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$: TESIS RICARDO MESTANZA OCTUBRE 2016'(',&$725,$ 'hglfr frq pxfkr dpru d plv sdguhv sru ho hvixhu]r txh klflhurq \ txh vljqlilfy txh dkrud orjuh hvwd phwd txh vhui xqd gh pxfkdv hq pl$
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO

"Frecuencia de las tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen utilizadas para la identificación de microorganismos,

realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el año 2015"

Trabajo de Titulación presentado previo a la obtención del Título de licenciado en Laboratorio Clínico e Histotecnológico

Mestanza Hurtado Ricardo Gabriel

TUTORA: MSc. Yolanda del Rocío Paredes Jiménez

Quito, Octubre 2016

ii

DEDICATORIA

Dedico con mucho amor a mis padres por el esfuerzo que

hicieron y que significó que ahora logre esta meta, que será una

de muchas en mi vida. A mi amada esposa por todo el tiempo

sacrificado y su paciencia que contribuyó en la realización de

este trabajo.

iii

AGRADECIMIENTO

Mi agradecimiento infinito por todo lo conseguido a Dios, por las

bendiciones de cada día, que es el motivo para seguir adelante

con mis sueños.

Agradezco de manera especial a mi madre que fue la persona que

ha estado con su apoyo y consejos constantemente.

Un agradecimiento sincero al personal del servicio de Anatomía

Patológica del Hospital Eugenio Espejo en especial al Lic.

Franklin Aponte por su ayuda y total apertura en todo lo que

necesitaba.

iv

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL

Yo, Ricardo Gabriel Mestanza Hurtado en calidad de autor del Proyecto de

Investigación realizado sobre “Utilización de las tinciones histoquímicas de PAS,

Grocott y Ziehl-Neelsen para la identificación de microorganismos, realizadas en el

Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en

el año 2015”, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL

ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de parte de los

que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente

autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los

artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su

Reglamento.

Quito, 28 de Julio del 2016

Ricardo Gabriel Mestanza

CI: 050367710-6

E-mail: [email protected]

v

APROBACIÓN DEL TUTOR/A DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

En mi calidad de Tutora del Trabajo de Titulación, presentado por RICARDO

GABRIEL MESTANZA HURTADO, para optar por el Grado de Licenciado en

Laboratorio Clínico e Histotecnológico; cuyo título es: "FRECUENCIA DE LAS

TINCIONES HISTOQUÍMICAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN

UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS,

REALIZADAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL

DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL AÑO 2015", considero que

dicho trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes para ser sometido a la

presentación pública y evaluación por parte del tribunal examinador que se designe.

En la ciudad de Quito, a los 29 días del mes de Julio de 2016.

MSc. Yolanda del Rocío Paredes Jiménez DOCENTE-TUTORA C.C. 1705148003

vi

APROBACIÓN DEL TRIBUNAL

Los miembros del Tribunal Examinador aprueban el informe de titulación "FRECUENCIA DE LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS, REALIZADAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL AÑO 2015", presentado por: RICARDO GABRIEL MESTANZA HURTADO. Para constancia certifican,

MSc. Bernardita Ulloa MSc. Lucrecia Pabón _____________________________ _____________________________ PRESIDENTE VOCAL

MSc. Carmen Salvador ________________________________

VOCAL

vii

ÍNDICE DE CONTENIDO:

DEDICATORIA ....................................................................................................... II

AGRADECIMIENTO .............................................................................................. III

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL ............................................. IV

APROBACIÓN DEL TUTOR/A DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ........................ V

APROBACIÓN DEL TRIBUNAL ........................................................................... VI

ÍNDICE DE IMÁGENES .......................................................................................... X

ÍNDICE DE TABLAS .............................................................................................. XI

ÍNDICE DE GRÁFICOS ....................................................................................... XIII

ÍNDICE DE ANEXOS ........................................................................................... XV

RESUMEN .......................................................................................................... XVI

ABSTRACT ........................................................................................................ XVII

INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 1

CAPITULO I ............................................................................................................ 3

EL PROBLEMA ...................................................................................................... 3

1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 3

1.2 OBJETIVOS ................................................................................................... 4

1.2.1 OBJETIVO GENERAL ............................................................................. 4

1.2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS .................................................................... 4

1.3 JUSTIFICACIÓN ............................................................................................ 5

CAPITULO II ........................................................................................................... 6

MARCO TEÓRICO ................................................................................................. 6

2.1 TINCIONES HISTOQUÍMICAS ...................................................................... 6

2.2 TINCIÓN DE PAS (ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF) ................................... 7

2.2.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN PAS .................................................... 8

2.2.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN PAS ................................... 9

2.2.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN PAS .............................................................. 9

2.2.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN PAS ................................................... 10

2.3 TINCIÓN DE GROCOTT (PLATA-METENAMINA) ....................................... 11

viii

2.3.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN GROCOTT ........................................ 12

2.3.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN GROCOTT ...................... 13

2.3.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN GROCOTT ................................................. 13

2.3.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN GROCOTT ......................................... 14

2.4 TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN (BAAR) ....................................................... 15

2.4.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN.............................. 16

2.4.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN ............ 17

2.4.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN ....................................... 17

2.4.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN............................... 18

2.5 MICROORGANISMOS EN LAS SECCIONES DE TEJIDOS ........................ 20

2.6 MICROORGANISMOS MICÓTICOS ............................................................ 20

2.6.1 Histoplasma ........................................................................................... 22

2.6.2 Cándida Albicans ................................................................................... 23

2.6.3 Cryptococcus ......................................................................................... 23

2.6.4 Aspergillus ............................................................................................. 24

2.7 MICROORGANISMOS BACTERIANOS ...................................................... 24

2.7.1 Actinomyces .......................................................................................... 24

2.8 MICROORGANISMOS PARASITARIOS ..................................................... 25

2.8.1 Amebas .................................................................................................. 25

2.8.2 Leishmania ............................................................................................ 26

2.9 MICROORGANISMOS BACTERIAS ALCOHOL-ÁCIDO RESISTENTES

(BAAR) ............................................................................................................... 26

CAPITULO III ........................................................................................................ 27

METODOLOGÍA ................................................................................................... 27

3.1 TIPO DE ESTUDIO ...................................................................................... 27

3.2 POBLACIÓN ................................................................................................ 27

3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN ................................ 27

3.4 CONSIDERACIONES ÉTICAS..................................................................... 27

CAPÍTULO IV ........................................................................................................ 28

RESULTADOS ...................................................................................................... 28

ix

4.1 PRESENTACIÓN ......................................................................................... 28

4.2 CONCLUSIONES ......................................................................................... 42

4.3 RECOMENDACIONES ................................................................................ 43

CAPITULO V ......................................................................................................... 44

PROPUESTA ........................................................................................................ 44

5.1 DESCRIPCIÓN ............................................................................................ 44

5.2 JUSTIFICACIÓN .......................................................................................... 44

5.3 BENEFICIARIOS .......................................................................................... 45

5.4 TRIPTICO DE DIFUSIÓN ............................................................................. 45

BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................... 47

ANEXOS ............................................................................................................... 51

x

ÍNDICE DE IMÁGENES

IMAGEN 1. TINCIÓN PAS. ASPERGILLUS ......................................................... 10

IMAGEN 2. TINCIÓN PAS DE GLÁNDULA SALIVAL .......................................... 11

IMAGEN 3. HONGOS FILAMENTOSOS DE TAMAÑOS VARIABLES Y SEPARADOS (TINCIÓN DE GROCOTT) ....................................................... 15

IMAGEN 4. TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN. MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS. ........................................................................................... 19

IMAGEN 5. TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN. LEPRA LEPROMATOSA .............. 19

xi

ÍNDICE DE TABLAS

TABLA 1. DISTRIBUCIÓN DE LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS REALIZADAS DURANTE EL PERÍODO 2015 EN EL SERVICIO ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO ........................ 28

TABLA 2. DISTRIBUCIÓN DE LOS CASOS POR LA EDAD DE LOS PACIENTES DEL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 29

TABLA 3. DISTRIBUCIÓN DE LOS CASOS POR SEXO DE LOS PACIENTES DEL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 30

TABLA 4. FRECUENCIA DE CASOS POSITIVOS PARA MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 31

TABLA 5. TINCIONES POSITIVAS PARA MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 32

TABLA 6. TINCIONES DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN POSITIVAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 33

TABLA 7. TINCIONES POSITIVAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN EN RELACIÓN AL TOTAL DE CADA UNA DE ESTAS TINCIONES REALIZADAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 34

TABLA 8. DISTRIBUCIÓN DE LAS TINCIONES POSITIVAS PARA PAS DE ACUERDO A LOS MICROORGANISMOS DIAGNOSTICADOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 35

TABLA 9. DISTRIBUCIÓN DE LOS TIPOS DE TEJIDOS EN LOS QUE SE REALIZÓ LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 .................................................................... 36

TABLA 10. DISTRIBUCIÓN DE LOS TIPOS DE TEJIDOS POR TINCIONES HISTOQUÍMICAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN REALIZADAS EN

xii

EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 37

TABLA 11. DISTRIBUCIÓN DE LOS TEJIDOS EN LOS QUE SE IDENTIFICÓ LA PRESENCIA DE MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................... 38

TABLA 12. DISTRIBUCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS IDENTIFICADOS CON LAS TINCIONES DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 39

TABLA 13. DISTRIBUCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS MICÓTICOS HALLADOS CON LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 .................................................................... 40

TABLA 14. IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS MICÓTICOS POR TINCIÓN DE PAS Y GROCOTT EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................... 41

xiii

ÍNDICE DE GRÁFICOS

GRÁFICO 1. DISTRIBUCIÓN DE LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS REALIZADAS DURANTE EL PERÍODO 2015 EN EL SERVICIO ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO 28

GRÁFICO 2. DISTRIBUCIÓN DE LOS CASOS POR LA EDAD DE LOS PACIENTES DEL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ............. 29

GRÁFICO 3. DISTRIBUCIÓN DE LOS CASOS POR SEXO DE LOS PACIENTES DEL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 30

GRÁFICO 4. FRECUENCIA DE CASOS POSITIVOS PARA MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................................................ 31

