t-select mhc tetramer - select your region | mbl...

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研究用

Th2

Th1

Treg

NKTTarget cells

Cell death

MDSC

B cell

CD4+T

Dendritic cells

CD8+T

IL-2IFN-γTNF-α

IL-4IL-5IL-10IL-13

IL-17

IL-4IL-12

Antibodies

IL-10TGF-β

IL-6+TGF-β

TGF-β

S100A8/A9PerforinGranzymeIFN-γTNF-α

Pathogens

TLR

CTL

MHC分子

ペプチド

蛍光標識物

T細胞受容体抗原特異的T細胞

β2m

T-Select MHC Tetramer

MHC class II

CD1d

MHC class I

Th17

第 5 版

Ｔ細胞上に発現しているT細胞受容体（T-cell receptor, TCR）は、MHC分子とペプチド断片の複合体(MHC

／ peptide complex) を特異的に認識して結合します。CD8 陽性 T 細胞は、MHC class I 分子とペプチド断

片の複合体 (MHC class I ／ peptide complex) を認識して、ウィルス感染細胞やがん細胞などの標的細胞を

直接攻撃・排除することから、細胞傷害性Ｔ細胞（Cytotoxic T Lymphocyte, CTL）と呼ばれています。一方、

CD4 陽性 T 細胞は、MHC class II 分子とペプチド断片の複合体（MHC class II ／ peptide complex）を認識

して活性化します。CD4 陽性 T 細胞は主にヘルパー T（Th）細胞と呼ばれ、細胞性免疫を司る CTL やマク

ロファージなどに作用する Th1 細胞と、樹状細胞や B 細胞に作用して液性免疫を賦活化する Th2 細胞が存

在します。1996 年、Altman らは MHC Tetramer 試薬を用いて、これらの特異的 T 細胞をフローサイトメ

トリーにより 1 個ずつ検出することに成功しました。MHC Tetramer 試薬は、これまでサイトカインの産生

や細胞傷害性活性の確認などで間接的にしか捉えることができなかった抗原特異的 T 細胞を直接的に検出す

ることを可能にしただけでなく、抗原特異的 T 細胞の分離にも利用できるため、抗原特異的 T 細胞の機能や

フェノタイプ等の詳細な解析を可能にしました。現在、 MHC Tetramer 試薬は、感染症やがんワクチン療法、

細胞免疫療法、移植免疫、自己免疫疾患などの基礎研究分野あるいは臨床開発において、Ｔ細胞免疫応答の

モニタリングに欠かす事のできないツールとして広く利用されています。

T-Select MHC Tetramer抗原特異的 T 細胞を特異的に検出できる試薬です

2（株）医学生物学研究所営業推進部基礎試薬グループ TEL: 052-238-1904 FAX: 052-238-1441　http://ruo.mbl.co.jp/

CONTENTSMHC Tetramerによる抗原特異的T細胞の検出原理 ...................................................... 3

T-Select MHC class I Tetramer試薬の作製方法 ........................................................ 3

T-Select HLA class I Tetramerの高い特異性 ............................................................ 4

T-Select MHC Tetramer染色方法 ........................................................................... 5全血の場合 ..................................................................................................................................... 5

Human PBMC, Mouse Splenocyte の場合 ......................................................................................... 6

Human CD8抗体のクローンによる染色性の違い ........................................................ 6

MHC TetramerはCTLの特異性を直接認識します ........................................................ 7

末梢血を用いた細胞傷害性T細胞の誘導 [MLPC法(modified by MBL)] .................................... 7

がん抗原WT1(変異型) 特異的CTLの誘導と検出 .......................................................... 8

がん抗原survivin-2B特異的CTLの検出 ..................................................................... 9

がん関連 T-Select MHC Tetramerによる染色例 ...................................................... 10

ウィルス・感染症関連 T-Select MHC Tetramerによる染色例 ..................................... 10EBV ........................................................................................................................................... 10

CMV .......................................................................................................................................... 11

Influenza M1 .............................................................................................................................. 12

HTLV-1 ...................................................................................................................................... 13

抗原特異的CTLの各種測定方法とMBL Kits .............................................................. 14IMMUNOCYTO CD107a Detection Kit ........................................................................................... 14

IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit ......................................................................................... 15

IMMUNOCYTO IFN-γ ELISPOT Kit ................................................................................................. 16

T-Select MHC IFN-γ Kit ................................................................................................................ 16

T-Select Antibody Gating Kit ........................................................................................................ 16

MHC Tetramer関連製品 ...................................................................................... 17抗 HLA 抗体による HLA 型簡易判定 .................................................................................................. 17

Clear Back （Human FcR blocking reagent） -Tetramer 染色の Blocking 試薬 - ......................................... 17

抗原特異的 CTL 誘導用 peptide ....................................................................................................... 17

抗原特異的マウスCTLの誘導方法 ........................................................................... 18in vitro stimulation による抗原特異的マウス CTL の誘導（インフルエンザウィルス） ................................... 18

Mouse MHC class I Tetramerの染色例 ................................................................. 19

H-2Kb OVA Tetramer ......................................................................................... 21

T-Select Mouse MHC Tetramerを用いたTetramer blocking assay ........................... 23

T-Select Mouse MHC class II Tetramer ............................................................... 24I-Ab OVA323-339 Tetramer-PE ......................................................................................................... 24

I-Ab ESAT-61-20 Tetramer-PE ........................................................................................................ 25

T-Select CD1d Tetramer ................................................................................... 27

T-Select MHC TetramerとMBL ........................................................................... 29

カスタム作製 ..................................................................................................... 30MHC class I custom Tetramer ....................................................................................................... 30

Human MHC class II custom Tetramer ........................................................................................... 31

T-Select MHC Tetramer使用文献 ......................................................................... 32

T-Select MHC Tetramer製品情報・価格表 ............................................................. 34

関連製品価格表 ................................................................................................. 39

3研究用試薬 Web Site にて、製品検索、データシート取得が可能です。ぜひご利用ください。

MHC Tetramerによる抗原特異的T細胞の検出原理

T 細胞受容体（TCR）は、抗原提示細胞（APC）に発現す

る MHC 分子と、APC 内でプロセスされた特定のペプチド配

列からなる複合体 (MHC ／ペプチド複合体 ) を認識して特異的

に結合することで、T 細胞を活性化させることが知られていま

す。この原理を利用して、MHC/ ペプチド複合体を用いた抗

原特異的 T 細胞の検出が可能であると考えられました。しか

し、MHC ／ペプチド複合体は、単量体（モノマー）の状態では

TCR に対する親和性が低く、両者の結合が不安定であるため、

そのままでは検出ツールとしての応用は困難でした。そこで、

MHC ／ペプチド複合体をビオチン化し、ストレプトアビジン

によりこれを 4 量体（テトラマー）化することで、TCR との

安定的な結合状態を維持させることで検出ツールとしての応用

が可能になりました。T-Select MHC Tetramer は、FITC、PE

あるいは APC （allophycocyanin）などの蛍光物質で標識され

ているため、フローサイトメーターや蛍光顕微鏡を用いて、抗

原特異的 T 細胞の検出が可能です。

T-Select MHC class I Tetramer試薬の作製方法

MHC class I Tetramer 試薬の作製には、Altman らにより考案

された方法が広く用いられています。Altman らは、MHC class

I ／ペプチド複合体の 4 量体をプローブとして利用することが抗

原特異的 CTL の検出、定量に有用であることを実証しました

（Science 1996, 274: 94 − 96）。また、Bodinier らは、HLA

class I heavy chain α3 ドメインに変異（A245V）を入れるこ

とで、CD8 分子との非特異的な結合が最小限に抑えられ、特異

性が飛躍的に向上することを報告しました (Nat. Med. 2000,

6: 707−710)。このことより、T-Select Human HLA class I

Tetramer は、α3 ドメインに変異を入れた HLA class I heavy

chain を用いて作製しています。

作製過程の概略を右図に示しました。

大腸菌リコンビナント蛋白質の MHC class I heavy chain

と β2-microglobulin（β2m）に抗原ペプチドを加えてフォー

ルディング操作を行い、可溶性の MHC class I/ ペプチド複合

体のモノマーを形成させます。次に、複合体中の MHC class I

heavy chain の C 末端にあらかじめ付加しておいたビオチン化

配列中のリジン残基を、BirA 酵素 (E. coli biotin holoenzyme

synthetase) を用いてビオチン化します。ビオチン化モノマーは、

カラムクロマトグラフィーにて精製します。精製ビオチン化モ

ノマーは、蛍光標識したストレプトアビジンと混合することで 4

量体化させ、T-Select MHC Tetramer 試薬となります。

HLA

蛍光標識したストレプトアビジン

Peptide

MHC Tetramer

モノマー

ビオチン化

＜作製過程概略＞

d-Biotin

β2m

Tetramer化

Folding

MHC class I heavy chain, β2m, ペプチドのFoldingを行い、 MHC class I/ペプチド複合体(モノマー)を形成させます。　　モノマー形成を毎日モニタリングしています。

MHC class I heavy chainのC末端リジン残基をBirA酵素を用いてビオチン化します。　　カラム精製で不純物を除去します。

ビオチン－アビジン結合を利用してテトラマー化します。　　Foldingからテトラマー化まで、9～14日間　　必要です。

製造者の声

MHC分子ペプチド

蛍光標識物

T細胞受容体

抗原特異的T細胞

β2m

MHC/ペプチド複合体の単量体（モノマー）ではTCRとの親和性が弱く安定して結合できず、特異的CTLを検出することはできません。

MHC/ペプチド複合体を4量体（テトラマー）化することでTCRと安定して結合し、特異的CTLを検出することができます。


T-Select HLA class I Tetramerの高い特異性

CD8 分子は、生体内において HLA と CTL の結合を補佐することが

知られています。そのため、HLA 分子には CD8 分子と結合する部位が

存在します。T-Select HLA class I Tetramer は、CD8 分子と非特異的

に結合する HLA 分子の α3 ドメイン内の１箇所に変異を入れています。

これにより、CD8 分子とテトラマー試薬の非特異的な結合が抑制され、

特異性が飛躍的に向上しました。

(French Application Number; FR9911133)

＜参考文献＞

1) Gao GF, et al., Nature 387: 630 − 634 (1997) 2) Bodinier M, et al., Nat. Med. 6: 707−710 (2000)

染色例 1：HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer

245

CD8

Tetramer試薬

MHC/peptide複合体

特異的TCR

CD8Tetramer試薬

MHC/peptide複合体

目的の特異的TCRではない

CD8 分子が非特異的に Tetramer 試薬に結合し、非特異的な CD8 陽性細胞も検出してしまいます

非特異結合部位に変異が入っている場合

非特異結合部位に変異が入っていない場合

特異的TCRを選択的に検出可能です

Tetramer-PE

Tetramer-PE

CD8-FITC CD8-FITC

Tetramer-PE

Tetramer-PE

CD8-FITC CD8-FITC

HLA-A*02:01 CMV pp65特異的CTLを含むライン

HLA-A*02:01 CMV pp65特異的CTLを含まないライン

HLA-A*02:01 CMV pp65特異的CTLを含むライン

HLA-A*02:01 CMV pp65特異的CTLを含まないライン

変異を入れたT-Select Tetramer

変異の入っていないTetramer

α3 domain of HLA-A2.1 1)

HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer 試薬で、 HLA-A*02:01 陽性 CMV 陽性患者末梢血（左）と、HLA-A*02:01 陰性

末梢血（右）を染色しました。HLA class I heavy chain α3 ドメインに変異を入れた T-Select MHC Tetramer 試薬（下段）

と、変異を入れていない従来の Tetramer 試薬（上段）で、特異性に明らかな違いがあることが分かります。

T-Select HLA class I Tetramer は、HLA class I heavy chain α3 ドメインに変異を入れ、CD8 分子との非特異的な結

合を最小限に抑えることで、特異性が飛躍的に向上しています。

French Application Number； FR9911133


染色例 2：HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer

HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より PBMC を分離

し、 MLPC 法にて誘導した EBV BRLF1 CTL line を、

HLA α3 ドメインに変異を入れた HLA-A*24:02 EBV

BRLF1 Tetramer-PE (MBL code no. TS-M002-1) と

HLA-A*24:02 Negative Tetramer-PE (MBL code no.

TS-M007-1)、HLA α3 ドメインに変異を入れていない

HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE にて染色しま

した。その結果、 HLA α3 ドメインに変異を入れていない

Tetramer では、CD8 陽性細胞に非特異的な染色が見られま

した。HLA α3 ドメインに変異を入れた Tetramer では、非

特異染色は見られませんでした。

※ 本データはリンパ球ゲートかつ 7-AAD 陰性ゲートで解析を行いました。

T-Select MHC Tetramer染色方法

■全血の場合1）ヘパリン採血管にて静脈血を採取します。

2） 200 mL の全血に 10 mL の T-Select MHC Tetramer-PE を加えます。

3）ゆっくりとボルテックスをかけます。

4）室温で 20 分間、あるいは 4℃で 30 分間インキュべーションします。

5） CD8 抗体等を加え、室温で 20 分間、あるいは 4℃で 30 分間インキュべーションします。

6） OptiLyse C （MBL code no. A11895, Beckman Coulter 社製分析機器用）、

　もしくは OptiLyse B （MBL code no. IM-1400, BD Biosciences 社製分析機器用）

　を用いて溶血・固定処理します。各々の説明書にて推奨の手順に従ってください。

7）溶血・固定プロトコールの最終ステップ後、適量の PBS を加えて再懸濁します。

8） 400 x g で 5 分間遠心します。

9）上清を注意深く捨て、細胞を 500 mL の PBS に再懸濁します。

* サンプルは暗室にて 4℃で保管し、24 時間以内に分析してください。

★ 溶血処理が不十分な場合、赤血球の乱反射による非特異的染色像が観察される

　ことがあります。CD45 を同時染色してリンパ球ゲートで解析してください。

CD45 染色により赤血球の乱反射をゲートアウト

することで、ノイズを低減することができました

（右図）。

CD8(T8)-FITC

α3 ドメイン変異あり α3 ドメイン変異なしNegative Tetramer

EBV BRLF1 Tetramer

Tetramer-PE

採血

200 μL whole blood

試薬添加・インキュベーション

MHC Tetramer-PE 10 μLCD8-FITC 20 μL

PBSに懸濁

フローサイトメーターによる解析

溶血固定処理

HLA-A*24:02BRLF1

HLA-A*24:02Negative

リンパ球ゲートのみ

リンパ球ゲートand

CD45陽性ゲート

Tetramer-PE

CD8(T8)-FITC

リンパ球ゲート CD45陽性ゲート

SSC-H

FSC-H CD45-PC5


■ Human PBMC, Mouse Splenocyte の場合1）定法に従って細胞を調製し、1×106-7 cells/mL の濃度にて、

　細胞を再懸濁します。

2）50 mL の細胞懸濁液に 10 mL の Clear Back（MBL code no.

　 MTG-001）を加え、室温にて 5 分間反応させてください。

3）10 mL の T-Select MHC Tetramer-PE を加えます。

4）室温で 20 分間、あるいは 4℃で 30 分間インキュべーションします。

5）CD8 抗体等を加え、4℃で 20 分間インキュべーションします。

6）適量の FCM buffer [2% FCS/0.05% NaN3/PBS] を加え 400 x g で

　 5 分間遠心します。

7）上清を注意深く捨てます。

8）細胞を 500 mL の FCM buffer もしくは 0.5% パラフォルムアルデ

ヒド /PBS に再懸濁します。

* サンプルは暗室にて 4℃で保管し、24 時間以内に分析してください。

注 1）

・ Human CD8 抗体は、クローン SFCI21Thy2D3（通称 T8）（MBL code no. 6603861）

のご使用を強く推奨します。他クローンの場合、TCR とテトラマー試薬の結合を阻害または

増長する可能性があります。

・ Mouse CD8 抗体は、クローン KT15 （MBL code no. D271-4）のご使用を強く推奨します。

他クローンの場合、TCR とテトラマー試薬の結合を阻害または増長する可能性があります。

・先にテトラマー試薬で染色後、続けて CD8 にて染色を行うと、染色性が良くなることがあり

ます。

・ご使用になるテトラマー試薬の特異性を判断するために、Negative Control Tetramer と、可

能ならば Positive Control Tetramer を同時に染色することをお勧めします。

注 2）

・培養した場合は、7-AAD Viability Dye （死細胞検出試薬 , MBL code no. A07704）を加え、

　FSC/FL3 のドットプロット展開より、死細胞を除去して解析してください。

Human CD8抗体のクローンによる染色性の違い

HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より分離した PBMC を、HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE (MBL code no.

