TES KOLESTEROL TOTAL

I. PRA ANALITIK

PERSIAPAN PASIENa) Puasa 10-14 jam boleh air putihb) Tdk minum obat yang mempengaruhi kadar lipid 2

mgg terakhirc) Pasien stabil. BB, pola makan,merokok, minum kopi &

alkohol tdk berubah 2 mgg terakhir.d) Pasien tidak stres oleh penyakit aku t

PERSIAPAN SAMPELa) Pasien sdh duduk slm 15 mnt sblm pengambilan

sampelb) Pasang torniquet ≤ 1 mnt saat ambil darahc) Bila sampel ikterik, hemolisis ulangid) Sgr lakukan pemisahan serum & sampel sgr di tes. Penyimpanan sampel : 2 hr suhu 15-25 oC 4 hr suhu 2 – 8 oC 3 bln suhu - 20oC

PRINSIP TES Dilakukan dengan metode kolorimetrik enzimatik Cholesterol esterase

Cholesterol ester + H2O Cholesterol + RCOOH

Cholesterol Oxidase

Cholesterol + O2 4 Cholesterol-3-one + H2O2

peroksidase

2H2O2 + 4-aminophenazone + phenol 4-(p- benzoquinone- monoimino) – phenazone + 4 H2O

Dengan adanya peroksidase, hydrogen peroksida akan mengoksidase phenol dan 4 amino phenazone membentuk warna merah

ALAT DAN BAHAN

Alat : a) Tabung reaksi & rak tabung

b) Pipet volumetrik ( 10 µl, 1000 µl )

c) Fotometer

Bahan :

a) Sampel serum, plasma (EDTA)

b) Reagen : R1

PIPES (piperazine-1,4-bis(2-ethne sulfonic acid)

buffer : 75 mmol / l

pH : 6,8

Mg2+ : 10 mmol / l

Sodium cholate : 0,2 mmol / l

4 aminophenazone : ≥ 0,15 mmol / l

phenol : ≥ 4,2 mmol / l

fatty alkohol polyglycol ether 1 %

cholesterol esterase : ≥ 0,5 U/ml

cholesterol oxidase (E.coli) : ≥ 0,15 U/ml

peroksidase (horseradish) : ≥ 0,25 U/ml

stabilizers

II. ANALITIK

Cara kerja semi automatika) Campurkan reagen dalam 32 ml larutan

pelarutb) Biarkan campuran itu selama 10 menit pada

suhu kamar. Larutan stabil selama 7 hr 15 – 25 oC

c) Ambil sampel darah sebanyak 10 µl dan 1000 µl larutan reagen. Campur dan isapkan ke fotometer.

d) Hasil akan keluar dalam bentuk print outNilai Rujukan : Kolesterol total < 200 mg/dl

III. PASCA ANALITIK

Interpretasi 200 – 239 mg/dl waspada tjd PJK

≥ 240 mg/dl resiko terjadinya PJK

Setiap 1% peninggian kolesterol akan

meningkatkan 2% terjadi PJK

TES TRIGLISERIDA

I. PRA ANALITIKPersiapan pasien

a) Puasa 10-14 jam hentikan OR & rokok boleh minum air putih untuk hindari tjd lipemia pasien indikasi tes trigliserida b) Tidak minum obat yang mempengaruhi kdr lipid 2 mgg

terakhir c) Pasien stabil. Tdk ada perubahan BB, pola makan, kebiasaan

merokok, minum kopi & alkohol dlm 2 mgg terakhir d) Pasien tidak mengalami stres oleh penyakit akut

Persiapan sampel a) Pasien duduk 5 mnt sblm pengambilan darah b) Saat pengambilan drh psg torniquet ≤ 1 menit c) Pisahkan serum sesegera mungkin. Sampel sgr di tes. Penyimpanan sampel : 2 hr suhu 15 – 25 oC 4 hr suhu 2 – 8 oC 3 bln suhu -20 oC d) Bila sampel ikterik, hemolisis sampel dilulangi

Prinsip tes

Tes trigliserida dilakukan dgn metode kolorimetrik enzimatik (GPO/PAP)

lipase

Trigliserida + 3H2O Glyserol + 3RCOOH

Glycerol kinase

Glycerol + ATP Glycerol-3-phosphate + ATP GPO

Glycerol-3-phosphate + O2 dyhydroxyaceton phosphate + H2O2

pereoksidase

H2O2 + 4 aminophenazone + 4 chlorophenol

4-(p-benzoquinone-mono-imino)-phenazone

+ 2 H2O + HCl (warna merah)

