tesis octopus maya
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Universidad de Guadalajara
Centro Universitario de Ciencias Biológicas
y Agropecuarias
Caracterización fisiológica y morfológica del desarrollo embrionario y los primeros días de vida de
Octopus maya (Voss y Solis1966).
T E S I S
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: LICENCIADO EN BIOLOGÍA.
P R E S E N T A:
RENNE JAIR CAZARES SIMENTAL
DIRECTOR DE TESIS: DR. CARLOS ROSAS VAZQUEZ
GUADALAJARA, JAL. 2006
Este trabajo se realizó dentro del proyecto: BASES BIOLÓGICAS PARA EL CULTIVO DEL PULPO
OCTOPUS MAYA. Financiado por el fondo SAGARPA-CONACYT 11720 bajo la responsabilidad del
Dr. Carlos Rosas Vázquez
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AGRADECIMIENTOS ESPECIALES
Al DR. Carlos Rosas Vázquez, por la oportunidad que me brindo al incorporarme a el proyecto pulpo y por todo el apoyo, tiempo, esfuerzo y lo mas importante la paciencia durante el desarrollo de mi tesis. A la M.C. Ariadna Berenice Sánchez Arteaga, por todos los consejos, apoyo y sobre todo por que eres una súper persona, eres bien A.T.M. y en especial con nosotros los Jalisquillos se te quiere mucho. A la Técnico académico Vianey Eunice Sosa Coh, por todo su apoyo en los muestreos en laboratorio, eres una mujer trabajadora y muy buena persona. A la Técnico Claudia Patricia Caamal Monsreal, gracias por tu amistad, todo tu tiempo, tu buena disposición y tu buen humor, por sacarme de muchos apuros gracias por todo. Al Técnico académico José Gabriel Taboada, gracias gabo por siempre estar al pendiente de nosotros los estudihambres, por siempre echarnos la mano de una manera incondicional. A mis amigos Marco Antonio Ponce Márquez ”pato” y Jaime Humberto García Chávez “cholito” por compartir su amistad y todos los buenos y malos momentos conmigo y por todo su apoyo durante la realización de esta tesis. A mis sinodales: Biol.. Maurilio Soto Espinosa, DR. Eduardo Ríos Jara y DR. Martín Pérez Peña, por su dedicación , paciencia, consejos y toda la ayuda que me han brindado. DEDICATORIA
Gracias dios, por que me has permitido llegar hasta aquí, brindándome una familia y
amigos muy especiales con los cuales eh pasado momentos muy difíciles y momentos muy
hermosos.
Todo este camino no lo hubiera podido recorrer solo, me ha costado mucho trabajo llegar
hasta este punto, todo se lo debo al apoyo de mi familia: a mi padre, Sergio Enrique
Cazares López, por siempre impulsarme a seguir adelante; gracias a mi madre, María
Guadalupe Simental Sánchez, por que sin tu apoyo no se que hubiera echo, tu me has
ayudado un sin fin de veces a salir de los agujeros donde me eh caído alentándome a seguir
adelante, depositando toda tu confianza cariño y amor ciegamente en mi, eres una mujer
muy especial vales oro mamá; a mis hermanos: Sergio Edwin, Celina Guadalupe y Herenia
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Carolina: por todo su cariño comprensión pero lo mas importante su paciencia y confianza
hacia mi persona, los quiero mucho.
Gracias a dios por los dos retoños que nacieron mientras yo realizaba mi tesis, ellos
trajeron felicidad y buenas vibras a toda mi familia, mi sobrina Lia Karolina y mi ahijado
Edwin Emiliano gracias por existir chamacones.
A todos mis tíos y primos que tuvieron fe en mí, en especial gracias a mi tía tere por sus
oraciones y sus buenos deseos de igual forma a mi tía Hilda por la fe y apoyo que me
brindo.
Gracias a mis abuelitos Polo y Esther, por sus buenos deseos, consejos y sobre todo sus
oraciones que me dieron animo cuando lo necesite.
A Juan Gualberto “KISIN” el tiempo no hace a los amigos, sino el corazón y la entrega de
los mismos, gracias demonio por todo tu apoyo y tu sinceridad, ¡¡¡¡gracias por ser un buen
amigo!!!!.
A toda la banda de la UMDI, Josué , morris, richard, rafilla, maldonado, gemita, los
shaggys, las chicas de Conkal, al buen MAO, a mi comadre Sofy”popy” y Xareny , a la DR.
Cristy, Pedro, Lety, Gaby Gaxiola.
A Jose Luis Gutiérrez, por su amistad, todos los paros y los cotorreos en Yucalpeten
animo brother.
A la familia Chuc por todo su cariño y por que siempre abrieron su corazón como si fuera
nuestra propia familia.
A la banda del CUCBA: Benito, Jarero, Beto, Davis, el capitan, pitus , Abraham, Chava,
Dany, gory, Luis Jacobo, Cuquis, Betty, Karina ”matuda” Alicia, Brenda, Cindy , Susy,
Diana “ zaika” Carina “portera”etc, por que sin ustedes la facultad no hubiera sido la
misma, ¡¡¡que chidos cotorreos!!! siempre los recordare carnales.
A unas personas muy importantes como lo son la M.C. Griselda Pares Sierra, DR. Alfredo
Salas Garza, DR. Eugenio Carpizo, por brindarnos su amistad con mucha sencillez y
enseñarnos a hacer las cosas con mucha entrega y dedicación sin dudar de nuestras
capacidades.
3
INDICE
PAGINAS 1 INTRODUCCION-------------------------------------------------------------- 1
2 ANTECEDENTES-------------------------------------------------------------- 1
3 JUSTIFICACION--------------------------------------------------------------- 4
4 HIPOTESIS---------------------------------------------------------------------- 5
5 OBJETIVO GENERAL------------------------------------------------------- 5
6 OBJETIVO PARTICULAR-------------------------------------------------- 5
7 MATERIALES Y METODOS----------------------------------------------- 6
8 DISEÑO EXPERIMENTAL-------------------------------------------------- 8
9 Experimento 1-------------------------------------------------------------------- 8
10 Experimento 2-------------------------------------------------------------------- 14
11 RESULTADOS------------------------------------------------------------------ 16
12 Experimento 1-------------------------------------------------------------------- 16
13 Experimento 2-------------------------------------------------------------------- 21
14 DISCUSION---------------------------------------------------------------------- 30
15 CONCLUSION------------------------------------------------------------------ 38
16 LITERATURA CITADA------------------------------------------------------ 40
4
INDICE DE FIGURAS
FIGURAS
DESCRIPCION
PAGINAS
Figura 1 Método de pesca por gareteo.
7
Figura 2 Área de reproducción de cefalópodos.
7
Figura 3 Refugios proporcionados a hembras de O. maya.
9
Figura 4 Sistema de incubación para huevos de O.maya. Racimos depositados en la tapa de uno de los refugios asignados a las hembras de O.maya.
10
Figura 5 Homogenizado de huevos de O. maya
12
Figura 6 Matraz kitasato y bomba de vació. Agitador 12 Figura 7 Embudos de separación con muestras de lípidos.
13
Figura 8 Frascos de pesada con muestras de lípidos dentro de una
campana de desecación.
13
Figura 9 Micro placa de lector de ELISA.
14
Figura 10 Numero de huevos desovados por hembras de O. maya con respecto a cada tratamiento.
17
Figura 11 Lípidos totales en huevos recién desovados de hembras O. maya alimentadas con diferentes dietas.
18
Figura 12 Proteínas totales en huevos recién desovados de hembras O. maya alimentadas con diferentes dietas. Se muestran los valores máximos y mínimos de proteína de los huevos desovados en cada tratamiento.
18
Figura 13 Relación entre la cantidad de huevos remanentes en gónada y la cantidad de lípidos (A) y proteína (B) en tejido ya desovado.
19
Figura 14 Relación entre el peso de los huevos y los días que duro incubación de O.Maya.
20
5
Figura 15
Relación entre la presión osmótica de huevos de O. maya y el tiempo de incubación.
21
Figura 16
Correlación entre la cantidad de lípidos a través de los días de Incubación de huevos de O.Maya.
22
Figura 17 Correlación entre la cantidad de proteínas durante los días de Incubación en huevos de O.Maya.
