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Test de compatibilité au laboratoire
Test ultime au lit du malade
AHU Houda Romdhane CRTS Sousse Interprétation et validation des tests immuno-
hématologiques
20 Octobre 2016 Tabarka
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Prélèvement Donneur Préparation Qualification
Biologique Distribution Transfusion Receveur
Etablissement de transfusion sanguine ETS
Etablissement de Soin ES
La sécurité transfusionnelle comporte un ensemble de mesures à
prendre en vue de prévenir les complications inhérentes à la
transfusion . Test de
compatibilité au laboratoire
Test ultime au lit du malade
Introduction
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Introduction
Un ensemble d’examens immuno-hématologiques est nécessaire
avant toute transfusion de CGR:
GS ABO et RhD du patient
Phénotype Rhésus(C,c,E,e) et Kell(K)
Test de compatibilité au laboratoire
RAI.
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Test de compatibilité au laboratoire ( Cross Match)
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�Obligatoire avant toute transfusion de CGR :circulaire (49/05)
�Sérum du patient testé vis-à-vis des unités de CGR à transfuser
� Doit comporter, au minimum, un test à l’anti-globuline
Humaine(AGH).
�Permet de vérifier l’absence chez le receveur d’Ac reconnaissant
des Ag présents sur les GR à transfuser autres que les Ag ABO.
�Permet une distribution nominative du CGR
�Ne dispense en aucun cas du contrôle ultime au lit du malade
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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1. Prescription de la demande
2. Prélèvement
3. Réalisation pratique
4. Lecture et Interprétation
5. Durée de validité
6. Traçabilité
6
Modalités pratiques
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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7
1/ Prescription de la demande
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Formulaire de demande de produits sanguins (Circulaire 49/05).
N.B: Patient GS inconnu:
déterminer d’abord le GS !!!
Demande dûment remplie et accompagnée:
� d’une carte de GS
� d’un prélèvement sanguin.
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• De moins de 72h/ Tube sec: sérum
EDTA: plasma
• Quantité suffisante
• Sérum hémolysé: non utilisé
• Ne pas prélever à partir de la branule.
• Étiqueter l’échantillon au chevet du malade
• L’étiquette doit comporter Nom, Prénom, Matricule/DDN.
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2/ le prélèvement
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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1. Vérification du GS du patients: EG
� Eviter les erreurs de prélèvement.
2. Choix des unités de CGR à tester:
� Règles immunologiques de la transfusion
� ATCD: historique transfusionnel et immuno-hématologique
du patient: GS,RAI,TCD…)
3. Vérification du GS de l’unité à tester:
� Eviter les erreurs d’étiquetage
9
3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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4. Bien centrifuger l’échantillon: 4000tr/5-10min
5. Choix de la technique :
� TCI en respectant les bonnes pratiques de laboratoire.
6. Maintien de la chaine du froid:
� Laisser les CGR le moins de temps possible sur la paillasse
� Travailler prescription par prescription (Sécurisation de
l’identification)
7. Conserver les tubes pendant 7j à 4degré pour une éventuelle
réévaluation
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3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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Donor RBCs (washed)
Patient serum
Pas d’ agglutination ~ compatible
Agglutination ~ incompatible
3/ Réalisation pratique: Principe LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Test indirect à l’anti-globuline humaine= Test de Coombs Indirect(TCI)
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En tube
-1 goutte de la suspension
d’hématies du donneur à 3% en salin*
-2 gouttes du sérum à tester -Incubation à 37°C pendant 45 mn* -3 lavages -Ajout de l’AGH -Centrifugation 20 s à 1500 trs/mn -Lecture
En gel test : GDL
-50 μl de la suspension d’hématies du
donneur à 0.8 % en salin* -25 μl du sérum à étudier -Incubation à 37°C pendant 45 mn*
-Centrifugation 10’ à 800tr/mn -Lecture
12 * Si les hématies sont préparées dans une solution à basse force ionique (BFI): incubation
pendant 15 mn seulement
3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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En tube En gel test
�3 lavages : risques:
-lavage insuffisant: neutralisation de l’AGH -Dissociation du complexe Ag-Ac
� AGH ajoutée secondairement sur le culot lavé
�Pas de lavage (diminution du temps d’analyse: important pour test de compatibilité)
�Standardisation: AGH présente dans le milieu de filtration( quantité identique pour tous les tests ) Evite toute erreur technique par omission de l’ajout de l’AGH
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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En tube En gel test
�Recherche des agglutinats par agitation :
� agitation trop forte
Faux négatifs (dissociation des faibles agglutinats)
� agitation trop faible après une centrifugation très rapide
Faux positifs
�lecture directe sans agitation du support de réaction
�centrifugation standardisée .
