonótico por el consumo de
lácteos y derivados provenientes de hatos contaminados. (15)
Actualmente se realiza un estudio epidemiológico a nivel nacional para poder conocer las
cifras de prevalencia de tuberculosis bovina. No se cuenta con datos actualizados, sin embargo
según reportes internacionales los brotes son aparentemente esporádicos. (16, 17) Los mecanismos
de diagnóstico, manejo, prevención y control serán tratados en los apartados correspondientes.
DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS BOVINA
El diagnóstico de tuberculosis bovina se puede realizar mediante las técnicas tradicionales
(cultivo de secreciones, tejidos), pruebas inmunológicas, pruebas de biología molecular y por
supuesto la evidencia histopatológica post-mortem. Sin embargo la utilización de pruebas
serológicas requieren personal técnico capacitado y también de logística administrativa, basado en
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el hecho de que la enfermedad causa respuesta inmunológica similar mas no igual entre especies
animales. (18)
1. CULTIVO BACTERIOLÓGICO Y DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
Las exigencias bioquímicas del género Mycobacterium vuelven complejo el proceso
de aislamiento y recuperación. Actualmente se realiza un homogenizado y concentrado de
las muestras (piezas histológicas, tejidos y secreciones). Posteriormente este material se
cultiva preferiblemente en medios enriquecidos con piruvato y carentes de glicerol. (15, 18)
Para tal fin puede utilizarse el medio Middlebrook o Stonebrink, los cuales ofrecen
mejores tasas de crecimiento, siendo Stonebrink el que mejores resultados ha mostrado
para el aislamiento y/o recuperación de Mycobacterium bovis. El tiempo de generación es
aproximadamente de 16 a 20 horas, también se necesita un periodo de incubación mínimo
de 56 días (8 semanas), aunque se puede incubar para mejores resultados por alrededor de
84 días (hasta 12 semanas). La morfología colonial característica de Mycobacterium bovis
en este medio es de colonias puntiformes, que gradualmente crecen hasta alcanzar 1mm de
diámetro, no pigmentadas, finamente granulares y friables. También pueden identificarse
cepas determinando las propiedades clásicas de cultivo y haciendo uso de baterías
bioquímicas que incluya pruebas tales como la catalasa, ureasa, etc. (3,18)
En ciertos casos, dependiendo de la muestra referida, se realiza una tinción Ziehl –
Neelsen para determinar la presencia de BAAR como forma preliminar de diagnóstico. (15)
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2. PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
Las pruebas inmunológicas, basadas en la interacción antígeno-anticuerpo,
constituyen las principales herramientas modernas para el diagnóstico rápido y eficaz de
muchas enfermedades, actualmente se realizan esfuerzos para el desarrollo e
implementación de pruebas inmunológicas para el diagnóstico de la tuberculosis bovina.
Desde los primeros ensayos dirigidos hacia la detección de antígenos específicos hasta la
actual combinación de antígenos purificados para la detección de anticuerpos, estas
técnicas han recorrido un largo camino y deben aun mejorar su sensibilidad y especificidad
lo cual nos permitiría un mejor desempeño en los procesos de evaluación e investigación.