GRÁFICO 5. TINCIONES POSITIVAS PARA MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 32

GRÁFICO 6. TINCIONES DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN POSITIVAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 33

GRÁFICO 7. TINCIONES POSITIVAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN EN RELACIÓN AL TOTAL DE CADA UNA DE ESTAS TINCIONES REALIZADAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................................................ 34

GRÁFICO 8. DISTRIBUCIÓN DE LAS TINCIONES POSITIVAS PARA PAS DE ACUERDO A LOS MICROORGANISMOS DIAGNOSTICADOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 35

GRÁFICO 9. DISTRIBUCIÓN DE LOS TIPOS DE TEJIDOS EN LOS QUE SE REALIZÓ LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 .................................................................... 36

GRÁFICO 10. DISTRIBUCIÓN DE LOS TIPOS DE TEJIDOS POR TINCIONES HISTOQUÍMICAS DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN REALIZADAS EN

xiv

EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 37

GRÁFICO 11. DISTRIBUCIÓN DE LOS TEJIDOS EN LOS QUE SE IDENTIFICÓ LA PRESENCIA DE MICROORGANISMOS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................... 38

GRÁFICO 12. DISTRIBUCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS IDENTIFICADOS CON LAS TINCIONES DE PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................... 39

GRÁFICO 13. DISTRIBUCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS MICÓTICOS HALLADOS CON LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 .................................................................... 40

GRÁFICO 14. IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS MICÓTICOS POR TINCIÓN DE PAS Y GROCOTT EN EL SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA DEL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO EN EL PERÍODO 2015 ................................................................................... 41

xv

ÍNDICE DE ANEXOS

ANEXO 1. HOJA DE RECOLECCIÓN DE DATOS ............................................... 51

ANEXO 2. HOJA DE PEDIDO DE TINCIONES HISTOQUÍMICAS ...................... 52

ANEXO 3. LIBRO DE TÉCNICAS DE TINCIONES HISTOQUÍMICAS ................. 52

ANEXO 4. PLACAS COLOREADAS CON LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN ............................................................ 53

ANEXO 5. CRONOGRAMA DEL PROYECTO ..................................................... 54

xvi

TEMA: "Frecuencia de las tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen utilizadas para la identificación de microorganismos, realizados en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio espejo en el año 2015"

Autor: Ricardo Gabriel Mestanza Hurtado

Tutora Académica: MSc. Yolanda Paredes

RESUMEN

Este estudio descriptivo transversal permitió determinar la frecuencia de las

tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen utilizadas para identificar

microorganismos, realizados en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de

Especialidades Eugenio Espejo en el año 2015 de un total de 556 tinciones

histoquímicas. En el desarrollo de este estudio se realiza los diferentes conceptos

orientados hacia las tinciones histoquímicas, técnicas utilizadas y los

microorganismos identificados. La tinción PAS fue la más utilizada con un 36%

mientras que las tinciones de Ziehl-Neelsen y Grocott obtuvieron un 32%. De las

tinciones histoquímicas positivas para microorganismos se obtuvieron 52 que

equivalen al 9% de las cuales los hongos fueron los más identificados. Las tinciones

histoquímicas de este estudio muestran una frecuencia alta pero su positividad es

baja para microorganismos.

PALABRAS CLAVES: PAS / GROCOTT / ZIEHL-NEELSEN / MICROORGANISMOS

xvii

TITLE: “Frequency of histochemical staining of PAS, Grocott and Ziehl-Neelsen used for the identification of microorganisms, carried out in the Pathological Anatomy Service at the Hospital de Especialidades Eugenio Espejo in 2015”

Author: Ricardo Gabriel Mestanza Hurtado

Academic Tutor: MSc. Yolanda Paredes

ABSTRACT

This cross-sectional descriptive study allowed determinig the frequency of

histochemical staining of PAS, Grocott, Ziehl-Neelsen used to identify

microorganisms, carried out in the of Pathological Anatomy Service at the Hospital

de Especialidades Eugenio Espejo in 2015 out of a total of 556 histochemical

staining. In the development of this study, there are different concepts toward

histochemical stains, techniques used and identified microorganisms. The PAS

staining was the most commonly use with a 36% while Ziehl-Neelsen and Grocott

stains obtained a 32%. For positive histochemical staining 52 amounting to 9% of

which fungi were those most identified obtained from microorganisms. This

Histochemical stains of this study show a high frequency but their positivity is low for

microorganisms.

KEYWORDS: PAS / GROCOTT / ZIEHL-NEELSEN / MICROORGANISM

1

INTRODUCCIÓN

Desde casi 100 años, los médicos patólogos han utilizado tinciones histoquímicas

llamadas también coloraciones especiales para apoyar en el diagnóstico

fundamentado en el estudio de los tejidos. Aunque la tinción de hematoxilina y

eosina (H&E) es una coloración muy conocida entre Histotecnólogos y Patólogos

para observar especímenes quirúrgicos, post mortem y biopsias, esta tinción tiene

algunos escasos inconvenientes en el diagnóstico, por tanto en estos casos, es

donde las tinciones especiales son útiles para el reconocimiento de estructuras

específicas, sustancias orgánicas o inorgánicas en las células o reacciones y

presencia de microorganismos en los tejidos.

La terminología "coloración especial" es empleada con más frecuencia en el ámbito

clínico, y sencillamente quiere decir cualquier técnica que no sea la H&E usada para

dar colores en una muestra de tejido (Pujar, Pereira, Tamgadge, Bhalerao, &

Tamgadge, 2015).

Se abarcan dentro de las coloraciones histoquímicas aquellas que impliquen

una reacción química en la que intervienen moléculas pertenecientes al propio

tejido. La finalidad de las técnicas histoquímicas es poner en evidencia una molécula

o familia de moléculas y estructuras biológicas que se muestran en una sección

histológica y poder analizar su distribución tisular "in situ". Estas estructuras y

moléculas son complicadas de distinguir con colorantes generales.

Durante el procesamiento del tejido previo a la reacción histoquímica, como la

fijación o la inclusión, hay que prevenir afectar a la estructura que queremos poner

de manifiesto porque de otra manera resultaría en falsos negativos, es decir, no

tener coloración cuando realmente la molécula de interés sí se encuentra en el

tejido, aunque dañada.

En ciertas ocasiones es imprescindible ejecutar pasos antes de la reacción

histoquímica para revelar la molécula que se quiere mostrar, por ejemplo utilizando

2

un fijador apropiado, porque de otro modo no reaccionaría con los reactivos

químicos (Megías, Molist, & Pombal, 2015).

Ya en la práctica se utiliza la palabra histoquímica para elegir el método que

convenga junto con la ayuda de los microscopios óptico y electrónico (Resino ,

2015).

Se ha tenido innumerables avances en la medicina moderna, el empleo de

medicamentos, y aún se puede decir que las infecciones todavía no pueden ser

erradicadas, al contrario, abundantes de estos agentes han cambiado al mismo

tiempo con los adelantos científico-técnicos (Walwyn Salas, y otros, 2004)

En éste trabajo se trata de describir la utilización de estas tinciones histoquímicas,

especialmente la frecuencia con que se utiliza las tinciones de PAS, Grocott y Ziehl-

Neelsen como apoyo en la identificación de microorganismos, y en qué casos se

solicitan éstas tinciones.

3

CAPITULO I

EL PROBLEMA

1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Uno de los procedimientos que son importantes dentro del Laboratorio de

Histopatología son las tinciones histoquímicas con las cuales se puede diferenciar

distintas estructuras del tejido, pudiendo observar lesiones específicas,

microorganismos o una presunta lesión.

Las tinciones “especiales” se utilizan principalmente para apoyar en el diagnóstico

de enfermedades infecciosas, y también pueden ser utilizadas en el diagnóstico

diferencial de otras patologías como un cáncer. Las tinciones histoquímicas se lo

utilizan con colorantes químicos específicos que identifican los microorganismos

presentes en los tejidos.

Estas técnicas de tinciones histoquímicas como son PAS, plata-metenamina

(Grocott), Ziehl-Neelsen entre otras, elevan la calidad de los diagnósticos

histopatológicos en biopsias, citología y autopsias en relación con infecciones

nosocomiales. Los resultados de estas tinciones posibilitan un diagnóstico

histológico específico del agente causal lo que permitirá una rápida aplicación de

conductas terapéuticas y preventivas al paciente (Walwyn Salas, y otros, 2004).

En algunos estudios realizados en México, la tinción PAS se utilizó en un 5% de los

casos histopatológicos a pesar de ser una de las técnicas más comúnmente

utilizada de las no rutinarias en la dermatopatología e histopatología, en la cual nos

ayuda a visualizar microorganismos como parásitos y hongos (Hajar Serviansky,

Kresch Tronik, Moreno Coutiño, Arenas, & Vega Memije, 2013).

Las tinciones de Grocott que son coloraciones argénticas porque utilizan como

colorante específico el nitrato de plata son utilizadas para la identificación de

4

hongos, y en vista de que la "patología fúngica" ha tenido un aumento en estos

últimos años sobre todo en inmunodeprimidos estas tinciones han sido mas

frecuentemente realizadas en los laboratorios de histopatología, según refieren los

estudios realizados en España (Mayayo Artal, 2004).

Por lo expuesto anteriormente la formulación del problema de este proyecto de

investigación es: ¿Con qué frecuencia se realizan las tinciones histoquímicas de

PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen para la identificación de microorganismos en el

Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo?

1.2 OBJETIVOS

1.2.1 OBJETIVO GENERAL

Determinar la frecuencia de las tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-

Neelsen para la identificación de microorganismos en el Servicio de Anatomía

Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo durante el período 2015.

1.2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Distribuir los casos de tinciones histoquímicas por grupo de edades y sexo

de los pacientes.

Establecer los casos de tinciones histoquímicas positivas para

microorganismos.

Distribuir los casos de tinciones histoquímicas positivas de PAS, Grocott y

Ziehl-Neelsen.

Describir los tipos de tejidos en los que fueron realizadas las tinciones

histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen.

Identificar los microorganismos diagnosticados con las tinciones

histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen.