Dengan adanya peroksidase, hydrogen peroksidase membentuk efek oxidase coupling dari 4-chlorophenol dan 4 aminophenazone yang membentuk warna merah derivat quinonemine

Alat dan Bahan

Alat : a) Tabung reaksi & rak tabung

b) Pipet volumetrik (20 µl, 1000 µl)

c) Fotometer

Bahan :

a) Sampel serum, plasma (EDTA)

b) Reagen : R 1 buffer / 4-chlorophenol / enzyme

PIPES (piperazine-N,N’bis ( 2-ethanasulfonic

acid )

buffer : 50 mmol/l

pH : 6,8

Mg2+ : 40 mmol/l

Sodium cholate : 0,20 mmol/l

ATP : 1,4 mmol/l

4-aminophenazone : 0,13 mmol/l

4 chlorophenol : 4,7 mmol/l

potassium hexacyanoferrate (II ) : 1 µmol/l

fatty alcohol polycol ether : 0,65

lipoprotein lipase : ≥ 5,0 U/ml

glycerokinase : ≥ 0,19U/ml

glycerol phosphate oxidase : ≥ 2,5 U/ml

peroksidase (horseradish) : ≥ 0,10 U/ml

II. ANALITIK

Cara kerja semi automatik :Campurkan reagen dlm 32 ml larutan pelarut

Biarkan campuran selama 10 menit pd suhu kamar. Larutan stabil selama 48 jam suhu 15 – 25 oC

Campur : 20 µl sampel darah + 1000 µl larutan reagen

Isapkan ke fotometer

Hasil akan terbaca pada print out

Nilai Rujukan : Kadar trigliserida < 200 mg/dl

III. PASCA ANALITIK

Interpretasi : 200 – 399 mg/dl waspada tjd

PJK

> 400 mg/dl resiko tjd PJK

TES KOLESTEROL HDL

I. PRA ANALITIK

Persiapan pasien : Puasa 10-14 jam hentikan rokok &

olah raga, boleh minum air putih Tidak mendapat obat yang

mempengaruhi kadar lipid dlm 2 mgg Dlm 2 mgg BB, pola makan,

merokok, minum kopi & alkohol tdk ada perubahan

Pasien tidak alami stres oleh penyakit akut

Persiapan sampel Saat ambil sampel pasien sdh duduk slm

5 menit Saat ambil drh pasang torniquet < 1 menit Pisahkan serum sesegera mungkin & sgr

lakukan tes. Sampel stabil 2 hr suhu 15-25 oC 4 hr suhu 2 – 8 oC 3 bln suhu -20oC Bila memakai plasma antikoagulan EDTA Bila sampel ikterik & lisis ulangi

pengambilan tjd peningkatan palsu

Prinsip tes Pemberian phosphotungstic acid dan ion

magnesium ke dlm sampel maka kilomikron, VLDL dan LDL mengendap (presipitasi).

Serum + HDL separating reagent sentrifus HDL fraksi (supernatan) +

kilomikron, VLDL, LDL fraksi (presipitasi).

Setelah disentrifus dalam supernatan hanya

terdapat HDL yg kadar kolesterolnya

ditentukan dgn metode kolorimetrik enzimatik.

Alat dan Bahan Alat : 1) Pipet mikro

2) Tabung mikro

3) Rak tabung

4) Alat Fotometer

Bahan :

a) Sampel serum, plasma (EDTA)

b) Reagen presipitasi

Phosphotungstic acid : 1,4 mmol/l

Magnesium chloride : 8,6 mmol/l

II. ANALITIK

Cara kerja : Campur 200 µl serum + 500 µl reagen

presipitasi lalu inkubasi selama 10 mnt pd suhu 15-25 oC.

Lakukan sentrifugasi slm 5 menit utk mendapatkan supernatan yang jernih

Pipetkan 100 µl supernatan jernih + 1000 µl larutan reagen (spt tes kolesterol total) ke dlm tbg reaksi

Campur & inkubasi slm 10 mnt pada suhu kamar

Isapkan ke fotometer Hasil akan terbaca dlm bentuk print outNilai Rujukan : Laki-laki 35-55 mg/dl Perempuan 45-65 mg/dl

III. PASCA ANALITIK

Interpretasi :

36 – 44 mg/dl waspada tjd PJK

≥ 35 mg/dl resiko tjd PJK

Setiap penurunan 4 mg% HDL, resiko tjd PJK meningkat 10%

TES KOLESTEROL LDL

Ada 2 cara pemeriksaan kolesterol LDL Cara tidak langsung dgn

menggunakan formula Friedewald bila kadar Trigliserida < 400 mg/dl.