El antígeno (proteína purificada) que ha mostrado ser muy antigénico es MPB83. Su
uso en diferentes ensayos y como elemento principal en muchas de las técnicas que a
continuación se analizan es de suma importancia. (19) Otras moléculas proveen valiosa
colaboración para el diagnóstico, tales como ESAT-6, CFP-10, LAM y MPB70. (20)
Prueba de γ Interferón (IFN)
El γ interferón es un mediador crítico en la activación de macrófagos como
instrumentos ejecutores de resistencia ante patógenos intracelulares. Su
participación en los procesos de apoptosis es incuestionable, promoviendo esta en
células T-CD4+ estimulando la producción de moléculas pro-apoptóticas
intracelulares y señales bioquímicas apoptóticas externas. (21) Es aproximadamente
después de dos semanas post infección o sensibilización del animal con PPD, que
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se alcanzan los niveles óptimos de γ interferón para su detección y los mismos son
sostenidos por alrededor de 16 semanas (utilizando como agente inmuno-
estimulante a Mycobacterium bovis). (22)
En un estudio se obtuvieron resultados que muestran la variabilidad de la
respuesta inmune de los animales inoculados con Mycobacterium bovis y donde la
respuesta humoral ante el antígeno ESAT-6 fue medida observando sus niveles
óptimos “pico” alrededor de las 8 semanas post-infección. (23)
Esta técnica combina la sensibilización y activación in-vitro de linfocitos
durante un periodo de incubación de hasta 24 horas y la detección de γ interferón
mediante ELISA. (18) Se debe señalar que esta técnica es utilizada ampliamente en
muchos países, no solo de Latinoamérica sino también en Europa y en países
industrializados. Sin embargo su costo no permite la utilización de la misma como
una prueba de rutina en la prevención y/o control de la enfermedad. (12, 18, 22, 24,
25)
Actualmente se utilizan pools de antígenos altamente purificados para la
prueba ELISA; se han obtenido mejores resultados cuando se han utilizado los
productos antigénicos ESAT-6 y CFP-10, incrementando así la especificidad de la
técnica y mejorando el valor predictivo. (12, 18, 20, 22)
Schiller O. et al reporta que la sensibilidad y especificidad del ensayo de γ
interferón ha sido estimado en múltiples estudios, la sensibilidad se encuentra en el
rango que varia desde 73.0 a 100.0 % con una media de 87.6 %, en cambio la
especificidad varia en un rango de 85.0 a 99.6 % con una media de 96,6 %. Se debe
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considerar que la variabilidad de dichos parámetros podría ser el resultado de
reportes dispares. El autor recomienda entonces la elaboración de procedimientos
mas estandarizados para fortalecer dicha prueba como elemento de diagnóstico
primario en los programas de tuberculosis.
MAPIA
MAPIA (multi-antigen print immunoassay) es una prueba basada en la reacción
antígeno-anticuerpo, donde se evalúa la respuesta humoral del animal. Para tal fin se
imprimen por micro-aerosolización de forma covalente 12 antígenos purificados de
Mycobacterium bovis en una base o plataforma de nitrocelulosa. Los antígenos utilizados
son ESAT6, CFP10, MPB64, MPB59, MPB70, MPB83, 16kda, 38kda, E6/P10, 16/83, B-
PPD, MBCF. Los criterios de resultado son (P) positivo, (N) negativo y el análisis de los
resultados puede llevar al establecimiento de un resultado sospechoso (S), según el patrón
de lectura que es elaborado por el fabricante.(26)
MAPIA reconoce solamente Inmunoglobulinas G (IgG) y ha sido utilizado en
múltiples ensayos como prueba de contraste y referencia, dadas las múltiples aplicaciones
del mismo. (26–28)
En un estudio se analizo la respuesta inmune humoral del ciervo y se determino la
sensibilidad y especificidad de la técnica utilizando como referencia 4 antígenos purificados:
ESAT-6, CFP-10, MPB83 y MPB70. Se calculo una sensibilidad media de 64.0% y una
especificidad media de 99.0%.2 Aunque el ensayo fue practicado en sueros de ciervo y no
2 Ver Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayos, (MAPIA).
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bovino la información obtenida en el mismo pone de manifiesto las aplicaciones posibles y
los cambios y mejoras que son necesarios y pertinentes. (20)
La selección cuidadosa de antígenos debe ser una premisa en el desarrollo de mejoras y
optimizaciones en esta técnica. A partir de 2010, MPB70 y MPB83 son los antígenos
utilizados con mayor frecuencia en las técnicas serológicas IN VITRO que involucran el uso
de MAPIA. (12) El conjugado de MPB83-CFP10 ha mostrado una notoria mejoría en cuanto
a sensibilidad en los ensayos epidemiológicos. (29, 30)
PPD / TST
El método comercial mas ampliamente utilizado para la detección de tuberculosis
bovina es la prueba de tuberculina, donde se utiliza un conjugado de derivados proteicos
purificados de Mycobacterium bovis (PPD / PPD-B) en una inyección aplicada al animal
investigado. Posteriormente se evalúa la reacción de hipersensibilidad tardía en el punto de
inyección 72 horas post-inoculo. En algunos países es utilizada la prueba combinada CCT
que utiliza PPD bovino y PPD aviar. (18) La cepa utilizada globalmente para fabricar PPD-B
es Mycobacterium bovis cepa AN5. (12)
La prueba TST (Tuberculin skin test) hace uso de variantes en el sitio de
inoculación, composición de PPD y evaluación de la reacción inmunológica, dichas variantes
pueden intervenir en el resultado obtenido según los esquemas disponibles de
interpretación. Las variantes son: CFT (Caudal fold test), CIT (Mid cervical intradermal test),
CCT (Comparative cervical test). (12)
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En un estudio practicado por Monaghan et al. en 1994, se obtuvo una sensibilidad
de 68-96.8% y 96-98.8% de especificidad para la variante TST-CFT, una sensibilidad de 80-
91.0% y 75.5-96.8% de especificidad para la variante TST-CIT y una sensibilidad de 55.1-
93.5% y 88.8-100.0 % de especificidad para la variante TST-CCT.