23
Figura 18 Correlación entre la cantidad de lípidos durante los Primeros días de vida de O.Maya.
23
Figura 19 Correlación entre la longitud del manto, longitud total y de los brazos con el peso húmedo (g) en juveniles de O. maya.
25
Figura 20 Longitud total durante los primeros días de vida de O. maya.
25
Figura 21 Relación entre la longitud del manto y el tiempo durante los primeros días de vida de juveniles de O.Maya.
26
Figura 22 Correlación positiva entre la longitud de los brazos y los primeros días de vida de juveniles de O.Maya.
27
Figura 23 Variaciones del peso húmedo y seco de los juveniles de O. maya durante los primeros días de vida.
28
Figura 24 Variaciones de la longitud del manto/longitud total (LM/LT) de los juveniles de O. maya a lo largo de los primeros 10 días de vida.
29
Figura 25 Variaciones de la longitud de los brazos /longitud total (LB/LT) de los juveniles de O. maya a lo largo de los primeros 10 días de vida.
29
Figura 26 Relación entre la longitud de los brazos y la longitud del manto (LB/LM) y el tiempo en juveniles de O. maya durante los primeros diez días de vida.
30
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INTRODUCCIÓN Octopus maya (Voss y Solís 1966), es una especie litoral propia de la
Península de Yucatán; estos moluscos viven en grietas de rocas y huecos del
fondo; con frecuencia forman parte de la comunidad de Thalassia testudinum.
Sus madrigueras comúnmente están bordeadas por fragmentos de
exoesqueletos de crustáceos y restos de moluscos bivalvos. Se les encuentra
también ocupando conchas de gasterópodos, tales como: Strombus gigas, S.
costatus, Pleuroploca gigantea, entre otros y diversos objetos sumergidos,
como envases de hojalata, plástico y neumáticos.
El pulpo que se explota en aguas de la Península de Yucatán (Octopus maya)
es endémico de, la región, a pesar de que tiene parientes cercanos de amplia
distribución geográfica. Se reproduce cerca de la costa en donde las hembras
depositan generalmente entre 1,500 y 2,000 huevecillos cada una (Solís, 1967).
La incubación dura cerca de dos meses y en el transcurso de este período la
hembra no se alimenta; cuando nacen las crías la madre generalmente muere y
éstos desarrollan vida independiente como depredadores (Solís, 1967). De
acuerdo con las observaciones, la edad de los reclutamientos pesqueros de los
pulpos al inicio de la temporada de pesca es de 4 meses y la reproducción más
intensa ocurre en el mes de noviembre. Por lo tanto, se estima que la pesquería
gravita principalmente sobre ejemplares juveniles o adultos jóvenes, de los
cuales la mitad son hembras.
ANTECEDENTES Los pulpos son altamente adaptables al ambiente del laboratorio (Boletzky y
Hanlon, 1983). La mayoría de los pulpos y demás cefalópodos presentan
huevos pequeños y larvas planctónicas (Boletzky, 1974). Lo contrario a las
especies que presentan huevos grandes y de desarrollo directo, y que aceptan
dietas muertas después de las primeras fases de desarrollo son las más
atractivas para la acuacultura, principalmente a nivel comercial y han sido
7
cultivados en pequeña o mediana escala durante los últimos años.Entre estas
especies están Sepia officinalis, que se han logrado cultivar por varias
generaciones en laboratorio (Pascual, 1978; Domíngues et al., 2001a, 2001b,
2002; Forsythe et al., 1991, 1994; Richard, 1975), al igual que Octopus joubini
(Forsythe y Hanlon, 1980), Octopus digueti (DeRusha et al., 1987), Octopus
bimaculoides, (Forsythe y Hanlon, 1988; Lee et al., 1991) y Octopus briareus
(Hanlon y Wolterding, 1989).
Una especie que produce huevos grandes y de desarrollo directo es Octopus
maya, Voss y Solís (1966), esta especie ostenta incluso los mayores huevos de
entre todas las especies de pulpo, pudiendo llegar a los 17mm de largo. Esto
hace que sea una de las especies con más alto potencial para su cultivo.
Octopus maya ha sido cultivado en laboratorio (Solís, 1967; Van Heukelem,
1976; 1977; DeRusha et al., 1989), incluso por 4 generaciones (Hanlon y
Forsythe, 1985), y hasta 5 generaciones consecutivas (Van Heukelem, 1983).
Octopus maya tiene crecimiento rápido debido a sus elevadas tasas de
ingestión y de conversión alimenticia de entre 30 y 60% (Hanlon y Forsythe,
1985). Van Heukelem, (1983) consiguió tasas de conversión alimenticia de
cerca de 40%. Puede alcanzar 1Kg en 4 meses, y obtener pesos por arriba a
los 3Kg en 9 meses, cuando se le mantiene a una temperatura de 25°C (Van
Heukelem, 1983).
Hanlon y Forsythe (1985), determinaron que el ciclo de vida para O. maya es de
entre 8 y 12 meses y Van Heukelem, (1983), de entre 9 y 10 meses para
temperaturas de cultivo entre 25 y 30°C. El desarrollo embrionario para esta
especie varia entre los 50 y los 65 días en el medio natural (Solís, 1967). Van
Heukelem (1983) indica un desarrollo embrionario de 45 días a temperaturas
entre 24 y 26°C. Los pulpos recién eclosionados de esta especie presentan un
peso en promedio 0.1 g un comportamiento similar al de los adultos,
8
(Van Heukelem, 1983; Hanlon y Forsythe, 1985). Durante las primeras fases
del ciclo de vida es esencial que sean alimentados con presas vivas de tamaño
adecuado. Entre estas están los misidaceos (Hanlon y Forsythe, 1985), o los
anfípodos e isópodos (Van Heukelem, 1983). Los juveniles pueden ser
alimentados con gasterópodos, almejas y cangrejos entre otras presas
naturales. De preferencia se deben ofrecer presas vivas, porque el canibalismo
aumenta cuando las dietas son muertas (Van Heukelem, 1983). Durante la fase
juvenil, las tasas de crecimiento varían entre 4% por día a 20°C y 7.8% por día,
a 30°C. Las tasas de alimentación (a temperaturas medias de 25°C) varían
entre 20 % de su peso por día en las primeras fases de la vida, hasta un 5% al
acercarse la etapa reproductiva (Hanlon y Forsythe, 1985).
El sexo de esta especie no se puede determinar por lo menos hasta los 3
meses de edad. Las gónadas de los individuos de esta especie aparecen entre
los 3 y 5 meses de edad (25 - 450 g). Aunque no se encuentran completamente
desarrollados el sexo puede ser determinado si se disecan los animales,
comparando la forma y color de los órganos sexuales. El hectocotilo (tercer
brazo derecho especializado y modificado en el macho para depositar los
espermatoforos en el manto de la hembra) empieza a desarrollarse entre el
cuarto y quinto mes de edad. La puesta suele ocurrir después de los 8 meses
de edad, y la fecundidad real (huevos producidos) para esta especie varia entre
300 y 5000 por hembra. La hembra permanece junto a los huevos, airándolos y
dándoles protección hasta que nacen las crías, y no sobrevive a la puesta (Van
Heukelem, 1983).
La mortalidad en los tanques de cultivo es baja (Van Heukelem, 1983).Hanlon y
Forsythe (1985) reportan mortalidades entre 20 y 30% para la totalidad del ciclo
de vida. Según Van Heukelem (1983), los ejemplares de O. maya cultivados en
el laboratorio crecen más que los capturados en el medio natural. Esto esta
relacionado con la temperatura media de cultivo, más elevada en el laboratorio
9
que en el medio natural y el alimento disponible. En los animales poiquilotermos
como los cefalópodos, la temperatura de cultivo es junto con el alimento
disponible el principal factor que afecta el crecimiento y el ciclo de vida
(Forsythe y Van Heukelem, 1987; Domingues et al., 2002) .