Kolesterol LDL = Kolesterol total – Kolesterol HDL -1/5 Trigliserida

Secara langsung dgn metode tes Homogeneous enzymatic colorimetric assay

I. PRA ANALITIK

Persiapan pasien : Puasa 10-14 jam hentikan rokok &

olah raga, boleh minum air putih Tidak mendapat obat yang

mempengaruhi kadar lipid dlm 2 mgg Dlm 2 mgg BB, pola makan,

merokok, minum kopi & alkohol tdk ada perubahan

Pasien tidak alami stres oleh penyakit akut

Persiapan sampel Saat ambil sampel pasien sdh

duduk slm 5 menit Saat ambil drh pasang torniquet < 1

menit Pisahkan serum sesegera mungkin &

sgr lakukan tes.

Bila memakai plasma antikoagulan EDTA

Bila sampel ikterik & lisis ulangi pengambilan tjd peningkatan palsu

Prinsip tes Metode tes : Homogeneous enzymatic

colorimetric assay R1 (a-Cyclodextrin/buffer) dan sampel

VLDL Mg +++ Selective

kilomikron sugar compound inhibition Penambahan R2 ( buffer / enzyme / 4-

aminoantipyrine ) dan start reagen HDL detergent Selective micellary

VLDL formation

kilomikron detergent cholesterol + free

LDL + H2O cholesterol esterase fatty acids

cholesterol

Cholesterol + O2 Cholestenone + H2O2

oksidase

peroxidase

2H2O2 + 4 aminoantipyrine + HSDA + H2O + H

pigmen ungu kebiruan + 5 H2O

Alat dan Bahan Alat : a) Pipet mikro b) Tabung mikro c) Rak tabung d) Rak sampel e) Alat automatik Cobas Mira

Bahan :

a) Sampel serum, plasma (EDTA)

b) R1 : buffer

MOPS (3-morpholinopropane sulfonic acid)

buffer : 20,1 mmol/l

pH : 6

HSDA : 0,3 g/l

ascorbate oxidase : 3,0 U/l

cholesterol oxidase : 2,0 kU/l

peroksidase (horseradish) : 20 kU/l

detergent

R2 : buffer / enzymes / 4-aminoantipyrine MOPS ( 3-morpholinopropane sulfonic acid )

buffer : 20,1 mmol/l pH : 6,8

MgSO4, 7H2O : 2,0 g/l 4-aminoantipyrine : 5 g/l cholesterol esterase : ≥ 3,0 kU/l cholesterol oksidase : ≥ 2,0 kU/l peroksidase : 20 kU/l detergent R1 dan R2 ; reagen siap pakai

II. ANALITIK

Cara kerja :Tes dilakukan dgn alat automatik cobas miraMasukkan 500 µl serum ke tempat sampel kemudian diletakkan pada rak sampel sesuai nomor tesReagen dimasukkan dlm tempat reagen kemudian diletakkan pada rak sesuai program kolesterol LDLAlat akan melakukan tes secara automatik sesuai program ( sampel 10 µl, Reagen R1 300 µl dan R2 90 µl )Hasil tes akan keluar melalui print out

Nilai Rujukan : Kolesterol LDL < 130 mg/dl

III. PASCA ANALITIK

Interpretasi :

Rheumatoid faktor peningkatan palsu bila kadarnya > 200 IU/ml

130 – 159 mg/dl waspada PJK

≥160 mg/dl resiko tjd PJK

TES GLUKOSA DARAH

I. PRA ANALITIK

Persiapan Pasien

GDP Pasien dipuasakan 8 – 12 jam

Semua obat dihentikan dulu

GD2PP Dilakukan 2 jam setelah tes GDP Pasien dianjurkan makan yg mengandung 100 gram

karbohidrat sblm tes dilakukan

TTGO Tiga hari sblm tes makan seperti biasa (KH cukup) Hentikan rokok, minum kopi & alkohol, OR Puasa minimal 8 jam sblm tes dilakukan

Persiapan sampel Sampel diambil pagi hari sore hari GD lbh

rendah kasus DM tdk terdiagnosis Tes saring/kontrol sampelnya plasma vena,

serum atau drh kapiler. Tes diagnostik dianjurkan plasma vena, tp

bisa juga whole blood, drh vena atau kapiler. Sampel plasma stabil < 1 jam.