En los últimos años se ha trabajado en la fabricación de PPD mejorada, utilizando
nuevos péptidos en conjugados y utilizando variantes de hasta 21 péptidos en un solo
producto. En algunos casos la sensibilidad fue incrementada sustancialmente, sin embargo
la especificidad fue ligeramente afectada. (12)
PRUEBAS RÁPIDAS (PR-BTB)
Las pruebas rápidas son utilizadas ampliamente en el mundo diagnóstico como un
método de diagnóstico rápido y económico.
Como se ha discutido en varios estudios, el uso de múltiples antígenos específicos
de Mycobacterium bovis aerosolizados o fijados en plataformas de nitrocelulosa
constituyen la base de las técnicas de inmunocromatografía en el área veterinaria. Este tipo
de prueba ha sido utilizado no solo para bovinos sino para un amplio espectro de animales
que son infectados con Mycobacterium bovis y que constituyen reservorios naturales de
infección tanto para otros animales como para el humano. (12, 20, 25, 28, 29, 31–36)
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Uno de los antígenos mas ampliamente utilizado para la manufactura de pruebas
rápidas de tuberculosis bovina es MPB83, según estudios se encontró una sensibilidad de
60.0% y una especificidad de 96.0% en ganado. (20)
Prueba de Plataforma Dual (DPP)
Esta novedosa prueba se utilizada en múltiples ensayos y ha sido montada para la
detección de VIH 1/ VIH 2 por CHEMBio ™, esto muestra la versatilidad de la misma.
Se ha utilizado un montaje del antígeno recombinante o purificado MPB83 y MPB70
para la detección de anticuerpos específicos en camélidos americanos. En el estudio
realizado DPP mostró una sensibilidad 74.3% y una especificidad de 97.6%. (37) El uso de
esta técnica es prometedora en el campo del diagnostico bovino a gran escala y en estudios
epidemiológicos primarios.
ELISA
ELISA es por excelencia uno de los kits comerciales y también “In House” mas
utilizados alrededor del mundo. Sus aplicaciones son infinitas y se utilizan como métodos de
referencia para el estudio de un sin numero de enfermedades y sus agentes etiológicos. Es
esta técnica la que se utiliza para poder medir la concentración de γ interferón como se
describió anteriormente en el apartado correspondiente. Así mismo el uso de antígenos
variados y en algunos casos combinados como lo son MPB70 y MPB83 hacen de esta
técnica una forma simple y segura de diagnóstico. (20, 38, 39) La sensibilidad media y
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especificidad media con el uso de dichos antígenos es de hasta 63.5% y 88.8%
respectivamente. (20, 39)
SeraLyte-Mbv
Esta es una novedosa técnica de reciente introducción, donde se utilizan perlas de
ferrita con una capa de antígeno MPB83 unida covalentemente al soporte. El conjugado
cuenta de ferrita-antígeno (Conjugado primario) se une específicamente a los anticuerpos
presentes en el suero a examinar en animales potencialmente infectados (Conjugado
secundario). Para correr la prueba se requieren de aproximadamente 2 horas, donde el
conjugado primario y secundario son incubados, luego la mezcla de trabajo es lavada y es
detectado por anticuerpo monoclonales específicos que contienen marcadores cromógenos
(Conjugado terciario). El resultante será leído por quimioluminiscencia. La sensibilidad y
especificidad fueron de 96.0% y 98.0% respectivamente. (40)
Multiplex Chemiluminescence Immunoassay
Esta es una técnica que utiliza la inmuno-impresión por micro-aerosolización de 20
antígenos purificados en pozos de micro placa convencional para Inmunoensayo.