TS-M002-1) もしくは HLA-A*24:02 Negative Tetramer-PE (MBL code no. TS-M007-1) と、Human CD8 抗体の 3

種類のクローン（T8, SK1, B9.11）を用いて同時染色しました。

その結果、クローン T8 では特異的 CTL がス

ポットで検出されましたが、SK1 と B9.11 で

はばらつきが大きくなる傾向がありました。

< 参考文献 >

Rita C. et al., Int. Immunol. 14: 39 − 44 (2002)

細胞の洗浄 (2% FCS/0.05% NaN3/PBS)

洗浄

細胞

ブロッキング処理

Clear Back (Human FcR blocking reagent)

試薬添加注1)

T-Select MHC Tetramer-PE 10 μL CD8-FITC 20 μL

室温で15－30分あるいは4℃で30－60分反応

フローサイトメーターによる解析注2)

T8 (推奨) SK1

CD8-FITC

B9.11

HLA-A*24:02 EBV BRLF1Tetramer-PE

HLA-A*24:02 NegativeTetramer-PE


MHC TetramerはCTLの特異性を直接認識します

MHC Tetramer が開発される前までは、サイトカインの

産生や細胞傷害性活性などで、間接的に特異的 CTL を測定

していました。しかし、MHC Tetramer が開発されて初めて、

TCR の立体構造上の特徴、つまり CTL の特異性を直接的に

捉えることができるようになりました。

末梢血を用いた細胞傷害性T細胞の誘導 [MLPC法(modified by MBL)]

T-Select MHC Tetramer は、ウィルス抗原特異的、あるいはがん抗原特異的 CTL の検出用試薬として用いられています。

しかしながら、ウィルス抗原と異なり、がん抗原特異的 CTL の数は非常に少なく、採血直後に検出することが非常に難しい

場合が多いと考えられます。そこで、短期間のペプチド刺激培養後に、がん抗原特異的 CTL の血中頻度を算出する方法とし

て考案されたのが 96-well plate を利用した MLPC 法 (Mixed Lymphocyte-Peptide Cultures) です。メラノーマ患者に対

するワクチン療法の結果、患者末梢血中の特異的 CTL 数が増加することを MLPC 法で確認した Karaniks らの論文（J.

Immunol, 2003, 171:4898）を参考に、MBL にて方法を改良し、より簡便に、より経済的に、健常人末梢血からがん抗

原特異的 CTL を誘導する方法を考案しました。

採　　血 ● ヘパリンナトリウム以外の抗凝固剤の使用は避けてください。採血後は、採血管をよく倒立攪拌してください。

● 直ちに処理できない場合は、室温にて静置してください。

血漿分離 ● 分離した血漿は、再度低速遠心後、小分けして− 30℃に保存し、凍結融解を繰り返さないようにしてください。

培養条件 ● 培養 medium: 5% autoplasma/50 U/mL IL-2/2-ME/antibiotics/RPMI1640

● 抗原ペプチドを 10 mg/mL 加えて、96-well U-bottom plate にマルチピペッターを用いて 100 mL/well でまき込みます。48 時間後に IL-2 入りの　 medium を 100 mL/well ずつ加えます。その後は medium の色を目安に最初の１週間は 1 回程度、次の１週間は 2 ～ 3 日毎に medium を半量ずつ　交換します。加えるペプチドと IL-2 の濃度は至適化されていません。ペプチド濃度はペプチドの溶解度や BIMAS 等のスコアを参考に、至適条件の　検討が必要です。

抗原刺激 ● ウィルス抗原特異的 CTL を誘導する際は、チューブを用いての MLPC 法で可能な場合が多いですが、がん抗原特異的 CTL を誘導する際は、その存

　在頻度が低いため、次に示す 96-well plate を利用した MLPC 法をお勧めします。

CTL

直接的

サイトカイン

間接的細胞傷害性活性

ヘパリン加血液血漿分離

遠心室温

3,000 rpm10 min.

血球2倍希釈

リンパ球分離抗原による刺激

がん抗原

12-15日培養

ウイルス抗原

数時間-15日培養

Tetramer染色

遠心室温

CD8

Tetra

mer

96 well plate

未刺激時(day 0) の解析


がん抗原WT1(変異型) 特異的CTLの誘導と検出

がん抗原 WT1 を例にして、96-well MLPC 法の手順を以下に示しました。HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より PBMC

を分離し、96-well MLPC 法にて WT1（mutant）特異的 CTL を誘導しました。ペプチド刺激後、14 日目に T-Select

WT1（mutant) Tetramer（MBL code no. TS-M014-1）で染色を行いました。まず 96-well plate の 1 つのレーン毎にサ

ンプルをプール（8 well 分）し、12 プールをそれぞれ染色しました。次に、テトラマー陽性細胞が検出されたレーンから

1well ずつサンプリングを行い、テトラマー試薬で染色して特異的 CTL の存在している well を同定しました。これらの陽性

well 数より、以下の計算式を用いて、特異的 CTL の採血時における存在頻度を算出しました。

リンパ球分離抗原による刺激解　析

CTL存在頻度の算出

12-15日培養

5%自己血漿抗原ペプチド

96 well plate

1.レーン毎にサンプルをプールし染色

2.ポジティブレーンについて各サンプルを染色

未刺激時(day 0) の解析

IL-2

day 2

リンパ球1-3x105 cells/well

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

ABCDEFGH

0.04 0.02

64.6 35.4

0.02 0.36

64.2 35.4

0.02 0.36

64.2 35.4

0.06 2.74

61.6 35.6

0.06 2.74

61.6 35.6

0.01 0.23

61.6 39.2

0.01 0.23

61.6 39.2

CD8

WT1(mutant)

Tetramer

(テトラマー陽性well数)

: テトラマー陽性well

(細胞数/well) x (総well数) x (day0のCD8陽性率)

2= =2 x 105 x 96 x 0.352.98 x 10-7 of whole blood CD8 T cell

96個のwellのうち2個のwellでテトラマー陽性細胞が確認されました。従って、採血時には、WT1特異的CTLは使用した細胞中に2個存在したという判定になります。採血時のCD8陽性細胞数で割ることで、存在頻度として算出されます。

血漿分離前の採血管


がん抗原survivin-2B特異的CTLの検出

サバイビン（survivin）は、アポトーシスを抑制する IAP

（inhibitor of apoptosis）ファミリーに属する分子で、正

常細胞では非常に低いレベルで発現が認められています。

survivin のスプライスバリアントのひとつである survivin-

2B は、胸腺以外の正常組織では発現が認められませんが、

さまざまながん細胞で高発現していることが報告されてい

ます。札幌医科大学佐藤らが同定した survivin-2B 80-88

エピトープは正常組織で発現している survivin には存在し

ない配列であることから、がん免疫療法における理想的な

標的と考えられています。既に国内では札幌医科大学を中

心に、このエピトープを用いた臨床試験が進められています。

染色例：HLA-A*24:02 survivin-2B Tetramer-PE

染色例：HLA-A*24:02 Negative Tetramer-FITC/survivin-2B Tetramer-PE の 2 重染色

がん抗原では特に、染色可能なサンプル量が限られている場合があります。希少なサンプルを有効に利用したいとの御要望により、

HLA-A*02:01 および HLA-A*24:02 の Negative Tetramer-FITC をラインナップしております。PE もしくは APC 標識された目的の

Tetramer 試薬と、この FITC 標識の Negative Tetramer を 2 重染色することで、細胞が目的のテトラマー試薬特異的に染色されているこ

とを 1 本のサンプルで確認できます。

exon 1 exon 2 exon 3 exon 4survivin

survivin-2B

142 aa

165 aa

EPDDDPI-----------------------EEHKKHSSGEPDDDPIGPGTVAYACNTSTLGGRGGRITREEHKKHSSG

exon 1 exon 2 exon 2B exon 3 exon 4

survivin-2B 80-88

データ提供：北海道公立大学法人札幌医科大学病理学第一講座鳥越俊彦先生、佐藤昇志先生

HLA-A*24:02survivin-2B CTL clone 1 CTL clone 2

CD8-FITC

HLA-A*24:02HIV (Negative)

Tetramer-PE

CD8-FITC

HLA-A*24:02 Survivin-2B

Tetramer-PE

Sample: survivin-2Bペプチドにて刺激培養したリンパ球 Sample: survivin-2B CTL clone

1.29% 0.05%

データ提供：北海道公立大学法人札幌医科大学病理学第一講座鳥越俊彦先生、佐藤昇志先生

HLA-A*24:02Negative Tetramer-FITC

HLA-A*24:02 survivin-2B

Tetramer-PE

HLA-A*24:02 survivin-2BTetramer-PE

CD8-PC5

CD8陽性細胞集団をゲーティングして解析

以下の試薬で染色を行いました。・HLA-A*24:02 Negative Tetramer-FITC・HLA-A*24:02 survivin-2B Tetramer-PE・CD8-PC5

1.61%

例：1x106個/sampleを染色に使用する場合

NegativeTetramer-PE

目的のTetramer-PE

NegativeTetramer-FITC

目的のTetramer-PE

目的のTetramer用、Negative Tetramer用で、計2x106個の細胞が必要です。

目的のTetramerとNegative Tetramerが同時に染色できるので1x106個の細胞で解析可能です。

TS-M027-3　T-Select HLA-A*02:01 HIV gag Tetramer-SLYNTVATL-FITCTS-M007-3　T-Select HLA-A*24:02 HIV env Tetramer-RYLRDQQLL-FITC

survivin-2B80-88 の参考文献

1) Hirohashi Y, et al., Clin. Cancer Res. 8: 1731−1739 (2002)2) Tsuruma T, et al., J Transl Med. 2: 19 −29 (2004)3) Idenoue S, et al., Clin. Cancer Res. 11: 1474 −1482 (2005)4) Kurotaki T, et al., J. Immunol. 179: 1803 −1813 (2007)5) Tsuruma T, et al., J Transl Med. 6: 24 − 34 (2008)


がん関連 T-Select MHC Tetramerによる染色例

染色例：HLA-A*24:02 WT1 Tetramer

HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より PBMC を分離

し、MLPC 法にて WT1 (mutant) 特異的 CTL を誘導してテ

トラマー試薬により染色しました。図は左から、T-Select

HLA-A*24:02 Negative Tetramer, HLA-A*24:02 WT1

(wild) Tetramer, HLA-A*24:02 WT1 (mutant) Tetramer に

よる染色像です。右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー

陽性細胞率 (%) を示します。

染色例：がん抗原 Tetramer 試薬

健常人末梢血より PBMC を分離し、MLPC 法にてがん

抗原特異的 CTL を誘導してテトラマー試薬により染色し

ました。右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性

細胞率 (%) を示します。

ウィルス・感染症関連 T-Select MHC Tetramerによる染色例

■ EBV

染色例：HLA-A* 24:02 EBV Tetramer

FSC-H

SSC-H

7-AAD

A*24:02 Negative(TS-M007-1)

A*24:02 WT1 (mutant)(TS-M014-1)

A*24:02 WT1 (wild)

CD8 (T8)-FITCTetramer-PE

1.1 %0.0 % 1.0 %

10.6 %51.151.1 %51.1 % 7.78 %

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE

HLA-A*24:02 WT1(mutant)(TS-M014-1)

HLA-A*24:02 hTERT(TS-M010-1)

HLA-A*02:01 NY-ESO-1(TS-M011-1)

T-Select HLA-A*24:02 EBV Tetramer には、5 種類のエピ

トープに対する試薬がラインナップされています（下段）。そして、

T-Select HLA-A*24:02 EBV mix Tetramer (MBL code no. TS-

M009-1, 上段左 ) にはこれら 5 種類の試薬がミックスされており、

1 本の試薬で 5 種類の EBV 特異的 CTL が染色できます。各エピトー

プの反応性には個人差があり、EBV mix で検出された陽性像がどの

エピトープに由来するものかは、5 種類のテトラマーで染色するこ

とにより知ることができます。

（）の数字は HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血で、採血直後に

各テトラマーにより陽性が検出された人数を示します。（陽性検出

者数 / 検討者総数）

EBV mix Negative

EBV BRLF1(7/13)

EBV EBNA3A(5/13)

EBV EBNA3B(3/13)

EBV BMLF1(3/13)

EBV LMP2(2/13)

0.00 %

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE

0.00 %0.01 % 0.01 %0.06 %

0.25 %

0.17 %


■ CMV

染色例：HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer

HLA-A2 陽性健常人末梢血より PBMC を

分離し、直後に T-Select HLA-A*02:01

CMV pp65 Tetramer (MBL code no.

TS-0010-1) による染色を行いました。

TS-0010-1 は HLA-A*02:01 のほ

か、HLA-A*02:06 にも反応しましたが、

HLA-A*02:07 には反応しませんでした。

右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー

陽性細胞率 (%) を示します。

< 参考文献 >

Morita Y, et al., Bone Marrow Transplant 36: 803 − 811 (2005)

染色例：HLA-A*24:02 CMV pp65 Tetramer

HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より PBMC を分離し、

直後に T-Select HLA-A*24:02 CMV pp65 Tetramer

(MBL code no. TS-0020-1) による染色を行いました。

右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞率

(%) を示します。HLA-A*24:02 の場合、採血直後は特異

的 CTL が検出されないケースもあります。陽性率には個

人差がありますが、おおむね HLA-A*02:01 CMV pp65

と比較して低い傾向があります。しかし、下図に示す通り、

MLPC 法で誘導することにより CMV 特異的 CTL を検出す

ることが可能です。

染色例：HLA-A*24:02 CMV pp65 特異的 CTL の誘導と Tetramer 染色

HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血より PBMC を分離し、MLPC 法にて HLA-A*24:02 CMV pp65 特異的 CTL を誘導して経時的にテト

ラマー試薬で染色しました。その結果、採血直後はテトラマー陽性率が 0% であった PBMC から、約 1 週間の培養により明らかな陽性像

を得ることができました。この方法を用いることで、検討した 10 名の HLA-A*24:02 陽性健常人末梢血から CMV 特異的 CTL の誘導が確

認できました。右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞率 (%) を示します。

Donor 4 Donor 8Donor 6


A*02:07A*02:06A*02:01

0.00 %6.64 % 3.33 %

0.00 %0.01 %0.17 %

CD8（T8）-FITC

Tetramer-PE


0.00 %0.02 % 0.01 %

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE

Day 0 Day 8 Day 11 Day 14

20.3 %0.00 % 1.37 % 31.9 %31.9 %

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE


染色例：HLA-A*11:01, HLA-B*15:01 CMV pp65 Tetramer

HLA-A*11:01 または HLA-B*15:01 陽性

健常人末梢血より PBMC を分離し、直後に

HLA-A*11:01 CMV pp65 Tetramer (MBL

code no. TS-M012-1) および HLA-B*15:01

CMV pp65 Tetramer (MBL code no. TS-

M013-1) にてそれぞれ染色を行いました。右上

の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞

率（%）を示します。

MLPC 法にて CMV pp65 特異的 CTL を誘導

して 14 日目に各 Tetramer 試薬で染色を行いま

した。その結果、採血直後はテトラマー陽性率が

0.01 および 0.06% であった PBMC から、約 2

週間の培養により明らかな陽性像を得ることがで

きました。

■ Influenza M1

染色例：HLA-A*02:01 Influenza M1 Tetramer

HLA-A2 陽性健常人末梢血より PBMC を分離し、直後に T-Select HLA-A*02:01 Influenza M1 Tetramer (MBL code no.

TS-0012-1) による染色を行いました。TS-0012-1 は HLA-A*02:01 のほか、HLA-A*02:06、HLA-A*02:07 に反応しました。

右上の数値は CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞率 (%) を示します。

day 0 day 14

HLA-B*15:01CMV pp65 Tetramer-PE

(TS-M013-1)

Tetramer-PE

0.01%

0.06%

12.3%

52.5%

HLA-A*11:01CMV pp65 Tetramer-PE

(TS-M012-1)

CD8 (T8)-FITC

A(HLA-A*02:01)

B(HLA-A*02:01 /HLA-A*02:06)

C(HLA-A*02:06)

D(HLA-A*02:07)

HLA-A*02:01Influenza M1 Tetramer-PE

NegativeTetramer-PE

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE

0.00 % 0.01 %0.01 %0.01 %

0.19 % 0.06 %0.43 %0.12 %


■ HTLV-1

染色例：HTLV-1 Tetramer

HTLV-1 （Human T-cell leukemia virus type 1）は、T 細胞に感染して成人 T 細胞白血病 (ATLL) や HTLV-1 関連脊髄症 (HAM/TSP) を

引き起こすことが知られており、HTLV-1 感染者の多さと、関連疾患発症後における症状の重篤性から、非常に注目されているウィルスの

ひとつです。HTLV-1 感染とそれに対する CTL を中心とした宿主免疫応答は、関連疾患の発症と深い関わりがあると考えられています。日

本の研究者は HTLV-1 特異的な CTL エピトープの同定において先駆的な役割を果たしてきました 1)-3)。鹿児島大学のグループは、16 種

類の Tetramer 試薬を用いて、ATLL では HTLV-1 Tax 特異的 CTL の多様性と数が減少しており 4)-5)、HAM/TSP では HTLV-1 Env 特異的

CTL の多様性と数が増加していることを明らかにしました 6) 。

Frequency of HTLV-1-specific CTLs positivity in asymptomatic HTLV-1 carriers (AC),ATLL, HAM/TSP and carriers with autoimmune diseases

A*02:01A*02:01A*02:01A*02:01A*02:01A*02:01A*02:01A*02:01A*24:02A*24:02A*24:02A*24:02A*24:02A*24:02A*24:02A*24:02Tax CTL positivesEnv CTL positivesTotal CTL positives

Tax11-19Tax123-131Tax155-163Tax178-186Tax307-315Env175-183Env239-247Env442-450Tax12-20Tax187-195Tax289-297Tax301-309Tax311-319Env11-19Env21-29Env153-161

73%9%0%9%9%0%0%0%

11%11%0%

94%0%6%0%0%

22%1%

14%

(8/11)(1/11)(0/11)(1/11)(1/11)(0/11)(0/11)(0/11)(2/18)(2/18)(0/18)(17/18)(0/18)(1/18)(0/18)(0/18)(32/145)(1/87)(33/232)

(3/9)(0/9)(0/9)(0/9)(0/9)(0/9)(0/9)(0/9)(0/22)(0/22)(0/22)(12/22)(0/22)(0/22)(0/22)(0/22)(15/155)(0/93)(15/248)

(9/10)(2/10)(1/10)(2/10)(0/10)(0/10)(1/10)(0/10)(2/15)(1/15)(2/15)(13/15)(1/15)(6/15)(2/15)(2/15)(33/125)(11/75)(44/200)