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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En tube En gel test
�Reproductibilité médiocre pour les Ac de faible titre
�Sensibilité moindre
� Relecture différée impossible
�Meilleure reproductibilité
�Sensibilité +++
�Relecture différée possible: sécurité d’attribution des résultats
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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En tube En gel filtration (cotation Diamed)
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Les résultats sont exprimés en nombre de croix
4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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En tube En gel filtration
(cotation Diamed)
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3/ Lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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� Absence d’agglutination � test de compatibilité négatif
� Joindre une Etiquette solidaire aux unités compatibles.
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4/ lecture et Interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
�Présence d’une réaction d’agglutination avec une ou plusieurs unités
� test de compatibilité positif.
�Toute unité positive est dite incompatible et ne pourra être délivrée
(sauf accord du responsable et dans des cas très particuliers d’auto Ac
sans allo Ac masqué)
�Distribution, livraison
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� Un Cross match positif impose des explorations quant au
problème impliqué.
� le patient ne devrait pas être transfusé avant que la cause du
problème ne soit décidée → sélection de sang approprié.
� Quand une incompatibilité est détectée, les résultats du
témoin auto et la RAI devraient être passés en revue.
4/ lecture et interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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CM positif
Vraie agglutination
RAI, T auto TCD,élution
Phénotypage :éventuellement élargi pour R et D
Fausse agglutination
-Qualité de l’échantillon? -Respect des conditions opératoires?
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4/ lecture et interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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� Problème technique:
• Forte concentration de la suspension des CGR?
• Lavage non fait du culot globulaire?
• Problème de centrifugation des cartes?
� Problème mécanique:
• Phénomène de rouleaux?
• Prélèvement branule?
• Présence d'Artefacts: carte gel desséchée? Périmée?
4/ lecture et interprétation: Fausse agglutination
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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Vraie Agglutination
RAI T auto
TCD
RAI Négative T auto Négatif
TCD Négatif
RAI positive T auto Négatif
TCD Négatif
RAI positive T auto positif
TCD Positif
Anticorps anti-privé test de compatiblité positif reproductible avec une seule unité
AlloAc identification →CGR compatibilisés dépourvus des Ag correspondants
Situation complexe Auto Ac ± Allo Ac
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4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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3 se
mai
nes
3 m
ois
Taux de l’Ac
1èr
e tr
ansf
usio
n 3jours
CM négatif
CM négatif
Seuil de détection de l’Ac
TS° TS°
1èr épisode transfusionnel immunogène Réponse primaire
2ème épisode transfusionnel apportant le même Ag Réponse secondaire
2èm
e tr
ansf
usio
n
5/ Durée de Validité
valide trois jours (72h) après le prélèvement de l’échantillon.
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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Date de la demande
Date de l’examen (CM)
N° du CGR
Date de péremption
Nom prénom
Matricule Service Date de l’annulation
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Registre de compatibilité si labo non informatisé:
6/ Traçabilité
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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Avantages • Permet d’éviter les
incompatibilités ABO. • Permet de détecter:
� les Ac anti-privé � la majorité des AlloAc.
• Assure une sécurité immunologique immédiate.
Inconvénients • Ne prévient pas l’immunisation.
• Ne garantit pas la survie des CGR
• Ne permet pas de détecter:
-les AlloAc dont l’Ag correspondant n’est
pas porté par les hématies du
donneur.