5

1.3 JUSTIFICACIÓN

Las técnicas de coloración histoquímica son de gran ayuda en el diagnóstico

histopatológico, y la realización de las mismas es una competencia del perfil

profesional del Licenciado en Laboratorio Clínico e Histotecnológico, el mismo que

tiene un papel preponderante en la aplicación de los protocolos de la técnica de las

coloraciones histoquímicas, así como en los procedimientos previos del manejo de

las muestras de tejido: como son la fijación, el procesamiento, el bloqueo, la

microtomía, la preparación de reactivos y colorantes, que influyen directamente en

la calidad de las placas que se entregan al médico patólogo para que emita el

diagnóstico

Ante la importancia que aún tiene la utilización de las coloraciones histoquímicas

este trabajo evidencia que el uso de las tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y

Ziehl-Neelsen son las más utilizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del

Hospital de Especialidades Eugenio Espejo durante el año 2015, además el uso de

estas tres tinciones demostró que si ayudaron al diagnóstico histopatológico, siendo

la tinción de PAS la que tuvo mayor frecuencia de utilización actualmente.

Los resultados obtenidos en este estudio pueden constituirse en las herramientas

necesarias para que se planteen otros trabajos de investigación que tengan un

mayor impacto en el sentido de que se generalice el uso de las coloraciones

histoquímicas para el diagnóstico e incluso se estandaricen los protocolos de las

técnicas de las tinciones histoquímicas en todos los laboratorios de Histopatología.

Información que puede y debe ser utilizada por el personal sanitario de otros

hospitales para la toma de decisiones en favor de la mejora del servicio que brindan

estas instituciones de salud en lo que respecta al diagnóstico histopatológico

partiendo de la realidad de nuestro país, en lo que respecta a la prevalencia de

tumores benignos y malignos que afectan a toda la población sin especificidad de

sexo, edad, condición socio económica, cultural, etc.

6

CAPITULO II

MARCO TEÓRICO

2.1 TINCIONES HISTOQUÍMICAS

La química de los colorantes y tinciones ayudó al progreso del campo científico que

son diversos, entre las cuales está la histología y la histopatología. El Histólogo y el

Histopatólogo manejan una variada serie de colorantes para conseguir imágenes

de la morfología de los tejidos biológicos, con ayuda del microscopio óptico. El

análisis microscópico de los elementos y reacciones químicas que distinguen a los

tejidos biológicos componen la histoquímica, y se apoya de la misma manera

utilizando colorantes que son específicos (Acuña Fernández & Elguero Bertolini,

2012).

Las tinciones histoquímicas se fundamentan en la unión de las moléculas de un

colorante a los tejidos. Estos procedimientos se los puede utilizar para

preparaciones en microscopía óptica o electrónica (Ross & Pawlina, 2012, pág. 3).

La histoquímica son técnicas de tinción histológicas que utilizamos a menudo para

identificar algunas substancias o ciertos agentes infecciosos. De tal forma que

podemos observar elementos o compuestos como hierro (Azul de Prusia),

lipofucsina (técnica de von Kossa), glucógeno (tinción PAS), etc. (de Ferraris

Gómez, 2009, pág. 18).

Las células de los tejidos no tienen color, por lo tanto deben teñirse para que sean

visibles al microscopio óptico (Stevens & Lowe, 2006, pág. 5). Partiendo de este

principio en el laboratorio de Histopatología se realizan varios tipos de tinciones

histológicas con el propósito de impregnar de un color a las estructuras del tejido

para observar innumerables componentes celulares, mismos que de acuerdo a las

características que presentan pueden ser valorados dentro de los patrones

7

histológicos normales o de los patrones histológicos con alteraciones benignas (no

cáncer) o alteraciones malignas (cáncer).

Las tinciones histológicas son de uso general como es el caso de la tinción

hematoxilina-eosina que es conocida también como la coloración de rutina que

puede comportarse como una tinción regresiva cuando se utiliza como colorante

nuclear, la hematoxilina de Harris o como una coloración progresiva cuando el

colorante nuclear es la hematoxilina de Mayer, esto debido a la capacidad de los

componentes químicos de cada colorante de interaccionar con las diversas

estructuras celulares que constituyen los tejidos. Y son de uso específico por su

mayor complejidad las tinciones histoquímicas, Inmunohistoquímica y las

Enzimohistoquímicas ya que emplean colorantes específicos, sustratos, enzimas,

anticuerpos marcados, etc. Estas tinciones en sus orígenes se hicieron en forma

empírica y con el paso del tiempo se fueron desarrollando en base al conocimiento

y a la experiencia científica, llegando a desarrollar incluso las técnicas de tinción

para el diagnóstico a través de la microscopía electrónica. Sin embargo el uso de

las técnicas de tinción histoquímica o tinciones especiales han prevalecido al pasar

del tiempo y se siguen utilizando al parecer por la capacidad que tienen de permitir

reconocer estructuras específicas coloreadas de un color determinado, como

ejemplo de estas tinciones, las más reconocidas son las tinciones de Orceína,

tinciones de Sudan, de Ácido Peryódico de Schiff, de Tricrómica de Masson; o las

tinciones para evidenciar microorganismos como la tinción de Gram, tinción de

Ziehl-Neelsen, tinción de Grocott o la tinción de tinta china (Cediel, y otros, 2009,

págs. 40-42).

2.2 TINCIÓN DE PAS (ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF)

La tinción ácido periódico de Schiff (PAS) es una de las técnicas de tinción especial

más comúnmente realizada en el laboratorio de histopatología que se utiliza para

poner de relieve las moléculas con alto porcentaje de contenido de carbohidratos

tales como mucina, glucógeno, microorganismos micóticos, parasitarios y para

delimitar la membrana basal en la piel y en otros tejidos (Giri D. , 2015).

8

Al contrario de otras técnicas, la tinción PAS también identifica mucinas neutras. La

reactividad del PAS no se fundamenta en la existencia de grupos ácidos entre los

polisacáridos, pero si en la estructura de las unidades de monosacáridos (Myers,

2016).

La técnica de tinción de PAS tiene muchas utilidades en lo que respecta a la

demostración de los distintos hidratos de carbono como se mencionó anteriormente,

pero también combinados con otros tipos de moléculas como proteínas que tienen

una coloración roja, y las mucinas del estómago también presentan una tinción muy

positiva para PAS de ahí que como control testigo positivo de la técnica de tinción

de PAS se utiliza un corte de tejido de estómago (Lowe & Anderson, 2015, pág. 6).

2.2.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN PAS

La reacción de la técnica de PAS se basa en la demostración de monosacáridos y

glucógeno. La primera reacción en la tinción implica la acción del ácido peryódico

como agente oxidante para oxidar los enlaces carbono-carbono entre dos grupos

hidroxilo adyacente. Se liberan grupos aldehído que se detectan por el reactivo de

Schiff (Parry N. , 2012).

En la segunda reacción, la sección de tejido reacciona con el reactivo de Schiff. Éste

comprende una mezcla de fucsina básica, ácido clorhídrico, y meta-bisulfito de sodio

dando como resultado un ácido inestable que es incoloro, y en la presencia de los

aldehídos adquiere un color purpura (García Espinoza, Campal Rubio, & Crespo

González, 2015, pág. 190).

La intensidad del color es proporcional a la concentración de grupos hidroxilo

originalmente presentes en las unidades de monosacárido (Parry N. , 2012).

A continuación la Hematoxilina se utiliza típicamente como una tinción de contraste

para visualizar otros elementos en el tejido. En ésta tinción se demuestra

compuestos como los mucopolisacáridos y glucógeno para delimitar las membranas

9

basales y poder evidenciar más a la mayoría de parásitos y hongos (Ceccotti,

Sforza, Carzoglio, Luberti, & Flichman, 2007, pág. 67).

2.2.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN PAS

Los reactivos necesarios usados en la tinción PAS se basan en el manual del “AFIP”

(Instituto de Patología de las Fuerza Armadas de los Estados Unidos de América)

utilizado en el laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades

Eugenio Espejo. (2015)

Solución de ácido Peryódico 5%

Solución de ácido clorhídrico 1N

Reactivo de Schiff de Coleman

Solución Hematoxilina de MAYER o la solución de Hematoxilina de

HARRIS (Instituto de Patología de las Fuerza Armadas de los Estados

Unidos de América, 1995, pág. 153).

2.2.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN PAS

En el laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio

Espejo se realiza la tinción de PAS siguiendo el procedimiento del manual del

Instituto de Patología de Fuerzas Armadas “AFIP”

Técnica en secciones de tejidos

Desparafinizar y luego hidratar hasta el agua destilada.

Realizar la Oxidación con ácido peryódico durante 5 min. (10 min)

Enjuagar con agua destilada.

Ponemos el reactivo de Schiff de Coleman durante 15 min. (30 min)

Lavar con agua tibia normal durante10 min.

Para el contraste se usa Hematoxilina de Mayer durante 15 min o a su vez

la Hematoxilina de Harris durante 6 min. (1 min)

Lavar con agua corriente durante 15 min. (8 min)

10

Deshidratar y aclarar con alcohol al 95% o alcohol absoluto y xileno con dos

cambios por dos minutos cada uno.

Realizar el montaje con un medio de resina (Instituto de Patología de las

Fuerza Armadas de los Estados Unidos de América, 1995, págs. 153, 154).

2.2.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN PAS (ver imagen 1 y 2)

Los resultados de la Tinción PAS son basados en la descripción del “AFIP” utilizado

en el del laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades

Eugenio Espejo

Las mucinas el glucógeno y membranas basales………………….......rojo a purpura

Hongos………………………………………………………………………rojo a purpura

Núcleos……………………………………………………………………….…………azul

(Instituto de Patología de las Fuerza Armadas de los Estados Unidos de América,

1995, pág. 154).