Uno de los factores más importantes que han impedido el desarrollo de la
acuacultura de cefalópodos a escala comercial es la dependencia en dietas
naturales para su alimentación (O'Dor & Wells, 1987; Lee et al., 1991). Hay
varias dietas naturales con que se pueden cultivar y mantener cefalópodos en
cautiverio (Boletzky & Hanlon, 1983; Toll & Strain, 1988; DeRusha et al., 1989;
DiMarco et al., 1993; Domingues et al., 2002, 2003, in press). En el cultivo de
cefalópodos, mas del 50% del trabajo está asociado a la captura,
mantenimiento o cultivo de las presas (Lee, 1994). Si se congelan las presas, el
costo de mano de obra es reducido en cerca de 30%, Inversamente el costo
asociado a producciones de dietas artificiales es bastante menor y ahorros mas
importantes se pueden obtener si se producen estas dietas artificiales a gran
escala (Lee, 1994).
Hasta el presente, se han realizado algunos intentos para producir dietas
artificiales para pulpos y también para S. officínalis (DeRusha et al., 1989; Lee
et al., 1991; Castro et al., 1993; Castro y Lee, 1994; Domingues, 1999.). Los
resultados obtenidos para crecimiento y supervivencia están al nivel de los
obtenidos hace años, cuando se empezó a hacer la transición de dietas
naturales a artificiales para las larvas de peces (Dabrowski et al., 1978;
Lindberg & Doroshov, 1986). JUSTIFICACION
El incremento en la captura del pulpo Octopus maya en los últimos años a
aumentado los riesgos por sobre pesca a corto plazo y consecuentemente la
10
baja en la producción para los años siguientes. El estudio del cultivo de O.
maya, en la localidad de Sisal, Yucatán tiene como propósito generar
información sobre algunos caracteres fisiológicos y morfológicos durante el
desarrollo embrionario y los primeros días de vida. Esta información es parte
de la base para el cultivo de esta especie.
HIPOTESIS
Si durante el desarrollo embrionario, los organismos utilizan a los lípidos como
nutriente fundamental para la formación del cuerpo, y a las proteínas como el
principal constituyente de la masa corporal, partiendo de diferentes dietas
proporcionadas a las progenitoras de Octopus maya, entonces una reducción
en los niveles de lípidos del huevo y un aumento en las proteínas tendrá un
efecto directo con el crecimiento de los embriones en los huevos y durante los
primeros días de vida de O.maya.
Si el contenido de ácidos grasos del alimento afecta la condición reproductiva
de las hembras de O. maya, entonces aquellos alimentos ricos en estos
constituyentes favorecerán huevos y embriones con altas concentraciones de
lípidos y por ende con una mayor calidad.
OBJETIVO GENERAL Conocer la forma en que el tipo de alimento modula la condición fisiológica
durante el desarrollo embrionario y primeros días de vida de Octopus maya.
Objetivo Particular. Distinguir algunas características fisiológicas y bioquímicas de los huevos y
embriones de O. maya procedentes de hembras mantenidas en condiciones
óptimas ambientales y de alimentación.
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MATERIALES Y METODOS Colecta y selección de reproductores Las hembras utilizadas en el presente estudio se obtuvieron de la población
silvestre localizada en la zona costera adyacente al puerto de Sisal, Yucatán.
Se utilizó una lancha con motor fuera de borda, en la cual se capturó a los
organismos utilizando el método del gareteo sin anzuelo el cual permite obtener
organismos sin ningún daño físico.
Este método de "gareteo" consiste en utilizar pequeñas embarcaciones, con
eslora promedio de 7 m. Cada embarcación es dotada de dos pértigas de
carrizo o "jimbas'' de 4 a 5 m de longitud cada una colocada a proa y popa; en
tales condiciones se atan a lo largo de dichas varas y a un costado del bote un
máximo de 25 líneas del número 18. Al extremo libre de la línea se ata un
cangrejo como cebo (Menippe mercenaria, Callinectes ornatus o Libinia
emarginata) y a aproximadamente 20 cm de la porción distal de la línea se
coloca un plomo (200 g aproximadamente), se sumergen éstas y se deja la
nave al garete o deriva.
Por acción del viento y las corrientes, la embarcación se desplaza y las líneas
cuyo cebo es arrastrado en el fondo, al pasar por la guarida de un pulpo, éste lo
atrapa, lo cual se manifiesta en cierta tensión de la línea y de inmediato el
pescador levanta ésta y sujeta al pulpo con la mano. Para matarlo, lo corta con
cuchillo o bien lo muerde en la porción interocular (Solís Ramírez J.M 1985).
(Fig.1).
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Fig.1 Método de pesca por gareteo.
Posteriormente los animales capturados fueron sexados y una ves identificadas
las hembras se transportaron en contenedores con agua de mar a la unidad de
reproducción de cefalópodos de la Unidad Multidisciplinaría de Docencia e
Investigación (UMDI)-UNAM, Sisal, Yucatán. Área de reproducción de cefalópodos. El área donde se llevo a cabo el experimento consiste de una nave de fibra de
vidrio en la que se cuenta con 25 tanques negros de forma rectangular de
500lts, conectados a un sistema de recirculación y tratamiento de agua, uno por
cada 5 tanques experimentales. Fig.2).
Fig.2 Área de reproducción de cefalópodos.
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El agua se recambió en una proporción de 300% diario. Una vez que fueron
colectadas las hembras se les regulo la luz y la temperatura se les asigno un
tanque de 500lts por cada hembra, cada tanque contaba con un sistema de
aireación, entradas y salidas de agua respectivamente.
Diseño experimental. Experimento 1. En este primer experimento se determinó el efecto del tipo de alimento sobre el
desarrollo embrionario de O. maya. El diseño experimental fue completamente
al azar, en el que las hembras se distribuyeron dentro de los 25 tanques negros
de 500lts, divididos en 5 grupos con 5 hembras cada uno. Los 5 tratamientos se
asignaron al azar y consistieron de: A, control (jaiba 100%), dieta B (jaiba 70%
- mejillón 30%), dieta C (jaiba 70% – almeja 30%), dieta D (jaiba 70% – mejillón
15% -almeja 15%), y dieta E (mejillón 50% – almeja 50%). Los distintos tipos
de alimento se suministraron de la siguiente manera: las jaibas a las 9:00am y
los bivalvos por la tarde (16:00 h) después de retirar la jaiba, a excepción de la
dieta E en la cual los mejillones se proporcionaron por la mañana y las almejas
por la tarde.
Todos los días, durante los 60 días que duró el experimento, se registró la
temperatura y la salinidad a las 9:00am con un conductimetro YSI modelo 30.
Con el fin de mantener la calidad del agua constante todos los días y dos veces
al día se retiró la materia orgánica que generaban las hembras a través de las
heces y el alimento no consumido.
Para facilitar el control de los desoves a cada hembra se le proporcionó un
refugio, el cual sirvió tanto para reducir el estrés en el área como para
proporcionar un lugar adecuado para el desove (Fig. 3).
14
Fig.3 Refugios proporcionados a hembras de O. maya.
Los refugios consistieron de cajas rectangulares de fibra de vidrio y de color
blanco, que median 16cm H * 19.5cm A * 30.5cm L, con la tapa deslizable o
(removible).
Sistema de incubación. La forma en que los cefalópodos realizan las puestas es muy variadas (Nesis,
1996). O. maya, deposita sus huevos en el interior de grietas o en la superficie
de las mismas, donde las hembras permanecerán y protegerán a sus huevos
durante la incubación. La colocación puede durar desde algunos días hasta
semanas dependiendo del número de huevos, el tipo de puesta y la
temperatura. Las hembras cuidan, limpian continuamente y protegen los
huevos contra los intrusos durante la duración del período embrionario (Rocha,
2003).
Con el fin de realizar un mejor control sobre el desarrollo de los embriones se
construyó un sistema de incubación el cual cuenta con 9 tanques de 30lts cada
uno, en los que se colocaron las puestas depositadas por las hembras en las
cajas de fibra de vidrio cada tanque tenía la capacidad para recibir 3 puestas
simultáneamente. (Fig. 4).
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A BA B
Fig.4 Imagen (A) sistema de incubación para huevos de O.maya.
Imagen (B) racimos depositados en la tapa de uno de los refugios asignados a las hembras de O.maya.