(6/11)(5/11)(0/11)(2/11)(0/11)(1/11)(2/11)(2/11)(4/17)(3/17)(3/17)(13/17)(1/17)(8/17)(6/17)(4/17)(37/140)(23/84)(60/224)

33%0%0%0%0%0%0%0%0%0%0%

55%0%0%0%0%

10%0%6%

90%20%10%20%0%0%

10%0%

13%7%

13%87%7%

40%13%13%26%15%22%

55%45%0%

18%0%9%

18%18%24%18%18%76%6%

47%35%24%26%27%27%

(The number of subjects with detectable CTLs / tetramers tested)

allele Tetramers AC ATLL HAM/TSPAC with

autoimmune diseases

CD8 (T8)-FITC

Tetramer-PE

CD8(T8)-FITC

Tetramer-PE

Tax301-309(TS-M018-1)

Tax12-20(TS-M020-1)

Tax187-195(TS-M021-1)

HLA-A*24:02 HTLV-1 HLA-A*02:01 HTLV-1

データ提供：国立大学法人鹿児島大学大学院医歯学総合研究科　難治ウイルス病態制御研究センター血液・免疫疾患研究分野有馬直道先生

福岡大学薬学部生化学・病態生化学教室小迫知弘先生

データ提供：東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科生体環境応答学系感染応答学講座免疫治療学分野神奈木真理先生

Env11-19(TS-M022-1)

Tax11-19(TS-M017-1)

Tax178-186(TS-M019-1)

HLA-A*11:01HTLV-1 Tax88-96(TS-M023-1)

HLA-A*11:01HTLV-1 Tax272-280(TS-M024-1)

参考文献：

1) Kannagi M, et al., J. Virol. 66: 2928-2933 (1992)2) Yashiki S, et al., AIDS Res Hum Retroviruses 17: 1047-1061 (2001)3) Harashima N, et al., J. Virol. 79: 10088-10092 (2005)4) Kozako T, et al., J. Immunol. 177: 5718-5726 (2006) 5) Akimoto M, et al., J. Med. Virol. 79: 977-986 (2007)6) Kozako T, et al., J. Med. Virol. 83: 501-509 (2011)


抗原特異的CTLの各種測定方法とMBL Kits

MBL では、テトラマー試薬だけでなく、抗原特異的な CTL の活性を検出するためのキットも取り揃えています。

テトラマー試薬と併用すれば、抗原特異的で、かつ活性化状態にある CTL を検出することができます。

■ IMMUNOCYTO CD107a Detection Kit抗原刺激により活性化した CTL は、細胞内顆粒中に含まれるパーフォリン、グランザイムなどの細胞傷害因子を放出し

ます。これに伴い、細胞内顆粒内膜に存在する CD107a (LAMP-1) などが細胞膜上に表出します。従って、細胞表面上に

表出した CD107 分子を検出することで、細胞傷害因子の放出を間接的に調べることができます。

IMMUNOCYTO CD107a Detection Kit (MBL code no. 4844) では、CD107a mobilization assay により、CTL によ

る細胞傷害性因子の放出を間接的に測定することができます。Intracellular IFN-γ assay と比べて短時間で実施できますが、

感度はやや低いと思われます。しかしながら、新規 CTL エピトープ同定の研究の場合、CD107a mobilization assay の方が、

IFN-γ 測定系と比較して、Tetramer 染色と非常に良く相関する事が社内検討で分かりました。

ELISPOT assay

(-)

T-Select MHC Tetramer

CD8

Tetramer

CD107a mobilization assay

CD107a

CD8

Intracellular IFN-γ stain

IFN-γ

CD8

CFSE

Annexin V-KO

7.79 % 85.84 %

Cytotoxity detection assay

1 %

CD107a CD107a

Tetramer X

Tetramer Y

stimulation

controlpeptide

35 %

0 %100 %99 %

11 % 89 % 65 %

cognatepeptide


■ IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit ※ 本キットには、CFSE は含まれておりません。

ウィルス感染細胞や腫瘍細胞などの細胞（Target 細胞）は、細胞傷害性活性を持つ T 細胞や NK 細胞（Effector 細胞）に

より直接認識され、傷害が起こります。細胞傷害性活性を測定する方法として、一般的には 51Cr 遊離試験（クロムリリー

スアッセイ）が広く利用されています。しかし、放射性同位元素（RI）を使用するため、使用には一定の制限があります。

そこで、RI を用いないで、細胞傷害性活性を測定するための方法（Non-RI 法）が考案されています。

IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit （MBL code no. AM-1005）は、Target 細胞を CFSE と Kusabira-Orange 標

識 Annexin V で二重染色し、フローサトメトリーによって細胞傷害性活性を測定する試薬です。CFSE 染色された Target

細胞のうち、Annexin V 染色された細胞の割合、つまり死細胞の割合で、Effector 細胞の細胞傷害性活性を測定します。

Effector 細胞は CFSE で染色されていないため、フローサイトメトリーにより簡便に区別して解析することができます。こ

の方法は、クロムリリースアッセイと高い相関性が報告されており、RI を使用せずに細胞傷害性活性を測定できる方法とし

て利用されています。

Annexin V によるアポトーシス検出の原理

脂質二重層の内側に存在している phosphatidylserine

(PS) は、アポトーシスをおこした細胞では、膜構造の変化

により細胞表面に露出します（右図）。Annexin V は Ca2+

存在下で PS に対して強い親和性をもつため、アポトーシス

細胞に結合します。蛍光標識した Annexin V を用いる事で、

Effector 細胞により傷害された Target 細胞をフローサイ

トメトリーにて検出することができます。 IMMUNOCYTO

Cytotoxity Detection Kit には、蛍光蛋白質 Kusabira-

Orange（KO; Excitation Max 548 nm/Emission Max

559 nm）標識した Annexin V が含まれています。

フローサイトメトリーによるデータ解析

右図は、IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit を用

いて細胞傷害性活性を解析したデータです。Effector 細胞

(E)、Target 細胞 (T) は図の下に示した通りです。

Killing が起こると、CFSE 陽性である Target 細胞が

Annexin V 陽性になることが分かります。この数値 (%)

を用いて、細胞傷害性活性を下記の式を用いて数値化する

ことができます。

Cytotoxity(%)=[(ET-T0)/(100-T0)]×100　ET: Effector 細胞と Target 細胞を共培養したときの、　　　CFSE+ Annexin V+ 細胞の割合 (%)　T0: Target 細胞のみを培養したときの、　　　CFSE+ Annexin V+ 細胞の割合 (%)

　

細胞傷害性活性を示すグラフ

HLA-A*24:02 CMV pp65 CTL line による

細胞傷害性活性のグラフ 2 例を右に示します。

データは、＜フローサイトメトリーによるデー

タ解析＞に記載した解析方法で解析しました。

生細胞アポトーシス初期細胞

生細胞のPSは細胞表面に露出していな

いので、Annexin Vとは結合しません。

アポトーシスを起こした細胞では、膜

構造が壊れ、PSが細胞表面に露出して、

Annexin Vと結合します。

Annexin VKO

Annexin VCa2+

Ca2+

Ca2+PS

PS

Ca2+

Annexin V

KO

Annexin V

KO

KO

Cytotoxity: 84.64%

E:T=0:1 E:T=1:4

CFSE

CFSE

FSC-H

Annexin V-KO

Cytotoxity: 0.32%

E:T=0:1 E:T=1:4

CFSE

CFSE

FSC-H

Annexin V-KO

E: A*24:02 EBV BRLF1 CTL lineT: BRLF1 peptide pulsed HLA-A24 LCL

E: A*24:02 EBV BRLF1 CTL lineT: HLA-A2 LCL

7.79 % 85.84 % 8.43 % 8.72 %7.79 % 85.84 % 8.43 % 8.72 %

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100(%)

1:4 1:2 1:1

peptide (+)peptide ( - )

E:T ratio E:T ratio

0

10

20

30

40

50

60

70

HLA-A*24:02 (CMV)HLA-A*24:02 (HIV)HLA-A*02:01 (CMV)

1:2 1:1 2:1

(%)

<グラフ1>

Effector cells: HLA-A*24:02 CMV pp65 CTL lineTarget cells: OKT3刺激で非特異的に増殖させた HLA-A*24:02 auto PBMC line

<グラフ2>

Effector cells: HLA-A*24:02 CMV pp65 CTL lineTarget cells: 図中に示す各alleleのLCL( )内はパルスしたpeptideの種類


■ IMMUNOCYTO IFN-γ ELISPOT KitIFN-γ は、炎症性免疫反応の調節に関与するサイトカインで、主に活性化 CD8+T 細胞、CD4+T

細胞、NK 細胞などによって分泌されます。IFN-γ の測定は免疫応答の評価に広く使用されており、

ELISPOT 法は、IFN-γ 放出細胞数をスポットとして検出して定量できます。右図は HLA-A*24:02

拘束性 CMV pp65 CTL line を、エピトープペプチド (QYDPVAALF) で、刺激した場合としていな

い場合のデータです。

■ T-Select MHC IFN-γ KitIFN-γ の産生は CTL の活性を反映する指標のひとつとして広く知られており、ELISA、ELISPOT、FCM などのアプリケーションを用い

て測定されます。しかし、IFN-γ は様々な免疫細胞から産生されることから、CTL 由来の IFN-γ 産生であることを示すのは困難です。

T-Select MHC IFN-γ Kit (MBL code no. TS-8005) は、Intracellular IFN-γ assay により、細胞内で産生された IFN-γ を染色し、フロー

サイトメトリーにより検出できます。テトラマー試薬と同時染色することにより、抗原特異的かつ IFN-γ 産生 CTL を検出することが可能

です。

■ T-Select Antibody Gating Kit健常人全血を用いて T-Select HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer-PE (MBL code no. TS-0010-1) と T-Select Antibody Gating Kit

(MBL code no. TS-9004) による三重染色を行い、CD8 陽性 CTL の測定をフローサイトメトリー（EPICS XL-MCL を使用）にて行いました。

1）CD4, CD13, CD19 がいずれも陰性の細胞分画にゲートをかけます (Gate A)。

2）Gate A 内の細胞集団を FSC と SSC の二次元に展開して生細胞分画にゲートをか

け (Gate B)、死細胞、細胞の残骸を測定対象から外します。

3）Gate B 内の細胞集団を FSC と CD8-FITC の二次元に展開し、CD8 陽性細胞分画

にゲートをかけます (Gate C)。

4）Gate C 内の細胞集団を MHC Tetramer-PE と CD8-FITC の二次元に展開します。

CD8 陽性細胞集団のうち、蛍光強度 (CD8-FITC) の高い細胞集団において、CMV

特異的 CTL が検出されました (Gate D)。

T-Select Antibody Gating Kit 構成品（100 tests, MBL code no. TS-9004）

Anti-CD4-PC5 （clone 13B8.2） 100 tests ×1

Anti-CD13-PC5 （clone IMMU103.44） 100 tests ×1

Anti-CD19-PC5 （clone J4.119） 100 tests ×1

Anti-CD8-FITC （clone SFCI21Thy2D3） 50 tests ×2

2.5 5.0 10

未刺激細胞

刺激細胞

×104 cells/well

Tetramer-PE

D1: tetramer 陽性 IFN-γ 陰性

[抗原特異的であるが、機能的には不活性の状態にあるCTL]

D2: tetramer 陽性 IFN-γ 陽性

[抗原特異的かつ、活性化の状態にあるCTL]

IFN-γ FITC

SSC

SSC

(CD4, CD13, CD19)-PC5

A

B

C D

FSC

FSC

CD8-FITC

MHC Tetramer-PE

CD8-FITC


MHC Tetramer関連製品

■ 抗 HLA 抗体による HLA 型簡易判定テトラマー試薬の使用には、検体の HLA ジェノタイプを判定することが不可欠で

す。採血時に HLA タイプの分からない検体でも、HLA ジェノタイピングの前に抗

HLA 抗体を用いて HLA の血清タイプを暫定的に判定可能です。続けて、HLA-A24

陽性の場合は EBV mix Tetramer で、HLA-A2 陽性の場合は CMV pp65 Tetramer

で染色することで、より可能性を高めることができます。ただし、抗体による判定は

あくまでも推定ですので、必ず任意の機関でHLAのジェノタイピングを行ってください。

※HLA-A24 抗体による HLA タイピングに関する注意事項

・HLA-A24 抗体（クローン 17A10, 22E1）は、HLA-B27 と交差反応性が確認されています。

但し、HLA-B27 の頻度は、日本人では非常に少ないことが知られています。

・HLA-A24 抗体（クローン 17A10, 22E1）は、いずれも HLA-B27 以外の何らかの HLA と交

差反応していますが、いまだ特定にはいたっておりません。

・MBL 社内検討では、A24 抗体陽性検体の約 2 割が HLA-A*24:02 陰性でした。HLA-A24 抗

体陰性検体で HLA-A*24:02 陽性の検体は現在のところ確認されていません。HLA タイプ間の

違いは数アミノ酸であることが多く、立体構造が類似していると、そのわずかな違いを抗体で

検出するには限界があります。必ず HLA ジェノタイピングを実施してください。

■ Clear Back （Human FcR blocking reagent） -Tetramer 染色の Blocking 試薬 -Clear Back（MBL code no. MTG-001）は、フローサイトメトリーや蛍光顕微鏡を用いた蛍光抗体法において、非特異反応を抑制する

試薬として開発されました。下図左に示す通り、単球領域ではこの試薬を用いる事により顕著に非特異反応が抑制されます。Tetramer 試

薬を用いて非常に頻度の低い細胞集団を検出する場合、この様な非特異的な染色を抑制する事は重要なポイントになります。Clear Back は、

マクロファージや樹状細胞などの抗原提示細胞によるエンドサイトーシスを抑制する効果もあり、ヒトだけでなくマウスサンプルにおいて

も効果的に使用できます。また使用法も非常に簡便です（5 ページの染色方法をご覧ください）。

下図右は、PBMC を Clear Back 存在下もしくは非存在下で HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer にて染色した図です。テトラマー陽

性 CD8 陰性領域での非特異染色が抑制されていることが分かります。

末梢血単核球における Clear Back の効果末梢血単核球における Clear Back の効果

■ 抗原特異的 CTL 誘導用 peptideMBL では、T-Select MHC Tetramer に使用されているエピトープペプチドを販売しています。ご使用のテトラマーに合ったペプチド配

列をご購入できますので、発注の際の配列ミスの心配がありません。また、溶液状態で納品しますので、MLPC 法にて CTL を誘導する際

に便利です。マウス CTL を誘導するためのペプチド、ヘルパー作用のある抗原ペプチドも各種取り揃えております。製品ラインナップは、

製品リスト（34 ページ）をご覧ください。

Tetramer code Peptide code 濃度容量溶液純度備考

TS-XXXX-1 TS-XXXX-P 10 mg/mL 1 mg (100 mL) DMSO 95%以上* 無菌グレード

* 一部該当しない配列もございます

推定されるHLA型

抗A24抗体(clone 17A10)

抗A2抗体(clone BB7.2)

Donor AA24+/A2+

Donor BA24+/A2-

Donor DA24-/A2-

Donor CA24-/A2+

SSC-H

counts

counts

FSC-H

FL1-H FITC FL1-H FITC

R1

R2

mouse IgG2a-FITC(5 μg/mL)にて反応

赤色：Clear Back処理有り緑色：Clear Back処理無し

リンパ球領域 (R1) 単球領域 (R2)

リンパ球領域 (R1) では、目立った非特異的な染色像は認められませんでした。単球領域 (R2) では、Clear Back 処理により、非特異染色が抑制されました。

Tetramer-PE

CD8 (T8)-FITC

Clear Back あり Clear Back なし

*Clear Back の使用により、CD8陰性、Tetramer陽性領域の非特異的な染色が抑制されました。


抗原特異的マウスCTLの誘導方法

マウスモデルは感染実験、ワクチンの開発、免疫療法の検討など、生体内のさまざ

まな免疫応答の観察に使用されています。

T-Select Mouse MHC Tetramer は、マウスの抗原特異的 CTL を検出することが

できます。MBL 社内検討の結果、次の方法で、より早く、安価で簡単に抗原特異的

CTL を誘導可能であることが分かりました。まず、目的の抗原ペプチドとヘルパー作

用の報告がある抗原ペプチドを混合し、免疫賦活剤とエマルジョン化して腹腔免疫し

ます。最後の免疫から 7-11 日後に脾臓を摘出します。脾細胞はフラスコ内でペプチ

ド刺激して 1 週間培養します。下図にタイムスケジュールを示します。免疫回数は

抗原によって違いますが、社内検討では、1-4 回で抗原特異的 CTL を誘導すること

ができました。個体差がありますので、1 抗原に対して 2 匹以上のマウスを用いるこ

とをお勧めします。詳細は、各テトラマー製品のデータシートをご覧ください。

■ in vitro stimulation による抗原特異的マウス CTL の誘導（インフルエンザウィルス）マウスモデルにおけるインフルエンザウィルスエピトープとそのバリアントの報告は多く、MHC の構造解析や結合力の研究から、ワク

チン開発や CTL クローンを用いた免疫応答の研究など、さまざまな目的に使用されています。ペプチド免疫での CTL 誘導を行う際にも、

CTL の誘導が効率良く行えるため、ペプチド免疫による CTL 誘導に最適な抗原のひとつといえます。in vitro における CTL 誘導データと、

取り扱っておりますマウスインフルエンザテトラマーの情報を一覧にまとめました。

MBL code no. allele epitope Influenza strain Protein aa

TS-M527-P H-2Db A S N E N M D A M Influenza A/NT/60/68(H3N2) nucleoprotein (NP) 366-374