Imagen 1. Tinción PAS. Aspergillus

Fuente: http://www.life-worldwide.org/esp/fungal-diseases/histopathology

Fecha de consulta: 25/Julio/2016

11

Imagen 2. Tinción PAS de glándula salival

Fuente: http://sosbiologiacelularytisular.blogspot.com/2010_04_01_archive.html


2.3 TINCIÓN DE GROCOTT (PLATA-METENAMINA)

El Ácido peryódico de Schiff (PAS), coloración de Gridley, y la tinción Grocott

conforman técnicas histoquímicas para identificación de hongos en secciones de

tejido. De las tres técnicas, la tinción de Grocott muestra mayor sensibilidad para la

detección de hongos y otros microorganismos en secciones de parafina preparados

de forma rutinaria (Shiogama, y otros, 2015).

La tinción de Grocott es probablemente la más conocida para la tinción de

organismos micóticos. Los hongos son en general relativamente grandes y

morfológicamente diversos, y pueden presentarse en los tejidos en diversas formas:

como hifas, esporas, levaduras, endosporas, o una combinación de estas formas

(Parry N. , 2013).

12

Para la detección de elementos micóticos en secciones de tejidos, ésta es una

tinción esencial y debe utilizarse siempre que se sospeche de una patología de

etiología fúngica (Ellis, 2016).

Particularmente es útil la tinción en aspirados bronquiales, esputos inducidos o

biopsias pulmonares utilizados para identificar hongos de tipo Pneumocystis carinii

u otros tipos de hongos que son oportunistas como aspergillus que hace que

provoquen una neumonía (García, Cárdenas, & Urbano, 2012, pág. 51). Las

paredes celulares de estos microorganismos se describen por el color en la tinción

marrón a negro (World Heritage Encyclopedia, 2016).

El Nitrato plata-metenamina de Gomori y el ácido crómico constituyen los principales

reactivos utilizados en la tinción de Grocott , recalcando que es el nitrato de plata el

que actúa como colorante, dotándoles de un color negro mate o brillante a las

estructuras fúngicas (Shiogama, y otros, 2015).

2.3.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN GROCOTT

El paso inicial de la tinción Grocott es similar a la tinción de PAS con la diferencia

en que Grocott utiliza el ácido crómico como un agente fijador y oxidante. En el

primer paso el ácido crómico produce la oxidación de los grupos hidroxilos a

aldehídos a partir de componentes mucopolisacáridos de la pared celular de los

hongos (Parry N. , 2013).

Después de ser tratadas con ácido crómico en los tejidos se emplea la solución de

nitrato-plata, en este caso los aldehídos reacciona con la mezcla de nitrato-plata

para producir un depósito de color negro, es decir, una reacción argentafin. Los

hongos se tiñen de negro (Ellis, 2016).

Cuando se usa un colorante de contraste de solución de color verde claro, los

elementos fúngicos se tiñen de color negro con márgenes afilados y un centro

aclarado, en un fondo de tejido de color verde claro (Parry N. , 2013).

13

2.3.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN GROCOTT

Los reactivos necesarios usados en la tinción Grocott se basan en el manual del

“AFIP” utilizado en el laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de

Especialidades Eugenio Espejo. (2015)

Solución de ácido crómico al 4%

Solución de nitrato de plata al 5%

Solución de metenamina al 3%

Solución bórax al 5% (Instituto de Patología de las Fuerza Armadas de los

Estados Unidos de América, 1995, pág. 232).

2.3.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN GROCOTT

El procedimiento para realizar la tinción de Grocott se basan en el manual del “AFIP”


Eugenio Espejo. (2015)

Desparafinizar y luego hidratar hasta llegar al agua destilada

Realizar la oxidación con ácido crómico al 4%, durante 1 hora.

Lavar con agua corriente unos segundos

Colocar en una solución de bisulfito de sodio durante 1 minuto esto para

remover el residuo de la solución del ácido crómico que haya quedado.

Se lava después con agua corriente durante 5 a 10 minutos.

Enjuagar con agua destilada unas 3 o 4 veces

Colocar la mezcla de nitrato de plata-metenamina en una estufa de

laboratorio a una temperatura de 58°C a 60°C, en un periodo de 50 a 60

minutos.

Enjuagar con el agua destilada unas 6 veces.

Realizar el matizado con la solución de cloruro de oro de 2-5 minutos.

Realizar un nuevo enjuague con agua destilada.

Colocar el tiosulfato de sodio de 2-5 minutos.

Realizar un buen lavado con agua.

14

Realizar el contrastado con la solución de verde claro durante unos 30-45

segundos.

Deshidratar y aclarar con alcohol al 95% o alcohol absoluto y xileno.

Realizar el montaje con un medio de resinoso (Instituto de Patología de las

Fuerza Armadas de los Estados Unidos de América, 1995, págs. 232, 233).

2.3.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN GROCOTT (Ver imagen 3)

Los resultados de la Tinción Grocott son basados en la descripción del “AFIP”


Eugenio Espejo (2015)

Hongos………………………………………….Claramente delineados de color negro

Mucina…………………………………………………………………………..gris oscuro

Micelios e hifas…………………………………………………………..rosado grisáceo

Fondo…………………………………………………………………………………verde


1995, pág. 233)

15

Imagen 3. Hongos filamentosos de tamaños variables y separados (tinción de Grocott)

Fuente: http://www.scielo.org.ar/img/revistas/medba/v72n6/a10fig3.gif


2.4 TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN (BAAR)

La técnica de tinción de Ziehl-Neelsen se basa en el trabajo de cinco

personas; Koch, Ehrlich, Ziehl, Rindfleisch y Neelsen, pero se conoce popularmente

como la tinción de “Ziehl-Neelsen” (Giri D. , 2016).

La tinción de Ziehl-Neelsen es usada para evidenciar la presencia de bacterias

alcohol-ácido resistente, que por lo general se lo realiza en muestras de

expectoración, pero también se lo hace en muestras de diferentes tejidos. La tinción

es muy importante en el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar y de otras

enfermedades producidas por bacterias acido resistentes como la lepra (Ramos

Jiménez, 2012, pág. 27).

16

El bacilo de la tuberculosis no es la única que se puede identificar con esta técnica

de tinción, sino a todos los bacilos del género Mycobacterium, y otros tipos de

microorganismos.

La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica de preferencia que es utilizada en los

laboratorios de América Latina y por lo tanto es la técnica que recomienda la

“Organización Mundial de la Salud” (OMS) y la “Unión Internacional Contra la

Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias” (UICTER) por que se obtienen

resultados confiables y reproducibles con costos económicos bajos (Sequeira de

Latini & Barrera, 2012, pág. 23).

2.4.1 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN

Las micobacterias no se tiñen fácilmente porque contienen gran cantidad de ácidos

micólicos (lípidos complejos) en su pared celular, lo que las hacen impenetrables a

los colorantes rutinarios (García, Cárdenas, & Urbano, 2012, pág. 56).

En ésta tinción se utilizan colorantes fuertes como la fucsina que es un colorante

básico que se asocia al ácido fenico (mordiente químico) y se necesita aplicar calor

para que estas bacterias retengan el colorante y no se puedan decolorar con

agentes químicos como el alcohol-acido (Negroni, 2009, pág. 547).

De contraste se usa un contra colorante que es el azul de metileno que tiñe el resto

de la muestra. No todas la micobacterias son alcohol-ácidos resistentes porque

existen muchas otras bacterias y microorganismos con capacidad alcohol-acido

resistentes en diferentes grados como por ejemplo; Cryptosporidium, Legionella y

otros (García, Cárdenas, & Urbano, 2012, pág. 56).

La denominación de bacterias alcohol-ácido resistentes se les da a todos los

microorganismos que resisten la decoloración y se observan de un color rojo en las

muestras de tejidos teñidos, en tanto que los microorganismos que no tiene la

capacidad de resistir la decoloración se los denominan bacterias no alcohol-ácido

resistentes y se observan con un color azul (Negroni, 2009, pág. 547).

17

2.4.2 REACTIVOS UTILIZADOS EN LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN

Los reactivos necesarios usados en la tinción Ziehl-Neelsen se basan en el manual

del “AFIP”, utilizado en el laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de


Carbol fucsina de Ziehl-Neelsen

Solución de alcohol acido al 1%

Solución matriz de azul de metileno

Solución azul de metileno (solución diaria de trabajo) (Instituto de Patología

de las Fuerza Armadas de los Estados Unidos de América, 1995, pág. 225).

2.4.3 TÉCNICA DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN

El procedimiento para realizar la tinción Ziehl-Neelsen se basa en el manual del

“AFIP”, utilizado en el laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de


Realizar la desparafinización y luego hidratar hasta llegar al agua destilada.

Teñir las placas con la solución fresca de carbol fucsina, durante unos 30

minutos.

Después lavar bien con agua corriente

Provocar la decoloración con la solución de alcohol acido al 1% hasta que

las secciones de tejido presenten un color rosado pálido.

Lavar bien con agua corriente durante unos 8 minutos.

Realizar la contrastación sumergiendo una placa a laves en la solución diaria

de azul de metileno. Estas secciones deben ser de color azul pálido, ya que

el exceso de contraste puede ocultar los bacilos.

Lavar con agua corriente y después con agua destilada.

18

Realizar una deshidratación rápido con alcohol etílico del 95% y alcohol

etílico absoluto, realizar 2 cambios cada uno y aclarar con xileno de igual

forma por 2 minutos cada uno.

Finalmente se realiza el montaje con un medio resinoso y laminilla

cubreobjetos (Instituto de Patología de las Fuerza Armadas de los Estados

Unidos de América, 1995, pág. 225).

2.4.4 RESULTADOS DE LA TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN (Ver imagen 4 y 5)

Los resultados de la Tinción Ziehl-Neelsen son basados en la descripción del

“AFIP”, utilizada en el del laboratorio de Anatomía Patológica del Hospital de


Bacilos alcohol-ácido resistentes………………………………..………….rojo brillante

Eritrocitos……………………………………………………….........amarillo-anaranjado

Otros elementos tisulares……………………………………………………………..azul


1995, pág. 225).

19

Imagen 4. Tinción de Ziehl-Neelsen. Mycobacterium tuberculosis.