La incubadora contó con un sistema de recirculación de agua de mar acoplado
a una bomba y un enfriador que se mantuvo a 26°C, un filtro de cartucho de 5
µm y una lámpara de luz ultravioleta. Con el fin de mantener la calidad del
agua, el sistema se lavó 3 veces por semana para evitar la contaminación de
los huevos. Todos los días se midieron a las 09:00 h la temperatura, la
salinidad. Los restos de huevos y los huevos infectados o muertos fueron
retirados todos los días mediante el uso de un sifón.
Muestreos de los huevos y embriones.
Los muestreos se realizaron cada 10 días a partir del momento en que las
hembras depositaron los huevos. En cada muestreo se analizaron 50 huevos
los cuales fueron pesados y analizados en cuanto a las concentraciones de
lípidos y proteínas totales. Para hacer esto los huevos se congelaron en
nitrógeno líquido para poder conservar las muestras hasta el análisis. Un grupo
de 10 huevos por desove fue utilizado, además para conocer las variaciones de
la presión osmótica durante el desarrollo embrionario.
16
Peso de los huevos El peso de los 50 huevos de cada desove se llevó a cabo individualmente en
una balanza analítica (Sartorios modelo TE214S, -0.001mg a +210g). Los
huevos fueron colocados en papel absorbente antes del pesado con el fin de
eliminar los restos de agua de mar adherida.
Presión osmótica Para medir la presión osmótica se utilizaron 10 huevos de cada tratamiento los
que fueron retirados con pinzas de disección para evitar desprender más
huevos de los necesarios. El análisis de la presión osmótica del líquido peri
vitelino se realizó en un micro-osmometro Mod. 3 MO plus que reporta los
resultados como mosm / Kg. de agua. El líquido peri vitelino (20µl) se tomo
haciendo una incisión con un bisturí en cada huevo.
Lípidos totales en huevos de pulpo Obtención de la muestra Se extrajeron 50huevos y se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenaron
en congelación (- 40 ºC) hasta su procesamiento.
Protocolo de preparación del Homogenado de los huevos de pulpo. Entre 10 y 50 huevos de pulpo (dependiendo de la edad y del tamaño) se
homogenizaron a 4 ºC colocando el tubo del homogenador en un vaso de
precipitado con hielo frappé. El homogenado (Fig.5) se centrifugó a 3000 rpm
(800 g) por 5 minutos. Únicamente se utilizó el sobrenadante para el análisis de
los lípidos totales.
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Fig.5 Homogenizado de huevos de O. maya
Protocolo medición lípidos
Cada muestra de 500 µl se mezcló con cloroformo- metanol (2:1) hasta un
volumen final de 20 ml el cual fue cubierto y luego agitado por un periodo de 15
minutos. La mezcla así obtenida se filtró con la ayuda de una bomba de vació
y un matraz kitasato (Fig.6).
A BA B
Fig.6 (A) Matraz kitasato y bomba de vació. (B) Agitador.
Posteriormente a la mezcla se le agregó una mezcla agua-metanol (3:1) la cual
se agregó hasta completar el volumen final de 250 ml. Una vez agitada, la
muestra fue decantada durante 1 h permitiendo así la separación de los lípidos
(Fig.7).
18
Fig.7 Embudos de separación con muestras de lípidos.
Los lípidos ya separados fueron transferidos a un frasco de pesada con tapa y
colocados en una campana de desecación hasta la total evaporación del
cloroformo y del metanol. (Bligh, E.G. y W.J. Dyer. 1959) modificada por (Foppe
y Torsten 1999), (Fig.8).
Fig.8 Frascos de pesada con muestras de lípidos dentro de una
campana de desecación.
El total de lípidos se calculó utilizando la ecuación:
Lípidos Totales (mg/g de huevo) = (PFM – PF)/PH
Donde PFM = al peso del frasco de pesada mas la muestra, PF es el peso del
frasco de pesada sin muestra y PH es el peso de los huevos analizados.
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Determinación de Proteínas totales Se utilizó una prueba comercial para micro-determinaciones basada en la
técnica de Bradford (1976). Se utilizaron 10 µl de liquido perivitelino diluido
(10µl de liquido perivitelino en 3000 µl de agua inyectable libre de pirógenos) en
una micro placa de lector de ELISA (Fig.9) y se añadieron 200 µL de solución
reactiva. Las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante 5 minutos
registrándose la absorbancia a 595 nm. La concentración de proteínas (mg/ml)
se calculó con una curva patrón utilizando el estándar comercial de albúmina
bovina.
Fig.9 Micro placa de lector de ELISA.
Determinación de lípidos y proteínas totales de la gónada ya desovada en hembras de Octopus maya.
Para la determinación de lípidos y proteínas totales en gónada desovada, se
utilizo el mismo procedimiento ya descrito con anterioridad para huevos de O.
maya.
Experimento 2. Para el desarrollo de este experimento se utilizaron 20 tanques de 500lts del
área de maduración de cefalópodos. Nuevamente se utilizaron hembras
procedentes de la población silvestre aunque con la diferencia de que en este
experimento se colocaron dos hembras por tanque para alcanzar un total de 40
20
hembras en el área de reproducción. Todas las hembras contaron con nidos
acondicionados con tapas deslizables y fueron alimentadas con una
combinación de jaiba (70%) mejillón (30%) una vez al día. Se siguió el mismo
procedimiento de alimentación y mantenimiento de la calidad del agua descrito
anteriormente. Los huevos y las hembras con huevos fueron mantenidos de
manera similar al experimento 1.
En este experimento se realizó un seguimiento en el tiempo de la concentración
de lípidos y proteínas de los huevos así como de los juveniles recién nacidos y
durante los primeros 10 días de vida. Ambos nutrientes fueron analizados de
acuerdo con los métodos descritos en el primer experimento.
Tasa de eclosión Los desoves obtenidos en el segundo experimento se marcaron con la fecha de
desove y el número de tina que se le asigno a cada hembra cuando ingreso al
sistema de maduración. Después se realizaron los conteos de huevos de pulpo
y se separaron unos en el sistema de incubación sin hembra (el utilizado en la
primera parte del experimento) y los otros se dejaron con las hembras hasta
que eclosionaran. Estas hembras se separaron en 5 tanques negros de 500lts,
en el área de maduración y se dejaron por 45 días hasta que los embriones se
desarrollaron (Van Heukelem 1983). Una vez cumplido este tiempo se pasaron
a unas tinas cosechadoras donde se llevaron a cabo los conteos de juveniles de
O. maya recién eclosionados, para así obtener la tasa de eclosión.
Caracterización de los juveniles tempranos de O. maya Para caracterizar a los juveniles se realizaron mediciones de la longitud total,
longitud del manto, longitud de los brazos, peso húmedo, peso seco, porcentaje
del peso seco por pulpo, gramos de agua por pulpo y porcentaje de agua por
pulpo, desde el primer día de vida y hasta el día 10. Por cada día de muestreo
se tomaron 10 organismos. Las mediciones de longitud se realizaron con un
21
escalimetro con el pulpo fijado sobre una tabla de cartón, mientras que el peso
seco se midió en animales colocados en una estufa de secado a 60°C. El
contenido de agua se determinó a partir de la ecuación:
Agua, mg = PH – PS
Donde PH es el peso húmedo en g, y PS es el peso seco (g).
Lípidos totales en juveniles de O. maya
Al igual que con los huevos, embriones y la gónada el contenido de lípidos y
proteínas totales se determinó en los juveniles tempranos con entre 1 y 10 días
de vida. Se siguió un procedimiento similar al ya descrito para realizar estas
evaluaciones.
RESULTADOS Experimento 1
Temperatura y salinidad en el sistema de incubación. Las variaciones de salinidad y temperatura que fueron tomadas durante la
realización de este experimento.
La temperatura vario entre los (máximo 32.7ºC – mínimo 24.25ºC). La salinidad
reportada para este experimento fue de entre 42 y 31.2 UPS.
Numero de huevos desovados por hembra. Se aplico una prueba de análisis de varianza (ANOVA), en la que se pudo
observar la formación de tres grupos con respecto a los tratamientos (c,b,a), los
cuales no presentaron diferencias significativas dentro de cada grupo (P> 0.05),
pero entre cada grupo si se observaron diferencias significativas (P> 0.05). El
grupo que presento el mayor numero de huevos por hembra fue el grupo (c)
que corresponde a los desoves obtenidos de las hembras alimentadas con
22
jaiba y con la mezcla de jaiba – mejillón. El grupo (b) esta conformado por los
desoves obtenidos de las hembras alimentadas con las mezclas de jaiba –
almeja y jaiba-mejillón-almeja, no obstante, los animales alimentados con estas
dietas presentaron un número de huevos menor que el obtenido con los
animales que conforman el grupo (c). El grupo (a) que son las hembras
alimentadas con la mezcla jaiba-almeja fue el grupo que presentó menor
numero de huevos /hembra (P> 0.05) (Fig10).