-les anticorps de faible titre en
particulier si les hématies du donneur
sont hétérozygotes. 25
Intérêts et limites
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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Test ultime au lit du malade ( contrôle ultime pré- transfusionnel :CUPT)
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Le test ultime au lit du malade ou Contrôle Ultime Pré-
Transfusionnel(C.U.P.T)
� Dernier verrou sécuritaire avant l’acte transfusionnel,
c’est une étape obligatoire et capitale
�Rempart aux dysfonctionnements possibles à tous les niveaux
de la chaine transfusionnelle
Introduction
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28
Permet d’éviter ce que nous redoutons tous: l’accident hémolytique
potentiellement mortel par incompatibilité ABO
Introduction
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6 points clés
� Réalisé immédiatement avant chaque transfusion
� Au lit du malade en sa présence ( aucune des étapes ne doit
être effectuée en salle de soins)
� Ne concerne qu’un seul patient à la fois
� pour le même patient; à renouveler pour chaque CGR
� Obligatoire y compris en cas d’urgence vitale
� Réalisé par la personne qui pose la transfusion:
« je contrôle, je transfuse »
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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1. Le contrôle ultime de concordance Tous les PSL
2. Le contrôle ultime de compatibilité les CGR
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Obligatoire (Circulaire 49/2005)
Réalisé en deux étapes:
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L’identité du patient Contrôle ultime de concordance
En interrogeant le patient ( si son état le permet): faire décliner nom, prénom et date de naissance
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Contrôle ultime de concordance
la carte de GS
la fiche transfusionnelle
-l’étiquette adhésive au PSL -l’étiquette solidaire de l’unité de sang à transfuser
Groupes sanguins
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Contrôle ultime de concordance
Numéro du PSL
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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�� GS identiques (Receveur/CGR) : TS° ISOGROUPE
Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité
Conformité des règles transfusionnelles:
� GS différents (Receveur / CGR) : TS° NON ISOGROUPE
Vérifier qu’elle est compatible
Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité.
Contrôle ultime de concordance
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Contrôle ultime de compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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- Contrôle de compatibilité ABO :Epreuve globulaire � GS ABO du patient � GS ABO du CGR à transfuser
-Les Ag présents sur les GR sont révélés par les réactifs (Ac): �Anti-A (Bleu ) �Anti-B (jaune)
- Lecture : formation d’agglutinats visibles absence d’agglutinats
Principe Contrôle ultime de compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Contrôle ultime de compatibilité
Lame ou
plaque
4 spatules
Dispositifs: Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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-Bien conservés à +4°C
-Non périmés
-Régulièrement contrôlés
-Nécessité d’une procédure validée,
pour la traçabilité
Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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receveur
Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Dispositif : SAFETY CARD AB Contrôle ultime de compatibilité
Sérums tests desséchés
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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Règle d’interprétation
Protocole
Personne réalisant le test
Zones individualisées:
� Identification
� Manipulation
� Interprétation
� Décision
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Dispositif : SAFETY CARD AB
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Ne jamais transfuser quand il y a pour le même réactif : � agglutination avec la poche � pas d’agglutination avec le patient
Règle:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
NE JAMAIS DONNER L’Ag QUE LE RECEVEUR NE POSSEDE PAS
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Transfusion ISO groupe Je transfuse
Réaction identique :
- même aspect
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS Patient: B GS culot: B
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Je dois valider la compatibilité
Réaction NON identique :
Transfusion NON iso groupe COMPATIBLE Je transfuse
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS Patient: A GS culot: O
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Transfusion NON iso groupe INCOMPATIBLE JE NE TRANSFUSE PAS
Réaction NON identique :
-Patient: ne possède aucun Ag sur ses GR, il a forcément les anti-A et anti-B dans son sérum - CGR apporte l’Ag B RISQUE D’HÉMOLYSE
Je dois valider la compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS culot: B GS Patient: O
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Difficultés d’interprétation Devant toute difficulté ou doute dans l’interprétation: - Bloquer la transfusion,
- Refaire le contrôle ,
- Demander l’avis du médecin responsable de la TS°
- Contacter le CRTS
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
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« Chaloupage » trop énergique
Surface de réaction trop petite
Aspect
homogène
Agglutinats visible
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Difficultés d’interprétation
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Conclusion
� Le CM Permet, quand il est réalisé dans le respect des bonnes
pratiques de laboratoire, d’assurer une sécurité
immunologique immédiate optimale.
� Adapté à la Tunisie:
� Problème de disponibilité permanente d’un panel
discriminatif et équilibré .
� L’interprétation de La RAI nécessite un biologiste bien
informé.
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Conclusion
� La sécurité transfusionnelle est la responsabilité à la fois des
centres de transfusion et des services transfuseurs.
� Le contrôle ultime au lit du malade est le dernier verrou de
sécurité et permet d’éviter les accidents par incompatibilité
ABO