Fuente: http://www.ibcrosario.com.ar/articulos/tuberculosis_2014.html


Imagen 5. Tinción de Ziehl-Neelsen. Lepra Lepromatosa

Fuente: http://www.saber.ula.ve/tropical/contenido/capitulo5/capitulo40/figuras/40-0002-es.html Fecha de consulta: 25/Julio/2016

20

2.5 MICROORGANISMOS EN LAS SECCIONES DE TEJIDOS

Los microorganismos son pequeñas formas de vida que nos rodean, y demasiados

pequeños para ser vistos a simple vista. Se encuentran en el agua, aire y en el

suelo. El cuerpo humano es también el hábitat de millones de estos microrganismos

que causan enfermedades, y también de otros microrganismos que son importantes

para mantener un buen estado de salud. Los más comunes son las bacterias, virus y

hongos pero también hay microorganismos del grupo de los protozoos que son

responsables de enfermedades (IQWiG, 2015).

Todas las superficies del cuerpo humano están colonizadas por microorganismos

y la flora normal es el resultado de la colonización permanente de microorganismos

en una relación simbiótica que produce resultados beneficiosos. En ocasiones la

flora normal puede llegar a ser un patógeno oportunista y causar enfermedades si

tienen acceso a las áreas que son normalmente estériles del cuerpo o si la persona

es inmunocomprometido causando infecciones y daños en los tejidos (Dudeja,

Dudeja, Srivastava, & Grover, 2016).

Se tiene una fuerte evidencia sobre los microorganismos que pueden ser los

agentes causales de muchas enfermedades crónicas no infecciosas tales como

algunos tipos de cáncer evidenciados en diferentes tejidos y en enfermedades

coronarias. Existen enfermedades que son causadas por diferentes tipos de

microorganismos que invaden los tejidos en mayor o menor medida (Microbiology

Society, 2016).

2.6 MICROORGANISMOS MICÓTICOS

Los microorganismos micóticos u hongos presentan estructuras eucariotas las

cuales contienen paredes gruesas formadas por quitina y ergosteroles en sus

membranas celulares. Estos microorganismos micóticos se pueden desarrollar

como formas unicelulares llamadas levaduras o como unas formas filamentosas

denominadas hifas, las cuales pueden ser tabicada o no tabicadas. Tenemos

21

algunos de estos microorganismos micóticos que adoptan una forma dimorfa, es

decir pueden crecer como hifas o levaduras, y estos tipos de hongos son de gran

interés clínico por ser causa de muchas infecciones micóticas.

Los microorganismos micóticos pueden ser causa de infecciones superficiales que

son afectaciones de la piel, uñas o cuero cabelludo. Los hongos también pueden

causar infecciones profundas, las cuales se diseminan e infectan los tejidos

causando daños en órganos importantes en pacientes que son

inmunocomprometidos (MacAdam & Sharpe, 2013, pág. 313).

Las infecciones por hongos son cada vez más frecuentes debido a la expansión de

las poblaciones. Los cambios en las infecciones fúngicas endémicas se puede

atribuir a los cambios climáticos, mayor población, factibilidad de viajes, y

poblaciones cambiantes. Las poblaciones en riesgo para las infecciones micóticas

oportunistas o diseminadas endémicas incluyen pacientes que han recibido

trasplantes, los inmunosupresores prescritos, medicamentos quimioterapéuticos,

pacientes infectados por el VIH etc.

En la actualidad los hongos que antes se consideraban no patógenos son causa de

enfermedades frecuentes en pacientes inmunocomprometidos. Por otra parte, los

avances en el diagnóstico radiológico y en apoyo al paciente han permitido una

mayor capacidad de diagnóstico mediante muestras de biopsia de tejidos de

diferentes sitios del cuerpo que antes no eran posibles para el examen

histopatológico.

El examen histopatológico de los tejidos para detectar hongos seguirá siendo una

herramienta importante a la hora de definir un diagnóstico por infecciones fúngicas.

La Histopatología también puede proporcionar un rápido diagnóstico presuntivo de

microorganismos micóticos en relación a la espera de los resultados de un cultivo

de hongos.

El examen histopatológico de muestras de biopsia, especímenes quirúrgicos y

autopsia debe comenzar siempre con la tinción de rutina H & E, en cambio la tinción

de Grocott y la tinción de PAS deben efectuarse si se sospecha de hongos después

22

de la revisión de los tejidos por una alta sospecha clínica y porque existe una

respuesta inflamatoria en el tejido (Guarner & Brant, 2011).

Los microorganismos micóticos que causaron mayores infecciones y que se

observaron con las tinciones histoquímicas registradas en el presente estudio se

describen a continuación.

2.6.1 Histoplasma

Las infecciones causadas por este hongo Histoplasma genera la histoplasmosis. El

Histoplasma vive en el medio ambiente, comúnmente en el suelo que contiene

grandes cantidades de excrementos de murciélagos y pájaros (CDC, 2015).

El Histoplasma es un hongo que se distribuye en todo el mundo y es endémico en

zonas geográficamente limitadas.

La histoplasmosis ocurre más frecuentemente en América, ya que la mayoría de los

estudios se publican a partir de pacientes que viven en ésta parte del mundo. En

América del Norte, el Histoplasma es endémico en los valles de Mississippi y Ohio

y también en algunas partes localizadas en la región. En el Caribe Central y América

del Sur se ha descrito en casi todos los países, y otras partes endémicas que

incluyen zonas de África, Asia y Australia (Adenis, Aznar, & Couppié, 2014).

Estas infecciones causadas por el Histoplasma son debidas a la inhalación de

esporas o microconidias las cuales llegan por vía aérea a los alveolos y después

fagocitadas por los macrófagos alveolares se desarrollan al interior de los mismos

macrófagos actuando como parásitos intracelulares (Miquel, 2012, pág. 262).

En el laboratorio la histopatología es de mucha ayuda para poner en aviso al médico

sobre una infección de patógenos de estas características compatibles con

Histoplasma. Los especímenes en los cuales se realizan estudios son muy variados,

como líquidos, secreciones, biopsias etc.

Se puede realizar tinciones de H&E que tiñen débilmente la pared de estos hongos,

en cambio con tinciones “especiales” como la de PAS y Grocott las paredes son

23

coloreadas con mayor intensidad haciéndolas más visibles al microscopio

(Fernández Andreu, Illnait, Martínez, Perurena , & Monroy , 2011).

2.6.2 Cándida Albicans

La Cándida albicans coloniza zonas del cuerpo humano como la oro faringe y la

vagina. Las infecciones superficiales que se producen en el aparato genitourinario

o tracto gastrointestinal se dan cuando existe un desequilibrio de los

microorganismos causado por diferentes aspectos, como las hormonas

reproductivas, los antibióticos, y la inmunosupresión que puede deberse a una

infección por VIH o la diabetes (Guarner & Brant, 2011).

En las infecciones superficiales por Cándida hay un predominio de éste hongo en

forma de filamentos que se denomina pseudo hifas, mientras tanto en infecciones

sistémicas existe un mayor predominio de las formas en levaduras que pueden

presentar también gemaciones.

El diagnóstico de la Cándida Albicans se puede realizar por una visualización directa

al microscopio por medio de un frotis o en biopsias de tejidos con alguna técnica de

tinción histoquímica como PAS o Grocott (Miquel, 2012, pág. 261).

2.6.3 Cryptococcus

El microorganismo micótico Cryptococcus neoformans es el responsable de la

mayoría de infecciones que se encuentra en los individuos inmunocomprometidos,

mientras que el Cryptococcus gattii causa infecciones en inmunocompetentes e

inmunocomprometidos.

El criptococo tiene una distribución mundial que se encuentra asociada

principalmente al excremento de las palomas. La infección por VIH es el factor

predisponente más frecuente para la criptococosis, sin embargo esta micosis se

puede dar por afectaciones del pulmón, el hígado, uso de inmunosupresores,

tumores malignos y enfermedades autoinmunes (Guarner & Brant, 2011).

24

El cryptococcus neoformans solo existe en su forma de levadura que se caracteriza

por poseer una cápsula gruesa de mucopolisacaridos, y para su identificación en

muestras tisulares se emplean tinciones histoquímicas de Grocott o de PAS,

coloraciones que las hacen más evidentes (Miquel, 2012, pág. 262).

2.6.4 Aspergillus

La aspergilosis es una infección micótica oportunista causada por el

hongo Aspergillus en pacientes inmunocomprometidos, por lo general después de

la inhalación de las esporas.

La aspergilosis abarca tres tipos de infecciones que incluyen la aspergilosis

broncopulmonar alérgica, aspergiloma pulmonar crónico, y la aspergilosis invasiva

o sistémica (Guarner & Brant, 2011).

2.7 MICROORGANISMOS BACTERIANOS

El ser humano contiene abundantes bacterias, pero se localizan en ciertas zonas

del cuerpo humano, como la piel, mucosa de la boca, el tracto gastrointestinal, la

vagina etc. Los tejidos al interior son generalmente estériles. En ocasiones, algunos

patógenos oportunistas son capaces de penetrar en el individuo mediante lesiones

o por deficiencias de las diferentes barreras.

Los microorganismos patógenos han desarrollado mecanismos para superar las

barreras y alcanzar órganos más internos en los que puedan desarrollarse y

provocar enfermedades más graves en el individuo (Ribet & Cossart, 2015).

2.7.1 Actinomyces

La actinomicosis es una enfermedad invasiva poco frecuente causada por el

actinomyces identificada hace más de un siglo. Los actinomyces son

microorganismos filamentosos bacilares que generalmente pertenecen a la flora

comensal de los seres humanos y están colonizando la orofaringe, tracto

gastrointestinal y urogenital (Valour, y otros, 2014).

25

La tinción con plata-metenamina Grocott también es útil para demostrar las

estructuras filamentosas, que no se hayan coloreado con tinción H&E, tinción de

PAS o Gridley (Roy S. , 2016a).

2.8 MICROORGANISMOS PARASITARIOS

Los microorganismos parasitarios son los que poseen una mayor complejidad, ya

que por su clasificación son microorganismos eucariotas, aunque algunos sean

unicelulares y otros pluricelulares. El ciclo vital de estos microorganismos también

tiene una complejidad ya que están relacionados generalmente con el ser humano

y muchos otros tienen que atravesar una serie de ciclos en diferentes hospederos

animales (Murray, Rosenthal, & Pfaller, 2013, pág. 4).