TS-M502-P H-2Db A S N E N M D T M Influenza A/NT/60/68(H3N2) nucleoprotein (NP) 366-374

TS-M508-P H-2Db A S N E N M E T M Influenza A/PR/8/34(H1N1) nucleoprotein (NP) 366-374

TS-M528-P H-2Db S S L E N F R A Y V Influenza A/PR/8/34(H1N1) RNA polymerase α subunit (PA) 224-233

TS-M520-P H-2Kd I Y S T V A S S L Influenza A/PR/8/34(H1N1) hemagglutinin (HA) 533-541

mouse strain

allele

H-2K H-2D H-2L

C57BL/- b b -

BXSB/Mp b b -

129/- b b -

BALB/c d d d

DBA/2 d d d

B10D2 d d d

C3H/He k k -

CBA/N k k -

免疫解剖刺激テトラマーによる染色

antigenic peptide,helper peptide,CFA, PBS

day-10* *boost 後の日数は至適化されていません。

peptideを加えて1週間培養

脾臓摘出

day 0解析

day 7解析

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

FSC-H

7-AAD

SSC-H

H-2Db

Influenza NP(TS-M502-1)

H-2Db


H-2Db


H-2Db

Influenza PA(TS-M528-1)

H-2Kd

Influenza HA(TS-M520-1)

特異的テトラマー試薬

Negative Tetramer

day 0 day 7

3.5%

0.0% 0.0% 0.1% 0.2% 0.2%

12.7% 2.3% 10.6%2.6%

<FSC/SSC展開図>


染色例：H-2Db Influenza NP Tetramer-PE (MBL code no. TS-M502-1)

H-2Db 拘束性 Influenza NP 由来の抗原ペプチド（ASNENMDTM, MBL

code no. TS-M502-P）と、ヘルパー作用の報告がある抗原ペプチド I-Ab

HBc helper peptide （MBL code no. TS-M701-P）を混合し、免疫賦活剤と

エマルジョン化し、C57BL/6 マウスに腹腔免疫しました。11 日後に脾臓を摘

出し、脾細胞を調製後、一部をサンプリングして MHC Tetramer 試薬を用いて

染色しました（day 0）。これらの脾細胞は、in vitro において Influenza NP 由

来の抗原ペプチド (1 mg/mL) で 1 週間刺激培養しました。これを同様に MHC

Tetramer 試薬を用いて染色しました（day 7）。

ドットブロット展開図右上の数字は、CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞

率（%）を示します。FSC/SSC 展開図にてリンパ球領域を R1 とし、7-AAD

陰性細胞領域を R2 としました。この R1 かつ R2 領域にて解析を行いました。

Influenza NP 由来の抗原ペプチド（ASNENMDTM）を免疫したマウスにお

いて、in vitro stimulation により 1.3 ～ 12.7％の Influenza NP 特異的 CTL の

誘導が確認されました。Negative Tetramer (H-2Db human gp100 Tetramer-

KVPRNQDWL-PE, MBL code no. TS-M505-1) を用いた比較染色により、

Influenza NP 特異的 CTL であることが明確に示されました。

※ 各エピトープにおける誘導条件は、各試薬のデータシートをご覧ください。

Mouse MHC class I Tetramerの染色例

MBL では、マウスモデル抗原や腫瘍抗原、ウィルス抗原などに対するテトラマー試薬を販売しています。

以下のデータは全て、ペプチド免疫ののち、in vitro stimulation により誘導した各抗原ペプチド特異的 CTL を、テトラマー試薬で染色し

た図（上段）と、Negative Tetramer で染色した図（下段）です。Negative Tetramer には、それぞれ同じ allele で違うエピトープ配列の

試薬を使用しています。サンプルは、ペプチド刺激後 day 6 のマウス脾細胞です。図中右上の数値は、CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性

細胞率（％）を示します。詳しい情報は各試薬のデータシートをご覧ください。

ウィルス抗原

CD8 (KT15)-FITC

CD8 (KT15)-FITC

stimulation(1 μg/mL peptide)


Negative(TS-M505-1)


<day 0>Mouse A Mouse B

<day 7>

Tetramer-PE

Tetramer-PE

12.7%

0.2%0.3%

1.3%

0.0%0.0%

CD8 (KT15)-FITC CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

Tetramer-PE

H-2Db

LCMV gp33(TS-5002-1)

H-2Db

LCMV gp33 (C9M)(TS-M512-1)

H-2Kb

MuLV p15E(TS-M507-1)

H-2Db

LCMV NP396(TS-M513-1)

H-2Ld

LCMV NP118(TS-M514-1)

H-2Ld

MuLV gp70(TS-M521-1)

LCMV MuLV

15.3%3.3%

0.1%

0.7%

0.1%0.13% 0.2%0.4% 0.0%

2.3%4.3%7.9%


各種ウィルス　

モデル抗原　　　　　　　　　　　　　　　　　　バクテリア抗原

マイナー抗原　　　　　　マウス　がん抗原

H-2Kb

HSV-1 gB(TS-M523-1)

H-2Kb

SeV(TS-M509-1)

H-2Kb

VSV NP(TS-M529-1)

H-2Dd

HIV P8-I10(TS-M516-1)

H-2Dk

polyomavirus MT(TS-M530-1)

H-2Dk

HTLV-1(TS-M531-1)

H-2Kd

RSV(TS-M506-1)

H-2Ld

MCMV IE1(TS-M510-1)

H-2Ld

HBsAg(TS-M522-1)

CD8 (KT15)-FITC

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

Tetramer-PE

17.8% 11.6% 1.6%10.8%3.1%

0.1%

0.9%

0.1% 0.1% 0.1% 0.2%0.39%

0.2%

0.4%0.0%

2.8% 1.3%

4.5%

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

H-2Dd

BCG MPT51(TS-M517-1)

H-2Kd

Malaria Pb9(TS-M515-1)

H-2Kd

Listeria LLO91-99(TS-M503-1)

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

H-2Kb

β-galactosidase(TS-M501-1)

H-2Kd

EGFP(TS-M525-1)

H-2Ld

β-galactosidase(TS-M511-1)

7.2% 1.4%3.7%

0.1%0.1% 0.2%0.3%

2.1%2.0%

0.0% 0.0%

4.4%

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

H-2Db

HY Uty(TS-M524-1)

0.2%

8.3%

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

H-2Kd

HER2(TS-M526-1)

H-2Db

human gp100(TS-M505-1)

H-2Db

CEA(TS-M518-1)

H-2Ld

P815(TS-M519-1)

0.1%0.4%

0.6% 0.9%2.2%5.4%

0.0%0.0%


マウス WT1 Tetramer 特異的 CTL の誘導

Wilms 腫瘍因子 WT1 は、成長因子などの転写を制御する転写因子です。WT1 遺伝子は、白血病や種々の固形癌で高発現しており、その発症、

進行に関与することが知られています。WT1 特異的 CTL は、WT1 発現量の高いがん細胞を傷害し、正常細胞は傷害しないことが示されて

おり、既に WT1 を用いた臨床試験が開始されています。WT1 は免疫療法のターゲット分子として注目されているがん抗原のひとつです。

以下に、C57BL/6 マウス 2 個体におけるペプチド免疫とその後の培養、 in vitro stimulation に伴う H-2Db WT1 Tetramer (MBL code

no. TS-M504-1) 陽性率の推移を示します。図中右上の数値は、CD8 陽性細胞中のテトラマー陽性細胞率 (%) を示します。

がん抗原由来の特異的 CTL を誘導したい場合や、その他の抗原であっても、場合によっては、1 回のペプチド刺激 (in vitro stimulation)

では充分量の Tetramer 陽性細胞を得ることが難しい場合があります。ペプチドで 2 回目の刺激を加えることにより、特異的 CTL を増幅

できる事もありますが、ペプチドが MHC class I 分子に提示され、特異的 CTL が細胞傷害性活性を示すことで、 <day14> に示すように

CD8 陰性細胞のほとんどが激減することが多くなります。また、使用するペプチド濃度が濃い場合は特異的 CTL 同士の殺傷により陽性率

が著しく低下する事もあります。この様な現象を避けたい場合、2 回目のペプチド刺激には、ペプチドをパルスした抗原提示細胞を利用す

ることをお勧めします。

H-2Kb OVA Tetramer

染色例：T-Select H-2Kb OVA Tetramer (TS-5001-1C)

C57BL/6 マウス脾細胞 (2 個体 ) の、T-Select H-2Kb OVA Tetramer (MBL code no. TS-5001-1C) による染色像です。図中右上の数

値はそれぞれ CD8 陽性細胞中の Tetramer 陽性細胞率 (%) を示します。

H-2Kb 拘束性 OVA 由来の抗原ペプチドとヘルパー作用の報告がある抗原ペプチドを混合し、免疫賦活剤とエマルジョン化し、C57BL/6

マウス 2 個体に腹腔免疫しました。10 日後に脾臓を摘出し、脾細胞を調製後、一部をサンプリングして MHC Tetramer 試薬を用いて染色

しました（下図左）。これらの脾細胞は in vitro において OVA ペプチドパルスした別の同種個体の脾細胞と 1 週間混合培養しました。これ

を同様に MHC Tetramer 試薬を用いて染色しました（下図右）。

Negative Tetramer Negative Tetramer Negative TetramerWT1 Tetramer WT1 Tetramer WT1 Tetramer

<day 0>

Mouse 1

Mouse 2

<day 7> <day 14>

CD8 (KT15)-FITC

stimulation

0.1 μg/mLpeptide

stimulation

0.1 μg/mLpeptide

0.0% 0.0% 0.0%

0.0%

0.6%

0.2%0.2%0.1%

0.5%

0.6%

3.2%

4.9%

Mouse 1 Mouse 2 Mouse 1 Mouse 2

CD8 (KT15)-FITC

0.02 %0.03 %

0.01 %0.04 %

7.68 %

0.42 %0.43 %

1.14 %

OVATetramer

NegativeTetramer

1 week


マウス CD8 抗体のクローンによる H-2Kb OVA Tetramer の染色性の違い（OT-I mouse の場合）

OT-I マウス脾臓細胞を、H-2Kb OVA Tetramer-PE (10 mL/sample) と段階希釈した anti-mouse CD8（クローン KT15 もしくはク

ローン 53.6.7）抗体で染色して解析を行いました（反応系：1×106 cells/sample, total 100 mL/sample）。Negative Tetramer として、

H-2Kb β-galactosidase Tetramer-PE (10 mL/sample) を使用して非特異的な反応を調べました。その結果、53.6.7 を用いた場合は OT-I

マウス脾臓細胞中の CD8 陽性細胞は OVA Tetramer でも β-galactosidase Tetramer でも染色されました。53.6.7 を希釈して使用しても、

同じく両方のテトラマーで染色されました。

KT15 を用いた場合、OT-I マウス脾臓細胞中の CD8 陽性細胞は OVA Tetramer でのみ特異的に染色されましたが、KT15 を 10 mL/

sample で使用した場合は明らかに OVA Tetramer-PE の蛍光強度が低下していました。濃度検討の結果、KT15 を 0.63 mL/sample で使

用した場合に、 OVA テトラマー陽性細胞集団の蛍光強度が比較的高くなりました。これ以上希釈して使用した場合、更に KT15-FITC 陽性

細胞集団の蛍光強度が低下してしまいました。ただし、ペプチド免疫して OVA 特異的 CTL を誘導したマウス脾臓細胞をサンプルとして用

いた場合は、KT15 を 10 mL/sample で使用しても特に問題は見られませんでした（次項目参照）。

以上より、トランスジェニックマウスである OT-I マウス由来の細胞をサンプルとして用いる場合は、Mouse CD8 抗体にはクローン

KT15 を適量で用いること、また、Negative Tetramer を必ず比較対照として置くことが重要であることが分かりました。

Anti-Mouse CD8 (KT15)-FITC/Tetramer-PE による染色　Anti-Mouse CD8 (53.6.7)-FITC/Tetramer-PE による染色

※ 本検討に使用した濃度はあくまでご使用の目安です。実験系により、必要に応じて濃度検討を行うことをおすすめします。

マウス CD8 抗体のクローンによる H-2Kb OVA Tetramer の染色性の違い（ペプチド免疫 C57BL/6 マウスの場合）

ペプチド免疫して特異的CTLを誘導したマウス脾臓細胞を、H-2Kb

OVA Tetramer-PE (10 mL/sample) と anti-mouse CD8 ( クローン

KT15 もしくはクローン 53.6.7）で染色して解析を行いました。

Negative Tetramer として、 H-2Kb β-galactosidase Tetramer-PE

(10 mL/sample) を使用して非特異的な反応を調べました。その結果、

KT15 を使用した場合は Negative Tetramer と比較してテトラマー

陽性細胞が認められましたが、53.6.7 を使用した場合は H-2Kb

OVA Tetramer-PE、H-2Kb β-galactosidase Tetramer-PE 共に激し

い非特異染色が見られました。53.6.7 は、H-2Kb OVA Tetramer-

PE とは特に相性が悪いことが知られています。OVA Tetramer に限

らず、ご使用の際は注意が必要です。MBL では可能な限り KT15 の

ご使用をお勧めしております。

CD8 (KT15)-FITC

Tetramer-PE

KT15抗体量

10 μL（推奨使用量）

2.5 μL（推奨使用量の1/4）


OVA Tetramerβ-galactosidaseTetramer

CD8 (53.6.7)-FITC

Tetramer-PE

53.6.7抗体量

10 μL（推奨使用量の1/2）



OVA Tetramerβ-galactosidaseTetramer

CD8-FITC

clone KT15 clone 53.6.7

Tetramer-PE

H-2Kb OVATetramer-PE

H-2Kb β-galactosidaseTetramer-PE(negative control)

1.31%

0.71%

32.7%

61.5%


T-Select Mouse MHC Tetramerを用いたTetramer blocking assay

Tetramer blocking assay は、MHC-Tetramer 試薬を用いて TCR を block することで、抗原特異的な細胞傷害性活性が

抑制されることを示す実験系です。つまり、クロムリリースアッセイや IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit などで見

られる細胞傷害性活性が、Tetramer 陽性 CTL に由来するものかどうかを明確に示すことができます。Tetramer 染色した

CTL は、約 24 時間で細胞傷害性活性が回復することが報告されています。

<Tetramer blocking assay 使用文献 >

1) Wakita D, et al., Int. Immunol. 18: 425 − 434 (2006)2) Chamoto K, et al., Cancer Res. 66: 1809 −1817 (2006)3) Yokouchi H, et al., Cancer Sci. 97: 148 −154 (2006)4) Yokouchi H, et al., Clin Exp Metastasis 24: 533 − 540 (2007)

100100

101

102

103

104

101 102 103 104 100 101 102 103 104

8.6 %

90.3 %90.3 %

解析

OT-I mousesplenocyte

Tetramerで染色したもの、していないものを用意します。

Tetramer染色あり Tetramer染色なし

通常のcell cytotoxity assay

51Cr labeledtarget cells(E.G7)

Target 細胞と4時間共培養します。

OVA-tetramer

CD8-FITC

2 : 1 1 : 1

E : T

0.5 : 1

10

101

102

103

104

0

OVA-tetramer

CD8-FITC

A. Wild type B. OT-I transgenic mice

OT-Iマウスのsplenocyteでは、約90%のCD8+T細胞がOVA Tetramer陽性です。

Tetramer染色により、特異的TCRを介する細胞傷害性活性が抑制されます。

Tetramer試薬の濃度依存的に細胞傷害性活性が抑制されます。

60

0

10

20

30

40

50

OT-I CTL vs E.G7

OT-I CTL vs EL-4

OT-I CTL + Tetramer vs E.G7

C D

Pre-treated

Cytotoxicity(%)

60

0

10

20

30

40

50

Cytotoxicity(%)

Tetramer染色Non-treated

E : T = 4 : 1

OVA-tet.

0.025

OVA-tet.

0.175

OVA-tet.

3.3

HBV-tet.