0200400600800
100012001400160018002000
Jaiba Jaiba-Mej Jaiba-Alm Jaiba-Mej-Alm
Mej-Alm
Tratamiento
Hue
vos
deso
vado
s/he
mbr
a
c c
b b
a
Fig. 10- Numero de huevos desovados por hembras de
O. maya con respecto a cada tratamiento.
Lípidos totales en huevos de pulpo recién desovados. Las diferentes dietas probadas en este experimento no produjeron diferencias
en los niveles de lípidos en los huevos recién desovados (Fig. 11; P> 0.05). Sin
embargo se puede apreciar una tendencia a una mayor cantidad de lípidos en
los huevos procedentes de hembras alimentadas con la mezcla de jaiba-
mejillón y jaiba-mejillón-almeja. Las tres dietas restantes, jaiba y la mezcla
mejillón-almeja y jaiba-almeja produjeron puestas con un nivel bajo de lípidos
(Fig.11).
23
Huevos recién desovados
-20.00-10.00
0.0010.0020.0030.0040.0050.00
Jaiba Jaiiba-Mejillón
Jaiba-Almeja
Jaib-Mejillón-Almeja
Mejillón-Almeja
Dietas
Lipi
dos
mg/
g hu
evo
Fig.11 Lípidos totales en huevos recién desovados de hembras O. maya
alimentadas con diferentes dietas.
Proteínas totales en huevos de pulpo recién desovados El nivel de proteínas en los huevos recién desovados mostró valores de
proteína entre 29 y 51 mg/g huevo con los valores menores en los pulpos
alimentados con jaiba-mejillón y los mayores en aquellos con jaiba-almeja (Fig.
12; P < 0.05).
Recién desovados
010203040506070
Jaiba Jaiiba-Mejillón
Jaiba-Almeja Jaib-Mejillón-Almeja
Mejillón-Almeja
Dietas
Prot
eina
s m
g/g
huev
o
Fig. 12- Proteínas totales en huevos recién desovados de hembras O. maya
alimentadas con diferentes dietas. Se muestran los valores máximos y mínimos de proteína de los huevos desovados en cada tratamiento.
Lípidos y proteínas totales en gónada desovada en hembras de O. maya.
24
La correlación que existe entre el número de huevos remanentes en gónada y
la cantidad de lípidos totales y proteínas presentes en el ovario de las hembras
de O. maya se presenta en la figura 14 a.
Como se puede apreciar, la forma de la curva sugiere un modelo potencial
negativo el cual quedó comprobado a partir de la obtención de un elevado
coeficiente de correlación en ambos casos (R2=0.9082). Este modelo muestra
que a mayor cantidad de huevos remanentes hay menor cantidad de lípidos y
proteínas en la gónada, así como también que la dieta que mayor cantidad de
huevos remanentes y menor cantidad de lípidos y proteínas en gónada fue en
las hembras alimentadas con jaiba. Las hembras que menor cantidad de
huevos remanentes y mayor cantidad de lípidos y proteínas fueron las que se
alimentaron con la mezcla de almeja-mejillón (Fig.13).
LÍpidos en gonada
y = -121.35Ln(x) + 271.9R2 = 0.9082
0
50
100
150
200
250
300
93 130 166 160 163
Llipidos mg/g tejido desovado
Nùm
ero
de h
uevo
s re
man
ente
s/ h
embr
a
jaiba
jaiba - mejillon
jaiba - almeja
jaiba - mejillon - almeja
almeja - mejillòn
proteinas en gonada y = -121.35Ln(x) + 271.9R2 = 0.9082
0
50
100
150
200
250
300
28 98 81 176 425
proteinas mg/g tejido desovado
Núm
ero
de h
uevo
sre
man
ente
s
jaiba
jaba - mejillon
jaiba - almeja
jaiba - mejillón - almeja
almeja - mejillón
Fig.13- Relación entre la cantidad de huevos
remanentes en gónada y la cantidad de lípidos (A)
25
y proteína (B) en tejido ya desovado.
Peso de huevos de Octopus maya con respecto al tiempo. El peso de los huevos de O. maya cambió en forma exponencial con respecto al
tiempo de desarrollo del embrión. No se encontraron diferencias significativas
entre los pesos de los huevos provenientes de los distintos tipos de alimento.
Por esa razón, el valor del peso de los huevos obtenidos en los diferentes
desoves se agrupó con el fin de conocer la relación que hay entre el peso y el
tiempo de desarrollo embrionario. Una alta correlación (R2 = 0.97) demuestra
que el peso de los huevos se incrementa significativamente con respecto al
tiempo y que ésta relación es de tipo exponencial (Fig. 14).
y = 0.0646e0.2999x
R2 = 0.967
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0 10 20 30 40
Tiempo, dias
Peso
de
los
huev
os, g
Fig.14 Relación entre el peso de los huevos y los
días que duro incubación de O.Maya.
Presión osmótica en huevos de Octopus maya con respecto al tiempo de incubación. La presión osmótica de los huevos de O. maya durante el desarrollo
embrionario mostró una curva logarítmica negativa la cual mostró una alta
correlación (R2= 0.92) (Fig. 15). No se observaron diferencias significativas
entre las presiones osmóticas obtenidas de los huevos procedentes de las
hembras alimentadas con los diferentes tipos de alimento (P > 0.05). Por esta
razón se calculó un valor promedio para todos los huevos muestreados a lo
largo del periodo de incubación. Como se puede apreciar la presión osmótica
26
de los huevos de O. maya se redujo hasta alcanzar la presión osmótica del
agua de mar justo unos días antes de la eclosión.
y = -207.12Ln(x) + 1606.5R2 = 0.9208
10001100120013001400150016001700
0 10 20 30 40
Tiempo, días
P.O
. Li
quid
o pe
rivite
lino,
mO
sm/k
g
P.O. agua de mar, 1250 mOsm/kg
Fig.15 Relación entre la presión osmótica de huevos
de O. maya y el tiempo de incubación.
Experimento 2 Temperatura y salinidad en agua de mar tratada y filtrada. La temperatura y la salinidad del sistema de incubación para huevos de
Octopus maya en agua de mar tratada a lo largo de este segundo experimento
fluctuaron entre 27.8 y 23.5°C y entre 36.4 y 33.68 UPS.
En el sistema de incubación de agua de mar filtrada, la temperatura fluctuó
entre 23.3 y 28.6°C y de 36.65 y 35.6 UPS
Desove y eclosión En la segunda parte del estudio en la que se caracterizaron los embriones
durante el desarrollo y los juveniles tempranos provenientes de hembras
alimentadas con la mezcla jaiba-mejillón, se evaluaron también el número de
huevos por racimo y el porcentaje de eclosión.
27
Los valores promedio indican que el número de racimos por desove fue de 30 +
2 de los que se obtuvieron 384 + 50 juveniles. Un total de 25 desoves fueron
cuantificados en esta parte del estudio.
Lípidos totales en huevos de Octopus maya a lo largo del desarrollo embrionario. Una curva polinomial fue ajustada en un intento de explicar el modelo de curva
que representa la relación entre la concentración de lípidos en los huevos (mg/g
huevo) y el tiempo de incubación. Como se puede apreciar, los lípidos de los
huevos disminuyen a lo largo del periodo de incubación hasta el día 30,
después del cual la concentración de lípidos totales aumenta significativamente
(Fig. 16).
y = 0.2407x2 - 1.1787x + 1.4661R2 = 0.7671
0
0.2
0.40.6
0.8
1
1.2
1.41.6
1.8
2
dia 0 dia10 dia20 dia30 dia40
Tiempo, dias
lipid
os m
g/g
huev
o/m
l
Fig. 16. Correlación entre la cantidad de lípidos a través de
los días de Incubación de huevos de O.Maya.