Los microorganismos parasitarios incluyen a los protozoos que son más frecuentes

en zonas tropicales y en condiciones sanitarias deplorables las cuales provocan

enfermedades y muertes.

Los efectos en el tejido que son causa de estos microorganismos varían desde una

reacción importante eosinofílica acompañada de necrosis o también de una

reacción granulomatosa o pueden no producir ninguna reacción. Las tinciones que

pueden ser de utilidad en los tejidos histológicos para evidenciar estos

microorganismos son la tinción de PAS y Giemsa (Miquel, 2012, págs. 265, 266).

Los microorganismos que fueron causa de infecciones parasitarias realizadas en

este estudio fueron de dos tipos de parásitos que se describirán brevemente a

continuación.

2.8.1 Amebas

La amebiasis intestinal es causada por la entamoeba histolytica, que puede afectar

a cualquier parte del intestino. Esto implica el colon ascendente, ciego, el recto y el

apéndice.

26

En las secciones histológicas la infección por amebas revela un tejido

granulomatoso, fibrosis, células inflamatorias etc. La tinción de PAS colorea el

citoplasma de los trofozoítos de rojo, evidenciándolos en el tejido (Roy S. , 2016b).

2.8.2 Leishmania

La infección por leishmaniasis la causa el parasito protozoo Leishmania que la

provocan varias especies, las cuales son trasmitidas a los seres humanos por

vectores que realizan picaduras (OMS, 2015).

Estos microorganismos son parásitos intracelulares que infectan los tejidos que

están dentro de los macrófagos. Existen tres formas de infección de estos parásitos:

visceral, cutánea y mucocutánea (Miquel, 2012, pág. 269).

2.9 MICROORGANISMOS BACTERIAS ALCOHOL-ÁCIDO RESISTENTES

(BAAR)

Los microorganismos denominados BAAR son todas las especies de

Mycobacterium. El Mycobacterium tuberculosis es de gran importancia clínica ya

que casusa infecciones generalmente a los pulmones pero también se puede

encontrar en cualquier tejido (Lee, Kurbanyan, & Hamrah, 2011).

Estos microorganismos no captan el colorante pero después de teñirlos resisten a

la decoloración por ácidos y alcoholes y por esta razón su denominación de alcohol-

ácido resistente. Otros tipos de Micobacterias también son de relevancia clínica

como Mycobacterium leprae que causa la lepra. En los tejidos se observan

estructuras cilíndricas rectas las cuales se pueden apreciar de color rojo brillante en

un fondo azul celeste con la tinción de Ziehl-Neelsen que es específica para

evidenciar micobacterias (Brooks & Carroll, 2011).

27

CAPITULO III

METODOLOGÍA

3.1 TIPO DE ESTUDIO

Este estudio es descriptivo transversal por que utiliza la recolección de información

de registros existentes como informes de resultados en un momento determinado.

3.2 POBLACIÓN

Todos los casos de tinciones de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen que se realizaron de

muestras de los pacientes que acudieron al Servicio de Anatomía Patológica del

Hospital de Especialidades Eugenio Espejo durante el año 2015.

3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN

Las técnicas aplicadas consistieron en lo siguiente: realización del análisis

documental bibliográfico de las tinciones histoquímicas, para lo cual se recolectó los

datos de las historias clínicas de los pacientes que se realizaron exámenes en el

Servicio de Anatomía Patológica del “Hospital de Especialidades Eugenio Espejo

durante el año 2015, los mismos que se registraron en una hoja de recolección

(Anexo 1) en la que se consignaron todas las variables establecidas para el estudio,

los mismos que fueron procesados en una hoja de cálculo de Excel para su

respectivo análisis estadístico en porcentajes y su representación en tablas y

gráficos en el capítulo IV que corresponde a resultados.

3.4 CONSIDERACIONES ÉTICAS

Todos los datos obtenidos de los pacientes se manejaron en forma confidencial

solo con fines académicos y no fueron ni serán utilizados con ninguna otra finalidad.

28

CAPÍTULO IV

RESULTADOS

4.1 PRESENTACIÓN

En este estudio se trabajó con un total de 267 muestras de pacientes, de las cuales

la mayoría fueron biopsias, en estas 267 muestras de diferentes tejidos se realizaron

y se analizaron 556 tinciones histoquímicas en el Servicio de Anatomía Patológica

del “Hospital de Especialidades Eugenio Espejo”.

Tabla 1 Distribución de las tinciones histoquímicas realizadas durante el período 2015 en el Servicio Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo

Tinciones histoquímicas empleadas N° de tinciones Porcentaje

PAS 202 36,3%

GROCOTT 175 31,5%

ZIEHL NEELSEN 179 32,2%

TOTAL 556 100% Fuente: Servicio Anatomía Patológica. HEEE. 2015 Elaborado por: Mestanza, Ricardo. 2016

Gráfico 1

Distribución de las tinciones histoquímicas realizadas durante el período 2015 en el Servicio Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo

Fuente: Servicio Anatomía Patológica. HEEE. 2015 Elaborado por: Mestanza, Ricardo. 2016

En la tabla 1 y el gráfico 1 se demuestra que la tinción de PAS es la que se realiza con mayor frecuencia (36,3%) mientras que la tinción de Grocott y Ziehl-Neelsen alcanza porcentajes similares (32%) entre ellas, pero menores a la tinción de PAS. Estas tinciones histoquímicas también muestran una utilización para el diagnóstico de microorganismos en estudios realizados en Cuba por Walwyn Salas et al.(2004).

PAS; 36,3%

GROCOTT; 31,5%

ZIEHL NEELSEN;

32,2%

29

Tabla 2 Distribución de los casos por la edad de los pacientes del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Grupo de edades en años N° de casos Porcentaje

01 – 20 24 9% 21 – 40 123 46% 41 – 60 67 25% 61 – 80 41 15% 81 – 100 9 4% S/E 3 1%

TOTAL 267 100% Fuente: Servicio Anatomía Patológica. HEEE. 2015 Elaborado por: Mestanza, Ricardo. 2016

Gráfico 2 Distribución de los casos por la edad de los pacientes del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 2 y el gráfico 2 se evidencia que el grupo de edades con un mayor predominio de casos fue en los de 21 a 40 años (46%), en comparación al grupo de edad de 1 a 20 años (9%) que mostró un menor número de casos. Otro grupo de edades que también destacan un importante número de casos son el grupo de 41 a 60 años (25%), pero que al compararlos con el grupo de edades de 21 a 40 años en los que predominan los casos alcanzando un 46%, estos corresponden casi a la mitad con tan solo un 25%.

9%

46%25%

15%

4% 1%

1 -20 21 - 40 41 - 60 61 - 80 81 -100 S/EEDAD

30

Tabla 3 Distribución de los casos por sexo de los pacientes del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Sexo

N° de casos Porcentaje

HOMBRE

117 43,8%

MUJER

150 56,2%

TOTAL

267 100%


Gráfico 3

Distribución de los casos por sexo de los pacientes del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 3 y el gráfico 3 nos muestra que el predominio de casos en el sexo femenino es relativamente mayor (56%) a los casos registrados en el sexo masculino (44%), lo que evidencia que tanto las mujeres como los hombres reciben atención por igual en el Hospital de Especialidades Eugenio Espejo.

43,8%

56,2%

HOMBRE MUJER

31

Tabla 4 Frecuencia de casos positivos para microorganismos en el Servicio de Anatomía

Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015 Microorganismos

N° de Casos Porcentaje

POSITIVOS

39 14,6%

NEGATIVOS

228 85,4%

Total

267 100%


Gráfico 4 Frecuencia de casos positivos para microorganismos en el Servicio de Anatomía

Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


La tabla 4 y el gráfico 4 demuestran que del total de casos que fueron 267 muestras de tejido sometidas a estudio por tinciones histoquímicas se determinó que solo 39 casos (15%) fueron positivos para microorganismos, los mismos que fueron identificados indistintamente por cada tinción utilizada, mientras que los 228 casos restantes fueron casos negativos (85%) para microorganismos.

POSITIVOS14,6%

NEGATIVOS85,4%

POSITIVOS NEGATIVOS

32

Tabla 5 Tinciones positivas para microorganismos en el Servicio de Anatomía Patológica

del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Tinciones Histoquímicas N° de tinciones Porcentaje

POSITIVAS 52 9,4%

NEGATIVAS 504 90,6%

Total 556 100%


Gráfico 5 Tinciones positivas para microorganismos en el Servicio de Anatomía Patológica

del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En los 267 casos que corresponden a las muestras de tejido de los pacientes que acudieron al Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015, se realizaron un total de 556 tinciones histoquímicas es decir, un promedio de 2 tinciones por cada caso y de 3 tinciones en algunos casos, y de estas 556 tinciones solo 52 (9%) fueron positivas para microorganismos, por lo que las 504 (91%) tinciones histoquímicas fueron negativas para microorganismos, según se demuestra en la tabla 5 y gráfico 5.

POSITIVAS9,4%

NEGATIVAS90,6%

33

Tabla 6 Tinciones de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen positivas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Tinción Histoquímica N° de tinciones

positivas Porcentaje

PAS 29 55,7%

GROCOTT 21 40,3%

ZIEHL NEELSEN 2 4,0%

Total 52 100%


Gráfico 6 Tinciones de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen positivas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 6 y el gráfico 6 se puede apreciar que de las 52 (9%) tinciones histoquímicas positivas para microorganismos, 29 corresponden a la tinción de PAS (Peryódico Ácido Schiff) por lo que se puede establecer que con esta tinción se diagnosticó el mayor porcentaje (56%) de microorganismos, mientras que 21 tinciones fueron de Grocott alcanzando esta tinción el 40% del diagnóstico de microorganismos. En lo que se refiere a las tinciones positivas para Ziehl-Neelsen fueron solamente 2 por lo que presentaron un menor porcentaje (4%) en relación a las tinciones positivas de PAS y Grocott.