3.3

none

none

vs E.G7 vs EL-4

(μg/mL)

0.9 %

98.5 %98.5 %

データ提供：北海道大学遺伝子病制御研究所免疫制御分野　茶本健司先生、西村孝司先生


T-Select Mouse MHC class II Tetramer

■ I-Ab OVA323-339 Tetramer-PEOVA は、多様な免疫反応を惹起させるモデル抗原として非常に多くの研究分野で利用されています。

I-Ab に OVA323-339 エピトープ（ISQAVHAAHAEINEAGR）が提示された状態を特異的に認識する TCR のトランスジェニッ

クマウス (OT-II マウス ) は、T 細胞の分化の過程、活性化などを解析するツールとして免疫学的研究に大きく貢献しています。

I-Ab OVA323-339 Tetramer は様々な実験系において重要なツールになることが期待されます。

< 参考文献 >1) Barnden MJ, et al., Immunol Cell Biol. 76: 34 − 40 (1998)2) Moon JJ, et al., Immunity. 27: 203 −213 (2007) 3) Landais E, et al., J Immunol. 183: 7949 −7957 (2009)

染色例 1-1：OT-II マウスでの反応性確認例染色例 1-2：peptide 刺激培養後（6 日間）の染色例

OT-II マウスの脾細胞を用いて、I-Ab OVA323-339 Tetramer 試薬の反応性を検討したところ、陽性細胞集団が検出される個体（Mouse 2）

と染色されない個体（Mouse 1）が存在することが明らかとなりました。（染色例 1-1）。

Mouse 1 に関しては、OVA323-339 特異的 TCR の発現レベルが低いと考えられたことから、peptide による特異的刺激により発現レベル

を上げることができるかについて検証を行いました。

Mouse 1 の脾細胞に、最終濃度が 1 mg/mL になるように OVA323-339 peptide（ISQAVHAAHAEINEAGR, MBL code no. TS-M703-P）

を加えて、6 日間培養後、MHC Tetramer 試薬の反応性を検討しました（染色例 1-2）。

その結果、Mouse 1 において、in vitro peptide stimulation により特異的 T 細胞の誘導が確認できました。

Negative control として I-Ab MOG35-55 Tetramer を用いた場合は、陽性細胞は検出されませんでした。

染色例 2：OVA323-339 peptide 免疫マウスでの染色例

100 nmol の OVA323-339 peptide と、10 mg の cholera toxin (MBL code

no. RK-01-511) を免疫賦活剤とエマルジョン化して C57BL/6 マウスに 2 回

腹腔免疫しました。

11 日後に脾臓を摘出して脾細胞を調製し、一部をサンプリングして MHC

Tetramer 試薬を用いて染色しました（day 0）。

これらの脾細胞は、in vitro において最終濃度が 1 mg/mL になるように

OVA323-339 peptide を加え、8 日間培養しました (day 8)。これを同様に MHC

Tetramer 試薬を用いて染色しました。

OVA323-339 peptide を免疫したマウスにおいて、in vitro　peptide stimulation

により特異的 T 細胞の誘導が確認できました。Negative control として、I-Ab

MOG35-55 Tetramer を用いた場合は、陽性細胞は検出されませんでした。

I-Ab OVA323-339

Tetramer-PE

Mouse 1

6.4 %

Mouse 2

75.2 %

CD4-FITC

I-Ab MOG35-55

Tetramer-PE

0.5 %

CD4-FITC

Tetramer-PE

I-Ab MOG35-55 Tetramer

1.2 %

I-Ab OVA323-339 Tetramer

1.9 %

OVA323-339 peptide

concentration

0 μg /mL

1 μg /mL

1.5 % 79.2 %

CD4-FITC

OVA323-339 peptide immunized mouse splenocytes

〈day 0〉〈day 8〉

I-Ab OVA323-339

Tetramer-PE

0.5 % 1.4 %

I-Ab MOG35-55

Tetramer-PE

0.2 % 0.2 %

CD4-FITC


■ I-Ab ESAT-61-20 Tetramer-PEヒト型結核菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）はグラム陽性細菌に分類され、肺結核などの結核症の原因菌としてよ

く知られています。ESAT-6（Early Secreted Antigenic Target 6）は、Mtb が分泌する主要な低分子タンパク質で、強い

抗原性を有しています。結核ワクチンに使用されている M. bovis BCG 株では ESAT-6 遺伝子を欠損していることから、こ

の抗原に特異的な T 細胞応答は BCG 接種者における結核感染の診断に利用されています。ESAT-61-20 は、I-Ab 拘束性の

immunodominant なエピトープとして知られており、生体内における免疫応答のモニタリングや新しいワクチン開発の研

究などで広く使用されています。I-Ab ESAT-61-20 特異的な TCR を持つトランスジェニックマウスも作製されており、I-Ab

ESAT-61-20 Tetramer は様々な実験系において重要なツールになることが期待されます。

FSC/SSC 展開図脾臓細胞における ESAT-61-20 特異的 CD4+T 細胞の染色例

FSC/SSC 展開にてリンパ球領域を R1、CD4 陽性細胞領域を R2 とし、

7-AAD 陰性細胞領域を R3 としました。この R1 かつ R2 かつ R3 領域に

て解析を行ないました。

ヒト型結核菌 H37Rv 株あるいは BCG Pasteur 株を尾静脈よりマウスに

感染（5x105 CFU/ 匹）させ、4 週間後に肺および脾臓を摘出して細胞を

調製しました。これらの細胞を、MHC Tetramer 試薬を用いて染色しまし

た。その結果、肺に存在するリンパ球において、ヒト型結核菌感染マウス

で CD4 陽性細胞中 7.73% の I-Ab ESAT-61-20 Tetramer 陽性細胞が検出

されました（下図）。また、脾臓細胞においてヒト型結核菌感染マウスでの

み、I-Ab ESAT-61-20 Tetramer 陽性細胞が検出され、BCG 感染マウスでは

I-Ab ESAT-61-20Tetramer 陽性細胞は検出されませんでした（右図）。

肺組織中に存在する ESAT-61-20 特異的 CD4+T 細胞の染色例

I-Ab ESAT-61-20 Tetramer の反応温度による染色性の違い

左図は Tetramer 染色の反応温度を検討したデータです。結核菌感染マ

ウス脾臓細胞を、室温もしくは氷上で 1 時間反応しました。その結果、

I-Ab ESAT-61-20 Tetramer においては室温での反応を行った方が、蛍光強

度が強く出ることが分かりました。データには示しておりませんが、同一

条件で 2 時間の反応を行った場合でも、氷上での反応系において、大き

く蛍光強度が上がることはありませんでした。

※ 本データは FSC/SSC 展開にてリンパ球領域を R1、 7-AAD 陰性細胞領域を R2 と

しました。この R1 かつ R2 領域にて解析を行いました。

データ提供：国立大学法人京都大学大学院医学研究科基礎医学系感染・免疫学講座微生物感染症学酒井俊祐先生、光山正雄先生

FSC-H

SSC-H

7-AAD

CD4-FITC

CD4-FITC

結核菌感染後非感染

I-Ab ESAT-61-20

Tetramer-PE

CD4-FITC

結核菌感染後

BCG感染後

非感染

Tetramer-PE

I-Ab ESAT-61-20Tetramer-PE

I-Ab MOG35-55Tetramer-PE(Negative control)

データ提供国立大学法人京都大学大学院医学研究科基礎医学系感染・免疫学講座微生物感染症学酒井俊祐先生、光山正雄先生

CD4(GK1.5)-FITC

室温1時間氷上1時間

Tetramer-PE


I-Ab MOG35-55Tetramer-PE(Negative control)

2.2 % 1.0 %

0.3 % 0.2 %


ペプチド免疫による I-Ab ESAT-61-20 Tetramer 特異的 CTL の誘導

I-Ab ESAT-61-20 peptide（MTEQQWNFAGIEAAASAIQG, MBL code no. TS-M707-P）100 nmol を、10 mg の cholera toxin （MBL

code no. RK-01-511）および免疫賦活剤とエマルジョン化してマウスに 2 回腹腔免疫しました。11 日後に脾臓を摘出して脾細胞を調

製後、一部をサンプリングして MHC Tetramer 試薬を用いて染色しました（day 0）。これらの脾細胞は、in vitro において ESAT-61-20

peptide（0.1 mg/mL）で 8 日間刺激培養しました。これを同様に MHC Tetramer 試薬を用いて染色しました（day 8）。その結果、 I-Ab

ESAT-61-20 Tetramer 特異的な CD4+T 細胞を検出することができました。Negative Tetramer (I-Ab MOG35-55 Tetramer, MBL code no.

TS-M704-1) では、陽性細胞は検出されませんでした。

※ 本データは FSC/SSC 展開にてリンパ球領域を R1、 7-AAD 陰性細胞領域を R2 としました。この R1 かつ R2 領域にて解析を行いました。

マウス MHC class II/OVA epitope 複合体を認識する抗体

Anti-Mouse TCR DO11.10 (MBL code no. KO221-5, clone KJ1.26) は、 I-Ad 拘束性 OVA323-339 特異的 TCR を認識

する抗体としてよく知られています。OVA323-339 (ISQAVHAAHAEINEAGR, MBL code no. TS-M703-P) の配列は、抗原

特異的 CTL を誘導する際のヘルパーペプチドとしても使用されています。

CD4(GK1.5)-FITC

day 0 day 8

Tetramer-PE


I-Ab MOG35-55Tetramer-PE(Negative Tetramer)

0.18 % 4.85 %

0.06 % 0.27 %

0.3 % 0.0 %

FL-1

counts

isotypic control

Anti-mouse TCR

DO11.10

Anti-mouse TCR

DO11.10-PE

CD4-FITC CD4-FITC

Isotypic control-PE

Anti-mouse TCR DO11.10染色例

DO11.10 T cell hybridoma OVA323-339 peptideを免疫したBALB/cマウス脾臓細胞

Sample: DO11.10 T cell hybridoma Sample: OVA323-339 immunized mouse splenocyte


T-Select CD1d Tetramer

CD1d 分子は、β2-microglobulin (β2m) と非共有結合した膜タンパク質で、

ヒト、マウス間でホモロジーが非常に高いことが知られています。CD1d 分子は、

海綿から抽出・分離された糖脂質である α-galactosylceramide (α-GalCer) を提

示することで、ヒトおよびマウスの CD1d 拘束性の NKT 細胞を活性化できます。

T-Select CD1d Tetramer-PE は、CD1d と β2m の複合体を PE または

APC 標識されたストレプトアビジンにより 4 量体化した試薬です。本試薬に

α-GalCer を結合させることで、CD1d 拘束性の NKT 細胞をフローサイトメト

リーにより高感度に検出できます。NKT 細胞関連抗体と組み合わせることで、

より簡便に NKT 細胞の機能解析を行うこともできます。

< 参考文献 >

1) Stephane S, et al., J. Immunol. Methods 268: 107−121 (2002)2) Matsuda JL, et al., J. Exp. Med. 192: 741−754 (2000)3) Benlagha K, et al., J. Exp. Med. 191: 1895 −1903 (2000)

CD1d Tetramer に使用する α-GalCer の溶解と load

★本製品には、α-GalCer は含まれておりません。

染色例：T-Select CD1d Tetramer を用いた NKT 細胞の検出

＜ Human ＞＜ Mouse ＞

NKT 細胞検出用試薬

製品名50 tests 10 tests

MBL code no. 価格 MBL code no. 価格

Human CD1d Tetramer-PE TS-HCD-1 ￥145,000 TS-HCD-1S ￥50,000

Human CD1d Tetramer-APC TS-HCD-2 ￥145,000 − −

Mouse CD1d Tetramer-PE TS-MCD-1 ￥145,000 TS-MCD-1S ￥50,000

Mouse CD1d Tetramer-APC TS-MCD-2 ￥145,000 − −

本製品には α-GalCer は含まれておりません。

NKT細胞CD1d分子

蛍光標識物

T-Select CD1d Tetramer

T細胞受容体

NKT細胞活性化

IFN-γ

パーフォリン

IL-4CD161抑制受容体

NKT細胞

標的細胞細胞死

獲得免疫系活性化

サイトカイン産生

樹状細胞

樹状細胞成熟化

糖脂質

糖脂質

CD1d分子

糖脂質

抗原受容体

そのまま4℃保存（遮光）

室温（20～30℃）もしくは37℃で、遮光して12～18時間静置します。

Pyridine

α-GalCer stock溶液(1 mg/mL)

200 μg/mLα-GalCer希釈溶液

0.9% NaCl/0.5% Tween-20

CD1d Tetramer-PE（100 μL）にα-GalCer希釈液（10 μL）を添加

α-GalCer (－) α-GalCer load

CD3-FITC

Human CD1d Tetramer-PE

0.00 % 0.05 %

CD4 (GK1.5)-FITC

Mouse CD1d Tetramer-PE

α-GalCer (－) α-GalCer load

0.42 % 2.33 %

健常人末梢血より PBMC を分離し、40 mL の ClearBack

(Human Fc receptor blocking reagent, MBL code no.

MTG-001) を加えて室温で 5 分間インキュベーションしまし

た。これに CD3-FITC と T-Select human CD1d Tetramer-

PE (α-GalCer 結合なし、α-GalCer 結合あり ) を加え、4℃暗

所にて 30 分静置しました。フローサイトメトリーで測定し

たところ、全体の 0.05% の NKT 細胞を検出できました。

C57BL/6 マウス脾臓細胞を調製し、CD4-FITC

と T-Select mouse CD1d Tetramer-PE（α-GalCer

結合なし、α-GalCer 結合あり）を加え、4℃暗所に

て 30 分静置しました。フローサイトメトリーで測

定したところ、全体の 2.33% の NKT 細胞を検出で

きました。


■ CD1d Tetramer FAQ

Q1. α-GalCer を、Pyridine ではなく DMSO に溶解してはいけませんか？A1. Pyridine の使用をお勧めします。社内検討では、 α-GalCer を DMSO に溶解して 80℃で 10 秒インキュベーション後、

Mouse CD1d Tetramer-PE に load して検討しましたが、CD1d 陽性細胞の検出はできませんでした。

Q2. α-GalCer について、200 mg/mL に希釈した状態での保存は可能ですか？A2. 反応性が低下することが分かっておりますので、α-GalCer は、200 mg/mL に希釈した状態での保存は避けてください。

Pyridine で 1 mg/mL に溶解した状態で− 20℃保存し、CD1d Tetramer に load する直前に、200 mg/mL に希釈してください。

Q3. α-GalCer を CD1d Tetramer に load した状態で、4℃保存は可能ですか？A3. はい。少なくとも Human で 12 ヶ月間、Mouse で 12 ヶ月間反応性が保たれることが分かっています。

Q4. CD1d Tetramer の有効期限はどのくらいですか？A4. 購入後 1 年を目安にお使いください。バックグランドの上昇など、劣化と思われる現象が観察された場合は使用を中止してください。

Q5. どの位の陽性率が期待できますか？A5. 健常人 4 名中 1 名で採血直後の PBMC から上図程度の陽性率が得られます。マウス脾臓細胞を染色した場合、CD4 陽性細胞中に、

　　BALB/c では～ 5%、C57BL/6 では～ 20% の Mouse CD1d Tetramer 陽性細胞が検出されます（社内検討データ）。

Q6. CD1d Tetramer を使用する際におすすめの Blocking 剤はありますか？A6. Clear Back Human FcR blocking reagent （MBL code no. MTG-001）の使用をおすすめしています。

　　ヒト、マウス共に単球由来の細胞によるテトラマー試薬の非特異的な取込みを抑制する効果が期待できます。

CD4(GK1.5)-FITC

1 2 3

Mouse CD1d Tetramer-PE

1:α-GalCerをloadしていないMouse CD1d Tetramer2:染色の前日に、200 μg/mLに希釈したα-GalCerをloadしたMouse CD1d Tetramer

3:200 μg/mLに希釈したα-GalCerを-30℃にて3ヶ月間凍結保存し、染色の前日にloadしたMouse CD1d Tetramer

図中右上の数値は、CD4陽性細胞中のCD1d Tetramer陽性細胞率 (%)を示します。

13.0 %16.9 %0.45 %

CD4(GK1.5)-FITC

mouse CD1d Tetramer-PE α-GalCer load直後 α-GalCer load後3ヶ月 α-GalCer load後12ヶ月without α-GalCer

CD3-FITC

human CD1d Tetramer-PE α-GalCer load後3ヶ月 α-GalCer load後6ヶ月 α-GalCer load後12ヶ月without α-GalCer

図中右上の数値は、CD4陽性細胞中のMouse CD1d Tetramer陽性細胞率 (%)を示します。

図中右上の数値は、全体のHuman CD1d Tetramer陽性細胞率 (%)を示します。

いずれの場合においても、α-GalCerをloadしない状態で4℃保存し、反応性確認の前日にα-GalCerをloadしたCD1d Tetramerと同等の反応性を示しました。

0.00 % 0.05 % 0.05 % 0.04 %

0.45 % 16.9 % 16.4 % 16.2 %


T-Select MHC TetramerとMBL

MBL は米国 Beckman Coulter 社から独占的サブライセンスを受けて、2002 年より国内でテトラマー試薬の開発・製造・

販売を行っています。以来、多くの先生方からご指導賜りながら、MBL ではテトラマー試薬というコア技術を中心にさまざ

まな免疫学的研究を経験することができています。MHC Tetramer 試薬メーカーとして、テトラマー試薬をご利用いただい

ている皆様方からのお問合せやご相談に対応できる知識を備えておくためにも、このような実験的、学術的経験を今後も蓄

積していきたいと考えています。

CTL

Tetramer

Epitopeidentification

Functionalassay

ExpansionMolecularbiological

analysis

Induction

Isolation

TCR cloning

Detection

Tetramer

CD107a

non-specific peptide specific peptide

100 % 0 % 65 % 35 %

6.64 %

10

50

100

150

200

250

300

350cells (x 10E5)

7 14 Days

CD137tetramer

3.24x107

1.81x107

6.9x1056.9x105

3.21x1065.49x106

Enriched antigen-specific T cells

Anti-Mouse IgG1Microbeads

sorting

anti-PEMicrobeads

αCD137 orαCD107a

peptidestimulation activation

CTL line

withoutstimulation

MHC Tetramer

88.3 %

0.00 % 31.9 %

day 0 day 14

α1

α2

α3

β2m


カスタム作製

■ MHC class I custom Tetramer弊社にて対応可能な allele とご希望の配列のペプチドを用いて T-Select MHC Tetramer を作製することができます。

＜ MHC Tetramer 試薬の参考文献＞1) Altman JD, et al., Science 274: 94-96 (1996)

2) Mcmichael AJ, et al., J. Exp. Med. 187: 1367-1371 (1998)

3) Bodinier M, et al., Nat. Med. 6: 707-710 (2000)

4) 村上昭弘 , 鈴木進　臨床免疫 42: 134-138 (2004)

ご希望の allele およびペプチド配列が決定いたしましたら、下記宛にご連絡ください。

折り返し、担当者よりご連絡させていただきます。

　