Proteínas totales en huevos de Octopus maya a lo largo del desarrollo embrionario. La relación entre cantidad de proteínas en los huevos y el tiempo se presenta
en la figura 17. Como se puede notar una ecuación polinomial fue ajustada con
el fin de explicar el comportamiento de esta relación. De acuerdo con la 28
ecuación, una reducción de la concentración de proteínas fue observada a lo
largo del periodo de incubación con los valores menores al día 40 justo antes de
la eclosión.
y = -1.5715x2 + 7.1181x + 3.5858R2 = 0.7532
-202468
1012141618
0 10 20 30 40
Tiempo, dias
Prot
eína
s To
tale
s, m
g/g
Hue
vo
Fig. 17. Correlación entre la cantidad de proteínas durante los días de
Incubación en huevos de O.Maya.
Características morfológicas y bioquímicas durante los primeros 10 días de vida en juveniles de Octopus maya.
Lípidos totales. Una serie de cambios morfológicos y fisiológicos fueron observados en los
juveniles de O. maya durante los primeros días de vida. Una reducción de la
concentración de lípidos/g pulpo fue observada, con los valores mayores en los
días 1 y 2 y los menores entre el día 8 y 10 (Fig. 18; P < 0.05).
29
y = -1.1711x + 23.981R2 = 0.6519
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
1 2 4 6 8 10
Tiempo, días
Lípi
dos
mg/
g pu
lpo
Fig.18 Correlación entre la cantidad de lípidos durante los
Primeros días de vida de O.Maya. Relaciones morfométricas. En general se observó que las distintas relaciones morfométricas medidas
presentaron altas dispersiones cuando se relacionaron con el peso húmedo
(Fig. 19). Sin embargo la relación entre la longitud del manto, longitud total y la
longitud de los brazos con el peso húmedo resultó ser positiva y significativa
con coeficientes de correlación de 0.43, 0.59 y 0.45.
Var2 vs. Var4Var2 = .54731 + 2.2362 * Var4
Correlation: r = .43122
0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20Peso húmedo, g
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
1.3
Long
itud
del m
anto
, cm
95% confidence
30
Var1 vs. Var4Var1 = 1.6089 + 7.7233 * Var4
Correlation: r = .59998
0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20P eso humedo, g
1.6
1.8
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
Long
. To
tal,
cm
95% confidence
Var3 vs. Var4Var3 = .87301 + 4.9538 * Var4
Correlation: r = .45252
0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20Peso húmedo, g
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
2.2
2.4
Long
bra
zos,
cm
95% confidence Fig.19- Correlación entre la longitud del manto, longitud total
y de los brazos con el peso húmedo (g) en juveniles de O. maya.
Longitud total La longitud total de los juveniles de Octopus. maya varió de forma irregular a lo
largo de los primeros 10 días de vida con los valores mayores al día 1, 5, 8 y 10
y los menores al día 2 a 4 y 6 (P < 0.05; Fig. 20).
31
1.5
1.7
1.9
2.1
2.3
2.5
2.7
2.9
3.1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, días
Long
itud
tota
l, cm
Fig.20 Longitud total durante los primeros días de vida
de O. maya.
Longitud del manto La longitud del manto se redujo a lo largo de los primeros días del experimento,
con los valores mayores al día 1 y los menores entre el día 3 y 10. Una
ecuación polinomial fue ajustada la cual presento una correlación de R2 =0.64
(Fig.21).
longitud manto
y = 0.0095x2 - 0.1219x + 1.1149R2 = 0.6378
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
tiempo, días
long
.man
to,c
m
32
Fig.21 Relación entre la longitud del manto y el tiempo durante los primeros días de vida de juveniles de O.Maya.
Longitud de los brazos La longitud de los brazos con respecto a los días presento una correlación
polinomial con una R2 = 0.85. Se puede observar que los brazos aumentan de
longitud de acuerdo con los días en los que se realizaron los muestreos
(Fig.22).
longitud brazos
y = 0.0126x2 - 0.084x + 1.4052R2 = 0.8459
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10tiempo,dias
long
. bra
zos,
cm
Fig22- Correlación positiva entre la longitud de los brazos y los primeros
días de vida de juveniles de O.Maya.
Peso seco, peso húmedo.
33
0.06
0.07
0.08
0.09
0.10
0.11
0.12
0.13
0.14
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, días
Peso
húm
edo,
g
0.010
0.015
0.020
0.025
0.030
0.035
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, días
Pes
o se
co, g
Fig.23- Variaciones del peso húmedo y seco de los juveniles de
O. maya durante los primeros días de vida. Valores como promedio + E.S.
Al igual que con la longitud total el peso húmedo y el peso seco mostraron
variaciones irregulares a lo largo de los primeros 10 días de vida. Los valores
mayores al peso húmedo fueron registrados al día 4, 8 y 10 y los menores a los
días 2 y 6. Valores intermedios fueron registrados en el resto de los días de
muestreo. Los valores mayores de peso seco fueron registrados a los días 1, 4,
5 y 8 a 10. Entre estos organismos el peso seco representó una proporción de
entre el 18 y 20% la cual se redujo entre el primer y el décimo día, siguiendo un
modelo polinomial negativo (R2 = 0.7166) (Fig.23).
34
y = 0.0016x2 - 0.0223x + 0.2693R2 = 0.7166
0.15
0.17
0.19
0.21
0.23
0.25
0.27
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TIEMPO, DÍAS
PH/P
S
Fig.23 Variaciones de la relación peso húmedo/peso seco de los
juveniles de O. maya durante los primeros diez días de vida. Longitud del manto/longitud total (LM/LT) Una reducción de la relación entre LM/LT con respecto al tiempo fue ajustada
con un modelo potencial negativo (Fig. 24; R2 =0.859).
y = 0.4074x-0.1396
R2 = 0.859
0.25
0.27
0.29
0.31
0.33
0.35
0.37
0.39
0.41
0.43
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo,días
LM/L
T
Fig.24. Variaciones de la longitud del manto/longitud total
(LM/LT) de los juveniles de O. maya a lo largo de los primeros 10 días de vida.
Longitud brazos/longitud total (LB/LT) Un aumento de la proporción de LB/LT con respecto al tiempo fue ajustado a
una ecuación polinomial la cual mostró un coeficiente de correlación de R2
=0.8677 (Fig.25), indicando que los brazos crecen en una proporción mayor al
manto durante los primeros días de vida de los juveniles de O. maya.
35
y = 0.0017x2 - 0.004x + 0.5354R2 = 0.8677
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
0.65
0.70
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, días
LB/L
T
Fig.25 Variaciones de la longitud de los brazos /longitud total
(LB/LT) de los juveniles de O. maya a lo largo de los primeros 10 días de vida.
Longitud de los brazos/longitud del manto (LB/LM). La relación entre LB/LM mostró ajustarse a un modelo lineal con respecto al
tiempo de vida (Fig. 26). Un coeficiente de correlación de R2 = 0.86 y una P <
0.05 mostraron que este es el modelo apropiado para describir esta relación.
y = 0.0914x + 1.3189R2 = 0.8594
1.00
1.20
1.40
1.60
1.80
2.00
2.20
2.40
2.60
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo días
LB/L
M
Fig.26. Relación entre la longitud de los brazos y la longitud
del manto (LB/LM) y el tiempo en juveniles de O. maya durante los primeros diez días de vida.