PAS; 55,7%

GROCOTT; 40,3%

ZIEHL NEELSEN;

4,0%

34

Tabla 7 Tinciones positivas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen en relación al total de cada

una de estas tinciones realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Tinción Histoquímica N° de tinción/Total de

tinción Porcentaje de

positivos

PAS 29 / 202 14,4%

GROCOTT 21 / 175 12% ZIEHL NEELSEN 2 / 179 1,1%


Gráfico 7 Tinciones positivas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen en relación al total de cada

una de estas tinciones realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 7 y el gráfico 7 se observa que se realizaron 202 tinciones de PAS de las cuales 29 (14%) fueron positivas para microorganismos, 179 de Ziehl-Neelsen con 2 (1%) tinciones positivas para BAAR y 175 de Grocott, con 21 (12%) tinciones positivas para hongos. Al sumar estos valores se obtiene el total de 556 tinciones histoquímicas que se realizaron en las 267 muestras de tejido. Además se puede establecer al tomar en cuenta el total de cada una de las tres tinciones histoquímicas realizadas, que predominan los casos negativos siendo más evidentes en las tinciones de Ziehl-Neelsen, en las cuales su positividad apenas representa el 1% del total para ésta tinción. La tinción Grocott utilizada en este estudio tiene una mayor frecuencia de positivos para hongos (12%) si comparamos en un estudio similar que presentó una positividad del 4% para estos microorganismos (Nowaseb, Gaeb , Fraczek , Richardson , & Denning , 2014), posiblemente porque no se utilizó mas tejidos como en el presente estudio.

0

50

100

150

200

PAS GROCOTT ZIEHL NEELSEN

29 212

173154

177

POSITIVOS NEGATIVOS

35

Tabla 8 Distribución de las tinciones positivas para PAS de acuerdo a los microorganismos

diagnosticados en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Microorganismos N° de tinción/Total de tinción PAS Porcentaje

HONGOS 22 / 202 10.9%

BACTERIAS 6 / 202 3%

PARASITOS 2 / 202 1% Fuente: Servicio Anatomía Patológica. HEEE. 2015 Elaborado por: Mestanza, Ricardo. 2016

Gráfico 8 Distribución de las tinciones positivas para PAS de acuerdo a los microorganismos

diagnosticados en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 8 y gráfico 8 se puede apreciar que del total de las tinciones de PAS que se realizaron (202), los casos positivos para microorganismos en su mayoría fueron hongos (11%), el resto de casos positivos para microorganismos en menor porcentaje fueron bacterias (3%) y los parásitos fueron tan sólo 1% del total de las tinciones PAS. Según estudios en México la tinción PAS identifico un 16% de microorganismos micóticos en un servicio de Dermatopatología (Hajar Serviansky et al., 2013) que presentó una frecuencia relativamente mayor de PAS positivos para hongos en relación a este estudio (11%).

0

50

100

150

200

HONGOS BACTERIAS PARÁSITOS

226 2

180196 200

Tinciones positivos para PAS Tinciones negativas para PAS

36

Tabla 9 Distribución de los tipos de tejidos en los que se realizó las tinciones histoquímicas

en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Tipo de tejido N° de tinción Porcentaje

RENAL 45 8,1%

DIGESTIVO 221 39,7%

NERVIOSO 13 2,3%

LINFATICO 89 16,0%

PULMONAR 48 8,6%

PIEL Y TEGUMENTOS 101 18,2%

ENDOCRINO 14 2,5%

MUSCULO ESQUELETICO 18 3,2%

HEMATOLÓGICO 5 0,9%

CARDÍACO 2 0,4% TOTAL 556 100%


Gráfico 9

Distribución de los tipos de tejidos en los que se realizó las tinciones histoquímicas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio

Espejo en el período 2015


En la tabla 9 y el gráfico 9 se puede ver claramente que en los tejidos digestivos se realizaron 221 tinciones histoquímicas (40%), por lo que este tipo de tejido fue predominante, seguido casi a la mitad de esta frecuencia, por la piel en la que se hicieron 101 tinciones histoquímicas (18%) y por el tejido linfático con 89 tinciones (16%), mientras que el resto de tejidos presentaron porcentajes inferiores al 9%. Estos tipos de tejidos también pueden ser comprobados en estudios realizados por Walwyn Salas et al. (2004) en las que también son utilizadas para realizar las tinciones histoquímicas.

0 50 100 150 200 250

RENALDIGESTIVONERVIOSOLINFATICO

PULMONARPIEL Y TEGUMENTOS

ENDOCRINOMUSCULO ESQUELETICO

HEMATOLÓGICOCARDÍACO

45221

1389

48101

1418

52

37

Tabla 10 Distribución de los tipos de tejidos por tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de

Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


Gráfico 10 Distribución de los tipos de tejidos por tinciones histoquímicas de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen realizadas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de



En la tabla 10 y el gráfico 10 se demuestra que el número de casos es mayor en los tejidos digestivos con la tinción PAS (41%) que las tinciones de Grocott y Ziehl-Neelsen que tuvieron porcentajes iguales (39%). En los tejidos respiratorios la tinción de Ziehl-Neelsen tiene mayor número de casos (12%) sobre las otras dos tinciones con porcentajes similares (7%). Y en los tejidos de piel la tinción de Grocott predomina (24%) sobre las otras dos tinciones con porcentajes menores a la de Grocott.

0102030405060708090

Tinción PAS Tinción Grocott Tinción Ziehl-Neelsen

Tipo de tejidos Tinción PAS Tinción Grocott Tinción Ziehl-Neelsen

N° de tinción Porcentaje N° de tinción Porcentaje N° de tinción Porcentaje

RENAL 16 7,9% 15 8,6% 14 7,8% DIGESTIVO 82 40,6% 69 39,4% 70 39,1% NERVIOSO 6 3,0% 4 2,3% 3 1,7% LINFATICO 34 16,8% 26 14,9% 29 16,2% RESPIRATORIO 14 6,9% 13 7,4% 21 11,7% PIEL Y TEGUMENTOS 37 18,3% 42 24,0% 22 12,3% ENDOCRINO 6 3,0% 3 1,7% 5 2,8% MUSCULO ESQUELETICO 4 2,0% 1 0,6% 13 7,3% HEMATOLÓGICO 2 1,0% 2 1,1% 1 0,6% CARDÍACO 1 0,5% 0 0,0% 1 0,6%

Total 202 100% 175 100% 179 100%

38

Tabla 11 Distribución de los tejidos en los que se identificó la presencia de microorganismos


Tipo de tejido Microorganismos

Porcentaje Hongos Bacterias Parásitos BAAR Actinomyces

DIGESTIVO 19 4 1 2 0 60,5% LINFATICO 4 0 0 0 0 9,3% MUSCULO ESQUELETICO 0 1 0 0 0 2,3% NERVIOSO 2 0 0 0 0 4,7% PIEL Y TEGUMENTOS 5 0 1 0 1 16,2% PULMONAR 3 0 0 0 0 7,0% Total 33 5 2 2 1 100%


Gráfico 11 Distribución de los tejidos en los que se identificó la presencia de microorganismos



Los tipos de tejidos que en mayor frecuencia se identificó microorganismos son los de tipo digestivo (61%) que mostro en su mayoría presencia de hongos y los tejidos de piel que identifico un 16% de microorganismos siendo casi en su totalidad microorganismos micóticos, los tejidos de tipo nervioso presentaron menor frecuencia con presencia solo de hongos en 2 casos (5%) según se puede demostrar en la tabla 11 y gráfico 11.

19

4

02

534

0 1 0 0 01 0 0 0 1 02

0 0 0 0 00 0 0 0 1 00

5

10

15

20

DIGESTIVO LINFATICO MUSCULOESQUELETICO

NERVIOSO PIEL YTEGUMENTOS

PULMONAR

Mic

roor

gani

smos

Tipo de tejido

Hongos Bacterias Parásitos BAAR Actinomyces

39

Tabla 12 Distribución de los microorganismos identificados con las tinciones de PAS,

Grocott y Ziehl-Neelsen en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Microorganismos Recuento Porcentaje

BACTERIAS ACIDO RESISTENTES 2 4,7%

BACTERIAS 5 11,6%%

ACTINOMYCES 1 2,3%

HONGOS 33 76,7%

PARÁSITOS 2 4,7%

Total 43 100% Fuente: Servicio Anatomía Patológica. HEEE. 2015 Elaborado por: Mestanza, Ricardo. 2016

Gráfico 12

Distribución de los microorganismos identificados con las tinciones de PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de



En la tabla 12 y el gráfico 12 se puede comprobar que dentro de los microorganismos diagnosticados a través de las tinciones histoquímicas, los más frecuentes son los hongos, los mismos que superan con un amplio porcentaje que es el 77%, al resto de microorganismos identificados, como los parásitos y las bacterias alcohol ácido resistentes no superan el 5%.

4,7%

11,6% 2,3%

76,7%

4,7%

BACTERIAS ACIDO RESISTENTES BACTERIASACTINOMYCES HONGOSPARASITOS

40

Tabla 13 Distribución de los microorganismos micóticos hallados con las tinciones

histoquímicas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Microorganismo micóticos Recuento Porcentaje

HISTOPLASMA 12 36,4% HONGOS NO ESPECIFICADOS 11 33,3% CANDIDA ALBICANS 6 18,2% CRYPTOCOCCUS 3 9,1% ASPERGILLUS 1 3,0% Total 33 100%


Gráfico 13 Distribución de los microorganismos micóticos hallados con las tinciones

histoquímicas en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015


En la tabla 13 y el gráfico 13 se evidencia un mayor número de hongos de tipo Histoplasma (36%) y hongos no especificados (33%), de ésta última se pueden encontrar esporas, hifas y/o levaduras, mientras que el resto de hongos representan un número menor, de los cuales el aspergillus se halla en menor frecuencia (3%).