HLA-AA*01:01A*02:01A*02:06A*02:07A*03:01A*11:01A*24:02A*26:01A*31:01

HLA-BB*07:02B*08:01B*15:01B*27:05B*35:01B*40:01B*40:02B*40:06B*44:03B*51:01B*52:01B*54:01B*57:01

HLA-CCw*01:02Cw*03:03Cw*03:04Cw*04:01Cw*08:01Cw*12:02Cw*15:02

MouseH-2Kb

H-2Kd

H-2Db

H-2Dd

H-2Dk

H-2Ld

H-2KK

A2Kb(キメラ)A24Kb(キメラ)

Rhesus MacaqueMamu-A*01

ペプチド合成料(20 mg)* ￥50,000-フォールディング検討料** ￥50,000-

MHC-peptide complex作製費用

対応可能なallele

＜カスタム作製例 (50 tests)＞

* ペプチドをご提供いただく場合、ペプチド合成料5万円は発生しません。

1 回のフォールディング検討には、純度90%以上のペプチドが20 mg 必要です。

** フォールディング検討料とは、MHC-peptide complex の作製にかかる費用です。MHC

とペプチド配列の親和性により、MHC-peptide complex の形成が可能であるかの検討が

必要になります。2回目以降の同配列カスタム作製ご注文時には、フォールディング検討

料は発生しません。

50 tests (1 vial) ￥200,000- 100 tests (2 vials) ￥350,000-　 100 tests以上はお問い合わせください

テトラマー化費用

Class I Tetramerカスタム作製費用

+

赤字のalleleに関しましては別途お問い合わせください。

納期目安

3ヶ月

2ヶ月

1ヶ月

税別価格です。

￥50,000 ￥50,000

￥50,000

￥200,000

￥200,000

￥200,000

￥300,000

￥250,000

￥200,000

ペプチド合成料

ペプチド合成料込 (約20 mg)

ペプチドご提供 (約20 mg)

2回目以降の同配列カスタム作製

+ + +

+ ++

フォールディング検討料テトラマー化カスタム作製費用(合計)

→

→

→

ビオチン化

テトラマー化

フォールディング

HLA Peptide

β2m

モノマー

d-Biotin

Streptavidin-PE

MHC Tetramer

E-mail: support＠mbl.co.jp


■ Human MHC class II custom Tetramer

Human class II フォールディング検討サービス

エピトープ同定の際などに、実際に候補エピトープが MHC/peptide 複合体を形成するかを確認できます。

Human Class IIDRB1*01:01DRB1*03:01DRB1*04:01DRB1*04:05DRB1*08:03DRB1*09:01DRB1*15:01DRB1*15:02DRB4*01:01DPB1*04:01DRB1*11:01

Mouse Class IIお問合せください

対応可能なallele

赤字のalleleに関しましては別途お問い合わせください。

＜フォールディング確認方法＞

+37℃で静置

Retention timeがnegativeペプチドと比べて、大きく移動する。

*Retention timeは一例です。

ペプチド25.417 min24.863 min 24.902 min

0.039 min0.554 min

ペプチドなし negativeペプチド指定ペプチドモノマー

Peptide

α鎖 β鎖

・ペプチドなし

・指定ペプチド

・negativeペプチド

MHC Tetramer

Streptavidin-PE

ペプチド合成料 (20 mg)* ￥100,000フォールディング検討料** ￥100,000

MHC-peptide complex作製費用

＜カスタム作製例 (50 tests)＞

* ペプチドをご提供いただく場合、ペプチド合成料10万円は発生しません。

1 回のフォールディング検討には、純度90%以上のペプチドが20 mg 必要です。

** フォールディング検討料とは、MHC-peptide complex の作製にかかる費用です。

MHC とペプチド配列の親和性により、MHC-peptide complex の形成が可能であ

るかの検討が必要になります。2 回目以降の同配列カスタム作製ご注文時には、

フォールディング検討料は発生しません。

弊社ではフォールディング検討の際、コントロールペプチドと指定ペプチドの Retention time (HPLC で目的タンパク質のピークが出現する時間）の差が 0.1 min 以上という基準を設け、これをMHC-peptide complex 形成の目安としております。フォールディング検討の結果によっては、以降の作業が困難となる場合がございますが、その場合は、ペプチド合成料およびフォールディング検討料以外は発生いたしません。

50 tests (1 vial) ￥600,000

テトラマー化費用

Class II Tetramerカスタム作製費用

+

税別価格です。

￥100,000

￥100,000

￥100,000

￥100,000

￥600,000

￥600,000

￥500,000

￥500,000

￥800,000

￥700,000

￥600,000

￥500,000

ペプチド合成料



＜2回目以降の同配列カスタム作製＞



+ + +

+ ++

+

フォールディング検討料テトラマー化カスタム作製費用(合計)

→

→

→

→

ビオチン化

テトラマー化

フォールディング

d-Biotin

￥200,000

￥100,000

※ 候補エピトープ数が多い場合は、別途ご相談ください。

ペプチド合成料込

ペプチドご提供（2 mg以上）

納期目安

7週間

3週間


T-Select MHC Tetramer 使用文献

コード No. 製品名使用文献

TS-0009-1 HLA-A*02:01 Mart-1 Tetramer-PE Takahara M, et al., J. Leukoc. Biol. 83: 742−754 (2008)

Akiyama Y, et al., J. Transl. Med. 3: 4−13 (2005)

Tomiyama M, et al., Anticancer Res. 24: 3327−3334 (2004)

TS-0013-1 HLA-A*02:01 gp100 (mutant) Tetramer-PE Akiyama Y, et al., J. Transl. Med. 3: 4−13 (2005)

TS-0017-1 HLA-A*02:01 proteinase 3 (PR1) Tetramer-PE Morita Y, et al., Int. J. Cancer 119: 1360−1367 (2006)

TS-0019-1 HLA-A*02:01 tyrosinase Tetramer-PE Akiyama Y, et al., J. Transl. Med. 3: 4−13 (2005)

TS-M014-1 or M015-1

HLA-A*24:02 WT1 (mutant ) Tetramer-PE or WT1 (wild) Tetramer-PE

Saitoh A, et al., Med. Oncol. 28: 219−230 (2011)

Narita M, et al., Int J Med Sci. 7: 72−81 (2010)

Chiba Y, et al., Jpn. J. Clin. Oncol. 40: 395−403 (2010)

Tsuboi A, et al., Int. J. Hematol. 86: 414−417 (2007)

TS-M025-1 HLA-A*24:02 survivin-2B Tetramer-PE Kameshima H, et al., Cancer Sci. 102: 1181−1187 (2011)

Miyazaki A, et al., Cancer Sci. 102: 324−329 (2011)

TS-M017-1 HLA-A*02:01 HTLV-1 Tax11-19 Tetramer-PE Kozako T, et al., Hum Immunol. 72: 1001−1006 (2011)

TS-M018-1 HLA-A*24:02 HTLV-1 Tax301-309 Tetramer-PE Kozako T, et al., J. Med. Virol. 83: 501−509 (2011)

TS-M019-1 HLA-A*02:01 HTLV-1 Tax178-186 Tetramer-PE Tanaka Y, et al., Cancer Res. 70: 6181−6192 (2010)

TS-M020-1 HLA-A*24:02 HTLV-1 Tax12-20 Tetramer-PE Sabouri AH, et al., Blood 112: 2411−2420 (2008)

TS-M021-1 HLA-A*24:02 HTLV-1 Tax187-195 Tetramer-PE Akimoto M, et al., J. Med Virol. 79: 977−986 (2007)

TS-M022-1 HLA-A*24:02 HTLV-1 Env11-19 Tetramer-PE Kozako T, et al., J. Immunol. 177: 5718−5726 (2006)

TS-0012-1 HLA-A*02:01 Influenza M1 Tetramer-PE Akiyama Y, et al., J. Transl. Med. 3: 4−13 (2005)

TS-0010-1 HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer-PE Sabouri AH, et al., Blood 112: 2411−2420 (2008)

Watanabe K, et al., Int J Hematol. 88: 311−320 (2008)

TS-0020-1 HLA-A*24:02 CMV pp65 Tetramer-PE Watanabe K, et al., Int J Hematol. 88: 311−320 (2008)

TS-M001-1 HLA-A*24:02 EBV LMP2 Tetramer-PE

Sato K, et al., Blood 117: 5663−5673 (2011)Watanabe K, et al., Int J Hematol. 88: 311−320 (2008)

TS-M002-1 HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE

TS-M003-1 HLA-A*24:02 EBV BMLF1Tetramer-PE

TS-M004-1 HLA-A*24:02 EBV EBNA3A Tetramer-PE

TS-M005-1 HLA-A*24:02 EBV EBNA3B Tetramer-PE

TS-M006-1 HLA-A*02:01 EBV LMP1 Tetramer-PE Shultz LD, et al., PNAS 107: 13022−13027 (2010)

TS-0011-1 HLA-A*02:01 EBV BMLF1 Tetramer-PE Shultz LD, et al., PNAS 107: 13022−13027 (2010)

Tomiyama M, et al., Anticancer Res. 24: 3327−3334 (2004)

TS-M007-1 HLA-A*24:02 Negative Tetramer-PE Akiyama Y, et al., Anticancer Res. 29: 647−655 (2009)

Tsukahara T, et al., Cancer Sci. 99: 368−375 (2008)

Akimoto M, et al., J. Med Virol. 79: 977−86 (2007)

Kozako T, et al., J. Immunol. 177: 5718−5726 (2006)


TS-5001-1C

H-2Kb OVA Tetramer-PE Kurachi S, et al., J. Exp. Med. 208: 1605−1620 (2011)

Yanai H, et al., PNAS 108: 11542−11547 (2011)

Takeshima T, et al., Cancer Res. 70: 2697−2706 (2010)

Asano J, et al., J. Immunol. 184: 736−745 (2010)

Tang C, et al., J. Leukoc. Biol. 86: 187−194 (2009)

Kijima M, et al., J. Immunol. 182: 3566−3572 (2009)

Senju S, et al., Stem Cells 27: 1021−31 (2009)

Miyakoda M, et al., J. Immunol. 181: 1420−1428 (2008)

Wakabayashi A, et al., J. Immunol. 180: 4000−4010 (2008)

Sugiyama T, et al., Int. Immunol. 20: 1−9 (2008)

Kumar H, et al., J. Immunol. 180: 683−687 (2008)

Li W, et al., J. Immunol. 178: 4482−4488 (2007)

Zhang Y, et al., Int. Immunol. 19: 151−161 (2007)

Taneichi M, et al., J. Immunol. 177: 2324−2330 (2006)

Wakita D, et al., Int. Immunol. 18: 425−434 (2006)

Chamoto K, et al., Cancer Res. 66: 1809−1817 (2006)

Saito K, et al., J. Immunol. 176: 2496−2504 (2006)

Yokouchi H, et al., Cancer Sci. 97: 148−154 (2006)

Yajima T, et al., J. Immunol. 176: 507−515 (2006)

Yajima T, et al., J. Immunol. 174: 3590−3597 (2005)

Li W, et al., Infect. Immunol. 72: 7005−7011 (2004)

Teramoto K, et al., Cancer Res. 63: 7920−7925 (2003)


コード No. 製品名使用文献

TS-5004-1 H-2Kb TRP2 Tetramer-PE Kuwada E, et al., Anticancer Res. 31: 881−891 (2011)

Takeshima T, et al., Cancer Res. 70: 2697−2706 (2010)

Okano F, et al., J. Immunol. 174: 2645−2652 (2005)

TS-M502-1 H-2Db Influenza NP Tetramer-PE Nakamura R, et al., J. Virol. 84: 5574−5582 (2010)

Koyama S, et al., J. Immunol. 179: 4711−4720 (2007)

TS-M508-1 H-2Db Influenza NP Tetramer-PE Seo S−U, et al., J. Virol. 84: 12713−12722 (2010)

TS-M520-1 H-2Kd Influenza HA Tetramer-PE Kayamuro H, et al., J. Virol. 84: 12703−12712 (2010)

TS-M503-1 H-2Kd LLO91-99 Tetramer-PE Ozawa Y, et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 41: 440−448 (2009)

Hayashi T, et al., J. Immunol. 182: 6360−6368 (2009)

TS-5002-1

H-2Db LCMV gp33 Tetramer-PE Takagi A, et al., Clin. Vaccine Immunol. 16: 1383−1392 (2009)

Jung A, et al., J. Virol. 82: 196–206 (2008)

Kawagoe T, et al., J. Exp. Med. 204: 1013−1024 (2007)

Gil MP, et al., Blood 107: 987−993 (2006)

TS-M008-1 H-2Kb Negative Tetramer-PE Asano J, et al., J. Immunol. 184: 736−745 (2010)

Wakita D, et al., Int. Immunol. 18: 425−434 (2006)

Chamoto K, et al., Cancer Res. 66: 1809−1817 (2006)

TS-5003-1 Mamu-A*01 SIV gag Tetramer-PE Cecchinato V, et al., J. Immunol. 180: 5439−5447 (2008)

Class I Custom Tetramer

Suemori K, et al., J. Gen. Virol. 90: 1806−1811 (2009)

Tsukamoto T, et al., J. Virol. 83: 9339−9346 (2009)

Akiyama Y, et al., Anticancer Res. 29: 647−655 (2009)

Yoshizaki M, et al., Blood 114: 1518−1527 (2009)

Takatsuka N, et al., Int. Immunol. 21: 1089−1100 (2009)

Harao M, et al., Int J Cancer 123: 2616−2625 (2008)

Tsukahara T, et al., Cancer Sci. 99: 368−375 (2008)

Wakabayashi A, et al., J. Immunol.180: 4000−4010 (2008)

Akimoto M, et al., J. Med Virol. 79: 977−86 (2007)

Kozako T, et al., J. Immunol. 177: 5718−5726 (2006)


Jalili A, et al., Blood 106: 3538−3545 (2005)

Class II Custom Tetramer

Mizote Y, et al., Vaccine 28: 5338−5346 (2010)

Watanabe K, et al., Int J Hematol. 88: 311−320 (2008)

TS-MCD-1 Mouse CD1d Tetramer-PE Yoshiga Y, et al., Clin Exp Immunol. 164: 236–247 (2011)

AM-1005 IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit Tanaka Y, et al., Cancer Res. 70: 6181−6192 (2010)

4844 IMMUNOCYTO CD107a Detection Kit Sabouri AH, et al., Blood 112: 2411−2420 (2008)

8223 IMMUNOCYTO IFN-γ ELISPOT Kit Yajima M, et al., J Infect Dis. 198: 673−682 (2008)

D271-4 Anti-mouse CD8 (clone KT15) Asano J, et al., J. Immunol. 184: 736−745 (2010)

Kayamuro H, et al., J. Virol. 84: 12703−12712 (2010)

T-Select MHC Tetramer 試薬、CTL 誘導用ペプチド等の製品ラインナップ、MHC Tetramer 試薬のカスタム作製等の

最新情報に関しましては、研究用試薬 Web Site（http://ruo.mbl.co.jp）よりご確認ください。

各製品の添付書類もダウンロードできます。

ライセンスを受けている特許

US Patent Number 5,635,363

Inventors: Altman JD, et al., (Stanford University)"Compositions and methods for the detection, quantitation and purification of antigen-specific T cells."

French Application Number FR9911133

Inventors: Lang F, et al., (INSERM)"Means for detecting and for the purifying CD8+ T-lymphocyte populations specific for peptides presented in the HLA context."

特許第 3506384 号抗原特異的な T 細胞の検出および精製のための MHC 抗原複合体


　 T-Select MHC Tetramer 製品情報

抗原名 MHC 配列位置 (aa)

code no.