DISCUSION
36
El presente estudio fue llevado a cabo con el fin de establecer la forma en que
el alimento modula la condición fisiológica durante el desarrollo embrionario de
Octopus maya. Los resultados ahora obtenidos demuestran que el tipo de
alimento ejerció un efecto sobre la cantidad de huevos desovados provocando
que los animales alimentados con jaiba y con la combinación jaiba mejillón
produjeran una mayor cantidad de huevos que la observada en los animales
alimentados con las otras combinaciones. Es interesante hacer notar que la
menor cantidad de huevos desovados fue observada en las hembras
alimentadas con la mezcla mejillón y almeja. Estudios recientes llevados a cabo
en O. vulgaris y O. deifilipi así como en el calamar Illex argentinus demostraron
que la energía y nutrientes para la maduración son derivados del alimento y no
de las reservas acumuladas en la glándula digestiva o el músculo (Moreno et
al., 1998; Rosa et al., 2004). Es por eso que el tipo de alimento tiene una
influencia definitiva sobre el éxito reproductivo de estas especies. En este
sentido (Otles y Sengor, 2005) indicaron que el mejillón tiene un alto contenido
de ácidos grasos polinsaturados los cuales son un componente importante de
las moléculas que son utilizadas para el desarrollo de los huevos de muchas
especies marinas como los pulpos. Por otro lado (Rosa et al., 2004)
demostraron que también las proteínas son utilizadas por las hembras de los
pulpos para el desarrollo del los embriones. Estudios previos mostraron que
durante la maduración sexual se incrementa la secreción de gonadotropina la
cual estimula el rompimiento de las proteínas y el flujo de amino ácidos para la
formación de las reservas vitelinas (O'Dor et al., 1983). Si el origen de las
proteínas que forman el ovario y los huevos es dietético entonces los pulpos
requerirán proteína de alta digestibilidad y una fuente de amino ácidos
disponibles para ser utilizados durante la maduración sexual.
En estudios realizados en O. vulgaris se ha observado que estos pulpos y los
cefalópodos en general son altamente eficientes en el aprovechamiento de las
proteínas provenientes de crustáceos y particularmente de los cangrejos, con
los cuales se han podido obtener altas tasas de crecimiento(Cerezo-Valverde
37
2004; García and Giménez, 2002; Giménez and Garcia, 2002; Iglesias et al.,
2000; Miliou et al., 2005; Pérez et al., 2006; Van Heukelem, 1976; Villanueva et
al., 2004). Aunque no hay estudios en los que se hayan probado diferentes
tipos de proteínas y lípidos en la maduración sexual de pulpos, los resultados
obtenidos ahora permiten suponer que las proteínas y los lípidos
proporcionados por las jaibas y los mejillones son de la calidad que las hembras
requieren para el desarrollo del ovario y la consecuente formación y desove de
los huevos de O. maya.
Aunque las almejas utilizadas en el presente estudio también aportaron
proteínas a la dieta de las hembras al parecer estos moluscos no contienen la
composición proteica o la cantidad de amino ácidos libres que los pulpos
requieren para el desarrollo del ovario. Nuevos estudios tendrán que llevarse a
cabo con el fin de conocer si la proporción de aminoácidos libres en los-
moluscos bivalvos como las almejas son el factor limitante del desarrollo ovárico
de las hembras de O. maya.
En el presente estudio se observó que la concentración de lípidos totales en los
huevos de O. maya procedentes de hembras alimentados con los diferentes
tipos de alimentos no mostraron diferencias significativas. Si la calidad de los
huevos y de los embriones es función de la concentración de lípidos presentes
en la dieta entonces los resultados ahora obtenidos podrían significar que,
independientemente de la cantidad de huevos producidos, la calidad de los
huevos de esta especie permanece constante. Esto podría ser interpretado
como una estrategia de O. maya para producir desoves aún cuando la
alimentación de las hembras en la temporada de maduración sexual haya sido
limitada. Este tipo de estrategia es muy apropiada en organismos que, como O.
maya tienen un ciclo de vida de un año. La posibilidad de producir desoves de
calidad constante aún cuando haya un cambio en la disponibilidad de alimento
38
garantiza el reclutamiento permanente de juveniles fisiológicamente aptos
independientemente de la abundancia o la calidad del alimento.
En el presente estudio se observó que en las hembras que más huevos
desovaron se presentaron una mayor cantidad de huevos remanentes. Aunque
la razón para la presencia de huevos no desovados aún no ha sido establecida
la hipótesis de que estos pudieran ser utilizados como reserva energética
durante el cuidado parental podría ser planteada.
La relacion del número de huevos remanentes entre los lípidos y las proteínas
contenidas en el ovario mostraron una relación potencial negativa indicando que
a medida que se reduce el número de huevos remanentes en el ovario, mayor
es la concentración de lípidos y proteínas en el ovario desovado. Estos
resultados podrían ser interpretados en relación con el papel que podrían tener
los huevos remanentes como reservas energéticas y de nutrientes para las
hembras durante el cuidado parental y la relación que guardan éstos con el
resto del ovario.
Estudios previos han demostrado que las hembras de pulpo requieren de
reservas energéticas las cuales son utilizadas para mantenerse vivas mientras
se desarrollan los embriones en el nido. En un trabajo desarrollado en O. mimus
se encontró que las hembras pueden reducir las reservas energéticas
acumuladas en el ovario en un 90% ya que la energía acumulada en este
órgano es depositada en los huevos (Zamora y Olivares, 2004). Así mismo
estos autores observaron que el peso seco del ovario se reduce en un 85%
durante el cuidado parental indicando que este órgano es una importante
reserva de nutrientes para la hembra. Aunque la forma en que participan los
huevos remanentes en el abasto de nutrientes aún no ha sido dilucidada es
evidente de los resultados obtenidos que no es la cantidad de nutrientes
39
acumulados en los huevos remanentes lo que determina su papel como reserva
de lípidos o proteínas sino más bien podría ser la calidad de estos nutrientes
(tipos de ácidos grasos, composición amino acídica de las proteínas etc.) la que
determine el valor fisiológico de estas reservas.
Aunque en el presente estudio no se realizó un análisis exhaustivo de la calidad
de los nutrientes contenidos en los huevos remanentes ni en los huevos
fecundados, existen indicadores indirectos del tipo de moléculas que podrían
estar presentes. Como se sabe, la presión osmótica esta determinada por la
concentración de moléculas y partículas osmóticamente activas. Entre estas
destacan los iones (Na, K, Ca, Mg) y los amino ácidos libres (Gerard and Gilles,
1972; Hanke et al., 1993; Pierce, 1982). Los resultados obtenidos ahora
demuestran que la presión osmótica de los huevos de O. maya cambia con el
desarrollo, pasando de altamente hiper-osmótica a prácticamente iso-osmótico
al agua de mar en la que se desarrollan los embriones. Si los amino ácidos
libres son un factor determinante de la presión osmótica en general entonces se
podría pensar que la alta presión osmótica observada en el líquido peri vitelino
de los huevos recién desovados de O. maya se debe a la presencia de éstos,
los cuales coadyuvarán al desarrollo de los embriones durante el período de
incubación.
Es interesante hacer notar que durante el desarrollo del embrión mientras los
huevos aumentan de peso y de tamaño se reduce la presión osmótica hasta
alcanzar valores similares a los del agua de mar que rodea a los huevos. Este
resultado podría estar asociado con una serie de eventos concatenados que
permiten al huevo transformar los nutrientes disueltos en tejido y al mismo
tiempo aclimatarse a las condiciones del medio circundante al momento de la
eclosión. Así con los resultados obtenidos del cambio de peso y presión
osmótica de los huevos durante el desarrollo se podría plantear la secuencia
siguiente:
40
1. Una vez desovados, los huevos llenos de nutrientes comienzan a ser
utilizados para el desarrollo del embrión. En esta etapa los amino ácidos
libres (AAL) presentes podrían ser el factor principal para elevar la
presión osmótica a nivel hiper-osmótico al agua de mar circundante. La
diferencia entre la presión osmótica del medio interno y la del medio
externo favorece la entrada de agua al huevo lo cual permite el aumento
del volumen interno.
2. Conforme los AAL y los otros nutrientes son utilizados por el embrión
para sintetizar tejidos, el espacio interior se amplía permitiendo la
entrada de agua. Una mayor cantidad de fluido peri vitelino es observada
conforme pasa el tiempo de incubación así como una reducción de la
presión osmótica interna y un aumento en el tamaño del embrión.
3. Finalmente y una vez agotadas las reservas, el líquido peri-vitelino con
características a las del agua de mar ofrece al embrión un ambiente
propicio para la eclosión ya que en ese momento es prácticamente iso-
osmótico al agua de mar circundante.
Variaciones similares de la presión osmótica durante el desarrollo embrionario
han sido reportadas en huevos de la cacerola de mar Limulus poliphemus
(Hayakawa et al., 1985). Estos autores observaron que la presión osmótica se
reduce siguiendo una curva hiperbólica durante el desarrollo de los embriones.