0

2

4

6

8

10

12

Microorganismos micóticos

1211

6

3

1

HISTOPLASMA HONGOS NO ESPECIFICADOS CANDIDA ALBICANS CRYPTOCOCCUS ASPERGILLUS

41

Tabla 14 Identificación de los microorganismos micóticos por tinción de PAS y Grocott en el

Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo en el período 2015

Microorganismos micóticos

Tinción de PAS Tinción de Grocott

N° de microorganismos/Total

de microorganismos

Porcentaje de PAS con

microorganismos

N° de microorganismos/Total

de microorganismos

Porcentaje de Grocott con

microorganismos

CANDIDA 4/33 12,1% 3/33 9,1%

HISTOPLASMA 10/33 30,3% 6/33 18,2%

CRYPTOCOCCUS 3/33 9,1% 3/33 9,1%

ASPERGILLUS 0/33 0,0% 1/33 3,0% HONGOS NO ESPECIFICADOS

7/33 21,2% 8/33 24,2%


Gráfico 14

Identificación de los microorganismos micóticos por tinción de PAS y Grocott en el Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Especialidades Eugenio Espejo

en el período 2015


En la tabla 14 y el gráfico 14 se puede demostrar que la tinción de PAS identificó un mayor número de hongos de tipo Histoplasma (30%), mientras que la tinción de Grocott mostró en su mayoría hongos no especificados (24%). El resto de microorganismos micóticos como cándida, criptococos y aspergillus tienen porcentajes en su mayoría similares (9% y 3%).

0

2

4

6

8

10

CANDIDA HISTOPLASMA CRYPTOCOCCUS ASPERGILLUS HONGOS NOESPECIFICADOS

4

10

3

0

7

3

6

3

1

8

PAS GROCOTT

42

4.2 CONCLUSIONES

Basado en los resultados obtenidos en este estudio se concluye que:

1. Las tinciones histoquímicas mas frecuentes para identificar microorganismos son

las tinciones de PAS (14%) y Grocott (12%) con más de la mitad de los casos

identificados, y la que menor identificación tiene es la tinción de Ziehl-Neelsen (1%).

La Tinción de PAS tuvo un papel protagónico en la identificación de

microorganismos micóticos como histoplasma y cándida, mientras que la tinción

Grocott no identificó hongos específicos sino la fase en la que se presentaron (hifas,

levaduras, esporas).

2. Los microorganismos con mayor frecuencia identificados por medio de las

tinciones histoquímicas fueron los hongos. Los microorganismos menos frecuentes

son las bacterias alcohol-ácido resistentes (BAAR). El Histoplasma fue el

microorganismo micótico con mayor frecuencia identificado en los tejidos mediante

tinciones histoquímicas, seguido de hongos en fase de hifas, levaduras y esporas,

se debe destacar que por cada 2 casos de histoplasma se pudo identificar uno de

cándida en los tejidos.

3. En relación al origen de las muestras se concluye que las de tipo digestivo son

las que más predominan para realizar tinciones histoquímicas seguidas de tejidos

de piel. La Tinción histoquímica de PAS fue utilizada preferentemente en los tejidos

de tipo digestivos, Ziehl-Neelsen para muestras provenientes del tracto respiratorio

y Grocott para tejidos de piel.

43

4.3 RECOMENDACIONES

Acorde a las conclusiones se puede hacer las siguientes recomendaciones:

1. Estandarizar el uso de las tinciones histoquímicas en base a la clínica de los

pacientes

2. En el caso de sospecha de infección micótica se debería emplear el uso de las

tinciones PAS y Grocott la cual daría mayor sensibilidad para identificar éstos

microorganismos.

3. Sí la sospecha clínica es de infección por BAAR se debe realizar la tinción de las

muestras con Ziehl-Neelsen para comprobar su presencia.

4. Si la impresión diagnóstica es de parasitosis en los tejidos se recomendaría el

empleo de la tinción PAS.

5. Capacitar al personal sanitario que emplea o solicita el uso de las tinciones

histoquímicas, ya que se evidenció un sobre uso de las mismas. Los reportes con

microorganismos fueron bajos en comparación al uso, y cabe resaltar que la

realización de biopsias u otros procedimientos son procesos invasivos y el empleo

de estas herramientas representa más costos.

44

CAPITULO V

PROPUESTA

5.1 DESCRIPCIÓN

La utilización de tinciones histoquímicas para poder diagnosticar e identificar

infecciones por microorganismos, es relativamente alta en relación a la positividad

que pueden tener estas tinciones, en especial la utilización de la tinción de Ziehl-

Neelsen que tuvo una positividad baja (1%) según los resultados arrojados en este

estudio en el año 2015, la cual nos lleva a plantear a modo de sugerencia que el

uso de tinciones histoquímicas soporte un mejor criterio, ya que en su mayoría los

pedidos de éstas tinciones al parecer no se fundamentan en la clínica del paciente.

Esta propuesta también incluye la necesidad de normatización y estandarización

de las técnicas de tinciones histoquímicas en todos los laboratorios de

histopatología, en especial a las tinciones más comúnmente utilizadas para la

identificación de microorganismos como son PAS, Grocott y Ziehl-Neelsen.

5.2 JUSTIFICACIÓN

La importancia en este trabajo sobre las tinciones histoquímicas permite hacer un

análisis sobre la frecuencia con la que fueron utilizas las tinciones de PAS, Grocott

y Ziehl-Neelsen y la ayuda que significa al dar un diagnóstico diferencial con otras

patologías. Las circunstancias en las que se solicitan las tinciones histoquímicas al

parecer no emplean buenos criterios al momento de tomar una decisión, por ello la

importancia de emplear normas para la solicitud de estas tinciones. Existen

organizaciones internacionales que establecen estándares para la histopatología y

definiciones de éstas a la hora de tomar decisiones en especial cuando se

sospecha de infecciones micóticas, de las cuales se puede mencionar a la “BSMM

Standards of Care” como una opción para la normatización en los casos de

45

infecciones de este tipo de microorganismos. De igual manera la utilización de la

tinción Ziehl-Neelsen requiere normas y guías estandarizadas que ayuden en el

diagnóstico, ya que como se puede apreciar en los resultados de este estudio fue

la segunda más utilizada y la que menos positividad obtuvo, y por lo consiguiente

generaría gastos innecesarios a la institución, y se reduciría el tiempo de espera de

un resultado, ya que con estas normas solo se realizaría el estudio histopatológico

con las tinciones histoquímicas cuando realmente las ameriten.

5.3 BENEFICIARIOS

Los beneficiarios en este caso son todos los profesionales de la salud incluidos los

médicos Patólogos e Histotecnólogos que pueden beneficiarse de los resultados

obtenidos para una toma de decisiones a la hora de solicitar una tinción histoquímica

en pro de la mejora del servicio de salud y recursos, y eventualmente los pacientes

que acuden al hospital de Especialidades Eugenio Espejo ya que tendrán un mejor

pronóstico en sus resultados.

5.4 TRIPTICO DE DIFUSIÓN

UNIVERSIDAD CENTRAL

DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE LABORATORIO CLINÍCO E HISTOTECNOLÓGICO

“TINCIONES HISTOQUIMICAS PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN

UTILIZADAS PARA IDENTIFICAR MICROORGANISMOS EN EL HOSPITAL DE ESPECIALIDADES EUGENIO ESPEJO

EN EL AÑO 2015”

Autor: RICARDO MESTANZA

TUTORA: MSc. Yolanda Paredes

Quito, 2016

Las tinciones histoquímicas comprenden un conjunto de técnicas utilizadas para poner de manifiesto la naturaleza química de los componentes tisulares y/o celulares. Se recurre al uso de estas tinciones histoquímicas cuando se necesita evidenciar estructuras determinadas. Sustancias específicas, microorganismos, etc.

OBJETIVO DE LAS TINCIONES HISTOQUIMICAS

El objetivo de las técnicas histoquímicas es poner en evidencia una molécula o familia de moléculas que se encuentran en una sección de tejido y observar su distribución tisular "in situ".

LAS TINCIONES MÁS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE

MICROORGANISMOS

PAS. Visualiza carbohidratos como glucógeno, microorganismos micóticos y parásitos.

¿QUÉ SON LAS TINCIONES HISTOQUIMICAS?

GROCOTT. Visualiza microorganismos micóticos de color de marrón a negro.

ZIEHL-NEELSEN. Visualiza micobacterias alcohol-ácido resistente de color rojo brillante.

MICROORGANISMOS IDENTIFICADOS CON MAYOR FRECUENCIA Se encuentran microorganismos micóticos como:

Hifas, levaduras, esporas Histoplasma Cándida albicans

¿EN QUE CASOS SE SUGIERE SOLICITAR UNA TINCIÓN HISTOQUIMICA?

En tejidos obtenidos de pacientes inmunocomprometidos y de otros pacientes con apreciación de infección microbiana. Reacciones granulomatosas, invasión vascular, necrosis, infarto trombosis. Inflamación con hiperplasia epitelial y abscesos dentro de la epidermis, deberían ser analizados mediante tinciones histoquímicas.

47

BIBLIOGRAFÍA

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51

ANEXOS

ANEXO 1. HOJA DE RECOLECCIÓN DE DATOS

N° de caso

Edad

Sexo

Tipo de tejidos

Tinción PAS

Tinción G

rocott

Tinción Ziehl-N

eelsen

Microorganism

os

Otros

microorganism

os no especificados

Casos VIH

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ANEXO 2. HOJA DE PEDIDO DE TINCIONES HISTOQUÍMICAS

Fuente: Lab. Anatomía Patológica HEEE, 2016

ANEXO 3. LIBRO DE TÉCNICAS DE TINCIONES HISTOQUÍMICAS


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ANEXO 4. PLACAS COLOREADAS CON LAS TINCIONES HISTOQUÍMICAS PAS, GROCOTT Y ZIEHL-NEELSEN


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ANEXO 5. CRONOGRAMA DEL PROYECTO

FECHA ACTIVIDAD

FEBRERO

Presentación del protocolo. Realización de trámites para la aceptación del proyecto en el HEE. Primera búsqueda y recolección de datos.

MARZO Recolección de datos del HEE. Realización del marco teórico.

ABRIL

Búsqueda de información para el marco teórico. Recolección de datos del HEE. Revisiones y correcciones

MAYO Culminación de la recolección de datos. Primeros análisis estadísticos

JUNIO Análisis de los datos estadísticos. Tabulación de datos.

JULIO

Revisiones de los datos que cumplan con los objetivos planteados. Correcciones finales de la tesis

AGOSTO Presentación del informe final del Trabajo de Fin de Carrera

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