PE 標識 (50 tests) PE 標識 (10 tests)APC 標識（コード末尾 -2）FITC 標識（コード末尾 -3）

（50 tests）誘導用 peptide

がん関連 (Human)New EphA2 A*02:01 TLADFDPRV 883-891 TS-M084-1 TS-M084-2

gp100 (wild) A*02:01 ITDQVPFSV 209-217 TS-0014-1 TS-0014-2

gp100 (mutant) A*02:01 IMDQVPFSV 209-217 TS-0013-1 TS-0013-2

gp100 154-162 A*02:01 KTWGQYWQV 154-162 TS-0035-1 TS-0035-2

New gp100 A*02:01 YLEPGPVTA 280-288 TS-M082-1 TS-M082-2

New gp100-intron 4 A*24:02 VYFFLPDHL 170-178 TS-M089-1 TS-M089-2

Her-2/neu E75 A*02:01 KIFGSLAFL 369-377 TS-0015-1 TS-0015-2

Her-2/neu A*02:01 RLLQETELV 689-697 TS-0016-1 TS-0016-2

New HM1.24 A*02:01 KLQDASAEV 126-134 TS-M083-1 TS-M083-2

hTERT A*24:02 VYGFVRACL 461-469 TS-M010-1

New MAGE-A1 A*02:01 KVLEYVIKV 278-286 TS-M070-1 TS-M070-2

New MAGE-A1 B*07:02 RVRFFFPSL 289-297 TS-M071-1 TS-M071-2

New MAGE-A2 A*02:01 YLQLVFGIEV 157-166 TS-M072-1 TS-M072-2

New MAGE-A2 A*24:02 EYLQLVFGI 156-164 TS-M073-1 TS-M073-2

New MAGE-A3 A*02:01 KVAELVHFL 112-120 TS-M075-1 TS-M075-2

New MAGE-A3 A*02:01 FLWGPRALV 271-279 TS-M076-1 TS-M076-2

New MAGE-A3 A*24:02 IMPKAGLLI 195-203 TS-M077-1 TS-M077-2

New MAGE-A10 A*02:01 GLYDGMEHL 254-262 TS-M078-1 TS-M078-2

Mart-1 A*02:01 ELAGIGILTV 26-35 TS-0009-1 TS-0009-2

New MCPyV large T Ag A*24:02 EWWRSGGFSF 92-101 TS-M091-1 TS-M091-2

NY-ESO-1 A*02:01 SLLMWITQC 157-165 TS-M011-1 TS-0034-2 TS-M011-P

New p53 A*02:01 LLGRNSFEV 264-272 TS-M081-1 TS-M081-2

proteinase 3 (PR-1) A*02:01 VLQELNVTV 169-177 TS-0017-1 TS-0017-2

New SSX-2 A*02:01 KASEKIFYV 41-49 TS-M079-1 TS-M079-2

survivin-2B A*24:02 AYACNTSTL 80-88 TS-M025-1 TS-M025-P

tyrosinase A*02:01 YMDGTMSQV 368-376 TS-0019-1 TS-0019-2

New tyrosinase A*24:02 AFLPWHRLF 206-214 TS-M090-1 TS-M090-2

WT1 A*02:01 RMFPNAPYL 126-134 TS-M016-1 TS-M016-2 問合せ

WT1 (mutant) A*24:02 CYTWNQMNL 235-243 TS-M014-1 TS-M014-2 問合せ

ウィルス他 (Human)New AdV Hexon B*07:02 KPYSGTAYNSL 114-124 TS-M065-1 TS-M065-2

New AdV Hexon B*07:02 KPYSGTAYNAL 114-124 TS-M066-1 TS-M066-2

HCMV IE1 B*08:01 ELRRKMMYM 199-207 TS-0026-1 TS-0026-2

HCMV pp50 A*01:01 VTEHDTLLY 245-253 TS-0024-1 TS-0024-2

HCMV pp65 A*02:01 NLVPMVATV 495-503 TS-0010-1 TS-0010-1S TS-0010-2 TS-0010-P

HCMV pp65 A*11:01 ATVQGQNLK 501-509 TS-M012-1

HCMV pp65 A*24:02 QYDPVAALF 341-349 TS-0020-1 TS-0020-1S TS-0020-2 TS-0020-P

HCMV pp65 B*15:01 KMQVIGDQY 215-223 TS-M013-1

HCMV pp65 B*35:01 IPSINVHHY 123-131 TS-0027-1 TS-0027-2

HCMV pp65 B*07:02 TPRVTGGGAM 417-426 TS-0025-1 TS-0025-2

New EBV BZLF1 B*08:01 RAKFKQLL 190-197 TS-M036-1 TS-M036-2

New EBV BZLF1 B*35:01 EPLPQGQLTAY 54-64 TS-M037-1 TS-M037-2

EBV BMLF1 A*02:01 GLCTLVAML 280-288 TS-0011-1 TS-0011-2

EBV BMLF1 A*24:02 DYNFVKQLF 320-328 TS-M003-1 TS-M003-P

EBV BRLF1 A*24:02 TYPVLEEMF 198-206 TS-M002-1 TS-M002-P

New EBV EBNA3A A*03:01 RLRAEAQVK 603-611 TS-M033-1 TS-M033-2

EBV EBNA3A A*24:02 RYSIFFDYM 246-254 TS-M004-1 TS-M004-P

EBV EBNA3B A*11:01 AVFDRKSDAK 399-408 TS-M028-1

EBV EBNA3B A*11:01 IVTDFSVIK 416-424 TS-M029-1

EBV EBNA3B A*24:02 TYSAGIVQI 217-225 TS-M005-1 TS-M005-P

EBV LMP1 A*02:01 YLQQNWWTL 159-167 TS-M006-1

New EBV LMP2 A*02:01 TVCGGIMFL 243-251 TS-M030-1 TS-M030-2

New EBV LMP2 A*02:01 LLWTLVVLL 329-337 TS-M031-1 TS-M031-2

New EBV LMP2 A*02:01 FLYALALLL 356-364 TS-M069-1 TS-M069-2

New EBV LMP2 A*02:01 CLGGLLTMV 426-434 TS-M032-1 TS-M032-2

New EBV LMP2 A*24:02 PYLFWLAAI 131-139 TS-M034-1 TS-M034-2

EBV LMP2 A*24:02 IYVLVMLVL 222-230 TS-M001-1 TS-M001-P

New EBV LMP2 A*24:02 TYGPVFMSL 419-427 TS-M035-1 TS-M035-2

New EBV LMP2 B*35:01 MGSLEMVPM 1-9 TS-M038-1 TS-M038-2


抗原名 MHC 配列位置 (aa)

code no.

PE 標識 (50 tests) PE 標識 (10 tests)APC 標識（コード末尾 -2）FITC 標識（コード末尾 -3）

（50 tests）誘導用 peptide

EBV mix A*24:02 TS-M009-1

HBV core A*02:01 FLPSDFFPSV 18-27 TS-0018-1 TS-0018-2

HBV core A*24:02 EYLVSFGVW 117-125 TS-0022-1 TS-0022-2

New HBV env A*02:01 WLSLLVPFV 335-343 TS-M051-1 TS-M051-2

New HBV env A*02:01 GLSPTVWLSV 348-357 TS-M052-1 TS-M052-2

HBV pol A*24:02 KYTSFPWLL 756-764 TS-0023-1 TS-0023-2

New HCV E2 A*24:02 EYVLLLFLL 717-725 TS-M044-1 TS-M044-2

New HCV NS3 A*02:01 CINGVCWTV 1073-1081 TS-M039-1 TS-M039-2

New HCV NS3 A*02:01 KLVALGINAV 1406-1415 TS-M040-1 TS-M040-2

New HCV NS4B A*02:01 VLSDFKTWL 1992-2000 TS-M041-1 TS-M041-2

New HCV NS5B A*02:01 ALYDVVTKL 2594-2602 TS-M042-1 TS-M042-2

New HCV NS5B A*02:01 ALYDVVSKL 2594-2602 TS-M043-1 TS-M043-2

HIV gag A*02:01 SLYNTVATL 77-85 TS-0007-1 TS-0007-2 TS-M027-3 TS-M027-P

HIV gag B*57:01 KAFSPEVIPMF 162-172 TS-0032-1 TS-0032-2

HIV pol A*02:01 ILKEPVHGV 476-484 TS-0008-1 TS-0008-2

HIV env gp160 A*24:02 RYLRDQQLL 584-592 TS-M007-1 TS-M007-2TS-M007-3 TS-M007-P

New HIV nef B*07:02 TPGPGVRYPL 128-137 TS-M054-1 TS-M054-2

New HPV16 E6 A*02:01 KLPQLCTEL 18-26 TS-M047-1 TS-M047-2

New HPV16 E6 A*24:02 VYDFAFRDL 49-57 TS-M049-1 TS-M049-2

HPV16 E7 A*02:01 YMLDLQPET 11-19 TS-0031-1 TS-0031-2

New HPV16 E7 A*02:01 YMLDLQPETT 11-20 TS-M048-1 TS-M048-2

HTLV-1 Tax11-19 A*02:01 LLFGYPVYV 11-19 TS-M017-1 TS-M017-2 TS-M017-P

HTLV-1 Tax178-186 A*02:01 QLGAFLTNV 178-186 TS-M019-1

HTLV-1 Tax12-20 A*24:02 LFGYPVYVF 12-20 TS-M020-1

HTLV-1 Tax187-195 A*24:02 PYKRIEELL 187-195 TS-M021-1

HTLV-1 Tax301-309 A*24:02 SFHSLHLLF 301-309 TS-M018-1 TS-M018-2 TS-M018-P

HTLV-1 Env11-19 A*24:02 FFQFCPLIF 11-19 TS-M022-1

HTLV-1 Tax88-96 A*11:01 KVLTPPITH 88-96 TS-M023-1

HTLV-1 Tax272-280 A*11:01 QSSSFIFHK 272-280 TS-M024-1

Influenza M1 A*02:01 GILGFVFTL 58-66 TS-0012-1 TS-0012-2 TS-0012-P

New Influenza NP B*35:01 LPFEKSTVM 418-426 TS-M046-1 TS-M046-2

M. tuberculosis A*02:01 TLAGKGISVV 53-62 TS-M026-1 TS-M026-P

マイナー抗原New HA-1 A*02:01 VLHDDLLEA 137-145 TS-M093-1 TS-M093-2

New H-Y A*02:01 FIDSYICQV 311-319 TS-M094-1 TS-M094-2

Negative TetramerNegative A*02:01 配列開示できません TS-0029-1 TS-0029-2

HIV env gp160 A*24:02 RYLRDQQLL 584-592 TS-M007-1TS-M007-2 TS-M007-3

TS-M007-P

SIY H-2Kb SIYRYYGL TS-M008-1

抗原名 MHC 配列位置 (aa)code no.

PE 標識 (50 tests) APC 標識 (50 tests) 誘導用 peptide

がん関連（Mouse）CEA H-2Db EAQNTTYL 526-533 TS-M518-1 TS-M518-P

New Erk1 156Q H-2Kd QYIHSANVL 156-164 TS-M545-1 TS-M545-2

HER2 H-2Kd TYLPTNASL 63-71 TS-M526-1 TS-M526-P

human gp100 H-2Db KVPRNQDWL 25-33 TS-M505-1 TS-5005-2 TS-M505-P

New mouse gp100 H-2Db EGSRNQDWL 25-33 TS-M546-1 TS-M546-2

New JAK1 H-2Kd SYFPEITHI 367-375 TS-M544-1 TS-M544-2

P815 H-2Ld LPYLGWLVF 35-43 TS-M519-1 TS-M519-P

TRP-2 H-2Kb SVYDFFVWL 180-188 TS-5004-1 TS-5004-2

WT1 H-2Db RMFPNAPYL 126-134 TS-M504-1 TS-M504-2 問合せ

ウィルス他（Mouse）HBsAg H-2Ld IPQSLDSWWTSL 28-39 TS-M522-1 TS-M522-P

New HCV NS3 H-2Db GAVQNEVTL 1629-1637 TS-M532-1 TS-M532-2

New HIV env H-2Dd IGPGRAFYA 315-323 TS-M536-1 TS-M536-2



PE 標識 (50 tests) APC 標識 (50 tests) 誘導用 peptideHIV P18-I10 H-2Dd RGPGRAFVTI 318-327 TS-M516-1 TS-M516-P

HIV gag H-2Kd AMQMLKETI 197-205 TS-5007-1 TS-5007-2

HPV16 E7 H-2Db RAHYNIVTF 49-57 TS-5008-1 TS-5008-2

HSV-1 gB H-2Kb SSIEFARL 498-505 TS-M523-1 TS-M523-P

HTLV-1 Tax38-46 H-2Dk ARLHRHALL 38-46 TS-M531-1 TS-M531-P

Influenza NP H-2Db ASNENMDTM 366-374 TS-M502-1 TS-M502-P

Influenza NP H-2Db ASNENMDAM 366-374 TS-M527-1 TS-M527-P

Influenza NP H-2Db ASNENMETM 366-374 TS-M508-1 TS-M508-P

New Influenza NP H-2Kd TYQRTRALV 147-155 TS-M534-1 TS-M534-2

Influenza PA H-2Db SSLENFRAYV 224-233 TS-M528-1 TS-M528-P

New Influenza PB1 H-2Kb SSYRRPVGI 703-711 TS-M533-1 TS-M533-2

Influenza HA H-2Kd IYSTVASSL 533-541 TS-M520-1 TS-M520-P

New Influenza HA H-2Kd LYQNVGTYV 204-212 TS-M535-1 TS-M535-2

LCMV gp33 H-2Db KAVYNFATC 33-41 TS-5002-1 TS-5002-2 TS-5002-P

LCMV gp33 (C9M) H-2Db KAVYNFATM 33-41 TS-M512-1 TS-M512-P

LCMV gp34-41 H-2Kb AVYNFATC 34-41 TS-5010-1 TS-5010-2

LCMV gp34-43 H-2Kb AVYNFATCGI 34-43 TS-5011-1 TS-5011-2

LCMV gp118-125 H-2Kb ISHNFCNL 118-125 TS-5012-1 TS-5012-2

LCMV gp276-286 H-2Db SGVENPGGYCL 276-286 TS-5009-1 TS-5009-2

LCMV L protein H-2Kb LEYDFNKL 825-832 TS-5014-1 TS-5014-2

LCMV NP205-212 H-2Kb YTVKYPNL 205-212 TS-5015-1 TS-5015-2

LCMV NP396 H-2Db FQPQNGQFI 396-404 TS-M513-1 TS-5013-2 TS-M513-P

LCMV NP118 H-2Ld RPQASGVYM 118-126 TS-M514-1 TS-M514-P

MCMV IE1 H-2Ld YPHFMPTNL 168-176 TS-M510-1 TS-M510-P

MoMSV H-2Db (Abu)(Abu)L(Abu)LTVFL 85-93 TS-5016-1 TS-5016-2

MuLV p15E H-2Kb KSPWFTTL 604-611 TS-M507-1 TS-M507-P

MuLV gp70 H-2Ld SPSYVYHQF 423-431 TS-M521-1 TS-M521-P

polyomavirus MT H-2Dk RRLGRTLLL 389-397 TS-M530-1 TS-M530-P

RSV M2 H-2Kd SYIGSINNI 82-90 TS-M506-1 TS-5006-2 TS-M506-P

RSV M187-195 H-2Db NAITNAKII 187-195 TS-5018-1 TS-5018-2

SeV H-2Kb FAPGNYPAL 324-332 TS-M509-1 TS-M509-P

SIV gag H-2Db AAVKNWMTQTL 312-322 TS-5017-1 TS-5017-2

VSV NP H-2Kb RGYVYQGL 52-59 TS-M529-1 TS-M529-P

その他BCG MPT51 H-2Dd GGPHAVYLL 24-32 TS-M517-1 TS-M517-P

β-galactosidase H-2Kb DAPIYTNV 96-103 TS-M501-1 TS-M501-2 TS-M501-P

β-galactosidase H-2Ld TPHPARIGL 876-884 TS-M511-1 TS-M511-P

EGFP H-2Kd HYLSTQSAL 200-208 TS-M525-1 TS-M525-P

HY Uty H-2Db WMHHNMDLI 246-254 TS-M524-1 TS-M524-P

New IGRP H-2Kd VYLKTNVFL 206-214 TS-M552-1 TS-M552-2

New InsB H-2Kd LYLVCGERL 15-23 TS-M554-1 TS-M554-2

LLO H-2Kd GYKDGNEYI 91-99 TS-M503-1 TS-M503-P

malaria Pb9 H-2Kd SYIPSAEKI 252-260 TS-M515-1 TS-M515-P

New Plasmodium CSP H-2Kd SYVPSAEQI 280-288 TS-M547-1 TS-M547-2

New Mtb32a H-2Db GAPINSATAM 309-318 TS-M549-1 TS-M549-2

New NRP-V7 H-2Kd KYNKANVFL TS-M553-1 TS-M553-2

New TB10.4 H-2Kb IMYNYPAM 4-11 TS-M550-1 TS-M550-2

OVA H-2Kb SIINFEKL 257-264 TS-5001-1C TS-5001-2C TS-5001-P

New OVA E1 H-2Kb EIINFEKL 257-264 TS-M541-1 TS-M541-2

New OVA Q4H7 H-2Kb SIIQFEHL 257-264 TS-M543-1 TS-M543-2

SIY H-2Kb SIYRYYGL designed peptide TS-M008-1 TS-M008-P

SIV gag Mamu-A*01 CTPYDINQM 181-189 TS-5003-1 TS-5003-2

New SIV gag Mamu-A*90120-5 SSVDEQIQW 241-249 TS-M901-1 TS-M901-2

Class II Tetramer (Mouse)


PE 標識 (20 tests) APC 標識 (20 tests) 誘導用 peptide

MOG I-Ab MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK 35-55 TS-M704-1 TS-M704-P

ESAT-6 I-Ab MTEQQWNFAGIEAAASAIQG 1-20 TS-M707-1 お問い合わせ

ください

TS-M707-P

New OVA I-Ab ISQAVHAAHAEINEAGR 323-339 TS-M710-1 TS-M703-P


T-Select MHC Tetramer 価格表

PE 標識APC 標識（コード末尾 -2)FITC 標識（コード末尾 -3)

誘導用 peptide

code no. 50 tests code no. 50 tests code no. 1 mg　TS-0007-1 ￥190,000 TS-0007-2 ￥190,000