Ellos concluyeron que esa disminución podría estar asociada con la
desaparición de moléculas osmoactivas, que son utilizadas para el crecimiento,
lo cual favorece la entrada de agua, permitiendo así el aumento en el espacio
interior el cual es aprovechado por el embrión para su crecimiento.
En cefalópodos existen estudios similares que han demostrado que este
mecanismo no es del todo generalizado y que depende más bien de la forma en
que se utiliza el líquido peri vitelino como almacén de sustancias osmoactivas.
41
(Gomi et al., 1986) encontraron que la presión osmótica de Sepia japónica
prácticamente se mantiene constante a lo largo del desarrollo del embrión con
niveles superiores a los del agua de mar circundante. Al mismo tiempo
observaron que las proteínas en el líquido peri vitelino aumentan mostrando que
en estos organismos este espacio es utilizado como almacén de sustancias
osmoactivas, las cuales favorecen la captación de agua durante el desarrollo
del embrión.
Los resultados obtenidos en el presente estudio mostraron que una
combinación de alimento compuesta por cangrejos frescos congelados (jaibas
del género Callinectes spp) y mejillón (Mytilus galloprovincialis) fueron los que
promovieron la mayor cantidad de huevos por hembra (desovados y
remanentes) y las mejores características de los huevos fecundados. Estas
características permitieron establecer que la combinación de alimentos podría
ser considerada como la más apropiada para la nutrición de las hembras en
condiciones controladas. Por esta razón se caracterizaron los huevos, los
embriones y los juveniles tempranos provenientes de hembras alimentadas
exclusivamente con esa combinación de alimentos en un intento por conocer
los cambios del estado fisiológico y del manejo de nutrientes durante el
desarrollo embrionario y los primeros días de vida de O. maya.
Durante el desarrollo embrionario de esta especie existen cambios morfológicos
importantes asociados con el desarrollo del organismo. Durante esta etapa
importantes cambios fisiológicos se llevan a cabo como resultado de la
movilización y transformación de nutrientes.
Durante el desarrollo embrionario los pulpos adquieren los nutrientes del vitelo
directamente a través de conductos que transportan los lípidos hacia el embrión
(Boletzky, 1975). Tal y como se observó en este estudio las reservas vitelinas
42
fueron absorbidas y transformadas en tejido el cual dio paso a la formación de
las formas juveniles de O. maya.
Es interesante hacer notar el aumento en la concentración de lípidos totales
observado en los huevos entre el día 30 y 40. Una posible explicación para este
aumento está en el metabolismo de los embriones. En un estudio previo
realizado sobre el consumo de oxígeno y la excreción nitrogenada de juveniles
tempranos de O. maya (Segawa y Hanlon, 1988) reportaron que en estas tallas
los animales presentaron un metabolismo lipídico importante el cual podría
estar asociado con el uso de los residuos de vitelo contenidos en los juveniles
en los días posteriores a la eclosión. Aunque se desconoce el mecanismo
bioquímico que opera en este estadio del desarrollo de los embriones existe la
posibilidad de que los pulpos, previo a su nacimiento transformen los nutrientes
acumulados en nutrientes de fácil degradación metabólica, los cuales, como los
lípidos, les darían una mayor oportunidad de sobrevivir en los primeros días,
justo cuando la disponibilidad de alimento pudiera ser limitada. Estudios
realizados en paralarvas de O. vulgaris indicaron que la composición lipídica de
los organismos cambia con el tiempo, lo cual pudiera estar asociada tanto con
la capacidad metabólica para hacer ajustes en el uso de nutrientes como ser
una consecuencia de la dieta ofrecida a las paralarvas (Navarroa y Villanueva,
2003).
Las adaptaciones de los juveniles tempranos a las condiciones ambientales son
un factor esencial de la sobrevivencia. Los estudios morfológicos desarrollados
en el presente trabajo demuestran que los organismos no solo son capaces de
modificar su metabolismo en la etapa embrionaria sino también de realizar
ajustes bioquímicos y morfológicos en los primeros días después de la eclosión.
Una reducción directa y proporcional de la concentración de lípidos en el tejido
así como cambios en las relaciones entre el largo de los tentáculos y el largo
total demuestran que los juveniles de O. maya en los primeros 10 días de vida -
-pasan de una condición fisiológica dependiente de las reservas lipídicas a una
43
condición totalmente raptorial para la cual están muy bien preparados. La
elongación de los tentáculos durante estos primeros días en comparación al
crecimiento del manto es una evidencia fuerte de que en ese período los
juveniles de O. maya invierten una buena parte de la energía almacenada en
esa conversión. Aunque no hay referencias que indiquen si esto sucede en
otras especies de cefalópodos, es evidente que las reservas vitelinas ya
mencionadas pudieron ser almacenadas en el manto, el cual fue
proporcionalmente más grande que los brazos en los primeros 5 días después
de la eclosión. Estudios realizados en paralarvas de O. vulgaris han demostrado
que en esta fase del desarrollo los animales también elongan los brazos lo cual
sucede en la medida que su comportamiento se hace más depredador-cazador
(Iglesias et al., 2000; Iglesias et al., 2004).
CONCLUSION
• Los resultados obtenidos en el presente estudio permiten demostrar que la
calidad de la dieta ofrecida a los reproductores afecta la cantidad de huevos
desovados pero no lo calidad de las reservas vitelinas ni la de los embriones.
Esto quedó demostrado a partir de que no se observaron diferencias
significativas en los niveles de proteínas ni lípidos totales en los huevos, los
embriones y los juveniles tempranos de O. maya, de esta manera se rechaza la
hipótesis planteada.
• Con respecto al objetivo general, concluimos que el tipo de alimento influyo
sobre la cantidad de huevos desovados provocando que los animales
alimentados con jaiba y en especial la combinación jaiba-mejillón produjeran
una mayor cantidad de huevos que la observada en los animales alimentados
con las otras combinaciones.
• Existe una relación estrecha entre el número de huevos remanentes en
gónada y la cantidad de lípidos y proteínas que estos mismos presentan: a
mayor cantidad de huevos remanentes, menor es la cantidad de lípidos y
proteínas en los huevos.
44
• Se encontró también que las dietas que mayor cantidad de huevos desovados
presentaron, son también las que obtuvieron una mayor cantidad de huevos
remanentes.
• Aunque no se observo una diferencia significativa en la cantidad de lípidos en
huevos recién desovados, si hubo una tendencia a presentar una mayor
cantidad de lípidos en la dieta jaiba mejillón.
• Tomando en cuenta lo anterior, se propone que la dieta jaiba-mejillón es la
mejor, bajo las condiciones del experimento realizado.
• Los elevados valores en la presión osmótica observados durante el desarrollo
embrionario de O.maya, podrían estar ligados a la presencia de AAL(Amino
ácidos libres) en el liquido perivitelino.
• El aumento en el tamaño y peso de los huevos de O.maya, podría ser un
factor determinante en la disminución de la presión osmótica por la presencia
de AAL(Amino ácidos libres) y por tanto estar ligado con la capacidad de
adaptativa de los embriones al agua de mar circundante.
• Una reducción directa y proporcional de la concentración de lípidos en el
tejido así como cambios en las relaciones entre el largo de los tentáculos y el
largo total demuestran que los juveniles de O. maya en los primeros 10 días de
vida pasan de una condición fisiológica dependiente de las reservas lipidicas a
una condición totalmente depredadora para la cual están muy bien preparados.
• La elongación de los tentáculos a partir de los primeros días de vida de O.
maya en comparación al crecimiento del manto pudieran estar ligadas a energía
almacenada en el manto el cual fue proporcionalmente más grande que los
brazos en los primeros 5 días después de la eclosión.
45
• El estudio de las transformaciones bioquímicas de los nutrientes contenidos
en el vitelo durante el desarrollo embrionario así como las consecuencias de
esto en el metabolismo y capacidad de adaptación de las formas juveniles de O.
maya son seguramente las líneas que habrá de seguir en futuras
investigaciones. La composición proteica y de ácidos grasos del líquido peri-
vitelino y del vitelo, así como del cuerpo de los -juveniles tempranos será de
gran interés, ya que como se ha visto a lo largo de este trabajo, estas
adaptaciones juegan un papel importante en la vida de los pulpos durante los
primeros días después de la eclosión.
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