Posteriormente cada uno de los puntos que corresponden a un antígeno en específico es
leído por quimioluminiscencia. Se obtuvo una especificidad de 98.4% y una sensibilidad de
93.1%. (41)
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BIOLOGÍA MOLECULAR
En los últimos años se han producidos notables avances en el diagnostico de bTB
con la herramientas de biología molecular que contribuyen a ampliar las limitaciones de las
técnicas tradicionales ya que los estudios de campo son propensos a subestimar
heredabilidad , debido a la exposición desigual a los patógenos , así como la sensibilidad
incompleta de las pruebas de diagnóstico que se utilizan se discute también la gran cantidad
de datos que ahora indica la existencia de una base genética para la resistencia a la
tuberculosis bovina en el ganado bovino. (2)
Entre las técnicas usadas para el diagnóstico tenemos la Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) y la técnica “Direct Variable Repeat Spacer Oligonucleotide Typing”
(Spoligotyping).
PCR
El PCR es una reacción de amplificación genética. En el caso de las mycobacterias,
la extracción es simple si se realiza a partir de cultivos tanto sólidos como líquidos donde
existe una cantidad elevada de ADN. Si se parte de una muestra clínica el rendimiento de la
extracción es menor y deficiente porque la cantidad de ADN es inferior lo que puede
comprometer la sensibilidad.
La técnica de PCR se ha utilizado para complementar estudios filogenéticos y
también para analizar muestras “extrañas”, como es el caso de un estudio publicado en el
que se extrajo ADN de moscas invasivas. El diagnóstico de Mycobacterium bovis y
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Mycobacterium avium subs. paratuberculosis fue lograda por la detección de las
secuencias IS6110 y IS900, de Mycobacterium bovis y Mycobacterium avium
respectivamente. (42)
Se ha determinado por medio de esta técnica que una de las proteínas con mayor
incidencia en los ensayos realizados es la MPB83. (19) Ciertas variaciones en la técnica son
útiles para la obtención de perfiles epidemiológicos completos. La restricción de genes para
su posterior detección muestra buenos resultados y sirve también para poder identificar
infecciones mixtas en ganado. Los tejidos son una buena muestra para esta técnica. (43)
SPOLIGOTYPING
Se evaluó por su capacidad para diferenciar cepas de Mycobacterium
bovis. Este método detecta la presencia o ausencia de los espaciadores del locus de
repetición directa del genoma de M. bovis. Los espaciadores en el locus de repetición
directa se amplifican por PCR y se detectan por la hibridación del producto de PCR marcado
con biotina con una membrana que contiene oligonucleótidos derivados de secuencias
espaciadoras que han sido previamente unidos covalentemente a una membrana. Al final
del protocolo se obtiene un patrón (perfil de Espoligotipo) (44, 45)
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IMS – SPOLIGOTYPING
La técnica de IMS (Immunomagnetic separation) nos permite concentrar de manera
especifica y selectiva bacilos de Mycobacterium bovis en muestras de tejido linfático
(nodos) mediante el uso de perlas micro-aerosolizadas con péptidos específicos.
Los resultados muestran una tasa de recuperación superior cuando se utiliza la técnica de
concentración aunada al spoligotyping mencionado anteriormente. La IMS-Spoligotyping
podría evitar la necesidad de descontaminación química, mediante la captura de forma
selectiva las células de Mycobacterium bovis y separándolas de otras bacterias en las
muestras, mejorando así su especificidad. (45)
FINGERPRINTING
En años recientes se han fabricado sondas de ADN para el estudio filogenético de
diversas formas de vida, incluyendo mycobacterias. El método más popular del DNA
fingerprinting para mycobacterias del complejo M. tuberculosis es el análisis de hibridación
del Southern Blot usando elementos de ADN repetitivos como sondas. El elemento de
inserción que mejores resultados ha dado, ha sido el IS6110, con este elemento se visualiza
mejor la variación de cepas que existen en el bacilo tuberculoso; ya que el polimorfismo del
ADN detectado por la sonda IS6110 es muy alto entre aislados clínicos no relacionados, y la
estabilidad de este elemento en el cromosoma de la mycobacteria, es muy alta. (38)
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CONCLUSIONES
El avance de la tecnología ha permitido la implementación de nuevas técnicas de
diagnostico para la tuberculosis bovina. El uso y la aplicación de pruebas inmunológicas son
los principales objetivos de la investigación global en este tema, mas de siete (7) diferentes
plataformas de diagnóstico rápido y al menos cuatro (4) técnicas novedosas han sido
valoradas, mostrando tasas satisfactorias de sensibilidad y especificidad.