TS-0008-1 ￥190,000 TS-0008-2 ￥190,000

TS-0009-1 ￥190,000 TS-0009-2 ￥190,000

TS-0010-1 小￥190,000 TS-0010-2 ￥190,000 TS-0010-P ￥15,000

TS-0011-1 ￥190,000 TS-0011-2 ￥190,000

TS-0012-1 ￥190,000 TS-0012-2 ￥190,000 TS-0012-P ￥15,000

TS-0013-1 ￥190,000 TS-0013-2 ￥190,000

TS-0014-1 ￥190,000 TS-0014-2 ￥190,000

TS-0015-1 ￥190,000 TS-0015-2 ￥190,000

TS-0016-1 ￥190,000 TS-0016-2 ￥190,000

TS-0017-1 ￥190,000 TS-0017-2 ￥190,000

TS-0018-1 ￥190,000 TS-0018-2 ￥190,000

TS-0019-1 ￥190,000 TS-0019-2 ￥190,000

TS-0020-1 小￥190,000 TS-0020-2 ￥190,000 TS-0020-P ￥15,000

TS-0022-1 ￥190,000 TS-0022-2 ￥190,000

TS-0023-1 ￥190,000 TS-0023-2 ￥190,000

TS-0024-1 ￥190,000 TS-0024-2 ￥190,000

TS-0025-1 ￥190,000 TS-0025-2 ￥190,000

TS-0026-1 ￥190,000 TS-0026-2 ￥190,000

TS-0027-1 ￥190,000 TS-0027-2 ￥190,000

TS-0029-1 ￥190,000 TS-0029-2 ￥190,000

TS-0031-1 ￥190,000 TS-0031-2 ￥190,000

TS-0032-1 ￥190,000 TS-0032-2 ￥190,000

TS-0034-2 ￥190,000

TS-0035-1 ￥190,000 TS-0035-2 ￥190,000

TS-5001-1C ￥165,000 TS-5001-2C ￥180,000 TS-5001-P ￥15,000

TS-5002-1 ￥165,000 TS-5002-2 ￥190,000 TS-5002-P ￥15,000

TS-5003-1 ￥190,000 TS-5003-2 ￥190,000

TS-5004-1 ￥190,000 TS-5004-2 ￥190,000

TS-5005-2 ￥190,000

TS-5006-2 ￥190,000

TS-5007-1 ￥190,000 TS-5007-2 ￥190,000

TS-5008-1 ￥190,000 TS-5008-2 ￥190,000

TS-5009-1 ￥190,000 TS-5009-2 ￥190,000

TS-5010-1 ￥190,000 TS-5010-2 ￥190,000

TS-5011-1 ￥190,000 TS-5011-2 ￥190,000

TS-5012-1 ￥190,000 TS-5012-2 ￥190,000

TS-5013-2 ￥190,000

TS-5014-1 ￥190,000 TS-5014-2 ￥190,000

TS-5015-1 ￥190,000 TS-5015-2 ￥190,000

TS-5016-1 ￥190,000 TS-5016-2 ￥190,000

TS-5017-1 ￥190,000 TS-5017-2 ￥190,000

TS-5018-1 ￥190,000 TS-5018-2 ￥190,000

TS-M001-1 大￥190,000 TS-M001-P ￥15,000

TS-M002-1 大￥190,000 TS-M002-P ￥15,000

TS-M003-1 大￥190,000 TS-M003-P ￥15,000

TS-M004-1 大￥190,000 TS-M004-P ￥15,000

TS-M005-1 大￥190,000 TS-M005-P ￥15,000

TS-M006-1 大￥190,000

TS-M007-1 ￥110,000 TS-M007-2TS-M007-3

￥110,000￥110,000

TS-M007-P ￥15,000

TS-M008-1 ￥85,000 TS-M008-P ￥15,000

TS-M009-1 大￥190,000

TS-M010-1 大￥190,000

TS-M011-1 大￥190,000 TS-M011-P ￥15,000

TS-M012-1 大￥190,000

TS-M013-1 大￥190,000

TS-M014-1 大￥190,000 TS-M014-2 大￥190,000 お問い合わせください


TS-M017-1 大￥190,000 TS-M017-2 大￥190,000 TS-M017-P ￥15,000

TS-M018-1 大￥190,000 TS-M018-2 大￥190,000 TS-M018-P ￥15,000

TS-M019-1 大￥190,000

TS-M020-1 大￥190,000

大小まとめ買い特価対象品（同一製品を 3 本まとめ買いで 30%OFF、6 本で 45%OFF）10 tests 包装、￥50,000



誘導用 peptide

code no. 50 tests code no. 50 tests code no. 1 mg　TS-M021-1 大￥190,000

TS-M022-1 大￥190,000

TS-M023-1 大￥190,000

TS-M024-1 大￥190,000

TS-M025-1 大￥190,000 TS-M025-P ￥15,000

TS-M026-1 大￥190,000 TS-M026-P ￥15,000

TS-M027-3 ￥160,000 TS-M027-P ￥15,000

TS-M028-1 大￥190,000

TS-M029-1 大￥190,000

New TS-M030-1 大￥190,000 New TS-M030-2 大￥190,000

New TS-M031-1 大￥190,000 New TS-M031-2 大￥190,000

New TS-M032-1 大￥190,000 New TS-M032-2 大￥190,000

New TS-M033-1 大￥190,000 New TS-M033-2 大￥190,000

New TS-M034-1 大￥190,000 New TS-M034-2 大￥190,000

New TS-M035-1 大￥190,000 New TS-M035-2 大￥190,000

New TS-M036-1 大￥190,000 New TS-M036-2 大￥190,000

New TS-M037-1 大￥190,000 New TS-M037-2 大￥190,000

New TS-M038-1 大￥190,000 New TS-M038-2 大￥190,000

New TS-M039-1 大￥190,000 New TS-M039-2 大￥190,000

New TS-M040-1 大￥190,000 New TS-M040-2 大￥190,000

New TS-M041-1 大￥190,000 New TS-M041-2 大￥190,000

New TS-M042-1 大￥190,000 New TS-M042-2 大￥190,000

New TS-M043-1 大￥190,000 New TS-M043-2 大￥190,000

New TS-M044-1 大￥190,000 New TS-M044-2 大￥190,000

New TS-M046-1 大￥190,000 New TS-M046-2 大￥190,000

New TS-M047-1 大￥190,000 New TS-M047-2 大￥190,000

New TS-M048-1 大￥190,000 New TS-M048-2 大￥190,000

New TS-M049-1 大￥190,000 New TS-M049-2 大￥190,000

New TS-M051-1 大￥190,000 New TS-M051-2 大￥190,000

New TS-M052-1 大￥190,000 New TS-M052-2 大￥190,000

New TS-M054-1 大￥190,000 New TS-M054-2 大￥190,000

New TS-M065-1 大￥190,000 New TS-M065-2 大￥190,000

New TS-M066-1 大￥190,000 New TS-M066-2 大￥190,000

New TS-M069-1 大￥190,000 New TS-M069-2 大￥190,000

New TS-M070-1 大￥190,000 New TS-M070-2 大￥190,000

New TS-M071-1 大￥190,000 New TS-M071-2 大￥190,000

New TS-M072-1 大￥190,000 New TS-M072-2 大￥190,000

New TS-M073-1 大￥190,000 New TS-M073-2 大￥190,000

New TS-M075-1 大￥190,000 New TS-M075-2 大￥190,000

New TS-M076-1 大￥190,000 New TS-M076-2 大￥190,000

New TS-M077-1 大￥190,000 New TS-M077-2 大￥190,000

New TS-M078-1 大￥190,000 New TS-M078-2 大￥190,000

New TS-M079-1 大￥190,000 New TS-M079-2 大￥190,000

New TS-M081-1 大￥190,000 New TS-M081-2 大￥190,000

New TS-M082-1 大￥190,000 New TS-M082-2 大￥190,000

New TS-M083-1 大￥190,000 New TS-M083-2 大￥190,000

New TS-M084-1 大￥190,000 New TS-M084-2 大￥190,000

New TS-M089-1 大￥190,000 New TS-M089-2 大￥190,000

New TS-M090-1 大￥190,000 New TS-M090-2 大￥190,000

New TS-M091-1 大￥190,000 New TS-M091-2 大￥190,000

New TS-M093-1 大￥190,000 New TS-M093-2 大￥190,000

New TS-M094-1 大￥190,000 New TS-M094-2 大￥190,000

TS-M501-1 大￥180,000 TS-M501-2 大￥180,000 TS-M501-P ￥15,000

TS-M502-1 大￥180,000 TS-M502-P ￥15,000

TS-M503-1 大￥180,000 TS-M503-P ￥15,000


TS-M505-1 大￥180,000 TS-M505-P ￥15,000

TS-M506-1 大￥180,000 TS-M506-P ￥15,000

TS-M507-1 大￥180,000 TS-M507-P ￥15,000

TS-M508-1 大￥180,000 TS-M508-P ￥15,000

TS-M509-1 大￥180,000 TS-M509-P ￥15,000

TS-M510-1 大￥180,000 TS-M510-P ￥15,000

TS-M511-1 大￥180,000 TS-M511-P ￥15,000

TS-M512-1 大￥180,000 TS-M512-P ￥15,000

TS-M513-1 大￥180,000 TS-M513-P ￥15,000

TS-M514-1 大￥180,000 TS-M514-P ￥15,000




誘導用 peptide

code no. 50 tests code no. 50 tests code no. 1 mg　TS-M515-1 大￥180,000 TS-M515-P ￥15,000

TS-M516-1 大￥180,000 TS-M516-P ￥15,000

TS-M517-1 大￥180,000 TS-M517-P ￥15,000

TS-M518-1 大￥180,000 TS-M518-P ￥15,000

TS-M519-1 大￥180,000 TS-M519-P ￥15,000

TS-M520-1 大￥180,000 TS-M520-P ￥15,000

TS-M521-1 大￥180,000 TS-M521-P ￥15,000

TS-M522-1 大￥180,000 TS-M522-P ￥15,000

TS-M523-1 大￥180,000 TS-M523-P ￥15,000

TS-M524-1 大￥180,000 TS-M524-P ￥15,000

TS-M525-1 大￥180,000 TS-M525-P ￥15,000

TS-M526-1 大￥180,000 TS-M526-P ￥15,000

TS-M527-1 大￥180,000 TS-M527-P ￥15,000

TS-M528-1 大￥180,000 TS-M528-P ￥15,000

TS-M529-1 大￥180,000 TS-M529-P ￥15,000

TS-M530-1 大￥180,000 TS-M530-P ￥15,000

TS-M531-1 大￥180,000 TS-M531-P ￥15,000

New TS-M532-1 大￥180,000 New TS-M532-2 大￥180,000

New TS-M533-1 大￥180,000 New TS-M533-2 大￥180,000

New TS-M534-1 大￥180,000 New TS-M534-2 大￥180,000

New TS-M535-1 大￥180,000 New TS-M535-2 大￥180,000

New TS-M536-1 大￥180,000 New TS-M536-2 大￥180,000

New TS-M541-1 大￥180,000 New TS-M541-2 大￥180,000

New TS-M543-1 大￥180,000 New TS-M543-2 大￥180,000

New TS-M544-1 大￥180,000 New TS-M544-2 大￥180,000

New TS-M545-1 大￥180,000 New TS-M545-2 大￥180,000

New TS-M546-1 大￥180,000 New TS-M546-2 大￥180,000

New TS-M547-1 大￥180,000 New TS-M547-2 大￥180,000

New TS-M549-1 大￥180,000 New TS-M549-2 大￥180,000

New TS-M550-1 大￥180,000 New TS-M550-2 大￥180,000

New TS-M552-1 大￥180,000 New TS-M552-2 大￥180,000

New TS-M553-1 大￥180,000 New TS-M553-2 大￥180,000

New TS-M554-1 大￥180,000 New TS-M554-2 大￥180,000

New TS-M901-1 大￥190,000 New TS-M901-2 大￥190,000

code no. 20 tests code no. 50 tests code no. 1 mg

TS-M703-P ￥15,000

TS-M704-P ￥15,000

TS-M707-1 ￥180,000 TS-M707-P ￥15,000

TS-M710-1 ￥180,000

NKT 細胞検出用試薬

製品名50 tests 10 tests

code no. 価格(税別) code no. 価格(税別)

T-Select Human CD1d Tetramer-PE TS-HCD-1 ¥145,000 TS-HCD-1S ¥50,000

T-Select Human CD1d Tetramer-APC TS-HCD-2 ¥145,000

T-Select Mouse CD1d Tetramer-PE TS-MCD-1 ¥145,000 TS-MCD-1S ¥50,000

T-Select Mouse CD1d Tetramer-APC TS-MCD-2 ¥145,000

関連製品価格表

キットcode no. 製品名包装価格(税別)

4844 IMMUNOCYTO CD107a Detection Kit 50 tests ¥50,000

AM-1005 IMMUNOCYTO Cytotoxity Detection Kit 50 tests ¥50,000

8223 IMMUNOCYTO IFN-γ ELISPOT Kit 96 well x 2 ¥50,000

TS-8005 T-Select MHC IFN-γ Kit 50 tests ¥220,000

TS-9004 T-Select Antibody Gating Kit 50 tests ¥240,000

TS-9017 T-Select MHC Tetramer T Cell Typing Kit 50 tests ¥238,000


144146-12101050N2012.10

◎営業推進部基礎試薬グループ〒460-0008　名古屋市中区栄四丁目5番3号 KDX名古屋栄ビル10階TEL :（052）238-1904　FAX :（052）238-1441E-mail : [email protected]

http://ruo.mbl.co.jp/

Copyright 2012 Medical & Biological Laboratories, All Rights Reserved.

試薬code no. 製品名包装価格(税別)

TS-8003 T-Select MHC Tetramer Fixative 10 mL ¥21,000

TS-8002 MHC Tetramer Lyse 100 mL ¥58,000

A07704 7-AAD Viability Dye (死細胞検出試薬） 150 tests ¥12,000

MTG-001 Clear Back (human FcR blocking reagent) 100 tests ¥15,000

IM-1400 OptiLyse B 250 tests ¥20,000

A11895 OptiLyse C 200 tests ¥25,000

マウス CTL 誘導用ヘルパーペプチドcode no. 配列由来 (位置aa) MHC 包装価格(税別)

TS-M701-P TPPAYRPPNAPIL HBc (128-140) I-Ab 1 mg ¥15,000

TS-M702-P FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE TT p30 (947-967) I-Ad 1 mg ¥15,000

TS-M703-P ISQAVHAAHAEINEAGR OVA (323-339) I-Ad 1 mg ¥15,000

TS-M708-P DGSTDYGILQINSRW HEL (48-62) I-Ak 1 mg ¥15,000

抗体code no. 製品名クローンアイソタイプ包装価格(税別)

HLA 抗体K0186-3 Anti-HLA-A2 BB7.2 Mouse IgG2b 100 mg ¥30,000

K0186-4 Anti-HLA-A2-FITC BB7.2 Mouse IgG2b 50 mg ¥20,000

K0186-5 Anti-HLA-A2-PE BB7.2 Mouse IgG2b 50 tests ¥20,000

K0208-3 Anti-HLA-A24 17A10 Mouse IgG2b 100 mg ¥30,000

K0208-4 Anti-HLA-A24-FITC 17A10 Mouse IgG2b 50 mg ¥20,000

K0208-5 Anti-HLA-A24-PE 17A10 Mouse IgG2b 50 tests ¥20,000

K0208-A48 Anti-HLA-A24-Alexa Fluor® 488 17A10 Mouse IgG2b 100 mg ¥40,000

K0208-A64 Anti-HLA-A24-Alexa Fluor® 647 17A10 Mouse IgG2b 100 mg ¥40,000

M077-4 Mouse IgG2b-FITC 3D12 Mouse IgG2bκ 50 mg ¥12,000

M077-5 Mouse IgG2b-PE 3D12 Mouse IgG2bκ 50 tests ¥12,000

M077-A48 Mouse IgG2b-Alexa Fluor® 488 3D12 Mouse IgG2bκ 100 mg ¥16,000

M077-A64 Mouse IgG2b-Alexa Fluor® 647 3D12 Mouse IgG2bκ 100 mg ¥16,000

CD8 抗体A83480 Anti-CD8α SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 100 tests ¥50,000

737659 Anti-CD8α-ECD (CYTO-STAT) SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 50 tests ¥29,500

6602385 Anti-CD8α-FITC SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 100 tests ¥78,000

6603861 Anti-CD8α-FITC (CYTO-STAT) SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 50 tests ¥23,500

6607011 Anti-CD8α-PC5 (CYTO-STAT) SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 50 tests ¥29,500

6603274 Anti-CD8α-RD1 SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 100 tests ¥93,000

6603848 Anti-CD8α-RD1 (CYTO-STAT) SFCI21Thy2D3 (T8) Mouse IgG1 50 tests ¥25,500

D271-4 Anti-Mouse CD8-FITC KT15 Rat IgG2aλ 100 tests ¥25,000

D271-A64 Anti-Mouse CD8-Alexa Fluor® 647 KT15 Rat IgG2aλ 50 mg ¥22,000

その他の抗体（標識は代表例）6604623 Anti-CD3-FITC (CYTO-STAT) UCHT1 Mouse IgG1 50 tests ¥24,000

6603862 Anti-CD4-FITC (CYTO-STAT) SFCI12T4D11 (T4) Mouse IgG1 50 tests ¥23,500

IM-2578 Anti-CD27-PE (IOTest) 　 1A4CD27 Mouse IgG1 100 tests ¥69,000

IM-1236 Anti-CD28-FITC (IOTest) 　 CD28.2 Mouse IgG1 100 tests ¥58,000

IM-2473 Anti-CD45-APC (IOTest) 　 J.33 Mouse IgG1 100 tests ¥69,000

A07786 Anti-CD45RA-FITC (IOTest) 　 ALB11 Mouse IgG1 100 tests ¥60,000

K0015-4 Anti-CD45RO-FITC UCHL1 Mouse IgG2α 50 mg ¥20,000

IM-1231 Anti-CD62L-FITC (IOTest) DREG56 Mouse IgG1 100 tests ¥63,000

IM-1980 Anti-CD127-PE (IOTest) 　 R34.34 Mouse IgG1 100 tests ¥74,000

K0029-4 Anti-CD137-FITC 4B4-1 Mouse IgG1κ 50 mg ¥20,000

D051-4 Anti-CD154 (CD40 Ligand)-FITC 5F3 Mouse IgG1 50 tests ¥35,000

K0221-5 Anti-Mouse TCR DO11.10-PE KJ1.26 Mouse IgG2aκ 50 tests ¥20,000

K0222-3 Anti-Mouse TCR 3DT-52.5 KJ12.98 Mouse IgG2aκ 100 mg ¥30,000

Alexa Fluor®は、LIFE TECHNOLOGIES社の登録商標です。MBLではAlexa Fluor® 標識抗体を、LIFE TECHNOLOGIES社より特許ライセンスを受けて製造・販売しております。

● 価格は2012年10月現在のものです。

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