Bila > 1 jam konsentr.glukosa o/k glikolisis ex vivo

Sampel serum stabil < 2 jam Penyimpanan sampel tambahkan glikolisis

inhibitor. Stabil slm 24 jam suhu 15-25 oC

10 hr suhu 4 oC

Metode Tes Metode kimia : metode ortho toluidin Metode enzimatik : glucose oxidase/

hexokinase

Prinsip Tes

Tes UV dgn metode enzimatik. Sampel ditambah R1 (buffer/ATPNADP)

Lalu tambahkan R2 (HK/G-6-PDH)Rx : HK

Glukosa + ATP G-6-P + ADP

Heksokinase mengkatalisis fosforilase glukosa mjd glukosa -6-fosfatase oleh ATP

G-6-PDH

G-6-P + NADP Gluconate-6-P + NADPH + H

Konsentrasi glukosa diukur dgn fotometer

Alat dan Bahan Alat : a) Tabung reaksi 4 buah b) Pipet mikro 10 µl, 1000 µl c) Fotometer Bahan :

Sampel serum, plasma EDTA Reagen : R1 Buffer / ATP /NADP TRIS (hydroxymethyl)aminomethane buffer 100 mmol pH 7,8 Mg2+ 4 mmol/l ATP ≥ 1,7 mmol/l R2 HK / G-6-PDH HEPES buffer 30 mmol/l pH 7,0 Mg2+ 4 mmol/l HK ≥ 8,3 U/ml G-6-PDH ≥ 15 U/ml Preservative

II. ANALITIK

Cara Kerja Semiautomatik

Buat blanko reagen & blanko sampel seperti pada tabel diatas

Campur dgn baik & inkubasi pd suhu ruang slm 10 menit Pembacaan hasil tes dilakukan pd pjg glbg 540 nm

Blanko

Reagen I

Blanko

Reagen II

Blanko

Sampel

Sampel

Reagen - 1000 µl - 1000 µl

NaCl 1000 µl - 1000 µl -Sampel - - 10 µl 10 µ

Tes GD2PP :

Setelah diberikan makanan yang

mengandung 100 gr KH, 2 jam kmdn

dilakukan tes sesuai cara tes GDP

TTGO : Dilakukan tes GDP Diberikan 75 gr glukosa (dewasa) atau 1,75

gr/kgBB dilarutkan dlm 250 ml air & dihabiskan dlm 5 menit

Dilakukan tes glukosa drh 2 jam sesudah beban glukosa

Selama tes, subjek yg diperiksa tetap istirahat & tdk merokok

Nilai Rujukan

Tes Sampel (mg/dl) (mmol/L)

GDS Plasma vena

Drh kapiler

< 110

< 90

< 6,1

< 5,0

GDP Plasma vena

Drh kapiler

< 110

< 90

< 6,1

< 5,0

GD2PP Plasma vena

Drh kapiler

< 140

< 120

< 7,8

< 6,7

III. PASCA ANALITIK

Interpretasi

TES SAMPEL

BUKAN DM BELUM PASTI DM DM

(mg/dL) (mmol/L) (mg/dL) (mmol/L) (mg/dL) (mmol/L)

GDS

Plasma vena < 110 < 6,1 110 - 199 6,1 - 11,0 ≥ 200 ≥ 11,1

Darah kapiler < 90 < 5,0 90 - 199 5,0 - 11,0 ≥ 200 ≥ 11,1

GDP

Plasma vena < 110 < 6,1 110 - 125 6,1 - 7,0 ≥ 126 ≥ 7,0

Darah kapiler < 90 < 5,0 90 - 109 5,0 - 6,1 ≥ 110 ≥ 6,1

GD2PP

Plasma vena < 140 < 7,8 140 - 200 7,8 - 11,1 > 200 > 11,1

Darah kapiler < 120 < 6,7 120 - 200 6,7 - 11,1 > 200 > 11,1

Kriteria

GDP

0 jam 2 jam

(mg/dL) (mmol/L) (mg/dL) (mmol/L)

GDPT≥ 110 serta

< 1266,1 ≥ serta

< 7,0 < 140 < 7,8

TGT < 126 < 7,0≥ 140 serta

< 2007,8 ≥ serta

<11,1

DM ≥ 126 ≥ 7,0 ≥ 200 ≥ 11,1

Interpretasi TTGO (WHO)