El uso de conjugados poli-antigénicos parecen ser los mejores candidatos para un
diagnostico serológico efectivo. El uso de MPB83 y proteínas recombinantes en plataformas
complejas son aún promisorias pero requieren de una gran inversión para su
implementación.
El uso de inmunoensayos convencionales utilizando pools de antígenos
recombinantes parece ser el mecanismo mas viable para combinar con pruebas tales como
γ Interferón, en la búsqueda de un diagnostico eficaz e individualizado en hatos lecheros y
ganaderos. En España se combina el uso de TST-PPD y la prueba de γ Interferón para
aumentar la sensibilidad y especificidad de los resultados.
Según expertos en Honduras, se utiliza la PPD como mecanismo de diagnostico
primario y el cultivo bacteriológico como mecanismo de diagnostico confirmatorio. Aunque
ambas técnicas proveen respuestas satisfactorias y son recomendadas por la OIE, la
implementación de pruebas serológicas o inmunológicas son necesarias para poder
competir a nivel internacional en cuanto a la exportación de productos lácteos o cárnicos.
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RECOMENDACIONES
Se necesita realizar una recolección de datos estadísticos y técnicos sobre
tuberculosis bovina, su diagnostico, manejo, prevención y control a nivel nacional.
El ensayo de pruebas inmunológicas es una necesidad. El manejo que prescriben
los organismos internacionales en nuestro país son el aislamiento y matanza del animal
infectado. Sin embargo la transmisión de tuberculosis por medio de productos lácteos es
posible y constituye un problema no valorado en los esquemas de control epidemiológico, en
parte por los costos que esta actividad reguladora supondría.
Asimismo se requiere el ensayo de cultivos bacteriológicos, el aislamiento y la
identificación del patógeno, aunando a lo anterior una prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos, que sin lugar a dudas contribuiría enormemente al fortalecimiento de la
investigación y a la salud de nuestros pueblos no solo a nivel nacional sino internacional.
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ANEXOS
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Tabla 1. Características de Cultivo (Mycobacterium bovis)
Medium ATCC 19210
Pinpoint colonies in 2 weeks; gradually enlarged and rounded to about 1 mm in diameter; no pigmentation; colonies matted; with hand lens (3 to 5x), the surface is finely granular; colonies friable; in nonglycerinated medium, the colonies appear earlier and are larger.
Lowenstein - Jensen
Similar to above except growth is slower and colonies smaller; in nonglycerinated medium, the colonies are larger.
PetragnaniPinpoint colonies in 2 to 3 weeks; gradually enlarge to about 1 mm; no pigment; finely granular surface; friable.
Middlebrook 7H10Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; appear moist but granular; friable.
Egg-yolk agar
Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; flat and slightly elevated surface; granular; friable.
Stone brink
Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; flat and slightly elevated surface; granular; friable.
Lebek medium Subsurface growth in 2 to 3 weeks.
Proskauer- Beckliquid medium
Granular deposit in 3 to 5 weeks; not turbid; no pigment; growth enhanced by 2 to 5% serum.
Dubs Tween-80liquid medium
Diffuse growth in 3 to 5 weeks; slight sediment which disperses on shaking; no pellicle; no pigment; maximal growth at about 5 weeks.
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Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayo utilizando MAPIA.
Antígeno * Sensibilidad (%) Especificidad (%)ESAT-6 67.0 98.0CFP-10 56.0 99.0MPB70 44.0 100.0MPB83 89.0 99.0* LA ESPECIE ANALIZADA FUE EL CIERVO.
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